마우스의 복부 유착의 창조

Abdominal adhesions that form after surgery are a major cause of pain, infertility, and hospitalization and reoperation for small bowel obstruction. Our surgical procedure for creating abdominal adhesions in mice is a reliable tool to study the mechanisms underlying the formation of adhesions.

Abdominal adhesions consist of fibrotic tissue that forms in the peritoneal space in response to an inflammatory insult, typically surgery or intraabdominal infection. The precise mechanisms underlying adhesion formation are poorly understood. Many compounds and physical barriers have been tested for their ability to prevent adhesions after surgery with varying levels of success. The mouse and rat are important models for the study of abdominal adhesions. Several different techniques for the creation of adhesions in the mouse and rat exist in the literature. Here we describe a protocol utilizing abrasion of the cecum with sandpaper and sutures placed in the right abdominal sidewall. The mouse is anesthetized and the abdomen is prepped. A midline laparotomy is created and the cecum is identified. Sandpaper is used to gently abrade the surface of the cecum. Next, several figure-of-eight sutures are placed into the peritoneum of the right abdominal sidewall. The abdominal cavity is irrigated, a small amount of starch is applied, and the incision is closed. We have found that this technique produces the most consistent adhesions with the lowest mortality rate.

복부 유착은 일반적으로 수술 또는 복강 내 감염에 이어 염증에 반응하여 복부 흉터 조직 형성의 형태이다. 유착 만성 복통 및 불임의 주요 원인이며, 소장 폐쇄 ^(1)의 가장 흔한 원인이다. 유착의 존재는 제 복부 조작이 더 어려운 수행 합병증의 ^가능성이 증가한다.

년간의 연구에도 불구하고, 유착의 형성을 기본 메커니즘은 제대로 이해 남아 있습니다. 복막 표면 초기 부상 다음 장과 같이 복벽 ^(3)의면을 결합하는 혈전 형성 피브린이 풍부한 유체의 삼출을 야기하는 것으로 알려져있다. 이후, 섬유 아세포 등의 세포 접착 공간으로 이전 및 결합 조직 ^(4)을 분비. 세 개월간 밀착성 혈관과 신경을 개발하여 성숙 ^5.

몇몇 상업적 제품은 복부 수술 (예 Seprafilm) 후 유착 형성을 줄일 수 있도록 설계되어있는 것. 이 모든 제품의 기계적 장벽의 역할과 대장의 ​​루프와 복부 벽 ^6,7 사이의 물리적 접촉을 방지하여 유착 형성을 중지합니다. 외과 접착 배리어 유착 ^(8)의 형성을 감소시키는 대조 연구로부터의 증거에도 불구하고, 많은 외과의는 일화 기계적 장벽 제품의 효과 실망되었다.

현재 유착 형성에 관여하는 정확한 과정이 제대로 이해하고 있다는 사실을 반영하는 어떤 약물 계 항 - 부착 요법은 존재하지 않는다. 특히 유착 형성에 관여하는 이벤트의 개선 된 이해를 필요 유착 형성에 관여하는 세포 또는 분자 제제를 대상으로하는 치료법 개발. 여러 그룹들 유착 형성 ^9-11에 대한 중요 할 수있다 분자 경로를 확인했다. 동물 모델은 유착 형성을 연구하기위한 최상의 환경을 제공한다. 많은 연구는 여러 동물, 특히 쥐와 마우스 ^6,12-14에 부착 수술 생성을 설명하는 발표되었다. 마우스 및 형질 전환 마우스 및 마우스 기반 항체의 폭 넓은 가용성 섬유증을 공부하고 우리의 경험을 감안할 때, 우리는 유착의 연구를위한 우리의 모델로 마우스를 선택했다. 여기서, 우리는 우리가 재현성 및 신뢰성 마우스의 복부 유착을 만들기 위해 개발 한 기술을보고합니다.

다음 프로토콜은 스탠포드 대학 기관 동물 관리 및 사용위원회 (IACUC)의 승인을 연구 동물의 사용과 관련된 모든 기관 윤리 지침을 준수하고 있습니다.

복부 유착 1. 창조

1. 일주 전 과정에 항생제 우 다이어트에 마우스를 시작합니다.
2. 수술 악기와 사전 따뜻한 식염수 관개 솔루션을 압력솥.
3. 2 % 흡입 이소 플루 란을 이용하여 마우스를 마취.
4. 짧은 애플리케이션 뒤에 이발기 사용 - 탈모 에이전트 (5 내지 10 초), 복부의 표면의 대부분으로부터 모발을 제거한다. 철저하게 조심스럽게 신중하게 따뜻한 물에 마우스의 아래쪽을 덩크에 의해 선택적으로 젖은 거즈로 닦아하여 제모 제를 제거합니다. 철저하게 동물을 건조.
5. 마취 코 콘에 동물의 주둥이를 놓습니다. 전체 수술하는 동안주의 깊게 연구를 모니터링필요에 따라 동물 espiratory 속도는 마취 유량을 적정한다.
6. 저체온증을 방지하기 위해, 이러한 가열 패드 또는 온난화 램프 등의 온난화 장치를 사용합니다.
7. 이전에 복부를 준비하고에, 수술 중 변화에서 마우스를 방지하기 위해 복부 위 아래에 배치 테이프의 스트립 마우스를 고정합니다. betadine와 복부를 소독 한 다음 70 % 에탄올에 따릅니다. 면도 영역의 에지에 모발을 포함하여 사전에 가능한 한 많은 공간을 포함한다. 마우스를 통해 멸균 드레이프를 놓습니다. (그림 1)
8. 피하 0.1 ㎎ / ㎏ 부 프레 노르 핀, 또는 30g 마우스 3 μg의 주입.
9. 피부 절개를합니다.
   1. 낮은 복부 정중선에서 시작, 집게로 피부를 잡고 날카로운 가위를 사용하여 피부의 얕은 수직 절단을합니다.
   2. 가위로 xyphoid에 우량 절단을 수행한다. 단지 피부를 입력하도록주의하십시오.
10. 복부 근육은 n입니다으로내장을 덮고 흐름 표시, 집게와 근육의 중간 선을 잡고 매우 신중하게 날카로운 가위를 사용에 작은 상처를합니다. 실수로 복부 장기로 절단하지 않도록합니다.
11. 작은 컷 복막 공간을 입력하고 근육 층이 복부 장기에서 멀리 당겨보고 후, 구멍에 가위를 삽입하고 조심스럽게 양 방향으로 절단하여 우량과 하방 절단을 확장합니다. xyphoid에서 우량으로 하방 방광 위의 절개를 확장합니다. (그림 2)
12. 이제 창자가 노출되어 있는지, 맹장을 찾아 조심스럽게 외면 화하다. 이빨이나 날카로운 집게로 맹장을 파악하지 마십시오. 대신 이러한 Adson 톱니 모양의 집게와 같은 외상성 집게를 사용합니다.
13. 사포와 맹장을 연마.
    1. 표면이 덜 반짝 점상 appea 될 때까지 60 초 - 부드럽게 30 100 사포로 맹장의 양쪽의 전체 표면을 연마표면에 연구. 외과 의사가 오른 손잡이 인 경우, 오른쪽에 직면 팁과 맹장의 방향과 외과 의사의 왼쪽 검지 손가락을 통해 맹장을 드레이프하는 데 도움이됩니다. (그림 3)
    2. 실수로 얇은 맹장 벽의 천공의 원인이 높기 때문에, 부드럽게 샌딩을 수행합니다. 샌드페이퍼가 맹장 표면을 따라 움직일 때 깔깔 소량 생각한다. 사포는 맹장에 잡기 반복적으로 느껴지는 경우,이 가능성이 맹장 벽에 파열의 원인이됩니다. 사포의 입자를 이동시키다이 과도한 이물 반응을 일으킬 수 있으므로, 복부에 남아 있지 않도록주의하세요.
    3. 맹장 벽에 파열이 발생하는 경우, 절차를 종료하고, 동물을 안락사.
    4. 맹장 혈관이 사포에 의해 전단되고 출혈이 발생하는 경우, 거즈와 최대 2 분 동안 압력을 유지. 출혈이 시간 이후 계속되면 그러나 주위에 그림-의 여덟 7-0 모노 필라멘트 봉합사를 배치출혈의 포인트. 이 안정적으로 거의 모든 경우에 출혈을 중지합니다. 이 벽의 관련 부분의 괴사를 일으키는 위험 같이, 봉합으로 맹장 벽을 다량 포함하지 않도록주의한다.
14. 오른쪽 복부 측벽을 손상.
    1. 오른쪽 복부 측벽의 근육의 복막 표면을 연마하기 위해 사포의 스트립을 사용합니다. 샌딩 여기보다 맹장에 더 적극적으로하고 오른쪽 복부 측벽의 전체 표면이 거칠게 나타날 때까지 계속합니다. 피부가 근육 층의 개구부를 통해 볼 수 있도록 열심히 연마하지 마십시오. (그림 4)
    2. 카스트로 - 비에 호 바늘 드라이버를 사용하여, 오른쪽 복부 측벽의 근육 층에 4-0 그림-의 여덟 둘 사이에 네 실크 바늘을 배치합니다. 약 5 mm 길이 꼬리를 남겨주세요. 실수로 봉합에 장 벽을 잡으려고 않도록주의하십시오. (그림 5)
15. 승 가득 10 ML의 주사기를 사용하여i 번째는 식염수를 따뜻하게 창자를 여러 번 관개. 뿐만 아니라 내부를 관개 복강 식염수의 흐름을 지시. 마우스 아래 표면이 적셔지면, 마우스를 통해 이동하거나 저체온증을 방지하기 위해, 표면을 교체한다.
16. 초과 관개를 흡수하기 위해 절개 위에 배치 멸균 거즈를 사용합니다.
17. 전분의 핀치를 타고 오른쪽 복부 측벽의 표면에와​​ 맹장의 양쪽에 그것을 뿌린다. (그림 6)
18. 활성 출혈이 없음을 확인합니다. 이 경우, 멈출 때까지 출혈 지점에 직접 압력을 적용 할 거즈 스폰지를 사용합니다. 출혈이 쉽게 멈추지 않을 경우 전술 한 바와 같이 지혈 봉합을 배치합니다.
19. 포셉과 손가락의 뭉툭한 끝을 사용하여 부드럽게 복강에 다시 창자를 밀어 넣습니다. 유착 형성을 극대화하기 위해 다음 오른쪽 복부 측벽의 봉합에 맹장을 배치합니다.
20. 기음복부 절개를 잃게됩니다.
    1. 6-0 꼰 흡수성 봉합사를 사용하여 절개 상단의 근육층에 실행 스티치를 배치했다.
    2. 근육 층을 함께 데리고 아래로 절개의 아래쪽으로 봉합을 실행합니다. 약 3mm로 여행하고 각각의 새로운 스티치로 3 밀리미터 물린 걸릴. 봉합을 배치하는 동안주의 실수로 소장의 물기를 취할 수 없습니다.
    3. 절개의 하단에서 이전의 입에서 봉합의 루프를두고 봉합을 묶어 악기로 사용합니다. 5mm 꼬리를 떠나 봉합을 잘라.
    4. 피부를 닫 6-0 나일론 모노 필라멘트 봉합사로 위의 세 가지 단계를 반복합니다.
21. 20 ㎖ / kg 피하 식염수 러스 (30 g을 마우스 약 0.5 ml)에 관리 할 수​​ 있습니다.
22. 지느러미 모피 관개 동안 젖지 경향 마른 거즈를 사용하여, 철저하게, 전체 동물을 건조.
23. 느슨하게 절개를 충당하기 위해 복부 주위에 드레싱 접착제를 포장. ㄱ을 제한하지 않도록주의 바랍니다nimal의 다리 또는 드레싱 호흡 역학.
24. 이 마취에서 회복으로 조심스럽게 동물을 모니터링 할 수 있습니다. 통증 조절을위한 시술 후 프레 노르 핀 2-3 일 동안 매일 12 시간을 관리 할 수​​ 있습니다.

2. 수확 접착 조직

1. 초기 수술 후 최소 7 일을 기다립니다. 또, 수술 도구를 압력솥과 이소 플루 란으로 마우스를 마취.
2. 70 % 에탄올 다음 betadine와 복부를 소독. 면도 조직학 더 어려워 피부를 포함하는 접착 시험편 모발에 적용되지 않도록 복부의 우측에서 부가 머리카락을 털을 뽑다.
3. 대장은 종종 원래의 절개에 부착되어 있기 때문에, 좌측 paramedian 절개를 사용합니다. 복부의 하단부터 원래 절개 하단 ​​왼쪽의 약 5 mm의 작은 톱니 집게로 피부를 잡고 예리한 가위 피부로 잘랐다. 이 우수한 절단 확장흉곽에 LY. (그림 7)
4. 가위를 이용하여 근육의 층으로하고, 복막 공간을 입력 한 후 절단, 절개의 상단과 하단에 컷 연장된다. 원래 절개로 가능 또한 복부의 우측 측벽에 부착하고 맹장과 소장을 일으키는 접착제 조직이 될 것입니다. (그림 8)
5. 맹장의 수준 이상, 가위를 사용하여 절개의 가장자리에 시작, 창자가 부착되는 영역 주위에 원 복부 벽에 절단 시작합니다.
6. 위의 교류와 맹장의 수준 이하로 점차 장에 피부와 복부 벽 부착의 "섬"을 산출, 모든 방법 접착 주위를 잘라 원을 완료합니다. (그림 9)
7. 다시 피부와 복부 벽으로 구성되어 조직의 샌드위치를​​ 산출, 창자로 절단 창자의 나머지 부분에서 접착 부분을 분리, 가위를 사용하여한쪽, 다른 쪽 창자 및 조직 접착제를 사이에이 둘을 연결. (그림 10)
8. 선택적으로, 크게 복벽 근육으로부터 피부를 분리 뾰족한 가위를 사용합니다. 조직학 붙어 피부를 떠나는 것을 고려하지만, 분해 및 세포 분리를 위해 피부를 제거 할 수있다. 조직은 조직 검사를 위해 사용되는 경우, 과도하게 접착 인터페이스를 방해하지 않고 가능한 한 많은 봉합 물질을 제거해야합니다. 소화와 세포 분리의 경우는 한 다이제스트 여과 조직으로 제자리에 봉합을 떠나 허용됩니다.
9. 접착 조직을 절제 한 후, 당신의 기관 동물 사용위원회의 승인을 인도적인 방법을 사용하여 마우스를 안락사.

수술, 맹장 가능성이 상승 대장, 간, 작은 창자의 루프 후 7 일에서 오른쪽 양면 복부 벽에 부착해야한다. (그림 8) 절제된 조직은 임베디드 및 절단 및 우수한 조직 학적 슬라이드를 보장 할 수 있습니다. (그림 11, 12)

절차가 적절히 수행되면, 마우스의 100 % 이레에서 상당한 유착을 가져야한다. 사망률은 5 % 미만이어야합니다.

그림 1 : 수술 준비 (가) 동물 테이프와 betadine로 수험 공부를 복부로 고정되어있다 (나) betadine가 알코올 면봉으로 삭제되었습니다 및 멸균 드레이프가 배치되었습니다...톰 / 파일 / ftp_upload / 54450 / 54450fig1large.jpg "대상 ="_ 빈 ">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

그림 2 :.. 절개 절개가 xyphoid에 방광의 수준에서 확장해야 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

도 3 :. 맹장 마모 (a)는 오른쪽을 가리키는 팁과 왼쪽 집게 손가락 위에 맹장 드레이핑은 맹장 염기가 좌측 엄지 손가락에 의해 안정화 될 수 있도록 (b) 연마 적절한 수준을 남긴다. 거친 표면 그와 맹장 이전보다, 출혈의 여러 점상 점 이하 반짝입니다. 혈관이 여기에 가장 활발하게 피하므로 각별한주의가, 장간막 쪽 근처 연마하는 동안주의해야한다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

그림 4 :. 복벽의 마모 내장 옆으로 쓸어하고는 거친 나타날 때까지 근육 벽의 복막 표면에 모래를 뿌려 장식한다. 혈관은 자주 발생 복벽의 사포 위에 볼 수 있지만. 실질적으로 피하지 않습니다 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

그림 6 :. 전분의 응용 프로그램 전분의 빛 층은 복부 측벽 및 장을 통해 뿌리고있다. 봉합은 근육 벽에서 볼 수 있습니다 그림 - 중 - 팔 두. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

그림 7: 두 번째 수술을위한 절개 (가) 절개 그냥 원래 절개의 왼쪽에 시작 (b)에 새로운 절개는 흉곽에 방광의 수준에서 확장해야합니다... 의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오 이 그림.

그림 8 :. 소장 (SB)의 접착 루프 우측 측벽에 서로 자기편이다. 볼 원래의 중간 선 절개, 지금 치료 (병원). 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

trong> 그림 9 : 접착 조직을 절제. (a)와 (b) 기본 대장에 피부와 복부 벽 부착의 "섬"이 부착 주변 완전한 원형으로 절단하여 해제됩니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

도 10 :. 시험편 창자 걸쳐 절단은 다른 쪽의 한쪽 (a) 및 장과 피부 조직의 샌드위치를 ​​수득한다 (b). 눈에 보이는 봉합사의 조각이 표본 조직학에 사용되는 경우 제거해야합니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

그림 12 : 면역 형광 이미징 immunofluorescently α-평활근 교류를위한 스테인드 수술 후 7 일에 접착의 섹션.주석 (왼쪽) 피부 모낭의 진정한 염색과 맹장 근육 벽 (가운데), 그리고 맹장 내강면 (오른쪽)의 비특이적 염색을 표시합니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

이 과정에서 중요한 단계는 다음과 같습니다 철저하게, 천공의 원인이되는 복부 측벽에 봉합을 배치하고, 전분의 오른쪽 금액을 적용하지 않고 맹장을 연마. 만 맹장, 또는 창자의 작은 특정 부분에 사포을 적용합니다. 소장 대량에 샌드 페이퍼의 광범위한 사용은 상당한 장폐색증을 유발하는 경향이있다. 표면이 거칠어집니다 충분한 힘과 맹장을 연마하는데주의를 기울여야하지만, 벽 눈물이 너무 많이하지. 이 균형을 찾는 것은 시간이 걸릴 수 있습니다. 항상주의 깊게 소장을 처리하고 장을 조작 할 수 날카 롭거나 이빨 집게를 사용하지 마십시오. 실수 집게로 작은 창자 장간막을 잡아하거나 너무 강제로 장을 당겨 출혈이 발생하기 쉽다.

눈물이 맹장 벽에서 발생하는 경우, 절차는 종료하고, 동물을 안락사한다. 우리의 경험에 의하면, 몇 일 후 동물의 죽음에 맹장 눈물 결과, 눈물은 바디 수리는 경우에도잘 IRED. 또한, 맹장 벽의 눈물은 예측할 수없는 방법으로 염증 반응에 영향을 미칠 것입니다 대변의 유출의 원인이됩니다.

지혈은 프로 시저의 끝에서 완료한다. 일부 출혈 혈관은 다시 열고을 중지 한 것으로 나타나는 후 출혈이 시작됩니다. 의심, 출혈 지점 주위에 흡수 모노 필라멘트 그림 - 중 - 팔 봉합을 배치 할 때. 이 최소 저항 조직 비록 인출 할 수 있기 때문에 봉합이 유형 또는 꼰 실크 봉합사를 흡착하는 것이 바람직하다. 그러나 우리는 모노 필라멘트 덜 염증 그대로 실크 또는 꼰 흡수성 봉합사는, 유착을 유도 복부 측벽에 가장 효과적인 것으로 나타났습니다.

프로 시저의 끝에서 전분의 적용은 유착 형성을 증가시키는 데 도움이 있지만 전분 과량 사망을 일으키는 염증 반응을 일으킬 것을 발견 하였다. 전분은 lightl에 뿌려해야와이. 이 고체 층을 형성 너무 많이가 없어야합니다.

제 절차를 학습 할 때, 몇몇 마우스를 잃는 것이 일반적이다. 우리의 경험에서 사망의 가장 흔한 원인으로 인해 장 천공에 지나치게 활발한 소장의 마모, 패혈증으로 인한 장폐색으로 인한 탈수 있습니다. 완전한 지혈 수술의 끝에 도달하지 않은 경우 출혈로 인한 사망이 발생할 수있다.

유착 형성이 불충분하면 더 많은 전분을 떠나, 또는 복부 측벽에 대한 봉합을 배치, 맹장 및 우측 측벽의보다 적극적인 마모를 사용하는 것이 좋습니다. 우리의 경험에 의하면, 적절한 유착 형성 미만 복부 결과를 재개하기 전에보다 일주일 기다리고. 수술 후 생쥐의 사망률이 높으면 한편, 지혈을 위해 더 자세히 검사, 적은 전분을 적용 맹장 덜 공격적인 마모를 고려하여. 주의 깊게 모니터링하는 것이 중요하다수술하는 동안 마우스의 호흡 속도. 이 절차와 의사 이득 경험하면, 사망률은 10 % 미만이어야합니다.

이 기술은 주로 맹장 우측 복부 측벽 사이의 유착을 형성하도록 설계된다. 유착은 종종 소장, 간, 그리고 중간 선 절개 사이에 형성됩니다. 이 기술을 사용하면 일반적으로 복부 왼쪽의 유착의 원인이 없다. 이 기술의 한계는 장과 복벽 사이의 유착은 대장의 루프 사이의 유착보다 형성 할 가능성이 있다는 것입니다. 또한, 종종 다수의 수술 있었다 인간에서 볼 접착제 조직의 전체 복부 완전히 냉동 될 것 같지 않다.

도입부에서 설명한 바와 같이, 다양한 기술들이 쥐와 다른 종, 특히 쥐의 복부 유착의 제조 문헌 ^6,12-14에 기재되어있다. 훨씬 적은 공표 protoco이 있습니다 마우스에서 유착의 창조를위한 LS. 우리는 생쥐의 유착의 창조가 쥐보다 더 어렵 기 때문에, 대부분의 연구자들은 쥐에서 자신의 기술을 개발하기 위해 선택했다고 추측. 그러나, 형질 전환 마우스 및 항 마우스 항체의 큰 가용성 때문에, 우리는 더 큰 기술적 인 어려움에도 불구하고, 마우스의 접착 제작을위한 강력한 모델을 가지고 가치가 있다고 생각합니다. 우리는 게시 된 쥐 프로토콜의 많은 노력 후이 프로토콜을 개발했다. 우리는 맹장에 전기 소를 사용하는 등 쥐의 유착을 만드는 방법, 자주 쥐가 죽는 원인 것으로 나타났습니다. 우리는 혼자 측벽 허혈성 버튼을 배치, 또는 유일한 맹장을 연마와 같은 단일 개입을 사용하는 기술에 의해 생산 유착의 밀도에 만족하지 않았다. 우리가 여기서 제시 기술은 우리가 사망률을 최소화 일관하면서 유착을 생산, 시행 착오를 통해 발견 개입의 조합을 나타냅니다.

일부 연구자들은 유착이 시간의 100 % 미만을 구성하는 모델을 원할 수있다. 전분의 적용을 생략하면 약 80 %의 부착 율을 감소시킬 것이다. 우측 복부 측벽에 배치 실크 봉합사의 수를 감소 시키면, 상기 접착 율을 감소시킬 것이다.

우리의 경험에 의하면, 수술 후 하루 일곱 창자는 복부 벽에 지속적으로 접착 첫 번째 시점이다. 그러나, 다른 시간 포인트 따라 더 관련 될 수있는프로젝트의 초점. 예를 들어, 접착 공간으로 호중구와 대 식세포의 이동에 관심이있는 연구자들은 수술 후 처음 5 일 조​​직을 수확 할 수 있습니다. 한편, 섬유 아세포의 콜라겐 침착은 초기 손상 이후에 주 동안 발생하고,이 것이 수술 후 몇 주 동안 이격 시점에서 조직을 조사하기 더 적합 할 것이다.

이 절차를 수행하는 동안 수술 돋보기는 수술 부위의 확대에 매우 도움이됩니다. 수술 현미경은 사용하지만 서로 다른 각도에서 동작하는 필드를 검사하는 의사의 능력을 제한 할 수있다. 절차는 전혀 배율로 수행 될 수있다.

저자는 더 경쟁 재정적 이해 관계가 없음을 선언합니다.

CDM은 외과 의사의 미국 대학 (ACS) 주민 연구 장학금에 의해 지원되었다. MSH는 캘리포니아 재생 의학 연구소 (CIRM) 임상 연구원 교육 보조금 TG2-01159에 의해 지원되었다. MSH, HPL, 그리고 MTL은 악안면 외과의 미국 사회 (ASMS) / 악안면 외과 재단 (MSF) 연구 그랜트 수상에 의해 지원되었다. HPL은 NIH 보조금 R01 GM087609와 안토니 슈 경의를 잉그리드 라이와 빌 슈의 선물에 의해 지원되었다. HPL 및 MTL은 소아 재생 의학에 대한 Hagey 연구소와 오크 재단에 의해 지원되었다. MTL는 건 / 올리비에 기금에 의해 지원되었다.