基本的なケア手順

ソース: ケイ ・ スチュワート、RLATG、RVT CMAR;ヴァレリー A. シュレーダー、RVT、RLATG。ノートルダムのノートルダム大学

マウスおよびラット生物医学的研究に使用される動物の 90% 以上を占めます。実験の結果には、これらの研究動物の適切なケアが欠かせません。これらのマウスおよびラットの大半に適用される一般的な手順がありますが、免疫不全の人などの動物のいくつかは実験のためにそれらを維持するために撮影するための追加手順を必要とします。

一般的に使用される免疫不全マウスは、自然発生した近交系マウスと遺伝子工学によって作成されているものであります。研究で使用される最初の免疫不全マウスはあった「ヌードマウス」です。Balb/c ヌード (nu) マウスは、髪と、胸腺に欠けているマウスを生産していた BALB/c コロニーの中で、1966 年に発見されました。これらの無胸腺マウス T 細胞を欠いている抑制免疫システムがあります。この動物の値は微生物感染症、免疫不全症、自己免疫の研究で使用するためすぐに発見されました。裸のマウスないほど普及して、また裸のラットがあります。裸のラット T 細胞欠損であり、末梢リンパ器官の胸腺依存領域で枯渇した細胞集団を示します。別の自然に発生する免疫欠損マウスは、重症複合免疫不全マウス (SCID) です。これらのマウスには、機能 B および T 細胞の生産を損なう欠陥があります。十分な免疫応答をマウントできない、これらのマウスはひと細胞の移植の受信者をホストとして使用できます。免疫の欠陥を持ついくつかの遺伝子組み換えマウス系統が市販されています。¹遺伝子組み換えの欠乏の重大度によって異なりますただし、免疫不全のマウスおよびラットのすべて同様に処理されます。

この原稿は、免疫と免疫不全動物のケアを説明します。動物の両方のグループの住宅、食事、環境要件、および処理について取り上げます。

住宅/ケージング

マウスやラットは、主に靴箱タイプの寝具材料を含む固体底部でケージングに収容されます。典型的な靴箱マウス ケージは、75 平方インチは最大 5 つの成体マウスのための十分なフロア スペースを提供します。ただし、実験的なデザインは、4 マウスのグループの呼び出すことができます。この場合、マウスは実験開始時に社会グループの中断を避けるために、4 つのグループで受信時に収納する必要があります。一般に、2 つの完全育てられた大人の動物の最大のことができますラット ケージングします。ラットを長期収納する場合は、彼らがペア住宅で確立されます。

ケージは静的または個別換気 (IVC)。静的ケージ ワイヤ バーふたで覆われているかまたはケージの上部は、棚の下のラックの上に定住しました。ワイヤー バー蓋の上にボンネット、またはラックの棚の上のフィルター紙のシートとして、フィルター材料がケージの上に追加されます。IVCs はケージ、ワイヤー バーふたをしケージに空気の流れを提供するラックに配置されているボンネットとして設定されます。IVCs の使用には、しばしば static としてケージが変更されるとき、ケージを変更する必要があります。

標準ケージ システムは、食品流通の水と地域のソースを提供します。水は、水のボトル、ケージの上に配置や動物のケージのコンポーネントに組み込まれてあるシッパー チューブを介して提供できます。ケージをラックにエンゲージ、動物施設全体動物のニーズを満たすために設計されている自動散水システムのシッパー チューブに水が輸送されます。ケージングは、動物の適切なケアを提供するためにきちんと準備されなければなりません。食品貯蔵用ワイヤー バーふたのセクションを使用またはいずれかのフィーダーを動物のケージ内に配置があります。食品は、動物によって汚ないように配置しなければなりません。

ケアおよび実験動物の使用のためのガイド² (以下、「ガイド」) の状態はすべてケージ実装は少なくとも 2 週間ごとを消毒する必要があります。いくつかのケージやアクセサリーは、臭気とエンクロージャ内アンモニアのレベルによって決まるより頻繁に変更する必要があります。4 つ以上の男性または女性; ごみがない限り、2 週間ごとの変更、IVCs を予定する一般的には、これらのエンクロージャは、毎週変更する必要があります。ケージを変更することは、病原体にさらされるマウスのための機会は、できるだけ頻繁として免疫欠損マウスのケージングの変更を行ってください。

ダイエット

タンパク質、炭水化物、および脂肪レベルの変化で利用できる食事療法の多くの曲があります。通常、15-19% のタンパク質、44% の炭水化物、および 4-9% の脂肪のフィードをで構成する必要があります。食品、脂肪含有量の増加は、再生を強化する繁殖コロニーに用いられます。食品は、免疫不全のマウスの汚染の源をすることができます、それはいずれかの蒸気滅菌または照射なりません。オートクレーブ処理を施した食品は、プロセスに耐えるように特別に策定する必要があります。ただし、照射プロセスでは、食料品の内容は変更されません。

水は免疫欠乏動物の汚染のもう一つの潜在的なソースです。オートクレーブまたは UV フィルターを通過する水は、ろ過によって、水を処理する必要があります。蒸気オートクレーブで水を消毒、水のボトルは、アルミ箔で覆われています。シッパー チューブとボトルの蓋は、オートクレーブ袋に個別に滅菌されています。酸性化水の pH を 2.5-3 水のボトルの細菌の成長を制御します。酸性水は、逆浸透 (RO) 水 8 リットルに 12 モル (M) 塩酸 (HCl) の 2 滴を追加することによって。濾過粒子フィルターと紫外線の光フィルターを含むシステム全体の一連の自動給水システムを使用できます。

環境

動物のケア施設内環境条件を厳密に管理する必要があります。連邦政府の規制とガイドラインは、ケアの基準を確立している、動物を使用一般の処理します。照明、温度、湿度、空気の流れは、動物の生理学的ニーズを満たすために提供されます。室温をわずかに増加の必要性を除いて免疫不全動物のパラメーター、従来の動物のものと同じです。無胸腺裸の動物には、追加の寝具および体温調節を支援する檻の中で細切り用紙タイプ ネスティング材料も必要です。

飼育室は温間 68-72 ° F 40-60% の湿度レベルを維持しなければなりません。²湿度 40% 以下はマウスやラット、収縮尾、尾の脱落につながることができるの周りのポイントを乾燥する尻尾の皮を引き起こす条件リングテールにつながります。照明サイクルは、不適切な日長または光強度によって引き起こされる動物にストレスを避けるために設定する必要があります。通常、日長が 12 時間と 12 時間外です。照明の強度は、部屋での活動に従って変わる必要があります。技術者が動物の部屋で作業しているときは、高い照明レベルを使用できます。ただし、すべての活動が終了したら照明を約 325 ルクスに低下する必要があります。²ライトはタイマーで監視システムを通じて検証サイクルする必要があります。ガイドの指示に従って、飼育室は時速 100% 新鮮な空気の 10-15 空気変更の最小必要があります。²空気変更微生物や動物の部屋の臭いを減少させます。密集飼育室、1 時間あたりの空気変更の数が増加する必要があります。

ケージ レベルで環境要因には、ケージ、水供給システム、国会内で使用される基板、ケージ型が含まれます。社会的なハウジングは科学的に正当化される場合を除き、必須または動物が他のすべてと互換性がありません。紙小屋およびネスティング材料などの環境エンリッチメントの規定は種特異的な行動を展示する動物を許可する順番のストレス レベルを減少させ、動物の全面的な福利を増加します。ネスティング材料を同じケージで複数の男性マウスの住宅補助鎮静フェロモンの飽和は、スリーピング エリアがあります。営巣地は、新しい環境に導入されている、男性の侵略を防ぐために変更するケージにきれいなケージに移動されます。³

1. 免疫 (従来の) マウスの取り扱い

それは、マウスの免疫疾患は人間に似て非常に実証されています。²これらの動物には、免疫機能が限定的で、プロシージャの処理で、これらの動物の世話を設計されているエンジニア リング コントロール、個人保護装置を使用して伝染病のリスクを最小限に抑えるため、動物の世話係と標準業務手順書;これらは、動物の接触がケージやその他の機器の汚染を軽減します。

1. 梱包から開梱: 動物の施設内で既に収容動物にリスクその他の機関または動物のベンダーから動物を受信します。、転送中に動物の輸送箱は病原体と接触して来ることができます。したがって、出荷コンテナーを開梱するときは、適切な手順を実行する必要があります。
   1. 最小限の個人保護装置 (PPE) 要件は、動物を取り扱うと手袋、きれいな白衣またはボディス クラブ、微粒子マスク、安全メガネ。
   2. ワイヤー バー蓋とバリアの上部などを含む、適切なケージを選択します。ケージは、適切な寝具とネスト材料供給べきであります。すべてケージングで準備、動物の到着前に受信側の領域に配置されます。
   3. 到着後、輸送箱は安全で配置され、温度制御ルーム。その後、損傷のコンテナーを調べます。
   4. すべての有害な病原体を破壊するコリン酸化製品、輸送用コンテナーの外側表面を消毒します。消毒液がメーカーの推奨事項に従ってボックスと接触して通常 15-30 分であることを確認します。
   5. 動物転送駅 (ATS) のコンテナーを配置します。ATS は、ユーザーおよび作業領域間真空空気の障壁を作成することによりアレルゲンの保護を提供するフード内の気流の HEPA フィルターを提供します。これは動物の毛/フケ、ケージの寝具材料の最小限の露出を保証します。一方向の空気も汚染の可能性を最小限に抑え周囲の部屋の空気から動物を保護します。
   6. 出荷用コンテナーが開かれた後は、動物の全体的な健康を評価します。怪我や病気の動物のメモしておきます。
   7. 適切なグループのサイズで組み立てられたケージに動物を配置します。グループは、スペース規制と割り当てが実験的プロトコルに従って必要があります。
   8. ワイヤー バーふた付きケージをカバーします。ワイヤーのバーふたを蓋の上の 2 つの領域を作成する分周器を保護します。
   9. 適切な食品を選択し、線バー蓋の片側に食べ物を置きます。2 番目の側は良い空気の循環のために開いたままにしておきます。
   10. 水は、水のボトルや自動散水システムを介して提供されます。水のボトルは、最近引き離されたマウスの彼ら、その水和のレベルを維持することができる使用されます。下大静脈は、自動給水ケージング、ラックに配置する前に給水チューブがかかります。
   11. ケージをラックに置き。IVCs を使用している場合は、ケージがラックに完全に従事しているし、シッパー チューブが散水システムに固定されていることを確認します。
2. 従来のマウスを変更するケージ
   1. ケージは、ATS に変更されます。ATS は、各セッションの終わりに消毒です。
   2. のみ 1 つのケージは、同時に開くことができます。
   3. 動物の部屋に取り込むケージング適切な寝具とネスト材料を準備します。ケージの数が少ないが、ATS に配置されます。
   4. 内部のシッパー チューブと IVC ケージ必要がありますシッパー チューブ内空気のデッド スペースを削除するシッパーに水を強制的に課金されます。正しく充電されると、マウスはシッパー チューブから空気を削除するに十分な圧力を提供することができるかもしれません。
   5. 最小限の個人保護装置 (PPE) 要件は、動物を取り扱うと手袋、きれいな白衣またはボディス クラブ、微粒子マスク、安全メガネ。
   6. 変更する動物のケージは、新しいケージに放置、ATS に配置されます。
   7. 動物は、手で、パッド入りの鉗子の使用いずれか転送されます。手袋には、ケージの間またはマウスのグループ間が変更されます。手袋は、ケージ間化学無毒で消毒することができます。
   8. それは、特に男性のグループは建物のためのきれいなケージへの移行支援きれいなケージにマウスの営巣地を転送する実証されています。他の強化アイテムは、新しいケージにも転送されます。
   9. 新しいケージ ケージ上部またはフィーダーを配置すると、食品が追加されます。
   10. バリア上部が新しいケージに配置され、ケージ、ラックに返されます。
   11. IVC ケージは、ラックが空気と水のバルブが従事していることを確認するに正しくドッキングする必要があります。

2. 免疫不全マウス

1. 出荷コンテナーから開梱
   1. 免疫不全動物は、生殖不能の条件の下で解凍する必要があります。免疫欠損マウスを処理するすべての個人は、蒸気滅菌ガウン、マスク、髪ボンネット、滅菌手袋を着用しなければなりません。無菌技術を使用して、すべての回は、これらの動物を渡すでください。
   2. すべての機器とケージングする必要がありますされて蒸気、紫外線で殺菌か殺菌滅菌ケージングの 2 つのオプションがあります、少なくとも 30 分間 70% エタノールに浸漬して化学的に: 標準、ラップされたケージングし蒸気滅菌、またはケージングします。照射により殺菌通常は-ベンダーによって。これらのケージは、1 つの使用、使い捨てのユニットです。
   3. 層流フードの下でマウスを操作する前に、フードは動作送風機と 70% エタノールに散布されています。フードの送風機は、無菌の環境を維持するためにすべての回でに残しておきます。各使用後フードを消毒剤を散布し、すべての破片を拭いてし、再び 70% エタノールを散布します。
   4. 理想的には、二人が免疫不全マウスの適切な受信に必要な: 無菌技術 (生殖不能の技術) を使用して動物を処理する 1 つと 1 つの汚染された項目 (非滅菌の技術者) を処理します。非滅菌の人がきれいな、長袖ガウン; を着用してください。白衣やスモック。マスク;ボンネット。フードに到達する必要滅菌室内の汚染を防ぐために滅菌手袋。
   5. 前述したように層流フードを準備します。免疫不全動物専用フードを持っていることをお勧めします。そのフードは、紫外線 (UV) 殺菌灯使用のフードの内部を滅菌するために使用できますが装備されることをお勧めします。タイマーを利用して、フードの表面が紫外線に十分な露出を持っているを確認します。
   6. ボンネットに配置されているすべての供給の外観は外側の包装を含む 70% アルコールで噴霧されている食糧、水およびケージングの。
   7. 輸送コンテナーは、ボンネットに置かれる前に塩素二酸化溶液を吹き付けています。フードでは、配置は 15-30 分のため未開封のままになります。
   8. 指定動物のハンドラーは、滅菌食品とフードの下で水を開きます。
   9. 非滅菌の技術者は、フードの下で出荷ボックスを開きます。非滅菌の技術者はケアを撮影し、フードと輸送用の箱の内側の内面との接触を避けるため必要があります。
   10. 動物のハンドラーは滅菌のケージを開き、食料とケージの上に水を置くことによってケージを準備します。マウスは出荷ボックスから削除し、滅菌ケージに配置します。
   11. 動物の条件は無菌動物のハンドラーで示されて。病気や、明らかな怪我を持っている動物が分離されます。すべてのケージ他の動物の潜在的な汚染を減らすために最後に、変化、または実験的操作をケージ動物の処理のため必要な獣医の関心が配置されるマークします。
   12. 非滅菌の人はフードから住まれたケージが削除されます。ケージは、静的のケージとして標準的なラックや IVCs として換気ラック上に配置できます。IVCs でマウスは、温度調節を支援する追加のネスト材料が提供されなければなりません。
   13. 動物のハンドラーは、動物のグループの可能な交差汚染を避けるために各出荷コンテナーの後手袋を変更ください。出荷コンテナー数は、病気が発生した場合、動物の起源を追跡するケージのカードに記録されます。
   14. 未使用の消耗品は、元のコンテナーを密封することができます提供、将来使用するため保存できます。未使用の食糧は、ルームから削除されます。
   15. マウス実験的使用前に最低一週間の順応期間を受ける必要があります。
2. ケージを免疫不全マウスの変更
   1. マウスのケージは、必要と判断した場合、少なくとも毎週 1 回、またはより頻繁に変更されます。
   2. フードの準備、ケージの準備、および人事 PPE する手順は、動物の開梱と同じです。
   3. 動物は、手で、パッド入りの鉗子の使用いずれか転送されます。指定動物のハンドラーは、手袋が破れていたり、汚染された場合、または動物が病気に表示されて場合すべて 5-10 ケージ後 reglove 必要があります。
   4. 現れる病気の動物のケージは、健康な動物の病原体や汚染物質に露出を避けるために順序を変更するケージの端に配置されます。
   5. 次のスケジュールされたケージの変更前にケージに食料や水を追加する必要がある場合は、準備のフードの下で無菌それ行う必要があります。

適切なケアと生物医学研究における動物の取扱いは、実験の結果に重要です。規制と確立されたガイドラインは、使用するプラクティスの多くを決定します。ただし、付加的な手段はマウスおよびラット日和見病原体への偶発的な暴露を軽減するために免疫不全症を持つために必要。とき慣行が確立された手順、健康に付着実験動物の福祉の充実し、より良い実験結果を達成しました。