أهم مزايا هذه التقنية هي القابلية للعكس ، وانخفاض تكلفة الحيوانات والصيانة ، وفترة حمل أقصر. وعلاوة على ذلك، يتم تقليل نفوق الحيوانات بسبب عدم وجود حاجة لاستئصال الرحم. وهناك فرص أوسع للعمل الوراثي.
يمكن استخدام هذه التقنية للتحقيق في الفيزيولوجيا المرضية للفتق الحجابي الخلقي. ويمكن أيضا تطبيقه على فهم الأمراض الأخرى في الرئة، مثل الأبقار ونقص التنسج الرئوي. ابدأ بالسماح للفئران بالتزاوج في نفس القفص من الساعة 6:00 مساء إلى الساعة 9:00 صباحا في اليوم التالي.
لتحديد E0، لاحظ المكونات المهبلية التي لديها متجانسة، منطقة خارجية تعلق على جدار المهبل والمنطقة الداخلية التي هي ليفية وتشمل بعض spermatozoa التي تشكل الجماهير متشابكة مختلطة مع ألياف المواد المكونات. سجل وزن الفئران في وقت التزاوج وعلى E10 لضمان الحمل المستمر وإجراء الجراحة في E16.5. تعقيم الأدوات التي سيتم استخدامها أثناء الجراحة.
سخني منصة الجراحة إلى 24 درجة مئوية واستعدي للمحلول الملحي الدافئ قبل الجراحة. خلق بيئة دافئة للتعافي وترك الطعام الرطب داخل القفص للتغذية المبكرة. تنظيف سطح البطن مع الكحول واليود بوفيدوني والحفاظ على ظروف معقمة طوال العملية.
إجراء شق عمودي لاستئصال البطن من السدود الحوامل وقطع جميع الطبقات على حدة. تحديد قرون الرحم على كل جانب وتحديد الأجنة المرشحة للجراحة. إجراء عملية جراحية على جنينين في كل قرن الرحم إذا كان هناك عدد حتى من الأجنة على كل جانب.
وعلى جنين واحد في كل قرن الرحم إذا كان هناك عدد فردي. باستخدام نظارات تكبير 2X للتصور ، ضع قرن الرحم بطريقة عرضية. ضع الجراء التي تواجه صعودا بين إصبعين باستخدام العينين والذيل كدليل.
تطبيق ضغط لطيف على رأس الجرو للسماح تمديد الرأس والتصور من الرقبة. إجراء انسداد القصبة الهوائية أو إلى استخدام إبرة atraumatic و6 في 0 خياطة البولي بروبلين. إبقاء المشيمة على الجانب وبعيدا عن نقاط الدخول والخروج من الإبرة.
أدخل الإبرة بشكل عرضي عبر جانب الرحم، بعيدا عن المشيمة عبر الجزء الأمامي من الرقبة. ثم تحريك الإبرة بلطف إلى خط الوسط من الرقبة. توجيهه إلى الجزء الأمامي.
ثم الخروج من الرقبة بين القصبة الهوائية وقبالة غمد السباتي والرحم. عقدة خياطة، مع الحرص على الحفاظ على سلامة الأغشية وجدار الرحم. استبدل قرن الرحم في البطن وحقن مليلترين من الملوحة الدافئة المعقمة في تجويف الصفاق قبل الإغلاق.
وضع خياطة الجري 5 في 0 البوليغلاتين لإغلاق جدار البطن. وإغلاق الجلد مع خياطة الحرير غير الجارية. تطبيق 0.1 ميكروغرام لكل كيلوغرام من البوبرينورفين intraperitoneally لتسكين والسماح للسد لاسترداد في حاضنة دافئة.
لاحظ أن الحيوان الذي يتم تشغيله يمكن أن يطعم نفسه ويبقيه وحيدا في قفصه الفردي. حصاد جميع الأجنة من قبل E18.5 عن طريق قسم ceasarean والتحقق من قدرتها على البقاء من خلال مشاهدة تحركاتهم. وزن جميع الأجنة.
إجراء شق عمودي على الصدر لتشريح الصدر الرئتين. ووزنها لحساب إجمالي نسبة الرئة إلى وزن الجسم. المفاجئة تجميد الأنسجة في النيتروجين السائل، مركب درجة الحرارة القطع الأمثل، والجليد الجاف.
قطع العينات في أقسام من 10 ميكرومتر باستخدام cryostat، وجبل لهم على الشرائح المغلفة بالبوليسين. خبز الشرائح بين عشية وضحاها في 60 درجة مئوية ووصمة عار الشرائح المخبوزة مع hematoxylin وeosin. صورة للشرائح في 10 إلى 20X التكبير ، وذلك باستخدام المجهر واسعة النطاق.
لتحليل البروتين والحمض النووي، المفاجئة تجميد الأنسجة ومتجانسة في 300 ميكرولتر من العازلة المقايسة الإشعاعية. جهاز طرد مركزي عند 18، 000 × ز و 4 درجات مئوية لمدة خمس دقائق. ثم استخراج وقياس البروتين والحمض النووي والجيش الملكي النيبالي.
كان متوسط وزن الجسم ووزن الرئة وLBWR أعلى في مجموعة TO منه في مجموعة التحكم. كانت كميات الحمض النووي للرئة ونسبة الحمض النووي إلى البروتين أعلى في مجموعة TO. لم يلاحظ أي فرق في الحمض النووي الريبي الرئة، وكانت كميات البروتين أقل في مجموعة TO مما كانت عليه في مجموعة التحكم.
أظهرت التحليلات النسيجية للرئتين المسيطرتين E18.5 المرحلة المتأخرة أو المبكرة من تطور الرئة مع تطور المجال الجوي وتداخل سميكة بين الأسطح الظهارية. وقد توسعت الرئتين في مجموعة TO المجال الجوي المركزي والقاصي مع أعداد أعلى ذاتيا من النوى. عند محاولة هذا البروتوكول، نقوم بإصلاح الغرز بطريقة تكون فيها عيون الجنين مرئية ويتم تمديد الرقبة بحيث لا تعطل الإبرة الهياكل المعدلة.
إزالة الهياكل إلى ولادة جديدة للجنين في مروحة النتريل ونماذج خروج المغلوب من CDH ستكون التطبيقات المستقبلية لهذه التقنية.
