Bu araştırma Deutsche Krebshilfe tarafından desteklenmiştir (Max Eder grup AN için: 110972), bir DGVS doktora tezi Bursu (SMB) ve bir Else-Kröner-Fresenius-Vakfı burs (RGG) Üniversitesi Tıp Merkezi Goettingen. Jutta Blumberg ve Ulrike Wegner uzman teknik destek için teşekkür ederiz. Biz de tüm hayvan teknisyenleri Üniversitesi Tıp Merkezi Goettingen fare tutmak için hayvan tesisinde teşekkür ederiz. Tüm deneyler Alman hayvan refahı düzenlemelere göre yapıldı.

Üniversitesi Tıp Merkezi Goettingen, Almanya (33.9-42502-04-15/2056) hayvan bakımı yönergeleri uyarınca protokolüdür. Panoları bireysel hayvan belirli gereksinimlerine bağlı olarak gözden geçirin, bazı iletişim kuralı adımlar buna göre değiştirilmiş olabilir.
1. abdominal palpasyonla KPC farelerin
<ol><li>Gereksiz ultrason taramaları önlemek için muhtemelen intraabdominal bir lezyon ayı olabilir ve daha sonra abdominal ultrason geçmesi fareler tanımlamak için fare karın muayene et.<ol>
<li>Abdominal palpasyonla haftalık 8 hafta-in yaş KPC fare modeli başlayarak gerçekleştirin. Yüksek çözünürlüklü ultrason da transplante tümör modeller (örneğin, orthotopics) veya diğer genetik fare modelleri uygulanabilir. Not: tümörlerin palpe önce tümör kinetik ve çalışma bağlı olarak (önleme çalışma, terapötik müdahale çalışması), algılama çok küçük tümörlerde (1-2 mm) monitör tümör başlangıç için uygun hedeftir.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Kafes ızgara üzerine fareyi getirin ve yavaşça fareyi kuyruğundan kaldırın ve karın hafifçe yukarı ve aşağı dizin ve sigara tamir el (şekil 1) başparmak ile giderek muayene et.</li>
	<li>Fareyi yumuşak palpasyonla kaldırabilir, yavaş yavaş basıncı artırarak devam edin. Daha büyük bir direnç üst ve alt karın kolayca tespit edilebilir. Bazen, sert dışkı yanlışlıkla bir tümör yorumlanabilir kitle.</li>
</ol>2. çalışma alanı hazırlanması
<ol><li>En az üç farklı çalışma birimleri için alan sağlamak: ön tarama alanını, sahne ve kurtarma kafes tarama. Gerekli malzeme Şekil 2' de tasvir.</li>
	<li>Ana çalışma plaka temiz (örneğin % 70 ile etanol) ve (şekil 3) tarama önce Isıtma platformunda geçiş. Birinci fare transfer edilmeden önce hedef sıcaklık 38-40 ° c ulaşacağından emin olun.</li>
	<li>Ultrason makinede geçiş ve elde edilen veriler (şekil 4) için yeni bir klasör oluşturun. B-mod ayarı karın görüntüleme için uygulanır. Ayrıca, karın dönüştürücü makinenin etkin bağlantı noktasına takılı olduğundan emin olun. Transduser baş çalışma sahne üstündeki montaj sistemi dönüştürücü kullanarak düzeltebilirsiniz.</li>
	<li>Bir kurtarma kafes bir ısıtma yüzeyi veya termal mat (veya kullanım Isıtma lambası) sonrası yordam termoregülasyon ve taranan farelerin hızlı iyileşme sağlamak için hazırlamak. Doku ince bir tabaka olarak yastık boğulma (şekil 5) riski ile yatak takımları, aspirasyon önlemek için bu kafesin dibinde koymak.</li>
</ol>3. inhalasyon anestezi
<ol><li>İndüksiyon odanın içine bir fare koyarak devam edin. Gaz taşıyıcı akışı (1 L/dak oksijen veya hava) için vana açıp isoflurane konsantrasyonu % 4, indüksiyon odasının yavaş yavaş artan bir doygunluk izin ayarlayabilirsiniz. (Etkin veya edilgen filtreleme) uygun isoflurane atma yerinde olduğundan emin olun. Yaklaşık 2-4 dakika sonra fare genellikle derin sedasyon altında olacaktır.<ol>
<li>Sedasyon çalışma Sahne Alanı'nda % 2 isoflurane burun konisi aracılığıyla yönetmek olarak korumak.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Dikkatli bir şekilde hayvan indüksiyon odasından çalışma Sahne Alanı'na transfer. Burun konisi sürekli gaz akışı için kontrol edin. Fare burun burun konisi anestezi satır çıkış koymak. İlk tarama için düzenli sırtüstü pozisyon konumdur. Fare da pankreas baş veya kuyruk Tümörleri (şekil 6) görünürlüğünü artırmak için sağa veya sola yan yerleştirilebilir.</li>
	<li>Abdominal ultrason acı başınaolmasa da, bir ağrı ücretsiz durumu ve derin anestezik durum gösterge ayak çimdik testi gerçekleştirin. Fare hala etkin veya etkin bir şekilde hareket etme, retransfer ise hayvan geri tekrarlanan ve uzun süreli indüksiyon için indüksiyon odasında.</li>
	<li>Göz koruma merhem sıvı kaybı nedeniyle kornea yaralanmaları önlemek için kullanın.</li>
	<li>Anestezi sırasında bir izleme sistemi kullanın. Ancak, EKG ve rektal ısı düzenli olarak kullanılır abdominal ultrason taramak için. Önemlisi, fareler anestezi altında thermoregulate yeteneği kaybetmek. Bu nedenle, hipotermi veya solunum soluyarak veya apne gibi klinik belirtiler yakından gözlemlemek. Herhangi bir belirti açık dur isoflurane ve yer fare kurtarma kafeste hemen ise.</li>
</ol>4. ultrason ayarları
<ol><li>Ultrason sistemde üretici yönergelerine tarafından açıklandığı gibi geçin. Birincil ayarı aktive karın paketiyle genel görüntüleme koymak emin olun. Genellikle B modunda görüntüleme veri toplama standart olarak kullanılır.</li>
	<li>İyi görüntü kalitesi aşağıdaki parametrelerle ulaşmak: frekans 40 MHz, 2D-kazanç 25-30 dB, görüntü derinliği 10 mm, resim genişliği 10 mm, 3-6 mm arasında merkezi ile 3 odak alanı.</li>
</ol>5. fare hazırlık
<ol><li>Yapışkan bant kullanarak üst ve alt ekstremite düzeltmek. Hayvan fiksasyon (Şekil 7) nedeniyle herhangi bir yaralanma önlemek mümkün olduğunca dikkatli olun.</li>
	<li>Tüm karın kürk elektronik evde beslenen hayvan makası kullanarak kaldırın. Kürk doku nedeniyle göğüs kafesi kadar alt karin başlatın. Bu alanda deri yaralanmaları önlemek için oluşum xiphoideus , kendine iyi bak. Not: Fare kürk ultrason dalgaları yansıtır ve görünürlüğü azalır.</li>
	<li>Bir en iyi duruma getirilmiş cilt hazırlık ve kürk tümüyle kaldırılmasını gerçekleştirmek için depilatory krem kullanın. Krem pamuk İpuçları (şekil 8) kullanarak traş karın üzerine ince bir tabaka yönetmek. Krem kuru dokuların bol su baştan başa çıkarmak tüm artıkları (Şekil 9, şekil 10, Şekil 11) tarafından takip ile (30 s ya da sonra daha sonra kullanılan krem bağlı olarak) kaldırın. Krem kalıntıları deri ve mukozada tahriş sonra ultrason neden olabilir ve böylece sağlık etkileyebilir.</li>
	<li>Yeterli tarama sağlamak için ultrason jeli (şekil 12) karın üzerine bol koşullar geçerlidir. Genellikle, sıcak ultrason jeli hipotermi fare için en aza indirmek için kullanılır.</li>
	<li>El ile dönüştürücü kafasına ultrason jeli ince bir tabaka uygulayın. Bir test çentik dönüştürücü uç dokunarak gerçekleştirin. Dönüştürücü doğru konumlandırılmış bir sinyal sol üst tarafındaki vasıl belgili tanımlık perde görülebilir.</li>
</ol>6. abdominal ultrason
<ol><li>Firma basınç uygulayarak karın üzerine dönüştürücü ayarlayın. Fare karın ağır sıkıştırma için solunum veya dolaşım bozukluğu neden olabilir ve kaçınılmalıdır.</li>
	<li>Yukarı ve aşağı inceden inceye gözden geçirmek. Çerçeve çalışma platformu ve tekerlekleri x ekseni ve y ekseni için ayarlayın.</li>
	<li>İlk adım olarak her iki böbrek tanımlayın. Genellikle alt karın hyperechogenic homojen yapıları olarak görünürler. Bağlı vena renalis vena kava inferior (şekil 13) bu da daha fazla neden kolayca bulunabilir.</li>
	<li>Vena lienalis hizmet için pankreas Simgesel Yapı beden olarak kullanın. Vena renalis ve vena lienalisarasında ayrım yapmak için girişim. Vena lienalis tespiti pankreas tam olarak yerelleştirilebilir. Normal pankreas oldukça katı bir yapı (Şekil 14 ve şekil 15) daha karın boşluğu yoluyla yayılan bir membran var.</li>
</ol>7. pankreas tümörü algılama ve birim değerlendirme
<ol><li>Tüm çevresindeki yapılardan pankreas lezyonlar tanımlayın. Bunlar genellikle hypoechoic inhomogeneous yuvarlak veya uzun doku kitleler (şekil 16) görüntülenir. Tümör genellikle sert ve zor tarama baş tarafından birleştirilebilir. Dikkat, zaman zaman açıkça bir tümör ve ince bağırsak döngü arasında ayırt etmek zor olabilir. Pankreas tümörleri dikkat edilmelidir değil Bağırsak bağırsakların dikkat edin.</li>
	<li>Tümör algılama ekran yukarı ve aşağı bir izlenime toplam boyutu ve ultrason Kaliper kullanarak en büyük çapı ölçmek için. Uygun bir görüntü bulunduktan sonra ekran donma ve tam tümör boyutu belirlemek için ölçü aracını kullanın. Dikkat, daha sonra kullanmak bir tümör kuyruk, vücut veya pankreas başkanı lokalize olup olmadığını ayırt etmek önemli olacaktır.</li>
	<li>Modu yaşamayı değiştirmeden önce çalışma kaydetmek için resimleri kaydetmek emin olun. Dikkat, ayar tekerleği serbest ve ultrason sonda daha da fare karında basıldığında olabilir görüntü dondurma. Bu nedenle, donarak mode değiştirmeden önce sıkıştırma ayarı düzeltmek.</li>
	<li>İlk uçak ölçümü bitirdikten sonra tarama baş tarafından boyuna konumda (şekil 17) 90 ° döndürmek veya tümörlerin boyuna genişleme tespit etmek için onun yanına fare açmak. Bazı tümör yeterli görüş için farenin konumunu değiştirmek gerekebilir. Pankreas kuyruk tümörler için fareyi onun sağ tarafında (şekil 10 ve şekil 19), sol tarafında (Şekil 11 ve şekil 20) pankreas baş tümörler için yerleştirilebilir.</li>
</ol>8. tümör Birim miktar
Not: Bir büyük amacı tüm çabaları, tümör biriminin doğru belirlenmesidir. Çeşitli teknikler kullanılabilir olmasına rağmen bir elipsoid formüle dahil olmak üzere bir hesaplama yöntemi Üniversitesi Tıp Merkezi Goettingen tercih edilir.
<ol><li>Tüm üç daha önce elde edilen çapları ile donatılmış, karşılık gelen tümör (şekil 21) yaklaşık hacmi hesaplamak.</li>
	<li>Alternatif olarak, sonraki hacim hesaplama ve 3 3-d-yeniden yapılanma ile tümör bölgesinin bir otomatik tarama gerçekleştirmek için tarama kafasının bir motor sistemi kullanın.</li>
</ol>9. kurtarma
<ol><li>Tarama sonra dikkatli bir şekilde tüm yapışkan bandı çıkarın ve dikkatli bir şekilde çıkarın tüm ultrason jeli kuru doku ile.</li>
	<li>Dikkatle fare ( şekil 21) kurtarma kafesin içine aktarın. Herhangi bir kaplama doku solunum bozukluğu neden olabilir mouse´s yüze kaçının. Kurtarma için bir yan konum tercih edilmelidir.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Kersten, K., de Visser, K. E., van Miltenburg, M. H., Jonkers, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetically+engineered+mouse+models+in+oncology+research+and+cancer+medicine.">Genetically engineered mouse models in oncology research and cancer medicine.</a> EMBO Molecular Medicine. 9 (2), 137-153 (2017).</li><li>Olive, K. P., Politi, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Translational therapeutics in genetically engineered mouse models of cancer. (2), 131-143 (2014).</li><li>Westphalen, C. B., Olive, K. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetically+engineered+mouse+models+of+pancreatic+cancer.">Genetically engineered mouse models of pancreatic cancer.</a> The Cancer Journal. 18 (6), 502-510 (2012).</li><li>Hingorani, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trp53R172H+and+KrasG12D+cooperate+to+promote+chromosomal+instability+and+widely+metastatic+pancreatic+ductal+adenocarcinoma+in+mice.">Trp53R172H and KrasG12D cooperate to promote chromosomal instability and widely metastatic pancreatic ductal adenocarcinoma in mice.</a> Cancer Cell. 7 (5), 469-483 (2005).</li><li>Frese, K. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=nab-Paclitaxel+potentiates+gemcitabine+activity+by+reducing+cytidine+deaminase+levels+in+a+mouse+model+of+pancreatic+cancer.">nab-Paclitaxel potentiates gemcitabine activity by reducing cytidine deaminase levels in a mouse model of pancreatic cancer.</a> Cancer Discovery. 2 (3), 260-269 (2012).</li><li>Paredes, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+non-invasive+method+of+quantifying+pancreatic+volume+in+mice+using+micro-MRI.">A non-invasive method of quantifying pancreatic volume in mice using micro-MRI.</a> PLoS One. 9 (3), e92263 (2014).</li><li>Boj, S. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organoid+models+of+human+and+mouse+ductal+pancreatic+cancer.">Organoid models of human and mouse ductal pancreatic cancer.</a> Cell. 160 (1-2), 324-338 (2015).</li><li>Aung, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunotargeting+of+Integrin+alpha6beta4+for+Single-Photon+Emission+Computed+Tomography+and+Near-Infrared+Fluorescence+Imaging+in+a+Pancreatic+Cancer+Model.">Immunotargeting of Integrin alpha6beta4 for Single-Photon Emission Computed Tomography and Near-Infrared Fluorescence Imaging in a Pancreatic Cancer Model.</a> Molecular Imaging. 15, (2016).</li><li>Akladios, C. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contribution+of+microCT+structural+imaging+to+preclinical+evaluation+of+hepatocellular+carcinoma+chemotherapeutics+on+orthotopic+graft+in+ACI+rats.">Contribution of microCT structural imaging to preclinical evaluation of hepatocellular carcinoma chemotherapeutics on orthotopic graft in ACI rats.</a> Bulletin du Cancer. 98 (2), 120-132 (2011).</li><li>Neesse, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CTGF+antagonism+with+mAb+FG-3019+enhances+chemotherapy+response+without+increasing+drug+delivery+in+murine+ductal+pancreas+cancer.">CTGF antagonism with mAb FG-3019 enhances chemotherapy response without increasing drug delivery in murine ductal pancreas cancer.</a> Proceedings of the National Academy of Science USA. 110 (30), 12325-12330 (2013).</li><li>Sastra, S. A., Olive, K. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+murine+pancreatic+tumors+by+high-resolution+ultrasound.">Quantification of murine pancreatic tumors by high-resolution ultrasound.</a> Methods in Molecular Biology. 980, 249-266 (2013).</li></ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

Bu iletişim kuralı ile pankreas tümörleri genetiği fare modellerinde yüksek çözünürlüklü abdominal ultrason Imaging'i kullanma miktarının için ayrıntılı bir açıklama sağlanmıştır. Son zamanlarda, Sastra ve ark. nasıl fare modelleri, ancak hazırlık ve tüm diğer adımları için önkoşul gösterildiği gibi11işleme hakkında görüntülenmeyecektir talimat pankreas tümörleri ölçmek için ayrıntılı bir açıklama yayınladı. Bu makale genel amacı farelerde yüksek çözünürlüklü ultrason için kapsamlı görsel bir kılavuz sağlamaktır.
Her ne kadar biz bizim açıklama genetiği farelerde endojen pankreas tümörleri üzerinde odaklanmak, bu yöntem de orthotopic nakli modeller için kullanılabilir. Orthotopic modeller için çok küçük tümörler kadar bile 1-2 mm tespit abdominally çekim hızı ve tümör başlangıçlı araştırmak için. Abdominal palpasyonla öznel ve yeniden oluşturulması güç olabilir gibi ultrason tarama da çok küçük pankreas tümörleri başlangıcı tespit için KPC modeli önceki palpasyonla olmadan uygulanabilir. Ayrıca, hava ile dolu ince bağırsak döngüler gibi karın yapıları bindirilmiş olabilir. Bu bağlamda, çalışma Sahne Alanı'nda hayvan konumunu değiştirmek yardımcı olabilir. Çoğu tümörler sırtüstü pozisyonda görüntülenmeyecektir; Ancak, bazı tümörler yalnızca fareyi onun sol tarafta (pankreas başı tümörü) veya sağ tarafta (pankreas kuyruk tümörler) yerleştirildiğinde algılanabilir. Böylece, yeterli bir fare konumlandırma verimli görünürlüğünü artırmak için önemlidir.
Karın organları veya anatomik değişkenlik yetersiz görünürlüğünü ortaya çıkabilir. Görünürlük ve ultrason görüntülerin çözünürlüğünü artırmak için parlaklık ve Karşıtlık ayarlarını hem de odak buna göre değiştirilmesi. Görüntü eserler hatalı/yanlış sonda, fare kürk eksik kaldırılmasını, ultrason jeli yetersiz miktarda veya fare karın ile probe yetersiz temas basıncı nedeniyle olabilir. Ayrıca, biraz sonda devirme görünürlük de önemli ölçüde artırabilir.
Ayrıca, tümör büyüme Kinetik boyuna küçük hayvan ultrason ile takip edilebilir. Tekniğin büyük avantajı düşük maliyeti (verilen bir ultrason makine durumu), hiçbir radyasyona maruz kalma, kısa scanning zaman ve böylece küçük zorlanma fareler için içerir. Boyuna kanser araştırmaları ışığında özellikle tekrarlanan tarama gerçekleştirmek kolay ve küçük hayvanlar sedasyon veya küçük hayvan BT veya MRI taramaları için gerekli olan anestezi uzun süreler, gerek kalmadan zorlar.
Daha güçlü ultrason sistemleri ile teknik gelişmeler şu anda geliştirilmiş çözünürlük ve giderek otomatik görüntü optimizasyon araçları, küçük hayvan, geliştirilmekte olan bu yana yüksek çözünürlüklü ultrason daha sık preklinik çeşitli kullanılacak disiplinleri içinde belgili tanımlık gelecek. Protokol içindeki kritik adımlar, karın organları ve damarları düzeltmek yanı sıra, doğru fare hazırlık ve konumlandırma içerir.
Yüksek çözünürlüklü ultrason genetik olarak algılama ve miktar pankreas Tümörlerinin için değerli bir araç olduğunu ve orthotopic fare modelleri. Diğer kurulan hayal teknikleri ile karşılaştırıldığında bu ultrason tabanlı yöntem hızlı oturum süreleri ve maliyet verimliliği birleştirir. Doğru satın alma ve ultrason resimleri yorumlanması doğru uygulamalı eğitim ve deneyim gerektirdiğinden bu video iletişim kuralı tüm yönleriyle pankreas kanseri modelleri için ayrıntılı bir kılavuz olarak hizmet vermektedir.

Genetiği fare modelleri kanser araştırma yeteneklerini yakından insan karsinojenezis1,2,3karmaşık doğası özetlemek için nedeniyle artan bir önem kazanmıştır. En sık kullanılan modelleri pankreas kanseri geliştirme eğitim için ilerleme ve terapötik yanıt bir Tümör baskılayıcı p534inactivation ile kombine Kras onkogen etkinleştiren bir mutasyon karakterize. Bu LSI-KrasG12D / +; LSI-Trp53R172H / +; PDX-1-Cre (KPC) fare modeli taklit eden invaziv Karsinomu için önceden invazif pankreas İntraepitelyal Neoplazi (PanIN) lezyon üzerinden ilerleme step-wise. Phenotypically, neredeyse tüm fareler doğumdan sonra ilk altı ay içinde PDAC geliştirmek. Ancak, transplante modellerle karşılaştırıldığında, KPC modeli 8 hafta son derece değişken tümör başlangıcından birkaç ay4ortaya koymaktadır. Pankreas Tümörleri (5-9 mm çapında) belirli bir boyutu ulaştığınızda, hızla tümör büyümesini hızlandırır ve fareler preklinik denemeler5' te kayıtlı gerekir. Bu nedenle, tümör başlangıçlı ve tümör boyutu tam algılama preklinik çalışma lojistik ve tedavi takibi için gerekli bir önkoşuldur. Genel olarak, çeşitli yaklaşımlar gibi manyetik rezonans görüntüleme (MRG)6,7,8,9 veya yüksek çözünürlüklü ultrason tarama bilgisayarlı tomografi tümör tarama yapmak için istihdam ve Terapi10. Her teknik avantajları ve dezavantajları vardır. Her ne kadar MRI- veya bilgisayarlı tomografi (CT)-görüntüleme sağlar yüksek çözünürlüklü veri toplama yanı sıra doğru hacim hesaplama, uzun süreli sınav zamanı genel sedasyon altında olarak ve çok pahalı ekipman gereklidir ve sık izin vermez uzun bir süre boyunca tarama. Buna ek olarak, küçük hayvan Ultrasonografi fareler11karın patolojiler için ekran için istihdam kurulan bir yöntemidir. Görüntüleme bu yöntemin avantajları, kez, yüksek çözünürlükte tarama kısa ve doppler ultrason veya kontrast kullanma imkanı perfüzyon organların paralel görselleştirmek için ultrason (CEUS) gelişmiş. Ancak, anatomik bilgi, 3D hayal gücü ve tam pratik eğitimden gerçek görüntü yorumu için gereklidir.
Aşağıdaki makalede, yüksek çözünürlüklü ultrason KPC modeli kullanmak için detaylı bir protokol sağlanır. Ayrıca, standart ultrason görüntüleri tasvir ve araştırmacı için yönlendirme kolaylaştırmak için organ yapıları ile Etiketlenmiş.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Visual Sonics Vevo2100 High Resolution Ultrasound System, including imaging stage and anesthesia line</td>
			<td>FUJIFILM VisualSonics Inc, Canada</td>
			<td>VS-11945</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vevo 2100 MicroScan Transducer MS-550-D (22-55MHz)</td>
			<td>FUJIFILM VisualSonics Inc, Canada</td>
			<td>VS-11874</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vevo Anesthesia System (anesthesia induction chamber with fresh and waste gas inlet)</td>
			<td>FUJIFILM VisualSonics Inc, Canada</td>
			<td>SA-12055</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vevo Imaging Station (working stage with nose cone for anesthesia supply)</td>
			<td>FUJIFILM VisualSonics Inc, Canada</td>
			<td>SA-11982</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;electronic pet clippers</td>
			<td>Panasonic Marketing Europe, Germany</td>
			<td>5025232484324</td>
			<td>Panasonic ER-PA10-s</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Labotect Hot plate</td>
			<td>Labor tech G&#246;ttingen, Germany</td>
			<td>13854</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>eye cream (ophthalmic ointment)</td>
			<td>Sch&#252;lke&#38;Mayr, Germany</td>
			<td>9080249</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>veterinary isoflurane</td>
			<td>Abbvie, Germany</td>
			<td>4831867</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>depilatory cream</td>
			<td>RB healthcare UK, United Kingdom</td>
			<td>8218535</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70% ethanol (v/v) in distilled water</td>
			<td>TH. Geyer, Germany</td>
			<td>22941000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ultrasound gel</td>
			<td>Asmuth, Germany</td>
			<td>13477</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>tissue wipes</td>
			<td>Kimberly-Clark Germany, Germany</td>
			<td>7558</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>cotton tips</td>
			<td>Meditrade, Germany</td>
			<td>75481116</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>glass bowl for ultrasound gel</td>
			<td>ARC France, France</td>
			<td>H1149</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>water bowl</td>
			<td>W &#38; P Trading Co., USA</td>
			<td>B00K2P6PLQ</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>gauze sponges</td>
			<td>Fuhrmann, Germany</td>
			<td>960504</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

utilizing high resolution ultrasound to monitor tumor onset and growth in genetically engineered pancreatic cancer models

LSI-KrasG12D / +; LSI-Trp53R172H / +; PDX-1-Cre (KPC) fare modeli pankreas kanseri yeni tedaviler değerlendirmek için bir kurulmuş ve sık kullanılan transgenik modeli temsil eder. Tümör başlangıçlı 8 hafta ile birkaç ay arasında KPC modelindeki değişkendir. Bu nedenle, non-invaziv görüntüleme aygıtlarının ekran için tümör başlangıçlı ve tedaviye yanıt için izlemek için gereklidir. Bu sorunu gidermek için farklı yaklaşımlar son yıl içinde ortaya çıkmıştır. Yüksek çözünürlüklü ultrason invasiveness sigara, hızlı oturum süreleri ve yüksek görüntü çözünürlüğü olmadan radyasyona maruz kalma gibi büyük avantajları vardır. Ancak, ultrason farelerde önemsiz ve yeterli anatomik bilgi değildir ve pratik becerileri yüksek çözünürlüklü ultrason preklinik pankreas kanseri modellerinde başarıyla gerçekleştirmek için gereklidir. Aşağıdaki makale ile endojen pankreas kanseri modelleri belirli bir odak ile fare modellerinde abdominal ultrason için ayrıntılı bir uygulamalı rehber sunulur. Ayrıca, ortak hatalar ve nasıl önlenebileceği bir özetini sağlar.

Ultrason görüntüleme insan hastalıkları fare modelleri birkaç önemli sorunu gidermek için kullanılan çok yönlü ve non-invaziv bir tekniktir. Tüm diğer görüntüleme yaklaşımlar büyük avantaj için yüksek üretilen iş, maliyet verimliliği, kısa edinme zaman ve gerçek zamanlı görüntüleme karşılaştırılır. Ancak, bu araç uzmanlık doğru yüksek kaliteli görüntüler oluşturmak için gerekir. Özellikle istenmeyen eserler olması durumunda genel olarak ultrason görüntüleme ile en az biraz tecrübe çok yararlıdır. Pankreas kanseri ile ilgili olarak tümör başlangıçlı, ilerleme ve tedaviye yanıt belirlemek için bu aracı sağlar. Ayrıca, farklı Çap ölçüm tarafından tümör birimin tam bir miktar zaman içinde sağlar. Bu çalışmada gösterir ve ayrıntılı olarak açıklar yüksek çözünürlüklü ultrason görüntüsü genetiği fare modelleri pankreas kanseri için bir tarama aracı olarak kullanmak.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56979/56979fig1.jpg"> Resim 1 : Abdominal palpasyonla. Sigara tamir el yordamı yavaşça yukarı ve aşağı hareket ettirerek Başlarken el hafifçe sabitleme kuyruğunu çeker. <a href="/files/ftp_upload/56979/56979fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56979/56979fig2.jpg"> Resim 2 : Alan tüm gerekli öğeleri genel bakış ile ön tarama. Cilt dezenfeksiyon (1), gazlı bez süngerler (2), % 70 isopropanol (3), ultrason jeli ile cam bağırsak (4), oftalmik merhem (5), doku mendil (6), tıbbi bant (7), su kabı (8), evde beslenen hayvan kesme makineleri (9) depilatory (10), küçük konteyner ile krem uygulamak için pamuk ipuçları göz jeli (11) merhem veya ultrason. <a href="/files/ftp_upload/56979/56979fig2large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56979/56979fig3.jpg"> Şekil 3 : Alan Isoflurane Buharlaştırıcı ile tarama. Çalışma Stage'le isoflurane Buharlaştırıcı (3) de dahil olmak üzere ayarlanabilir sonda tutucu (1), indüksiyon Odası (2). <a href="/files/ftp_upload/56979/56979fig3large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56979/56979fig4.jpg"> Şekil 4 : Ultrason cihazı. Ultrason sistemi üç ultrason probları ve ilgili bağlantı noktalarına ile sağlanır. Klavye ve PC fare sistemi içinde bulunur. <a href="/files/ftp_upload/56979/56979fig4large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56979/56979fig5.jpg"> Şekil 5 : Kurtarma kafes. Kafesin altına ince bir doku ile hazırlanır ve tarama prosedürü sonra yeterli Isıtma için izin vermek için Önceden ısıtılmış. Sıcaklık santigrat (C °) gösterilir. <a href="/files/ftp_upload/56979/56979fig5large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56979/56979fig6.jpg"> Şekil 6 : Sabit fare çalışma sahnede. Fare sırtüstü pozisyonda çalışma Sahne Alanı'nda yer alıyor. <a href="/files/ftp_upload/56979/56979fig6large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 7" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56979/56979fig7.jpg"> Şekil 7 : Evde beslenen hayvan kesme makineleri kullandıktan sonra traş fare. Karın kürk kesilir, ama hangi düzenli olarak el eşyaları neden saç daha küçük parçalar kalıcı. <a href="/files/ftp_upload/56979/56979fig7large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 8" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56979/56979fig8.jpg"> Şekil 8 : Depilatory krem kullanımı. Depilatory krem traş bölgesindeki karın ince bir tabaka yönetmek. <a href="/files/ftp_upload/56979/56979fig8large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 9" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56979/56979fig9.jpg"> Şekil 9 : Bir fare tamamen traş karın. Bol su tüm krem artıkları durulama için kullanılır, tümüyle kaldırılmasını kürk en iyi bir tarama yordam sağlar. <a href="/files/ftp_upload/56979/56979fig9large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 10" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56979/56979fig10.jpg"> Şekil 10 : Fare sağ tarafında. Pankreas kuyruk tümör tarama için en iyi yönü. <a href="/files/ftp_upload/56979/56979fig10large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 11" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56979/56979fig11.jpg"> Şekil 11 : Sol tarafında fare. Pankreas baş tümör tarama için en iyi yönü. <a href="/files/ftp_upload/56979/56979fig11large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 12" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56979/56979fig12.jpg"> Şekil 12 : Fare karın ultrason sondası. Önlemek için çok fazla baskı kullanmak fare için herhangi bir yaralanma. <a href="/files/ftp_upload/56979/56979fig12large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 13" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56979/56979fig13.jpg"> Şekil 13 : Ultrason görüntüsü şu karın kısmı Böbrek ve karaciğer için yakın ana geminin abdominal aort ve vena kava inferior gibi yapıların içinde yer alır. <a href="/files/ftp_upload/56979/56979fig13large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 14" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56979/56979fig14.jpg"> Şekil 14 : Sol karın kısmı ultrason resmini Sol böbrek ve dalak arasında pankreas membranöz yapısını bulunur bir dönüm noktası olarak vena lienalis org (sarı ok) çalışan ve yol gösterici bir yapı olarak kullanılabilir. <a href="/files/ftp_upload/56979/56979fig14large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 15" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56979/56979fig15.jpg"> Şekil 15 : Pankreas kenarlığını. (İçindekiler ile) mide pankreas (sarı ok) sol kenarlığını işaretler. <a href="/files/ftp_upload/56979/56979fig15large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 16" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56979/56979fig16.jpg"> Şekil 16 : Tanımlayıcı pankreas tümörü. Sırtüstü konumu yuvarlak pankreas tümörü görünen bir hypodense ile çevresindeki normal doku kenarlığını ok gösterir. <a href="/files/ftp_upload/56979/56979fig16large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 17" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56979/56979fig17.jpg"> Şekil 17 : Boyuna konumu. Pankreas tümörü uzunluðunu belirlemek. <a href="/files/ftp_upload/56979/56979fig17large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 18" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56979/56979fig18.jpg"> Şekil 18 : Pankreas tümörü boyuna taraması. Hava yoluyla neden müdahale oniki parmak bağırsağı dolu. <a href="/files/ftp_upload/56979/56979fig18large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 19" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56979/56979fig19.jpg"> Şekil 19 : Fareyi sağ tarafında: pankreas kuyruk tümör <a href="/files/ftp_upload/56979/56979fig19large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 20" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56979/56979fig20.jpg"> Şekil 20 : Farenin sol: pankreas başı tümörü <a href="/files/ftp_upload/56979/56979fig20large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 21" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56979/56979fig21.jpg"> Şekil 21 : Tümör Birim miktar. Tüm üç çapları daha önce belirtilen iki tarama pozisyonlarda edinimi sonra hacim hesaplama yapılır. Bu nedenle, bir elipsoid formül kullanılır: 4/3 π/2 a * b/2 * c/2. <a href="/files/ftp_upload/56979/56979fig21large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 22" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56979/56979fig22.jpg"> Şekil 22 : Kurtarma. Hayvan tarama kadar tamamen iyileşmiş bir ısıtma yüzeyi aktarıldıktan sonra fare göz beyaz göz merhem dikkat edin. <a href="/files/ftp_upload/56979/56979fig22large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Utilizing High Resolution Ultrasound to Monitor Tumor Onset and Growth in Genetically Engineered Pancreatic Cancer Models at JoVE.com

Utilizing High Resolution Ultrasound to Monitor Tumor Onset and Growth in Genetically Engineered Pancreatic Cancer Models

Bu makalede genetiği pankreas kanseri farelerde yüksek çözünürlüklü ultrason kullanımı. Birincil amaç algılama ve endojen pankreas tümörleri değerlendirilmesi için ayrıntılı bir talimat sağlamaktır.

Yüksek çözünürlüklü ultrason monitör tümör başlangıçlı ve büyüme genetiği pankreas kanseri modellerinde kullanmak

The LSL-KrasG12D/+; LSL-Trp53R172H/+; Pdx-1-Cre (KPC) mouse model represents an established and frequently used transgenic model to evaluate novel ...

utilizing-high-resolution-ultrasound-to-monitor-tumor-onset-growth

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Cancer Research

10.7K Görüntüleme.  University Medical Center Goettingen. Bu makalede genetiği pankreas kanseri farelerde yüksek çözünürlüklü ultrason kullanımı. Birincil amaç algılama ve endojen pankreas tümörleri değerlendirilmesi için ayrıntılı bir talimat sağlamaktır.

Video: Utilizing High Resolution Ultrasound to Monitor Tumor Onset and Growth in Genetically Engineered Pancreatic Cancer Models

A Genetically Engineered Mouse Model of Sporadic Colorectal Cancer

Despite the advantages of easy applicability and cost-effectiveness, colorectal cancer mouse models based on tumor cell injection have severe limitations and do not accurately simulate tumor biology and tumor cell dissemination. Genetically engineered mouse models have been introduced to overcome these limitations; however, such models are technically demanding, especially in large organs such as the colon in which only a single tumor is desired.
As a result, an immunocompetent, genetically engineered mouse model of colorectal cancer was developed which develops highly uniform tumors and can be used for tumor biology studies as well as therapeutic trials. Tumor development is initiated by surgical, segmental infection of the distal colon with adeno-cre virus in compound conditionally mutant mice. The tumors can be easily detected and monitored via colonoscopy. We here describe the surgical technique of segmental adeno-cre infection of the colon, the surveillance of the tumor via high-resolution colonoscopy and present the resulting colorectal tumors.

A protocol for the establishment of a genetically engineered mouse model of colorectal cancer by segmental adeno-cre infection and its surveillance via high-resolution colonoscopy is presented.

Sporadik Kolorektal Kanserin Genetik Olarak Geliştirilmiş Fare Modeli

Despite the advantages of easy applicability and cost-effectiveness, colorectal cancer mouse models based on tumor cell injection have severe limitations ...

Kanser Araştırmaları

Radionuclide-fluorescence Reporter Gene Imaging to Track Tumor Progression in Rodent Tumor Models

Metastasis is responsible for most cancer deaths. Despite extensive research, the mechanistic understanding of the complex processes governing metastasis remains incomplete. In vivo models are paramount for metastasis research, but require refinement. Tracking spontaneous metastasis by non-invasive in vivo imaging is now possible, but remains challenging as it requires long-time observation and high sensitivity. We describe a longitudinal combined radionuclide and fluorescence whole-body in vivo imaging approach for tracking tumor progression and spontaneous metastasis. This reporter gene methodology employs the sodium iodide symporter (NIS) fused to a fluorescent protein (FP). Cancer cells are engineered to stably express NIS-FP followed by selection based on fluorescence-activated cell sorting. Corresponding tumor models are established in mice. NIS-FP expressing cancer cells are tracked non-invasively in vivo at the whole-body level by positron emission tomography (PET) using the NIS radiotracer [18F]BF4-. PET is currently the most sensitive in vivo imaging technology available at this scale and enables reliable and absolute quantification. Current methods either rely on large cohorts of animals that are euthanized for metastasis assessment at varying time points, or rely on barely quantifiable 2D imaging. The advantages of the described method are: (i) highly sensitive non-invasive in vivo 3D PET imaging and quantification, (ii) automated PET tracer production, (iii) a significant reduction in required animal numbers due to repeat imaging options, (iv) the acquisition of paired data from subsequent imaging sessions providing better statistical data, and (v) the intrinsic option for ex vivo confirmation of cancer cells in tissues by fluorescence microscopy or cytometry. In this protocol, we describe all steps required for routine NIS-FP-afforded non-invasive in vivo cancer cell tracking using PET/CT and ex vivo confirmation of in vivo results. This protocol has applications beyond cancer research whenever in vivo localization, expansion and long-time monitoring of a cell population is of interest.

We describe a protocol for preclinical in vivo tracking of cancer metastasis. It is based on a radionuclide-fluorescence reporter combining the sodium iodide symporter, detected by non-invasive [18F]tetrafluoroborate-PET, and a fluorescent protein for streamlined ex vivo confirmation. The method is applicable for preclinical in vivo cell tracking beyond tumor biology.

Kemirgen tümör modelleri ilerlemesinde tümör izlemek için Imaging radyonüklid Floresans muhabir gen

Metastasis is responsible for most cancer deaths. Despite extensive research, the mechanistic understanding of the complex processes governing metastasis ...

Patient-derived Orthotopic Xenograft Models for Human Urothelial Cell Carcinoma and Colorectal Cancer Tumor Growth and Spontaneous Metastasis

Cancer patients have poor prognoses when lymph node (LN) involvement is present in both high-grade urothelial cell carcinoma (HG-UCC) of the bladder and colorectal cancer (CRC). More than 50% of patients with muscle-invasive UCC, despite curative therapy for clinically-localized disease, will develop metastases and die within 5 years, and metastatic CRC is a leading cause of cancer-related deaths in the US. Xenograft models that consistently mimic UCC and CRC metastasis seen in patients are needed. This study aims to generate patient-derived orthotopic xenograft (PDOX) models of UCC and CRC for primary tumor growth and spontaneous metastases under the influence of LN stromal cells mimicking the progression of human metastatic diseases for drug screening. Fresh UCC and CRC tumors were obtained from consented patients undergoing resection for HG-UCC and colorectal adenocarcinoma, respectively. Co-inoculated with LN stromal cell (LNSC) analog HK cells, luciferase-tagged UCC cells were intra-vesically (IB) instilled into female non-obese diabetic/severe combined immunodeficiency (NOD/SCID) mice, and CRC cells were intra-rectally (IR) injected into male NOD/SCID mice. Tumor growth and metastasis were monitored weekly using bioluminescence imaging (BLI). Upon sacrifice, primary tumors and mouse organs were harvested, weighed, and formalin-fixed for Hematoxylin and Eosin and immunohistochemistry staining. In our unique PDOX models, xenograft tumors resemble patient pre-implantation tumors. In the presence of HK cells, both models have high tumor implantation rates measured by BLI and tumor weights, 83.3% for UCC and 96.9% for CRC, and high distant organ metastasis rates (33.3% detected liver or lung metastasis for UCC and 53.1% for CRC). In addition, both models have zero mortality from the procedure. We have established unique, reproducible PDOX models for human HG-UCC and CRC, which allow for tumor formation, growth, and metastasis studies. With these models, testing of novel therapeutic drugs can be performed efficiently and in a clinically-mimetic manner.

This protocol describes the generation of patient-derived orthotopic xenograft models by intra-vesically instilling high-grade urothelial cell carcinoma cells or intra-rectally injecting colorectal cancer cells into non-obese diabetic/severe combined immunodeficiency (NOD/SCID) mice for primary tumor growth and spontaneous metastases under the influence of lymph node stromal cells, which mimics the progression of human metastatic diseases.

Insan Üromotorial Hücre Karsinomu ve kolorektal kanser tümörü büyüme ve spontan Metasrik için hasta türevi Ortootopik xenograft modelleri

Cancer patients have poor prognoses when lymph node (LN) involvement is present in both high-grade urothelial cell carcinoma (HG-UCC) of the bladder and ...

In Vivo Inhibition of MicroRNA to Decrease Tumor Growth in Mice

MicroRNAs (miRNAs) are important regulators of gene expression through their ability to destabilize mRNA and inhibit translation of target mRNAs. An ever-increasing number of studies have identified miRNAs as potential biomarkers for cancer diagnosis and prognosis, and also as therapeutic targets, adding an extra dimension to cancer evaluation and treatment. In the context of thyroid cancer, tumorigenesis results not only from mutations in important genes, but also from the overexpression of many miRNAs. Accordingly, the role of miRNAs in the control of thyroid gene expression is evolving as an important mechanism in cancer. Herein, we present a protocol to examine the effects of miRNA-inhibitor delivery as a therapeutic modality in thyroid cancer using human tumor xenograft and orthotopic mouse models. After engineering stable thyroid tumoral cells expressing GFP and luciferase, cells are injected into nude mice to develop tumors, which can be followed by bioluminescence. The in vivo inhibition of a miRNA can reduce tumor growth and upregulate miRNA gene targets. This method can be used to assess the importance of a determined miRNA in vivo, in addition to identifying new therapeutic targets.

This protocol describes xenograft and orthotopic mouse models of human thyroid tumorigenesis as a platform to test microRNA-based inhibitor treatments. This approach is ideal to study the function of non-coding RNAs and their potential as new therapeutic targets.

Farelerde Tümör Büyümesini Azaltmak için MikroRNA'nın Vivo İnhibisyonu

MicroRNAs (miRNAs) are important regulators of gene expression through their ability to destabilize mRNA and inhibit translation of target mRNAs. An ...

Ultrasound-Guided Orthotopic Implantation of Murine Pancreatic Ductal Adenocarcinoma

The recent success of immune checkpoint blockade in melanoma and lung adenocarcinoma has galvanized the field of immuno-oncology as well as revealed the limitations of current treatments, as the majority of patients do not respond to immunotherapy. Development of accurate preclinical models to quickly identify novel and effective therapeutic combinations are critical to address this unmet clinical need. Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDA) is a canonical example of an immune checkpoint blockade resistant tumor with only 2% of patients responding to immunotherapy. The genetically engineered KrasG12D+/-;Trp53R172H+/-;Pdx-1 Cre (KPC) mouse model of PDA recapitulates human disease and is a valuable tool for assessing therapies for immunotherapy resistant in the preclinical setting, but time to tumor onset is highly variable. Surgical orthotopic tumor implantation models of PDA maintain the immunobiological hallmarks of the KPC tissue-specific tumor microenvironment (TME) but require a time-intensive procedure and introduce aberrant inflammation. Here, we use an ultrasound-guided orthotopic tumor implantation model (UG-OTIM) to non-invasively inject KPC-derived PDA cell lines directly into the mouse pancreas. UG-OTIM tumors grow in the endogenous tissue site, faithfully recapitulate histological features of the PDA TME, and reach enrollment-sized tumors for preclinical studies by four weeks after injection with minimal seeding on the peritoneal wall. The UG-OTIM system described here is a rapid and reproducible tumor model that may allow for high throughput analysis of novel therapeutic combinations in the murine PDA TME.

We describe a protocol for the ultrasound guided implantation of murine-derived pancreatic ductal adenocarcinoma cell lines directly into the native tumor site. This approach resulted in pancreatic tumors detectable by ultrasound scanning within 2-4 weeks of injection, and significantly reduced the proportion tumor cell seeding on the peritoneal wall as compared to surgical orthotopic implantation.

Murine Pankreatik Duktal Adenokarsinomun Ultrason Eşliğinde Ortotopik İmplantasyonu

The recent success of immune checkpoint blockade in melanoma and lung adenocarcinoma has galvanized the field of immuno-oncology as well as revealed the ...

Isolation of Proximal Fluids to Investigate the Tumor Microenvironment of Pancreatic Adenocarcinoma

Pancreatic adenocarcinoma (PDAC) is the fourth leading cause of cancer-related death, and soon to become the second. There is an urgent need of variables associated to specific pancreatic pathologies to help preoperative differential diagnosis and patient profiling. Pancreatic juice is a relatively unexplored body fluid, which, due to its close proximity to the tumor site, reflects changes in the surrounding tissue. Here we describe in detail the intraoperative collection procedure. Unfortunately, translating pancreatic juice collection to murine models of PDAC, to perform mechanistic studies, is technically very challenging. Tumor interstitial fluid (TIF) is the extracellular fluid, outside blood and plasma, which bathes tumor and stromal cells. Similarly to pancreatic juice, for its property to collect and concentrate molecules that are found diluted in plasma, TIF can be exploited as an indicator of microenvironmental alterations and as a valuable source of disease-associated biomarkers. Since TIF is not readily accessible, various techniques have been proposed for its isolation. We describe here two simple and technically undemanding methods for its isolation: tissue centrifugation and tissue elution.

Pancreatic juice is a precious source of biomarkers for human pancreatic cancer. We describe here a method for intraoperative collection procedure. To overcome the challenge of adopting this procedure in murine models, we suggest an alternative sample, tumor interstitial fluid, and describe here two protocols for its isolation.

Pankreatik adenokarsinomun tümör mikroçevresini araştırmak için proksimal sıvıların izolasyonu

Pancreatic adenocarcinoma (PDAC) is the fourth leading cause of cancer-related death, and soon to become the second. There is an urgent need of variables ...

A Mouse Model to Investigate the Role of Cancer-Associated Fibroblasts in Tumor Growth

Cancer-associated fibroblasts (CAFs) can play an important role in tumor growth by creating a tumor-promoting microenvironment. Models to study the role of CAFs in the tumor microenvironment can be helpful for understanding the functional importance of fibroblasts, fibroblasts from different tissues, and specific genetic factors in fibroblasts. Mouse models are essential for understanding the contributors to tumor growth and progression in an in vivo context. Here, a protocol in which cancer cells are mixed with fibroblasts and introduced into mice to develop tumors is provided. Tumor sizes over time and final tumor weights are determined and compared among groups. The protocol described can provide more insight into the functional role of CAFs in tumor growth and progression.

A protocol to co-inject cancer cells and fibroblasts and monitor tumor growth over time is provided. This protocol can be used to understand the molecular basis for the role of fibroblasts as regulators of tumor growth.

Kanserle İlişkili Fibroblastların Tümör Büyümesindeki Rolünü Araştırmak İçin Bir Fare Modeli

Cancer-associated fibroblasts (CAFs) can play an important role in tumor growth by creating a tumor-promoting microenvironment. Models to study the role ...

Analysis of Lymph Node Volume by Ultra-High-Frequency Ultrasound Imaging in the Braf/Pten Genetically Engineered Mouse Model of Melanoma

Tyr::CreER+,BrafCA/+,Ptenlox/lox&#160;genetically engineered mice (Braf/Pten mice) are widely used as an in vivo model of metastatic melanoma. Once a primary tumor has been induced by tamoxifen treatment, an increase in metastatic burden is observed within 4-6 weeks after induction. This paper shows how Ultra-High-Frequency UltraSound (UHFUS) imaging can be exploited to monitor the increase in metastatic involvement of the inguinal lymph nodes by measuring the increase in their volume.
The UHFUS system is used to scan anesthetized mice with a UHFUS linear probe (22-55 MHz, axial resolution 40 &#181;m). B-mode images from the inguinal lymph nodes (both left and right sides) are acquired in a short-axis view, positioning the animals in dorsal recumbency. Ultrasound records are acquired using a 44 &#181;m step size on a motorized mechanical arm. Afterward, two-dimensional (2D) B-mode acquisitions are imported into the software platform for ultrasound image post-processing, and inguinal lymph nodes are identified and segmented semi-automatically in the acquired cross-sectional 2D images. Finally, a total reconstruction of the three-dimensional (3D) volume is automatically obtained along with the rendering of the lymph node volume, which is also expressed as an absolute measurement.
This non-invasive in vivo technique is very well tolerated and allows the scheduling of multiple imaging sessions on the same experimental animal over 2 weeks. It is, therefore, ideal to assess the impact of pharmacological treatment on metastatic disease.

Melanoma is a very aggressive disease that quickly spreads to other organs. This protocol describes the application of ultra-high-frequency ultrasound imaging, coupled with 3D rendering, to monitor the volume of the inguinal lymph nodes in the Braf/Pten mouse model of metastatic melanoma.

Braf/Pten Genetiği Mühendisliğiyle Tasarlanmış Melanom Fare Modelinde Ultra Yüksek Frekanslı Ultrason Görüntüleme ile Lenf Düğümü Hacminin Analizi

Tyr::CreER+,BrafCA/+,Ptenlox/lox&#160;genetically engineered mice (Braf/Pten mice) are widely used as an in vivo model of metastatic melanoma. Once a ...

Molecular and Immunologic Techniques in a Genetically Engineered Mouse Model of Gastrointestinal Stromal Tumor

Gastrointestinal stromal tumor (GIST) is the most common human sarcoma and is typically driven by a single mutation in the KIT receptor. Across tumor types, numerous mouse models have been developed in order to investigate the next generation of cancer therapies. However, in GIST, most in vivo studies use xenograft mouse models which have inherent limitations. Here, we describe an immunocompetent, genetically engineered mouse model of gastrointestinal stromal tumor harboring a KitV558&#916;/+ mutation. In this model, mutant KIT, the oncogene responsible for most GISTs, is driven by its endogenous promoter leading to a GIST which mimics the histological appearance and immune infiltrate seen in human GISTs. Furthermore, this model has been used successfully to investigate both targeted molecular and immune therapies. Here, we describe the breeding and maintenance of a KitV558&#916;/+ mouse colony. Additionally, this paper details the treatment and procurement of GIST, draining mesenteric lymph node, and adjacent cecum in KitV558&#916;/+ mice, as well as sample preparation for molecular and immunologic analyses.

The goal of this manuscript is to describe the KitV558&#916;/+&#160;mouse model and techniques for successful dissection and processing of mouse specimens.

Gastrointestinal Stromal Tümörün Genetiği Değiştirilmiş Bir Fare Modelinde Moleküler ve İmmünolojik Teknikler

Gastrointestinal stromal tumor (GIST) is the most common human sarcoma and is typically driven by a single mutation in the KIT receptor. Across tumor ...

Zebrafish Larvae as a Model to Evaluate Potential Radiosensitizers or Protectors

Zebrafish are extensively used in several kinds of research because they are one of the easily maintained vertebrate models and exhibit several features of a unique and convenient model system. As highly proliferative cells are more susceptible to radiation-induced DNA damage, zebrafish embryos are a front-line in vivo model in radiation research. In addition, this model projects the effect of radiation and different drugs within a short time, along with major biological events and associated responses. Several cancer studies have used zebrafish, and this protocol is based on the use of radiation modifiers in the context of radiotherapy and cancer. This method can be readily used to validate the effects of different drugs on irradiated and control (non-irradiated) embryos, thus identifying drugs as radio sensitizing or protective drugs. Although this methodology is used in most drug screening experiments, the details of the experiment and the toxicity assessment with the background of X-ray radiation exposure are limited or only briefly addressed, making it difficult to perform. This protocol addresses this issue and discusses the procedure and toxicity evaluation with a detailed illustration. The procedure describes a simple approach for using zebrafish embryos for radiation studies and radiation-based drug screening with much reliability and reproducibility.

The zebrafish has recently been exploited as a model to validate potential radiation modifiers. The present protocol describes the detailed steps to use zebrafish embryos for radiation-based screening experiments and some observational approaches to evaluate the effect of different treatments and radiation.

Potansiyel Radyosensitizörleri veya Koruyucuları Değerlendirmek için Bir Model Olarak Zebra Balığı Larvaları

Zebrafish are extensively used in several kinds of research because they are one of the easily maintained vertebrate models and exhibit several features ...