Method Article
Abdominal adhesions that form after surgery are a major cause of pain, infertility, and hospitalization and reoperation for small bowel obstruction. Our surgical procedure for creating abdominal adhesions in mice is a reliable tool to study the mechanisms underlying the formation of adhesions.
Abdominal adhesions consist of fibrotic tissue that forms in the peritoneal space in response to an inflammatory insult, typically surgery or intraabdominal infection. The precise mechanisms underlying adhesion formation are poorly understood. Many compounds and physical barriers have been tested for their ability to prevent adhesions after surgery with varying levels of success. The mouse and rat are important models for the study of abdominal adhesions. Several different techniques for the creation of adhesions in the mouse and rat exist in the literature. Here we describe a protocol utilizing abrasion of the cecum with sandpaper and sutures placed in the right abdominal sidewall. The mouse is anesthetized and the abdomen is prepped. A midline laparotomy is created and the cecum is identified. Sandpaper is used to gently abrade the surface of the cecum. Next, several figure-of-eight sutures are placed into the peritoneum of the right abdominal sidewall. The abdominal cavity is irrigated, a small amount of starch is applied, and the incision is closed. We have found that this technique produces the most consistent adhesions with the lowest mortality rate.
Karın yapışıklıklar genellikle cerrahi veya karın içi enfeksiyonu takiben, inflamasyon yanıt olarak karın içinde formu skar dokusu bir form vardır. Yapışıklıklar kronik karın ağrısı ve kısırlık başlıca nedenidir ve ince bağırsak tıkanması 1 en sık nedenidir. Yapışıklıklar varlığı, ikinci bir karın operasyonu daha zor performans ve komplikasyonların 2 olasılığını artırır yapar.
Yıllar süren araştırmalara rağmen, yapışıklık oluşumunu altında yatan mekanizmaları yeterince anlaşılamamıştır. Peritoneal bir başlangıç yaralanma ardından barsak ve karın duvarı birlikte, 3 yüzeylerini bağlayan bir pıhtı oluşturan fibrin bakımından zengin sıvının, bir eksudasyon neden olduğu bilinmektedir. Daha sonra, fibroblastlar ve diğer hücreler yapışkan uzaya göç ve bağ dokusunu 4 salgılar. yıllara aylarda yapışma kan damarlarını ve sinirleri geliştirerek olgunlaşır 5.
Çeşitli ticari ürünler abdominal cerrahi (örneğin, Seprafilm) sonrasında doku kaynaşması oluşumunu azaltmak için tasarlanmış ürünler mevcuttur. Tüm bu ürünlerin mekanik bariyerler olarak hareket ve bağırsak döngüler ve karın duvarı 6,7 arasındaki fiziksel teması engelleyerek yapışma oluşumunu durdurmak. Cerrahi adhezyon bariyeri yapışıklık 8 oluşumunu azaltır kontrollü çalışmadan kanıtlara rağmen, pek çok cerrah anekdotal mekanik bariyer ürünlerin etkinliği ile hayal kırıklığı olmuştur.
Şu anda yapışıklık oluşumunda rol kesin süreçler tam olarak anlaşılamamıştır olduğu gerçeğini yansıtır herhangi bir ilaç tabanlı anti-yapışma tedaviler vardır. Özellikle yapışma oluşumunda yer olayların gelişmiş bir anlayış gerektirir yapışıklıkların oluşumuna katılan hücresel veya moleküler ajanlar hedefleyen bir terapi geliştirilmesi. çeşitli grups yapışıklık oluşumu 9-11 için önemli olabilir moleküler yollar belirledik. Hayvan modelleri yapışıklıklar oluşumunu incelemek için mükemmel bir ortam sağlar. Birçok çalışma, çok sayıda hayvan, özellikle de sıçan ve fare 6,12-14 yapışkanlıktaki cerrahi oluşturulmasını tarif yayınlanmıştır. Fare ve transgenik fareler ve fare tabanlı antikorların geniş yer fibrozis okuyan bizim deneyim göz önüne alındığında, yapışıklıklar çalışma için model olarak fare seçti. Bu yazıda, biz tekrarlanabilir ve güvenilir fare karın yapışıklıklar oluşturmak için geliştirilen tekniği rapor.
Aşağıdaki protokol Stanford Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (IACUC) tarafından onaylanmış ve araştırma hayvanların kullanımı ile ilgili tüm kurumsal etik kurallara uygun olmuştur.
Karın Adezyonların 1. Yaratılış
2. Hasat Yapışma Doku
cerrahi, çekum ve muhtemelen artan kolon, karaciğer ve ince bağırsağın döngüler sonra yedi gün sağ taraflı karın duvarına yapışık olmalıdır. (Şekil 8) Kesilen doku gömüldü, kesit ve mükemmel histolojik slaytlar verecektir edilebilir. (Şekil 11, 12)
Prosedür doğru gerçekleştirildiğinde, farelerin% 100 yedi gün sonra dikkate değer adezyonlar olmalıdır. Ölüm% 5 daha az olmalıdır.
Şekil 1: Cerrahi Hazırlık (a) Hayvan bant ve betadin prepped karın güvence altına alınmıştır (b) betadine alkollü bir bezle temizlendi ve steril örtüyü yerleştirildi...om / files / ftp_upload / 54450 / 54450fig1large.jpg "target =" _ blank "> bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayınız.
Şekil 2:.. İnsizyon kesi xiphoid mesaneden seviyesinden uzanmalıdır bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayınız.
Şekil 3:. Çekum Aşınma (a) sağ işaret ucu ile sol işaret parmağı üzerinde çekum Drapaj çekum baz sol başparmak ile stabilize sağlar (b) zımpara uygun bir seviyede bırakır. pürüzlü bir yüzeye buna körbarsak daha önce ve kanama birkaç peteşial puan ile daha az parlak. Gemiler burada en briskly kanayacak kadar ekstra bakım, mezenterik kenarına yakın zımparalama sırasında alınmalıdır. Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.
Şekil 4:. Karın Duvarı Aşınma organlar kenara ve kaba görünene kadar kas duvarının periton yüzey zımparalanır. Kan damarı sadece sık rastlanan bir karın duvarında zımpara yukarıda gördüğümüz ama. Önemli ölçüde kanamaya olmaz bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayınız.
Şekil 6:. Nişasta Uygulama nişasta hafif tabakası karın yan duvar ve bağırsak üzerinde serpilir. Dikişler kas duvarında görülen figür sekiz-iki. Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.
Şekil 7,: İkinci Cerrahi Kesi (a) kesi sadece orijinal kesi solunda başladı (b) yeni kesi göğüs kafesi ile mesane seviyesinden uzanmalıdır... Büyük halini görmek için tıklayınız bu figür.
Şekil 8:. Ince bağırsağın (SB) Yapışma Döngüler sağ yan duvara ve birbirlerine yapışık bulunmaktadır. Görülen orijinal orta hat kesi, şimdi iyileşti, (A.Ş.). Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.
trong> Şekil 9: Yapışma Doku excising. (a) ve (b) altta yatan bağırsak için deri ve karın duvarı yapışık bir "ada" yapışık alanı çevresinde tam bir daire keserek serbest bırakılır. Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.
Şekil 10:. Örnek bağırsak kesen diğer tarafında bir yan (a) ve deri üzerinde barsak dokusu bir sandviç verim (b). Görünür dikiş adet numune histoloji için kullanılacak ise kaldırılmalıdır. Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.
Şekil 12: immünofloresan Görüntüleme immunofluorescently α-düz kas ac lekeli ameliyat sonrası yedi gün yapışma bir bölümü.kalay, (solda) cilt saç köklerinin gerçek boyama ve çekal kas duvarı (orta) ve çekal luminal yüzeyindeki (sağda) non-spesifik boyama göstererek. Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.
Bu prosedürde kritik adımlar şunlardır: iyice, perforasyon neden karın yanağında sütür yerleştirerek, ve nişasta doğru miktarda uygulamadan çekum aşındırma. Sadece çekum, ya da barsak küçük bir özel bölümüne zımpara kağıdı uygulayın. ince bağırsağın büyük miktarlarda zımpara yaygın kullanımı önemli ileus neden olmaktadır. yüzeyi pürüzlü hale yeterli kuvvetle çekum aşındırmak için özen, ancak duvar gözyaşları o kadar çok değil. Bu dengeyi bulmak biraz zaman alabilir. Her zaman dikkatli bir şekilde bağırsak işlemek ve bağırsak işlemek için keskin veya dişli forseps kullanmaktan kaçının. Yanlışlıkla forseps ile ince bağırsak mezenter kapma ya da çok zorla barsak çekerek kanamaya yol kolaydır.
Bir gözyaşı çekal duvarında meydana gelirse, işlem sonlandırılır ve hayvan ötenazi edilmelidir. Bizim tecrübelerimize göre, bir kaç gün sonra hayvanın ölümü ile çekal gözyaşı sonuçları, gözyaşı repa olsa bileiyi IRED. Buna ek olarak, sekum duvarın gözyaşı öngörülemeyen bir şekilde enflamatuar yanıtı etkileyecek dışkı dökülme neden olacaktır.
Hemostaz prosedürün sonunda tamamlanmış olması gerekir. Bazı kanama gemiler açık yeniden ve durmuş görünen sonra kanamaya başlar. Şüphe, kanama noktasının etrafında bir emilebilir monofilament figür sekiz-sütür yerleştirdiğinizde. Bu minimum dirençle doku da çekilebilir, çünkü ameliyat dikiş ipliğinin bu tür ipek veya örgülü absorbe edilebilir sütür tercih edilir. Ancak biz monofilament daha az inflamatuar olduğu gibi ipek veya örgülü emilebilir sütür, yapışıklıklar uyarılacak karın yanağında en etkili olduğunu bulduk.
Prosedürün sonunda nişasta uygulama doku kaynaşması oluşumunu artırmak için yardımcı olur, ancak nişasta aşırı miktarda ölümüne neden olan bir enflamatuar reaksiyonlar oluşur keşfetmişlerdir. nişasta lightl üzerine serpilir olmalıdırY. Bu katı bir tabaka oluşturur o kadar olmamalıdır.
Öncelikle bu işlemi öğrenirken, birkaç fare kaybetmek yaygındır. Bizim tecrübelerimize göre en sık görülen ölüm nedenleri nedeniyle bağırsak delinmesi aşırı kuvvetli bağırsak aşınmaya ve sepsis nedeniyle ileus nedeniyle dehidratasyon vardır. tam hemostaz ameliyat sonunda elde değilse kanama nedeniyle ölüm meydana gelebilir.
yapışma oluşumu yetersiz ise, daha fazla nişasta bırakarak, ya da karın yan duvarı üzerinde daha fazla sütür yerleştirerek, çekum ve sağ yan duvarın daha agresif aşınma kullanmayı düşünün. Bizim tecrübelerimize göre, yeterli yapışıklık oluşumunda daha az karın sonuçları yeniden açılması az bir süre kala bir hafta bekliyor. Ameliyattan sonra farelerin ölüm oranı yüksek ise, diğer yandan, hemostaz için daha yakından incelenmesi ve daha az nişasta uygulayarak, çekum az agresif aşınma kullanmayı düşünün. Dikkatli bir şekilde izlemek için de önemlidirAmeliyat sırasında fare solunum hızı. Bu prosedür ile cerrah kazandığı deneyim sonra, mortalite% 10 daha az olmalıdır.
Bu teknik, öncelikle çekum ve sağ karın yan duvar arasındaki yapışıklıkları oluşturmak için tasarlanmıştır. Yapışıklıklar da genellikle küçük bağırsak, karaciğer ve orta hat kesi arasında oluşturacaktır. Bu tekniği kullanarak genelde karnın sol tarafında yapışıklıklara neden olmaz. Bu tekniğin bir sınırlama bağırsak ve karın duvarı arasında yapışıklıklar bağırsak döngüler arasındaki yapışıklıklar daha oluşturmak için daha muhtemeldir olmasıdır. Buna ek olarak, genellikle birden fazla ameliyat oldu insanlarda görülen yapışkan doku, bir tamamen donmuş karın tam yol açması muhtemel değildir.
Giriş bölümünde tartışıldığı gibi, birçok teknik fareler ve diğer türler, özellikle de sıçanlarda ADEZYONLARIN üretilmesi için, literatürde 6,12-14 tarif edilmiştir. daha az yayınlanmış Protoco vardır Farelerde yapışıklık yaratılması için ls. Biz farelerde yapışıklık yaratma sıçanlarda daha zordur, çünkü çoğu araştırmacı sıçan kendi tekniğini geliştirmek için seçtim spekülasyon. Ancak, transgenik fareler ve anti-fare antikorları yüksek kullanılabilirlik, çünkü biz büyük teknik zorluk rağmen, farelerde yapışma yaratılması için sağlam bir modeli var değerli olduğuna inanıyoruz. Biz yayınlanan sıçan protokolleri birçok denedikten sonra bu protokolü geliştirdi. Biz çekum üzerinde elektrokoter kullanımı gibi sıçan yapışıklıklar, oluşturmak için yöntemler, genellikle fareler ölmesine neden olduğunu buldular. Biz yalnız yan iskemik düğmeleri yerleştirerek, ya da sadece çekum aşındırma gibi tek bir müdahaleyi kullanmak teknikleri ile üretilen yapışıklıklar yoğunluğu memnun değildi. Burada mevcut teknik mortalite ve minimize sürekli ederken yapışıklıkları üretmek için, deneme yanılma yoluyla buldum müdahalelerin bir kombinasyonunu temsil etmektedir.
Bu tekniğin sürekli çekum ve yan duvar arasındaki oluşturmak için yapıştırıcı dokusu sebep olur çünkü içerik ">, biz adezyon oluşumunu azaltmak için tasarlanmış deney müdahalelere idealdir olduğuna inanıyoruz. Ayrıca, bu tekniktir moleküler yollar ve hücre türlerini araştırmak için kullanılabilir yapışıklık oluşumunda çıkıyor. yapışma doku kolayca çıkarıldı ve histoloji için hazırlanan ve verimleri mükemmel histolojik görüntüleri (12, 11 Şekiller) olabilir.Bazı araştırmacılar yapışıklıklar zaman 100'den az% oluşturduğu bir model isteyebilirler. nişasta uygulanmasını atlama kabaca% 80 yapışma oranını azaltacaktır. sağ karın yan duvarına yerleştirilen ipek dikişlerle sayısının azaltılması daha da yapışma oranını azaltacaktır.
Bizim tecrübelerimize göre, ameliyattan bir gün sonra yedi bağırsak karın duvarına sürekli yapışık ilk kez noktasıdır. Bununla birlikte, diğer zaman noktaları olarak daha uygun olabilirProjenin odak. Örneğin, yapışma uzaya nötrofillerin ve makrofajların göç ilgilenen araştırmacılar ameliyat sonrası ilk beş gün içinde doku hasat isteyebilirsiniz. Öte yandan, fibroblastlar tarafından kollajen depozisyon işlemi ilk hasardan sonra hafta içinde yer alır, ve bunun için ameliyattan sonra birkaç hafta aralıklı zaman noktalarında doku incelenmesi daha uygun olacaktır.
Bu yordamı gerçekleştirirken Cerrahi loupes cerrahi alanın büyütme için çok faydalıdır. Operatif mikroskop da kullanılabilir, ancak farklı açılardan ameliyat alanını incelemek için cerrahın yeteneğini sınırlar olabilir. Prosedür, aynı zamanda, hiç büyütme ile yapılabilir.
Yazarlar hiçbir rakip mali çıkarları olduğunu beyan ederim.
CDM Amerikan Cerrahlar Koleji (AKS) Resident Araştırma Bursu ile desteklenmiştir. MSH California Rejeneratif Tıp Enstitüsü (CIRM) Klinik Fellow eğitim bursu TG2-01159 tarafından desteklenmiştir. MSH, HPL ve MTL Maksillofasiyal Cerrahi American Society (ASMS) / Maksillofasiyal Cerrahlar Vakfı (MSF) Araştırma Bursu Ödülü tarafından desteklendi. HPL NIH hibe R01 GM087609 ve Anthony Shu onuruna Ingrid Lai ve Bill Shu bir hediye ile desteklenmiştir. HPL ve MTL Pediatrik Rejeneratif Tıp Hagey Laboratuvarı ve Meşe Vakfı tarafından desteklenmiştir. MTL Gunn / Olivier Fonu tarafından desteklenmiştir.
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Fisherbrand Absorbent Underpads, 20" x 24" | Fisher Scientific | 14-206-62 | |
Polylined Sterile Field, 18" x 24" | Busse Hospital Disposables | 696 | Cut a rectangular hole of the appropriate size |
Isothesia isoflurane | Henry Schein | 050033 | |
Fisherbrand Sterile cotton gauze pad, 4" x 4" | Fisher Scientific | 22-415-469 | |
Puralube petrolatum ophthalmic ointment, 1/8 oz. tube | Dechra Veterinary Products | NDC 17033-211-38 | |
Nair depilatory cream | Church & Dwight Co. | 22339-05 | |
Buprenex buprenorphine 0.3 mg/ml | Reckitt Benckiser Pharmaceuticals Inc. | NDC 12496-0757-5 | |
1 cc insulin syringe, 27 G | Becton Dickinson | 329412 | |
Povidone Iodine Prep Solution | Medline | MDS093944H | |
Webcol alcohol prep swabs | Covidien | 6818 | |
General-Purpose Labarotory Labeling tape | VWR | 89097-912 | |
BioGel PI surgical gloves | Mölnlycke Health Care | ALA42675Z | |
Micro Forceps with teeth | Roboz | RS-5150 | |
Fine scissors- sharp | Fine Science Tools | 14060-09 | |
Straight serrated forceps | Fine Science Tools | 11050-10 | |
Castro-Viejo needle driver | Fine Science Tools | 12565-14 | |
100 grit 1/4 sheet sandpaper | ACE Hardware | 1010446 | Cut into strips |
4-0 silk suture, 30", SH needle | Ethicon | K831 | |
7-0 PDS II absorbable monofilament suture, 30", BV-1 needle | Ethicon | Z135 | Usually comes double-armed. Cut the suture at the midway point to generate two usable sutures. |
Rice starch | MP Biomedicals | 102955 | |
0.9% Sodium Chloride Irrigation | Baxter | BHL2F7121 | Warm to 37 °C prior to use |
10 ml syringe | Becton Dickinson | 309604 | |
6-0 Vicryl absorbable braided suture, 18", RB-1 taper needle | Ethicon | J212H | |
6-0 Ethilon nylon monofilament suture, 18", P-3 needle, | Ethicon | 1698G | |
Tegaderm Transparent Film Dressing Frame Style, 6 cm x 7 cm | 3M | 1624W | Cut in half lengthwise |
Bu JoVE makalesinin metnini veya resimlerini yeniden kullanma izni talebi
Izin talebiThis article has been published
Video Coming Soon
JoVE Hakkında
Telif Hakkı © 2020 MyJove Corporation. Tüm hakları saklıdır