우리는 친절 우수한 기술 지원 및 지원 사빈 Reckinger 감사합니다.

1. 준비 <ol><li> 시료 채취 주 : 교반기 방법은 하나 또는 풀링 근육 샘플을 사용할 수있다. <ol><li> 적절한 취향 사이트로부터 적당량 (9)을 채취. 국가의 요구 사항 또는 ICT, OIE 또는 ISO의 권고 사항을 참조하십시오. <ol><li> 유럽 ​​연합 (EU)의 경우, 예를 들어, 돼지의 힘찬 부분으로의 전환에 다이어프램 기둥에서 1g의 샘플을 채취. 모든 근육 샘플 모든 지방과 근막이 없는지 확인합니다. </li></ol></li><li> 혀가 테스트되는 경우, 테스트 이전에 표층 제거. </li><li> 샘플을 냉동하는 경우 가장 선모충의 유충이 내성 동결과 죽음 이후 풀다하지 않는 한,주의, 소화에 덜 내성 및 감소 분석 감도의 결과로, 컨테이너 벽에 집착하는 경향이있다. 참고 : 냉동 경우, 리터에서 표본의 크기를 두 배로동쪽으로는 침전 시간 (아래 참조) 증가. </li></ol></li><li> 분해 액의 제조 <ol><li> 3 L의 유리 비커에 48 °의 C - 46로 예열 수돗물의 2 L에 25 % 염산 (16 ± 0.5 mL의)를 추가합니다. 불완전 분해의 온도 결과에 너무 낮다; 온도가 너무 높은 펩신의 효소 속성을 비활성화합니다. </li><li> 비커에 교반 봉을 놓고 예열 접시에 용액을 교반 (46-48 °에 C를). </li><li> (10,000 NF, 1 : 12,500 BP, 2000 FIP 1) 산성 용액에 펩신의 10 ± 0.2 g을 추가합니다. 참고 : 펩신의 품질은 가장 중요하고 효소 활성이 생산자에 의해 인증을 받아야이다. 실험실 안전을 위해 및 펩신 활성을 유지하기 위해 분해 액 성분의 첨가 순서에 부착되어야한다. </li></ol></li><li> 근육 샘플 준비 <ol><li> 믹서 나 분쇄기에 근육 샘플 100g까지 들어온다. BLEN 용이하게하기 위해땡은 샘플을 2 mL의 물을 예열 추가하고 2 최대 속도로 혼합 - 3 초. </li><li> 제 블렌딩 전에 믹서를 열고 바닥 반복 블렌딩 블렌딩 그릇 에지 가장자리의 상단에있는 근육 샘플 옮긴다. 고기의 눈에 보이는 조각이 남아 있지 않을 때까지 3 초 - 2 버스트 혼합을 계속합니다. 참고 : 너무 작은 혼합이 불완전한 소화 될 수 있습니다, 너무 많이 혼합이 샘플 6에서 선모충의 유충 존재를 손상시킬 수있다. </li></ol></li></ol> 2. 절차 <ol><li> 근육 샘플 소화 <ol><li> 실린더로 소화 유체의 1 L를 전송합니다. 비커에 다진 고기를 전송하고 숟가락 또는 포크 소화 유체에 보급. 철저 3 L 비커로 예열 소화 액 500 mL로 믹서 뚜껑, 블레이드 및 믹서 그릇을 씻어. 참고 : 불완전한 세척은 SENS의 손실이 발생할 수 있습니다itivity. </li><li> 알루미늄 호일로 비커를 덮고 (44)의 일정한 온도 유지 - 46 °의 C 및 온도계를 모니터링 할 수 있습니다. </li><li> 고기 입자가 사라질 때까지 30 분 튀는없이 깊은 소용돌이를 생성하는 소화 액체를 저어. 시험 고기 (야생 동물의 고기 등)의 종류에 따라, 60 분의 최대까지 소화 시간을 증가시킨다. </li></ol></li><li> 여과 및 소화 유체의 침강 <ol><li> 소화 조직의 양을 결정하기 위해 0으로 스케일을 조정 사용 전에 자체 무게 및 중량을 참고. 체는 깨끗하고 침강 깔때기에 도달하는 선모충의 유충을 방해 할 수있는 조직 입자의 결여해야한다. 분리 깔때기 수직 수평되어 있는지 확인합니다. </li><li> 소화 후, 조심스럽게 분리 된 유리 깔때기에 180 ㎛의 체를 분해 액을 붓는다. 분리 된 유리 깔때기의 폭 ㄴ 안된다전자 길이보다 큰 55 %는 좋은 유충 침강을 허용합니다. 어떤 오버 플로우를 방지하기 위해주의하십시오. </li><li> 감도의 손실을 방지하기 위해 철저하게 유리 비커와 스퀴즈 세척 병 수돗물의 약 200 mL를 체를 씻어 침강 유리 깔때기로 헹굼 물을 전송합니다. 조심스럽게 3 L 비커의 가장자리를 씻어주의하십시오. 체를 들어 올리고 철저하게 자체에서 영역을 씻어. </li></ol></li><li> 소화 조직 량의 결정 주 : 상기 방법의 실행에서의 오류로 인해, 근육 조직이 잘 근막과 소화되어 결합 조직으로, 체 상에 남아있을 수있다. 소화 조직의 양은 제 10 분간 침강 단계 (250 참조) 동안 결정된다. 잔류 물이 소화되지 않은 조직의 결정 무게에 영향을 미칠 수 있기 때문에 이것은 자체 건조하는 약 30 분을 할 수 있습니다. <ol><li> 규모에 종이 타월을 배치하고, undiges으로 자체 무게테드 조직. </li><li> 소화되지 않은 조직으로 자체 중량에서 여과하기 전에 자체 무게를 뺍니다. 시작 샘플 중량의 5 % 이하가 자체 (즉, 5g / 100g 원료)에 남아있는 경우, 분해 과정은 양호한 것으로 간주된다. </li><li> 소화 조직의 양이 5 %를 초과하는 경우, 새로운 근육 시료를 사용하여 시험을 반복한다. 나머지 조직은 주로 소화 근조직 이루어지는 신선한 샘플을 사용할 수없는 경우, 다시 소화 남아 다이제스트 원래 샘플에 부가 조사한다. </li></ol></li><li> 소화 유체의 침전 <ol><li> 30 분 동안 분별 깔대기에서 여과 소화 유체를 유지한다. 그대로두면 선모충의 유충은 깔때기의 바닥에 정착됩니다. </li><li> 냉동 된 샘플을 사용하는 경우, 60 분간 최대 침강 시간을 증가시킨다. </li><li> 침전이 완료되면 완전히 콕을 열고분액 깔때기의 신속 적어도 40 mL를 소화 유체의리스 (근육 샘플 이전에 냉동 있었다면 80 mL)을 메스 실린더로 도망. </li><li> 먼저, 실린더에 유체의 절반을 허용하고 완전히 통과 분해 액 10 ㎖를 허용하도록 반대 방향 스톱 콕을 열어. 마지막으로, 또 다른 10 ㎖에 대한 반대 방향 스톱 콕을 열어. 이 절차는 선모충의 유충이 꼭지에 갇혀되지 않도록합니다. 주 : 충분한 속도 감도를 감소 분액 깔대기에 남아있는 유충을 피하기 위해 필요하다. </li></ol></li><li> 실린더 내 소화 유체 침강 <ol><li> 유충은 침전 수 있도록 10 분 동안 실린더 내의 퇴적물을 남겨주세요. 10 ML의 침전물을 방해하지 않고 피펫으로 흡입하여 30 mL의 상층 액을 제거합니다. </li><li> 시료의 조직 섬유의 양을 줄이기 위해, 침전물을 30 mL의 수돗물을 추가하고 다른 10m 떠날액체가 분명하다 때까지. 반복합니다. </li><li> 상층 액을 제거하고 10 ㎖가 그리드 화 페트리 접시 또는 애벌레 계산 유역에 침전물을 세척 전송합니다. 10 ML의 수돗물 실린더를 씻어 후 시료에 물을 추가합니다. 주 : 필요한 경우 시료 파편으로 다량의 선모충 유충 (도 1)의 식별을 방지 할 수 있으며, 상기 세척 단계가 수행되어야한다. </li></ol></li><li> 현미경 검사 <ol><li> 즉시 세척 단계 후 샘플을 검사 15 20 배 배율에서 trichinoscope 또는 조정 강도의 하위 단계 전송 광원과 스테레오 현미경을 사용합니다. </li><li> 격자 페트리 접시에 샘플을 주입 한 후 그리드에 의해 요리 / 체계적으로 분지 그리드를 검사합니다. 아무 의심 구조가 발견되지 않으면, 부드럽게 모든 선모충 라 할 수 있도록 원형 방식으로 격자 페트리 접시 또는 애벌레 계산 분지에서 유체를 이동잠재적으로 간과했다 rvae은 페트리 접시의 중심에 축적합니다. 검사를 반복합니다. </li><li> 용의자 구조가있는 경우, 40 배율을 증가 - 100X한다. 피펫으로 접시 / 분지에서 선모충의 유충을 제거하고 90 % 에탄올로 튜브에 수집합니다. </li><li> 완전한 접시가 검사 된 후에는 접시 / 지의 부드러운 흔들림부터의 절차를 반복한다. 적어도 3 회 더 이상 애벌레 때까지 절차를 반복하는 것이 발견된다. </li><li> 유충의 수를 계산합니다. 근육 조직의 양과 상관 관계는 테스트 g (LPG) 당 유생으로 존재. </li><li> 너무 많은 유충이 안정적으로 애벌레 수를 결정하기 위해 소화 유체에 존재하는 경우, 측정 실린더에 유충을 포함하는 유체를 돌려 스퀴즈 세척 병 수돗물로 씻어,하고 아래로 정착 애벌레를 둡니다. </li><li> 10 분 침강 시간 후, 정의 된 볼륨에 뜨는을 감소 (예 :10 ㎖). 정확한 양을 확인하려면, 피펫으로 새 실린더에 뜨는을 전송합니다. </li><li> 격렬한 흔들림에 의해 유체에 균일하게 애벌레를 일시 중단합니다. 요동 동안 배양 접시에 20 μL 애벌레 정지 12 방울을 추가합니다. </li><li> 현미경으로 각 드롭을 검사합니다. 240 μL의 유충의 수를 결정하고 최고 및 최저 카운트를 삭제합니다. 상등액의 총량 (예를 들어 10 ㎖)에 유충의 수를 추정. 참고 : 스테레오 현미경의 품질은 선모충의 유충의 식별을 위해 가장 중요하다. </li><li> 유충은 피펫으로 튜브에 수집 할 때, 애벌레는 피펫 벽에 부착하지 않았지만 튜브로 전송되어 있는지주의 깊게 확인합니다. 참고 : 풀링 된 샘플에서 긍정적 인 선모충 결과는 기원의 시체에 다시 풀에서 추적해야합니다. 양 도체가 아이덴 때까지 여기서, 풀 크기는 점진적으로 감소되어야tified. 샘플 크기는 감도를 증가시키는 과정이 증가 될 수있다. 집단 시료의 검사는 양수 또는 불확실한 결과를 생성하는 경우, 추가 20g 샘플은 각각의 돼지에서 가져온 것입니다. 다섯 돼지에서 20g 샘플을 모으고 기재된 방법을 사용하여 검사된다. 이런 식으로 다섯 돼지의 20 그룹의 샘플을 검사한다. 선모충 5 개의 돼지에서 풀링 된 샘플에서 검출 될 때, 20g의 시료를 그룹의 각각의 돼지로부터 수집되고 원래 양 도체가 검출 될 때까지 각각 별도로 검사된다. </li></ol></li></ol>

<ol>
	<li>Gottstein, B., Pozio, E., N&#246;ckler, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology,+Diagnosis,+Treatment,+and+Control+of+Trichinellosis.">Epidemiology, Diagnosis, Treatment, and Control of Trichinellosis.</a> Clin. Microbiol. Rev. 22, 127-145 (2009).</li><li>Pozio, E., Murrell, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systematics+and+epidemiology+of+Trichinella.">Systematics and epidemiology of Trichinella.</a> Adv. Parasitol. 63, 367-439 (2006).</li><li>9 CFR Part 318.10 - Prescribed treatment of pork and products containing pork to destroy trichinae. U.S. Government Publishing Office Available from: <a target="_blank" href="https://www.gpo.gov/fdsys/pkg/CFR-2016-title9-vol2/pdf/CFR-2016-title9-vol2-sec318-10.pdf">https://www.gpo.gov/fdsys/pkg/CFR-2016-title9-vol2/pdf/CFR-2016-title9-vol2-sec318-10.pdf</a> (2012)</li><li>Gamble, H. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=International+Commission+on+Trichinellosis:+recommendations+on+methods+for+the+control+of+Trichinella+in+domestic+and+wild+animals+intended+for+human+consumption.">International Commission on Trichinellosis: recommendations on methods for the control of Trichinella in domestic and wild animals intended for human consumption.</a> Vet. Parasitol. 93 (3-4), 393-408 (2000).</li><li>Gajadhar, A. A., Forbes, L. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+internationally+recognized+quality+assurance+system+for+diagnostic+parasitology+in+animal+health+and+food+safety,+with+example+data+on+trichinellosis.">An internationally recognized quality assurance system for diagnostic parasitology in animal health and food safety, with example data on trichinellosis.</a> Vet. Parasitol. 103, 133-140 (2002).</li><li>N&#246;ckler, K., Kapel, C. M. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chapter+3,+Detection+and+surveillance+for+Trichinella:+meat+inspection+and+hygiene,+and+legislation.">Chapter 3, Detection and surveillance for Trichinella: meat inspection and hygiene, and legislation.</a> FAO/WHO/OIE Guidelines for the surveillance, management, prevention and control of trichinellosis. , 69-98 (2007).</li><li>Boch, J., Schnieder, T., Supperer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Veterin&#228;rmedizinische Parasitologie. , (2006).</li><li>Despommier, D. D., M&#252;ller, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+stichosome+and+its+secretion+granules+in+the+mature+muscle+larva+of+Trichinella+spiralis.">The stichosome and its secretion granules in the mature muscle larva of Trichinella spiralis.</a> J. Parasitol. 62 (5), 775-785 (1976).</li><li>Marucci, G., Interisano, M., La Rosa, G., Pozio, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+identification+of+nematode+larvae+different+from+those+of+the+Trichinella+genus+detected+by+muscle+digestion.">Molecular identification of nematode larvae different from those of the Trichinella genus detected by muscle digestion.</a> Vet Parasitol. 194, 117-120 (2013).</li><li>Forbes, L. B., Gajadhar, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+validated+Trichinella+digestion+assay+and+an+associated+sampling+and+quality+assurance+system+for+use+in+testing+pork+and+horse+meat.">A validated Trichinella digestion assay and an associated sampling and quality assurance system for use in testing pork and horse meat.</a> J. Food Prot. 62, 1308-1313 (1999).</li><li>Malakauskas, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+epidemiology+of+Trichinella+spp.+in+three+Baltic+countries:+Lithuania,+Latvia,+and+Estonia.">Molecular epidemiology of Trichinella spp. in three Baltic countries: Lithuania, Latvia, and Estonia.</a> Parasitol. Res. 100 (4), 687-693 (2007).</li><li>Kapel, C. M., Webster, P., Gamble, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Muscle+distribution+of+sylvatic+and+domestic+Trichinella+larvae+in+production+animals+and+wildlife.">Muscle distribution of sylvatic and domestic Trichinella larvae in production animals and wildlife.</a> Vet. Parasitol. 132 (1-2), 101-105 (2005).</li><li>Interisano, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Validation+of+a+latex+agglutination+test+for+the+detection+of+Trichinella+infections+in+pigs.">Validation of a latex agglutination test for the detection of Trichinella infections in pigs.</a> Vet. Parasitol. 194, 121-124 (2013).</li><li>Pozio, E., La Rosa, ., G, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PCR-derived+methods+for+the+identification+of+Trichinella+parasites+from+animal+and+human+samples.">PCR-derived methods for the identification of Trichinella parasites from animal and human samples.</a> Methods Mol. Biol. 216, 299-309 (2003).</li></ol>

저자는 더 경쟁 재정적 이해 관계가 없음을 선언합니다.

교반기 방법을 용이하게 수행 할 수 있지만, 엄격 기술적 세부 사항을 준수하지 않는 것은, 따라서 소비자의 건강을 위태롭게 충분한 감도로 이끈다. 임계 제어 지점은 위의 텍스트에서 강조되고있다. 또한, 해당 장치의 사용은 시험의 성공적인 결과에 매우 중요하다. 모든 선박들은 표면 애벌레의 부착을 감소시키는 실리콘 코팅 유리 피펫 팁 만들어 져야한다. 소화 방법의 민감도는 근육의 유충 밀도 시험 근육 시료의 양에 따라 달라진다. (3)의 유충 밀도 - 근육 조직 5 LPG, 100 %의 민감도가보고 되었으나 한 LPG보다 감도가 40 % (13)에 떨어 뜨렸다. 테스트 된 숙주 동물의 종에 따라 시험의 민감도가 사용 시료의 양을 증가시킴으로써 향상시킬 수있다. 제 i야생 동물 nfection 부담 때문에 더 큰 샘플 크기는 14을 사용, 일반적으로 낮다. 취향 사이트는 또한 호스트 동물마다 다릅니다. 여기서, 또한 큰 샘플을 초래할 수 혀 고려할 필요 같은 일부 근육 조직의 하부 소화율은 15 크기. 또한, 자석 교반기 방법은 내부 제어를 포함하지 않는다는 것을 이해하는 것이 중요하다. 따라서, 문서에 대한 샘플링에서 품질 보증 관리는 정확하고 정밀한 결과를 얻기 위해 필수적이다. 근육 샘플 선모충 유충을 검출하는 기관 성능의 품질 능력 시험에서 각 분석 정기적 참여에 의해 모니터링한다. 방법의 또 다른 한계는 현미경으로 근육 애벌레의 최종 식별 단계는 매우 주관적 및 난방입니다입니다심사 분석에 의해 애벌레 형태의 지식에 vily 의존. 이 문제를 회피하는 흥미로운 또 다른 방법은 라텍스 응집 시험으로 애벌레 검출 다음 필터 분리에 자석 교반기 방법 /입니다. 그러나 EU 법규에 따라이 방법은 같은 멧돼지 4로 국내 돼지하지만 감염의 위험이 높은 동물 고기의 테스트에 해당하는 것으로 간주됩니다. 모노클로 날 항체와 항원 유생의 식별은 시험보다 대물 수 있지만, 기관 고기를 16 그램 당 유충의 수를 결정하는 가능성을 부정한다. 자석 교반기 방법의 또 다른 변화는 기계적으로 지원 풀링 된 샘플 소화 방법 / 침전 기술, 기계적으로 지원 풀링 된 샘플 발굴 포함필터 분리 기술에 estion 방법 / 최대 35g 기술의 풀링 된 샘플에 대한 자동 소화 방법. 이들 기술은 모두 고기 선모충 유충의 시각화 및 계산의 인공 소화에 기초하지만, 여과 및 침전 단계에 사용되는 기기 상이된다. 분리 된 유충은 또한 분자 시험 (예를 들어, 다중 PCR) (17)에 의해 종 레벨에서 식별 될 수있다. EU 법률에 따르면, 모든 긍정적 인 샘플은 선모충 종 판별을 위해 국가 참조 실험실 또는 EURLP에 전달해야합니다.

속 선모충의 선충은 전 세계적으로 육식 동물과 잡식 동물 포유류, 조류, 파충류의 가로 무늬 근육에서 검출 될 수있다. 이러한 동물 매개 선충 돼지, 말에서 인간 원료 또는 반 원시 고기와 고기 파생 된 제품을 도달 할 수 있습니다, 게임 동물은 섭취한다. 이 인수 공통 전염병은 pathognomonic 징후와 증상, 예를 들어, 설사, 발열, 눈 주위 부종과 근육통 및 심근염, 혈전 색 전성 질환과 뇌염 1 가능한 합병증을 특징으로 인체에 심각한 질병이 될 수 있습니다. 선모충은 야생 및 국내 동물 선모충 감염의 가장 광범위 병인 에이전트이며, 전 세계적으로 인간 감염의 대부분을 발생합니다. 유럽, 북미 및 서부 아프리카, 서아시아에서 선모충의 britovi 인간 감염의 또 다른 근원이다. 또한 10 개의 다른 분류군 덜 일반적 원인으로보고있다<html> 인간 질병의 에이전트는 일반적으로 야생 동물 2, 세계의 다른 지역에서 발견된다. 이러한 멧돼지, 곰, 바다 코끼리와 오소리 등 야생 동물뿐만 아니라, 돼지 고기는 전 세계적으로 인간 감염의 가장 중요한 소스를 나타냅니다. trichinellosis을 방지하는 가장 좋은 방법은 원시 육류 제품을 먹는 자제하고 고기, 안전 온도 (특히 게임 고기를 요리하다&gt; 65 ° C 1 분 동안, 즉의 핵심에 갈색에 핑크에서 고기 색상을 변경하려면 고기 제품) 3. 유럽 연합 (EU)과 USDA은 고기 4, 5 T.의 spiralis 유충을 죽이는 데 사용 할 수 있습니다 돼지 고기 제품에 대한 동결 및 조리 시간과 온도를 지정했습니다. 또한, 육류 및 육류 제품에 선모충의 비활성화에 대한 권장 사항은 Trichinellosis에 관한 국제위원회가 발표되었다&quot;외부 참조&quot;&gt; 6. 유럽에서는, 선모충 감염의 위험성을 무시할 상업용 돼지 무리의 제어 하우징 조건의 도입에 더하여, 인간 trichinellosis 예방은 감염 동물 사에서 근육 샘플의 실험실 시험에 기초한다. 식품 안전을 위해 소화 분석 고기 3, 7 선모충 유충의 직접 검출을위한 신뢰할 수있는 유일한 방법이다. 소화 분석의 여러 가지 변형이 있더라도 교반기 방법은 국제적으로 인정 된 기준 방법 3, 4, 7이다. 이 분석은 가로 무늬 근육 조직에서 선모충의 유충의 검출을 기반으로합니다. 근육 샘플의 효소 분해 및 후속 여과 및 침전 단계 후 트라이chinella 유충은 현미경으로 식별됩니다. 무역 의무와 국내법에 따라, 자석 교반기 메소드의 범용 프로토콜에서 작은 변화의 다수가 있습니다. 여기에, 기술적 인 세부 사항은 유럽 연합 (EU)의 요구 사항 4, ISO 규격 8, ICT 가이드 라인 (6) 및 기생충 (EURLP)에 대한 유럽 연합 (EU) 참조 연구소의 경험과 선모충에 대한 독일의 참조 연구소를 기반으로합니다.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1019">
	<tbody>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:220px;">Knife,Scissors, Tweezers&#160;</td>
			<td style="width:356px;"></td>
			<td style="width:80px;"></td>
			<td style="width:363px;">Cutting samples and removing non-digestible tissue</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:220px;">Blender&#160;</td>
			<td style="width:356px;"></td>
			<td></td>
			<td style="width:363px;">With a sharp chopping blade</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:220px;">Magnetic stirrer</td>
			<td style="width:356px;"></td>
			<td></td>
			<td style="width:363px;">With thermostatically controlled heating plate</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:220px;">Stirring Rod</td>
			<td style="width:356px;"></td>
			<td></td>
			<td style="width:363px;">Teflon-coated, approximately 5 cm long</td>
		</tr>
		<tr height="66">
			<td height="66" style="height:66px;width:220px;">Conical glass separation funnel</td>
			<td style="width:356px;"></td>
			<td></td>
			<td style="width:363px;">Capacity of at least 2 litres, preferably fitted with Teflon safety plugs. The width should not be larger than 55% of the length to allow a good larva sedimentation</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:220px;">Stands, rings and clamps</td>
			<td style="width:356px;"></td>
			<td></td>
			<td style="width:363px;"></td>
		</tr>
		<tr height="45">
			<td height="45" style="height:45px;width:220px;">Sieve</td>
			<td style="width:356px;"></td>
			<td></td>
			<td style="width:363px;">Mesh size 180 microns, external diameter 11 cm, with stainless steel mesh</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:220px;">Funnel</td>
			<td style="width:356px;"></td>
			<td></td>
			<td style="width:363px;">Internal diameter not less than 12 cm, to support the sieves</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:220px;">Glass beaker</td>
			<td style="width:356px;"></td>
			<td></td>
			<td style="width:363px;">Capacity 3 litres</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:220px;">Glass measuring cylinder</td>
			<td style="width:356px;"></td>
			<td></td>
			<td style="width:363px;">Capacity 50 to 100 ml, or centrifuge tube</td>
		</tr>
		<tr height="46">
			<td height="46" style="height:46px;width:220px;">Stereo-microscope</td>
			<td style="width:356px;"></td>
			<td></td>
			<td style="width:363px;">With a substage transmitted light source of adjustable intensity or trichinoscope with a horizontal table</td>
		</tr>
		<tr height="66">
			<td height="66" style="height:66px;width:220px;">Petri dishes</td>
			<td style="width:356px;"></td>
			<td></td>
			<td style="width:363px;">9 cm diameter, marked on their undersides into 10 &#215; 10 mm square examination areas using a pointed instrument or a larval counting basin for the tricinoscope</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:220px;">Aluminium foil</td>
			<td style="width:356px;"></td>
			<td></td>
			<td style="width:363px;">Alternatively a lid to cover the beakers</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:220px;">25 % hydrochloric acid</td>
			<td style="width:356px;"></td>
			<td></td>
			<td style="width:363px;"></td>
		</tr>
		<tr height="100">
			<td height="100" style="height:100px;width:220px;">Pepsin</td>
			<td style="width:356px;"></td>
			<td></td>
			<td style="width:363px;">Strength: 1:10 000 NF (US National Formulary) corresponding to 1:12 500 BP (British Pharmacopoeia) and to 2 000 FIP (F&#233;d&#233;ration internationale de pharmacie), or stabilised liquid pepsin with minimum 660 European Pharmacopoeia units/ml</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:220px;">Ethanol</td>
			<td style="width:356px;"></td>
			<td></td>
			<td style="width:363px;">70-90% ethyl alcohol</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:220px;">Tap water</td>
			<td style="width:356px;"></td>
			<td></td>
			<td style="width:363px;">Heated to 46-48 &#176;C before use</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:220px;">Balance</td>
			<td style="width:356px;"></td>
			<td></td>
			<td style="width:363px;">Accurate to at least 0.1 g</td>
		</tr>
		<tr height="45">
			<td height="45" style="height:45px;width:220px;">Metal tray</td>
			<td style="width:356px;"></td>
			<td></td>
			<td style="width:363px;">Capacity 10 to 15 litres, to collect the remaining digestive juice</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:220px;">Pipettes and pipette holder</td>
			<td style="width:356px;"></td>
			<td></td>
			<td style="width:363px;">Different sizes (1, 10 and 25 ml)</td>
		</tr>
		<tr height="47">
			<td height="47" style="height:47px;width:220px;">Thermometer&#160;</td>
			<td style="width:356px;"></td>
			<td></td>
			<td style="width:363px;">Accurate to 0.5 &#176;C, temperature range at least from 20 &#176; C to 70 &#176; C</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:220px;">Siphon&#160;</td>
			<td style="width:356px;"></td>
			<td></td>
			<td style="width:363px;">For tap water</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

magnetic stirrer method for the detection of trichinella larvae in muscle samples

Trichinellosis 인간의 쇠약 질환과 속 선모충의 선충 유충에 감염된 동물의 원시 또는 덜 익힌 고기의 소비로 인해 발생합니다. 인간 감염의 가장 중요한 소스는 전 세계 게임 고기와 돼지 고기 나 돼지 고기 제품입니다. 많은 나라에서, 인간 trichinellosis 예방은 감염 동물 사체로부터 근육 시료의 인공 소화에 의해 감염된 동물의 식별에 기초한다. 고기의 소화하지만, 자석 교반기 방법이 황금 표준으로 간주됩니다에 따라 여러 가지 방법이 있습니다. 이 방법은 근육 샘플 및 후속 여과 및 침전 단계의 효소 분해 후 현미경으로 선모충의 유충의 검출을 할 수 있습니다. 이 방법은 특별한 고가의 장비를 필요로하지 않지만, 내부의 제어 장치는 사용할 수 없다. 따라서, 엄격한 품질 관리는있는 수정되어야한다테스트를 통해 거라고. 본 연구의 목적은 세부 처리 지침 및 기생충에 대한 유럽 연합 (EU) 참조 약국 및 선모충 독일의 국립 참조 연구소의 경험을 바탕으로 애널리스트의 방법의 중요 관리 점을 제공하는 것입니다.

<html> 소화 후, 감염성 근육 유충의 형상 인식을 더 어렵게 변할 수있다. 일반적인 형태는 단단히 코일 유충, 가볍게 코일 유충 또는 C 형 또는 완전히 uncoiled 유충 (- 2C도 2B)를 포함한다. 그램 당 발견 된 유충의 수는 상당히 다를 수 있으며, 몇 백 애벌레 한 유충에 이르기까지 다양 할 수 있습니다. 감염성 근육 유충의 형태는도 2a에 도시된다. 길이 0.7 ~ 1.5 mm, 폭 약 0.3 mm는 선모충의 유충입니다. 식도는 좁고 약간 둥근 끝이있다. 표피는 부드러운이다. 체강 상기 stichosome의 앞쪽 절반에서, 구조 (45) (55)에 큰 셀 (stichocytes)의 행에 의해 둘러싸인 긴 세관 이루어지는 관찰 할 수있다. 직장 11 어떤 예측하지 않고 또한 둥근 또는 10 부속되어. t &quot;&gt; 기타 구조, 선모충의 유충 외에, 근육 소화 후 발견 될 수있는 몇 가지 예는도 3a에 도시되어있다 -.. 3 층을 야생 동물이 자주 애니메이션으로 내장 적출 과정에서 오염 된 다른 기생충이나 테스트에 사용할 수있는 근육 샘플에 감염되어 또는 무생물 구조 / 생물. 유충의 길이는 전방 및 후방 끝의 모양과 stichosome 도움의 발생은 다른 선충 장군 (12)를 구별한다. <img alt="그림 1" src="/files/ftp_upload/55354/55354fig1.jpg" /> 그림 1 : (A) 부족 및 (B) 충분한 헹굼 단계 후 선모충 유충의 현미경 검사. 스케일 바는 100 μm의를 나타냅니다. <a href="https://ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/55354/55354fig1large.jpg" target="_blank">더 큰이 적이 보려면 여기를 클릭하십시오</a>이 그림의 rsion. <img alt="그림 2" src="/files/ftp_upload/55354/55354fig2.jpg" /> 그림 2 : 유충 (A)의 직장, Stichosome과 식도 표시 형태론 감염성의 선모충 애벌레. 소화 표시 (B) 후 근육 애벌레의 가능한 모양 단단히 감아 가볍게 애벌레와 (C)를 이동하는 유충을 uncoiled 코일. 스케일 바는 100 μm의를 나타냅니다. <a href="https://ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/55354/55354fig2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a> <img alt="그림 3" src="/files/ftp_upload/55354/55354fig3.jpg" /> 그림 3 : 자석 교반기 방법으로 소화 근육의 샘플 후 부대 조사 결과의 예. (A)의 모 형 머리멧돼지에있는 지구 벌레; (B) 멧돼지에서 Alaria의 alata는; (C) 멧돼지에서 근육 섬유; (D) Metastrongylus SP. 멧돼지에서; Toxocara 특검팀 : (E) 식물 섬유는 멧돼지 (F)에서 발견. 멧돼지에서 애벌레. 스케일 바는 100 μm의를 나타냅니다. <a href="https://ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/55354/55354fig3large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Magnetic Stirrer Method for the Detection of Trichinella Larvae in Muscle Samples at JoVE.com

Magnetic Stirrer Method for the Detection of Trichinella Larvae in Muscle Samples

많은 나라에서 인간 trichinellosis 방지 전세계 교반기 방법 금 표준 간주되는 소화의 방법에 의해 감염 동물의 근육 샘플의 실험실 시험에 기초한다.

의 검출을위한 자석 교반기 방법<em&gt; 선모충</em근육 샘플에서&gt; 애벌레

Trichinellosis is a debilitating disease in humans and is caused by the consumption of raw or undercooked meat of animals infected with the nematode ...

magnetic-stirrer-method-for-detection-trichinella-larvae-muscle

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Magnetic Stirrer Method for the Detection of Trichinella Larvae in Muscle Samples

28.5K 조회수.  Federal Institute for Risk Assessment.  많은 나라에서 인간 trichinellosis 방지 전세계 교반기 방법 금 표준 간주되는 소화의 방법에 의해 감염 동물의 근육 샘플의 실험실 시험에 기초한다. 

비디오: Magnetic Stirrer Method for the Detection of Trichinella Larvae in Muscle Samples

Combination of Adhesive-tape-based Sampling and Fluorescence in situ Hybridization for Rapid Detection of Salmonella on Fresh Produce

This protocol describes a simple approach for adhesive-tape-based sampling of tomato and other fresh produce surfaces, followed by on-tape fluorescence in situ hybridization (FISH) for rapid culture-independent detection of Salmonella spp. Cell-charged tapes can also be placed face-down on selective agar for solid-phase enrichment prior to detection. Alternatively, low-volume liquid enrichments (liquid surface miniculture) can be performed on the surface of the tape in non-selective broth, followed by FISH and analysis via flow cytometry. To begin, sterile adhesive tape is brought into contact with fresh produce, gentle pressure is applied, and the tape is removed, physically extracting microbes present on these surfaces. Tapes are mounted sticky-side up onto glass microscope slides and the sampled cells are fixed with 10% formalin (30 min) and dehydrated using a graded ethanol series (50, 80, and 95%; 3 min each concentration). Next, cell-charged tapes are spotted with buffer containing a Salmonella-targeted DNA probe cocktail and hybridized for 15 - 30 min at 55&deg;C, followed by a brief rinse in a washing buffer to remove unbound probe. Adherent, FISH-labeled cells are then counterstained with the DNA dye 4',6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) and results are viewed using fluorescence microscopy. For solid-phase enrichment, cell-charged tapes are placed face-down on a suitable selective agar surface and incubated to allow in situ growth of Salmonella microcolonies, followed by FISH and microscopy as described above. For liquid surface miniculture, cell-charged tapes are placed sticky side up and a silicone perfusion chamber is applied so that the tape and microscope slide form the bottom of a water-tight chamber into which a small volume (&le; 500 &mu;L) of Trypticase Soy Broth (TSB) is introduced. The inlet ports are sealed and the chambers are incubated at 35 - 37&deg;C, allowing growth-based amplification of tape-extracted microbes. Following incubation, inlet ports are unsealed, cells are detached and mixed with vigorous back and forth pipetting, harvested via centrifugation and fixed in 10% neutral buffered formalin. Finally, samples are hybridized and examined via flow cytometry to reveal the presence of Salmonella spp. As described here, our "tape-FISH" approach can provide simple and rapid sampling and detection of Salmonella on tomato surfaces. We have also used this approach for sampling other types of fresh produce, including spinach and jalape&ntilde;o peppers.

Combination of Adhesive-tape-based Sampling and Fluorescence in situ Hybridization for Rapid Detection of Salmonella on Fresh Produce

This protocol describes a simple adhesive-tape-based approach for sampling of tomato and other fresh produce surfaces, followed by rapid whole cell detection of Salmonella using fluorescence in situ hybridization (FISH).

접착제 테이프 기반의 샘플링 및 형광의 조합 현장에서</em의 신속한 감지를 위해> 하이브 리다이 제이션 살모넬라균 신선한 농산물에 대한

This protocol describes a simple approach for adhesive-tape-based sampling of tomato and other fresh produce surfaces, followed by on-tape fluorescence in ...

연구

면역학 및 감염병학

Use of Fluorescent Immuno-Chemistry for the detection of Edwardsiella ictaluri in channel catfish (I. punctatus) samples

While Edwardsiella ictaluri is a major pathogen of channel catfish Ictalurus punctatus and has been discovered nearly 
three decades ago 1,2, so far, to the best of these authors' knowledge, no method has been developed to allow for the in situ visualization of the 
bacteria in histological sections.
While bacterial localization has been determined in vivo in previous studies using plate counts 3, radiometric labeled 4, 
or bioluminescent bacteria 5, most of these studies have only been performed at the gross organ level, with one exception 6. This limitation 
is of particular concern because E. ictaluri has a complex infection cycle 1,7, and it has a variety of virulence factors 8,9. 
The complex interaction of E. ictaluri with its host is similar in many respects to Salmonella typhi 10, which is in the same taxonomic family.
Here we describe a technique allowing for the detection of bacteria using indirect immuno-histochemistry using the monoclonal Ed9 antibody described by Ainsworth et al.11.
Briefly, a blocking serum is applied to paraffin embedded histological sections to prevent non-specific biding. Then, the 
sections are incubated with the primary antibody: E. ictaluri specific monoclonal antibody Ed9. Excess antibodies are rinsed away and the FitC 
labeled secondary antibodies are added. After rinsing, the sections are mounted with a fluorescent specific mounting medium. 
This allowed for the detection of E. ictaluri in situ in histological sections of channel catfish tissues.

Use of Fluorescent Immuno-Chemistry for the detection of Edwardsiella ictaluri in channel catfish I. punctatus samples

Here we describe a procedure allowing the labeling of Edwardsiella ictaluri in situ in histological sections from channel catfish Ictalurus punctatus using indirect immunohistochemistry with monoclonal antibodies Ed9 as a primary, and fluorescent FitC labeled antibodies as a secondary. This allowed for the detection of the bacterium using fluorescent microscopy.

의 검출을위한 형광 단백질 화학의 이용 Edwardsiella ictaluri 채널 메기에 ( I. punctatus) 샘플

While Edwardsiella ictaluri is a major pathogen of channel catfish Ictalurus punctatus and has been discovered nearly 
three decades ago 1,2, so far, to ...

Multiplex Detection of Bacteria in Complex Clinical and Environmental Samples using Oligonucleotide-coupled Fluorescent Microspheres

Bacterial vaginosis (BV) is a recurring polymicrobial syndrome that is characterized by a change in the "normal" microbiota from Lactobacillus-dominated to a microbiota dominated by a number of bacterial species, including Gardnerella vaginalis, Atopobium vaginae, and others1-3. This condition is associated with a range of negative health outcomes, including HIV acquisition4, and it can be difficult to manage clinically5. Furthermore, diagnosis of BV has relied on the use of Gram stains of vaginal swab smears that are scored on various numerical criteria6,7. While this diagnostic is simple, inexpensive, and well suited to resource-limited settings, it can suffer from problems related to subjective interpretations and it does not give a detailed profile of the composition of the vaginal microbiota8. Recent deep sequencing efforts have revealed a rich, diverse vaginal microbiota with clear differences between samples taken from individuals that are diagnosed with BV compared to those individuals that are considered normal9,10, which has resulted in the identification of a number of potential targets for molecular diagnosis of BV11,12. These studies have provided a wealth of useful information, but deep sequencing is not yet practical as a diagnostic method in a clinical setting. We have recently described a method for rapidly profiling the vaginal microbiota in a multiplex format using oligonucleotide-coupled fluorescent beads with detection on a Luminex platform13. This method, like current Gram stain-based methods, is rapid and simple but adds the additional advantage of exploiting molecular knowledge arising from sequencing studies in probe design. This method therefore provides a way to profile the major microorganisms that are present in a vaginal swab that can be used to diagnose BV with high specificity and sensitivity compared to Gram stain while providing additional information on species presence and abundance in a semi-quantitative and rapid manner. This multiplex method is expandable well beyond the range of current quantitative PCR assays for particular organisms, which is currently limited to 5 or 6 different assays in a single sample14. Importantly, the method is not limited to the detection of bacteria in vaginal swabs and can be easily adapted to rapidly profile nearly any microbial community of interest. For example, we have recently begun to apply this methodology to the development of diagnostic tools for use in wastewater treatment plants.

We describe a multiplex method for the detection of microorganisms within a sample using oligonucleotide-coupled fluorescent beads. Amplicon from all organisms within a sample is hybridized to a panel of probe-coupled beads. A Luminex or Bio-Plex instrument is used to query each bead for bead type and hybridization signal.

Oligonucleotide - 결합 형광등 Microspheres를 사용하여 복잡한 임상 및 환경 샘플에서 박테리아의 멀티 플렉스 감지

Bacterial vaginosis (BV) is a recurring polymicrobial syndrome that is characterized by a change in the "normal" microbiota from Lactobacillus-dominated ...

High-throughput Detection Method for Influenza Virus

Influenza virus is a respiratory pathogen that causes a high degree of morbidity and mortality every year in multiple parts of the world. Therefore, precise diagnosis of the infecting strain and rapid high-throughput screening of vast numbers of clinical samples is paramount to control the spread of pandemic infections. Current clinical diagnoses of influenza infections are based on serologic testing, polymerase chain reaction, direct specimen immunofluorescence and cell culture 1,2.
Here, we report the development of a novel diagnostic technique used to detect live influenza viruses. We used the mouse-adapted human A/PR/8/34 (PR8, H1N1) virus 3 to test the efficacy of this technique using MDCK cells 4. MDCK cells (104 or 5 x 103 per well) were cultured in 96- or 384-well plates, infected with PR8 and viral proteins were detected using anti-M2 followed by an IR dye-conjugated secondary antibody. M2 5 and hemagglutinin 1 are two major marker proteins used in many different diagnostic assays. Employing IR-dye-conjugated secondary antibodies minimized the autofluorescence associated with other fluorescent dyes. The use of anti-M2 antibody allowed us to use the antigen-specific fluorescence intensity as a direct metric of viral quantity. To enumerate the fluorescence intensity, we used the LI-COR Odyssey-based IR scanner. This system uses two channel laser-based IR detections to identify fluorophores and differentiate them from background noise. The first channel excites at 680 nm and emits at 700 nm to help quantify the background. The second channel detects fluorophores that excite at 780 nm and emit at 800 nm. Scanning of PR8-infected MDCK cells in the IR scanner indicated a viral titer-dependent bright fluorescence. A positive correlation of fluorescence intensity to virus titer starting from 102-105 PFU could be consistently observed. Minimal but detectable positivity consistently seen with 102-103 PFU PR8 viral titers demonstrated the high sensitivity of the near-IR dyes. The signal-to-noise ratio was determined by comparing the mock-infected or isotype antibody-treated MDCK cells.
Using the fluorescence intensities from 96- or 384-well plate formats, we constructed standard titration curves. In these calculations, the first variable is the viral titer while the second variable is the fluorescence intensity. Therefore, we used the exponential distribution to generate a curve-fit to determine the polynomial relationship between the viral titers and fluorescence intensities. Collectively, we conclude that IR dye-based protein detection system can help diagnose infecting viral strains and precisely enumerate the titer of the infecting pathogens.

This method describes the use of Infrared dye based imaging system for detection of H1N1 in bronchioalveolar lavage (BAL) fluid of infected mice at a high sensitivity. This methodology can be performed in a 96- or 384-well plate, requires &lt;10 &mu;l volume of test material and has the potential for concurrent screening of multiple pathogens.

인플루엔자 바이러스에 대한 높은 처리량 검출 방법

Influenza virus is a respiratory pathogen that causes a high degree of morbidity and mortality every year in multiple parts of the world. Therefore, ...

Qualitative and Quantitative Assays for Detection and Characterization of Protein Antimicrobials

Initial evaluations of large microbial libraries for potential producers of novel antimicrobial proteins require both qualitative and quantitative methods to screen for target enzymes prior to investing greater research effort and resources. The goal of this protocol is to demonstrate two complementary assays for conducting these initial evaluations. The microslide diffusion assay provides an initial or simple detection screen to enable the qualitative and rapid assessment of proteolytic activity against an array of both viable and heat-killed bacterial target substrates. As a counterpart, the increased sensitivity and reproducibility of the dye-release assay provides a quantitative platform for evaluating and comparing environmental influences affecting the hydrolytic activity of protein antimicrobials. The ability to label specific heat-killed cell culture substrates with Remazol brilliant blue R dye expands this capability to tailor the dye-release assay to characterize enzymatic activity of interest.

Here, we present protocols to rapidly screen and characterize enzymes for antimicrobial activity. The microslide diffusion assay and the dye-release assay utilize target bacterial substrates for qualitative and quantitative enzymatic activity evaluation.

정성 및 정량 검출을위한 시험 법 및 단백질 항생제 특성

Initial evaluations of large microbial libraries for potential producers of novel antimicrobial proteins require both qualitative and quantitative methods ...

Fast and Specific Assessment of the Halogenating Peroxidase Activity in Leukocyte-enriched Blood Samples

In this paper a protocol for the quick and standardized enrichment of leukocytes from small whole blood samples is described. This procedure is based on the hypotonic lysis of erythrocytes and can be applied to human samples as well as to blood of non-human origin. The small initial sample volume of about 50 to 100 &#181;l makes this method applicable to recurrent blood sampling from small laboratory animals. Moreover, leukocyte enrichment is achieved within minutes and with low material efforts regarding chemicals and instrumentation, making this method applicable in multiple laboratory environments.
Standardized purification of leukocytes is combined with a highly selective staining method to evaluate halogenating peroxidase activity of the heme peroxidases, myeloperoxidase (MPO) and eosinophil peroxidase (EPO), i.e., the formation of hypochlorous and hypobromous acid (HOCl and HOBr). While MPO is strongly expressed in neutrophils, the most abundant immune cell type in human blood as well as in monocytes, the related enzyme EPO is exclusively expressed in eosinophils. The halogenating activity of these enzymes is addressed by using the almost HOCl- and HOBr-specific dye aminophenyl fluorescein (APF) and the primary peroxidase substrate hydrogen peroxide. Upon subsequent flow cytometry analysis all peroxidase-positive cells (neutrophils, monocytes, eosinophils) are distinguishable and their halogenating peroxidase activity can be quantified. Since APF staining may be combined with the application of cell surface markers, this protocol can be extended to specifically address leukocyte sub-fractions. The method is applicable to detect HOCl and HOBr production both in human and in rodent leukocytes.
Given the widely and diversely discussed immunological role of these enzymatic products in chronic inflammatory diseases, this protocol may contribute to a better understanding of the immunological relevance of leukocyte-derived heme peroxidases.

This protocol describes the quick enrichment of leukocytes from small blood samples for a subsequent specific determination of the halogenating peroxidase activity within the cells. The method can be applied to human and non-human material and may contribute to the evaluation of new inflammatory markers.

백혈구가 풍부한 혈액 샘플의 할로겐 퍼 옥시 다제 활동의 신속하고 구체적인 평가

In this paper a protocol for the quick and standardized enrichment of leukocytes from small whole blood samples is described. This procedure is based on ...

Swab Sampling Method for the Detection of Human Norovirus on Surfaces

Human noroviruses are a leading cause of epidemic and sporadic gastroenteritis worldwide. Because most infections are either spread directly via the person-to-person route or indirectly through environmental surfaces or food, contaminated fomites and inanimate surfaces are important vehicles for the spread of the virus during norovirus outbreaks.
We developed and evaluated a protocol using macrofoam swabs for the detection and typing of human noroviruses from hard surfaces. Compared with fiber-tipped swabs or antistatic wipes, macrofoam swabs allow virus recovery (range 1.2-33.6%) from toilet seat surfaces of up to 700 cm2. The protocol includes steps for the extraction of the virus from the swabs and further concentration of the viral RNA using spin columns. In total, 127 (58.5%) of 217 swab samples that had been collected from surfaces in cruise ships and long-term care facilities where norovirus gastroenteritis had been reported tested positive for GII norovirus by RT-qPCR. Of these 29 (22.8%) could be successfully genotyped. In conclusion, detection of norovirus on environmental surfaces using the protocol we developed may assist in determining the level of environmental contamination during outbreaks as well as detection of virus when clinical samples are not available; it may also facilitate monitoring of effectiveness of remediation strategies.

A macrofoam based sampling methodology was developed and evaluated for the detection and quantification of norovirus on environmental hard surfaces.

표면에 인간의 노로 바이러스의 검출을위한 면봉 표본 추출 방법

Human noroviruses are a leading cause of epidemic and sporadic gastroenteritis worldwide. Because most infections are either spread directly via the ...

A Method for Targeted 16S Sequencing of Human Milk Samples

Studies of microbial communities have become widespread with the development of relatively inexpensive, rapid, and high throughput sequencing. However, as with all these technologies, reproducible results depend on a laboratory workflow that incorporates appropriate precautions and controls. This is particularly important with low-biomass samples where contaminating bacterial DNA can generate misleading results. This article details a semi-automated workflow to identify microbes from human breast milk samples using targeted sequencing of the 16S ribosomal RNA (rRNA) V4 region on a low- to mid-throughput scale. The protocol describes sample preparation from whole milk including: sample lysis, nucleic acid extraction, amplification of the V4 region of the 16S rRNA gene, and library preparation with quality control measures. Importantly, the protocol and discussion consider issues that are salient to the preparation and analysis of low-biomass samples including appropriate positive and negative controls, PCR inhibitor removal, sample contamination by environmental, reagent, or experimental sources, and experimental best practices designed to ensure reproducibility. While the protocol as described is specific to human milk samples, it is adaptable to numerous low- and high-biomass sample types, including samples collected on swabs, frozen neat, or stabilized in a preservation buffer.

A semi-automated workflow is presented for targeted sequencing of 16S rRNA from human milk and other low-biomass sample types.

인간의 우유 샘플의 타겟된 16S 시퀀싱 하는 방법

Studies of microbial communities have become widespread with the development of relatively inexpensive, rapid, and high throughput sequencing. However, as ...

Rapid, Safe, and Simple Manual Bedside Nucleic Acid Extraction for the Detection of Virus in Whole Blood Samples

The rapid diagnosis of an infection is essential for the outbreak management, risk containment, and patient care. We have previously shown a method for the rapid bedside inactivation of the Ebola virus during blood sampling for safe nucleic acid (NA) tests by adding a commercial lysis/binding buffer directly into the vacuum blood collection tubes. Using this bedside inactivation approach, we have developed a safe, rapid, and simplified bedside NA extraction method for the subsequent detection of a virus in lysis/binding buffer-inactivated whole blood. The NA extraction is directly performed in the blood collection tubes and requires no equipment or electricity. 
After the blood is collected into the lysis/binding buffer, the contents are mixed by flipping the tube by hand, and the mixture is incubated for 20 min at room temperature. Magnetic glass particles (MGPs) are added to the tube, and the contents are mixed by flipping the collection tube by hand. The MGPs are then collected on the side of the blood collection tube using a magnetic holder or a magnet and a rubber band. The MGPs are washed three times, and after the addition of elution buffer directly into the collection tube, the NAs are ready for NA tests, such as qPCR or isothermal loop amplification (LAMP), without the removal of the MGPs from the reaction. The NA extraction method is not dependent on any laboratory facilities and can easily be used anywhere (e.g., in field hospitals and hospital isolation wards). When this NA extraction method is combined with LAMP and a portable instrument, a diagnosis can be obtained within 40 min of the blood collection.

Here, we present a protocol for the rapid virus nucleic acid extraction from the virus-inactivated whole blood. The extraction is performed directly in the blood collection tubes and requires no equipment or electricity. The method is not dependent on laboratory facilities and can be used anywhere (e.g., in field hospitals).

전체 혈액 샘플에서 바이러스의 검출, 안전, 신속 하 고 간단한 수동 침대 핵 산 추출

The rapid diagnosis of an infection is essential for the outbreak management, risk containment, and patient care. We have previously shown a method for ...

A High-throughput Platform for the Screening of Salmonella spp./Shigella spp.

Fecal-oral transmission of acute gastroenteritis occurs from time to time, especially when people who handled food and water are infected by Salmonella spp./Shigella spp. The gold standard method for the detection of Salmonella spp./Shigella spp. is direct culture but this is labor-intensive and time-consuming. Here, we describe a high-throughput platform for Salmonella spp./Shigella spp. screening, using real-time polymerase chain reaction (PCR) combined with guided culture. There are two major stages: real-time PCR and the guided culture. For the first stage (real-time PCR), we explain each step of the method: sample collection, pre-enrichment, DNA extraction and real-time PCR. If the real-time PCR result is positive, then the second stage (guided culture) is performed: selective culture, biochemical identification and serological characterization. We also illustrate representative results generated from it. The protocol described here would be a valuable platform for the rapid, specific, sensitive and high-throughput screening of Salmonella spp./Shigella spp.

A High-throughput Platform for the Screening of Salmonella spp./Shigella spp.

Salmonella spp./Shigella spp. are common pathogens attributed to diarrhea. Here, we describe a high-throughput platform for the screening of Salmonella spp./Shigella spp. using real-time PCR combined with guided culture.

살 모 넬 라 종의 심사에 대 한 높은 처리 플랫폼 /Shigella 종

Fecal-oral transmission of acute gastroenteritis occurs from time to time, especially when people who handled food and water are infected by Salmonella ...

의 검출을위한 자석 교반기 방법

요약

더 많은 비디오 탐색

이 비디오의 챕터

접착제 테이프 기반의 샘플링 및 형광의 조합 현장에서 하이브 리다이 제이션 살모넬라균* 신선한 농산물에 대한*

의 검출을위한 형광 단백질 화학의 이용 Edwardsiella ictaluri 채널 메기에 ( I. punctatus) 샘플

Oligonucleotide - 결합 형광등 Microspheres를 사용하여 복잡한 임상 및 환경 샘플에서 박테리아의 멀티 플렉스 감지

인플루엔자 바이러스에 대한 높은 처리량 검출 방법

정성 및 정량 검출을위한 시험 법 및 단백질 항생제 특성

백혈구가 풍부한 혈액 샘플의 할로겐 퍼 옥시 다제 활동의 신속하고 구체적인 평가

표면에 인간의 노로 바이러스의 검출을위한 면봉 표본 추출 방법

인간의 우유 샘플의 타겟된 16S 시퀀싱 하는 방법

전체 혈액 샘플에서 바이러스의 검출, 안전, 신속 하 고 간단한 수동 침대 핵 산 추출

살 모 넬 라 종의 심사에 대 한 높은 처리 플랫폼 /Shigella 종

의 검출을위한 자석 교반기 방법

요약

더 많은 비디오 탐색

이 비디오의 챕터

접착제 테이프 기반의 샘플링 및 형광의 조합 현장에서 하이브 리다이 제이션 살모넬라균 신선한 농산물에 대한

의 검출을위한 형광 단백질 화학의 이용 Edwardsiella ictaluri 채널 메기에 ( I. punctatus) 샘플

Oligonucleotide - 결합 형광등 Microspheres를 사용하여 복잡한 임상 및 환경 샘플에서 박테리아의 멀티 플렉스 감지

인플루엔자 바이러스에 대한 높은 처리량 검출 방법

정성 및 정량 검출을위한 시험 법 및 단백질 항생제 특성

백혈구가 풍부한 혈액 샘플의 할로겐 퍼 옥시 다제 활동의 신속하고 구체적인 평가

표면에 인간의 노로 바이러스의 검출을위한 면봉 표본 추출 방법

인간의 우유 샘플의 타겟된 16S 시퀀싱 하는 방법

전체 혈액 샘플에서 바이러스의 검출, 안전, 신속 하 고 간단한 수동 침대 핵 산 추출

살 모 넬 라 종의 심사에 대 한 높은 처리 플랫폼 /Shigella 종

접착제 테이프 기반의 샘플링 및 형광의 조합 현장에서 하이브 리다이 제이션 살모넬라균* 신선한 농산물에 대한*