쥐의 트랜스테린 태아 기관 폐색 모델

이 기술의 가장 중요한 장점은 가역성, 동물의 비용 절감 및 유지 보수, 짧은 임신 기간입니다. 또한 자군 절제술이 필요하지 않으므로 동물 사망률이 줄어듭니다. 그리고 유전 작용에 대한 더 넓은 기회가 있습니다.

이 기술은 선천성 횡격막 탈장의 병리생리학을 조사하는 데 사용할 수 있습니다. 그것은 또한 폐에 있는 그밖 질병을 이해에 적용될 수 있습니다, 소 와 폐 hypoplasia와 같은. 마우스가 다음 날 오전 6:00부터 9:00까지 같은 케이지에서 짝짓기를 허용함으로써 시작합니다.

E0을 결정하기 위해, 질 벽에 부착된 균질, 외부 영역이 있는 질 플러그를 관찰하고 섬유질인 내측 영역을 관찰하고 플러그 재료의 섬유와 혼합된 얽힌 질량을 형성하는 일부 정자를 포함한다. 결합 시 및 E10에 마우스의 무게를 기록하여 지속적인 임신을 보장하고 E16.5에서 수술을 수행합니다. 수술 중에 사용될 기구를 살균합니다.

수술 플랫폼을 섭씨 24도로 예열하고 수술 전에 따뜻한 식염수에 대비하십시오. 회복을 위한 따뜻한 환경을 조성하고 젖은 음식을 케이지 안에 넣어 조기 수유를 할 수 있습니다. 알코올과 포비도요오드로 복부 표면을 청소하고 수술 내내 멸균 상태를 유지합니다.

임신 한 댐의 복강경에 대한 수직 절개를 수행하고 별도로 모든 층을 잘라. 양쪽에 있는 자궁 뿔을 확인하고 수술에 대한 후보 태아를 결정합니다. 각 측면에 태아의 짝수가있는 경우 각 자궁 경적에 두 개의 태아에 작동합니다.

그리고 홀수 번호가있는 경우 각 자궁 경적에 하나의 태아에. 시각화를 위해 2X 배율 안경을 사용하여 자궁 경적을 횡방향 방식으로 배치합니다. 새끼는 눈과 꼬리를 사용하여 두 손가락 사이에 위쪽으로 향하는 것을 안내자로 배치합니다.

강아지의 머리에 부드러운 압력을 가하여 머리의 연장과 목의 시각화를 허용합니다. 외상 성 바늘과 6 x 0 폴리 프로필렌 봉합사를 사용하여 기관 폐색 또는 TO를 수행합니다. 측면에 태반을 유지하고 바늘의 입구와 출구 지점에서 멀리.

바늘을 자궁 의 측면을 통해 반으로 삽입하고 태반에서 목의 1/3 전방 부분을 통해 멀리 삽입하십시오. 그런 다음 바늘을 목의 중간선으로 부드럽게 이동합니다. 전방 부품으로 안내합니다.

그런 다음 기관 사이의 목을 빠져 나와 경동맥 칼집과 자궁 맞은편에 있습니다. 봉합사를 매듭, 막과 자궁 벽의 무결성을 유지하기 위해주의. 복부의 자궁 경적을 교체하고 닫기 전에 복막 구멍에 따뜻한 멸균 식염수 2 밀리리터를 주입하십시오.

복부 벽을 닫기 위해 5 by 0 폴리 글락틴 봉합사를 놓습니다. 그리고 비 실행 실크 봉합사로 피부를 닫습니다. 진통을 위해 1킬로그램당 0.1 마이크로그램을 적용하여 댐이 따뜻한 인큐베이터에서 회복되도록 합니다.

수술된 동물이 스스로 먹이를 주고 개별 케이지에 혼자 보관할 수 있음을 관찰하십시오. Ceasarean 섹션에 의해 E18.5에 의해 모든 태아를 수확하고 그들의 움직임을 보고 그들의 생존력을 확인합니다. 모든 태아의 무게를 측정합니다.

흉부 절제술을 위해 흉부에 수직 절개를 수행하여 폐를 해부합니다. 그리고 체중 비율에 총 폐를 계산하기 위해 그들을 무게. 스냅 액체 질소, 최적의 절삭 온도 화합물 및 드라이 아이스에서 조직을 동결합니다.

극저온을 사용하여 10 마이크로미터의 섹션에 샘플을 잘라 폴리 리신 코팅 슬라이드에 장착합니다. 밤새 60도에서 슬라이드를 굽고 헤마톡슬린과 에오신으로 구운 슬라이드를 얼룩지게합니다. 와이드필드 현미경을 사용하여 10~ 20배율로 슬라이드의 이미지.

단백질 및 DNA 분석을 위해, 스냅은 조직을 동결하고 방사성 면역 침전 분석 분석 버퍼의 300 마이크로 리터에서 균질화. 원심분리기 는 18, 000 x g 및 섭씨 4도에서 5 분 동안. 그런 다음 단백질, DNA 및 RNA를 추출하고 정량화합니다.

평균 체중, 폐 중량 및 LBWR는 대조군보다 TO 그룹에서 더 높았다. 폐 DNA 양과 단백질 에 대한 DNA 비율은 TO 그룹에서 더 높았다. 폐 RNA에서 차이가 관찰되지 않았으며, 단백질 양은 대조군보다 TO 그룹에서 낮았다.

E18.5 대조군 폐의 조직학적 분석은 상피 표면 사이의 발달 공간과 두꺼운 중간 질과 폐 발달의 후기 또는 초기 반안경 단계를 보여주었다. TO 그룹의 폐는 주관적으로 더 많은 수의 핵을 가진 중앙 및 말단 영공을 넓혀 주었으며, 그 공간은 있었다. 이 프로토콜을 시도할 때, 우리는 태아의 눈이 보이고 바늘이 조정된 구조물을 방해하지 않도록 목이 확장되는 방식으로 봉합사를 고칠 수 있습니다.

CDH의 니트릴 팬과 녹아웃 모델에서 태아의 재탄생에 대한 구조를 제거하는 것은이 기술의 미래 응용 프로그램이 될 것입니다.