Технические аспекты свища аортокавальной мышь

Цель состоит в том, чтобы произвести артериовенозного свища, который является простым и воспроизводимым. Этот метод не использует швов или клея клея. Таким образом, образцы могут быть использованы с наименьшим количеством посторонних материалов для анализа.

Технические аспекты создания артериовенозной фистулы у мышей обсуждаются. Под общим наркозом, брюшной надрез, и аорты и нижней полой вены (НПВ) подвергаются. Проксимальных инфраренальной аорты и дистальной аорты расчленены для размещения зажима и прокол иглой, соответственно. Особое внимание уделяется, чтобы избежать вскрытия между аортой и нижней полой вены. После зажима аорты, 25 G игла используется для прокалывания обе стенки аорты в НПВ. Окружающей соединительной ткани используется для гемостатических сжатия. Успешное создание AVF покажет пульсирующего артериального кровотока в нижней полой вене. Дальнейшее подтверждение успешного AVF может быть достигнуто путем послеоперационного ультразвуковой допплерографии.

Наиболее распространенным вариантом выбрали для заместительной почечной терапии у больных с терминальной стадией почечной недостаточности является гемодиализ. Доступ для гемодиализа осуществляется артериовенозной фистулы (АВФ), артериовенозной трансплантата, или временного катетера. Хотя AVF являются предпочтительным способом доступа, AVF все еще далеки от совершенства. Один год первичная проходимость AVF ставки только 60-65%, при этом многие неудачи из-за неоинтимальной гиперплазии. Молекулярной биологии и физиологии нормального формирования АВФ и неадекватного формирования остается слабо изучен. Таким образом, многое которые могут быть получены в улучшении AVF результаты со ссылками на прилагаемые выигрыш в понимании регулирования свищей. ^1-3

Выдержка из вены артериального кровотока обычно изучается в контексте венозных шунтов, которые являются прямыми моделями хирургического шунтирования. ^{4, 5} Хотя венозных шунтов и AVF схожее ознакомление вене артериальная среде существует несколько критических диfferences между ними. Во-первых, сопротивление дистального русла стоков значительно ниже в AVF, как AVF стоков в правое предсердие, тогда как вены трансплантата стоков от часто больные дистальной части тонкой артерии, что приводит к увеличению кровотока и напряжение сдвига в AVF. Во-вторых, крови в венозной конечности AVF может представлять собой смесь венозной и артериальной крови приводит к снижению оксигенации по сравнению с чисто артериальной содержание в шунта. В-третьих, вены в AVF не удаляется из его дна, что приводит к сохранению ее сосуда venorum и нервной иннервации, по сравнению с полной транспозицией шунта в артериального русла. И наконец, количество анастомозов, как правило, два в венозных шунтов в то время как AVF обычно имеет только один. В этом исследовании мы вводим мышиной модели аортокавальной свищ, который может быть использован для изучения AVF.

1. Анестезия и Дооперационное Процедуры

1. Индукция общей анестезии
   Утверждению соответствующими Институциональные уходу и использованию животных комитета получается. Самцы мышей C57/black, в возрасте 10 недель, под наркозом. Доставить 4% с 0,8 изофлурана л / мин кислорода через коробку из плексигласа изофлурана испарителем и поместите курсор внутрь. Кроме того, при желании хирургом, внутрибрюшинный анестезии могут быть использованы.
2. Сохранение анестезией
   После подтверждения анестезии отсутствие реакции до ног крайнем случае, когда мышь попадает на операционном столе в положении лежа на спине с силиконовой маской. Isoflurane снижается до 2% для поддержания соответствующего уровня анестезии.
3. Удаление волос
   Брюшной волос удаляется от шеи до нижней части живота использования для удаления волос. Для удаления волос является предпочтительным, поскольку волосы, что осталось помощью бритвы может помешать допплерография.

2. Предоперационная Ultrasounре

1. Цели ультразвук
   Доплеровский УЗИ выполняется до операции AVF, чтобы записать результаты базового уровня, который можно сравнить с послеоперационными выводы, чтобы увидеть анатомические и физиологические изменения.
2. Точках наблюдения
   Яремную вену, сверх-и ИК-почечной нижней полой вены (НПВ) и брюшной аорты исследуют с использованием как импульс Доплера и в В-режиме.
3. Размеры
   Использование в В-режиме, диаметр каждого сосудистой измеряется. Кроме того, максимальная скорость (пиковой систолической скорости в артерии) и сигналы записываются в каждый из измерительных точек описано выше.

3. Оперативных процедур

1. Подготовка Мышь
   Подготовьте место разреза с местного антисептика и продолжить надлежащее асептики во время операции, включая применение хирургической простыни, стерильные перчатки и инструменты и т.д.
2. Лапаротомия
   Средняя линия брюшной надрез FROM нижний край печени чуть выше лобка.
3. Воздействие на аорте и НПВ.
   Ретрактор вставляется и все кишечника вытягиваются из брюшной полости с правой стороны и все завернуты в марлей, смоченной солевым раствором. Проанализируйте мембрана, которая соединяет забрюшинного пространства и нижней части толстой кишки, чтобы получить полное представление о аорты и нижней полой вены. Подайте давление на мочевой пузырь, если она расширена и стоит на пути.
4. Воздействие на месте прокола
   Пункции будет между половины до трех четвертей расстояния от левой почечной вены в бифуркации аорты. (Рис. 1) Рассеките левого края аорту так, что она может быть проколот. Следует помнить, что аорты расположена примерно на 45 градусов позади нижней полой вены и она должна быть расчлененный сзади в дополнение к левой стороне. (Рис. 2) Наиболее важным моментом этой операции не рассекать между аортой и нижней полой вены. Хранить вдали от них.
5. Воздействие на месте зажимом аортыTA
   Проанализируйте инфраренальной аорты от окружающих тканей. Будьте осторожны, чтобы не повредить IVC слева и левой почечной вены с ее притоками справа.
6. Зажимной аорты
   Зажмите проксимального отдела аорты с применением микрохирургии клипов.
7. Вращение аорты
   По захвата соединительной ткани, окружающей аорты, вращаются в аорту так, что прокол может быть сделан из слегка спинной части аорты (рис. 2).
8. Прокол аорты до IVC
   Сохранение в аорте повернутом положении, прокол аорты до IVC использование 25 G иглы. (Рис. 2) В случае успеха, иглу можно увидеть через тонкие стены IVC.
9. Гемостаз
   Потянув за забрюшинного ткани, включая мышцы, оберните место прокола аорты. Не сжимать аорту против IVC, поскольку это может сгусток AVF (рис. 3).
10. Ослабление зажима аорты
    После подтвержденияпервичного гемостаза, де-зажим аорты. Дополнительные кровотечение может произойти, но она может быть остановлена ​​с последующим сжатием описано выше. По Ослабление зажима артериальной крови можно увидеть, впадающих в IVC вместо темных венозного кровотока.
11. Закрытие живота
    Вернуться недр в естественном положении и закройте живота.

4. Послеоперационный Процедуры

1. Послеоперационный уход
   После закрытия брюшной полости, изофлуран остановлен. Послеоперационный уход, включая обезболивание и ран применяется в соответствии с инструкцией рекомендовано Институциональные уходу и использованию животных комитета. Для аналгезии мы используем бупренорфин в дозе 0,1 мг / кг intrasmuscularly каждые 12 ч в течение 24 ч после хирургических процедур.
2. Послеоперационный ультразвук
   В первый день после операции, ультразвуковая допплерография проводится для подтверждения AVF. Кроме того, другие переменные измерены, чтобы проверить изменения с предоперационногозначений.

После практики выживания на первом послеоперационный день, как правило, более 95%, в послеоперационный день 7, выживаемость была 91,3% На рисунках 1 и 2 показывают идеальным местом прокола в корональной и поперечное сечение;. Размещение прокола Сайт имеет решающее значение для получения хорошего выживания без чрезмерного кровотечения. Интраоперационная смертности и ранней послеоперационной смерти, как правило, в связи с кровотечением. Это обычно происходит с чрезмерным рассечение между аортой и нижней полой вены, либо с недостаточным гемостатической давления. 3 показана схема важность упаковки пункции соединительной ткани перед применением давления для гемостаза, что позволяет хорошо гемостаза без сжатия AVF. По нашему опыту, все технически успешной AVF может быть подтверждена с помощью ультразвука на третий день, однажды AVF подтверждается на дуплексных присутствовать, AVF, как правило, не быть стабильным по крайней мере до 28-й день рисунке 4.показаны типичные допплерография выводы в успешное формирование АВФ. Изменение формы волны наблюдались на уровне AVF в IVC и к сердцу. Общий уровень подтверждения AVF на послеоперационный день 3 был 71,4%.

Рисунок 1. Схема места прокола. Идеальное место прокола от половины до трех четвертей от расстояния между левой почечной вены и подвздошных бифуркации. IVC: нижнюю полую вену.

Рисунок 2. Кросс схема секции сайта формирование AVF. Черный Стрелка отмечает сайт и Directiна вскрытие, чтобы разоблачить аорты. Синяя стрелка отмечает сайт, прокалывание и направление.

Рисунок 3. Схема метода гемостаза Верхний ряд:. Обертывания аорты с соединительной ткани и мышц. Нижний ряд: применение прямого давления. Шансы на закрытие AVF высоки с прямым прессованием.

Рисунок 4. Ультразвукового исследования после операции AVF. AVF был рассмотрен с высоким разрешением ультразвуковое после операции. Сигналы ниже AVF были типичными венозной формы сигнала, в то время как на уровне и выше AVF сигналов показал наложения артериального потока, которого не было ниже AVF. Нажмите здесь, чтобы увеличить рисунок.

Есть несколько отчетов, описанных AVF у крыс, в том числе бедренной ^{AVF, 6, 7} сонной к яремной AVF ⁸ и аорто-полой AVF. ^{9, 10} крыс в несколько раз больше, чем мыши, что упрощает операции у крыс по сравнению мыши. Тем не менее, для того, чтобы воспользоваться мышью генетические штаммы и варианты процедура должна быть распространена на мышиных моделях. Несколько ранее опубликованные отчеты представили AVF модели на мышах, но эти сведения в целом были в контексте Разработка модели для правосторонней сердечной недостаточностью, с использованием больших игл размером ^11-13 Гузман сообщали о подобной методике нашему;. Однако в этого доклада авторы использовали швов, чтобы закрыть артериотомии. ¹³ Мы не используем швов во избежание возникновения помех с последующей экстракции белка и РНК для молекулярного анализа. Кроме того закрытии артериотомии со швами несет в себе риск чрезмерного применениянапряженность на свищей, которые могут привести к острой или поздней кровотечения. В других отчетов, AVF были созданы между сонной артерии и яремной вены помощью манжеты методом. ¹⁴ В этом исследовании мы опишем простой, воспроизводимый метод, который можно использовать в исследованиях AVF в том, что не зависят от пери-анастомоза манжеты .

Мы создаем AVF путем прокалывания мыши инфра-почечная аорты с иглой 25 G и расширение прокол через стенку аорты стороны в инфра-почечная полую вену. При разработке нашей нынешней методологии, мы заметили некоторые важные технические моменты по улучшению технического успеха и последовательность процедуры:

1. Пункции аорты помещают на дистальной брюшной аорты. Как показано на фиг.1, проксимальной части аорты инфраренального не расположен бок о бок с нижней полой вены, и есть больше соединительной ткани между этими двумя сосудов, которое ингибирует стабилизацию AVF,ведущие к кровотечениям и низкая проходимость.
2. Нет зажимы не требуются дистально за прокол точки на аорте. Проксимальный зажимной достаточно, чтобы свести к минимуму кровяного давления во время процедуры. Кроме того, дистальный зажимы будут мешать прокалывания аорты.
3. Как показано на рисунке 2, наиболее эффективным и физиологического направления для прокола до IVC от заднего левого к брюху право. Неспособность сделать это может привести к уменьшению размера свища, что приводит к замедлению созревания или в начале окклюзии. Поэтому мы предпочитаем анализировать внешнюю заднюю часть аорты и вращать аорты немного вправо так, чтобы получить прямой вид на место прокола.
4. Для гемостаза аорты входное отверстие отремонтирована только с использованием сжатия окружающие ткани, и не требует шов ремонт артериотомия или любой клей клей. Наложение швов может тянуть аорты от нижней полой вены, что может привести к закупорке AVF. Клей маядать подкрепление для гемостаза, но он может также столкнуться во время ультразвукового исследования доплеровского а также сделать послеоперационный ткани добычи трудно. Что касается сжатия, мы не применяем прямого давления на месте прокола к IVC, потому что это также может сжать свищей, а также. Как описано выше и показано на рисунке 3, мы обернуть аорты с окружающей соединительной ткани и мышцы.

Потенциальным ограничением этого исследования является то, что эта модель выполнена между аортой и нижней полой вены, крупные сосуды в маленькую мышь. Пока не ясно, сможет ли эта модель имитирует AVF, используемый в клинической помощи пациентам человека, т.е. AVF сделанные в небольших периферийных артерий. Кроме того, у контрольных животных для опытов должны быть выполнены тщательно, и зависит от протокола эксперимента. Обычно мы используем фиктивные операции для органов управления, в котором мы проводим лапаротомии и немедленного закрытия под общим наркозом, без puncturэлектронной вообще.

Мы описываем короткий протокол, в котором оператор может выполнять AVF у мышей, в течение 15-20 мин. Мы ожидаем, что эта модель будет полезна для исследования свищей адаптации, которая может быть полезной для человека пациентов с терминальной стадией почечной недостаточности, особенно если используется в сочетании с мышью моделях болезни.

Ни один.

Эта работа была выполнена при частичной поддержке Национального института здоровья грант R01-HL095498, а также с ресурсами и использования средств на VA Коннектикута системы здравоохранения, Уэст-Хейвен, штат Коннектикут.