Этот метод может помочь ответить на ключевые вопросы в клеточной биологии, такие как, насколько важно напряжение в удовлетворении шпиндель контрольно-пропускной пункт, и какова роль на шпиндель привязанности в хромосоме поведения в миозе? Основным преимуществом этой техники является то, что это нелеталетная техника, которая позволяет экспериментатору применять напряжение или перепозиционировать хромосомы в живой клетке. Для начала подготовьте слайд диаметром 75 на 25 миллиметров с круглым отверстием диаметром 20 миллиметров, вырезанное из центра.
Затем, запустить 25 на 25 миллиметров число 1,5 крышки щели через пламя горелки Bunsen в течение двух секунд. Нанесите вакуумную смазку по краю отверстия в стеклянной горке. Затем поместите крышку скольжения по отверстию и нажмите его, чтобы сформировать плотный уплотнения.
Переверните слайд и заполните недавно созданный колодец вскрытия галоуглеродным маслом. После получения некоторых взрослых мужчин сверчков, использовать рассечение ножницами, чтобы прорезать спинной поверхности параллельно длинной оси живота, прямо за крылом почки. Затем аккуратно сожмите живот, чтобы протолкнуть яички через разрез в экзоскелете.
Используя типсы, поместите изолированные яички в вскрытие хорошо. Под рассечением микроскопа используйте тонкие мипсы, чтобы разделить яички на более мелкие кусочки и удалить любой жир. Затем, распространение содержимого яички под маслом на поверхности крышки щели.
Продолжайте распространять содержимое яитесов до тех пор, пока часть спреда не будет едва видна невооруженным глазом. При необходимости могут быть использованы дополнительные нефтяные загруженные скважины для вскрытия. Во-первых, поместите конец стеклянной трубки в пламя горелки bunsen.
Держите конец трубки, чтобы создать угол 150 градусов и расширенную область узких стеклянных труб. Разбей трубки в тонкой области так, чтобы тонкая область, простирающаяся от ранее созданного угла, была длиной около 10 миллиметров. Используя микрофору, растопить кончик стеклянной иглы, образуя 45-градусный угол между иглой и платиновой проволокой микрофорги.
Затем оттяните стекло от провода, одновременно выключив тепло. Поместите ранее подготовленный слайд на сцену перевернутого фазового контрастного микроскопа. Затем найдите разделительные ячейки и центрив их в поле зрения, используя наименьшее возможное увеличение.
Поместите микроиглу в держатель иглы микроманипулятора. Затем вручную распоистив микроиглу в светлом пути микроскопа. Сосредоточьте микроскоп на нескольких фокусных плоскостях над плоскости, содержащей клетки.
Далее, используйте контроллер джойстика, чтобы переместить микроигл несколько раз, чтобы найти тень иглы в х и у осей. Отрегулируйте положение иглы до тех пор, пока положение кончика не будет видно, отрегулируйте положение иглы вдоль оси z до тех пор, пока кончик не будет в фокусе. Затем переориентация на клетки и фокусировка микроскопа чуть выше клеточной плоскости.
Затем отрегулируйте положение иглы так, чтобы кончик был в фокусе в этой фокусной плоскости. Повторите этот процесс, используя более высокую цель увеличения и более высокую чувствительность настройки. Переориентация на клетки и корректировка их положения, чтобы они оставались в центре поля зрения.
Используйте джойстик для управления микроиглы, как он толкает хромосомы вокруг внутри клетки. Убедитесь, что кончик иглы остается в плоскости над клетками. Чтобы переместить хромосому, сосредоточьтесь на хромосоме в верхней части клетки.
Затем отрегулируйте ось z на джойстике, чтобы привести кончик иглы в фокус, и перемести иглу с джойстиком в x и y. Поместите кончик иглы непосредственно на хромосому интереса, и нажмите его в нужном направлении. Нанесите достаточное напряжение, чтобы отделить хромосому от шпинделя.
Наконец, поместите хромосому в любом месте клетки. Используя этот протокол, можно изменить положение, применить напряжение и полностью отделить хромосому от шпинделя с помощью микроманипуляции. В этом примере две манипулируемые хромосомы были сохранены от присоединения к шпинделю, будучи постоянно толкнул с микроманипуляции иглы.
После освоения образцы можно подготовить к манипуляциям, а микроманипулятор можно распоить за 15-20 минут. Эксперименты по микроманипуляции могут занять от нескольких секунд до нескольких часов. При попытке этой процедуры, важно помнить, чтобы манипулировать хромосомами на стороне клетки дальше от крышки скольжения.
После своего развития, этот метод проложил путь для исследователей в области клеточной биологии, чтобы исследовать шпиндель контрольно-пропускной пункт в кузнечиков и богомола.
