Vários técnicos e estudantes de pós-graduação na Universidade Estadual de Michigan têm ajudado a desenvolver, refinar e avaliar o projeto de armadilha do DD ao longo dos anos, incluindo Andrea Anulewicz, Robert McDonald e Nathan Siegert. Agradecemos a James Wieferich e Jeremy Lowell (MSU) para sua assistência no desenvolvimento as instruções para instalação do DD. James Wieferich e Molly Robinett (MSU) revisaram um rascunho anterior do projeto deste manuscrito e agradecemos as suas sugestões. Joseph Francese e Damon Crook (USDA-APHIS) generosamente compartilhou suas observações em resposta EAB para cor e host voláteis. Financiamento para avaliação e desenvolvimento de armadilha DD foi fornecido por subsídios de protecção da saúde o USDA Forest Service, área do nordeste, floresta.

1. preparar o verde e roxo painéis <ol><li>adquirir verde e roxo ondulado painéis de plástico (120 cm x 60 cm) para a captura de EAB através de um distribuidor comercial de pragas de gestão de suprimentos. Use um estilete ou faca de serviço público para marcar dois Dobre as linhas em cada painel cortando parcialmente através do plástico ao longo as corrugações verticais, 40cm dois curtas bordas do painel. Isso permite que o painel a ser dobrada em um prisma de 3 lados (cada face será 40 x 60 cm). Painéis geralmente são marcados pelo distribuidor para facilitar a dobradura, assim este passo pode não ser necessário.</li>
	<li>Broca dois pares de furos em cada painel usando uma ½ polegada (1,3 cm) pouco conforme indicado na Figura 1. Faça furos de 4 polegadas (10 cm) da parte superior do painel e 4 polegadas em ambos os lados da dobra à esquerda. O segundo par de furos de broca de 19 polegadas (48 cm) da parte superior do painel e logo abaixo os furos superiores (ou seja, 4 polegadas em ambos os lados da dobra à esquerda).</li>
</ol> 2. Preparar o tubo de PVC <ol><li>obter uma secção de tubo de cloreto de polivinila (PVC) agenda 40, 3 m de comprimento e 10 cm de diâmetro, de uma loja comercial ou outro fornecedor para cada armadilha. Furos 4 na tubulação de PVC, conforme mostrado na Figura 2. Usando uma broca de ½ polegada (1,3 cm), fazer um par de buracos 4 polegadas (10 cm) da parte superior do tubo de PVC e 3½ polegadas (8,9 cm) distante. Alinhe os orifícios horizontalmente.</li>
	<li>Um segundo par de furos, 3½ polegadas distante e 52 polegadas (1.3 m) abaixo do topo do tubo, diretamente abaixo do primeiro conjunto de furos de broca.</li>
</ol> 3. Instalar um T-post libras <ol><li>uso um post para instalar um t-post no local desejado. Dirigir o post profundo o suficiente para que a flange está logo abaixo da superfície do solo, mas não há nenhuma necessidade de ir mais fundo. T-post irá fornecer todo apoio para a armadilha DD, mesmo em ventos fortes. Tipo de fios ou suportes adicionais não são necessários. Embora o t-post não precisa ser definido profundamente no solo, é uma boa ideia para verificar se há utilidades subterrâneas ou tubulações enterradas antes de dirigir o post no chão.</li>
</ol> 4. Montar a armadilha de DD <ol><li>dobra um painel roxo em um prisma. Se os painéis estão pre-glued, certifique-se de que lado pegajoso é do lado de fora. Alimentar as duas pequenas abas através de fendas e usar dois laços de cabo de 8 polegadas (20 cm) para fixar as extremidades do painel juntos. Repetir com um painel verde.</li>
	<li>Suporte do tubo de PVC horizontalmente acima do solo. Deslize o prisma roxo para o tubo de PVC e até o menor conjunto de furos no tubo de PVC.</li>
	<li>Alimentar um grande, gravata de cabo longo 2 pés (60 cm) horizontalmente através do topo deixou o buraco no prisma, então através do par de buracos no tubo de PVC e finalmente através do furo adjacente no lado direito do prisma. Certifique-se de que o prisma é bem encostado a parte sólida do tubo de PVC que se encontra entre os dois furos. Feche e aperte a abraçadeira, certificando-se a braçadeira não está torcida.</li>
	<li>Alimentar uma segunda grande abraçadeira através do orifício inferior do prisma, ao redor do tubo e no orifício correspondente no lado adjacente do prisma. Feche o laço do cabo e aperte, novamente tendo o cuidado de assegurar o empate de cabo não torça antes que esteja apertada.</li>
	<li>Deslize o prisma verde do tubo de PVC e anexá-lo ao conjunto superior de buracos no tubo de PVC com dois laços de cabo de 60 cm, seguindo os mesmos passos como antes. Vai haver uma lacuna de 21 polegadas (54 cm) entre os prismas superiores e inferiores.</li>
</ol> 5. Aplicar a cola de inseto e Set Up the Trap <ol><li>clara aplicar cola de captura insetos para painéis que não são pre-glued. Nem pré-colada painéis geralmente exigem cola adicional para capturar besouros EAB. Para aplicar cola de captura de insetos, definir a base do tubo de PVC no chão e coloque a face interna do prisma superior-posto de t.</li>
	Luvas de <li>usando o latex (ou similar), colher-se dois a três punhados de cola e esfregaço através da superfície de um painel, certificar-se de que a superfície do painel é completamente revestido. Gire o tubo de PVC para acessar todas as superfícies de três sobre dois prismas. Cola não precisa ser aplicado para o tubo de PVC.</li>
	<li>Pegue o cano de PVC, segurá-lo na vertical e deslize a extremidade inferior sobre o post de t. Evite tocar os painéis pegajosos.</li>
</ol> 6. Isca na armadilha de DD <ol><li>como prismas pré-colada geralmente chegam com um pequeno furo (4 mm) perto da borda inferior de um painel do prisma, usar uma gravata de cabo de 4 polegadas (10 cm) para anexar um malote de cis -3-hexenol à borda inferior do prisma top (verde). Se não houver um buraco, use um furador portátil ou um canivete para cortar um pequeno buraco ou fenda no plástico e, em seguida, usar a gravata pequeno cabo para anexar a atração. 
	Nota: O cis -3-hexenol composto nas iscas é liberado lentamente durante aproximadamente 10 semanas. Se precisam de armadilhas manter a sua eficácia por mais de 10 semanas, substituir as iscas, conforme necessário.</li>
</ol> 7. Verificação de armadilhas para besouros EAB <ol><li>verificação de armadilhas em intervalos de 2-4 semanas se possível, para evitar a perda de besouros capturados, que ocasionalmente cair fora das armadilhas, especialmente se ocorre chuva pesada. Examine os três lados do prisma inferior para EAB besouros. Em seguida, usando luvas descartáveis de látex, levantar o tubo de PVC para cima e fora o t-post e coloque-a face interna do prisma superior a t-post, expondo um painel de ambos os prismas.</li>
	<li>Uso de fórceps para remover qualquer suspeito EAB besouros e colocá-los em um saco de amostra de plástico re-selável.</li>
	<li>Girar o tubo de PVC para examinar todos os três painéis em ambos os prismas para suspeito EAB besouros e, em seguida, empurra o tubo de volta sobre a post-t. 
	Nota: Moscas, besouros clique e vários outros insetos serão inevitavelmente capturados em armadilhas. É preciso um olho afiado para manchar um besouro EAB. Carregar um cartão de referência de foto pode ser útil ao verificar armadilhas pela primeira vez.</li>
	<li>Para confirmar a identificação das espécies, retornar besouros suspeitos para o laboratório e mergulhe-os em um tóxicos histológica despachante para um ou dois dias para remover a cola de captura de insetos. Besouros em seguida podem ser examinados sob um microscópio dissecação.</li>
</ol>

Os autores declaram que eles têm não tem interesses financeiro concorrente.

A concepção e a colocação de armadilhas DD exploram a atração de besouros adultos da EAB às máscaras específicas de cor e de luz. O prisma verde na parte superior do tubo de PVC é mais atraente para besouros masculinos, que gastam sua expectativa de vida, alimentando-se de folhas de freixo, bem como32,36,38,39de acasalamento. O prisma inferior roxo garante armadilhas também são atraentes para o sexo feminino besouros32. Como os machos, femininos besouros se alimentam de folhagem cinza em toda a sua vida útil, mas fêmeas maduras gastam grandes quantidades de tempo sobre a casca de ramos ou a mala onde põem ovos39. Enquanto a detecção de novas infestações requer apenas capturando um besouro de ambos os sexos, a capacidade de atrair e capturar EABs femininos pode ser particularmente importante. Fêmeas EAB maduras são fisiologicamente capazes de voar mais longe do que os machos40 e população modelos sugerem a dispersão de longa distância de fêmeas acasaladas contribui substancialmente para a expansão da EAB novas infestações41, 42 , 43.
DD de colocar armadilhas no aberto serve finalidades múltiplas. Uma vez montado, DD armadilhas são altamente visíveis e a silhueta da armadilha do alta, vertical é semelhante ao de um pequeno Freixo. Usar dois prismas realça a silhueta da armadilha, mas talvez mais importante, duplica a área da superfície disponível para besouros de armadilhagem. Os prismas de verdes e púrpura sobre as armadilhas DD stand-alone não são susceptíveis de ser obscurecida por folhagem de árvores ou vegetação. Em contraste com as iscas prisma armadilhas penduradas do ramo de um freixo, iscas sobre as armadilhas do DD não tem que competir com compostos emitidos pelas cinzas ao vivo em torno da armadilha. Em vez disso, iscas, armadilhas do DD de fornecem os besouros com uma fonte de ponto distinto do relacionados com cinzas voláteis podem facilmente identificar e localizar. Além disso, preparando a armadilha DD as proezas aberto a preferência forte e consistente para condições ensolaradas exibido por besouros EAB.
Finalmente, as armadilhas do DD são simples de instalar, fácil de verificar e resistir a ventos fortes e tempestades de verão. As armadilhas não são apenas altamente aparentes a EAB besouros; Eles também são fáceis para o pessoal de pesquisa Localizar para verificações de meia-estação ou recuperação. Vandalismo, nunca foi problema em qualquer uma das dezenas de sites onde DD armadilhas foram monitoradas durante os últimos dez anos. Os painéis pegajosos desagradáveis prováveis servem para sufocar o entusiasmo dos pretensos vândalos.
As armadilhas DD também podem servir como ferramentas de divulgação para aumentar a consciência pública da EAB. Exibir um sinal pode ser útil. Sinais simples e de baixo custo com uma foto de uma armadilha DD e uma explicação da finalidade da armadilha podem ser impresso com uma impressora desktop, laminados, colados a uma madeira ou papelão de apoio, então anexados a um t-post em áreas onde as pessoas são susceptíveis de encontrar armadilhas um o site de t. Sinais de exposição e o óbvio esforço em andamento para detectar EAB normalmente geram boa vontade além de funcionar como uma ferramenta educacional.
Obviamente, DD armadilhas com dois painéis, um t-post e tubo de PVC custam pelo menos duas vezes tanto quanto suspendendo uma armadilha único prisma na Copa das árvores de cinzas. O tubo de PVC e t-post, no entanto, podem ser reutilizados por muitos anos. Além disso, muito do custo de pesquisas de deteção para pragas florestais invasoras como EAB reflete o tempo necessário para as tripulações de pesquisa localizar um local apropriado, instalar a armadilha, periodicamente as armadilhas, e classificar e identificar a armadilha pega. Custos de falsos negativos, por exemplo, falha em detectar uma infestação de baixa densidade da EAB, também devem ser considerados se for usada uma armadilha menos eficaz. Resultados de estudos englobando mais de 30 sites diferentes têm mostrado que, em áreas recentemente infestadas com populações de baixa densidade EAB, DD armadilhas eram consistentemente mais prováveis capturar besouros EAB que prisma armadilhas aguentando os dosséis de freixos22 ,31,44.
Desvantagens e vantagens distintas estão associadas com cada projeto de armadilha EAB avaliado em ensaios de campo anteriores. Armadilhas de funil são inicialmente mais caras do que os outros projetos da armadilha, mas podem ser reutilizadas por vários anos. Armadilhas de prisma são o design menos caro, enquanto DD armadilhas são intermediárias no custo. Os componentes mais caros de armadilhas DD (t-posts e tubo de PVC) estão prontamente disponíveis em lojas de ferragem e casa melhoria e podem ser reutilizados por vários anos. Anticongelante non-toxic, non-etanol ou tiras insecticidas são necessárias para capturar insetos atraídos para armadilhas no funil. Prismas, se suspenso em dosséis de cinza ou em armadilhas DD, devem ser revestidas com cola inseto pegajosa para capturar insetos e não podem ser reutilizadas. Todos os insetos capturados em armadilhas de funil devem ser recolhidos e retornados ao laboratório para identificação e classificação. Painéis prisma e DD armadilhas devem ser examinados e suspeitos besouros removidos com fórceps para confirmação de espécies posteriores em laboratório. Alguma experiência é útil para distinguir EABs (ou pelo menos besouros buprestid) no campo, mas topógrafos de treinamento não é difícil. Armadilhas de funil e prisma armadilhas nos galhos em copas de árvore de cinzas de suspensão pode exigir um tempo considerável, especialmente se as árvores são grandes. Muitas vezes precisam polos longos ou grandes estilingues para acessar ramos e linha trançada ou cabo é necessário suspender as armadilhas. Armadilhas de dois andares, que são colocadas em campo aberto perto de freixos, podem ser facilmente configuradas em qualquer lugar. Ventos fortes ocasionalmente tem soprado prismas das árvores ou causado linhas rolamento funil ou prisma armadilhas ao redor ramos superiores, impedindo o acesso para as armadilhas do solo. Em contraste, DD armadilhas permaneceram intactas durante tempestades severas, incluindo tempestades com ventos de linha reta22,44.
É importante notar que deteção da EAB e métodos de pesquisa não são mutuamente exclusivos. Métodos de deteção diferentes podem ser integrados em estratégias de pesquisa adequadas para situações específicas ou as condições locais. Por exemplo, baixo valor ou declinando cinza podem ser cintadas e descascadas, para funcionar como ferramentas de detecção de árvores ao longo das linhas de vedação, estradas ou em ambientes florestados. Menos cara prisma armadilhas ou armadilhas de funil reutilizável podem ser distribuídas mais amplamente em pesquisas sistemáticas em grande escala. Armadilhas DD autônoma podem ser especialmente apropriadas para áreas de alto risco, tais como parques de campismo ou áreas de recreação onde potencialmente infestadas de lenha apresenta uma ameaça em curso. Topógrafos podem optar por colocar armadilhas DD em uma variedade de configurações, ou locais, enquanto as armadilhas são perto de freixos e em campo aberto, então os prismas são expostos ao sol. Dois andares armadilhas têm sido utilizadas com sucesso em medianas da estrada e ao longo de ferrovias, em linhas de alta tensão atravessa áreas florestadas, em torno do perímetro de serrarias e jardas de resíduos de madeira e ao longo de rios, valas de drenagem e outras áreas de mata ciliares. Embora as armadilhas do DD são iscadas com uma cinzas voláteis (cis-3-hexenol) e foram projetados para EAB inquéritos, buprestid nativo espécie também frequentemente é capturado nos painéis pegajosos. Mais estudos para avaliar alterações potenciais armadilhas DD ou iscas que possam aumentar a atração de outras espécies de buprestid poderiam ser útil.

A broca do Esmeralda cinza (EAB) (Agrilus planipennis Fairmaire) (Coleoptera: Buprestidae) matou centenas de milhões de freixos (Fraxinus spp.), desde que foi identificado em 2002 na área metropolitana de Detroit, Michigan e em nas proximidades Windsor, Ontário, Canadá. Propagação inadvertida de freixos infestadas, logs e lenha, juntamente com a dispersão natural de besouros, resultaram na criação da EAB pelo menos 27 Estados e duas províncias canadenses a data1. Relatórios recentes indicam que a EAB também invadiu Moscou, na Rússia, onde está matando paisagem cinza árvores2,3, gerando uma preocupação adicional sobre seu potencial se espalhou para a Europa. Variação interespecífica em preferência de anfitrião EAB e resistência entre norte-americanos cinza espécie tem sido documentada4,5,6,7,8,9, Mas praticamente todas as espécies de cinzas na América do Norte são susceptíveis de ser anfitriões adequados. Catastróficos níveis de mortalidade de cinzas foram registrados nas áreas de Michigan e Ohio10,11,12, com impactos ecológicos e económicos associados13,14, 15,16.
Métodos eficazes para detectar novas infestações EAB e monitorar as populações de baixa densidade são aspectos críticos da gestão desta praga invasora em ambientes urbanos, residenciais e arborizadas. Deteção adiantada fornece tempo para desenvolver uma estratégia, garantir o financiamento e implementar atividades para reduzir os impactos da EAB. Por exemplo, os proprietários e funcionários municipais podem começar a tratar cinzas valiosa em paisagens com inseticidas sistêmicas antes de danos causados pelo aumento da eficácia de limites de densidades larvares destes produtos17,18. Da mesma forma, identificação de uma nova infestação e informações confiáveis sobre distribuição local EAB dá silvicultores e proprietários a oportunidade de implementar as vendas de madeira, conversão de espécies ou outras atividades para reduzir os custos económicos ou ecológica efeitos da mortalidade de cinzas.
Detecção precoce, delimitação e um controlo eficaz das populações de EAB baixa densidade, no entanto, permanecem difíceis. Pesquisas visuais para identificar freixos recém infestadas não são confiáveis porque cinza raramente apresentam sinais externos ou sintomas de infestação EAB até densidades larvares construir a moderada ou mesmo altos níveis4,19. O meio mais eficaz de detecção muito baixas densidades de EAB envolve o uso de cinzas cintadas deteção árvores19,20,21,22. Freixos são anelados na primavera ou início do verão, removendo uma faixa de casca exterior e floema em torno da circunferência do tronco, o que sublinha a árvores, aumentando a atração de adulto EAB besouros. Árvores cintadas podem ser descascadas no outono ou no inverno para identificar a densidade e a presença de larvas de EAB. Embora cintado cinza árvores têm sido utilizadas operacionalmente para EAB deteção19,23,24,25, eles são problemáticos. Árvores cintadas descascamento podem ser trabalhoso e localizar árvores adequadas para cintar pode ser difícil, especialmente em áreas urbanas ou residenciais ou quando pesquisas devem efectuar-se por vários anos19.
Artificiais armadilhas iscadas com atrativos EAB eliminam muitas preocupações associadas ao uso de deteção de freixos cintadas. Em contraste com outras pragas florestais importantes tais como gypsy moth (mariposa dispar L) e alguns besouros de bark Scolytinae que produzem sexo de longa distância ou feromônios de agregação, até à data, não eficaz longa distância feromônios foram encontrados para EAB. Um feromônio sexual de curto alcance, cis-lactona, podem facilitar o acasalamento26,27, mas em ensaios de campo, cis-lactona iscas não aumentaram consistentemente atração EAB a armadilhas artificiais28. Besouros adultos dependem de compostos voláteis emitidos pelas cinzas de folhas, casca e madeira para identificar seu anfitrião árvores29,30,31 e encontrar parceiros potenciais. Vários compostos voláteis foram avaliados para uso em iscas para atrair adultos EABs para armadilhas artificiais27,32. Atualmente, as armadilhas utilizadas operacionalmente para pesquisas de deteção EAB nos EUA são iscadas com iscas contendo cis-3-hexenol, um volátil de folha verde comum produzido por cinzas folhagem30,33. Em anos anteriores, armadilhas EAB usadas para pesquisas dos EUA também têm sido iscadas com Manuka óleo, que é extraído da árvore do chá de Nova Zelândia (Leptospermum scoparium Forst e Forst) ou óleo de Phoebe, um extrato da árvore de noz brasileira (Phoebe porosa Mez.); Ambos contêm vários sesquiterpenos que também estão presentes na casca de freixo29. Problemas com entregas inconsistentes destes óleos naturais, no entanto, restringiu seu uso.
Além de compostos voláteis produzidos anfitrião, besouros adultos EAB respondem a estímulos visuais, incluindo cor e luz20,32,34,35. Estudos iniciais mostraram que adultos EAB, que são relativamente ágil panfletos, raramente foram capturados pelo funil preto armadilhas iscadas com vários compostos voláteis de cinzas (DGM e TMP, dados não publicados). Outros projetos de armadilha, tais como armadilhas de Cruz de palhetas, foram avaliados, mas a aversão do EAB besouros para espaços escuros e sombras limitada a eficácia dessas armadilhas.
Desenvolvimento de um prisma de três faces, que pode ser revestido com clear captura insetos cola35 para capturar besouros, foi uma melhoria substancial no design de armadilha. Atração de adultos EABs a cor também foi extensivamente avaliada em ensaios de campo e em estudos de laboratório com um retinograph34. Resultados mostram EAB besouros são consistentemente atraídos específicos tons de verde e roxo32,36. Armadilhas de prisma, fabricadas em plástico corrugado colorido agora são amplamente utilizadas em atividades de pesquisa EAB nos EUA e Canadá.
Porque os adultos EAB são fortemente atraídos pela luz, besouros são muito mais propensos a colonizar aberto-grown árvores do sombreado árvores de20,21. Orientações para os exames de deteção EAB em os E.U. necessário armadilhas prisma individual para ser suspenso em um galho de meados de dossel em um freixo crescendo ao longo de uma estrada ou a borda de uma área arborizada de37. Em teoria, isto deve assegurar-se que pelo menos um painel do prisma é exposta à luz solar. Operacionalmente, no entanto, prisma armadilhas podem ser parcialmente sombreadas por ramos aéreos adjacentes ou nas proximidades de árvores. Superfícies pegajosas painel frequentemente são sopradas em folhagem, resultando em folhas aderindo ao e obscurecendo, pelo menos uma parte de um ou mais painéis.
Armadilhas de dois andares (DD) foram desenvolvidas para integrar múltiplos sinais visuais e olfativos para aumentar a atração de besouros EAB. Cada armadilha DD é composta por um verde e um roxa ondulada plástica prisma anexado a um cano de 40 cloreto de polivinila (PVC) de programação do 3 m de altura (10 cm de diâmetro), que é apoiado pelo deslizar o tubo de PVC sobre um t-post. Usar o verdes e roxas prismas é projetado para atrair ambos os sexos da EAB besouros32,36,38,39. Além disso, ao invés de ser suspenso em um galho na Copa de uma árvore de cinzas, as armadilhas do DD são colocadas em pleno sol, 5-10 metros freixos ao longo da borda de uma área arborizada ou no meio de dispersos, freixos aberto-crescido.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Light green corrugated plastic panel: 120 cm x 60 cm</td>
			<td>Great Lakes IPM; www.greatlakesipm.com</td>
			<td>IPM-EAB GR</td>
			<td colspan="13" rowspan="3">All three surfaces of each prism need to be covered with clear insect trapping glue, even if the panels are pre-glued. Pre-glued panels are often not sticky enough to consistently capture or retain EAB beetles.&#160; Other clear insect trapping glue products are available but are considerably more difficult to apply.&#160;&#160;&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Light purple corrugated plastic panel: 120 cm x 60 cm</td>
			<td>Great Lakes IPM; www.greatlakesipm.com</td>
			<td>IPM-EAB&#160; LP</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Large cable tie (4): 60 cm with a 79 kg capacity</td>
			<td>Cabletiesandmore.com; http://www.cabletiesandmore.com/cableties.php</td>
			<td>CT-24-NU-100PK</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medium cable ties (4): 20 cm with a 22.7 kg capacity</td>
			<td>Cabletiesandmore.com; http://www.cabletiesandmore.com/cableties.php</td>
			<td>CT261</td>
			<td colspan="13" rowspan="1"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small cable tie: 10 cm with a 8.2 kg capacity</td>
			<td>Cabletiesandmore.com; http://www.cabletiesandmore.com/cableties.php</td>
			<td>CT204</td>
			<td colspan="13" rowspan="1"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>cis-3-hexanol pouch</td>
			<td>Synergy Semiochemicals; http://www.semiochemical.com/html/buprestids.html)</td>
			<td>3136</td>
			<td colspan="13" rowspan="4">Lures used to bait DD traps consist of pouches containing cis-3-hexenol, a non-toxic compound present in ash leaves.&#160; One pouch is attached to the lower edge of the top prism using a small cable tie.&#160; Each pouch of cis-3-hexenol has a release rate of approximately 50 mg/day. Note that cis-3-hexenol is sometimes written as Z-3-hexenol.&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aphinity Hexenol</td>
			<td>Sylvar Technologies</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lure GLV4 emerald ash borer</td>
			<td>Chemtica, Heredia, Costa Rica</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>cis-3-hexanol pouch</td>
			<td>WestGreen Global Technologies; http://www.westgreenglobaltechnologies.com/</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clear insect trapping glue&#160;</td>
			<td>Hummert International; http://www.hummert.com/product-details/8196/pestick</td>
			<td>01-3522-1&#160;&#160;</td>
			<td colspan="13" rowspan="1"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Histoclear II histological clearing agent</td>
			<td>National Diagnostics; www.nationaldiagnostics.com</td>
			<td>HS-202</td>
			<td colspan="13">Histoclear II will be needed to remove the sticky insect glue from suspect beetles.&#160; Other histological clearing agents are available but may not remove the glue and some products dissolve plastic, an important consideration if plastic containers are used for soaking the beetles.&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Histoclear II histological clearing agent</td>
			<td>Great Lakes IPM; www.greatlakesipm.com</td>
			<td>10011</td>
			<td colspan="13">Histoclear II will be needed to remove the sticky insect glue from suspect beetles.&#160; Other histological clearing agents are available but may not remove the glue and some products dissolve plastic, an important consideration if plastic containers are used for soaking the beetles.&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>t-post: 1.5 m</td>
			<td>multiple sources</td>
			<td></td>
			<td colspan="13" rowspan="1">A t-post (5 feet tall) (1.5 m) is used to support the PVC pipe.&#160;&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>post pounder</td>
			<td>multiple sources</td>
			<td></td>
			<td colspan="13" rowspan="1">Use a post pounder to set t-posts into the ground. No additional support is necessary.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HDPE (high density polyethylene) PVC pipe : 3 m x 10 cm diameter</td>
			<td>multiple sources</td>
			<td colspan="14" rowspan="1"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps (rigid)</td>
			<td>multiple sources</td>
			<td></td>
			<td colspan="13">Forceps (tweezers) will be needed to remove suspect beetles from the traps. Rigid forceps work better than flexible forceps.&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Latex gloves</td>
			<td>multiple sources</td>
			<td></td>
			<td colspan="13">Latex gloves are needed for applying the insect trapping glue to the prisms and for checking the traps to collect EAB beetles.&#160;&#160;&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Baby oil or baby wipes&#160;</td>
			<td>multiple sources</td>
			<td></td>
			<td colspan="13" rowspan="1">Baby oil or baby wipes are helpful for removing the trapping glue from hands and equipment.&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Re-sealable plastic specimen bags: 5 cm x 8 cm&#160;</td>
			<td>multiple sources</td>
			<td></td>
			<td colspan="13">Small re-sealable plastic specimen bags are useful for collecting beetles from traps.&#160; Each bag should be labelled, either with pre-made, adhesive labels or with soft felt pens.&#160;&#160;&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td colspan="3">Guides to help with distinguishing EAB from beetles native to North America are available on the national EAB website at www.emeraldashborer.info. &#160;</td>
			<td colspan="13" rowspan="1"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

building double-decker traps for early detection of emerald ash borer

Broca de cinzas Esmeralda (EAB) (Agrilus planipennis Fairmaire), o inseto de floresta mais destrutivo que invadiram a América do Norte, matou centenas de milhões de árvores de floresta e a paisagem cinza (Fraxinus spp.). Diversos projetos de armadilha artificial para atrair e capturar besouros EAB foram desenvolvidos para detectar, delinear e monitorar as infestações. Double-Decker (DD) armadilhas consistem em dois ondulado plásticas prismas, um verde e um roxo, ligado a um tubo de cloreto de polivinila (PVC) de 3 m de altura apoiado por um t-post. O prisma verde na parte superior do tubo de PVC é iscado com cis-3-hexenol, um composto produzido por folhagem cinza. As superfícies de ambos os prismas são revestidas com cola inseto pegajosa para capturar besouros adultos EAB. Armadilhas de dois andares devem ser colocadas perto de freixos, mas em áreas abertas, expostas ao sol. Colocação e construção de armadilha de dois andares são apresentados aqui, juntamente com um resumo dos experimentos de campo, demonstrando a eficácia do DD armadilhas na captura de besouros EAB. Em um estudo recente em sites com relativamente baixas densidades EAB, armadilhas de dois andares capturaram EAB significativamente mais do que o prisma verde ou roxo armadilhas ou armadilhas de funil verde, todos os quais são projetados para ser suspenso em um galho no dossel de freixos. Uma porcentagem maior de double decker armadilhas foram positivas, ou seja, capturado EAB pelo menos um, que o prisma armadilhas ou armadilhas de funil que foram penduradas em copas de árvore de cinzas.

Em uma grande escala de estudo, três projetos de armadilha artificial, bem como cintados freixos foram implantados sistematicamente, 10-20 m de distância, do outro lado um recém infestadas 16 ha arborizada área com uma densidade muito baixa de EAB25. Projetos de armadilha artificial testaram incluídas prismas roxas iscadas com óleo de Manuka e suspenso &#62; árvores de 3 m de altura em um galho no dossel de cinzas, armadilhas DD 3 m de altura com dois painéis verdes, e DD armadilhas com dois painéis roxos suportados por postes de t. Armadilhas de dois andares de ambas as cores foram iscadas com uma mistura de compostos voláteis de cinzas incluindo cis-3-hexenol no painel superior e Manuka óleo sobre painel inferior. As armadilhas foram verificadas para coletar EAB capturado durante todo o verão e árvores cintadas foram descascadas em queda. Χ2 bondade-do teste de ajuste (GOF) com Bonferroni correção para comparações emparelhadas foi usada para testar se o total de capturas de EAB diferiam entre os tipos de armadilha de quatro. Armadilhas de dois andares roxo capturaram besouros EAB mais do que o dossel roxo armadilhas, armadilhas de dois andares verde ou bandas adesivas em árvores cintadas. Armadilhas de dois andares verde capturaram mais EAB besouros que roxo dossel armadilhas. Um ou mais besouros EAB foram capturados em 25% das armadilhas dossel roxo, 56% das armadilhas verde de dois andares e 81% das armadilhas roxo de dois andares, enquanto todas as árvores cintadas foram colonizados25.
Mais recentemente, EAB capta e sucesso de deteção de desenhos diferentes armadilha foram monitorados em 2015 em oito blocos de armadilhas, estabelecidos em dois sites florestados com baixa a moderada densidades da EAB (Figura 3). Cada bloco é composta por seis armadilhas, espaçadas de 10-20 m de distância. Armadilhas avaliadas incluíram um prisma roxo, um prisma verde escuro, um prisma de luz verde e uma armadilha de funil verde, cada um suspenso em um galho &#62; 5 m de altura em freixos crescendo na borda de áreas arborizadas. Cada bloco também incluiu uma armadilha DD com dois prismas roxas e uma armadilha DD com um prisma verde na parte superior e um prisma roxo na parte inferior. Como antes, as armadilhas DD foram 3 m de altura e apoiado no conjunto de t-postos no chão. Todas as armadilhas foram iscadas com cis-3-hexenol e as armadilhas de prisma verde claro e escuro também incluíram cis-lactona iscas. O número médio de EAB capturado por armadilha foi analisado entre tratamentos pela ANOVA de duas vias com efeitos principais para replicar e tratamento seguido o Tukey-Kramer: teste de separação. Todas as armadilhas DD capturaram um ou mais besouros EAB, enquanto 62% das armadilhas funil verde e 37 de 75% das armadilhas prisma em dosséis de freixos capturados pelo menos um EAB. Ambas as combinações de cores de DD armadilhas capturaram significativamente mais EABs masculinos e femininos, do que qualquer um dos projetos armadilha pendurados em dosséis cinza (Figura 3). Enquanto não houve significativa diferença entre armadilhas com dois painéis roxos e armadilhas com painéis de verdes e roxos no presente estudo, outros experimentos descobriram que as armadilhas DD verdes e roxas capturaram EAB mais do que as armadilhas com dois painéis roxo28 e que quando colocados em locais mais elevados, armadilhas de prisma verde capturaram EAB mais do que o prisma roxo armadilhas34. Portanto, inclusão de painéis verdes na posição superior, sobre as armadilhas de double decker pode melhorar a atração a EAB.
Número de EAB besouros capturados por prisma também foi avaliado, dado que DD armadilhas têm duas vezes mais área de superfície (14.400 cm2), como as armadilhas do dossel de prisma individual (7.200 cm2) e 30% mais área do que as superfícies combinadas de todos os 12 funis de um armadilha de funil (11.160 cm2). A área visual bidimensional silhueta de uma armadilha de prisma é equivalente a um painel do prisma 3 lados (2.400 cm2) e a área visual da silhueta de uma armadilha DD é duas vezes aquele (4.800 cm2) de uma armadilha de prisma e 20% maior do que o bidimensional área visual da silhueta de uma armadilha de funil (2000 cm2) (equivalente ao diâmetro de um funil (20 cm), vezes a altura total de 12 funis parcialmente aninhados [100 cm]) quando a armadilha é pendurada e expandida. Mesmo quando os prismas individuais foram considerados, no entanto, as armadilhas DD capturaram besouros EAB mais do que os outros projetos da armadilha. Prismas globalmente, individuais sobre o DD armadilhas em dois sites adultos capturados de 49 a 111 EABs (totais de 146 e 214 EAB por armadilha DD), enquanto prisma individual armadilhas e funil armadilhas em dosséis de cinzas capturaram um total de 11 a 28 EAB besouros, respectivamente.
<img alt="Figure 1" src="/files/ftp_upload/55252/55252fig1.jpg"> 
Figura 1: preparando-se painéis. Dois ondulados painéis de plástico (120 cm x 60 cm), geralmente verdes e roxos, são utilizados para cada armadilha de dois andares para capturar besouros EAB. Cada painel vai ser dobrada em terços para criar um prisma. Cada face do prisma será 40 cm x 60 cm. <a href="https://ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/55252/55252fig1large.jpg" target="_blank">clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 2" src="/files/ftp_upload/55252/55252fig2.jpg"> 
Figura 2: preparar o tubo de PVC. Um tubo de cloreto de polivinila (PVC) (schedule 40) que é de 3 m de altura e 10 cm de diâmetro será usado para apoiar as duas prisma armadilhas para captura de besouros EAB. Um total de quatro furos precisará ser perfurado em cada tubo de PVC. Abraçadeiras para anexar os prismas para o tubo de PVC vão passar por estes buracos.
<img alt="Figure 3" src="/files/ftp_upload/55252/55252fig3.jpg"> 
Figura 3: Captura de EAB besouros em DD e outras armadilhas. Média (+ SE) número de macho e fêmea EAB besouros capturados em verde no funil armadilhas ou armadilhas de luz roxa prisma iscadas com cis-3-hexenol e pendurados em dosséis de cinza, luz verde prisma armadilhas ou armadilhas de prisma verde escuro iscadas com cis-3-hexenol e cis-lactona e pendurados em dosséis de cinzas, ou armadilhas de dois andares (3 m de altura) com dois prismas roxas, ou com um prisma verde na parte superior e um inferior prisma roxo, ambos iscadas com cis-3-hexenol. Bares, encimadas por letras diferentes dentro do mesmo sexo são significativamente diferentes (P &#60; 0,05). N = 8 repetições em dois locais do norte de Michigan em 2015. <a href="https://ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/55252/55252fig3large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>

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Building Double-decker Traps for Early Detection of Emerald Ash Borer

Armadilhas eficazes para atrair e capturar a broca cinzas Esmeralda (EAB) são um elemento-chave da detecção e gestão desta praga invasora. Armadilhas de dois andares, colocadas em pleno sol perto de freixos, incorporam as pistas visuais e olfativas e eram mais propensos a capturar EAB do que outros projetos de armadilha em ensaios de campo.

Construção de dois andares armadilhas para detecção precoce de cinzas Esmeralda Borer

Emerald ash borer (EAB) (Agrilus planipennis Fairmaire), the most destructive forest insect to have invaded North America, has killed hundreds of millions ...

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Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Environment

7.8K visualizações.  Michigan State University. Armadilhas eficazes para atrair e capturar a broca cinzas Esmeralda (EAB) são um elemento-chave da detecção e gestão desta praga invasora. Armadilhas de dois andares, colocadas em pleno sol perto de freixos, incorporam as pistas visuais e olfativas e eram mais propensos a capturar EAB do que outros projetos de armadilha em ensaios de campo.

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Transcript and Metabolite Profiling for the Evaluation of Tobacco Tree and Poplar as Feedstock for the Bio-based Industry

The global demand for food, feed, energy, and water poses extraordinary challenges for future generations. It is evident that robust platforms for the exploration of renewable resources are necessary to overcome these challenges. Within the multinational framework MultiBioPro we are developing biorefinery pipelines to maximize the use of plant biomass. More specifically, we use poplar and tobacco tree (Nicotiana glauca) as target crop species for improving saccharification, isoprenoid, long chain hydrocarbon contents, fiber quality, and suberin and lignin contents. The methods used to obtain these outputs include GC-MS, LC-MS and RNA sequencing platforms. The metabolite pipelines are well established tools to generate these types of data, but also have the limitations in that only well characterized metabolites can be used. The deep sequencing will allow us to include all transcripts present during the developmental stages of the tobacco tree leaf, but has to be mapped back to the sequence of Nicotiana tabacum. With these set-ups, we aim at a basic understanding for underlying processes and at establishing an industrial framework to exploit the outcomes. In a more long term perspective, we believe that data generated here will provide means for a sustainable biorefinery process using poplar and tobacco tree as raw material. To date the basal level of metabolites in the samples have been analyzed and the protocols utilized are provided in this article.

Plant biomass offers a renewable resource for multiple products, including fuel, feed, food, and a variety of materials. In this paper we investigate the properties of tobacco tree (Nicotiana glauca) and poplar as suitable sources for a biorefinery pipeline.

Transcrição e Metabolite Profiling de Avaliação dos Árvore Tabaco e Poplar como matéria-prima para a indústria baseada em Bio

The global demand for food, feed, energy, and water poses extraordinary challenges for future generations. It is evident that robust platforms for the ...

Ambiente

Multimodal Optical Microscopy Methods Reveal Polyp Tissue Morphology and Structure in Caribbean Reef Building Corals

An integrated suite of imaging techniques has been applied to determine the three-dimensional (3D) morphology and cellular structure of polyp tissues comprising the Caribbean reef building corals Montastraeaannularis and M. faveolata. These approaches include fluorescence microscopy (FM), serial block face imaging (SBFI), and two-photon confocal laser scanning microscopy (TPLSM). SBFI provides deep tissue imaging after physical sectioning; it details the tissue surface texture and 3D visualization to tissue depths of more than 2 mm. Complementary FM and TPLSM yield ultra-high resolution images of tissue cellular structure. Results have: (1) identified previously unreported lobate tissue morphologies on the outer wall of individual coral polyps&#160;and (2) created the first surface maps of the 3D distribution and tissue density of chromatophores and algae-like dinoflagellate zooxanthellae endosymbionts. Spectral absorption peaks of 500 nm and 675 nm, respectively, suggest that M. annularis and M. faveolata contain similar types of chlorophyll and chromatophores. However, M. annularis and M. faveolata exhibit significant differences in the tissue density and 3D distribution of these key cellular components. This study focusing on imaging methods indicates that SBFI is extremely useful for analysis of large mm-scale samples of decalcified coral tissues. Complimentary FM and TPLSM reveal subtle submillimeter&#160;scale changes in cellular distribution and density in nondecalcified coral tissue samples. The TPLSM technique affords: (1) minimally invasive sample preparation,&#160;(2) superior optical sectioning ability,&#160;and (3) minimal light absorption and scattering, while still permitting deep tissue imaging.

An integrated suite of imaging techniques has been applied to determine polyp morphology and tissue structure in the Caribbean corals Montastraeaannularis and M. faveolata. Fluorescence, serial block face,&#160;and two-photon confocal laser scanning microscopy have identified lobate structure, polyp walls, and estimated chromatophore and zooxanthellae densities and distributions.

Multimodal ópticos métodos de microscopia Revelar Polyp Tissue Morfologia e Estrutura em Caribe Reef construção Corais

An integrated suite of imaging techniques has been applied to determine the three-dimensional (3D) morphology and cellular structure of polyp tissues ...

Detection of Foodborne Bacterial Pathogens from Individual Filth Flies

There is unanimous consensus that insects are important vectors of foodborne pathogens. However, linking insects as vectors of the pathogen causing a particular foodborne illness outbreak has been challenging. This is because insects are not being aseptically collected as part of an environmental sampling program during foodborne outbreak investigations and because there is not a standardized method to detect foodborne bacteria from individual insects. To take a step towards solving this problem, we adapted a protocol from a commercially available PCR-based system that detects foodborne pathogens from food and environmental samples, to detect foodborne pathogens from individual flies.Using this standardized protocol, we surveyed 100 wild-caught flies for the presence of Cronobacter spp., Salmonella enterica, and Listeria monocytogenes and demonstrated that it was possible to detect and further isolate these pathogens from the body surface and the alimentary canal of a single fly. Twenty-two percent of the alimentary canals and 8% of the body surfaces from collected wild flies were positive for at least one of the three foodborne pathogens. The prevalence of Cronobacter spp. on either body part of the flies was statistically higher (19%) than the prevalence of S. enterica (7%) and L.monocytogenes (4%). No false positives were observed when detecting S. enterica and L. monocytogenes using this PCR-based system because pure bacterial cultures were obtained from all PCR-positive results. However, pure Cronobacter colonies were not obtained from about 50% of PCR-positive samples, suggesting that the PCR-based detection system for this pathogen cross-reacts with other Enterobacteriaceae present among the highly complex microbiota carried by wild flies. The standardized protocol presented here will allow laboratories to detect bacterial foodborne pathogens from aseptically collected insects, thereby giving public health officials another line of evidence to find out how the food was contaminated when performing foodborne outbreak investigations.

A PCR-based protocol was adapted to detect Cronobacter spp., Salmonella enterica, and Listeria monocytogenes from body surfaces and alimentary canals of individual wild-caught flies. The goal of this protocol is to detect and isolate bacterial pathogens from individual insects collected as part of an environmental sampling program during foodborne outbreak investigations.

Detecção de Patógenos alimentares bacterianas de Flies Individual Filth

There is unanimous consensus that insects are important vectors of foodborne pathogens. However, linking insects as vectors of the pathogen causing a ...

The Hawaii Protocol for Scientific Monitoring of Coffee Berry Borer: a Model for Coffee Agroecosystems Worldwide

Coffee berry borer (CBB) is the most devastating insect pest for coffee crops worldwide. We developed a scientific monitoring protocol that is aimed at capturing and quantifying the dynamics and impact of this invasive insect pest as well as the development of its host plant across a heterogeneous landscape. The cornerstone of this comprehensive monitoring system is timely georeferenced data collection on CBB movement, coffee berry infestation, mortality by the fungus Beauveria bassiana, and coffee plant phenology via a mobile electronic data recording application. This electronic data collection system allows field records to be georeferenced through built-in global positioning systems, and is backed by a network of weather stations and records of farm management practices. Comprehensive monitoring of CBB and host plant dynamics is an essential part of an area-wide project in Hawaii to aggregate landscape-level data for research to improve management practices. Coffee agroecosystems in other parts of the world that experience highly variable environmental and socioeconomic factors will also benefit from implementing this protocol, in that it will drive the development of customized integrated pest management (IPM) to manage CBB populations.

Comprehensive monitoring of coffee berry borer and host plant dynamics is essential for aggregating landscape-level data to improve management of this invasive pest. Here, we present a protocol for scientific monitoring of coffee berry borer movement, infestation, mortality, coffee plant phenology, weather, and farm management via a mobile electronic data recording application.

O protocolo de Havaí para acompanhamento científico da broca do café: um modelo para agroecossistemas de café no mundo

Coffee berry borer (CBB) is the most devastating insect pest for coffee crops worldwide. We developed a scientific monitoring protocol that is aimed at ...

Fluorescent Paper Strips for the Detection of Diesel Adulteration with Smartphone Read-out

Three fluorescent molecular rotors of 4-dimethylamino-4-nitrostilbene (4-DNS) were investigated for their potential use as viscosity probes to indicate the content of kerosene in diesel/kerosene blends, a wide-spread activity to adulterate fuel. In solvents with low viscosity, the dyes rapidly deactivate via a so-called twisted intramolecular charge transfer state, efficiently quenching the fluorescence. Measurements of diesel/kerosene blends revealed a good linear correlation between the decrease in fluorescence and the increase of the fraction of the less viscous kerosene in diesel/kerosene blends. Immobilization of the hydroxy derivative 4-DNS-OH in cellulose paper yielded test strips that preserve the fluorescent indicator&#39;s behavior. Combination of the strips with a reader based on a smartphone and a controlling app allowed to create a simple field test. The method can reliably detect the presence of kerosene in diesel from 7 to 100%, outperforming present standard methods for diesel adulteration.

Here, we present a protocol to detect the adulteration of diesel with kerosene using test strips coated with a fluorescent viscosity probe together with a smartphone-based analysis system.

Tiras de papel fluorescente para a detecção da adulteração de Diesel com leitura de Smartphone

Three fluorescent molecular rotors of 4-dimethylamino-4-nitrostilbene (4-DNS) were investigated for their potential use as viscosity probes to indicate ...

Detection of Viruses from Bioaerosols Using Anion Exchange Resin

This protocol demonstrates a customized bioaerosol sampling method for viruses. In this system, anion exchange resin is coupled with liquid impingement-based air sampling devices for efficacious concentration of negatively-charged viruses from bioaerosols. Thus, the resin serves as an additional concentration step in the bioaerosol sampling workflow. Nucleic acid extraction of the viral particles is then performed directly from the anion exchange resin, with the resulting sample suitable for molecular analyses. Further, this protocol describes a custom-built bioaerosol chamber capable of generating virus-laden bioaerosols under a variety of environmental conditions and allowing for continuous monitoring of environmental variables such as temperature, humidity, wind speed, and aerosol mass concentration. The main advantage of using this protocol is increased sensitivity of viral detection, as assessed via direct comparison to an unmodified conventional liquid impinger. Other advantages include the potential to concentrate diverse negatively-charged viruses, the low cost of anion exchange resin (~$0.14 per sample), and ease of use. Disadvantages include the inability of this protocol to assess infectivity of resin-adsorbed viral particles, and potentially the need for the optimization of the liquid sampling buffer used within the impinger.

An anion exchange resin-based method, adapted to liquid impingement-based bioaerosol sampling of viruses is demonstrated. When coupled with downstream molecular detection, the method allows for facile and sensitive detection of viruses from bioaerosols.

Detecção de vírus de Bioaerossóis usando resina de troca de ânion

This protocol demonstrates a customized bioaerosol sampling method for viruses. In this system, anion exchange resin is coupled with liquid ...

An Anaerobic Biosensor Assay for the Detection of Mercury and Cadmium

Mercury (Hg) bioavailability to microbes is a key step to toxic Hg biomagnification in food webs. Cadmium (Cd) transformations and bioavailability to bacteria control the amount that will accumulate in staple food crops. The bioavailability of these metals is dependent on their speciation in solution, but more particularly under anoxic conditions where Hg is methylated to toxic monomethylmercury (MeHg) and Cd persists in the rhizosphere. Whole-cell microbial biosensors give a quantifiable signal when a metal enters the cytosol and therefore are useful tools to assess metal bioavailability. Unfortunately, most biosensing efforts have so far been constrained to oxic environments due to the limited ability of existing reporter proteins to function in the absence of oxygen. In this study, we present our effort to develop and optimize a whole-cell biosensor assay capable of functioning anaerobically that can detect metals under anoxic condition in quasi-real time and within hours. We describe how the biosensor can help assess how chemical variables relevant to the environmental cycling of metals affect their bioavailability. The following protocol includes methods to (1) prepare Hg and Cd standards under anoxic conditions, (2) prepare the biosensor in the absence of oxygen, (3) design and execute an experiment to determine how a series of variable affects Hg or Cd bioavailability, and (4) to quantify and interpret biosensor data. We show the linear ranges of the biosensors and provide examples showing the method's ability to distinguish between metal bioavailability and toxicity by utilizing both metal-inducible and constitutive strains.

Here, we present a protocol to use an anaerobic whole-cell microbial biosensor to evaluate how different environmental variables affect the bioavailability of Hg and Cd to bacteria in anoxic environments.

Um ensaio de anaeróbios Biosensor para a detecção de mercúrio e cádmio

Mercury (Hg) bioavailability to microbes is a key step to toxic Hg biomagnification in food webs. Cadmium (Cd) transformations and bioavailability to ...

A Precise and Autonomous System for the Detection of Insect Emergence Patterns

Existing systems to measure insect emergence patterns have limitations; they are only partially automated and are limited in the maximum number of emerging insects they can detect. In order to obtain precise measurement of insect emergence, it is necessary for systems to be semi-automated and able to measure large numbers of emerging insects. We addressed these issues by designing and building a system that is automated and can measure emergence of up to 1200 insects. We modified the existing &#34;falling-ball&#34; system using Arduino microcontrollers to automate data collection and expand the sample size through multiple data channels. Multiple data channels enable the user to not only increase their sample size, but also allows for multiple treatments to be run simultaneously in a single experiment. Furthermore, we created an R script to automatically visualize the data as a bubble plot, while also calculating the median day and time of emergence. The current system was designed using 3D printing so the user can modify the system to be adjusted for different species of insects. The goal of this protocol is to investigate important questions in chronobiology and stress physiology, using this precise and automated system to measure insect emergence patterns.

Measurement of insect emergence patterns requires precision. Existing systems are only semi-automated and sample size is limited. We addressed these issues by designing a system using microcontrollers to precisely measure the time of emergence of large numbers of emerging insects.

Um sistema autónomo e preciso para a detecção de padrões de emergência de insetos

Existing systems to measure insect emergence patterns have limitations; they are only partially automated and are limited in the maximum number of ...

Detection of Tilapia Lake Virus Using Conventional RT-PCR and SYBR Green RT-qPCR

The aim of this method is to facilitate the fast, sensitive and specific detection of Tilapia Lake Virus (TiLV) in tilapia tissues. This protocol can be used as part of surveillance programs, biosecurity measures and in TiLV basic research laboratories. The gold standard of virus diagnostics typically involves virus isolation followed by complementary techniques such as reverse-transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) for further verification. This can be cumbersome, time-consuming and typically requires tissue samples heavily infected with virus. The use of RT-quantitative (q)PCR in the detection of viruses is advantageous because of its quantitative nature, high sensitivity, specificity, scalability and its rapid time to result. Here, the entire method of PCR based approaches for TiLV detection is described, from tilapia organ sectioning, total ribonucleic acid (RNA) extraction using a guanidium thiocyanate-phenol-chloroform solution, RNA quantification, followed by a two-step PCR protocol entailing, complementary deoxyribonucleic acid (cDNA) synthesis and detection of TiLV by either conventional PCR or quantitative identification via qPCR using SYBR green I dye. Conventional PCR requires post-PCR steps and will simply inform about the presence of the virus. The latter approach will allow for absolute quantification of TiLV down to as little as 2 copies and thus is exceptionally useful for TiLV diagnosis in sub-clinical cases. A detailed description of the two PCR approaches, representative results from two laboratories and a thorough discussion of the critical parameters of both have been included to ensure that researchers and diagnosticians find their most suitable and applicable method of TiLV detection.

This protocol diagnoses Tilapia Lake Virus (TiLV) in tilapia tissues using RT-PCR methodologies. The entire method is described from tissue dissection to total RNA extraction, followed by cDNA synthesis and detection of TiLV by either conventional PCR or quantitative PCR using dsDNA binding a fluorescent binding dye.

Deteção de tilápia Lago vírus usando convencional RT-PCR e SYBR Green RT-qPCR

The aim of this method is to facilitate the fast, sensitive and specific detection of Tilapia Lake Virus (TiLV) in tilapia tissues. This protocol can be ...

Enrichment and Detection of Clostridium perfringens Toxinotypes in Retail Food Samples

Clostridium perfringens (C. perfringens) is a prolific toxin producer and causes a wide range of diseases in various hosts. C. perfringens is categorized into five different toxinotypes, A through E, based on the carriage of four major toxin genes. The prevalence and distribution of these various toxinotypes is understudied, especially their pervasiveness in American retail food. Of particular interest to us are the type B and D strains, which produce epsilon toxin, an extremely lethal toxin suggested to be the environmental trigger of multiple sclerosis in humans. To evaluate the presence of different C. perfringens toxinotypes in various food samples, we developed an easy method to selectively culture these bacteria without the use of an anaerobic container system only involving three culturing steps. Food is purchased from local grocery stores and transported to the laboratory under ambient conditions. Samples are minced and inoculated into modified rapid perfringens media (RPM) and incubated overnight at 37 &#176;C in a sealed, airtight conical tube. Overnight cultures are inoculated onto a bottom layer of solid Tryptose Sulfite Cycloserine (TSC) agar, and then overlaid with a top layer of molten TSC agar, creating a &#34;sandwiched&#34;, anaerobic environment. Agar plates are incubated overnight at 37 &#176;C and then evaluated for appearance of black, sulfite-reducing colonies. C. perfringens-suspected colonies are removed from the TSC agar using sterile eye droppers, and inoculated into RPM and sub-cultured overnight at 37 &#176;C in an airtight conical tube. DNA is extracted from the RPM subculture, and then analyzed for the presence of C. perfringens toxin genes via polymerase chain reaction (PCR). Depending on the type of food sampled, typically 15&#8211;20% of samples test positive for C. perfringens.

Enrichment and Detection of Clostridium perfringens Toxinotypes in Retail Food Samples

The objective of this protocol is to detect different Clostridium perfringens toxinotypes in locally purchased foods, particularly epsilon toxin producing strain types B and D, without the use of anaerobic chambers.

Enriquecimento e detecção de toxinotipos de Clostridium perfringens em amostras de alimentos para varejo

Clostridium perfringens (C. perfringens) is a prolific toxin producer and causes a wide range of diseases in various hosts. C. perfringens is categorized ...