Abbiamo gentilmente Ringraziamo Sabine Reckinger per l&#39;assistenza tecnica eccellente e di sostegno.

1. preparati <ol><li> raccolta dei campioni Nota: Il metodo agitatore magnetico può essere utilizzato per i campioni muscolari singole o in pool. <ol><li> Raccogliere campioni dai siti di predilezione appropriati e in una quantità appropriata 9. Fare riferimento ai requisiti nazionali o alle raccomandazioni del TIC, UIE o ISO. <ol><li> Per l&#39;Unione europea, ad esempio, prendere un campione di 1 g da un pilastro del diaframma nella zona di transizione verso la parte tendinea dei suini domestici. Assicurarsi che tutti i campioni muscolari sono privi di tutto il grasso e fascia. </li></ol></li><li> Se la lingua è testato, rimuovere lo strato superficiale prima del test. </li><li> Fare attenzione se i campioni sono congelati, come la maggior parte delle larve di Trichinella non sono congelare resistente e Srotolare dopo la morte, sono meno resistenti alla digestione e tendono ad aderire alle pareti del contenitore, con conseguente diminuzione della sensibilità del test. Nota: Se congelato, raddoppiare la dimensione del campione a Lest e aumentare il tempo di sedimentazione (vedi sotto). </li></ol></li><li> Preparazione di liquido di digestione <ol><li> Aggiungere 25% HCl (16 ± 0,5 mL) per 2 L di acqua di rubinetto preriscaldato a 46 - 48 ° C in un bicchiere di vetro 3 L. Troppo basso di un risultato di temperatura in incompleta digestione; troppo elevato di temperatura disattiva le proprietà enzimatiche della pepsina. </li><li> Inserire una barra di agitazione nel becher, e agitare la soluzione su una piastra preriscaldata (46 - 48 ° C). </li><li> Aggiungere 10 ± 0,2 g di pepsina (1: 10.000 NF, 1: 12.500 BP, 2.000 FIP) alla soluzione acida. Nota: La qualità della pepsina è della massima importanza e l&#39;attività enzimatica devono essere certificati dal produttore. Per motivi di sicurezza di laboratorio e per mantenere l&#39;attività della pepsina, la sequenza di aggiunta componenti fluidi digestione deve essere rispettata. </li></ol></li><li> Preparazione del campione muscolare <ol><li> Tritare fino a 100 g di campioni di muscolo in un frullatore o macinino. Per facilitare blending, aggiungere 2 ml preriscaldata acqua per i campioni e si fondono alla massima velocità per 2 - 3 s. </li><li> Prima della seconda fusione, aprire il frullatore e trasferire qualsiasi campione di muscolo in cima miscelazione ciotola margine del bordo di fondo e ripetere la miscelazione. Continuare la miscelazione con esplosioni di 2 - 3 s fino a quando non frammenti visibili di carne rimangono. Nota: Troppo poco miscelazione può causare digestione incompleta, mentre troppa fusione può danneggiare il Trichinella larve presenti nei campioni 6. </li></ol></li></ol> 2. procedura <ol><li> Muscle campione digestione <ol><li> Trasferire 1 L del fluido di digestione in un cilindro. Trasferire la carne macinata nel becher e diffondere nel fluido di digestione con un cucchiaio o forchetta. Sciacquare la ciotola coperchio frullatore, lama e frullatore con 500 ml di succo di digestione preriscaldato nel 3 L bicchiere. Nota: risciacquo incompleta può comportare la perdita di sensitivity. </li><li> Coprire il becher con foglio di alluminio e mantenere una temperatura costante 44 - 46 ° C e controllare con un termometro. </li><li> Mescolare il succo di digestione per 30 minuti per creare un vortice profondo senza spruzzi fino a quando le particelle di carne scompaiono. A seconda del tipo di carne provati (per esempio carne di animali selvatici), aumentare il tempo di digestione fino ad un massimo di 60 min. </li></ol></li><li> Filtrazione e sedimentazione del fluido di digestione <ol><li> Per determinare la quantità di tessuto non digerito, regolare la scala a zero, pesare il setaccio prima dell&#39;uso, e annotare il suo peso. Il setaccio deve essere pulita e priva di eventuali particelle di tessuto, che potrebbero ostacolare le larve di Trichinella raggiungere l&#39;imbuto di sedimentazione. Controllare che l&#39;imbuto di separazione è livellato in senso verticale. </li><li> Dopo la digestione, con attenzione versare il liquido di digestione attraverso un setaccio di 180 micron in un imbuto di vetro di separazione. La larghezza del imbuto di vetro di separazione non deve be più grande di 55% della lunghezza per consentire una buona larva sedimentazione. Fare attenzione per evitare qualsiasi troppo pieno. </li><li> Per evitare la perdita di sensibilità, sciacquare il bicchiere di vetro e il setaccio con circa 200 ml di acqua di rubinetto da una bottiglia di lavaggio squeeze e trasferire l&#39;acqua di risciacquo nell&#39;imbuto bicchiere sedimentazione. Fare attenzione a lavare con cura i bordi del 3 L bicchiere. Sollevare il setaccio e lavare l&#39;area sotto il setaccio accuratamente. </li></ol></li><li> Determinazione della quantità di tessuto non digerito Nota: A causa di errori nella esecuzione del metodo, tessuto muscolare può rimanere sul setaccio, nonché fascia e tessuto connettivo che sono indigeribili. La quantità di tessuto non digerito è determinato durante la prima fase di sedimentazione 10 min (vedere 2.5). Questo permette circa 30 minuti per il setaccio a secco, come l&#39;acqua residua può influenzare il peso determinato del tessuto non digerito. <ol><li> Mettere un tovagliolo di carta su una scala, e pesare il setaccio con le undigestessuti TED. </li><li> Sottrarre il peso del setaccio prima della filtrazione dal peso del setaccio con i tessuti non digerite. Il processo di digestione è considerato soddisfacente se non più del 5% del peso del campione iniziale rimane sul setaccio (cioè 5 g / 100 g materiale di partenza). </li><li> Se la quantità di tessuto non digerito supera il 5%, ripetere il test utilizzando campioni di muscolo freschi. Se il tessuto rimanente è prevalentemente costituito da tessuto muscolare non digerito e campioni freschi non sono disponibili, digerire ancora i resti non digeriti ed esaminare in aggiunta ai campioni originali. </li></ol></li><li> La sedimentazione del fluido di digestione <ol><li> Mantenere il fluido di digestione filtrato nell&#39;imbuto separatore per 30 min. Se lasciati indisturbati, le larve Trichinella si depositerà sul fondo dell&#39;imbuto. </li><li> Se si utilizzano campioni congelati, aumentare il tempo di sedimentazione a un massimo di 60 min. </li><li> Una volta che la sedimentazione è completa, aprire completamente il rubinettodell&#39;imbuto separatore di lasciare almeno 40 ml di succo di digestione rapidamente in un recipiente cilindrico (80 mL se campioni di muscolo erano stati precedentemente congelati). </li><li> Per prima cosa, la metà del fluido nel cilindro e quindi aprire completamente il rubinetto nella direzione opposta per consentire 10 ml di succo di digestione per passare. Infine, aprire il rubinetto in senso opposto per altri 10 mL. Questa procedura garantisce che larve di Trichinella non sono intrappolati nel rubinetto. Nota: è necessaria la velocità sufficiente per evitare le larve che rimane nella imbuto separatore, diminuendo la sensibilità. </li></ol></li><li> La sedimentazione del fluido di digestione nel cilindro <ol><li> Lasciare il sedimento nel cilindro per 10 minuti per permettere alle larve di sedimenti. Rimuovere 30 mL surnatante mediante aspirazione con una pipetta senza disturbare il sedimento 10 mL. </li><li> Per ridurre la quantità di fibre di tessuto nel campione, aggiungere 30 ml di acqua di rubinetto per il sedimento e lasciar riposare per altri 10 ma. Ripetere fino a quando il liquido è chiaro. </li><li> Rimuovere il surnatante e trasferire i 10 ml lavato sedimenti di una capsula di Petri a griglia o vaschetta per il conteggio delle larve. Lavare il cilindro con 10 mL di acqua di rubinetto e quindi aggiungere l&#39;acqua al campione. Nota: Come grandi quantità di detriti nel campione possono impedire l&#39;identificazione delle larve Trichinella (Figura 1), ulteriori fasi di lavaggio devono essere eseguite, se necessario. </li></ol></li><li> Esame microscopico <ol><li> Utilizzare trichinoscopio o stereomicroscopio con una sorgente luminosa sottostadio trasmessa di intensità regolabile da 15 a 20 ingrandimenti per esaminare i campioni immediatamente dopo le fasi di lavaggio. </li><li> Dopo aver versato il campione nella capsula di Petri con griglia, esaminare il piatto / bacino sistematicamente griglia per griglia. Se non si trovano le strutture sospette, spostare delicatamente il liquido nella scatola di Petri con griglia o vaschetta per il conteggio delle larve in modo circolare per consentire a qualsiasi Trichinella larvae, che sono stati potenzialmente trascurato, si accumuli nel centro del piatto Petri. Ripetere l&#39;esame. </li><li> Se viene trovata una struttura di sospetto, aumentare l&#39;ingrandimento di 40 - 100X. Rimuovere larve di Trichinella dal piatto / vasca con una pipetta e raccogliere in un tubo con etanolo al 90%. </li><li> Dopo il piatto completo è stato esaminato, ripetere la procedura partendo dal leggero scuotimento del piatto / bacino. Ripetere la procedura almeno tre volte o fino a quando non più larve si trovano. </li><li> Contare il numero di larve. Correlare alla quantità di tessuto muscolare testati e presente come larve per grammo (GPL). </li><li> Se troppe le larve sono presenti nel succo di digestione per determinare il numero delle larve in modo affidabile, restituire il fluido contenente le larve al cilindro di misura, sciacquare con acqua di rubinetto da una bottiglia di lavaggio di compressione, e lasciare le larve di depositarsi sul fondo. </li><li> Dopo un tempo di sedimentazione 10 min, ridurre il supernatante in un volume definito (ad esempio10 mL). Per determinare il volume esatto, trasferire il surnatante in un nuovo cilindro con una pipetta. </li><li> Sospendere larve omogeneamente nel fluido da agitazione vigorosa. Durante il movimento di agitazione, aggiungere 12 gocce di 20 microlitri di sospensione delle larve su una capsula di Petri. </li><li> Esaminate ogni goccia al microscopio. Determinare il numero di larve in 240 ml ed eliminare il più alto e il più basso conteggio. Estrapolare il numero di larve al volume totale (ad esempio 10 ml) del surnatante. Nota: La qualità della stereomicroscopio è di fondamentale importanza per l&#39;identificazione di larve di Trichinella. </li><li> Quando le larve sono raccolti in un tubo da una pipetta, verificare attentamente che le larve non ha attaccato sulla parete pipetta, ma vengono trasferiti al tubo. Nota: Trichinella Positive risultati di campioni aggregati devono essere ricondotte dalla piscina alla carcassa di origine. Qui, la dimensione del pool dovrebbe progressivamente diminuire fino a quando la carcassa positivo è identificata. La dimensione del campione può essere aumentata durante questo processo per aumentare la sensibilità. Se l&#39;esame di un campione aggregato produce un risultato positivo o incerto, un ulteriore campione di 20 g è preso da ciascun suino. I 20 g di campioni provenienti da cinque suini vengono raggruppati ed esaminati con il metodo descritto. In questo modo saranno esaminati campioni provenienti da 20 gruppi di cinque suini. Quando viene rilevato Trichinella in un campione composito da cinque suini, campioni di 20 g vengono raccolti dai singoli suini del gruppo e ciascuno viene esaminato separatamente fino a quando viene rilevata la carcassa positiva di origine. </li></ol></li></ol>

<ol>
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Parasitol. 194, 121-124 (2013).</li><li>Pozio, E., La Rosa, ., G, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PCR-derived+methods+for+the+identification+of+Trichinella+parasites+from+animal+and+human+samples.">PCR-derived methods for the identification of Trichinella parasites from animal and human samples.</a> Methods Mol. Biol. 216, 299-309 (2003).</li></ol>

Gli autori dichiarano di non avere interessi finanziari concorrenti.

Sebbene il metodo agitatore magnetico può essere facilmente eseguita, non strettamente aderente ai dettagli tecnici conduce alla sensibilità insufficiente, mettendo così in pericolo la salute dei consumatori. I punti critici di controllo sono stati evidenziati nel testo di cui sopra. Inoltre, l&#39;uso di attrezzature adeguate è fondamentale per il buon esito del test. Tutte le navi devono essere di punte di vetro e pipette rivestite con silicone per ridurre l&#39;aderenza delle larve in superficie. La sensibilità del metodo di digestione dipende dalla densità larvale nei muscoli e la quantità di campione di muscolo testato. Per una densità larvale di 3 - 5 lpg di tessuti muscolari, è stata riportata una sensibilità del 100%, ma inferiore 1 lpg la sensibilità è scesa al 40% 13. A seconda della specie ospite animali esaminate, la sensibilità del test può essere migliorata aumentando la quantità di campione usato. l&#39;infection onere di fauna selvatica è solitamente basso, campioni di conseguenza più grandi dimensioni vengono utilizzati 14. I siti di predilezione variano anche tra gli animali ospiti. Qui, la digeribilità inferiore alcuni tessuti muscolari come la lingua deve essere presa in considerazione, che può anche provocare campione più taglie 15. Inoltre, è importante comprendere che il metodo agitatore magnetico non include controlli interni. Pertanto, la gestione garanzia di qualità dal campionamento alla documentazione è essenziale per ottenere risultati accurati e precisi. La qualità delle prestazioni del laboratorio per rilevare larve di Trichinella nei campioni di muscolo deve essere monitorata dalla partecipazione regolare di ogni analista in prove di competenza. Ulteriori limitazioni del metodo sono che la fase di identificazione finale delle larve muscolare al microscopio è molto soggettiva e heaVily dipende dalla conoscenza della morfologia larvale dall&#39;analista esaminando. Un metodo alternativo interessante per aggirare questo problema è il metodo agitatore magnetico / isolamento mediante filtraggio seguito da rilevamento larve mediante un test di agglutinazione al lattice. Tuttavia, secondo la legislazione UE questo metodo è considerato solo equivalente per la sperimentazione di carni di suini domestici, ma non per gli animali che sono a più alto rischio di infezione, come cinghiale 4. L&#39;identificazione dell&#39;antigene larvale con anticorpi monoclonali rende il test più obiettivo, ma nega il laboratorio la possibilità di determinare il numero di larve per grammo di carne 16. Ulteriori variazioni del metodo agitatore magnetico comprendono la tecnica metodo / sedimentazione digestione di campioni aggregati assistito meccanicamente, lo scavo campione composito assistito meccanicamenteMetodo estion / sulla tecnica di isolamento del filtro, e il metodo di digestione automatica per campioni aggregati tecnica fino a 35 g. Queste tecniche sono tutti basati sulla digestione artificiale della carne e la visualizzazione e conteggio delle larve di Trichinella, ma differiscono per l&#39;apparecchiatura utilizzata per le fasi di filtrazione e sedimentazione. Le larve isolato può essere ulteriormente identificato a livello di specie da un test molecolare (ad esempio, multiplex PCR) 17. Secondo la legislazione UE, tutti i campioni positivi devono essere trasmessi al laboratorio nazionale di riferimento o al EURLP per la determinazione delle specie Trichinella.

I nematodi del genere Trichinella possono essere rilevati nei muscoli striati di carnivori e onnivori mammiferi, uccelli e rettili in tutto il mondo. Questi nematodi zoonotici possono raggiungere gli esseri umani quando crudo o carne semi-prime e prodotti di carne derivati ​​da suini, cavallo e selvaggina vengono ingeriti. Questo zoonosi può essere una grave malattia negli esseri umani caratterizzati da segni e sintomi patognomonici, ad esempio, diarrea, febbre, edema periorbitale e mialgia e le possibili complicazioni, come la miocardite, malattia tromboembolica e l&#39;encefalite 1. Trichinella spiralis è l&#39;agente eziologico più diffusa di infezione Trichinella negli animali selvatici e domestici e provoca la maggior parte delle infezioni umane in tutto il mondo. In Europa, Nord e West Africa e Asia occidentale, Trichinella britovi è un&#39;altra fonte di infezioni umane. Inoltre, altri dieci taxa sono meno comunemente riportati come causale<html> agenti della malattia umana e si trovano in diverse regioni del mondo, di solito in animali selvatici 2. Oltre agli animali selvatici come cinghiali, orsi, trichechi e tassi, carne di maiale rappresenta la più importante fonte di infezione umana in tutto il mondo. Il modo migliore per prevenire la trichinellosi è quello di astenersi dal mangiare prodotti di carne cruda e per cucinare qualsiasi tipo di carne, soprattutto carne gioco a temperature sicure (&gt; 65 ° C per 1 minuto, vale a dire per cambiare il colore della carne dal rosa al marrone nel nucleo della prodotti a base di carne) 3. L&#39;Unione europea e USDA hanno specificato di congelamento e tempi di cottura e le temperature per i prodotti di carne di maiale che possono essere utilizzati per uccidere T. spiralis larve nella carne 4, 5. Inoltre, le raccomandazioni per l&#39;inattivazione di Trichinella nella carne e derivati sono stati pubblicati dalla Commissione internazionale sulla Trichinellosi&quot;xref&quot;&gt; 6. In Europa, oltre all&#39;introduzione di condizioni di stabulazione controllata in allevamenti suini commerciali in cui il rischio di infezione da Trichinella è trascurabile, la prevenzione di trichinellosi umana si basa su analisi di laboratorio dei campioni di muscolo da animali sensibili 4. Per motivi di sicurezza alimentare, i saggi di digestione sono le uniche procedure affidabili per la rilevazione diretta di larve di Trichinella nella carne 3, 7. Anche se ci sono diverse varianti del saggio di digestione, il metodo agitatore magnetico è il metodo accettato internazionalmente riferimento 3, 4, 7. Questo test si basa sul rilevamento di larve di Trichinella nei tessuti muscolari striate. Dopo la digestione enzimatica di campioni di muscolo e successive fasi di filtrazione e sedimentazione, Trichinella larve sono identificati al microscopio. A seconda obblighi commerciali e la legislazione nazionale, ci sono una moltitudine di piccole variazioni nel protocollo generale del metodo agitatore magnetico. Qui, i dettagli tecnici si basano su requisiti UE 4, le specifiche ISO 8, linee guida ICT 6, e l&#39;esperienza del laboratorio di riferimento dell&#39;Unione europea per i Parassiti (EURLP) e il laboratorio tedesco di riferimento per Trichinella.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1019">
	<tbody>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:220px;">Knife,Scissors, Tweezers&#160;</td>
			<td style="width:356px;"></td>
			<td style="width:80px;"></td>
			<td style="width:363px;">Cutting samples and removing non-digestible tissue</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:220px;">Blender&#160;</td>
			<td style="width:356px;"></td>
			<td></td>
			<td style="width:363px;">With a sharp chopping blade</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:220px;">Magnetic stirrer</td>
			<td style="width:356px;"></td>
			<td></td>
			<td style="width:363px;">With thermostatically controlled heating plate</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:220px;">Stirring Rod</td>
			<td style="width:356px;"></td>
			<td></td>
			<td style="width:363px;">Teflon-coated, approximately 5 cm long</td>
		</tr>
		<tr height="66">
			<td height="66" style="height:66px;width:220px;">Conical glass separation funnel</td>
			<td style="width:356px;"></td>
			<td></td>
			<td style="width:363px;">Capacity of at least 2 litres, preferably fitted with Teflon safety plugs. The width should not be larger than 55% of the length to allow a good larva sedimentation</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:220px;">Stands, rings and clamps</td>
			<td style="width:356px;"></td>
			<td></td>
			<td style="width:363px;"></td>
		</tr>
		<tr height="45">
			<td height="45" style="height:45px;width:220px;">Sieve</td>
			<td style="width:356px;"></td>
			<td></td>
			<td style="width:363px;">Mesh size 180 microns, external diameter 11 cm, with stainless steel mesh</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:220px;">Funnel</td>
			<td style="width:356px;"></td>
			<td></td>
			<td style="width:363px;">Internal diameter not less than 12 cm, to support the sieves</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:220px;">Glass beaker</td>
			<td style="width:356px;"></td>
			<td></td>
			<td style="width:363px;">Capacity 3 litres</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:220px;">Glass measuring cylinder</td>
			<td style="width:356px;"></td>
			<td></td>
			<td style="width:363px;">Capacity 50 to 100 ml, or centrifuge tube</td>
		</tr>
		<tr height="46">
			<td height="46" style="height:46px;width:220px;">Stereo-microscope</td>
			<td style="width:356px;"></td>
			<td></td>
			<td style="width:363px;">With a substage transmitted light source of adjustable intensity or trichinoscope with a horizontal table</td>
		</tr>
		<tr height="66">
			<td height="66" style="height:66px;width:220px;">Petri dishes</td>
			<td style="width:356px;"></td>
			<td></td>
			<td style="width:363px;">9 cm diameter, marked on their undersides into 10 &#215; 10 mm square examination areas using a pointed instrument or a larval counting basin for the tricinoscope</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:220px;">Aluminium foil</td>
			<td style="width:356px;"></td>
			<td></td>
			<td style="width:363px;">Alternatively a lid to cover the beakers</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:220px;">25 % hydrochloric acid</td>
			<td style="width:356px;"></td>
			<td></td>
			<td style="width:363px;"></td>
		</tr>
		<tr height="100">
			<td height="100" style="height:100px;width:220px;">Pepsin</td>
			<td style="width:356px;"></td>
			<td></td>
			<td style="width:363px;">Strength: 1:10 000 NF (US National Formulary) corresponding to 1:12 500 BP (British Pharmacopoeia) and to 2 000 FIP (F&#233;d&#233;ration internationale de pharmacie), or stabilised liquid pepsin with minimum 660 European Pharmacopoeia units/ml</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:220px;">Ethanol</td>
			<td style="width:356px;"></td>
			<td></td>
			<td style="width:363px;">70-90% ethyl alcohol</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:220px;">Tap water</td>
			<td style="width:356px;"></td>
			<td></td>
			<td style="width:363px;">Heated to 46-48 &#176;C before use</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:220px;">Balance</td>
			<td style="width:356px;"></td>
			<td></td>
			<td style="width:363px;">Accurate to at least 0.1 g</td>
		</tr>
		<tr height="45">
			<td height="45" style="height:45px;width:220px;">Metal tray</td>
			<td style="width:356px;"></td>
			<td></td>
			<td style="width:363px;">Capacity 10 to 15 litres, to collect the remaining digestive juice</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:220px;">Pipettes and pipette holder</td>
			<td style="width:356px;"></td>
			<td></td>
			<td style="width:363px;">Different sizes (1, 10 and 25 ml)</td>
		</tr>
		<tr height="47">
			<td height="47" style="height:47px;width:220px;">Thermometer&#160;</td>
			<td style="width:356px;"></td>
			<td></td>
			<td style="width:363px;">Accurate to 0.5 &#176;C, temperature range at least from 20 &#176; C to 70 &#176; C</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:220px;">Siphon&#160;</td>
			<td style="width:356px;"></td>
			<td></td>
			<td style="width:363px;">For tap water</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

magnetic stirrer method for the detection of trichinella larvae in muscle samples

La trichinellosi è una malattia debilitante in esseri umani ed è causata dal consumo di carne cruda o poco cotta di animali infettati con le larve di nematodi del genere Trichinella. Le fonti più importanti di infezioni umane in tutto il mondo sono selvaggina e prodotti di carne di maiale o di maiale. In molti paesi, la prevenzione di trichinellosi umana si basa sulla individuazione di animali infetti mediante digestione artificiale dei campioni di muscolo da carcasse animali sensibili. Esistono diversi metodi basati sulla digestione della carne ma il metodo agitatore magnetico è considerato il gold standard. Questo metodo consente l&#39;individuazione di Trichinella larve al microscopio dopo la digestione enzimatica di campioni di muscolo e successive fasi di filtrazione e sedimentazione. Anche se questo metodo non richiede attrezzature speciali e costose, controlli interni non possono essere utilizzati. Pertanto, la gestione della qualità rigorosa dovrebbe essere applied durante tutta la prova. Lo scopo del presente lavoro è quello di fornire istruzioni di manipolazione dettagliate e punti critici di controllo del metodo gli analisti, sulla base dell&#39;esperienza del laboratorio di riferimento dell&#39;Unione europea per i parassiti e il Laboratorio Nazionale di riferimento della Germania per Trichinella.

<html> Dopo la digestione, la forma delle larve muscolare infettivo può variare, rendendo più difficile l&#39;identificazione. Forme tipiche includono larve strettamente arrotolato, larve leggermente arrotolata o a forma di C o larve completamente srotolato (Figure 2B - 2C). Il numero di larve trovato per grammo può variare considerevolmente e può variare da una larva a qualche centinaio larve. La morfologia della larva muscolare infettivo è mostrato nella Figura 2A. Trichinella larve sono 0,7 a 1,5 mm e circa 0,3 mm di larghezza. L&#39;esofago è stretta e ha una fine leggermente arrotondata. La cuticola è liscia. Nella metà anteriore della cavità del corpo, il stichosome, una struttura costituita da un lungo tubo sottile circondata da una fila di 45 a 55 grandi cellule (stichocytes), può essere osservato. Il retto è anche arrotondata senza sporgenze o appendici 10, 11. t &quot;&gt; altre strutture, oltre larve di Trichinella, possono essere trovati dopo la digestione muscolare Alcuni esempi sono riportati nelle figure 3A -.. 3F Gli animali selvatici sono spesso infettati con altri parassiti o campioni di muscolo disponibili per i test sono contaminati durante il processo di eviscerazione da animato o strutture inanimate / organismi. la lunghezza delle larve, l&#39;aspetto delle estremità anteriore e posteriore e la presenza della guida stichosome di discriminare tra i diversi generi nematode 12. <img alt="Figura 1" src="/files/ftp_upload/55354/55354fig1.jpg" /> Figura 1: esame microscopico di larve di Trichinella Dopo (A) insufficiente e (B) adeguato risciacquo passi. Barre di scala indicano 100 micron. <a href="https://ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/55354/55354fig1large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare un grande ve</a>rsion di questa figura. <img alt="figura 2" src="/files/ftp_upload/55354/55354fig2.jpg" /> Figura 2: Morfologia del infettiva larve di Trichinella Mostrando il retto, Stichosome e l&#39;esofago della larva (A). Possibili forme delle larve muscolare dopo digestione mostra (B) strettamente avvolti e leggermente arrotolati movimento larve e (C) srotolato larve. Barre di scala indicano 100 micron. <a href="https://ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/55354/55354fig2large.jpg" target="_blank">Clicca qui per vedere una versione più grande di questa figura.</a> <img alt="Figura 3" src="/files/ftp_upload/55354/55354fig3.jpg" /> Figura 3: Esempi di risultati in secondo piano dopo la digestione di Muscle Campioni con il metodo agitatore magnetico. (A) capelli setole-comelombrico trovato nei cinghiali; (B) Alaria alata di cinghiale; (C) delle fibre muscolari di cinghiale; (D) Metastrongylus sp. di cinghiale; Fibra (E) impianto trovato in cinghiale (F): Toxocara sp. larva di cinghiale. Barre di scala indicano 100 micron. <a href="https://ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/55354/55354fig3large.jpg" target="_blank">Clicca qui per vedere una versione più grande di questa figura.</a>

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Magnetic Stirrer Method for the Detection of Trichinella Larvae in Muscle Samples

La prevenzione della trichinellosi umana in molti paesi del mondo si basa su analisi di laboratorio di campioni muscolari di animali sensibili con metodi di digestione, le cui modalità agitatore magnetico è considerato il gold standard.

Metodo dell&#39;agitatore magnetico per la rilevazione di<em&gt; Trichinella</em&gt; Le larve in campioni di muscolo

Trichinellosis is a debilitating disease in humans and is caused by the consumption of raw or undercooked meat of animals infected with the nematode ...

magnetic-stirrer-method-for-detection-trichinella-larvae-muscle

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Magnetic Stirrer Method for the Detection of Trichinella Larvae in Muscle Samples

28.5K Views.  Federal Institute for Risk Assessment.  La prevenzione della trichinellosi umana in molti paesi del mondo si basa su analisi di laboratorio di campioni muscolari di animali sensibili con metodi di digestione, le cui modalità agitatore magnetico è considerato il gold standard. 

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Combination of Adhesive-tape-based Sampling and Fluorescence in situ Hybridization for Rapid Detection of Salmonella on Fresh Produce

This protocol describes a simple approach for adhesive-tape-based sampling of tomato and other fresh produce surfaces, followed by on-tape fluorescence in situ hybridization (FISH) for rapid culture-independent detection of Salmonella spp. Cell-charged tapes can also be placed face-down on selective agar for solid-phase enrichment prior to detection. Alternatively, low-volume liquid enrichments (liquid surface miniculture) can be performed on the surface of the tape in non-selective broth, followed by FISH and analysis via flow cytometry. To begin, sterile adhesive tape is brought into contact with fresh produce, gentle pressure is applied, and the tape is removed, physically extracting microbes present on these surfaces. Tapes are mounted sticky-side up onto glass microscope slides and the sampled cells are fixed with 10% formalin (30 min) and dehydrated using a graded ethanol series (50, 80, and 95%; 3 min each concentration). Next, cell-charged tapes are spotted with buffer containing a Salmonella-targeted DNA probe cocktail and hybridized for 15 - 30 min at 55&deg;C, followed by a brief rinse in a washing buffer to remove unbound probe. Adherent, FISH-labeled cells are then counterstained with the DNA dye 4',6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) and results are viewed using fluorescence microscopy. For solid-phase enrichment, cell-charged tapes are placed face-down on a suitable selective agar surface and incubated to allow in situ growth of Salmonella microcolonies, followed by FISH and microscopy as described above. For liquid surface miniculture, cell-charged tapes are placed sticky side up and a silicone perfusion chamber is applied so that the tape and microscope slide form the bottom of a water-tight chamber into which a small volume (&le; 500 &mu;L) of Trypticase Soy Broth (TSB) is introduced. The inlet ports are sealed and the chambers are incubated at 35 - 37&deg;C, allowing growth-based amplification of tape-extracted microbes. Following incubation, inlet ports are unsealed, cells are detached and mixed with vigorous back and forth pipetting, harvested via centrifugation and fixed in 10% neutral buffered formalin. Finally, samples are hybridized and examined via flow cytometry to reveal the presence of Salmonella spp. As described here, our "tape-FISH" approach can provide simple and rapid sampling and detection of Salmonella on tomato surfaces. We have also used this approach for sampling other types of fresh produce, including spinach and jalape&ntilde;o peppers.

Combination of Adhesive-tape-based Sampling and Fluorescence in situ Hybridization for Rapid Detection of Salmonella on Fresh Produce

This protocol describes a simple adhesive-tape-based approach for sampling of tomato and other fresh produce surfaces, followed by rapid whole cell detection of Salmonella using fluorescence in situ hybridization (FISH).

Combinazione di nastro adesivo a base di campionamento e di fluorescenza In situ</emIbridazione> per il rilevamento rapido di Salmonella Su prodotti freschi

This protocol describes a simple approach for adhesive-tape-based sampling of tomato and other fresh produce surfaces, followed by on-tape fluorescence in ...

Ricerca

Immunologia e infezioni

Use of Fluorescent Immuno-Chemistry for the detection of Edwardsiella ictaluri in channel catfish (I. punctatus) samples

While Edwardsiella ictaluri is a major pathogen of channel catfish Ictalurus punctatus and has been discovered nearly 
three decades ago 1,2, so far, to the best of these authors' knowledge, no method has been developed to allow for the in situ visualization of the 
bacteria in histological sections.
While bacterial localization has been determined in vivo in previous studies using plate counts 3, radiometric labeled 4, 
or bioluminescent bacteria 5, most of these studies have only been performed at the gross organ level, with one exception 6. This limitation 
is of particular concern because E. ictaluri has a complex infection cycle 1,7, and it has a variety of virulence factors 8,9. 
The complex interaction of E. ictaluri with its host is similar in many respects to Salmonella typhi 10, which is in the same taxonomic family.
Here we describe a technique allowing for the detection of bacteria using indirect immuno-histochemistry using the monoclonal Ed9 antibody described by Ainsworth et al.11.
Briefly, a blocking serum is applied to paraffin embedded histological sections to prevent non-specific biding. Then, the 
sections are incubated with the primary antibody: E. ictaluri specific monoclonal antibody Ed9. Excess antibodies are rinsed away and the FitC 
labeled secondary antibodies are added. After rinsing, the sections are mounted with a fluorescent specific mounting medium. 
This allowed for the detection of E. ictaluri in situ in histological sections of channel catfish tissues.

Use of Fluorescent Immuno-Chemistry for the detection of Edwardsiella ictaluri in channel catfish I. punctatus samples

Here we describe a procedure allowing the labeling of Edwardsiella ictaluri in situ in histological sections from channel catfish Ictalurus punctatus using indirect immunohistochemistry with monoclonal antibodies Ed9 as a primary, and fluorescent FitC labeled antibodies as a secondary. This allowed for the detection of the bacterium using fluorescent microscopy.

L&#39;uso di Immuno-fluorescenza Chimica per il rilevamento di Edwardsiella ictaluri In pesce gatto di canale ( I. punctatus) I campioni

While Edwardsiella ictaluri is a major pathogen of channel catfish Ictalurus punctatus and has been discovered nearly 
three decades ago 1,2, so far, to ...

Multiplex Detection of Bacteria in Complex Clinical and Environmental Samples using Oligonucleotide-coupled Fluorescent Microspheres

Bacterial vaginosis (BV) is a recurring polymicrobial syndrome that is characterized by a change in the "normal" microbiota from Lactobacillus-dominated to a microbiota dominated by a number of bacterial species, including Gardnerella vaginalis, Atopobium vaginae, and others1-3. This condition is associated with a range of negative health outcomes, including HIV acquisition4, and it can be difficult to manage clinically5. Furthermore, diagnosis of BV has relied on the use of Gram stains of vaginal swab smears that are scored on various numerical criteria6,7. While this diagnostic is simple, inexpensive, and well suited to resource-limited settings, it can suffer from problems related to subjective interpretations and it does not give a detailed profile of the composition of the vaginal microbiota8. Recent deep sequencing efforts have revealed a rich, diverse vaginal microbiota with clear differences between samples taken from individuals that are diagnosed with BV compared to those individuals that are considered normal9,10, which has resulted in the identification of a number of potential targets for molecular diagnosis of BV11,12. These studies have provided a wealth of useful information, but deep sequencing is not yet practical as a diagnostic method in a clinical setting. We have recently described a method for rapidly profiling the vaginal microbiota in a multiplex format using oligonucleotide-coupled fluorescent beads with detection on a Luminex platform13. This method, like current Gram stain-based methods, is rapid and simple but adds the additional advantage of exploiting molecular knowledge arising from sequencing studies in probe design. This method therefore provides a way to profile the major microorganisms that are present in a vaginal swab that can be used to diagnose BV with high specificity and sensitivity compared to Gram stain while providing additional information on species presence and abundance in a semi-quantitative and rapid manner. This multiplex method is expandable well beyond the range of current quantitative PCR assays for particular organisms, which is currently limited to 5 or 6 different assays in a single sample14. Importantly, the method is not limited to the detection of bacteria in vaginal swabs and can be easily adapted to rapidly profile nearly any microbial community of interest. For example, we have recently begun to apply this methodology to the development of diagnostic tools for use in wastewater treatment plants.

We describe a multiplex method for the detection of microorganisms within a sample using oligonucleotide-coupled fluorescent beads. Amplicon from all organisms within a sample is hybridized to a panel of probe-coupled beads. A Luminex or Bio-Plex instrument is used to query each bead for bead type and hybridization signal.

Rilevazione multiplex di batteri in campioni clinici complessi ed Ambientali con oligonucleotidi accoppiati microsfere fluorescenti

Bacterial vaginosis (BV) is a recurring polymicrobial syndrome that is characterized by a change in the "normal" microbiota from Lactobacillus-dominated ...

High-throughput Detection Method for Influenza Virus

Influenza virus is a respiratory pathogen that causes a high degree of morbidity and mortality every year in multiple parts of the world. Therefore, precise diagnosis of the infecting strain and rapid high-throughput screening of vast numbers of clinical samples is paramount to control the spread of pandemic infections. Current clinical diagnoses of influenza infections are based on serologic testing, polymerase chain reaction, direct specimen immunofluorescence and cell culture 1,2.
Here, we report the development of a novel diagnostic technique used to detect live influenza viruses. We used the mouse-adapted human A/PR/8/34 (PR8, H1N1) virus 3 to test the efficacy of this technique using MDCK cells 4. MDCK cells (104 or 5 x 103 per well) were cultured in 96- or 384-well plates, infected with PR8 and viral proteins were detected using anti-M2 followed by an IR dye-conjugated secondary antibody. M2 5 and hemagglutinin 1 are two major marker proteins used in many different diagnostic assays. Employing IR-dye-conjugated secondary antibodies minimized the autofluorescence associated with other fluorescent dyes. The use of anti-M2 antibody allowed us to use the antigen-specific fluorescence intensity as a direct metric of viral quantity. To enumerate the fluorescence intensity, we used the LI-COR Odyssey-based IR scanner. This system uses two channel laser-based IR detections to identify fluorophores and differentiate them from background noise. The first channel excites at 680 nm and emits at 700 nm to help quantify the background. The second channel detects fluorophores that excite at 780 nm and emit at 800 nm. Scanning of PR8-infected MDCK cells in the IR scanner indicated a viral titer-dependent bright fluorescence. A positive correlation of fluorescence intensity to virus titer starting from 102-105 PFU could be consistently observed. Minimal but detectable positivity consistently seen with 102-103 PFU PR8 viral titers demonstrated the high sensitivity of the near-IR dyes. The signal-to-noise ratio was determined by comparing the mock-infected or isotype antibody-treated MDCK cells.
Using the fluorescence intensities from 96- or 384-well plate formats, we constructed standard titration curves. In these calculations, the first variable is the viral titer while the second variable is the fluorescence intensity. Therefore, we used the exponential distribution to generate a curve-fit to determine the polynomial relationship between the viral titers and fluorescence intensities. Collectively, we conclude that IR dye-based protein detection system can help diagnose infecting viral strains and precisely enumerate the titer of the infecting pathogens.

This method describes the use of Infrared dye based imaging system for detection of H1N1 in bronchioalveolar lavage (BAL) fluid of infected mice at a high sensitivity. This methodology can be performed in a 96- or 384-well plate, requires &lt;10 &mu;l volume of test material and has the potential for concurrent screening of multiple pathogens.

High-throughput Metodo di rilevazione per il virus dell&#39;influenza

Influenza virus is a respiratory pathogen that causes a high degree of morbidity and mortality every year in multiple parts of the world. Therefore, ...

Qualitative and Quantitative Assays for Detection and Characterization of Protein Antimicrobials

Initial evaluations of large microbial libraries for potential producers of novel antimicrobial proteins require both qualitative and quantitative methods to screen for target enzymes prior to investing greater research effort and resources. The goal of this protocol is to demonstrate two complementary assays for conducting these initial evaluations. The microslide diffusion assay provides an initial or simple detection screen to enable the qualitative and rapid assessment of proteolytic activity against an array of both viable and heat-killed bacterial target substrates. As a counterpart, the increased sensitivity and reproducibility of the dye-release assay provides a quantitative platform for evaluating and comparing environmental influences affecting the hydrolytic activity of protein antimicrobials. The ability to label specific heat-killed cell culture substrates with Remazol brilliant blue R dye expands this capability to tailor the dye-release assay to characterize enzymatic activity of interest.

Here, we present protocols to rapidly screen and characterize enzymes for antimicrobial activity. The microslide diffusion assay and the dye-release assay utilize target bacterial substrates for qualitative and quantitative enzymatic activity evaluation.

Saggi qualitativi e quantitativi per il rilevamento e la caratterizzazione di proteine ​​antimicrobici

Initial evaluations of large microbial libraries for potential producers of novel antimicrobial proteins require both qualitative and quantitative methods ...

Fast and Specific Assessment of the Halogenating Peroxidase Activity in Leukocyte-enriched Blood Samples

In this paper a protocol for the quick and standardized enrichment of leukocytes from small whole blood samples is described. This procedure is based on the hypotonic lysis of erythrocytes and can be applied to human samples as well as to blood of non-human origin. The small initial sample volume of about 50 to 100 &#181;l makes this method applicable to recurrent blood sampling from small laboratory animals. Moreover, leukocyte enrichment is achieved within minutes and with low material efforts regarding chemicals and instrumentation, making this method applicable in multiple laboratory environments.
Standardized purification of leukocytes is combined with a highly selective staining method to evaluate halogenating peroxidase activity of the heme peroxidases, myeloperoxidase (MPO) and eosinophil peroxidase (EPO), i.e., the formation of hypochlorous and hypobromous acid (HOCl and HOBr). While MPO is strongly expressed in neutrophils, the most abundant immune cell type in human blood as well as in monocytes, the related enzyme EPO is exclusively expressed in eosinophils. The halogenating activity of these enzymes is addressed by using the almost HOCl- and HOBr-specific dye aminophenyl fluorescein (APF) and the primary peroxidase substrate hydrogen peroxide. Upon subsequent flow cytometry analysis all peroxidase-positive cells (neutrophils, monocytes, eosinophils) are distinguishable and their halogenating peroxidase activity can be quantified. Since APF staining may be combined with the application of cell surface markers, this protocol can be extended to specifically address leukocyte sub-fractions. The method is applicable to detect HOCl and HOBr production both in human and in rodent leukocytes.
Given the widely and diversely discussed immunological role of these enzymatic products in chronic inflammatory diseases, this protocol may contribute to a better understanding of the immunological relevance of leukocyte-derived heme peroxidases.

This protocol describes the quick enrichment of leukocytes from small blood samples for a subsequent specific determination of the halogenating peroxidase activity within the cells. The method can be applied to human and non-human material and may contribute to the evaluation of new inflammatory markers.

La valutazione rapida e specifica del alogenazione perossidasi attività in campioni di sangue leucociti arricchita

In this paper a protocol for the quick and standardized enrichment of leukocytes from small whole blood samples is described. This procedure is based on ...

Swab Sampling Method for the Detection of Human Norovirus on Surfaces

Human noroviruses are a leading cause of epidemic and sporadic gastroenteritis worldwide. Because most infections are either spread directly via the person-to-person route or indirectly through environmental surfaces or food, contaminated fomites and inanimate surfaces are important vehicles for the spread of the virus during norovirus outbreaks.
We developed and evaluated a protocol using macrofoam swabs for the detection and typing of human noroviruses from hard surfaces. Compared with fiber-tipped swabs or antistatic wipes, macrofoam swabs allow virus recovery (range 1.2-33.6%) from toilet seat surfaces of up to 700 cm2. The protocol includes steps for the extraction of the virus from the swabs and further concentration of the viral RNA using spin columns. In total, 127 (58.5%) of 217 swab samples that had been collected from surfaces in cruise ships and long-term care facilities where norovirus gastroenteritis had been reported tested positive for GII norovirus by RT-qPCR. Of these 29 (22.8%) could be successfully genotyped. In conclusion, detection of norovirus on environmental surfaces using the protocol we developed may assist in determining the level of environmental contamination during outbreaks as well as detection of virus when clinical samples are not available; it may also facilitate monitoring of effectiveness of remediation strategies.

A macrofoam based sampling methodology was developed and evaluated for the detection and quantification of norovirus on environmental hard surfaces.

Tampone Metodo di campionamento per la rilevazione di Norovirus umana sulle superfici

Human noroviruses are a leading cause of epidemic and sporadic gastroenteritis worldwide. Because most infections are either spread directly via the ...

A Method for Targeted 16S Sequencing of Human Milk Samples

Studies of microbial communities have become widespread with the development of relatively inexpensive, rapid, and high throughput sequencing. However, as with all these technologies, reproducible results depend on a laboratory workflow that incorporates appropriate precautions and controls. This is particularly important with low-biomass samples where contaminating bacterial DNA can generate misleading results. This article details a semi-automated workflow to identify microbes from human breast milk samples using targeted sequencing of the 16S ribosomal RNA (rRNA) V4 region on a low- to mid-throughput scale. The protocol describes sample preparation from whole milk including: sample lysis, nucleic acid extraction, amplification of the V4 region of the 16S rRNA gene, and library preparation with quality control measures. Importantly, the protocol and discussion consider issues that are salient to the preparation and analysis of low-biomass samples including appropriate positive and negative controls, PCR inhibitor removal, sample contamination by environmental, reagent, or experimental sources, and experimental best practices designed to ensure reproducibility. While the protocol as described is specific to human milk samples, it is adaptable to numerous low- and high-biomass sample types, including samples collected on swabs, frozen neat, or stabilized in a preservation buffer.

A semi-automated workflow is presented for targeted sequencing of 16S rRNA from human milk and other low-biomass sample types.

Un metodo per il sequenziamento del 16S mirato di campioni di latte umano

Studies of microbial communities have become widespread with the development of relatively inexpensive, rapid, and high throughput sequencing. However, as ...

Rapid, Safe, and Simple Manual Bedside Nucleic Acid Extraction for the Detection of Virus in Whole Blood Samples

The rapid diagnosis of an infection is essential for the outbreak management, risk containment, and patient care. We have previously shown a method for the rapid bedside inactivation of the Ebola virus during blood sampling for safe nucleic acid (NA) tests by adding a commercial lysis/binding buffer directly into the vacuum blood collection tubes. Using this bedside inactivation approach, we have developed a safe, rapid, and simplified bedside NA extraction method for the subsequent detection of a virus in lysis/binding buffer-inactivated whole blood. The NA extraction is directly performed in the blood collection tubes and requires no equipment or electricity. 
After the blood is collected into the lysis/binding buffer, the contents are mixed by flipping the tube by hand, and the mixture is incubated for 20 min at room temperature. Magnetic glass particles (MGPs) are added to the tube, and the contents are mixed by flipping the collection tube by hand. The MGPs are then collected on the side of the blood collection tube using a magnetic holder or a magnet and a rubber band. The MGPs are washed three times, and after the addition of elution buffer directly into the collection tube, the NAs are ready for NA tests, such as qPCR or isothermal loop amplification (LAMP), without the removal of the MGPs from the reaction. The NA extraction method is not dependent on any laboratory facilities and can easily be used anywhere (e.g., in field hospitals and hospital isolation wards). When this NA extraction method is combined with LAMP and a portable instrument, a diagnosis can be obtained within 40 min of the blood collection.

Here, we present a protocol for the rapid virus nucleic acid extraction from the virus-inactivated whole blood. The extraction is performed directly in the blood collection tubes and requires no equipment or electricity. The method is not dependent on laboratory facilities and can be used anywhere (e.g., in field hospitals).

Rapido, sicuro e semplice manuale sul comodino estrazione dell'acido nucleico per la rilevazione del Virus in campioni di sangue intero

The rapid diagnosis of an infection is essential for the outbreak management, risk containment, and patient care. We have previously shown a method for ...

A High-throughput Platform for the Screening of Salmonella spp./Shigella spp.

Fecal-oral transmission of acute gastroenteritis occurs from time to time, especially when people who handled food and water are infected by Salmonella spp./Shigella spp. The gold standard method for the detection of Salmonella spp./Shigella spp. is direct culture but this is labor-intensive and time-consuming. Here, we describe a high-throughput platform for Salmonella spp./Shigella spp. screening, using real-time polymerase chain reaction (PCR) combined with guided culture. There are two major stages: real-time PCR and the guided culture. For the first stage (real-time PCR), we explain each step of the method: sample collection, pre-enrichment, DNA extraction and real-time PCR. If the real-time PCR result is positive, then the second stage (guided culture) is performed: selective culture, biochemical identification and serological characterization. We also illustrate representative results generated from it. The protocol described here would be a valuable platform for the rapid, specific, sensitive and high-throughput screening of Salmonella spp./Shigella spp.

A High-throughput Platform for the Screening of Salmonella spp./Shigella spp.

Salmonella spp./Shigella spp. are common pathogens attributed to diarrhea. Here, we describe a high-throughput platform for the screening of Salmonella spp./Shigella spp. using real-time PCR combined with guided culture.

Una piattaforma di High-throughput per lo Screening della Salmonella spp /Shigella spp.

Fecal-oral transmission of acute gastroenteritis occurs from time to time, especially when people who handled food and water are infected by Salmonella ...