이 연구는 독일 Krebshilfe 에 의해 지원 되었다 (AN 최대 Eder 그룹: 110972), (SMB)에 DGVS 박사 논문 장학금 및 대학 의료 센터 괴팅겐에는 Else Kröner Fresenius 재단 장학금 (RGG)을. 우리 전문가 기술 지원 또한 블 룸 베르크와 Ulrike Wegner 감사합니다. 우리는 또한 유지 하는 마우스에 대 한 대학 의료 센터 괴팅겐의 동물 시설에서 모든 동물 기술자를 감사 합니다. 모든 실험은 독일 동물 복지 규정에 따라 수행 했다.

이 프로토콜은 대학 의료 센터 괴팅겐, 독일 (33.9-42502-04-15/2056)에서 동물 보호 지침. 개별 동물의 특정 요구 사항에 따라 검토 보드, 일부 프로토콜 단계에 따라 수정할 수 있습니다.
1. 복 부 촉진 KPC 마우스의
<ol><li>피하기 위해 불필요 한 초음파 검사, 식별 수도 아마도 intraabdominal 병 변 고 이후에 복 부 초음파 검사를 받아야 한다 쥐 마우스 복 부를 만져.<ol>
<li>KPC 마우스 모델에서 나이의 8 주 이상 복 부 촉진 주간 시작을 수행 합니다. 고해상도 초음파 또한 이식된 종양 모델 (예를 들어, orthotopics) 또는 다른 유전자 조작된 마우스 모델에 적용할 수 있습니다. 참고: 종양 활동 및 연구 목표 (예방 연구, 치료 개입 연구)에 따라 매우 작은 종양 (1-2 m m)의 탐지는 모니터 종양 발병 가능 종양 palpated 수 있습니다 전에.</li>
	</ol>
</li>
	<li>감 금 소에 마우스를 놓고 부드럽게 마우스 꼬리 리프트 하 고 부드럽게 인덱스와 비-고정 손 (그림 1)의 엄지를 위아래로 이동 하 여 복 부를 만져.</li>
	<li>마우스는 부드러운 촉진 허용, 천천히 압력을 증가 하 여 진행 합니다. 더 큰 저항 위와 더 낮은 복 부에 쉽게 검색할 수 있습니다. 가끔, 하드 배설물 해석 될 수 있습니다 실수로 종양으로 질량.</li>
</ol>2입니다. 준비 작업 공간
<ol><li>적어도 3 명의 다른 작업 단위에 대 한 공간을 제공: 사전 검사 영역, 단계 및 복구 케이지를 스캔. 필요한 자료는 그림 2에 묘사 된다.</li>
	<li>주요 작업 플레이트 청소 (예를 들어 70%와 에탄올) 난방 플랫폼 (그림 3) 스캔 이전에 전환. 38-40 ° C의 목표 온도 도달 하면 첫 번째 마우스 전송 하기 전에 다는 것을 확인 하십시오.</li>
	<li>초음파 기계에 스위치와 인수 데이터 (그림 4)에 대 한 새 폴더를 만듭니다. 복 부 영상 B 모드 설정이 적용 됩니다. 또한, 복 부 변환기 컴퓨터의 활성 포트에 연결 되어 확인 하십시오. 시스템을 장착 하는 변환기를 사용 하 여 작업 단계의 상단에 변형기 머리를 수정.</li>
	<li>난방 격판덮개 또는 열 매트 (또는 사용 난방 램프) 포스트 절차 체온 조절 및 스캔된 마우스의 신속한 복구를 보장 하기 위해 복구 케이지를 준비. (그림 5)는 질 식의 위험으로 침구의 열망을 피하기 위해이 장의 하단에 쿠션으로 직물의 얇은 레이어를 넣어.</li>
</ol>3. 흡입 마 취
<ol><li>유도 챔버로 마우스를 넣어 진행 합니다. 가스 캐리어 흐름 (1 L/min 산소 또는 공기) 밸브 열고 isoflurane 농도 4% 유도 챔버의 천천히 증가 채도 수 있도록 설정 합니다. 그 자리에는 적절 한 isoflurane 청소 (수동 또는 능동 필터링) 다는 것을 확인 하십시오. 약 2-4 분 후 마우스는 깊은 진정의 밑에 일반적으로 있을 것입니다.<ol>
<li>원뿔을 통해 2 %isoflurane 작업 단계에 투여 하 여 진정 작용을 유지 합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>조심 스럽게 작업 단계로 유도 챔버에서 동물 전송. 코 콘 일정 가스 흐름에 대 한 확인 하십시오. 마 취 선 콘센트의 원뿔에 마우스 주 둥이 넣어. 초기 검색에 대 한 일반적인 위치는 부정사 위치가입니다. 마우스 췌 장 머리 또는 꼬리 종양 (그림 6)의 가시성을 개선 하기 위해 오른쪽 또는 왼쪽에 배치할 수 있습니다.</li>
	<li>복 부 초음파 고통 스러운 라기보다는, 고통 무료 조건 및 깊은 마 취 상태에 대 한 지표로 서 발 꼬 집 음 시험을 수행 합니다. 마우스는 여전히 활성 또는 적극적으로 주위를 움직이고, 다시 옮긴 다 동물 반복 및 장기간 유도 위한 유도 실에서 다시.</li>
	<li>눈 보호 연 고를 사용 하 여 액체 손실로 인해 각 막 부상을 방지 하기 위해.</li>
	<li>마 취 동안 모니터링 시스템을 사용 합니다. 그러나, ECG 및 직장 온도 사용 되지 않습니다 정기적으로 복 부 초음파 검사. 중요 한 것은, 쥐 취 thermoregulate 수가 잃게됩니다. 따라서, 저체온증 이나 호흡 곤란 허 걱 등 가사에 대 한 임상 증상 관찰 밀접 하 게. 경우 어떤 증상 즉시 명백한 중지 isoflurane 장소와 복구 장에 마우스입니다.</li>
</ol>4. 초음파 설정
<ol><li>제조업체의 지침에 설명 된 대로 초음파 시스템에 전환 합니다. 기본 설정은 활성화 복 패키지와 함께 일반 영상에 넣어 다는 것을 확인 하십시오. 일반적으로 B-모드-영상 표준으로 서 데이터 수집에 사용 됩니다.</li>
	<li>다음 매개 변수 최적화 된 이미지 품질을 달성: 주파수 40 MHz, 2D 이득 25-30 dB, 이미지 깊이 10 m m, 이미지 폭 10 m m, 3-6 m m 사이 센터 3 초점 영역.</li>
</ol>5. 마우스 준비
<ol><li>위와 더 낮은 말단 접착 테이프를 사용 하 여 수정 합니다. 때문에 고정 (그림 7) 동물에 어떤 부상을 피하기 위해 최대한 주의 해야 합니다.</li>
	<li>전자 애완 동물 클리퍼 스를 사용 하 여 모든 복 부 털을 제거 합니다. 모피 텍스처 때문에 흉 곽까지 더 낮은 복 부에서 시작 합니다. 이 지역에 있는 피부 상해를 피하기 위해 프로세스 xiphoideus 에 주의. 참고: 마우스 모피 초음파 파도 반영 하 고 가시성을 감소 시킵니다.</li>
	<li>Depilatory 크림을 사용 하 여 수행 하는 최적화 된 피부 준비 및 모피의 완전 한 제거. 코 튼 팁 (그림 8)를 사용 하 여 면도 복 부에 크림의 얇은 레이어를 관리 합니다. 뒤에 모든 잔재 (그림 9, 그림 10, 그림 11)를 완전히 제거 하는 물을 충분히 건조 조직 (후 30 s 나중에 따라 또는 사용 하는 크림) 크림을 제거 합니다. 크림 나머지 초음파 후 피부와 점 막 자극을 일으킬 수 있는 고 따라서 건강에 영향을 미칠 수 있습니다.</li>
	<li>적절 한 검색 되도록 조건 (그림 12) 복 부에 초음파 젤 많이 적용 됩니다. 일반적으로, 따뜻한 초음파 젤 마우스에 대 한 저체온증을 최소화 하기 위해 사용 됩니다.</li>
	<li>직접 변환기 머리에 초음파 젤의 얇은 층을 적용. 노치 변환기 끝에 감동 하 여 테스트를 수행 합니다. 화면에서 상단 왼쪽에 신호 변환기가 올바르게 배치 하는 경우를 볼 수 있습니다.</li>
</ol>6. 복 부 초음파
<ol><li>확고 한 압력을 사용 하 여 복 부에 변환기를 조정 합니다. 무거운 압축 마우스 복 부의 호흡 또는 혈액 순환 장애를 발생할 수 있습니다 하 고 피해 야 한다.</li>
	<li>아래로 검색 합니다. 작업 플랫폼 및 x 축과 y 축에 대 한 바퀴의 프레임을 조정 합니다.</li>
	<li>첫 번째 단계로 두 신장 식별 합니다. 일반적으로 그들은 낮은 복 부에 균질 성 구조를 hyperechogenic로 나타납니다. 연결 된 베 나 renalis 찾을 수 있습니다 쉽게 더 베 나 정 맥 열 등 (그림 13)에 이르게.</li>
	<li>획기적인 혈관 베 나 lienalis 역할을 사용 하 여 췌 장에 대 한. 베 나 renalis 와 베 나 lienalis를 구별 하려고 합니다. 베 나 lienalis 의 검출 시 췌 정확 하 게 지역화할 수 있습니다. 정상 췌 오히려 멤브레인 (그림 14 와 그림 15) 고체 구조 보다 복 부 구멍을 통해 확산입니다.</li>
</ol>7. 췌 장 종양 탐지 및 볼륨 평가
<ol><li>모든 주변 구조에서 췌 장 병 변 식별 합니다. 그들은 일반적으로 hypoechoic 휘도가 원형 또는 길쭉한 조직 질량 (그림 16)으로 표시 됩니다. 종양 보통 회사 이며 거의 스캔 헤드에 의해 압축 될 수 있습니다. 참고, 때때로 종양 및 작은 창 자 루프 사이 명확 하 게 구별 하기 힘들 수도. 췌 장 종양에서 관찰 하지 한다 창 자 연동에 주의.</li>
	<li>에 종양 감지 화면 위쪽 및 아래쪽을 전체 크기의 인상을 가져오고 초음파 캘리퍼스를 사용 하 여 큰 직경을 측정. 적당 한 이미지를 발견 되 면 화면을 고정 하 고 측정 도구를 사용 하 여 종양 크기를 정확 하 게 결정. 참고, 나중을 위해 꼬리, 몸 또는 췌 장의 머리에 종양 지역화 여부를 차별화 하는 것이 중요할 것 이다.</li>
	<li>라이브 모드를 다시 변경 하기 전에 작업을 기록 하는 사진을 저장 해야 합니다. Note, 조정 바퀴를 출시 하 고 초음파 프로브 마우스 복 부를 누르면 더욱 그럴 수 있습니다 이미지를 고정 하는 동안 따라서, 동결 모드를 변경 하기 전에 압축 조정 수정.</li>
	<li>첫 비행기의 측정을 완료 한 후 경도 위치 (그림 17)에서 90 °에 의해 스캔 헤드를 회전 하거나 종양의 경도 확장을 검색 하는 쪽으로 마우스를 설정 합니다. 일부 종양 적절 한 가시성에 대 한 마우스의 위치를 변경 해야 합니다. 췌 장 꼬리 종양에 대 한 마우스 췌 장 머리 종양의 왼쪽 (그림 11 및 그림 20)에 대 한 (그림 10 과 그림 19), 그것의 오른쪽에 배치 수 있습니다.</li>
</ol>8입니다. 종양 볼륨의 정량화
참고: 모든 노력을 하나의 주요 목표는 종양 볼륨의 정확한 결심 이다. 사용할 수 있는 몇 가지 기술이 있다는 타원 면의 수식을 포함 하는 계산 방법 이지만 대학 의료 센터 괴팅겐에서 선호 합니다.
<ol><li>모든 3 개의 이전 취득 직경 있습니다 해당 종양 (그림 21)의 대략적인 양을 계산 합니다.</li>
	<li>또는, 스캔 머리의 모터 시스템을 사용 하 여 후속 볼륨 계산 및 3 차원 재구성 종양의 자동된 검색을 수행 하.</li>
</ol>9입니다. 복구
<ol><li>스캔, 후 신중 하 게 모든 접착 테이프를 제거 하 고 신중 하 게 모든 초음파 젤을 제거 건조 조직으로.</li>
	<li>조심 스럽게 복구 ( 그림 21)으로 마우스를 전송 합니다. 호흡기 장애를 발생할 수 있습니다 mouse´s 얼굴에 어떤 덮 음 조직을 하지 마십시오. 복구에 대 한 측면 위치 기본 설정 해야 합니다.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Kersten, K., de Visser, K. E., van Miltenburg, M. H., Jonkers, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetically+engineered+mouse+models+in+oncology+research+and+cancer+medicine.">Genetically engineered mouse models in oncology research and cancer medicine.</a> EMBO Molecular Medicine. 9 (2), 137-153 (2017).</li><li>Olive, K. P., Politi, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Translational therapeutics in genetically engineered mouse models of cancer. (2), 131-143 (2014).</li><li>Westphalen, C. B., Olive, K. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetically+engineered+mouse+models+of+pancreatic+cancer.">Genetically engineered mouse models of pancreatic cancer.</a> The Cancer Journal. 18 (6), 502-510 (2012).</li><li>Hingorani, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trp53R172H+and+KrasG12D+cooperate+to+promote+chromosomal+instability+and+widely+metastatic+pancreatic+ductal+adenocarcinoma+in+mice.">Trp53R172H and KrasG12D cooperate to promote chromosomal instability and widely metastatic pancreatic ductal adenocarcinoma in mice.</a> Cancer Cell. 7 (5), 469-483 (2005).</li><li>Frese, K. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=nab-Paclitaxel+potentiates+gemcitabine+activity+by+reducing+cytidine+deaminase+levels+in+a+mouse+model+of+pancreatic+cancer.">nab-Paclitaxel potentiates gemcitabine activity by reducing cytidine deaminase levels in a mouse model of pancreatic cancer.</a> Cancer Discovery. 2 (3), 260-269 (2012).</li><li>Paredes, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+non-invasive+method+of+quantifying+pancreatic+volume+in+mice+using+micro-MRI.">A non-invasive method of quantifying pancreatic volume in mice using micro-MRI.</a> PLoS One. 9 (3), e92263 (2014).</li><li>Boj, S. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organoid+models+of+human+and+mouse+ductal+pancreatic+cancer.">Organoid models of human and mouse ductal pancreatic cancer.</a> Cell. 160 (1-2), 324-338 (2015).</li><li>Aung, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunotargeting+of+Integrin+alpha6beta4+for+Single-Photon+Emission+Computed+Tomography+and+Near-Infrared+Fluorescence+Imaging+in+a+Pancreatic+Cancer+Model.">Immunotargeting of Integrin alpha6beta4 for Single-Photon Emission Computed Tomography and Near-Infrared Fluorescence Imaging in a Pancreatic Cancer Model.</a> Molecular Imaging. 15, (2016).</li><li>Akladios, C. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contribution+of+microCT+structural+imaging+to+preclinical+evaluation+of+hepatocellular+carcinoma+chemotherapeutics+on+orthotopic+graft+in+ACI+rats.">Contribution of microCT structural imaging to preclinical evaluation of hepatocellular carcinoma chemotherapeutics on orthotopic graft in ACI rats.</a> Bulletin du Cancer. 98 (2), 120-132 (2011).</li><li>Neesse, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CTGF+antagonism+with+mAb+FG-3019+enhances+chemotherapy+response+without+increasing+drug+delivery+in+murine+ductal+pancreas+cancer.">CTGF antagonism with mAb FG-3019 enhances chemotherapy response without increasing drug delivery in murine ductal pancreas cancer.</a> Proceedings of the National Academy of Science USA. 110 (30), 12325-12330 (2013).</li><li>Sastra, S. A., Olive, K. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+murine+pancreatic+tumors+by+high-resolution+ultrasound.">Quantification of murine pancreatic tumors by high-resolution ultrasound.</a> Methods in Molecular Biology. 980, 249-266 (2013).</li></ol>

저자는 공개 없다.

이 프로토콜, 췌 장 종양 유전자 조작된 마우스 모델에서 고해상도 복 부 초음파 이미징 사용 하 여 측정에 대 한 자세한 설명을 제공 합니다. 최근, Sastra 외. 췌 장 종양 마우스 모델, 하지만 준비 및 모든 추가 단계에 대 한 전제 조건11를 표시 했다 처리에 대 한 아무 시각된 지침을 계량 하는 방법 자세한 설명 출판. 이 원고의 전반적인 목표는 고해상도 초음파 쥐에 대 한 포괄적인 시각 가이드를 제공 하입니다.
우리가 우리의 설명 유전자 조작된 쥐에 내 인 성 췌 장 종양에 집중,이 메서드는 orthotopic 이식 모델도 사용할 수 있습니다. Orthotopic 모델, 심지어 매우 작은 종양을 1-2 m m 걸릴 속도 종양 발병 조사 abdominally 검출 될 수 있다. 주관적이 고 재현 하기 어려운 복 부 촉진 될 수 있는, 초음파 검사는 아주 작은 췌 장 종양의 발병을 감지 하는 섹 모델에 이전 촉진 없이 적용할 수 있습니다. 또한, 작은 창 자 루프 공기 가득 같은 복 부 구조는 겹쳐 있을 수 있습니다. 이와 관련, 작업 단계에는 동물의 위치를 변경 하려면 유용할 수 있습니다. 대부분 종양 부정사 위치;에 구상 될 수 있다 그러나, 일부 종양 마우스의 왼쪽 (췌 장 머리 종양) 또는 오른쪽 (췌 장 꼬리 종양)에 놓으면 검색만 수 있습니다. 따라서, 마우스의 적절 한 위치 효율적인 가시성을 높이기 위해 중요 하다.
복 부 장기 또는 해 부 변이의 부족 표시 발생할 수 있습니다. 증가 가시성 및 초음파 이미지의 해상도, 초점 뿐만 아니라 밝기 및 대비 설정을 해야 변경할 수 따라. 이미지 유물 결함/잘못 프로브, 마우스 모피의 불완전 한 제거, 초음파 젤의 부족 금액 또는 부족 한 접촉 압력의 마우스 복 부와 프로브 수 있습니다. 또한, 약간 프로브를 기울이기 시야 또한 상당히 높일 수 있습니다.
또한, 종양 성장 속도 론 작은 동물 초음파에 의해 경도 모니터링할 수 있습니다. 기술의 주요 장점 등 낮은 비용 (초음파 기계의 가용성 주어진), 방사선 노출 없이, 짧은 스캔 시간, 따라서 작은 긴장 마우스. 종 암 연구에 비추어 특히 반복 검색 쉽게 수행 하 고 진정 또는 작은 동물 CT 또는 MRI 검사에 필요한 마 취의 긴 기간 필요성 없이 동물에 작은 부담을 박 았.
고해상도 초음파 다양 한 전 임상에서 더 자주 사용 됩니다 때문에 더 강력한 초음파 시스템의 기술 진보는 향상 된 해상도와 점점 자동된 이미지 최적화 도구, 작은 동물, 현재 개발 되 고 있다 미래에 학문입니다. 프로토콜 내에서 중요 한 단계는 올바른 마우스 준비 및 위치, 뿐 아니라 올바른 복 부 장기 및 혈관의 식별.
초음파는 감지 및 췌 장 종양의 정량화를 위한 유용한 도구가 유전으로 설계 된 높은 해상도 및 orthotopic 마우스 모델. 다른 설립된 상상 기법에 비해이 초음파 기반 방법 빠른 세션 시간 및 비용 효율성을 결합 합니다. 올바른 수집 및 해석 초음파 이미지의 적절 한 실습 교육 및 경험을 필요로 하기 때문에이 비디오 프로토콜 췌장암 모델의 모든 측면에 대 한 자세한 지침으로 제공 합니다.

유전자 조작된 마우스 모델 연구 밀접 하 게 인간의 발암1,2,3의 복잡 한 성격을 정리 하는 능력 때문에 증가 중요성을 얻고 있다. 하나는 가장 자주 췌장암 개발 연구 모델을 사용, 진행 및 치료 응답 종양 억제기 p534의 비활성화와 결합 하는 Kra oncogene에서 활성화 돌연변이 의해 특징입니다. 이 LSL KraG12D / +; LSL-Trp53R172H / +; Pdx-1-Cre (KPC) 마우스 모델 모방 침략 암 전 침략 적인 췌 장 intraepithelial neoplasia (PanIN) 병 변에서 단계별 진행. Phenotypically, 거의 모든 마우스는 출산 후 첫 6 개월 이내 PDAC를 개발. 그러나, 섹 모델 몇 개월4주 8에서 높은 변수 종양 발병을 밝혀 이식된 모델에 비해. 췌 장 종양에 도달 특정 크기 (지름 5-9 m m), 종양의 성장을 빠르게 가속 및 마우스5전 임상 시험 등록 해야 합니다. 따라서, 종양 발병 및 종양 크기의 정확한 탐지 물류 전 임상 연구 및 치료 모니터링에 대 한 필수적인 전제 조건입니다. 일반적으로, 몇 가지 방법을 같은 자기 공명 영상 (MRI)6,7,,89 또는 고해상도 초음파 단층 종양 검사 실시를 채택 될 수 있다 고 치료10. 각 기술은 그것의 장점과 단점이 있다. 비록 MRI-컴퓨터 단층 촬영 (CT) 또는-이미징 고해상도 데이터 수집 뿐만 아니라 정확한 볼륨 계산, 일반 진정에서 장시간된 시험 시간을 허용 하 고 매우 비싼 장비 필요, 그리고 자주 허용 하지 않습니다 시간의 긴 기간 동안 스캔. 대조적으로, 작은 동물 초음파 쥐11복 부 병 리에 대 한 화면을 사용할 수 있는 설정된 방법입니다. 이미징이 방법의 장점은 짧은 시간, 높은 해상도, 스캔 그리고 도플러 초음파 또는 대비 사용 가능성 향상 된 동시에 장기의 관류를 시각화 하기 위해 초음파 (CEUS). 그러나, 해 부 지식, 3D 상상력과 철저 한 실습은 올바른 이미지 해석 필요 합니다.
다음 문서에서 섹 모델에서 고해상도 초음파를 이용 하 여에 대 한 상세한 프로토콜 제공 됩니다. 또한, 표준 초음파 이미지 묘사 되며 조사에 대 한 오리엔테이션을 촉진 하기 위하여 기관 구조와 분류.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Visual Sonics Vevo2100 High Resolution Ultrasound System, including imaging stage and anesthesia line</td>
			<td>FUJIFILM VisualSonics Inc, Canada</td>
			<td>VS-11945</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vevo 2100 MicroScan Transducer MS-550-D (22-55MHz)</td>
			<td>FUJIFILM VisualSonics Inc, Canada</td>
			<td>VS-11874</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vevo Anesthesia System (anesthesia induction chamber with fresh and waste gas inlet)</td>
			<td>FUJIFILM VisualSonics Inc, Canada</td>
			<td>SA-12055</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vevo Imaging Station (working stage with nose cone for anesthesia supply)</td>
			<td>FUJIFILM VisualSonics Inc, Canada</td>
			<td>SA-11982</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;electronic pet clippers</td>
			<td>Panasonic Marketing Europe, Germany</td>
			<td>5025232484324</td>
			<td>Panasonic ER-PA10-s</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Labotect Hot plate</td>
			<td>Labor tech G&#246;ttingen, Germany</td>
			<td>13854</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>eye cream (ophthalmic ointment)</td>
			<td>Sch&#252;lke&#38;Mayr, Germany</td>
			<td>9080249</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>veterinary isoflurane</td>
			<td>Abbvie, Germany</td>
			<td>4831867</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>depilatory cream</td>
			<td>RB healthcare UK, United Kingdom</td>
			<td>8218535</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70% ethanol (v/v) in distilled water</td>
			<td>TH. Geyer, Germany</td>
			<td>22941000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ultrasound gel</td>
			<td>Asmuth, Germany</td>
			<td>13477</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>tissue wipes</td>
			<td>Kimberly-Clark Germany, Germany</td>
			<td>7558</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>cotton tips</td>
			<td>Meditrade, Germany</td>
			<td>75481116</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>glass bowl for ultrasound gel</td>
			<td>ARC France, France</td>
			<td>H1149</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>water bowl</td>
			<td>W &#38; P Trading Co., USA</td>
			<td>B00K2P6PLQ</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>gauze sponges</td>
			<td>Fuhrmann, Germany</td>
			<td>960504</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

utilizing high resolution ultrasound to monitor tumor onset and growth in genetically engineered pancreatic cancer models

LSL-KraG12D / +; LSL-Trp53R172H / +; Pdx-1-Cre (KPC) 마우스 모델 췌장암에서 소설 치료 평가를 설립 하 고 자주 사용 유전자 변형 모델을 나타냅니다. 종양 발병 8 주 몇 달 사이 섹 모델 변수입니다. 따라서, 비-침략 적 이미징 도구는 화면 종양 발병 및 치료에 대 한 모니터 해야 합니다. 이 문제를 해결 하려면 다른 접근은 지난 년 동안 등장 했습니다. 고해상도 초음파 비 침해, 빠른 세션 시간 및 방사선 노출 없이 높은 이미지 해상도 같은 주요 장점이 있습니다. 그러나, 쥐에서 초음파 사소한 하 고 충분 한 해부학 지식을 이며 실용적인 기술을 성공적으로 전 임상 췌장암 모델에서 고해상도 초음파를 수행 하는 데 필요한. 다음 문서와 함께 내 생 췌장암 모델에 특히 초점 murine 모델에서 복 부 초음파에 대 한 자세한 체험 가이드 제공 됩니다. 또한, 일반적인 실수 및 그들을 피하기 위해 방법의 요약을 제공 합니다.

초음파 이미징 인간의 질병의 murine 모델에 몇 가지 문제를 해결 하는 데 사용 되는 다양 하 고 비-침략 적 기술입니다. 모든 다른 이미징 접근 주요 장점에 비해 높은 처리량, 비용 효율, 짧은 획득 시간과 실시간 이미징 있습니다. 그러나,이 도구는 정확 하 고 높은 품질의 이미지를 생성 하는 전문 지식이 필요 합니다. 원치 않는 유물 경우 특히 적어도 일부 경험 초음파 이미징 일반적으로 매우 도움이 됩니다. 췌장암에 관하여이 도구는 종양 발병, 진행 및 치료에 응답을 결정 수 있습니다. 또한, 다른 직경의 측정으로 그것 시간이 지남에 종양 볼륨의 정확한 정량화를 허용합니다. 이 연구는 보여줍니다과 유전자 조작된 마우스 모델에서 췌장암에 대 한 고해상도 초음파 영상 검사 도구로 사용 하는 방법을 자세하게에서 설명 합니다.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56979/56979fig1.jpg"> 그림 1 : 복 부 촉진. 부드럽게 손을 고정 아닌 고정 손을 부드럽게 아래로 이동 하 여 절차를 시작 하는 동안 꼬리를 당긴 다. <a href="/files/ftp_upload/56979/56979fig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56979/56979fig2.jpg"> 그림 2 : 미리 모든 필요한 항목의 개요와 지역 검색. 피부 소독 (1), 거 즈 스폰지 (2), 70% 소 프로 파 놀 (3) 초음파 젤 유리 장 (4), 안과 연 고 (5), 티슈 물티슈 (6), 의료 테이프 (7), 물 컨테이너 (8), 애완 동물 클리퍼 스 (9) depilatory 크림 작은 컨테이너 (10), 코 튼 팁 적용 눈 연 고 또는 초음파 젤 (11). <a href="/files/ftp_upload/56979/56979fig2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56979/56979fig3.jpg"> 그림 3 : Isoflurane 기화와 지역 검색. 조정 가능한 프로브 홀더 (1), 유도 챔버 (2) isoflurane 기화 기 (3)를 포함 하 여 작업 단계. <a href="/files/ftp_upload/56979/56979fig3large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56979/56979fig4.jpg"> 그림 4 : 초음파 장치. 초음파 시스템은 3 개의 초음파 프로브 및 해당 포트 함께 제공 됩니다. 키보드와 마우스 PC 시스템에 포함 됩니다. <a href="/files/ftp_upload/56979/56979fig4large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56979/56979fig5.jpg"> 그림 5 : 복구 케이지. 감 금 소의 바닥은 얇은 조직으로 준비 하 고 미리 스캔 절차 후 충분 한 난방 수 있도록가 열. 온도 섭씨 (° C)에 표시 됩니다. <a href="/files/ftp_upload/56979/56979fig5large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56979/56979fig6.jpg"> 그림 6 : 작업 단계에 고정된 마우스. 마우스는 작업 단계에는 부정사 위치에 배치 됩니다. <a href="/files/ftp_upload/56979/56979fig6large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 7" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56979/56979fig7.jpg"> 그림 7 : 애완 동물 클리퍼 스를 사용 하 여 후 면도 마우스. 복 부 털 컷, 하지만 머리의 작은 부분을 정기적으로 유물을 일으킬 유지. <a href="/files/ftp_upload/56979/56979fig7large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 8" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56979/56979fig8.jpg"> 그림 8 : Depilatory 크림의 사용. 복 부의 면도 영역에 depilatory 크림의 얇은 레이어를 관리 합니다. <a href="/files/ftp_upload/56979/56979fig8large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 9" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56979/56979fig9.jpg"> 그림 9 : 마우스의 완전히 면도 복 부. 물을 충분히 모든 크림 잔재를 씻어 하는 데 사용 됩니다, 그리고 모피의 완전 한 제거만 최적의 스캐닝 절차를 수 있습니다. <a href="/files/ftp_upload/56979/56979fig9large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 10" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56979/56979fig10.jpg"> 그림 10 : 마우스의 오른쪽. 췌 장 꼬리 종양 스캔에 대 한 최적의 방향입니다. <a href="/files/ftp_upload/56979/56979fig10large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 11" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56979/56979fig11.jpg"> 그림 11 : 마우스의 왼쪽. 췌 장 머리 종양 스캔에 대 한 최적의 방향입니다. <a href="/files/ftp_upload/56979/56979fig11large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 12" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56979/56979fig12.jpg"> 그림 12 : 마우스 복 부에 초음파 프로브. 방지 하기 위해 마우스를 어떤 상해 든 지 너무 많은 압력을 사용 하지 마십시오. <a href="/files/ftp_upload/56979/56979fig12large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 13" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56979/56979fig13.jpg"> 그림 13 : 부분 오른쪽 복 부의 초음파 이미지 복 부 대동맥 및 열 등 한 베 나 정 맥 같은 구조에 있는 주요 선박 신장 및 간 닫습니다. <a href="/files/ftp_upload/56979/56979fig13large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 14" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56979/56979fig14.jpg"> 그림 14 : 왼쪽된 복 부 부분의 초음파 이미지 왼쪽된 신장, 비장 사이의 췌 장의 막 구조는, 랜드마크로 베 나 lienalis 기관 (노란색 화살표)를 통해 실행 되 고 기본 구조로 사용할 수 있습니다. <a href="/files/ftp_upload/56979/56979fig14large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 15" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56979/56979fig15.jpg"> 그림 15 : 췌 장의 경계. (내용)으로 복 부 췌 장 (노란색 화살표)의 왼쪽된 테두리를 표시합니다. <a href="/files/ftp_upload/56979/56979fig15large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 16" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56979/56979fig16.jpg"> 그림 16 : 식별 췌 장 종양. 라운드 췌 장 종양을 나타나는 hypodense 부정사 위치, 화살표는 주변 정상 조직에의 테두리를 나타냅니다. <a href="/files/ftp_upload/56979/56979fig16large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 17" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56979/56979fig17.jpg"> 그림 17 : 경도 위치. 췌 장 종양의 길이 결정합니다. <a href="/files/ftp_upload/56979/56979fig17large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 18" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56979/56979fig18.jpg"> 그림 18 : 췌 장 종양의 경도 검사. 공기에 의해 발생 하는 간섭 십이지를 가득 합니다. <a href="/files/ftp_upload/56979/56979fig18large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 19" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56979/56979fig19.jpg"> 그림 19 : 마우스의 오른쪽: 종양이 췌 장 꼬리 <a href="/files/ftp_upload/56979/56979fig19large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 20" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56979/56979fig20.jpg"> 그림 20 : 마우스의 왼쪽: 췌 장 머리 종양 <a href="/files/ftp_upload/56979/56979fig20large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 21" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56979/56979fig21.jpg"> 그림 21 : 종양 볼륨 정량화. 이전 표시 된 두 개의 검사 위치에서 모든 3 개의 직경의 취득, 후 볼륨 계산을 수행 합니다. 따라서,는 타원 면의 공식은 사용 된다: 4/3 π/2 * b/2 * c/2. <a href="/files/ftp_upload/56979/56979fig21large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 22" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56979/56979fig22.jpg"> 그림 22 : 복구. 완전히 복구 될 때까지 난방 격판덮개 전송 동물 검색 후 마우스의 눈에서 흰 눈 연 고 통지. <a href="/files/ftp_upload/56979/56979fig22large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>

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Utilizing High Resolution Ultrasound to Monitor Tumor Onset and Growth in Genetically Engineered Pancreatic Cancer Models

이 문서에서는 유전자 조작된 췌장암 쥐에서 고해상도 초음파의 활용. 기본 목표 탐지 및 내 인 성 췌 장 종양의 평가 대 한 자세한 지침을 제공 하는.

고해상도 초음파 모니터 종양 발병 및 성장 췌장암 유전자 조작된 모델에서을 활용 하 여

The LSL-KrasG12D/+; LSL-Trp53R172H/+; Pdx-1-Cre (KPC) mouse model represents an established and frequently used transgenic model to evaluate novel ...

utilizing-high-resolution-ultrasound-to-monitor-tumor-onset-growth

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Cancer Research

10.7K 조회수.  University Medical Center Goettingen. 이 문서에서는 유전자 조작된 췌장암 쥐에서 고해상도 초음파의 활용. 기본 목표 탐지 및 내 인 성 췌 장 종양의 평가 대 한 자세한 지침을 제공 하는.

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A Genetically Engineered Mouse Model of Sporadic Colorectal Cancer

Despite the advantages of easy applicability and cost-effectiveness, colorectal cancer mouse models based on tumor cell injection have severe limitations and do not accurately simulate tumor biology and tumor cell dissemination. Genetically engineered mouse models have been introduced to overcome these limitations; however, such models are technically demanding, especially in large organs such as the colon in which only a single tumor is desired.
As a result, an immunocompetent, genetically engineered mouse model of colorectal cancer was developed which develops highly uniform tumors and can be used for tumor biology studies as well as therapeutic trials. Tumor development is initiated by surgical, segmental infection of the distal colon with adeno-cre virus in compound conditionally mutant mice. The tumors can be easily detected and monitored via colonoscopy. We here describe the surgical technique of segmental adeno-cre infection of the colon, the surveillance of the tumor via high-resolution colonoscopy and present the resulting colorectal tumors.

A protocol for the establishment of a genetically engineered mouse model of colorectal cancer by segmental adeno-cre infection and its surveillance via high-resolution colonoscopy is presented.

산발성 대장 암의 유 전적으로 조작 된 마우스 모델

Despite the advantages of easy applicability and cost-effectiveness, colorectal cancer mouse models based on tumor cell injection have severe limitations ...

연구

암 연구학

Radionuclide-fluorescence Reporter Gene Imaging to Track Tumor Progression in Rodent Tumor Models

Metastasis is responsible for most cancer deaths. Despite extensive research, the mechanistic understanding of the complex processes governing metastasis remains incomplete. In vivo models are paramount for metastasis research, but require refinement. Tracking spontaneous metastasis by non-invasive in vivo imaging is now possible, but remains challenging as it requires long-time observation and high sensitivity. We describe a longitudinal combined radionuclide and fluorescence whole-body in vivo imaging approach for tracking tumor progression and spontaneous metastasis. This reporter gene methodology employs the sodium iodide symporter (NIS) fused to a fluorescent protein (FP). Cancer cells are engineered to stably express NIS-FP followed by selection based on fluorescence-activated cell sorting. Corresponding tumor models are established in mice. NIS-FP expressing cancer cells are tracked non-invasively in vivo at the whole-body level by positron emission tomography (PET) using the NIS radiotracer [18F]BF4-. PET is currently the most sensitive in vivo imaging technology available at this scale and enables reliable and absolute quantification. Current methods either rely on large cohorts of animals that are euthanized for metastasis assessment at varying time points, or rely on barely quantifiable 2D imaging. The advantages of the described method are: (i) highly sensitive non-invasive in vivo 3D PET imaging and quantification, (ii) automated PET tracer production, (iii) a significant reduction in required animal numbers due to repeat imaging options, (iv) the acquisition of paired data from subsequent imaging sessions providing better statistical data, and (v) the intrinsic option for ex vivo confirmation of cancer cells in tissues by fluorescence microscopy or cytometry. In this protocol, we describe all steps required for routine NIS-FP-afforded non-invasive in vivo cancer cell tracking using PET/CT and ex vivo confirmation of in vivo results. This protocol has applications beyond cancer research whenever in vivo localization, expansion and long-time monitoring of a cell population is of interest.

We describe a protocol for preclinical in vivo tracking of cancer metastasis. It is based on a radionuclide-fluorescence reporter combining the sodium iodide symporter, detected by non-invasive [18F]tetrafluoroborate-PET, and a fluorescent protein for streamlined ex vivo confirmation. The method is applicable for preclinical in vivo cell tracking beyond tumor biology.

방사성 핵 종 형광 취재 원 유전자 설치류 종양 모델에서 종양의 진행을 추적 하기 위해 이미징

Metastasis is responsible for most cancer deaths. Despite extensive research, the mechanistic understanding of the complex processes governing metastasis ...

Patient-derived Orthotopic Xenograft Models for Human Urothelial Cell Carcinoma and Colorectal Cancer Tumor Growth and Spontaneous Metastasis

Cancer patients have poor prognoses when lymph node (LN) involvement is present in both high-grade urothelial cell carcinoma (HG-UCC) of the bladder and colorectal cancer (CRC). More than 50% of patients with muscle-invasive UCC, despite curative therapy for clinically-localized disease, will develop metastases and die within 5 years, and metastatic CRC is a leading cause of cancer-related deaths in the US. Xenograft models that consistently mimic UCC and CRC metastasis seen in patients are needed. This study aims to generate patient-derived orthotopic xenograft (PDOX) models of UCC and CRC for primary tumor growth and spontaneous metastases under the influence of LN stromal cells mimicking the progression of human metastatic diseases for drug screening. Fresh UCC and CRC tumors were obtained from consented patients undergoing resection for HG-UCC and colorectal adenocarcinoma, respectively. Co-inoculated with LN stromal cell (LNSC) analog HK cells, luciferase-tagged UCC cells were intra-vesically (IB) instilled into female non-obese diabetic/severe combined immunodeficiency (NOD/SCID) mice, and CRC cells were intra-rectally (IR) injected into male NOD/SCID mice. Tumor growth and metastasis were monitored weekly using bioluminescence imaging (BLI). Upon sacrifice, primary tumors and mouse organs were harvested, weighed, and formalin-fixed for Hematoxylin and Eosin and immunohistochemistry staining. In our unique PDOX models, xenograft tumors resemble patient pre-implantation tumors. In the presence of HK cells, both models have high tumor implantation rates measured by BLI and tumor weights, 83.3% for UCC and 96.9% for CRC, and high distant organ metastasis rates (33.3% detected liver or lung metastasis for UCC and 53.1% for CRC). In addition, both models have zero mortality from the procedure. We have established unique, reproducible PDOX models for human HG-UCC and CRC, which allow for tumor formation, growth, and metastasis studies. With these models, testing of novel therapeutic drugs can be performed efficiently and in a clinically-mimetic manner.

This protocol describes the generation of patient-derived orthotopic xenograft models by intra-vesically instilling high-grade urothelial cell carcinoma cells or intra-rectally injecting colorectal cancer cells into non-obese diabetic/severe combined immunodeficiency (NOD/SCID) mice for primary tumor growth and spontaneous metastases under the influence of lymph node stromal cells, which mimics the progression of human metastatic diseases.

인간 비뇨기과 세포 암 및 대장암 종양 성장 및 자발적 전이를 위한 환자 유래 직교 이종이식 모델

Cancer patients have poor prognoses when lymph node (LN) involvement is present in both high-grade urothelial cell carcinoma (HG-UCC) of the bladder and ...

In Vivo Inhibition of MicroRNA to Decrease Tumor Growth in Mice

MicroRNAs (miRNAs) are important regulators of gene expression through their ability to destabilize mRNA and inhibit translation of target mRNAs. An ever-increasing number of studies have identified miRNAs as potential biomarkers for cancer diagnosis and prognosis, and also as therapeutic targets, adding an extra dimension to cancer evaluation and treatment. In the context of thyroid cancer, tumorigenesis results not only from mutations in important genes, but also from the overexpression of many miRNAs. Accordingly, the role of miRNAs in the control of thyroid gene expression is evolving as an important mechanism in cancer. Herein, we present a protocol to examine the effects of miRNA-inhibitor delivery as a therapeutic modality in thyroid cancer using human tumor xenograft and orthotopic mouse models. After engineering stable thyroid tumoral cells expressing GFP and luciferase, cells are injected into nude mice to develop tumors, which can be followed by bioluminescence. The in vivo inhibition of a miRNA can reduce tumor growth and upregulate miRNA gene targets. This method can be used to assess the importance of a determined miRNA in vivo, in addition to identifying new therapeutic targets.

This protocol describes xenograft and orthotopic mouse models of human thyroid tumorigenesis as a platform to test microRNA-based inhibitor treatments. This approach is ideal to study the function of non-coding RNAs and their potential as new therapeutic targets.

쥐에서 종양 성장을 감소 하는 MicroRNA의 생체 내 억제

MicroRNAs (miRNAs) are important regulators of gene expression through their ability to destabilize mRNA and inhibit translation of target mRNAs. An ...

Ultrasound-Guided Orthotopic Implantation of Murine Pancreatic Ductal Adenocarcinoma

The recent success of immune checkpoint blockade in melanoma and lung adenocarcinoma has galvanized the field of immuno-oncology as well as revealed the limitations of current treatments, as the majority of patients do not respond to immunotherapy. Development of accurate preclinical models to quickly identify novel and effective therapeutic combinations are critical to address this unmet clinical need. Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDA) is a canonical example of an immune checkpoint blockade resistant tumor with only 2% of patients responding to immunotherapy. The genetically engineered KrasG12D+/-;Trp53R172H+/-;Pdx-1 Cre (KPC) mouse model of PDA recapitulates human disease and is a valuable tool for assessing therapies for immunotherapy resistant in the preclinical setting, but time to tumor onset is highly variable. Surgical orthotopic tumor implantation models of PDA maintain the immunobiological hallmarks of the KPC tissue-specific tumor microenvironment (TME) but require a time-intensive procedure and introduce aberrant inflammation. Here, we use an ultrasound-guided orthotopic tumor implantation model (UG-OTIM) to non-invasively inject KPC-derived PDA cell lines directly into the mouse pancreas. UG-OTIM tumors grow in the endogenous tissue site, faithfully recapitulate histological features of the PDA TME, and reach enrollment-sized tumors for preclinical studies by four weeks after injection with minimal seeding on the peritoneal wall. The UG-OTIM system described here is a rapid and reproducible tumor model that may allow for high throughput analysis of novel therapeutic combinations in the murine PDA TME.

We describe a protocol for the ultrasound guided implantation of murine-derived pancreatic ductal adenocarcinoma cell lines directly into the native tumor site. This approach resulted in pancreatic tumors detectable by ultrasound scanning within 2-4 weeks of injection, and significantly reduced the proportion tumor cell seeding on the peritoneal wall as compared to surgical orthotopic implantation.

뮤린 췌장 연성 선암의 초음파 유도 정형 외 이식

The recent success of immune checkpoint blockade in melanoma and lung adenocarcinoma has galvanized the field of immuno-oncology as well as revealed the ...

Isolation of Proximal Fluids to Investigate the Tumor Microenvironment of Pancreatic Adenocarcinoma

Pancreatic adenocarcinoma (PDAC) is the fourth leading cause of cancer-related death, and soon to become the second. There is an urgent need of variables associated to specific pancreatic pathologies to help preoperative differential diagnosis and patient profiling. Pancreatic juice is a relatively unexplored body fluid, which, due to its close proximity to the tumor site, reflects changes in the surrounding tissue. Here we describe in detail the intraoperative collection procedure. Unfortunately, translating pancreatic juice collection to murine models of PDAC, to perform mechanistic studies, is technically very challenging. Tumor interstitial fluid (TIF) is the extracellular fluid, outside blood and plasma, which bathes tumor and stromal cells. Similarly to pancreatic juice, for its property to collect and concentrate molecules that are found diluted in plasma, TIF can be exploited as an indicator of microenvironmental alterations and as a valuable source of disease-associated biomarkers. Since TIF is not readily accessible, various techniques have been proposed for its isolation. We describe here two simple and technically undemanding methods for its isolation: tissue centrifugation and tissue elution.

Pancreatic juice is a precious source of biomarkers for human pancreatic cancer. We describe here a method for intraoperative collection procedure. To overcome the challenge of adopting this procedure in murine models, we suggest an alternative sample, tumor interstitial fluid, and describe here two protocols for its isolation.

췌장 선암의 종양 미세 환경을 조사하기위한 근위액 분리

Pancreatic adenocarcinoma (PDAC) is the fourth leading cause of cancer-related death, and soon to become the second. There is an urgent need of variables ...

A Mouse Model to Investigate the Role of Cancer-Associated Fibroblasts in Tumor Growth

Cancer-associated fibroblasts (CAFs) can play an important role in tumor growth by creating a tumor-promoting microenvironment. Models to study the role of CAFs in the tumor microenvironment can be helpful for understanding the functional importance of fibroblasts, fibroblasts from different tissues, and specific genetic factors in fibroblasts. Mouse models are essential for understanding the contributors to tumor growth and progression in an in vivo context. Here, a protocol in which cancer cells are mixed with fibroblasts and introduced into mice to develop tumors is provided. Tumor sizes over time and final tumor weights are determined and compared among groups. The protocol described can provide more insight into the functional role of CAFs in tumor growth and progression.

A protocol to co-inject cancer cells and fibroblasts and monitor tumor growth over time is provided. This protocol can be used to understand the molecular basis for the role of fibroblasts as regulators of tumor growth.

종양 성장에서 암 관련 섬유아세포의 역할을 조사하기 위한 마우스 모델

Cancer-associated fibroblasts (CAFs) can play an important role in tumor growth by creating a tumor-promoting microenvironment. Models to study the role ...

Analysis of Lymph Node Volume by Ultra-High-Frequency Ultrasound Imaging in the Braf/Pten Genetically Engineered Mouse Model of Melanoma

Tyr::CreER+,BrafCA/+,Ptenlox/lox&#160;genetically engineered mice (Braf/Pten mice) are widely used as an in vivo model of metastatic melanoma. Once a primary tumor has been induced by tamoxifen treatment, an increase in metastatic burden is observed within 4-6 weeks after induction. This paper shows how Ultra-High-Frequency UltraSound (UHFUS) imaging can be exploited to monitor the increase in metastatic involvement of the inguinal lymph nodes by measuring the increase in their volume.
The UHFUS system is used to scan anesthetized mice with a UHFUS linear probe (22-55 MHz, axial resolution 40 &#181;m). B-mode images from the inguinal lymph nodes (both left and right sides) are acquired in a short-axis view, positioning the animals in dorsal recumbency. Ultrasound records are acquired using a 44 &#181;m step size on a motorized mechanical arm. Afterward, two-dimensional (2D) B-mode acquisitions are imported into the software platform for ultrasound image post-processing, and inguinal lymph nodes are identified and segmented semi-automatically in the acquired cross-sectional 2D images. Finally, a total reconstruction of the three-dimensional (3D) volume is automatically obtained along with the rendering of the lymph node volume, which is also expressed as an absolute measurement.
This non-invasive in vivo technique is very well tolerated and allows the scheduling of multiple imaging sessions on the same experimental animal over 2 weeks. It is, therefore, ideal to assess the impact of pharmacological treatment on metastatic disease.

Melanoma is a very aggressive disease that quickly spreads to other organs. This protocol describes the application of ultra-high-frequency ultrasound imaging, coupled with 3D rendering, to monitor the volume of the inguinal lymph nodes in the Braf/Pten mouse model of metastatic melanoma.

흑색종의 Braf/Pten 유전자 조작 마우스 모델에서 초고주파 초음파 이미징에 의한 림프절 부피 분석

Tyr::CreER+,BrafCA/+,Ptenlox/lox&#160;genetically engineered mice (Braf/Pten mice) are widely used as an in vivo model of metastatic melanoma. Once a ...

Molecular and Immunologic Techniques in a Genetically Engineered Mouse Model of Gastrointestinal Stromal Tumor

Gastrointestinal stromal tumor (GIST) is the most common human sarcoma and is typically driven by a single mutation in the KIT receptor. Across tumor types, numerous mouse models have been developed in order to investigate the next generation of cancer therapies. However, in GIST, most in vivo studies use xenograft mouse models which have inherent limitations. Here, we describe an immunocompetent, genetically engineered mouse model of gastrointestinal stromal tumor harboring a KitV558&#916;/+ mutation. In this model, mutant KIT, the oncogene responsible for most GISTs, is driven by its endogenous promoter leading to a GIST which mimics the histological appearance and immune infiltrate seen in human GISTs. Furthermore, this model has been used successfully to investigate both targeted molecular and immune therapies. Here, we describe the breeding and maintenance of a KitV558&#916;/+ mouse colony. Additionally, this paper details the treatment and procurement of GIST, draining mesenteric lymph node, and adjacent cecum in KitV558&#916;/+ mice, as well as sample preparation for molecular and immunologic analyses.

The goal of this manuscript is to describe the KitV558&#916;/+&#160;mouse model and techniques for successful dissection and processing of mouse specimens.

위장 기질 종양의 유전자 조작 마우스 모델의 분자 및 면역 학적 기술

Gastrointestinal stromal tumor (GIST) is the most common human sarcoma and is typically driven by a single mutation in the KIT receptor. Across tumor ...

Zebrafish Larvae as a Model to Evaluate Potential Radiosensitizers or Protectors

Zebrafish are extensively used in several kinds of research because they are one of the easily maintained vertebrate models and exhibit several features of a unique and convenient model system. As highly proliferative cells are more susceptible to radiation-induced DNA damage, zebrafish embryos are a front-line in vivo model in radiation research. In addition, this model projects the effect of radiation and different drugs within a short time, along with major biological events and associated responses. Several cancer studies have used zebrafish, and this protocol is based on the use of radiation modifiers in the context of radiotherapy and cancer. This method can be readily used to validate the effects of different drugs on irradiated and control (non-irradiated) embryos, thus identifying drugs as radio sensitizing or protective drugs. Although this methodology is used in most drug screening experiments, the details of the experiment and the toxicity assessment with the background of X-ray radiation exposure are limited or only briefly addressed, making it difficult to perform. This protocol addresses this issue and discusses the procedure and toxicity evaluation with a detailed illustration. The procedure describes a simple approach for using zebrafish embryos for radiation studies and radiation-based drug screening with much reliability and reproducibility.

The zebrafish has recently been exploited as a model to validate potential radiation modifiers. The present protocol describes the detailed steps to use zebrafish embryos for radiation-based screening experiments and some observational approaches to evaluate the effect of different treatments and radiation.

잠재적인 방사능 감작제 또는 보호제를 평가하기 위한 모델로서의 제브라피시 유충

Zebrafish are extensively used in several kinds of research because they are one of the easily maintained vertebrate models and exhibit several features ...