이 작품은 Moritz Koch 교수의 기억에 전념합니다.

여기에 제시된 동물 실험은 기관 및 정부 동물 관리 및 사용위원회가 독립적으로 검토 및 승인했으며 실험 동물 학회 연맹 (FELASA) 지침에 따라 실시되었습니다. 모든 가능한 조치는 마취 및 진통제, 또는 필요한 경우 조기 안락사를 비롯한 고통을 최소화하기 위해 취해졌습니다. 1. 외과 적 Adeno-cre 감염을 통한 국소 종양 유도 <ol><li> 수술 용 동물의 준비 참고 : 사실상 모든 조건 적 ( &quot;floxed&quot;) 돌연변이는 여기에 설명 된 방법을 통해 유도 될 수 있습니다. Apc, Kras 또는 Tp53과 같은 결장 직장암과 관련된 유전자에서 돌연변이를 사용하는 것이 좋습니다. 재조합 체의 효율은 절제 할 구조물의 크기에 달려있다. 큰 홍수 염색체 서열은 덜 효율적으로 절제됩니다. 모든 대립 형질의 재조합은 종양에서 PC에 의해 확인되어야한다아르 자형. <ol><li> 대장 암 종양의 발전을 위해서는 CRC의 기본 모델 (괄호 안의 MGI 데이터베이스 번호)에 다음 조건 대립 유전자의 십자가를 사용하십시오. Apc tm2Rak (MGI : 3688435) 16 크라스 tm4Tyj (MGI : 2429948) 17 Tp53 tm2Tyj (MGI : 3039263) 18 </li><li> 형광 기자 대립 유전자가 필요한 경우 ( 예 : 미세 전이를 검출하기 위해), 다음 대립 유전자를 사용하십시오 : Gt (ROSA) 26Sor tm6 (CAG-ZsGreen1) Hze (MGI : 3809522) 19 참고 : 위의 모든 균주는 NCI 마우스 저장소 또는 Jackson Laboratory를 통해 구할 수 있습니다. 아데노 바이러스에 감염되기 전에 남은 모든 분변을 씻어 낼 수 있기 때문에 금식을하지 않아도됩니다. 수술 전 금식은 수술 전 사망률을 높이고 작은 설치류에게 엄청난 스트레스를줍니다. </li><li> 전신 마취시 3 ~ 3.5 vol %의 세보 플루 란을 사용하십시오. t의 손실발가락 핀치 반사는 충분한 마취를 나타냅니다. </li><li> 첫 절개 전에 0.05 mg / kg의 부 프레 노르 핀을 피하 주사하십시오. </li><li> 각막의 건조를 피하기 위해 마취 된 마우스의 눈을 안과 용 연고로가립니다. </li><li> 마우스를 작은 테이블 위에 올려 놓습니다. 비 충격적인 접착 테이프를 사용하여 마우스를 제지하십시오. </li><li> 복부를 전기 면도기 (면도기 크림을 사용할 수도 있음)로 면도하고 알코올 면봉이나 요오드로 소독하십시오. 제조업체가 권장하는 접촉 시간을 사용하십시오. </li><li> 멸균 커튼으로 수술 분야를 감싸줍니다. 참고 : 수술 관련 항생제의 사용은 선택 사항이며 제도적 지침의 적용을받습니다. </li><li> 모든 수술 절차에는 멸균 된 단일 사용 또는 멸균 된 도구를 사용하십시오. </li></ol></li><li> 중간 선 개복술과 결장 노출 <ol><li> 정중선 절개를 만들기 위해 가위 (메스를 사용)를 사용하십시오.(~ 15 mm) 아래쪽 복부에있는 피부. </li><li> 겸자로 복벽 근육을 집어 들어 조심스럽게 가위로 절개하여 복강을 엽니 다. </li><li> 말초 결장을 확인하고, atraumatic 집게 만 만지십시오. 항문 근위부에서 약 15 mm의 섬세한 클램프 ( 예 : 마이크로 세린 혈관 클램프)로 결장을 고정시킵니다. 참고 : 항상 콜론의 취약성에주의하십시오. 천공은 필연적으로 복막염과 패혈증을 초래하고 동물의 안락사를 요구합니다. </li></ol></li><li> 아데노 크리 바이러스에 의한 대장 결장 감염 <ol><li> 유연한 테프론 튜브를 횡행하여 조심스럽게 삽입하고 이전에 항문 가장자리에서 15mm 떨어진 위치에있는 클램프가 내강에 닿을 때까지 조심스럽게 밀어 올립니다. 과도한 힘을 가하면 천공이 발생할 수 있으므로 사용하지 마십시오. </li><li> 30G 캐뉼라로 튜브를 통을 막고, 표준 1mL 주사기를 연결하고 콜로를 씻어 낸다.남은 배설물을 대피시키기 위해 정상 식염수로 씻는다. 이 경우 몇 mL의 식염수가 필요할 수 있습니다. </li><li> 원위부 결장이 비어지면 튜브를 제거하고 신선한 테프론 튜브로 교체 한 다음 위에서 설명한대로 다시 클램프의 먼쪽에 위치시킵니다. </li><li> 근위 클램프에서 3mm 떨어져있는 두 번째 클램프 ( 즉 , 삽입 된 튜브 위, 항문 경계선에서 ~ 12mm)로 결장을 폐쇄하여 3mm 격리 구역이 감염되게하십시오. 참고 : 세그먼트의 원위 폐쇄의 경우 Fogarty 관상 동맥 클립은 클램프의 가지 사이의 관내 튜브에도 불구하고 결장의 긴밀한 폐쇄로 이어지는 고무로되어 있기 때문에 가장 적합하다는 것이 입증되었습니다. </li><li> 조심스럽게 클램핑 콜론 세그먼트에 0.25 % 트립신 - EDTA 50 - 80 μL를 주입하고 10 분 동안 품어 두 번째 주사기 (30G 정맥과 표준 1 ML)를 사용하십시오. 액체가 새어 나오지 않도록 테프론 튜브에 캐 뉼러와 주사기를 부착 한 상태로 두십시오. <li> 원위 클램프를 제거한 다음 트립신 튜브를 제거하십시오. </li><li> 약 500 μL의 정상 식염수로 말초 결장을 플러시하여 남아있는 트립신을 제거하십시오. </li><li> 새로운 테플론 튜브를 삽입하고, 원위 클램프를 제자리에 다시 넣고 50-80 μL의 아데노 바이러스 용액 (인산 완충 식염수 중 10 11 플라크 형성 단위 (PFU) / mL)으로 콜론 부분을 팽창시키고 30 분 동안 배양합니다 도 2a ). 참고 : adeno-cre와의 접촉이 조건부 돌연변이 마우스의 모든 조직에서 종양 발달을 유발할 수 있으므로 바이러스 성 용액을 엎 지르지 마십시오. </li><li> 클램프와 튜브를 제거하십시오. </li></ol></li><li> 복부 폐쇄 및 수술 후 회복 <ol><li> 신속하게 흡수 가능한 6-0으로 복벽을 닫습니다.( 예 , polydioxanone (PDS)). </li><li> 수술 상처 클립으로 피부를 닫으십시오. </li><li> 그것이 마취에서 완전히 회복 때까지 38로 설정 가열 패드에 마우스를 놓습니다. </li><li> 수술 후 12 시간에 0.05 mg / kg buprenorphine의 다른 보루스를 투여하고, 필요하다면 추가로 12 시간마다 부프로 핀 구강을 추가 투여하십시오. </li><li> 종양 성장으로 인한 고통의 징후가 있는지 적어도 매일 1 회 마우스를 모니터링하십시오. </li></ol></li></ol> 2. 대장 내시경 검사 참고 : 사용 된 조건부 돌연변이에 따라 아데노 바이러스 감염은 2 ~ 4 주 이내에 내시경으로 보이는 종양을 유발합니다. 따라서 아데노 바이러스 유도 2 주 후에 첫 번째 수술 후 대장 내시경 검사를 시행하고 2 주마다 반복합니다. 상업적으로 이용 가능한 시스템은 쥐 대장 내시경 검사에 권장됩니다. 20 <ol><li> 대장 내시경 용 동물의 준비 참고 : 금식하지 않아도됩니다 requir에드. 잔존 대변은 원위 결장에서 잘 형성되며 대장 내시경 검사 중에 종양을 넘어 밀려날 수 있으므로 반복되는 금식의 스트레스가 가중되는 과정이 불필요합니다. <ol><li> 전신 마취시 3 ~ 3.5 vol %의 세보 플루 란을 사용하십시오. 발가락 핀치 반사의 손실은 충분한 마취를 나타냅니다. </li><li> 각막의 건조를 피하기 위해 마취 된 쥐의 눈을 안과 용 연고로가립니다. </li><li> 작은 테이블에서 쥐를 앙와위로 세우십시오. </li></ol></li><li> 대장 내시경 검사 <ol><li> 항문을 통해 장관 (직경 1.9mm, 길이 10cm)을 삽입하고 시각 제어하에 공기를 조심스럽게 흘려 결장을 팽창시킵니다. 검사에 필요한 것보다 더 많은 공기를 불어 넣지 마십시오. 참고 : 공기 주입의 경우 대장 내시경 검사 시스템의 방담 용 공기 펌프를 사용할 수 있습니다. 방담 기능이없는 공기 펌프가없는 경우 매우 낮은 압력 설정을 가진 다른 공기 펌프를 사용할 수 있습니다.섬세한 감압 밸브로 공기를 흡입합니다. 이산화탄소 (CO2)는 작은 설치류에서 쉽게 산증을 유발하므로 피해야합니다. </li><li> 말초 결장의 점막 병변이 확인 될 때까지 조심스럽게 범위를 앞으로 밀어주십시오 ( 그림 1A - 1D ). </li><li> 나중에 평가할 수 있도록 내시경 이미지를 저장하십시오. Intraluminal 종양에 대한 내시경 스코어링 시스템은 이전에 설명되었습니다. 20 </li><li> 조심스럽게 스코프를 제거하고 마취로 완전히 회복 될 때까지 38 ° C로 설정된 가열 패드 위에 마우스를 놓습니다. </li></ol></li></ol>

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일반적으로 생성 및 유지가 쉽지만, 세포주 주입에 기반한 고전적인 CRC 마우스 모델은 인위적이며 인간 질병을 완전히 되풀이 할 수 없습니다. 결과적으로 GEMM이 개발되었습니다. 첫 번째 CRC GEMM은 Apc 유전자의 이형 변이 돌연변이를 가지고있는 Apc Min 마우스 였고, 따라서 인간 유전병 인 가족 성 대장 용종증 (FAP)을 모방했다. 그러나 Apc Min 마우스는 콜론에 국한되지 않는 다발성 장선을 항상 동반합니다. 또한 선종 형성 시간과 정확한 위치는 무작위이며 종양은 선종이 진행되기 전에 양성 종양 부하로 사망 할 때 악성 병변으로 발전하는 경우는 드뭅니다. 그러므로 Apc Min 마우스는 산발성 CRC가 아닌 FAP 모델입니다. 다른 모델은 DNA 불일치 복구 유전자에 돌연변이를 나타낸다. 22 , 23 이 중 일부는생쥐는 유전성 위장 암에 대한 우수한 모델이며 산발성 대장 암을 대표하지 않습니다. 근원적 ​​인 유전자 변형과는 별개로, 산발성 및 증후 성 대장 암의 모델을 구분하는 것은 유전 적 병변의 위치입니다. 위에서 언급 한 모든 모델은 결장 전체 또는 심지어 전체 위장관 전체에 걸쳐 구성 적으로 활성 또는 유도 된 돌연변이를 특징으로합니다. 이것은 인간의 산발성 CRC를 대표하지 않는 다발성 선종의 형성을 가져오고, 대장 내시경 검사로는 거의 평가할 수 없으며, 또한 종양이 광범위한 종양 부하에 굴복하기 전에 종양이 발달하기에 충분한 시간을 가지지 않습니다. 따라서 산발성 대장 암의 마우스 모델은 대장 암 발생의 국소 활성화를 포함해야합니다. 여기에 제시된 GEMM에서 발생하는 종양은 외과 적으로 클램핑 된 아데노 크린 감염 세분에 엄격히 국한되어 있습니다결장의. 그 결과 대장 내시경 검사로 쉽게 검출 및 감시 할 수있는 단일 종양이 형성됩니다. 또한 원위부 위치는 장의 막힘을 종양 성장의 후기 합병증으로 만들어 종양이 침습성으로 발전하게하고 유전자형에 따라 동물이 안락사를 필요로하기 전에 전이성 암종을 만듭니다. 분절 크리크 감염의 또 다른 이점은 영향을받지 않는 환경입니다. Apc Min 과 다른 유전성 마우스 모델에서 주변 점막과 간질 세포조차도 종양과 동일한 유전 적 이상을 겪습니다. 여기 제시된 모델의 종양은 정상적인 결장 상피와 간질에서 발생합니다. 이것은 제한없이보다 현실적인 종양 - 숙주 상호 작용 및 분자 연구를 가능하게합니다. 또한, 종양 유도의 시점은이 모델에서 잘 정의되어있다. Apc Min 마우스에서 종양은 두 번째 Apc 대립 유전자가 확증 된 &quot;두 번째 히트 (second hit)&quot;이후에 발생합니다무작위 적 시점에서 잃어버린 경우, 원하는 모든 돌연변이가 여기에 기술 된 모델에서 동시에 활성화되어 매우 초기의 병변이나 연속적인 생검의 결과를 매우 명확하게 정의 할 수 있습니다. 그러나이 모델에는 한계가 있습니다. 다중 대립 유전자를 하나의 모델로 교차시키는 것은 엄청난 시간과 자원을 필요로한다. 또한, 부적절한 유전자형으로 인해 모든 자손이 실험에 사용될 수있는 것은 아닙니다. 절차 자체는 연습이 필요하며 시간이 많이 걸립니다. 충분히 높은 역가 및 많은 양의 아데노 - 크리 바이러스 현탁액의 제조는 비용 - 집중적이다. 따라서이 모델은 다른 모든 CRC 마우스 모델을 대체하기에 적합하지 않으며 GEM 모델에 중점을 둔 실험실로 제한됩니다. 프로토콜 자체는 기술적으로 까다 롭지 만 일부 비 훈련 인력이 적절하게 절차를 수행 할 수 있습니다. adeno-cre i의 중요한 단계nfection은 클램핑 된 장 (clamped bowel) 부분의 팽창 (inflation)입니다. 초과 관내 압력은 천공으로 이어지고, 불충분 한 압력은 성공적인 감염률을 감소시킵니다. 이 단계는 교육이 필요합니다. 말초 결장의 아데노 바이러스 감염 프로토콜은 Hung et al. 전에. 여기에 제시된 프로토콜은 몇 가지 주요 측면에서 앞서 언급 한 프로토콜과 다릅니다. 미숙 한 손에서 자주 장 천공을 일으키기 때문에 adeno-cre incubation 전의 점막의 기계적 마모는 현재의 프로토콜에서 건너 뜁니다. 이는 종양 형성 속도를 감소 시키지만, 바이러스 역가가 증가됨에 따라 저해 될 수 있습니다. 이렇게하면 점막 마모가 없기 때문에 창자 벽에있는 간엽 세포 수가 적어서 adeno-cre에 노출되기 때문에 간엽 종양의 비율을 낮출 수 있습니다. 또한 위에서 언급 한 프로토콜 13 과는 대조적으로설명 된 프로토콜은 수술이나 대장 내시경 검사 전에 하룻밤 금식을 권장하지 않습니다. 대신 대장 내시경이나 대장 내시경 검사의 경우에는 기계적 조작으로 남은 대변을 제거합니다. 이 프로토콜의 개선으로 동물 복지가 획기적으로 향상되었습니다. 밤새 단식은 작은 설치류에 대해 매우 스트레스가 많은 절차이며 쥐의 신진 대사에 강하게 영향을 미치는 것으로 알려져있어 실험 결과에도 영향을줍니다. 24 , 25 밤새 금식의 이러한 원치 않는 결과는 여기 제시된 원고에서 피할 수있다. Hung 등이 제시 한 프로토콜과 프로토콜 간의 또 다른 중요한 차이점은 다음과 같습니다. 클램핑 된 (따라서 감염된) 세그먼트의 길이입니다. 여기에 설명 된 프로토콜은 짧은 길이 (~ 3 mm)를 권장하지만, Hung et al. 원위부 결장 20 mm 감염을 권장합니다. 번호를 줄이기 위해 짧은 세그먼트 길이가 선택되었습니다.재조합 된 음낭의 결과로 종양이 생기게된다. 산발성 CRC 환자의 대다수가 다발성 종양이 아닌 단일 종양으로 진행되기 때문에이 방법은 모델의 임상 적 관련성을 증가시킵니다. 종양 형성 속도는 감염된 결장의 표면 감소에 영향을받지 않는 것 같습니다. 이 기술의 향후 적용에는 결장 점막 내에서 국소 재조합을 필요로하는 모든 프로토콜이 포함됩니다. 암 연구의 대부분의 응용 프로그램에는 조건 종양 유전자가 포함되어 결장 직장 종양이 형성됩니다. 그러나, 결장 점막 내에서 리포터 구조물을 유도하는 것과 같은 모든 다른 적용은 본원에서 제시된 프로토콜로 달성 될 수있다. 결론적으로, 대장 암의 고도로 정교화 된 유전자 조작 마우스 모델과 개발중인 종양의 검출 및 감시를위한 고해상도 대장 내시경 검사의 옵션을 함께 제시하면CRC의 생물학과 치료법을 연구하는 훌륭한 환경입니다.

대장 암 (CRC)은 서구 국가에서 암 관련 사망의 주요 원인 중 하나입니다. 1 초기 병기의 환자의 예후가 양호한 반면 많은 치료 옵션에도 불구하고 많은 예후가 제한되는 후기 단계에서 많은 종양이 진단됩니다. 2 , 3 , 4 , 5 CRC의 현재 마우스 모델의 대다수는 세포주 또는 환자 종양에서 유래 된 종양 세포를 면역 결핍 마우스에 이식하는 것을 기본으로합니다. 6 , 7 , 8 이것은 주사 부위와 주사에 사용 된 종양 세포, 때로는 전이성 종양에 따라 국부적으로 이어집니다. 9 , 10 그러나 이종 이식 모델은 major 제한. 그들은 면역 결핍 마우스에서 확립되어야하며 따라서 종양과 숙주 면역계 사이의 복잡한 상호 작용을 제거해야합니다. 또한, 종양 기질은 숙주 세포로부터 유래되기 때문에, 인간 종양 실질과 마우스 기질 사이의 상호 작용은 결함이있어 질병을 대표하지 못한다. 이러한 결핍은 마우스 세포주를 주입하여 피할 수 있습니다. 그러나, 단지 몇 가지 쥐 CRC 세포주가 이용 가능하며, 대부분의 이용 가능한 인간 CRC 세포주와 유사하게 단일 클론 성 및 고도 변성가이다. 요약하면, 현재 이용 가능한 대부분의 CRC 마우스 모델은 인위적인 질병을 완전히 대표하지 않는 매우 인공적이다. CRC의 유전 공학 마우스 모델 (GEMM)은 대장에서 CRC의 주요 돌연변이 유발을 통해 생성되는 진정한 마우스 종양을 특징으로하기 때문에 이러한 단점을 피할 수 있습니다. 12 , 13 ,이것은 결장 직장 점막에서 cre recombinase에 의한 조건 적 (floxed) germline 돌연변이의 활성화에 의해 달성 될 수있다. 많은 다른 종양 엔티티의 GEMM에서 조직 특이 적 프로모터에 의해 유도 된 생식선 (유도 성) cre 발현이 사용되는 경우, 결장 내에서 양성 종양 부하에 의한 사망을 유발하는 다수의 선종이 생기기 때문에 생식선 크립을 결장에 사용할 수 없다. 아주 어린 나이. 따라서, 여기에 기술 된 모델에서, cre를 발현하는 아데노 바이러스 벡터는 짧은 콜론 절편을 감염 시키는데 사용된다. 이것은 조사자에 의해 정의 된 시점에서 점막의이 부분 내에서 종양 형성을 유도하여 결국 선종이 침윤성 및 전이성 암종으로 진행되게한다. 종양은 순수한 마우스 종양으로 손상되지 않은 미세 환경에서 자라며 종양 - 숙주 상호 작용과 전이성 캐스케이드를 포함한 대장 암 종양 발생의 전체를 시뮬레이션 할 수 있습니다. 이 모델은따라서 암 생물학 및 전임상 치료 시험 연구를위한 매력적인 플랫폼입니다. 유 전적으로 조작 된 마우스 모델의 주요한 단점은 기술적 인 복잡성이다. floxed Apc 대립 유전자를 가진 생쥐에서 직장 아데노 크리 (recten adeno-cre) 관장을 이용한 국소 크립 전달은 이전에 기술되어있다. 그러나이 기술을 사용하면 장 종양의 발생률, 다양성 및 위치가 매우 다양 할 수 있습니다. 따라서 유도되는 부분의 외과 클램핑에 의한 아데노 크리 감염을 제한하는 기술이 개발되었다. 우리는 동물 복지를 개선하고 사망률과 결과 종양의 수를 줄이기 위해이 절차를 수정했습니다. 이 프로토콜을 사용하면 작은 설치류 수술 경험이있는 모든 실험실에서 모델을 재현하고 대장 내시경 검사에 쉽게 액세스 할 수있는 종양을 생산할 수 있어야합니다. 조건부 m에 따라종양 형성에 사용되는 발작, 선종의 전체 스펙트럼, 침윤성 암종 및 전이가 관찰 될 수있다. 종양이 대장 결장에 위치하므로이 모델에서 일련의 내시경 검사가 쉽게 가능합니다.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Reagents / consumables</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s Phosphate Buffered Saline</td>
			<td>Life Technologies GmbH</td>
			<td>14190169</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin-EDTA (0.25%, Phenol-Red)</td>
			<td>Life Technologies GmbH</td>
			<td>25200072</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normal saline 0.9% (E154)</td>
			<td>Serumwerk Bernburg AG</td>
			<td>10013</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aqua ad injectabilia</td>
			<td>B. Braun Melsungen AG</td>
			<td>235144</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ad5CMV-Cre (adenovirus, c = 2E+11 PFU/mL)</td>
			<td>Gene Transfer Vector Core 
			University of Iowa</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 mL, 50 mL centrifuge tubes</td>
			<td>Greiner Bio-One GmbH</td>
			<td>188271/227270</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf tubes 1.5 mL/ 2 mL</td>
			<td>Sarstedt AG &#38; Co.</td>
			<td>72,695,400</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dish PS 100/15 mm (sterile, Nuclon)</td>
			<td>Fisher Scientific GmbH</td>
			<td>10508921/ NUNC150350</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 mL Syringe (without dead volume) - Injekt-F SOLO</td>
			<td>Braun/neoLab</td>
			<td>194291661</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>30G injection needle</td>
			<td>BECTON DICKINSON</td>
			<td>304000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Analgesia / anesthesia</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sevoflurane (Sevoflurane AbbVie)</td>
			<td>AbbVie Germany GmbH &#38; Co. KG</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medical oxygen</td>
			<td>Air Liquide Medical GmbH</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorphine (Temgesic)</td>
			<td>Indivior Eu Ltd.</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bepanthen - ophthalmic ointment</td>
			<td>Bayer Vital GmbH</td>
			<td>10047757</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Table Top Research Anesthesia Machine x/O2 Flush w/ Sevoflurane Vaporizer</td>
			<td>Parkland Scientific</td>
			<td>V3000PS/PK</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cellulose swabs</td>
			<td>Lohmann &#38; Rauscher Deutschland</td>
			<td>13356</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin syringe EMG 1 mL (with 30G cannula)</td>
			<td>B. Braun Melsungen AG</td>
			<td>9161627S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine Bore Tubing (bore: 0.28 mm/ diameter: 0.61mm)</td>
			<td>Smiths Medical Deutschland</td>
			<td>800/100/100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro-Adson Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11018-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iris Scissor - ToughCut</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14058-11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Olsen-Hegar Needle Holder</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>12002-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AutoClip Kit</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>12020-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PDS Z1012H 6/0 C1 (surgical suture)</td>
			<td>Johnson &#38; Johnson Medical GmbH</td>
			<td>Z1012H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Curved Micro Serrefine Vascular Clamp</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>18055-05</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fogarty Spring Clips</td>
			<td>Edwards</td>
			<td>CDSAFE 6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hot Plate 062</td>
			<td>Labotect</td>
			<td>13854</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isis - Hair shaver</td>
			<td>Aesculap - Braun</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Colonoscopy</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cold Light Fountain XENON 175 SCB</td>
			<td>Karl Storz</td>
			<td>20132101-1</td>
			<td>Karl Storz Coloview System Mainz</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fiber Optic Light Cable</td>
			<td>Karl Storz</td>
			<td>69495NL</td>
			<td>Karl Storz Coloview System Mainz</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TRICAM Three-Chip Camera Head</td>
			<td>Karl Storz</td>
			<td>20221030</td>
			<td>Karl Storz Coloview System Mainz</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TRICAM SLII Camera Control Unit</td>
			<td>Karl Storz</td>
			<td>20223011-1</td>
			<td>Karl Storz Coloview System Mainz</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15&#34; Flat Screen Monitor EndoVue</td>
			<td>Karl Storz</td>
			<td>9415NN</td>
			<td>Karl Storz Coloview System Mainz</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HOPKINS Straight Forward Telescope 
			diameter 1.9 mm; length 10 cm 
			autoclavable 
			fiber optic light transmission incorporated</td>
			<td>Karl Storz</td>
			<td>64301AA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Protection and Examination Sheath</td>
			<td>Karl Storz</td>
			<td>61029C</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a genetically engineered mouse model of sporadic colorectal cancer

쉽게 적용 할 수 있고 비용 효과가 있다는 장점에도 불구하고, 종양 세포 주입에 근거한 대장 암 마우스 모델은 심각한 한계가 있으며 종양 생물학 및 종양 세포 보급을 정확하게 시뮬레이트하지 못합니다. 이러한 제한을 극복하기 위해 유전 공학 마우스 모델이 도입되었습니다. 그러나 이러한 모델은 기술적으로 까다 롭습니다. 특히 단일 종양 만 원하는 결장과 같은 대형 장기에서 특히 그렇습니다. 결과적으로 고도로 균일 한 종양을 발달시키고 종양 생물학 연구 및 치료 임상 시험에 사용할 수있는 면역 능력이있는 유전자 조작 마우스 결장 직장암 모델이 개발되었습니다. 종양 발달은 화합물 조건부 돌연변이 마우스에서 아데노 크립 바이러스로 원위 결장의 외과 적, 분절성 감염에 의해 개시된다. 종양은 대장 내시경 검사를 통해 쉽게 감지하고 모니터링 할 수 있습니다. 우리는 여기에 대한 세그먼트 adeno - cre 감염의 수술 기법을 설명콜론, 고해상도 대장 내시경 검사 를 통한 종양 감시 및 결과 대장 암 종양 존재.

적절하게 수행되면,&gt; 85 %의 동물이 종양이 발생합니다. 여기에 제시된 수술 절차의 사망률은 &lt;5 %이며, 대장 내시경 검사의 사망률은 사실상 존재하지 않습니다. 대다수의 생쥐에서 단일 병변이 감지됩니다. 약 30 %에서 종양 유도 후 2 ~ 3 주 이내에 보통 단일 종양에 융합되는 2 ~ 3 개의 작은 선종이 검출 될 수 있습니다. 결과 종양의 표현형 및 생물학적 거동은 동물의 조건 적 돌연변이에 크게 의존합니다. apc의 국소적인 cre-mediated 녹아웃은 종양 형성을 유도하기에 충분하고 처음에는 adenovirus에 감염되어 2 ~ 4 주 후에 발견 될 수 있고 12 ~ 16 주 이내에 침윤성 선암으로 진행되는 adenoma로 이어진다. 이 과정은 조건 적 발암 성 Kras 돌연변이 (Kras G12D)를 추가함으로써 가속화 될 수 있으며, 결과 종양은 침습성선암. 발암 성 Tp53 R172H가 첨가되면 종양은 침습성 및 전이성 암종으로 빠르게 진행됩니다. 생존은 종양의 유전자형에 크게 의존한다. 중간 생존율은 종양 유도 후 약 80 - 200 일입니다. 대다수의 경우 사망 원인은 종양 성장에 따른 장의 장 폐쇄이다. 종양은 동물에 큰 스트레스없이 대장 내시경 검사 ( 그림 1 )를 통해 쉽고 반복적으로 모니터링 할 수 있습니다. 질병 발현은 인간 CRC와 매우 유사합니다. 동물은 선종과 궁극적으로 말초 결장의 선암을 발생시킵니다 ( 그림 2B, 2C, 2F ). 생쥐의 조건 적 유전자형에 따라, 종양도 간 ( 그림 2D ) 간 ( 그림 2E )과 희귀<html> 폐 (not shown). Cre 기자 대립 유전자 ( 예 : ZSGreen 19 )를 사용하면 모든 종양 발현을 쉽게 확인할 수 있습니다. ZSGreen 기자 대립 유전자는 일광에서 충분히 밝게 보이는 형광 단백질 발현을 특징으로합니다 ( 그림 1B , 그림 2C ). 조직 학적으로 발전하는 종양의 95 %가 선암입니다. 종양의 약 5 %는 실수로 adeno-cre에 감염된 간질 세포에서 발생하는 것으로서, 섬유 육종이나 평활근 육종과 같은 간엽 기원이있다. 선암의 조직 형태학은 비 침습성 선종에서 주변 구조물에 침습하는 선암에 이르는 전체 스펙트럼을 특징으로하는 인간 CRC와 매우 유사합니다 ( 그림 3A - 3C ). <html> 파일 / ftp_upload / 55952 / 55952fig1.jpg &quot;/&gt; 그림 1. Colorectal 종양의 Colonoscopic 이미지 (대괄호에 주어진 동물의 조건부 대립). A. 정상 원위 결장. B. 아데노 크리 피 감염 2 주 후 조기 선종. 이 마우스에서 GFP 기자 allele로 인해 녹색 색상을 참고하십시오. ( Apc tm2Rak , Kras tm4Tyj , Gt (ROSA) 26Sor tm6 (CAG-ZsGreen1) Hze ). C. 후기 선종 ( Apc tm2Rak , Kras tm4Tyj ). Colorectal adenocarcinoma ( Colcctal adenocarcinoma) (대장 내시경 영상 획득 후 병리학 적으로 진단 됨 , Apc tm2Rak , Kras tm4Tyj , Tp53 tm2Tyj ). <a href="https://ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/55952/55952fig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a> 2.jpg &quot;/&gt; 그림 2. A. Intraoperative Situs . 아래쪽에 크고 고무로 된 Fogarty 클립과 adeno-cre 주입 (빨간색 화살표)을 위해 횡 방향으로 삽입 된 튜브를 확인하십시오. B. adeno-cre 감염 후 8 주째에 연속 대장의 막힌 대장 암 (백색 화살표) ( Apc tm2Rak , Kras tm4Tyj , Tp53 tm2Tyj ). C. Adeno -cre 감염 10 주 후 대장 암 (백색 화살표) ( Apc tm2Rak , Kras tm4Tyj , Gt (ROSA) 26Sor tm6 (CAG-ZsGreen1) Hze ). 이 마우스는 녹색 형광 단백질 (GFP) 리포터 유전자 때문에 녹색을 띄게됩니다. D. GEMM ( Apc tm2Rak , Kras tm4Tyj , Tp53 tm2Tyj )에서 복막 암종 (검정색 화살표). 간과 내장이 제거되어 신장과 횡경막이 노출됩니다. E. adeno-cre를 투여 한 지 12 주 후 GEMM에서의 총 간 전이( Apc tm2Rak , Kras tm4Tyj ). 도 2C에 묘사 된 동물로부터 제거한 후 종양을 갖는 결장. <a href="https://ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/55952/55952fig2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a> <img alt="그림 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55952/55952fig3.jpg" /> 그림 3. GEMM에서 대장 암 종양의 Hematoxylin / Eosin (H / E) 염색 절편. A. 점막, 점막하 및 근막 점막의 침윤으로 정상 점막에서 선암으로의 이행 영역 ( Apc tm2Rak , Kras tm4Tyj ). B. 정상적인 결장 점막에서 침습성 선암으로의 이행 영역 ( Apc tm2Rak , Kras tm4Tyj ). C. 주변 조직의 침윤을 동반 한 고급 선암 (Apc tm2Rak, Kras tm4Tyj , Tp53 tm2Tyj ). <a href="https://ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/55952/55952fig3large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>

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A Genetically Engineered Mouse Model of Sporadic Colorectal Cancer

산발성 대장 암의 유 전적으로 조작 된 마우스 모델

분절성 아데노 크리 (adeno-cre) 감염 및 고해상도 대장 내시경 검사 를 통한 대장 암의 유 전적으로 조작 된 마우스 모델을 확립하기위한 프로토콜이 제시됩니다.

Despite the advantages of easy applicability and cost-effectiveness, colorectal cancer mouse models based on tumor cell injection have severe limitations ...

a-genetically-engineered-mouse-model-of-sporadic-colorectal-cancer

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Cancer Research

9.4K 조회수.  Technische Universität Dresden.  분절성 아데노 크리 (adeno-cre) 감염 및 고해상도 대장 내시경 검사 를 통한 대장 암의 유 전적으로 조작 된 마우스 모델을 확립하기위한 프로토콜이 제시됩니다. 

비디오: A Genetically Engineered Mouse Model of Sporadic Colorectal Cancer

Fluorescent Orthotopic Mouse Model of Pancreatic Cancer

Pancreatic cancer remains one of the cancers for which survival has not improved substantially in the last few decades. Only 7% of diagnosed patients will survive longer than five years. In order to understand and mimic the microenvironment of pancreatic tumors, we utilized a murine orthotopic model of pancreatic cancer that allows non-invasive imaging of tumor progression in real time. Pancreatic cancer cells expressing green fluorescent protein (PANC-1 GFP) were suspended in basement membrane matrix, high concentration, (e.g., Matrigel HC) with serum-free media and then injected into the tail of the pancreas via laparotomy. The cell suspension in the high concentration basement membrane matrix becomes a gel-like substance once it reaches room temperature; therefore, it gels when it comes in contact with the pancreas, creating a seal at the injection site and preventing any cell leakage. Tumor growth and metastasis to other organs are monitored in live animals by using fluorescence. It is critical to use the appropriate filters for excitation and emission of GFP. The steps for the orthotopic implantation are detailed in this article so researchers can easily replicate the procedure in nude mice. The main steps of this protocol are preparation of the cell suspension, surgical implantation, and whole body fluorescent in vivo imaging. This orthotopic model is designed to investigate the efficacy of novel therapeutics on primary and metastatic tumors.

A procedure to implant green fluorescent protein-expressing pancreatic cancer cells (PANC-1 GFP) orthotopically into the pancreas of Balb-c Ola Hsd-Fox1nu mice to assess tumor progression and metastasis is presented here.

췌장암의 형광 동소 이식 마우스 모델

Pancreatic cancer remains one of the cancers for which survival has not improved substantially in the last few decades. Only 7% of diagnosed patients will ...

연구

암 연구학

A Mouse Model of Fatigue Induced by Peripheral Irradiation

Cancer-related fatigue (CRF) is a distressing and costly condition that often affects patients receiving cancer treatments, including radiation therapy. Here we describe a method using targeted peripheral irradiation to induce fatigue-like behavior in mice. With appropriate shielding, the irradiation targets the lower abdominal/pelvic region of the mouse, sparing the brain, in an effort to model radiation treatment received by individuals with pelvic cancers. We deliver an irradiation dose that is sufficient to induce fatigue-like behavior in mice, measured by voluntary wheel-running activity (VWRA), without causing obvious morbidity. Since wheel running is a normal, voluntary behavior in mice, its use should have little confounding effect on other behavioral tests or biological measures. Hence, wheel running can be used as a feasible outcome measure in understanding the behavioral and biological correlates of fatigue. CRF is a complex condition with frequent comorbidities, and likely has causes related both to cancer and its various treatments. The methods described in this paper are useful for investigating radiation-induced changes that contribute to the development of CRF and, more generally, to explore the biological networks that can explain the development and persistence of a peripherally-triggered but centrally-driven behavior like fatigue.

We describe a method using targeted peripheral irradiation to induce fatigue-like behavior in mice. The selected non-lethal irradiation dose leads to a week-long reduction in voluntary wheel-running activity.

주변 방사선 조사에 의해 유도 된 피로의 마우스 모델

Cancer-related fatigue (CRF) is a distressing and costly condition that often affects patients receiving cancer treatments, including radiation therapy. ...

Isolation of Circulating Tumor Cells in an Orthotopic Mouse Model of Colorectal Cancer

Despite the advantages of easy applicability and cost-effectiveness, subcutaneous mouse models have severe limitations and do not accurately simulate tumor biology and tumor cell dissemination. Orthotopic mouse models have been introduced to overcome these limitations; however, such models are technically demanding, especially in hollow organs such as the large bowel. In order to produce uniform tumors which reliably grow and metastasize, standardized techniques of tumor cell preparation and injection are critical. 
We have developed an orthotopic mouse model of colorectal cancer (CRC) which develops highly uniform tumors and can be used for tumor biology studies as well as therapeutic trials. Tumor cells from either primary tumors, 2-dimensional (2D) cell lines or 3-dimensional (3D) organoids are injected into the cecum and, depending on the metastatic potential of the injected tumor cells, form highly metastatic tumors. In addition, CTCs can be found regularly. We here describe the technique of tumor cell preparation from both 2D cell lines and 3D organoids as well as primary tumor tissue, the surgical and injection techniques as well as the isolation of CTCs from the tumor-bearing mice, and present tips for troubleshooting.

We describe the establishment of orthotopic colorectal tumors via injection of tumor cells or organoids into the cecum of mice and the subsequent isolation of circulating tumor cells (CTCs) from this model.

대장 암 정위 마우스 모델에서의 순환 종양 세포의 분리

Despite the advantages of easy applicability and cost-effectiveness, subcutaneous mouse models have severe limitations and do not accurately simulate ...

Utilizing High Resolution Ultrasound to Monitor Tumor Onset and Growth in Genetically Engineered Pancreatic Cancer Models

The LSL-KrasG12D/+; LSL-Trp53R172H/+; Pdx-1-Cre (KPC) mouse model represents an established and frequently used transgenic model to evaluate novel therapies in pancreatic cancer. Tumor onset is variable in the KPC model between 8 weeks and several months. Therefore, non-invasive imaging tools are required to screen for tumor onset and monitor for response to treatment. To address this issue, different approaches have emerged over the last years. High resolution ultrasound has major advantages such as non-invasiveness, fast session times and a high image resolution without radiation exposure. However, ultrasound in mice is not trivial and sufficient anatomical knowledge and practical skills are required to successfully perform high resolution ultrasound in preclinical pancreatic cancer models. With the following article, a detailed hands-on guide for abdominal ultrasound in murine models with a particular focus on endogenous pancreatic cancer models is presented. Furthermore, a summary of common mistakes and how to avoid them is provided.

This article describes the utilization of high-resolution ultrasound in genetically engineered pancreatic cancer mice. The primary aim is to provide a detailed instruction for detection and evaluation of endogenous pancreatic tumors.

고해상도 초음파 모니터 종양 발병 및 성장 췌장암 유전자 조작된 모델에서을 활용 하 여

The LSL-KrasG12D/+; LSL-Trp53R172H/+; Pdx-1-Cre (KPC) mouse model represents an established and frequently used transgenic model to evaluate novel ...

In Vitro Establishment of a Genetically Engineered Murine Head and Neck Cancer Cell Line using an Adeno-Associated Virus-Cas9 System

The use of primary normal epithelial cells makes it possible to reproducibly induce genomic alterations required for cellular transformation by introducing specific mutations in oncogenes and tumor suppressor genes, using clustered regulatory interspaced short palindromic repeat (CRISPR)-based genome editing technology in mice. This technology allows us to accurately mimic the genetic changes that occur in human cancers using mice. By genetically transforming murine primary cells, we can better study cancer development, progression, treatment, and diagnosis. In this study, we used Cre-inducible Cas9 mouse tongue epithelial cells to enable genome editing using adeno-associated virus (AAV) in vitro. Specifically, by altering KRAS, p53, and APC in normal tongue epithelial cells, we generated a murine head and neck cancer (HNC) cell line in vitro,which is tumorigenic in syngeneic mice. The method presented here describes in detail how to generate HNC cell lines with specific genomic alterations and explains their suitability for predicting tumor progression in syngeneic mice. We envision that this promising method will be informative and useful to study tumor biology and therapy of HNC.

Development of murine models with specific genes mutated in head and neck cancer patients is required for understanding of neoplasia. Here, we present a protocol for in vitro transformation of primary murine tongue cells using an adeno-associated virus-Cas9 system to generate murine HNC cell lines with specific genomic alterations.

아데노 관련 바이러스-Cas9 시스템을 사용하여 유전자 조작 된 뮤린 머리와 목 암 세포라인의 시험관 내 설립

The use of primary normal epithelial cells makes it possible to reproducibly induce genomic alterations required for cellular transformation by ...

Establishing a Competing Risk Regression Nomogram Model for Survival Data

The Kaplan&#8211;Meier method and Cox proportional hazards regression model are the most common analyses in the survival framework. These are relatively easy to apply and interpret and can be depicted visually. However, when competing events (e.g., cardiovascular and cerebrovascular accidents, treatment-related deaths, traffic accidents) are present, the standard survival methods should be applied with caution, and real-world data cannot be correctly interpreted. It may be desirable to distinguish different kinds of events that may lead to the failure and treat them differently in the analysis. Here, the methods focus on using the competing regression model to identify significant prognostic factors or risk factors when competing events are present. Additionally, nomograms based on a proportional hazard regression model and a competing regression model are established to help clinicians make individual assessments and risk stratifications in order to explain the impact of controversial factors on prognosis.

Presented here is a protocol to build nomograms based on the Cox proportional hazards regression model and competing risk regression model. The competing method is a more rational method to apply when competing events are present in the survival analysis.

The Kaplan&#8211;Meier method and Cox proportional hazards regression model are the most common analyses in the survival framework. These are relatively ...

Analysis of Lymph Node Volume by Ultra-High-Frequency Ultrasound Imaging in the Braf/Pten Genetically Engineered Mouse Model of Melanoma

Tyr::CreER+,BrafCA/+,Ptenlox/lox&#160;genetically engineered mice (Braf/Pten mice) are widely used as an in vivo model of metastatic melanoma. Once a primary tumor has been induced by tamoxifen treatment, an increase in metastatic burden is observed within 4-6 weeks after induction. This paper shows how Ultra-High-Frequency UltraSound (UHFUS) imaging can be exploited to monitor the increase in metastatic involvement of the inguinal lymph nodes by measuring the increase in their volume.
The UHFUS system is used to scan anesthetized mice with a UHFUS linear probe (22-55 MHz, axial resolution 40 &#181;m). B-mode images from the inguinal lymph nodes (both left and right sides) are acquired in a short-axis view, positioning the animals in dorsal recumbency. Ultrasound records are acquired using a 44 &#181;m step size on a motorized mechanical arm. Afterward, two-dimensional (2D) B-mode acquisitions are imported into the software platform for ultrasound image post-processing, and inguinal lymph nodes are identified and segmented semi-automatically in the acquired cross-sectional 2D images. Finally, a total reconstruction of the three-dimensional (3D) volume is automatically obtained along with the rendering of the lymph node volume, which is also expressed as an absolute measurement.
This non-invasive in vivo technique is very well tolerated and allows the scheduling of multiple imaging sessions on the same experimental animal over 2 weeks. It is, therefore, ideal to assess the impact of pharmacological treatment on metastatic disease.

Melanoma is a very aggressive disease that quickly spreads to other organs. This protocol describes the application of ultra-high-frequency ultrasound imaging, coupled with 3D rendering, to monitor the volume of the inguinal lymph nodes in the Braf/Pten mouse model of metastatic melanoma.

흑색종의 Braf/Pten 유전자 조작 마우스 모델에서 초고주파 초음파 이미징에 의한 림프절 부피 분석

Tyr::CreER+,BrafCA/+,Ptenlox/lox&#160;genetically engineered mice (Braf/Pten mice) are widely used as an in vivo model of metastatic melanoma. Once a ...

Portal Vein Injection of Colorectal Cancer Organoids to Study the Liver Metastasis Stroma

Hepatic metastasis of colorectal cancer (CRC) is a leading cause of cancer-related death. Cancer-associated fibroblasts (CAFs), a major component of the tumor microenvironment, play a crucial role in metastatic CRC progression and predict poor patient prognosis. However, there is a lack of satisfactory mouse models to study the crosstalk between metastatic cancer cells and CAFs. Here, we present a method to investigate how liver metastasis progression is regulated by the metastatic niche and possibly could be restrained by stroma-directed therapy. Portal vein injection of CRC organoids generated a desmoplastic reaction, which faithfully recapitulated the fibroblast-rich histology of human CRC liver metastases. This model was tissue-specific with a higher tumor burden in the liver when compared to an intra-splenic injection model, simplifying mouse survival analyses. By injecting luciferase-expressing tumor organoids, tumor growth kinetics could be monitored by in vivo imaging. Moreover, this preclinical model provides a useful platform to assess the efficacy of therapeutics targeting the tumor mesenchyme. We describe methods to examine whether adeno-associated virus-mediated delivery of a tumor-inhibiting stromal gene to hepatocytes could remodel the tumor microenvironment and improve mouse survival. This approach enables the development and assessment of novel therapeutic strategies to inhibit hepatic metastasis of CRC.

Portal vein injection of colorectal cancer (CRC) organoids generates stroma-rich liver metastasis. This mouse model of CRC hepatic metastasis represents a useful tool to study tumor-stroma interactions and develop novel stroma-directed therapeutics such as adeno-associated virus-mediated gene therapies.

간 전이 스트로마를 연구하기 위해 대장암 오가노이드의 포털 정맥 주사

Hepatic metastasis of colorectal cancer (CRC) is a leading cause of cancer-related death. Cancer-associated fibroblasts (CAFs), a major component of the ...

Molecular and Immunologic Techniques in a Genetically Engineered Mouse Model of Gastrointestinal Stromal Tumor

Gastrointestinal stromal tumor (GIST) is the most common human sarcoma and is typically driven by a single mutation in the KIT receptor. Across tumor types, numerous mouse models have been developed in order to investigate the next generation of cancer therapies. However, in GIST, most in vivo studies use xenograft mouse models which have inherent limitations. Here, we describe an immunocompetent, genetically engineered mouse model of gastrointestinal stromal tumor harboring a KitV558&#916;/+ mutation. In this model, mutant KIT, the oncogene responsible for most GISTs, is driven by its endogenous promoter leading to a GIST which mimics the histological appearance and immune infiltrate seen in human GISTs. Furthermore, this model has been used successfully to investigate both targeted molecular and immune therapies. Here, we describe the breeding and maintenance of a KitV558&#916;/+ mouse colony. Additionally, this paper details the treatment and procurement of GIST, draining mesenteric lymph node, and adjacent cecum in KitV558&#916;/+ mice, as well as sample preparation for molecular and immunologic analyses.

The goal of this manuscript is to describe the KitV558&#916;/+&#160;mouse model and techniques for successful dissection and processing of mouse specimens.

위장 기질 종양의 유전자 조작 마우스 모델의 분자 및 면역 학적 기술

Gastrointestinal stromal tumor (GIST) is the most common human sarcoma and is typically driven by a single mutation in the KIT receptor. Across tumor ...

An R-Based Landscape Validation of a Competing Risk Model

The Cox proportional hazard model is widely applied for survival analyses in clinical settings, but it is not able to cope with multiple survival outcomes. Different from the traditional Cox proportional hazard model, competing risk models consider the presence of competing events and their combination with a nomogram, a graphical calculating device, which is a useful tool for clinicians to conduct a precise prognostic prediction. In this study, we report a method for establishing the competing risk nomogram, that is, the evaluation of its discrimination (i.e., concordance index and area under the curve) and calibration (i.e., calibration curves) abilities, as well as the net benefit (i.e., decision curve analysis). In addition, internal validation using bootstrap resamples of the original dataset and external validation using an external dataset of the established competing risk nomogram were also performed to demonstrate its extrapolation ability. The competing risk nomogram should serve as a useful tool for clinicians to predict prognosis with the consideration of competing risks.

The present protocol describes codes in R for evaluating the discrimination and calibration abilities of a competing risk model, as well as codes for the internal and external validation of it.