Method Article
* Эти авторы внесли равный вклад
Специальная команда может предложить пациентам Майер-Рокитанского-Кустера-Хаузера возможность выполнять контролируемую стимуляцию яичников и криоконсервацию ооцитов во время лапароскопической вагинопластики.
У пациенток с синдромом Майера-Рокитанского-Кустера-Хаузера (MRKHS), у которых запланирована лапароскопическая вагинопластика и есть желание биологического материнства, мы предлагаем провести сопутствующее лапароскопическое извлечение ооцитов для криоконсервации. Извлечение ооцитов проводится в начале лапароскопии. Расположены правые и левые троакары 5 мм, через которые для пункции правого и левого яичников используется аспирационная игла 17 Г яичников соответственно. Для облегчения экспозиции фолликулов яичники мобилизуются и удерживаются лапароскопическими щипцами.
При аспирации нескольких фолликулов рядом друг с другом кончик иглы удерживается в яичнике, чтобы уменьшить количество раз, когда кора яичников трансфиксируется и из-за присущего риска кровотечения. Последующие этапы остаются неизменными по сравнению с лапароскопической модифицированной методикой вагинопластики Давыдова. Перед операцией проводится контролируемая стимуляция яичников протоколом антагониста гонадотропин-гормон-рилизинг-гормон (Gn-RH), а сопутствующая процедура извлечения ооцитов и вагинопластики назначается через 36 ч после окончательного триггера созревания фолликулов. Фолликулярная жидкость собирается в тех же стерильных трубках объемом 10 мл, которые используются при трансвагинальном извлечении ооцитов, и переносится в согревающем блоке (37 °C) в лабораторию вспомогательной репродукции, где оцифровываются зрелые (метафазные II) ооциты.
При этом у серии из 23 женщин с МРХ, ооциты были успешно извлечены и криоконсервированы у всех пациентов; Впоследствии вагинопластика была проведена без изменений, и стационарный и амбулаторный послеоперационный уход (день удаления мочевого катетера, день выписки из больницы, использование расширителя и комфорт при последующем наблюдении) остался неизменным. Одно послеоперационное осложнение возникло у одного пациента (лихорадка, развивающаяся на 5 день после операции и обнаружение внутрибрюшинной жидкости на трансабдоминальном УЗИ) и разрешилось после консервативного лечения. Вместо того, чтобы выполнять хирургическую вагинопластику и задерживать извлечение ооцитов у пациентов с MRKH, этот подход сочетает обе процедуры в одной лапароскопии, тем самым сводя к минимуму хирургическую инвазивность и анестезиологические риски.
При заболеваемости примерно 1 из 4-10 000 женщин МРХС является причиной 15% случаев первичной аменореи. MRKHS характеризуется врожденным отсутствием верхнего сегмента влагалища и матки, тогда как аномалии мочевыводящих путей и скелета связаны по-разному. Более конкретно, обычно присутствует влагалищный свод глубиной 1-2 см, а также могут быть найдены два рудиментарных маточных рога1.
В прошлом основной медицинский интерес к MRKHS заключался в том, чтобы обеспечить нормальный половой акт, который обычно требует построения неовагины либо нехирургическими, либо хирургическими подходами2. Тем не менее, достижения в области репродуктивной медицины в настоящее время позволяют генетическое материнство у пациентов с MRKHS либо суррогатным материнством 3,4, либо, в последнее время, трансплантацией матки5. В то время как трансплантация матки все еще является экспериментальной процедурой, суррогатное материнство доступно во многих странах мира6, и зарегистрированные акушерские и психосоциальные результаты сопоставимы со стандартным экстракорпоральным оплодотворением и донорством ооцитов7.
Как суррогатное материнство, так и трансплантация матки требуют извлечения ооцитов и экстракорпорального оплодотворения, но нет единого мнения о том, как выполнять сбор яйцеклеток у пациентов с MRKHS. Трансвагинальный подход может быть неосуществим из-за недостаточной эластичности влагалища8 даже после вагинопластики, атипичного расположения яичников9 или чрезмерного расстояния между яичниками и вагинальной манжетой 4,10. В этих случаях лапароскопическое извлечение ооцитов представляет собой оптимальный подход с точки зрения хирургического доступа. Однако, поскольку большинство пациентов с МРХС в настоящее время проходят лапароскопическую неовагинопластику, мы предлагаем выполнить лапароскопическое извлечение ооцитов во время операции по вагинопластике11 с последующей криоконсервацией ооцитов для будущего использования, тем самым минимизируя инвазивность при сочетании лечения сексуальной и репродуктивной функции пациентов с МРХС.
Демографические данные пациентов
Двадцать три пациента с МРХ прошли лечение по этому протоколу до сих пор. Анамнестические, инструментальные и лабораторные данные пациентов обобщены в таблице 1. Если не указано в таблице 1, никаких связанных врожденных аномалий обнаружено не было.
Местный этический комитет в третичном справочном центре для MRKHS (IRCCS San Raffaele University Hospital, Милан, Италия) был уведомлен и одобрил протокол до его реализации в июле 2017 года. Все пациенты или опекуны дали подписанное информированное согласие на лапароскопическое извлечение и криоконсервацию ооцитов во время вагинопластики и на использование анонимизированных клинических/лабораторных данных в научных целях.
1. Состав команды
2. Диагностическая проработка и консультирование
3. Планирование хирургической процедуры и контролируемой стимуляции яичников
4. Контролируемая стимуляция яичников: начальная доза, коррекция дозы и мониторинг, запуск окончательного созревания ооцитов
5. Клиническая процедура (лапароскопия): извлечение ооцитов
6. Клиническая процедура (лапароскопия): вагинопластика
ПРИМЕЧАНИЕ: Этапы вагинопластики остаются неизменными по сравнению с лапароскопической модифицированной методикой Давыдова12.
7. Лаборатория ЭКО: за день до забора ооцитов
8. Лаборатория ЭКО: процедура извлечения ооцитов
9. Денудация ооцитов
10. Витрификация ооцитов
11. Стационарная послеоперационная помощь
12. Амбулаторная послеоперационная помощь
13. Последующая деятельность
Таблица 2 включает данные стимуляции яичников пациенток, тогда как основные хирургические и функциональные исходы описаны в таблице 3. Сопутствующие лапароскопические процедуры извлечения ооцитов и вагинопластики были успешно объединены у всех пациентов. В среднем было извлечено 11,4 ± 5,4 (среднее ± SD) ооцитов и криоконсервировано 9,6 ± 4,3 ооцитов MII (таблица 3). В нашем опыте криоконсервации ооцитов у пациентов, перенесших АРТ, выживаемость послевония яйцеклеток по этому протоколу витрификации, определяемая как доля морфологически интактных ооцитов во время интрацитоплазматической инъекции сперматозоидов, составляла 84,5 ± 19,3. Общее среднее время операции составило 114 ± 17 мин, интраоперационная кровопотеря была незначительной (<50 мл) у всех пациентов, а интраоперационных побочных явлений не наблюдалось. Мочевой катетер и вагинальная марля были удалены на 2 день после операции у всех пациентов. На 3-й день после операции пациенты начали ежедневное использование расширителя и были выписаны на 6,0-й день ± 1,0. Одно послеоперационное осложнение произошло у одного пациента (лихорадка, развивающаяся на 5 день после операции и обнаружение внутрибрюшинной жидкости на трансабдоминальном УЗИ). Пациент успешно лечился перорально введенными антибиотиками и выписывался на 9-й день после операции. Последующее наблюдение после операции подтвердило анатомический и функциональный успех процедуры. Ни один из пациентов не сообщил о каких-либо ограничениях их повседневной деятельности, какой-либо боли или мочевом симптоме.
Рисунок 1: Протокол витрификации ооцитов. Схема, показывающая различные этапы процесса витрификации ооцитов. Ооциты сначала помещают в каплю WS1 (A), а затем в каплю WS2 (B). Смешайте каплю ES1 с WS2 и через 2 мин инкубации слить каплю ES2 с ранее слитыми каплями (B). Через 2 мин слита третья капля ES3 (B). Через 1 мин поместите ооциты в каплю ES4, инкубируя в течение 10 мин (С). Затем ооциты перемещаются последовательно в три капли VS в течение 60 с (D). Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.
Характерный | Среднее ± SD или n (%) | |
Возраст на момент постановки диагноза, лет | 13.8 ± 1.5 | |
46 XX кариотип | 23 | |
Возраст при операции, лет | 20.3 ± 3.4 | |
Количество антральных фолликулов (AFC), n | 13.2 ± 4.1 | |
Соответствующие результаты (инструментальные/лабораторные) | ||
Подковообразная почка | 2 (8.7) | |
Внетазовые яичники/яичники | 3 (13.0) | |
Односторонний почечный агенез | 2 (8.7) | |
Дилатационная кардиомиопатия | 1 (4.3) | |
Мезокардия | 1 (4.3) | |
Синдром Фатера | 1 (4.3) | |
Сенсоневральная тугоухость | 1 (4.3) | |
Врожденная косолапость | 1 (4.3) | |
Сколиоз | 1 (4.3) | |
Целиакии | 1 (4.3) | |
Сахарный диабет 1 типа | 1 (4.3) | |
Аутоиммунный гипотиреоз | 1 (4.3) |
Таблица 1: Демографические, анамнестические и клинические данные 23 пациентов, получавших лечение до настоящего времени.
Среднее ± SD | |
Начальная доза ФСГ, МЕ | 196 ± 44 |
Общая доза ФСГ, МЕ | 2 174 ± 506 |
Дни стимуляции, n | 12.1 ± 0.4 |
Уровни E2 при срабатывании, пг/мл | 4 330 ± 2 007 |
Уровни P при срабатывании, нг/мл | 1.06 ± 0.95 |
Таблица 2: Контролируемые данные стимуляции яичников у 23 пациенток, получавших лечение до настоящего времени. Сокращения: ФСГ = фолликулостимулирующий гормон; E2 = эстрадиол; P = прогестерон.
Среднее ± SD или n (%) | |
Время работы, не менее | 114 ± 17 |
Пребывание в больнице, дней | 6.0 ± 1.0 |
Кровопотеря, мл | незначительный |
Извлеченные ооциты, n | 11.4 ± 5.4 |
Зрелые ооциты (витрифицированные), n | 9.6 ± 4.3 |
Осложнений | |
Никакой | 22 (95.6) |
Послеоперационная лихорадка и выявление внутрибрюшинной жидкости | 1 (4.3) |
Таблица 3: Результаты комбинированной лапароскопической процедуры извлечения ооцитов и вагинопластики у 23 пациентов, получавших лечение до настоящего времени.
Этот протокол снижает инвазивность при лечении MRKHS путем сочетания процедур вагинопластики и извлечения ооцитов. Для этой цели крайне важно, чтобы специальная команда была назначена для обеспечения эффективного планирования сроков COS, хирургической процедуры и витрификации ооцитов.
Пациенты с MRKHS, для которых этот комбинированный лапароскопический метод, как ожидается, будет наиболее полезным, - это те, у кого трансвагинальное извлечение будет считаться технически сложным или невозможным из-за экстрапелвических яичников, расположенных сбоку вдоль стенок таза14 или в непосредственной близости от органов, таких как печень и желчный пузырь9, или из-за наличия тазовых почек. У этих пациентов трансабдоминальный подход может быть гипотетическим и был зарегистрирован в литературе: тем не менее, среднее число 4,92 ± 1,7 ооцитов было собрано15, что предполагает неоптимальное извлечение из-за технических ограничений. Кроме того, трансабдоминальный подход может быть затруднен или невозможен в некоторых случаях, например, у пациенток с выраженной толщиной брюшной стенки или плохой видимостью яичников из-за вышележащих петель кишечника16.
Безопасность является примечательной сильной стороной этого подхода. Помимо описанных выше преимуществ оптимальной визуализации и доступа, объединение двух процедур в одну снижает анестезиологические риски. Следует отметить, что аналогичное оперативное время сохраняется по сравнению с лапароскопической вагинопластикой Давыдова, для которой средняя продолжительность 125 мин была зарегистрирована в литературе12. Более того, тот факт, что пациентки проходят COS в очень молодом возрасте, а не в более позднем возрасте, не подразумевает для них повышенного риска синдрома гиперстимуляции яичников, поскольку этого осложнения эффективно избежать, вызвав окончательное созревание фолликулов аналогом Gn-RH.
Текущие руководящие принципы для MRKHS требуют, чтобы клиницисты рассматривали будущие варианты рождения детей с пациентами и родителями на момент постановки диагноза в качестве средства, помогающего им справиться с болезнью и ее последствиями1. Усыновление, суррогатное материнство или трансплантация матки являются доступными решениями, причем оба варианта биологического материнства требуют извлечения ооцитов17. Таким образом, этот комбинированный лапароскопический подход также может быть особенно полезен для тех пациентов с MRKHS, которые выражают серьезное беспокойство по поводу их диагноза бесплодия18. Фактически, опросы показали, что бесплодие может быть одним из самых сложных состояний для пациентов, получающих диагноз MRKHS19. Ранняя криоконсервация ооцитов у пациентов с желанием будущего генетического потомства может облегчить их психологический стресс по сравнению с отсрочкой этого необходимого инвазивного вмешательства до неопределенной даты в будущем.
Однако, в качестве основного ограничения этого подхода, не все пациенты, которые выбирают криоконсервацию ооцитов уже во время вагинопластики, в конечном итоге будут преследовать свое желание генетического материнства в более поздние взрослые годы. По этой причине команда также должна получить и записать решение пациентки относительно использования ее ооцитов в случае прекращения ее восстановления криоконсервации (т. Е. Устранение, донорство в исследовательских целях, пожертвование или продажа для гетерологической репродукции, если это законно).
В качестве возможной модификации этой методики мы предполагаем использование лапароскопических ультразвуковых зондов, которые могли бы помочь эксперту по бесплодию в прокалывании фолликулов, расположенных далеко от поверхности яичников. Наконец, мы предполагаем, что накопление опыта в лапароскопическом извлечении ооцитов для сохранения фертильности во время других процедур может обеспечить наличие этого варианта. Например, пациенты, проходящие другие лапароскопические процедуры, такие как миомэктомия, и показывающие показания к сохранению фертильности, могут извлечь выгоду из этого подхода.
Авторы не имеют каких-либо конфликтов интересов для раскрытия.
Никаких конкретных финансовых средств для этой работы получено не было.
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Oocyte retrieval procedure | |||
Equipment | |||
CO2 O2 Incubator | Sanyo | ||
Incubator | Thermo Scientific | ||
Laminar Flow Hood | Cooper Surgical | ||
Portable incubator | Cooper Surgical | ||
Stereomicroscope | Nikon | ||
Consumables | |||
14 mL Polystyrene Round-Bottom Tube | Falcon | 352057 | |
4-well dish | Nunc | 144444 | |
60 mm Petri dish | Nunc | FA9150270 | |
90 mm Petri dish | Nunc | FA9150360 | |
Human Serum Albumin 100 mg/ml in Normal Saline (5%) | Origio | 3001 | |
Mineral oil for embryo culture | Origio | 4008 | |
One Well Dish | Oosafe | OOPW-CW05 | |
Quinn’s Advantage Fertilization medium SAGE | Origio | 1020 | |
Quinn’s Advantage medium with HEPES | Origio | 1024 | |
Sterile glass pasteur pipettes | |||
Oocyte denudation | |||
Equipment | |||
CO2 O2 Incubator | Sanyo | ||
Flexipet adjustable handle set | Cook | G18674 | |
Incubator | Thermo Scientific | ||
Laminar Flow Hood | Cooper Surgical | ||
Stereomicroscope | Nikon | ||
Consumables | |||
4-well dish | Nunc | 144444 | |
CSCM (Continuos single culture) medium | Fujifilm irvine Scientific | 90165 | |
Human Albumin 100 mg/mL in Normal Saline (5%) | Origio | 3001 | |
Hyaluronidase | Fujifilm Irvine Scientific | 90101 | |
IVF culture 60 mm petri dish | Nunc | FA9150270 | |
Mineral oil for embryo culture | Origio | 4008 | |
One Well Dish | Oosafe | OOPW-CW05 | |
Quinn’s Advantage medium with HEPES | Origio | 1024 | |
Serum Substitute Supplement | Fujifilm irvine Scientific | 99193 | |
Sterile glass pasteur pipettes | |||
Stripping pipette tips (140 μm) | Cook | K-FPIP-1140-10BS-5 | |
Stripping pipette tips (170 μm) | Cook | K-FPIP-1170-10BS-5 | |
Oocyte vitrification | |||
35 mm Petri dish | NUNC | 150255 | |
60 mm Petri dish | NUNC | 150270 | |
90 mm Petri dish | NUNC | 150360 | |
Container for Cooling rack | Kitazato | ||
Cryodevice/cryotop | Kitazato | 81111 | |
Electronic timer | |||
Flexipet | COOK | K- 1000 | |
Gilson Pipetman | Gilson | F123601 | |
Lab Printer LabXpert | Brady | XSL-86-461 | |
Tips 20-200 µL | Thermo Scientific | 2160G | |
Tips 2-20 µL | Thermo Scientific | 2139-HR | |
Visotubes | Cryo Bio System | 20 | |
Vitrification Freeze Kit | Fujifilm Irvine Scientific | 90133-SO | |
Vitrification Thaw kit | Fujifilm Irvine Scientific | 90137-SO |
Запросить разрешение на использование текста или рисунков этого JoVE статьи
Запросить разрешениеThis article has been published
Video Coming Soon
Авторские права © 2025 MyJoVE Corporation. Все права защищены