Diversi tecnici e studenti laureati presso la Michigan State University hanno contribuito a sviluppare, perfezionare e valutare la progettazione di trappola DD nel corso degli anni, tra cui Andrea Anulewicz, Robert McDonald e Nathan Siegert. Ringraziamo James Wieferich e Jeremy Lowell (MSU) per la loro assistenza nello sviluppo di istruzioni per l'installazione di DD. Recensione di James Wieferich e Molly Robinett (MSU) una prima stesura di questo manoscritto e apprezziamo i loro suggerimenti. Joseph Francese e Damon Crook (USDA APHIS) generosamente condiviso le loro osservazioni sulla risposta EAB di sostanze volatili di colore e host. Finanziamenti per la valutazione e lo sviluppo di trappola DD è stato fornito da sovvenzioni dalla tutela della salute di foresta di USDA Forest Service, Area nord-orientale.

1. preparare il verde e il viola pannelli <ol><li>Acquire verde e viola ondulato pannelli di plastica (120 × 60 cm) per il trapping EAB da un distributore commerciale di pest gestione forniture. Usare un taglierino o coltello per segnare due linee di piega in ogni pannello tagliando parzialmente attraverso la plastica lungo le ondulazioni verticali, 40 cm dai due bordi corti del pannello. In questo modo il pannello per essere piegato in un prisma su 3 lati (ogni faccia sarà 40 x 60 cm). Pannelli sono solitamente segnati dal distributore per facilitare la piegatura, quindi questo passaggio potrebbe non essere necessario.</li>
	<li>Due coppie di trapano dei fori in ogni gruppo utilizzando un ½ pollice (1,3 cm) bit come indicato nella Figura 1. I fori 4 pollici (10 cm) dalla parte superiore del pannello e 4 pollici su entrambi i lati della piega sinistra. Forare la seconda coppia di fori 19 pollici (48 cm) dalla parte superiore del pannello e direttamente sotto i fori superiori (cioè, 4 pollici su entrambi i lati della piega sinistra).</li>
</ol> 2. Preparare il tubo in PVC <ol><li>ottenere una sezione di tubo di programma 40 cloruro di polivinile (PVC), 3 m di lunghezza e 10 cm di diametro, da un negozio di ferramenta commerciale o altro fornitore per ogni trappola. Quattro fori nel tubo in PVC, come mostrato nella Figura 2. Eseguire utilizzando un trapano di ½ pollice (1,3 cm), una coppia di fori 4 pollici (10 cm) dalla parte superiore del tubo del PVC e 3½ pollici (8,9 cm) a parte. Allineare i fori orizzontalmente.</li>
	<li>Trapano un secondo paio di fori, 3½ pollici a parte e 52 pollici (1,3 m) sotto la parte superiore del tubo, direttamente sotto la prima serie di fori.</li>
</ol> 3. Installare un T-post <ol><li>uso un post libbre per installare un t-post nella posizione desiderata. Guidare il post abbastanza profondo in modo che la flangia è appena sotto la superficie del terreno, ma non c'è nessun bisogno di andare più in profondità. Il t-post fornirà un sacco di supporto per la trappola DD, anche in venti forti. Ragazzo fili o supporti supplementari non sono necessari. Anche se il t-post non deve necessariamente essere impostata profondamente nel terreno, è una buona idea per cercare di sottoservizi o tubi interrati prima mettendo il post terra.</li>
</ol> 4. Assemblare la trappola di DD <ol><li>Fold un pannello viola in un prisma. Se i pannelli sono pre-incollati, assicurarsi che la parte adesiva è all'esterno. I due piccoli lembi attraverso le feritoie di alimentazione e utilizzare due fascette di 8 pollici (20 cm) per fissare le estremità del pannello insieme. Ripetere con un pannello verde.</li>
	<li>Sostenere il tubo in PVC orizzontalmente sopra la terra. Far scorrere il prisma viola sui tratti di tubo di PVC e giù per la serie più bassa di fori nel tubo in PVC.</li>
	<li>Feed un grande, fascetta ferma-cavo lungo 2 piedi (60 cm) orizzontalmente attraverso la parte superiore a sinistra buco nel prisma, poi attraverso la coppia di fori nel tubo in PVC e infine attraverso il foro adiacente sul lato destro del prisma. Assicurarsi che il prisma è allineato contro la parte solida del tubo di PVC che si trova tra i due fori. Chiudere e serrare la fascetta ferma-cavo, assicurandosi che la fascetta non sia attorcigliata.</li>
	<li>Alimentare una seconda fascetta grande attraverso il foro inferiore nel prisma, intorno al tubo e attraverso il foro corrispondente sul lato adiacente del prisma. Chiudere la fascetta e serrare, nuovamente avendo cura di assicurare la fascetta non attorciglia prima serrato.</li>
	<li>Far scorrere il prisma verde sui tratti di tubo di PVC e allegarlo alla serie superiore di fori nel tubo in PVC con due fascette ferma-cavo di 60 cm, seguendo la stessa procedura descritta in precedenza. Ci sarà un gap di 21 pollici (54cm) tra i prismi superiori e inferiori.</li>
</ol> 5. Applicare la colla di insetto e Set Up the Trap <ol><li>applica chiaro colla di insetto intrappolamento ai pannelli che non sono pre-incollati. Anche pre-incollate spesso richiedono ulteriore colla per catturare EAB coleotteri. Per applicare colla cattura insetti, impostare la base del tubo del PVC sul terreno e prop la faccia interna del prisma superiore sul post-t.</li>
	<li>Guanti utilizzando lattice (o simili), raccogliere due o tre manciate di colla e striscio su tutta la superficie di un pannello, facendo attenzione che la superficie del pannello sia adeguatamente coperto. Ruotare il tubo in PVC per accedere a tutte le superfici in tre su due prismi. Colla non deve necessariamente essere applicato al tubo di PVC.</li>
	<li>Prendere il tubo in PVC, tenerlo verticalmente e far scorrere l'estremità inferiore sopra il post di t. Evitare di toccare i pannelli appiccicosi.</li>
</ol> 6. Esca la trappola di DD <ol><li>come pre-incollati prismi di solito arrivano con un piccolo foro (4 mm) vicino al bordo inferiore di un pannello del prisma, utilizzare una fascetta per cavi da 4 pollici (10 cm) per collegare una bustina di cis -3-hexenol al bordo inferiore del prisma superiore (verde). Se non c'è un buco, utilizzare un punzone buco palmare o un coltellino per tagliare un piccolo buco o fessura nella plastica, quindi utilizzare la piccola fascetta per attaccare l'esca. 
	Nota: Il cis -3-hexenol composto nelle esche viene rilasciato lentamente per circa un periodo di 10 settimane. Se trappole devono rimanere efficace per più di 10 settimane, sostituire le esche come necessario.</li>
</ol> 7. Controllo trappole per EAB coleotteri <ol><li>Check trappole a intervalli di 2-4 settimane, se possibile, per evitare di perdere i coleotteri catturati, che occasionalmente scendono le trappole, soprattutto in caso di pioggia. Esaminare tutti i tre lati del prisma inferiore per coleotteri EAB. Quindi, utilizzando guanti in lattice monouso, sollevare il tubo in PVC, verso l'alto e fuori il t-post e prop la faccia interna del prisma superiore sul t-post, esponendo un pannello di due prismi.</li>
	<li>Uso forcipe di rimuovere qualsiasi sospetto EAB coleotteri e metterli in un sacchetto di plastica richiudibile esemplare.</li>
	<li>Ruotare il tubo in PVC per esaminare tutti i tre pannelli su entrambi prismi per sospetto EAB coleotteri, quindi far scorrere il tubo indietro sopra il post-t. 
	Nota: Mosche, fare clic su scarafaggi e altri insetti vari saranno inevitabilmente catturati sulle trappole. Ci vuole un occhio attento per individuare uno scarabeo di EAB. Portando una foto tessera di riferimento può essere utile quando il controllo di trappole per la prima volta.</li>
	<li>Per confermare l'identificazione di specie, restituire coleotteri sospetti al laboratorio e metterli a bagno in un agente di compensazione istologico non tossico per un giorno o due per rimuovere la colla dell'intrappolamento dell'insetto. Coleotteri possono quindi essere esaminati sotto un microscopio per dissezione.</li>
</ol>

Gli autori dichiarano di non avere nessun concorrenti interessi finanziari.

La progettazione e la collocazione di trappole DD sfruttare l'attrazione di coleotteri adulti EAB alle specifiche tonalità di colore e alla luce. Il prisma verde sulla parte superiore del tubo del PVC è più attraente per gli scarabei maschii, che spendono la loro durata di vita nutrendosi di foglie della cenere, come pure di accoppiamento32,36,38,39. Il prisma inferiore viola assicura trappole sono anche attraente per donna coleotteri32. Come maschi, coleotteri femminile cibano del fogliame di cenere in tutta la durata della loro vita, ma femmine mature spendono grandi quantità di tempo per la corteccia dei rami o del tronco dove depongono uova39. Mentre nuove infestazioni di rilevazione richiede solo catturare un coleottero di entrambi i sessi, la capacità di attirare e catturare EABs femminile può essere particolarmente importante. Femmine mature EAB sono fisiologicamente in grado di volare oltre i maschi40 e modelli di popolazione suggeriscono interurbano dispersione delle femmine accoppiate contribuisce sostanzialmente all'espansione del nuovo EAB infestazioni41, 42 , 43.
Immissione DD trappole nel aperti serve diversi scopi. Una volta assemblato, DD trappole sono molto evidenti e la silhouette della trappola alto, verticale assomiglia a quello di un albero di cenere piccole. Utilizzando due prismi esalta la silhouette della trappola, ma forse ancora più importante, raddoppia la superficie disponibile per gli scarabei dell'intrappolamento. I prismi di verdi e viola sulle trappole DD stand-alone sono improbabili da essere oscurata da fogliame da alberi o vegetazione. In contrasto con trappole innescate Prisma appesi dal ramo di un albero di cenere, non dobbiamo competere con composti emessi da ash dal vivo che circonda la trappola esche sulle trappole DD. Invece, esche sulle trappole DD forniscono i coleotteri con una sorgente puntiforme distinto di cenere-relative sostanze volatili possono facilmente identificare e individuare. Inoltre, impostando la trappola DD nelle Gesta aperte la preferenza forte e coerenza per condizioni di sole esposto dai coleotteri EAB.
Infine, le trappole DD sono semplici da installare, facile da controllare e resistere a forti venti e temporali estivi. Le trappole non sono solo altamente apparente EAB coleotteri; sono anche facili per il personale di indagine individuare per metà stagione controlli o recupero. Atti di vandalismo non è mai stato problema in una qualsiasi delle decine di siti dove DD trappole sono state monitorate negli ultimi dieci anni. I pannelli appiccicosi sgradevoli probabilmente servono per sedare l'entusiasmo degli aspiranti Vandali.
Le trappole DD possono anche servire come strumenti di sensibilizzazione per sensibilizzare il pubblico di EAB. Visualizzazione di un segno può essere utile. Segni semplici e poco costosi con una foto di una trappola DD e una spiegazione dello scopo della trappola possono essere stampati con una stampante a colori desktop, laminati, incollati su un legno o fibra di legno di supporto, quindi collegati a un t-post in aree dove la popolazione è probabile incontrare trappole un t il sito. Cartelli esplicativi e l'evidente sforzo in corso per rilevare EAB in genere generare benevolenza oltre a funzionamento come strumento educativo.
Ovviamente, DD trappole con due pannelli, un t-post e tubo in PVC costo almeno due volte tanto quanto la sospensione di una trappola di prisma singolo nel baldacchino di alberi di frassino. Il tubo in PVC e t-post, tuttavia, può essere riutilizzati per molti anni. Inoltre, gran parte del costo delle indagini di rilevazione per parassiti forestali invasive quali EAB riflette il tempo necessario per le squadre di indagine individuare un sito adatto, installare la trappola, controllare periodicamente le trappole e per ordinare e identificare trappola cattura. Costi dei falsi negativi, ad esempio, l'insufficienza di rilevare un'infestazione di densità bassa di EAB, devono essere considerati anche se viene utilizzata una trappola meno efficace. I risultati degli studi che comprende più di 30 diversi siti hanno mostrato che in aree recentemente infestate con popolazioni di EAB di bassa densità, DD trappole erano costantemente più probabile catturare EAB coleotteri di prisma trappole d'attaccatura con i baldacchini di frassini22 ,31,44.
Svantaggi e vantaggi distinti sono associati con ogni disegno di trappola EAB valutato nelle prove sul campo precedente. Imbuto trappole sono inizialmente più costosi di altri disegni di trappola, ma possono essere riutilizzate per più anni. Prisma trappole sono il design meno costoso, mentre DD trappole sono intermedi nel costo. I componenti più costosi delle trappole DD (t-post e tubo in PVC) sono facilmente reperibili nei negozi di miglioramento hardware e casa e possono essere riutilizzati per più anni. Antigelo non tossico, non-etanolo o strisce insetticide sono necessari per catturare insetti attratti per imbuto trappole. Prismi, se sospeso in baldacchini di cenere o il DD trappole, devono essere ricoperto di colla di insetto appiccicoso per catturare insetti e non possono essere riutilizzati. Tutti gli insetti catturati da imbuto trappole devono essere raccolti e restituiti al laboratorio per l'identificazione e l'ordinamento. Pannelli su Prisma e DD trappole devono essere esaminati e sospetti coleotteri rimossi con il forcipe per conferma successiva specie in laboratorio. Qualche esperienza è utile per distinguere EABs (o almeno coleotteri buprestid) nel campo, ma gli ispettori di formazione non è difficile. Appeso imbuto trappole e prisma trappole sui rami in baldacchini di albero di cenere può richiedere molto tempo, soprattutto se gli alberi sono grandi. Gli equipaggi devono spesso lunghe pertiche o Fionde grandi rami di accedere a e linea intrecciata o cavo di alimentazione è necessario sospendere le trappole. Trappole a due piani, che sono collocati all'aperto nei pressi di frassini, possono essere facilmente impostati ovunque. Venti forti hanno occasionalmente soffiato prismi fuori alberi o causato linee cuscinetto imbuto o prisma trappole per avvolgere intorno rami superiori, impedendo l'accesso alle trappole da terra. Al contrario, DD trappole sono rimaste intatte durante gravi tempeste, tra cui tempeste con linea retta venti22,44.
È importante notare che la rilevazione EAB e metodi di indagine non sono mutuamente esclusive. Metodi di rilevamento differenti possono essere integrati nelle strategie di indagine appropriate per specifiche situazioni o condizioni locali. Ad esempio, di basso valore o il rifiuto di cenere alberi lungo linee di recinzione, strade o nelle impostazioni boschive possono essere cinto e scortecciati, per funzionare come strumenti di rilevazione. Meno costoso Prisma trappole o imbuto riutilizzabili trappole possono essere distribuiti in modo più ampio in indagini sistematiche su larga scala. Freestanding DD trappole possono essere particolarmente adatti per zone ad alto rischio come campeggi o aree di ricreazione dove potenzialmente infestate da ardere presenta una costante minaccia. Geometri possono scegliere di posizionare trappole DD in una varietà di posizioni o impostazioni, come le trappole sono vicino a frassini e all'aperto, così i prismi sono esposti al sole. Trappole del Double-Decker sono stati utilizzati con successo in mediane di autostrada e lungo le ferrovie, in linee elettriche in esecuzione attraverso zone boschive, intorno al perimetro di Segherie e iarde di smaltimento dei rifiuti di legno e lungo i fiumi, canali di scarico e altre aree ripariali. Anche se le trappole DD sono innescate con una cenere volatile (cis-3-hexenol) e sono stati progettati per le indagini EAB, nativo buprestid specie vengono catturate anche frequentemente sui pannelli appiccicosi. Ulteriori studi per valutare potenziali modifiche al DD trappole o esche che potrebbero aumentare l'attrazione di altre specie di buprestid potrebbero essere utili.

Il dispositivo di prelievo cenere verde smeraldo (EAB) (dato planipennis Fairmaire) (Coleoptera: Buprestidae) ha ucciso centinaia di milioni di alberi di frassino (Fraxinus spp.), poiché esso è stato identificato nel 2002 nell'area metropolitana di Detroit, Michigan e in vicino Windsor, Ontario, Canada. Diffusione involontaria di frassini infestati, tronchi e legna da ardere, insieme a dispersione naturale di coleotteri, hanno provocato di EAB istituzione in almeno 27 Stati e due province canadesi alla data1. I rapporti recenti indicano che la EAB ha invaso anche Mosca, in Russia, dove sta uccidendo paesaggio cenere alberi2,3, generando ulteriore preoccupazione sul suo potenziale di diffusione in Europa. Variazione interspecifica in preferenza host EAB e resistenza tra cenere nordamericano specie è stato documentato4,5,6,7,8,9, ma praticamente tutte le specie di cenere in Nord America sono suscettibili di essere padroni di casa adatte. Livelli catastrofici della mortalità di cenere sono stati registrati nelle aree del Michigan e Ohio10,11,12, con impatti ecologici ed economici associati13,14, 15,16.
Metodi efficaci per rilevare nuove infestazioni di EAB e monitorare le popolazioni di bassa densità sono aspetti critici della gestione di questo parassita invasivo nelle impostazioni urbane, residenziale e boscose. Diagnosi precoce fornisce tempo di sviluppare una strategia, garantire finanziamenti e realizzare attività per ridurre gli impatti della EAB. Ad esempio, i proprietari di abitazione e i funzionari comunali può iniziare il trattamento ceneri preziose in paesaggi con insetticidi sistemici prima di danni causati dall'aumento densità larvale limiti efficacia di questi prodotti17,18. Allo stesso modo, identificazione di una nuova infestazione e informazioni attendibili sulla distribuzione locale di EAB dà silvicoltori e proprietari di immobili la possibilità di implementare le vendite di legname, conversione di specie o altre attività per ridurre i costi economici o ecologico effetti della mortalità di cenere.
La diagnosi precoce, delimitazione ed efficace monitoraggio delle popolazioni di EAB a bassa densità, tuttavia, rimangono difficili. Indagini visive per identificare frassini recentemente infestate non sono affidabili perché ash raramente presentano segni esterni o sintomi di infestazione di EAB fino a densità larvale costruire a livelli moderati o anche alta4,19. Il mezzo più efficace di rilevazione molto basse densità di EAB richiedono l'uso di cenere cinto rilevamento alberi19,20,21,22. Frassini sono cinto in primavera o inizio estate rimuovendo una banda di corteccia esterna e floema intorno alla circonferenza del tronco, che sottolinea gli alberi, aumentando la loro attrazione per adulti EAB coleotteri. Cinto di alberi possono essere scortecciati in autunno o in inverno per identificare la densità e presenza larvale EAB. Anche se girdled cenere alberi sono stati utilizzati operativamente per EAB rilevamento19,23,24,25, sono problematici. Scortecciatura cinto alberi possono essere laborioso e individuazione di alberi adatti per anulazione può essere difficile, soprattutto nelle aree urbane o residenziale o quando indagini devono essere condotte per più anni19.
Artificiale trappole innescate con attrattivi EAB eliminano molte preoccupazioni associate all'utilizzo di frassini cinto di rilevamento. A differenza di altri parassiti forestali importanti come il bombice dispari (Lymantria dispar L) e alcuni scarabei di corteccia Scolytinae che producono sesso lunga distanza o feromoni di aggregazione, ad oggi, non efficace interurbani feromoni sono stati trovati per EAB. Un feromone sessuale a corto raggio, cis-lattone, può facilitare l'accoppiamento26,27, ma nelle prove sul campo, cis-lattone esche non hanno costantemente accresciuto attrazione EAB a trappole artificiali28. Coleotteri adulti si basano sui composti volatili emessi dal frassino foglie, corteccia e legno per identificare il loro ospite alberi29,30,31 e incontrare potenziali compagni. Diversi composti volatili sono stati valutati per l'utilizzo in esche per attirare EABs adulto a trappole artificiali27,32. Attualmente, trappole utilizzate operativamente per indagini di rilevazione di EAB negli Stati Uniti sono innescate con esche contenenti cis-3-hexenol, una volatile di foglia verde comune prodotta da cenere fogliame30,33. Negli anni precedenti, trappole EAB utilizzate per US indagini hanno anche stato innescate con l'olio di Manuka, che viene estratta dall'albero del tè di Nuova Zelanda (Leptospermum scoparium Forst e Forst) o olio di Phoebe, un Estratto di noce brasiliana (Phoebe porosa Mez.); entrambi contengono diversi sesquiterpeni presenti anche in cenere corteccia29. Problemi con i rifornimenti incoerente di questi oli naturali, tuttavia, hanno limitato il loro uso.
Oltre alle sostanze volatili prodotte da host, coleotteri adulti EAB rispondono agli stimoli visivi, tra cui colore e luce20,32,34,35. Gli studi iniziali hanno mostrato gli adulti EAB, che sono le alette di filatoio relativamente agile, raramente sono stati catturati da imbuto nero trappole innescate con varie sostanze volatili cenere (DGM e TMP, dati non pubblicati). Sono stati valutati altri disegni di trappola, come Croce-a palette trappole, ma l'avversione di EAB scarabei a spazi scuri e ombre limitato l'efficacia di queste trappole.
Sviluppo di un prisma a tre lati, che possa essere rivestito con chiaro intrappolamento insetto colla35 per catturare gli scarabei, era un miglioramento sostanza nella progettazione di trappola. Attrazione di EABs adulto di colore inoltre è stata valutata estesamente nelle prove sul campo e in studi di laboratorio con un retinograph34. Risultati mostrano EAB coleotteri sono sempre attratti da specifiche tonalità di verde e viola32,36. Trappole di prisma fabbricati dalla plastica ondulata colorata ora sono ampiamente usati nelle attività di indagine EAB negli Stati Uniti e Canada.
Perché gli adulti EAB sono fortemente attratti alla luce, i coleotteri sono molto più propensi a colonizzare albero aperto-cresciutos rispetto all'ombra degli alberi20,21. Linee guida per le indagini di rilevamento EAB negli Stati Uniti richieste individuali Prisma trappole per essere sospeso da un ramo di Mid-baldacchino in un albero di cenere che crescono lungo una strada o il bordo di una zona boscosa37. In teoria, questo dovrebbe garantire che almeno un pannello del prisma è esposto alla luce solare. Operativamente, tuttavia, Prisma trappole possono essere parzialmente ombreggiati da rami spioventi adiacenti o nelle vicinanze di alberi. Delle superfici del pannello appiccicoso sono frequentemente soffiate nel fogliame, conseguente foglie aderendo al e oscurando almeno una parte di uno o più pannelli.
Trappole del Double-Decker (DD) sono stati sviluppati per integrare più segnali visivi ed olfattivi per aumentare l'attrazione di EAB coleotteri. Ogni trappola DD è composto da uno verde e uno prisma plastica ondulato viola attaccato ad un tubo di 40 cloruro di polivinile (PVC) di pianificazione di 3 m di altezza (10 cm di diametro), che è supportato facendo scorrere il tubo in PVC un t-post. Utilizzando prismi sia verdi e viola è progettato per ottenere entrambi i sessi di EAB coleotteri32,36,38,39. Inoltre, piuttosto che essere sospesa da un ramo sotto la tettoia di un frassino, le trappole DD sono posizionate in pieno sole, 5-10 m lontano da frassini lungo il bordo di una zona boscosa o in mezzo a dei dispersi, Apri-grown frassini.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Light green corrugated plastic panel: 120 cm x 60 cm</td>
			<td>Great Lakes IPM; www.greatlakesipm.com</td>
			<td>IPM-EAB GR</td>
			<td colspan="13" rowspan="3">All three surfaces of each prism need to be covered with clear insect trapping glue, even if the panels are pre-glued. Pre-glued panels are often not sticky enough to consistently capture or retain EAB beetles.&#160; Other clear insect trapping glue products are available but are considerably more difficult to apply.&#160;&#160;&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Light purple corrugated plastic panel: 120 cm x 60 cm</td>
			<td>Great Lakes IPM; www.greatlakesipm.com</td>
			<td>IPM-EAB&#160; LP</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Large cable tie (4): 60 cm with a 79 kg capacity</td>
			<td>Cabletiesandmore.com; http://www.cabletiesandmore.com/cableties.php</td>
			<td>CT-24-NU-100PK</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medium cable ties (4): 20 cm with a 22.7 kg capacity</td>
			<td>Cabletiesandmore.com; http://www.cabletiesandmore.com/cableties.php</td>
			<td>CT261</td>
			<td colspan="13" rowspan="1"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small cable tie: 10 cm with a 8.2 kg capacity</td>
			<td>Cabletiesandmore.com; http://www.cabletiesandmore.com/cableties.php</td>
			<td>CT204</td>
			<td colspan="13" rowspan="1"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>cis-3-hexanol pouch</td>
			<td>Synergy Semiochemicals; http://www.semiochemical.com/html/buprestids.html)</td>
			<td>3136</td>
			<td colspan="13" rowspan="4">Lures used to bait DD traps consist of pouches containing cis-3-hexenol, a non-toxic compound present in ash leaves.&#160; One pouch is attached to the lower edge of the top prism using a small cable tie.&#160; Each pouch of cis-3-hexenol has a release rate of approximately 50 mg/day. Note that cis-3-hexenol is sometimes written as Z-3-hexenol.&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aphinity Hexenol</td>
			<td>Sylvar Technologies</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lure GLV4 emerald ash borer</td>
			<td>Chemtica, Heredia, Costa Rica</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>cis-3-hexanol pouch</td>
			<td>WestGreen Global Technologies; http://www.westgreenglobaltechnologies.com/</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clear insect trapping glue&#160;</td>
			<td>Hummert International; http://www.hummert.com/product-details/8196/pestick</td>
			<td>01-3522-1&#160;&#160;</td>
			<td colspan="13" rowspan="1"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Histoclear II histological clearing agent</td>
			<td>National Diagnostics; www.nationaldiagnostics.com</td>
			<td>HS-202</td>
			<td colspan="13">Histoclear II will be needed to remove the sticky insect glue from suspect beetles.&#160; Other histological clearing agents are available but may not remove the glue and some products dissolve plastic, an important consideration if plastic containers are used for soaking the beetles.&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Histoclear II histological clearing agent</td>
			<td>Great Lakes IPM; www.greatlakesipm.com</td>
			<td>10011</td>
			<td colspan="13">Histoclear II will be needed to remove the sticky insect glue from suspect beetles.&#160; Other histological clearing agents are available but may not remove the glue and some products dissolve plastic, an important consideration if plastic containers are used for soaking the beetles.&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>t-post: 1.5 m</td>
			<td>multiple sources</td>
			<td></td>
			<td colspan="13" rowspan="1">A t-post (5 feet tall) (1.5 m) is used to support the PVC pipe.&#160;&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>post pounder</td>
			<td>multiple sources</td>
			<td></td>
			<td colspan="13" rowspan="1">Use a post pounder to set t-posts into the ground. No additional support is necessary.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HDPE (high density polyethylene) PVC pipe : 3 m x 10 cm diameter</td>
			<td>multiple sources</td>
			<td colspan="14" rowspan="1"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps (rigid)</td>
			<td>multiple sources</td>
			<td></td>
			<td colspan="13">Forceps (tweezers) will be needed to remove suspect beetles from the traps. Rigid forceps work better than flexible forceps.&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Latex gloves</td>
			<td>multiple sources</td>
			<td></td>
			<td colspan="13">Latex gloves are needed for applying the insect trapping glue to the prisms and for checking the traps to collect EAB beetles.&#160;&#160;&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Baby oil or baby wipes&#160;</td>
			<td>multiple sources</td>
			<td></td>
			<td colspan="13" rowspan="1">Baby oil or baby wipes are helpful for removing the trapping glue from hands and equipment.&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Re-sealable plastic specimen bags: 5 cm x 8 cm&#160;</td>
			<td>multiple sources</td>
			<td></td>
			<td colspan="13">Small re-sealable plastic specimen bags are useful for collecting beetles from traps.&#160; Each bag should be labelled, either with pre-made, adhesive labels or with soft felt pens.&#160;&#160;&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td colspan="3">Guides to help with distinguishing EAB from beetles native to North America are available on the national EAB website at www.emeraldashborer.info. &#160;</td>
			<td colspan="13" rowspan="1"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

building double-decker traps for early detection of emerald ash borer

Trivellatore di cenere verde smeraldo (EAB) (dato planipennis Fairmaire), l'insetto più distruttivo di foresta a hanno invaso il Nord America, ha ucciso centinaia di milioni di alberi di frassino (Fraxinus spp.) di foresta e paesaggio. Parecchi disegni artificiale trappola per attirare e catturare EAB coleotteri sono stati sviluppati per rilevare, delineare e monitorare le infestazioni. Trappole del Double-Decker (DD) costituiti da due ondulato plastica prismi, uno verde e uno viola, collegato ad un tubo di cloruro di polivinile (PVC) di 3 m di altezza supportato da un t-post. Il prisma verde nella parte superiore del tubo del PVC è innescato con cis-3-hexenol, un composto prodotto da fogliame di cenere. Le superfici di due prismi sono ricoperte di colla appiccicosa dell'insetto per catturare coleotteri adulti EAB. Double-Decker trappole devono essere collocati vicino agli alberi di frassino ma in aree aperte, esposti al sole. Posizionamento e costruzione trappola a due piani sono presentati qui, insieme a un riepilogo degli esperimenti di campo che dimostrano l'efficacia delle trappole DD a catturare EAB coleotteri. In uno studio recente in siti con relativamente basse densità di EAB, trappole del Double-Decker catturato EAB significativamente più di trappole Prisma verde o viola o verde imbuto trappole, che sono progettati per essere sospeso da un ramo nel baldacchino di alberi di frassino. Una percentuale maggiore di doppio decker trappole erano positivi, vale a dire, catturato almeno un EAB, rispetto al prisma trappole o trappole di imbuto che sono stati appesi in baldacchini di albero di frassino.

In una grande scala studio, tre disegni trappola artificiale anche come cinto frassini sono stati distribuiti sistematicamente, 10-20 m di distanza, attraverso un recente infestate 16 ettari boschiva con una densità molto bassa di EAB25. Disegni di trappola artificiale testato inclusi prismi viola innescate con l'olio di Manuka e sospeso &#62; 3 m di altezza da un ramo nel baldacchino di cenere alberi, trappole DD 3 m di altezza con due pannelli verdi, e DD intrappola con due pannelli viola supportati da t-post. Trappole del Double-Decker di entrambi i colori sono state innescate con una miscela di sostanze volatili cenere tra cui cis-3-hexenol sul pannello superiore e l'olio di Manuka sul pannello inferiore. Trappole sono stati controllati per raccogliere EAB catturato tutta l'estate e cinto alberi erano scortecciati in autunno. Una bontà di2 Χ-di test di adattamento (GOF) con Bonferroni correzione per confronti a coppie è stata usata per verificare se totale EAB cattura differiva tra i tipi di quattro trappola. Viola a due piani trappole catturato più coleotteri EAB rispetto al baldacchino viola trappole, trappole di verde a due piani o bande adesive sugli alberi cinto. Verde del Double-Decker trappole catturato più EAB coleotteri di trappole di baldacchino di porpora. Uno o più coleotteri EAB sono stati catturati il 25% delle trappole viola baldacchino, 56% delle trappole verde a due piani e 81% delle trappole viola a due piani, mentre tutti gli alberi cinto furono colonizzate25.
Più recentemente, EAB cattura e successo di rilevamento dei disegni di abbondanza diversi sono stati controllati nel 2015 su otto blocchi di trappole stabiliti in due siti boschive con bassa a moderata densità di EAB (Figura 3). Ogni blocco ha consistito di sei trappole, distanziati di 10-20 m di distanza. Trappole valutati includono un prisma viola, un prisma verde scuro, un prisma di luce verde e una trappola di imbuto verde, ciascuno sospeso da un ramo &#62; 5 m di altezza in alberi di frassino cresce ai margini delle zone boschive. Ogni blocco incluso anche una trappola DD con due prismi viola e una trappola DD con un prisma verde sulla parte superiore e un prisma viola sul fondo. Come prima, le trappole DD erano 3 m alto e supportati su t-post insieme nel terreno. Tutte le trappole sono state innescate con cis-3-hexenol e le trappole di prisma verde chiaro e scuro anche incluso cis-lattone esche. Il numero medio di EAB catturati per trappola è stato analizzato tra trattamenti mediante ANOVA a due vie con effetti principali per replicare e trattamento seguita da Tukey-Kramer: test di separazione. Ogni trappola DD catturato uno o più coleotteri EAB, mentre 62% delle trappole imbuto verde e 37 a 75% delle tonnare Prisma le pensiline dei frassini catturato almeno un EAB. Due combinazioni di colore di DD trappole catturato EABs significativamente più maschile e femminile di tutti i disegni di trappola appesi con i baldacchini di cenere (Figura 3). Mentre non c'era differenza significativa tra trappole con due pannelli viola e trappole con pannelli verdi e viola in questo studio, altri esperimenti hanno trovato che trappole DD verde e viola catturato più EAB di trappole con due pannelli viola28 e che Quando collocati in posizioni superiori, Prisma verde trappole catturavano più EAB oltre viola Prisma trappole34. Pertanto, l'inclusione dei pannelli verdi nella posizione superiore il doppio decker trappole può migliorare attrazione di EAB.
Numero di coleotteri EAB catturato a prisma inoltre è stata valutata, dato che DD trappole hanno due volte tanto superficie (14.400 cm2) come le trappole di baldacchino singolo Prisma (7.200 cm2) e la zona di 30% in più rispetto alle superfici combinate di tutti i 12 imbuti di un imbuto trappola (11.160 cm2). L'area visual sagoma bidimensionale di una trappola di prisma è equivalente ad un pannello del prisma su 3 lati (2.400 cm2) e la zona di visual sagoma di una trappola DD è due volte quella (4.800 cm2) di una trappola di prisma e il 20% maggiore di bidimensionale area Visual sagoma di una trappola di imbuto (2000 cm2) (equivalente al diametro di un imbuto (20cm) volte l'altezza totale di 12 imbuti parzialmente nidificati [100 cm]) quando la trappola è appeso e ampliata. Anche quando singoli prismi sono stati considerati, tuttavia, le trappole DD catturato più EAB coleotteri rispetto gli altri disegni di trappola. Complessivi, singoli prismi su DD intrappola presso i due siti catturati 49 a 111 adulto EABs (totali di EAB 146 e 214 per trappola DD), mentre singoli Prisma trappole e trappole a imbuto in baldacchini di cenere catturato un totale di 11 a 28 EAB coleotteri, rispettivamente.
<img alt="Figure 1" src="/files/ftp_upload/55252/55252fig1.jpg"> 
Figura 1: preparazione pannelli. Due pannelli ondulati della plastica (120 x 60 cm), in genere verdi e viola, sono utilizzati per ogni trappola a due piani per catturare EAB coleotteri. Ogni pannello sarà piegato in tre parti per creare un prisma. Ogni faccia del prisma sarà 40 cm x 60 cm. <a href="https://ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/55252/55252fig1large.jpg" target="_blank">per favore clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 2" src="/files/ftp_upload/55252/55252fig2.jpg"> 
Figura 2: preparare il tubo in PVC. Un tubo di cloruro di polivinile (PVC) (programma 40) che è di 3 m di altezza e 10 cm di diametro, serviranno per sostenere il due Prisma trappole per la cattura di coleotteri EAB. Un totale di quattro fori dovranno essere perforato in ogni tubo di PVC. Fascette per fissare i prismi per il tubo in PVC passerà attraverso questi fori.
<img alt="Figure 3" src="/files/ftp_upload/55252/55252fig3.jpg"> 
Figura 3: Cattura di EAB coleotteri su DD e altre trappole. Media (+ SE) numero di maschi e femmine EAB coleotteri verde catturati su imbuto trappole o luce viola Prisma trappole innescate con cis-3-hexenol e appeso in baldacchini di cenere, luce verde Prisma trappole o prisma verde scuro trappole innescate con cis-3-hexenol e CIS-lattone e appese in cenere baldacchini, o trappole a due piani (3 m di altezza) con due prismi di viola, o con un prisma verde sulla parte superiore e un inferiore Prisma viola, entrambi innescate con cis-3-hexenol. Bar sormontato da lettere diverse all'interno dello stesso sesso sono significativamente differenti (P &#60; 0.05). N = 8 ripetizioni in due siti, Michigan settentrionale nel 2015. <a href="https://ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/55252/55252fig3large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>

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Building Double-decker Traps for Early Detection of Emerald Ash Borer

Trappole efficaci per attirare e catturare il trivellatore di cenere verde smeraldo (EAB) sono un elemento chiave della rilevazione e la gestione di questo parassita invasivo. Trappole a due piani, posizionate in pieno sole nei pressi di frassini, incorporano spunti visivi ed olfattivi ed erano più probabili catturare EAB rispetto agli altri modelli di trappola nelle prove sul campo.

Edificio a due piani trappole per individuazione tempestiva di smeraldo cenere Borer

Emerald ash borer (EAB) (Agrilus planipennis Fairmaire), the most destructive forest insect to have invaded North America, has killed hundreds of millions ...

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Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Environment

7.8K Views.  Michigan State University. Trappole efficaci per attirare e catturare il trivellatore di cenere verde smeraldo (EAB) sono un elemento chiave della rilevazione e la gestione di questo parassita invasivo. Trappole a due piani, posizionate in pieno sole nei pressi di frassini, incorporano spunti visivi ed olfattivi ed erano più probabili catturare EAB rispetto agli altri modelli di trappola nelle prove sul campo.

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Transcript and Metabolite Profiling for the Evaluation of Tobacco Tree and Poplar as Feedstock for the Bio-based Industry

The global demand for food, feed, energy, and water poses extraordinary challenges for future generations. It is evident that robust platforms for the exploration of renewable resources are necessary to overcome these challenges. Within the multinational framework MultiBioPro we are developing biorefinery pipelines to maximize the use of plant biomass. More specifically, we use poplar and tobacco tree (Nicotiana glauca) as target crop species for improving saccharification, isoprenoid, long chain hydrocarbon contents, fiber quality, and suberin and lignin contents. The methods used to obtain these outputs include GC-MS, LC-MS and RNA sequencing platforms. The metabolite pipelines are well established tools to generate these types of data, but also have the limitations in that only well characterized metabolites can be used. The deep sequencing will allow us to include all transcripts present during the developmental stages of the tobacco tree leaf, but has to be mapped back to the sequence of Nicotiana tabacum. With these set-ups, we aim at a basic understanding for underlying processes and at establishing an industrial framework to exploit the outcomes. In a more long term perspective, we believe that data generated here will provide means for a sustainable biorefinery process using poplar and tobacco tree as raw material. To date the basal level of metabolites in the samples have been analyzed and the protocols utilized are provided in this article.

Plant biomass offers a renewable resource for multiple products, including fuel, feed, food, and a variety of materials. In this paper we investigate the properties of tobacco tree (Nicotiana glauca) and poplar as suitable sources for a biorefinery pipeline.

Trascrizione e metabolita Profiling per la valutazione del Tabacco Albero e pioppo come materia prima per l&#39;industria con sede a Bio

The global demand for food, feed, energy, and water poses extraordinary challenges for future generations. It is evident that robust platforms for the ...

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Multimodal Optical Microscopy Methods Reveal Polyp Tissue Morphology and Structure in Caribbean Reef Building Corals

An integrated suite of imaging techniques has been applied to determine the three-dimensional (3D) morphology and cellular structure of polyp tissues comprising the Caribbean reef building corals Montastraeaannularis and M. faveolata. These approaches include fluorescence microscopy (FM), serial block face imaging (SBFI), and two-photon confocal laser scanning microscopy (TPLSM). SBFI provides deep tissue imaging after physical sectioning; it details the tissue surface texture and 3D visualization to tissue depths of more than 2 mm. Complementary FM and TPLSM yield ultra-high resolution images of tissue cellular structure. Results have: (1) identified previously unreported lobate tissue morphologies on the outer wall of individual coral polyps&#160;and (2) created the first surface maps of the 3D distribution and tissue density of chromatophores and algae-like dinoflagellate zooxanthellae endosymbionts. Spectral absorption peaks of 500 nm and 675 nm, respectively, suggest that M. annularis and M. faveolata contain similar types of chlorophyll and chromatophores. However, M. annularis and M. faveolata exhibit significant differences in the tissue density and 3D distribution of these key cellular components. This study focusing on imaging methods indicates that SBFI is extremely useful for analysis of large mm-scale samples of decalcified coral tissues. Complimentary FM and TPLSM reveal subtle submillimeter&#160;scale changes in cellular distribution and density in nondecalcified coral tissue samples. The TPLSM technique affords: (1) minimally invasive sample preparation,&#160;(2) superior optical sectioning ability,&#160;and (3) minimal light absorption and scattering, while still permitting deep tissue imaging.

An integrated suite of imaging techniques has been applied to determine polyp morphology and tissue structure in the Caribbean corals Montastraeaannularis and M. faveolata. Fluorescence, serial block face,&#160;and two-photon confocal laser scanning microscopy have identified lobate structure, polyp walls, and estimated chromatophore and zooxanthellae densities and distributions.

Multimodali ottici Metodi Microscopia Reveal Polyp Tissue morfologia e struttura in Caribbean Reef costruzione Coralli

An integrated suite of imaging techniques has been applied to determine the three-dimensional (3D) morphology and cellular structure of polyp tissues ...

Detection of Foodborne Bacterial Pathogens from Individual Filth Flies

There is unanimous consensus that insects are important vectors of foodborne pathogens. However, linking insects as vectors of the pathogen causing a particular foodborne illness outbreak has been challenging. This is because insects are not being aseptically collected as part of an environmental sampling program during foodborne outbreak investigations and because there is not a standardized method to detect foodborne bacteria from individual insects. To take a step towards solving this problem, we adapted a protocol from a commercially available PCR-based system that detects foodborne pathogens from food and environmental samples, to detect foodborne pathogens from individual flies.Using this standardized protocol, we surveyed 100 wild-caught flies for the presence of Cronobacter spp., Salmonella enterica, and Listeria monocytogenes and demonstrated that it was possible to detect and further isolate these pathogens from the body surface and the alimentary canal of a single fly. Twenty-two percent of the alimentary canals and 8% of the body surfaces from collected wild flies were positive for at least one of the three foodborne pathogens. The prevalence of Cronobacter spp. on either body part of the flies was statistically higher (19%) than the prevalence of S. enterica (7%) and L.monocytogenes (4%). No false positives were observed when detecting S. enterica and L. monocytogenes using this PCR-based system because pure bacterial cultures were obtained from all PCR-positive results. However, pure Cronobacter colonies were not obtained from about 50% of PCR-positive samples, suggesting that the PCR-based detection system for this pathogen cross-reacts with other Enterobacteriaceae present among the highly complex microbiota carried by wild flies. The standardized protocol presented here will allow laboratories to detect bacterial foodborne pathogens from aseptically collected insects, thereby giving public health officials another line of evidence to find out how the food was contaminated when performing foodborne outbreak investigations.

A PCR-based protocol was adapted to detect Cronobacter spp., Salmonella enterica, and Listeria monocytogenes from body surfaces and alimentary canals of individual wild-caught flies. The goal of this protocol is to detect and isolate bacterial pathogens from individual insects collected as part of an environmental sampling program during foodborne outbreak investigations.

Rilevazione di origine alimentare batterica Pathogens da mosche individuale Filth

There is unanimous consensus that insects are important vectors of foodborne pathogens. However, linking insects as vectors of the pathogen causing a ...

The Hawaii Protocol for Scientific Monitoring of Coffee Berry Borer: a Model for Coffee Agroecosystems Worldwide

Coffee berry borer (CBB) is the most devastating insect pest for coffee crops worldwide. We developed a scientific monitoring protocol that is aimed at capturing and quantifying the dynamics and impact of this invasive insect pest as well as the development of its host plant across a heterogeneous landscape. The cornerstone of this comprehensive monitoring system is timely georeferenced data collection on CBB movement, coffee berry infestation, mortality by the fungus Beauveria bassiana, and coffee plant phenology via a mobile electronic data recording application. This electronic data collection system allows field records to be georeferenced through built-in global positioning systems, and is backed by a network of weather stations and records of farm management practices. Comprehensive monitoring of CBB and host plant dynamics is an essential part of an area-wide project in Hawaii to aggregate landscape-level data for research to improve management practices. Coffee agroecosystems in other parts of the world that experience highly variable environmental and socioeconomic factors will also benefit from implementing this protocol, in that it will drive the development of customized integrated pest management (IPM) to manage CBB populations.

Comprehensive monitoring of coffee berry borer and host plant dynamics is essential for aggregating landscape-level data to improve management of this invasive pest. Here, we present a protocol for scientific monitoring of coffee berry borer movement, infestation, mortality, coffee plant phenology, weather, and farm management via a mobile electronic data recording application.

Il protocollo di Hawaii per monitoraggio scientifico di Coffee Berry Borer: un modello per caffè agroecosistemi in tutto il mondo

Coffee berry borer (CBB) is the most devastating insect pest for coffee crops worldwide. We developed a scientific monitoring protocol that is aimed at ...

Fluorescent Paper Strips for the Detection of Diesel Adulteration with Smartphone Read-out

Three fluorescent molecular rotors of 4-dimethylamino-4-nitrostilbene (4-DNS) were investigated for their potential use as viscosity probes to indicate the content of kerosene in diesel/kerosene blends, a wide-spread activity to adulterate fuel. In solvents with low viscosity, the dyes rapidly deactivate via a so-called twisted intramolecular charge transfer state, efficiently quenching the fluorescence. Measurements of diesel/kerosene blends revealed a good linear correlation between the decrease in fluorescence and the increase of the fraction of the less viscous kerosene in diesel/kerosene blends. Immobilization of the hydroxy derivative 4-DNS-OH in cellulose paper yielded test strips that preserve the fluorescent indicator&#39;s behavior. Combination of the strips with a reader based on a smartphone and a controlling app allowed to create a simple field test. The method can reliably detect the presence of kerosene in diesel from 7 to 100%, outperforming present standard methods for diesel adulteration.

Here, we present a protocol to detect the adulteration of diesel with kerosene using test strips coated with a fluorescent viscosity probe together with a smartphone-based analysis system.

Strisce di carta fluorescente per la rilevazione dell'adulterazione di Diesel con lettura di Smartphone

Three fluorescent molecular rotors of 4-dimethylamino-4-nitrostilbene (4-DNS) were investigated for their potential use as viscosity probes to indicate ...

Detection of Viruses from Bioaerosols Using Anion Exchange Resin

This protocol demonstrates a customized bioaerosol sampling method for viruses. In this system, anion exchange resin is coupled with liquid impingement-based air sampling devices for efficacious concentration of negatively-charged viruses from bioaerosols. Thus, the resin serves as an additional concentration step in the bioaerosol sampling workflow. Nucleic acid extraction of the viral particles is then performed directly from the anion exchange resin, with the resulting sample suitable for molecular analyses. Further, this protocol describes a custom-built bioaerosol chamber capable of generating virus-laden bioaerosols under a variety of environmental conditions and allowing for continuous monitoring of environmental variables such as temperature, humidity, wind speed, and aerosol mass concentration. The main advantage of using this protocol is increased sensitivity of viral detection, as assessed via direct comparison to an unmodified conventional liquid impinger. Other advantages include the potential to concentrate diverse negatively-charged viruses, the low cost of anion exchange resin (~$0.14 per sample), and ease of use. Disadvantages include the inability of this protocol to assess infectivity of resin-adsorbed viral particles, and potentially the need for the optimization of the liquid sampling buffer used within the impinger.

An anion exchange resin-based method, adapted to liquid impingement-based bioaerosol sampling of viruses is demonstrated. When coupled with downstream molecular detection, the method allows for facile and sensitive detection of viruses from bioaerosols.

Rilevamento di virus da Bioaerosols utilizzando resina a scambio anionico

This protocol demonstrates a customized bioaerosol sampling method for viruses. In this system, anion exchange resin is coupled with liquid ...

An Anaerobic Biosensor Assay for the Detection of Mercury and Cadmium

Mercury (Hg) bioavailability to microbes is a key step to toxic Hg biomagnification in food webs. Cadmium (Cd) transformations and bioavailability to bacteria control the amount that will accumulate in staple food crops. The bioavailability of these metals is dependent on their speciation in solution, but more particularly under anoxic conditions where Hg is methylated to toxic monomethylmercury (MeHg) and Cd persists in the rhizosphere. Whole-cell microbial biosensors give a quantifiable signal when a metal enters the cytosol and therefore are useful tools to assess metal bioavailability. Unfortunately, most biosensing efforts have so far been constrained to oxic environments due to the limited ability of existing reporter proteins to function in the absence of oxygen. In this study, we present our effort to develop and optimize a whole-cell biosensor assay capable of functioning anaerobically that can detect metals under anoxic condition in quasi-real time and within hours. We describe how the biosensor can help assess how chemical variables relevant to the environmental cycling of metals affect their bioavailability. The following protocol includes methods to (1) prepare Hg and Cd standards under anoxic conditions, (2) prepare the biosensor in the absence of oxygen, (3) design and execute an experiment to determine how a series of variable affects Hg or Cd bioavailability, and (4) to quantify and interpret biosensor data. We show the linear ranges of the biosensors and provide examples showing the method's ability to distinguish between metal bioavailability and toxicity by utilizing both metal-inducible and constitutive strains.

Here, we present a protocol to use an anaerobic whole-cell microbial biosensor to evaluate how different environmental variables affect the bioavailability of Hg and Cd to bacteria in anoxic environments.

Un dosaggio di biosensore anaerobico per la rilevazione di mercurio e cadmio

Mercury (Hg) bioavailability to microbes is a key step to toxic Hg biomagnification in food webs. Cadmium (Cd) transformations and bioavailability to ...

A Precise and Autonomous System for the Detection of Insect Emergence Patterns

Existing systems to measure insect emergence patterns have limitations; they are only partially automated and are limited in the maximum number of emerging insects they can detect. In order to obtain precise measurement of insect emergence, it is necessary for systems to be semi-automated and able to measure large numbers of emerging insects. We addressed these issues by designing and building a system that is automated and can measure emergence of up to 1200 insects. We modified the existing &#34;falling-ball&#34; system using Arduino microcontrollers to automate data collection and expand the sample size through multiple data channels. Multiple data channels enable the user to not only increase their sample size, but also allows for multiple treatments to be run simultaneously in a single experiment. Furthermore, we created an R script to automatically visualize the data as a bubble plot, while also calculating the median day and time of emergence. The current system was designed using 3D printing so the user can modify the system to be adjusted for different species of insects. The goal of this protocol is to investigate important questions in chronobiology and stress physiology, using this precise and automated system to measure insect emergence patterns.

Measurement of insect emergence patterns requires precision. Existing systems are only semi-automated and sample size is limited. We addressed these issues by designing a system using microcontrollers to precisely measure the time of emergence of large numbers of emerging insects.

Un sistema preciso ed autonomo per l'individuazione di modelli di emersione degli insetti

Existing systems to measure insect emergence patterns have limitations; they are only partially automated and are limited in the maximum number of ...

Detection of Tilapia Lake Virus Using Conventional RT-PCR and SYBR Green RT-qPCR

The aim of this method is to facilitate the fast, sensitive and specific detection of Tilapia Lake Virus (TiLV) in tilapia tissues. This protocol can be used as part of surveillance programs, biosecurity measures and in TiLV basic research laboratories. The gold standard of virus diagnostics typically involves virus isolation followed by complementary techniques such as reverse-transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) for further verification. This can be cumbersome, time-consuming and typically requires tissue samples heavily infected with virus. The use of RT-quantitative (q)PCR in the detection of viruses is advantageous because of its quantitative nature, high sensitivity, specificity, scalability and its rapid time to result. Here, the entire method of PCR based approaches for TiLV detection is described, from tilapia organ sectioning, total ribonucleic acid (RNA) extraction using a guanidium thiocyanate-phenol-chloroform solution, RNA quantification, followed by a two-step PCR protocol entailing, complementary deoxyribonucleic acid (cDNA) synthesis and detection of TiLV by either conventional PCR or quantitative identification via qPCR using SYBR green I dye. Conventional PCR requires post-PCR steps and will simply inform about the presence of the virus. The latter approach will allow for absolute quantification of TiLV down to as little as 2 copies and thus is exceptionally useful for TiLV diagnosis in sub-clinical cases. A detailed description of the two PCR approaches, representative results from two laboratories and a thorough discussion of the critical parameters of both have been included to ensure that researchers and diagnosticians find their most suitable and applicable method of TiLV detection.

This protocol diagnoses Tilapia Lake Virus (TiLV) in tilapia tissues using RT-PCR methodologies. The entire method is described from tissue dissection to total RNA extraction, followed by cDNA synthesis and detection of TiLV by either conventional PCR or quantitative PCR using dsDNA binding a fluorescent binding dye.

Rilevamento di Tilapia Lago Virus mediante RT-PCR convenzionale e SYBR Green RT-qPCR

The aim of this method is to facilitate the fast, sensitive and specific detection of Tilapia Lake Virus (TiLV) in tilapia tissues. This protocol can be ...

Enrichment and Detection of Clostridium perfringens Toxinotypes in Retail Food Samples

Clostridium perfringens (C. perfringens) is a prolific toxin producer and causes a wide range of diseases in various hosts. C. perfringens is categorized into five different toxinotypes, A through E, based on the carriage of four major toxin genes. The prevalence and distribution of these various toxinotypes is understudied, especially their pervasiveness in American retail food. Of particular interest to us are the type B and D strains, which produce epsilon toxin, an extremely lethal toxin suggested to be the environmental trigger of multiple sclerosis in humans. To evaluate the presence of different C. perfringens toxinotypes in various food samples, we developed an easy method to selectively culture these bacteria without the use of an anaerobic container system only involving three culturing steps. Food is purchased from local grocery stores and transported to the laboratory under ambient conditions. Samples are minced and inoculated into modified rapid perfringens media (RPM) and incubated overnight at 37 &#176;C in a sealed, airtight conical tube. Overnight cultures are inoculated onto a bottom layer of solid Tryptose Sulfite Cycloserine (TSC) agar, and then overlaid with a top layer of molten TSC agar, creating a &#34;sandwiched&#34;, anaerobic environment. Agar plates are incubated overnight at 37 &#176;C and then evaluated for appearance of black, sulfite-reducing colonies. C. perfringens-suspected colonies are removed from the TSC agar using sterile eye droppers, and inoculated into RPM and sub-cultured overnight at 37 &#176;C in an airtight conical tube. DNA is extracted from the RPM subculture, and then analyzed for the presence of C. perfringens toxin genes via polymerase chain reaction (PCR). Depending on the type of food sampled, typically 15&#8211;20% of samples test positive for C. perfringens.

Enrichment and Detection of Clostridium perfringens Toxinotypes in Retail Food Samples

The objective of this protocol is to detect different Clostridium perfringens toxinotypes in locally purchased foods, particularly epsilon toxin producing strain types B and D, without the use of anaerobic chambers.

Arricchimento e rilevamento di Clostridium perfezioni tossinotipi nei campioni di alimenti al dettaglio

Clostridium perfringens (C. perfringens) is a prolific toxin producer and causes a wide range of diseases in various hosts. C. perfringens is categorized ...