いくつかの技術者とミシガン州立大学の大学院生は開発、改良、アンドレア ・ Anulewicz、ロバート ・ マクドナルド ネイサン Siegert など長年にわたって DD トラップ デザインを評価に貢献しています。DD のインストール手順を開発に彼らの支援、ジェームス Wieferich とジェレミー ・ ローウェル (MSU) に感謝します。ジェームス Wieferich とモリー Robinett (MSU) がこの原稿の以前の下書きを見直し、彼らの提案を申し上げます。ジョセフ Francese、デイモン ・ クルック (米国農務省ワタアブラムシ) 寛大例色とホストの揮発性物質に対する応答で彼らの観察を共有しました。DD トラップ開発と評価のための資金は、米国農務省森林サービス、北東部地域、森林健康保護からの助成金によって提供されました。

1 です。 緑と紫パネルを準備 害虫管理供給の商業ディストリビューターから例のトラップ用段ボール プラスチック パネル (120 cm × 60 cm) の <ol><li>取得緑と紫です。ボックス カッターを使用または 2 つを獲得するためのユーティリティ ナイフを折る線各パネルに沿って垂直関係を保った、パネルの 2 つの短い端から 40 cm プラスチックを部分的に切断することによって。これは、3面プリズム (それぞれの面が 40 × 60 cm になります) に折られるパネルをことができます。この手順は必要ない場合がありますので、パネル、折り畳み、容易にするためにディストリビューターによって得点通常します</li>。
	<li>ドリル 2 つ組の 1/2 のインチ (1.3 cm) を使用して各パネルに穴は 図 1 のとおりビットします。左折りのどちら側でも 4 インチ パネルの上部から 4 インチ (10 cm) の穴をドリルします。ドリル穴の 2 番目のペア、トップの穴 (すなわち、左折りのどちら側でも 4 インチ) 以下直接パネルの上から 19 インチ (48 cm).</li>
</ol> 2。塩ビ管を準備 スケジュール 40 ポリ塩化ビニル (PVC) 管、3 メートル、商用ハードウェア ストアまたは各トラップの他のサプライヤーから、直径 10 cm の <ol><li>1 つの取得セクション。図 2 に示すように、塩ビ管に 4 つの穴をドリルします。1/2 のインチ (1.3 cm) ドリルビットを使用すると、ドリル穴の組離れて 3 インチ (8.9 cm) 塩ビ管の上部から 4 インチ (10 cm)。水平方向に穴を配置します</li>。
	<li>穴の最初のセットのすぐ下のパイプの上端と、離れて 3 インチ、52 インチ (1.3 m) の 2 番目のペアをドリルします</li>。
</ol> 3。T-ポストをインストール 目的場所に t のポストをインストールする <ol><li>使用ポスト打つ。十分な深さのポストをドライブ フランジ土壌表面のすぐ下が、深く必要はありません。T のポストは DD トラップ、強風にもさまざまなサポートを提供します。男ワイヤまたは追加のサポートが必要ではないです。T-ポストは、土に深く設定する必要はありません、それは地下の実用性または埋設管を地面にポストを運転する前にチェックすることをお勧めします</li>。
</ol> 4。DD トラップを組み立てる <ol><li>倍プリズムに紫パネル。パネルは接着済み、粘着面が外側にあることを必ずください。スリットを介して 2 つの小さなフラップをフィードし、一緒にパネルの端を固定する 2 つの 8 インチ (20 cm) のケーブルタイを使用します。緑色のパネルでリピート</li>。
	<li>は、水平方向に地面の上の塩ビ管をサポートします。塩ビ管と塩ビ管の穴の下に絞り紫プリズムをスライドです</li>。
	<li>フィード大きな、上部から水平方向に 2 フィート (60 cm) 長いケーブルタイ左穴 を通して し、プリズムで塩ビ管の穴の組そしてプリズムの右側に隣接する穴。必ずプリズムは 2 つの穴の間にある塩ビ管の固体部分に対してぴったりです。閉じるし、締めケーブル ネクタイ、ケーブル ネクタイがねじれていないかどうかを確かめるします</li>。
	<li>周り パイプ、柱の下の穴から、プリズムの隣の辺に対応する穴は、2 番目の大きなケーブル ネクタイをフィードしました。ケーブル ネクタイを閉じるし、再びそれを締め付けける前に、ケーブル ネクタイはひねらないように世話を締めます</li>。
	<li>は塩ビ管に緑プリズムをスライド、として同じ手順を実行する前に、2 つの 60 cm ケーブル関係で塩ビ管の穴の上部に取り付けます。上下プリズムの間に 21 インチ (54 cm) のギャップがあります</li>。
</ol> 5。昆虫接着剤と、トラップの設定適用 <ol><li>適用の明確な昆虫トラップ接着剤には接着済みパネル。接着済みパネルは例のカブトムシをキャプチャするその他の接着剤を必要があります。昆虫トラップ接着剤を適用すると、地面に塩ビ管のベースを設定し、t のポストの上のプリズムの内側の面を支えるです</li>。
	<li>ラテックス (または類似の) を使用して手袋を 2 つ 3 つの握り接着剤とパネルの表面を確かめる、パネルの表面にそれが十分に被覆が塗抹標本のスクープします。両方のプリズムのすべての 3 つのサーフェスにアクセスする塩ビ管を回転させます。接着剤は塩ビ管に適用する必要はありません</li>。
	<li>塩ビ管をピックアップ、それを垂直に保持し、t のポストに低い方の端をスライドします。粘着パネルには触れないでください</li>。
</ol> 6。DD トラップ餌 <ol><li>接着済みのプリズムは、プリズムの 1 つのパネルの下端近くに小さな穴 (4 mm) を通常到着 cis-3 の 1 つの袋を添付する 4 インチ (10 cm) のケーブルタイを使用-トップ (グリーン) プリズムの下端に hexenol。ハンドヘルド穴パンチやナイフを使用して小さな穴がカットまたはプラスチックにスリット穴が存在しない場合、ルアーを付ける小さなケーブル ネクタイを使用しています 。
	注: シス-3-hexenol ルアーで化合物は約 10 週間の期間で徐々 に放出します。トラップは 10 週間以上有効のままする必要がある場合、は、必要に応じて、ルアーを交換します</li>。
</ol> 7。例のカブトムシのトラップをチェック <ol><li>チェック トラップ 2-4 週の間隔で可能であれば、時折トラップは、落ちる大雨が発生した場合に特にキャプチャしたカブトムシを失うことを避けるために。例のカブトムシの下のプリズムのすべての 3 つの側面を確認します。使い捨てラテックス手袋を使用すると、塩ビ管を持ち上げてまっすぐ、t のポストをオフし、両方のプリズムの 1 つのパネルを公開する t 記事に上のプリズムの内側の面を支えるです</li>。
	<li>を削除する鉗子を使用例カブトムシを疑うし、再密閉プラスチック試料袋にそれらを配置します</li>。
	<li>容疑者の例カブトムシの両方のプリズムのすべての 3 つのパネルを調べるに塩ビ管を回転し、t のポスト バック スライド パイプします 。
	注: ハエ、コメツキムシ、様々 な他昆虫必然的にキャプチャされますないトラップの。それは例カブトムシをスポットに鋭い目を取る。初めてのトラップをチェックするとき、参考にすることができます写真参照カードを </li>。
	種の識別を確認する <li>容疑者のカブトムシをラボに戻るし、昆虫トラップ接着剤を削除する一日か二日の非毒性病理クリア剤に浸します。カブトムシを解剖顕微鏡の下で検査しことができる</li>。
</ol>

著者は、彼らは競合する金銭的な利益があることを宣言します。

デザインと DD トラップの配置、光と色の特定の色合いに大人の例のカブトムシの魅力を悪用します。塩ビ管の上に緑のプリズムは32,36,38,39を嵌合し同様、灰葉を食べて自分の寿命を過ごす男性のカブトムシに最も魅力的です。下の紫のプリズムにより、トラップがまた魅力的な女性に甲虫32。男性のような彼らの寿命中の灰葉を餌に女性のカブトムシが、成熟した雌が卵39敷く幹や枝の樹皮に大量の時間を費やします。どちらかの性のカブトムシをキャプチャする必要新しいインフェ ステーションを検出のみ、能力を誘致し、女性の EABs をキャプチャは特に重要であるかもしれません。成熟した例の女性が生理学的男性40以上飛ぶことができるとお勧めの人口モデル雌成虫の交尾の長距離分散は、新しい例のインフェ ステーション41,の拡大に大きく寄与します。42,43。
DD を配置するトラップ オープンで複数の目的の。組み立てた後、DD トラップが非常に明白な背が高く、垂直のトラップのシルエットに似ている小さな灰の木。2 つのプリズムを使用して、トラップのシルエットを高めますが、おそらくもっと重要なことは、ダブルス トラップ カブトムシの表面積。スタンドアロンの DD トラップの緑と紫のプリズムが木や植物からの葉によって隠される可能性が高いです。灰の木の枝から吊り下げ餌プリズム トラップと対照をなしてトラップを取り巻くライブの灰によって放出される化合物と競合する DD トラップのルアーはありません。代わりに、DD トラップのルアーは、容易に識別して検索できる灰関連の揮発性成分の異なるポイント ソースとカブトムシを提供します。また、日当たりの良い条件のための強力かつ一貫した好みのオープン攻撃で DD トラップを設定例カブトムシによって展示しました。
最後に、DD トラップは簡単にインストール、簡単にチェックし、強風や夏の雷雨に耐えられます。トラップだけ例のカブトムシに非常に明らかにされていません。また、シーズン中盤のチェックまたは回復の検索調査人員のため簡単です。荒らしには、DD トラップが過去 10 年間でモニターされましたサイトの数十のいずれかで問題はなかった。自称荒らしの熱意を鎮めるために魅力のない粘着パネルの可能性が高いを提供します。
DD トラップは、例の国民の意識を高めるためのアウトリーチ ツールとしても使用できます。記号を表示できます。DD トラップとトラップの目的の説明の写真とシンプルで安価な看板のデスクトップ カラー プリンターで印刷、積層、木材やバックアップ、繊維板に接着し、t の人がトラップに遭遇する可能性が高い地域ではポストに接続されていることが、t サイト。説明看板と通常例を検出する進行中の明白な努力の生成のれん教育ツールとして機能しているだけでなく。
明らかに、2 つのパネル、t ポストと塩ビ管少なくとも灰の木の天蓋の単一プリズム トラップを中断の二倍のコストと DD をトラップします。塩ビ管と t のポスト、しかし、再利用できる多くの年のため。また、例など侵襲的な森林病害虫の検出調査のコストの多くは、トラップをインストールする適切なサイトを検索する調査の乗組員のため、定期的に、トラップをチェックに必要な時間を反映して、並べ替えやトラップを識別するをキャッチします。偽陰性例の低密度の侵入の検出に失敗などのコストは、あまり効果的なトラップを使用する場合にも考慮されなければなりません。30 以上の異なるサイトを包括的な調査からの結果は、低密度例人口最近出没エリアの DD トラップが一貫してより灰の木22 の天蓋にぶら下がっているプリズム トラップより例カブトムシを捕まえられる可能性が示されています。 ,,3144。
長所と短所は、以前のフィールド試験で評価各例トラップ デザインに関連付けられます。漏斗のトラップは当初より他のトラップの設計よりも高価なが、複数年の再利用することができます。プリズム トラップが、DD トラップが中間コストの最も高価なデザインです。DD トラップ (t 投稿と塩ビ管) の最も高価なコンポーネントはハードウェアおよび家の改築の店で容易に入手できるが、複数年の再利用することができます。非毒性、非エタノールの不凍液または殺虫剤のストリップは、トラップを漏斗に引き付け昆虫をキャプチャに必要です。プリズム、灰の天蓋や DD トラップを中断かどうか昆虫を捕獲する粘着性昆虫接着剤でコーティングする必要があり、再利用できません。漏斗のトラップで捕獲されたすべての昆虫を収集し、並べ替えと識別のために検査室に返される必要があります。プリズムと DD トラップ パネルは検査され、疑いのあるカブトムシ研究室でその後種確認を鉗子で除去をする必要があります。EABs を区別するためいくつかのノウハウが役に (または少なくともタマムシ) フィールドでもトレーニング測量は困難ではないです。木が大きい場合に特に掛かる漏斗のトラップおよびプリズム トラップ灰木の天蓋の枝にかなりの時間を要求できます。乗組員はしばしば長いポールや枝にアクセスする大規模なパチンコを必要し、トラップを中断に編組の行またはコードが必要があります。灰の木の近くに配置されている二階建てトラップは、どこにも簡単に設定できます。強風が時折木からプリズムを吹き飛ばさまたはラインは地面からトラップへのアクセスを防止、上部の枝の周りをラップする漏斗やプリズムのトラップを発生します。対照的に、DD トラップは直線風22,44と嵐を含む重度の嵐の中にそのまま残っています。
その例の検出に注意することが重要だし、調査方法は相互に排他的ではありません。別の検出方法は、特定の状況またはローカル条件の適切な調査戦略に統合できます。たとえば、低値または低下灰木のフェンスに沿って、道路や森林に覆われた設定で剥できありません検出ツールとして機能します。以下の高価なプリズムのトラップまたは再利用可能な漏斗のトラップの大規模な組織的調査でより広く分散できます。フリースタンディング DD トラップは、潜在的に出没する灰薪が継続的な脅威を示すキャンプ場などリスクの高い地域やレクリエーション エリアに特に適して可能性があります。プリズムは、太陽にさらされているのでトラップが灰の木の近くと、オープンである限り、測量は様々 な場所や設定で DD トラップを配置を選択できます。高速道路の中央分離帯や製材所の廃棄木材ヤード、川、排水溝、その他水辺に沿って周囲の森林地帯を通る電線の鉄道沿い二階建てトラップを正常に使用されています。DD トラップが揮発性灰と餌を付けたが (シス-3-hexenol)、種は頻繁にまた粘着パネルで捕獲されネイティブ玉虫例調査のために設計されています。DD トラップや玉虫の他の種の魅力を高める可能性がありますルアーへの潜在的な変更を評価するためにさらなる研究が役に立つかもしれません。

エメラルド灰中くり盤 (例) (時期 planipennis成虫) (コウチュウ目: タマムシ) デトロイト、ミシガン州の首都圏とは 2002 年に初めて発見されて以来、灰 (トネリコ属) の木の数百万の何百もを死亡しています。近くにウィンザー、オンタリオ州、カナダ。出没する灰の木、ログおよびカブトムシの自然分散と共に薪が不用意に広がらない日付1例、少なくとも 27 の州および 2 つのカナダの州で設立しました。最近の報告では、例は、それは風景灰木2,3を殺して、ロシア ・ モスクワに侵攻もヨーロッパに広がるその可能性について追加の懸念を生成します。例の選好性, および抵抗性種がずっと北アメリカの灰の種間変異記載4,5,6,7,8,9,北アメリカの事実上すべての灰種が適切なホストをする可能性があります。アッシュ死亡率の壊滅的なレベルは、ミシガンとオハイオ州10、11,12, 関連する生態学的、経済的影響13,14の領域に記録されています。 15,16。
例の新しい寄生虫を検出および低密度個体群を監視する効果的な方法は、都市、住宅、および森林に覆われた設定でこの侵襲性害虫の管理の重要な側面です。早期発見は、戦略を策定、資金を確保し、例の影響を削減する活動を実施する時間を提供します。たとえば、市当局および自家所有者によっては、これら製品17,18の幼虫密度の制限の有効性を高めることによって引き起こされる損傷の前に全身の殺虫剤と風景の貴重な灰を治療開始できます。同様に、新しいインフェ ステーションおよびローカル例配布についての信頼できる情報の同定林業、財産所有者を木材の販売、種変換または経済のコストを削減する他のアクティビティを実装する機会与える生態学的またはアッシュ死亡の効果。
早期発見、限界、および低密度の例集団の効果的な監視、しかし、難しいまま。幼虫密度が中程度または高いレベル4,19構築まで、灰ほとんど展示外部徴候や症状例のインフェ ステーションのため、新しく出没する灰の木を識別するために視覚的調査は信頼性がありません。例の非常に低密度を検出する最も効果的な手段を含むブドウ結果灰を用いた検出木19,20,21,22。外側の樹皮のバンドを取り外し、春または初夏に輪状灰の木と木、成人例への魅力の増加に重点を置くトランクのまわりを師部甲虫します。ブドウ結果木は、秋または冬例幼虫の存在感と密度を識別するために debarked することができます。木例検出19,23,24,25の運用に使用されている灰を剥が問題があります。デバーキング ブドウ結果木は労働集約的なでき、複数年19の調査を実施する必要があります、特に都市や住宅の分野で、困難にすることができます環状はく皮処理に適した木を検索します。
例の誘引と人工トラップは、ブドウ結果灰検出の木を使用してに関連する多くの問題を排除します。日付、効果的にマイマイガ (強区L) などの他の重要な森林病害虫、長距離セックスや集合フェロモン生成いくつかの過程キクイムシとは対照的に、長距離のフェロモンは例の発見されています。近距離のフェロモン、 cis-ラクトン、交尾26,27, を容易にする可能性がありますが、フィールド試験、 cisで-ラクトン ルアーは一貫して人工トラップ28例の魅力を増加していません。成虫は、灰葉、樹皮とそのホストの木29,30,31を識別し、潜在的な仲間に遭遇する木材によって放出される揮発性の化合物に依存します。ルアー人工トラップ27,32大人の EABs を誘致するために使用するいくつかの揮発性化合物を評価されています。現在、米国で例の検出調査のため運用使用トラップcis-3 を含むルアーつられるてい-アルコール、青葉灰葉30,33によって生成される一般的な緑の葉の揮発性。前の年の米国の調査の使用例トラップがニュージーランド ティー ツリーから抽出したマヌカオイルと餌されても (ギョリュウバイフォルスト、フォルスト)、フィービー石油、ブラジルのクルミの木 (フィービー状況の抽出Mez);。両方はまた灰樹皮29に存在するいくつかのセスキテルペンを含まれています。しかし、これらの天然オイルの一貫性のない供給に問題は使用を制限しています。
ホスト生産揮発性に加えて例成虫は色光20,32,34,35などの視覚刺激に応答します。初期の研究は比較的機敏なチラシである例大人いた様々 な灰の揮発性物質と黒い煙突トラップで捕獲したほとんどを示した (DGM と TMP、未発表のデータ)。クロス ベーン トラップなど、他のトラップのデザインを行ったが、暗い空間に甲虫の例の嫌悪感と影制限これらのトラップの有効性。
コーティングすることができます 3 面のプリズムの開発とカブトムシを捕獲する昆虫トラップ接着剤35をクリアし、トラップ デザインで大幅に改善されました。色に大人の EABs の魅力が retinograph34研究、フィールド試験で広く評価されても。結果表示例カブトムシは一貫して緑と紫32,36の特定の色合いに魅了されています。色の段ボール プラスチックから作製したプリズム トラップは米国とカナダの例調査活動に広く今。
例大人は光に強く引かれるので、カブトムシが開く成長ツリーを植民地化する可能性が高く影よりも s 木20,21です。米国の例検出調査のためのガイドラインが必要道路や雑木林の37の端に沿って生えるトネリコで半ばキャノピー支店から中断される個々 のプリズム トラップ。これによりプリズムの少なくとも 1 つのパネル、理論的には、日光にさらされています。ただし、運用上、プリズム トラップと、頭上の枝または隣接して近くの木に部分的にシャドウ可能性があります。粘着パネル表面は、葉、葉に付着し、1 つまたは複数のパネルの一部を隠すことの結果によく吹き飛ばされます。
二階建て (DD) トラップは、例のカブトムシの魅力を高めるために複数の視覚および嗅覚の情報を統合する開発されました。各 DD トラップは、1 つの緑と t のポストで塩ビ管をスライドしている 3 m 背の高いスケジュール 40 ポリ塩化ビニル (PVC) 管 (直径 10 cm) に接続されている 1 つの紫段ボール プラスチック製のプリズムで構成されます。緑と紫のプリズムを用いた例カブトムシ32,36,38,39の男女を引き付けるために設計されています。また、灰の木の天蓋のブランチから中断されているのではなく DD トラップ完全な太陽、雑木の灰の木縁から 5-10 m に配置したりの真っ只中に散在し、オープン栽培の灰の木。

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Light green corrugated plastic panel: 120 cm x 60 cm</td>
			<td>Great Lakes IPM; www.greatlakesipm.com</td>
			<td>IPM-EAB GR</td>
			<td colspan="13" rowspan="3">All three surfaces of each prism need to be covered with clear insect trapping glue, even if the panels are pre-glued. Pre-glued panels are often not sticky enough to consistently capture or retain EAB beetles.&#160; Other clear insect trapping glue products are available but are considerably more difficult to apply.&#160;&#160;&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Light purple corrugated plastic panel: 120 cm x 60 cm</td>
			<td>Great Lakes IPM; www.greatlakesipm.com</td>
			<td>IPM-EAB&#160; LP</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Large cable tie (4): 60 cm with a 79 kg capacity</td>
			<td>Cabletiesandmore.com; http://www.cabletiesandmore.com/cableties.php</td>
			<td>CT-24-NU-100PK</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medium cable ties (4): 20 cm with a 22.7 kg capacity</td>
			<td>Cabletiesandmore.com; http://www.cabletiesandmore.com/cableties.php</td>
			<td>CT261</td>
			<td colspan="13" rowspan="1"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small cable tie: 10 cm with a 8.2 kg capacity</td>
			<td>Cabletiesandmore.com; http://www.cabletiesandmore.com/cableties.php</td>
			<td>CT204</td>
			<td colspan="13" rowspan="1"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>cis-3-hexanol pouch</td>
			<td>Synergy Semiochemicals; http://www.semiochemical.com/html/buprestids.html)</td>
			<td>3136</td>
			<td colspan="13" rowspan="4">Lures used to bait DD traps consist of pouches containing cis-3-hexenol, a non-toxic compound present in ash leaves.&#160; One pouch is attached to the lower edge of the top prism using a small cable tie.&#160; Each pouch of cis-3-hexenol has a release rate of approximately 50 mg/day. Note that cis-3-hexenol is sometimes written as Z-3-hexenol.&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aphinity Hexenol</td>
			<td>Sylvar Technologies</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lure GLV4 emerald ash borer</td>
			<td>Chemtica, Heredia, Costa Rica</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>cis-3-hexanol pouch</td>
			<td>WestGreen Global Technologies; http://www.westgreenglobaltechnologies.com/</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clear insect trapping glue&#160;</td>
			<td>Hummert International; http://www.hummert.com/product-details/8196/pestick</td>
			<td>01-3522-1&#160;&#160;</td>
			<td colspan="13" rowspan="1"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Histoclear II histological clearing agent</td>
			<td>National Diagnostics; www.nationaldiagnostics.com</td>
			<td>HS-202</td>
			<td colspan="13">Histoclear II will be needed to remove the sticky insect glue from suspect beetles.&#160; Other histological clearing agents are available but may not remove the glue and some products dissolve plastic, an important consideration if plastic containers are used for soaking the beetles.&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Histoclear II histological clearing agent</td>
			<td>Great Lakes IPM; www.greatlakesipm.com</td>
			<td>10011</td>
			<td colspan="13">Histoclear II will be needed to remove the sticky insect glue from suspect beetles.&#160; Other histological clearing agents are available but may not remove the glue and some products dissolve plastic, an important consideration if plastic containers are used for soaking the beetles.&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>t-post: 1.5 m</td>
			<td>multiple sources</td>
			<td></td>
			<td colspan="13" rowspan="1">A t-post (5 feet tall) (1.5 m) is used to support the PVC pipe.&#160;&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>post pounder</td>
			<td>multiple sources</td>
			<td></td>
			<td colspan="13" rowspan="1">Use a post pounder to set t-posts into the ground. No additional support is necessary.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HDPE (high density polyethylene) PVC pipe : 3 m x 10 cm diameter</td>
			<td>multiple sources</td>
			<td colspan="14" rowspan="1"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps (rigid)</td>
			<td>multiple sources</td>
			<td></td>
			<td colspan="13">Forceps (tweezers) will be needed to remove suspect beetles from the traps. Rigid forceps work better than flexible forceps.&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Latex gloves</td>
			<td>multiple sources</td>
			<td></td>
			<td colspan="13">Latex gloves are needed for applying the insect trapping glue to the prisms and for checking the traps to collect EAB beetles.&#160;&#160;&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Baby oil or baby wipes&#160;</td>
			<td>multiple sources</td>
			<td></td>
			<td colspan="13" rowspan="1">Baby oil or baby wipes are helpful for removing the trapping glue from hands and equipment.&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Re-sealable plastic specimen bags: 5 cm x 8 cm&#160;</td>
			<td>multiple sources</td>
			<td></td>
			<td colspan="13">Small re-sealable plastic specimen bags are useful for collecting beetles from traps.&#160; Each bag should be labelled, either with pre-made, adhesive labels or with soft felt pens.&#160;&#160;&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td colspan="3">Guides to help with distinguishing EAB from beetles native to North America are available on the national EAB website at www.emeraldashborer.info. &#160;</td>
			<td colspan="13" rowspan="1"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

building double-decker traps for early detection of emerald ash borer

エメラルド灰中くり盤 (例) (時期 planipennis成虫)、北アメリカを侵略したの最も破壊的な森林昆虫は、森林や風景の灰 (トネリコ属) の木の数百万の何百もを死亡しています。誘致し、例のカブトムシをキャプチャするいくつかの人工トラップ デザインは、検出、線引き、インフェ ステーションを監視し開発されています。二階建て (DD) トラップから成っている 2 つの段ボール プラスチック プリズム、緑、紫色、t のポストでサポートされている 3 m 背の高いポリ塩化ビニル (PVC) 管に接続されています。塩ビ管の上部に緑プリズムを促しているシス-3-アルコール、青葉灰葉によって生成される化合物です。両方のプリズムの表面は大人の例のカブトムシを捕獲する粘着性昆虫接着剤をコーティングします。二階建てのトラップは太陽にさらされてオープン エリアが、灰の木近く置かれるべき。二階建てのトラップの構造と配置は DD 例カブトムシを捕獲トラップの有効性を実証フィールド実験の概要と一緒にここでは、表示されます。例密度の比較的低いサイトで最近の調査では、ダブルデッカー トラップは緑または紫プリズム トラップや緑漏斗トラップ、すべての灰の木の天蓋のブランチから中断される設計されていますよりもはるかに多くの例を捕獲しました。ダブルデッカーの大きい割合プリズム トラップや灰木の天蓋で掛けられました漏斗のトラップよりも、少なくとも 1 つの例を捕獲トラップされた肯定的なすなわち。

大スケール研究 3 人工トラップ デザイン同様にブドウ結果灰の木が体系的に展開された、10-20 メートル離れて、新しく出没 16 ha 例25の密度が非常に低い地域の森林します。人工トラップ デザイン テスト含まれている紫プリズム マヌカオイルを促して、中断 &#62; 3 m 灰のキャノピーの枝から高木、高さ 3 m DD トラップ 2 つの緑のパネルで、DD トラップ t の記事でサポートされている 2 つの紫のパネル。両方の色の二階建てのトラップされたcis-3 を含む灰の揮発性成分のブレンドで餌を付けた-上部パネルと下部パネルにマヌカオイルを hexenol。トラップは夏中のキャプチャの例を収集するためにチェックされ、秋のブドウ結果木がありません。Χ2善-ボンフェローニでフィット (GOF) テストの一対比較の補正合計例キャプチャ 4 トラップの種類により異なっていたかどうかをテストする使用されました。紫ダブルデッカー トラップは、ブドウ結果木に紫冠トラップ、ダブルデッカー グリーン トラップ、または粘着性のバンドより例カブトムシを捕獲しました。ダブルデッカー グリーン トラップ紫キャノピー トラップより例カブトムシを捕獲しました。ブドウ結果木のすべてだった植民地化された25いる紫キャノピー トラップの 25%、ダブルデッカー グリーン トラップの 56%、紫ダブルデッカー トラップの 81% に捕獲された 1 つまたは複数の例の甲虫。
最近では、例をキャプチャし、異なるトラップ デザインの検出成功例 (図 3) の中程度の密度に低 2 つの森林に覆われたサイトに設立されたトラップの 8 ブロックに 2015 年に監視されました。各ブロックは間隔 10-20 メートル離れて六つのトラップから成っています。紫プリズム、暗い緑プリズムや光緑プリズム緑漏斗のトラップ、トラップの評価が含まれる、各は、ブランチから中断 &#62; 樹木が茂った区域の端に成長している灰の木の高さ 5 m。各ブロックは、2 つの紫プリズム DD トラップと緑プリズムの上と下に紫プリズム DD トラップにも含まれています。前に、DD トラップは 3 メートル背が高く、地面に t 投稿セットでサポートされている.すべてのトラップを促していたシス-3-hexenol、明るい部分と暗い緑プリズム トラップも付いてcis-ラクトン ルアー。トラップあたりキャプチャ例の平均数を二元複製の主な効果と治療の間で行った、テューキー Kramer によってその後の治療は分離テストを意味します。すべての DD トラップ緑漏斗のトラップの 62%、37 ~ 75% 灰の木の天蓋のプリズム トラップの捕獲に少なくとも 1 つの例、1 つまたは複数の例のカブトムシを捕獲しました。DD トラップの両方の色の組み合わせは、灰天蓋 (図 3) に掛けられてトラップ デザインのどれよりもはるかに多くの男性と女性 EABs を捕獲しました。本研究では 2 つの紫パネルにトラップとトラップ緑と紫のパネルと有意差はなかった、他の実験を発見した 2 つの紫パネル28とトラップよりもより多くの例を緑と紫の DD トラップに捕獲高い場所に置くと、緑プリズム トラップは紫プリズム トラップ34よりもより多くの例を捕獲しました。したがって、二重デッカー トラップの上部の位置に緑のパネルを含めることは、例の魅力が向上します。
プリズムあたり例の甲虫の数も評価された DD トラップ倍の表面積 (14,400 cm2) 個々 のプリズム キャノピー トラップ (7,200 cm2) としてとのすべて 12 目標到達プロセスの複合表面より 30% 以上の領域があることを考える、漏斗のトラップ (11,160 cm2)。プリズム トラップの視覚的な二次元シルエット エリアは DD トラップの視覚的なシルエットは 2 回は (4,800 cm2) プリズム トラップと二次元の以上 20% の 3面プリズム (2,400 cm2) の 1 つのパネルに相当視覚的なシルエット (12 部分的に入れ子になった漏斗 【 100 cm 】 の高さの合計回漏斗 (20 cm) の直径に相当) ファンネル トラップ (2000 cm2) 部トラップはハングし、拡大します。個々 のプリズムは、考慮されたときにもただし、DD トラップは他のトラップの設計よりもより多くの例カブトムシを捕獲しました。個々 のプリズム トラップしながらキャプチャされた 49 に 111 大人 EABs (DD トラップあたり 146 と 214 例の合計)、2 つのサイトで DD の全体的にみて、個々 のプリズム トラップし、灰天蓋で漏斗のトラップはそれぞれ 28 に 11 例の甲虫の合計を捕獲しました。
<img alt="Figure 1" src="/files/ftp_upload/55252/55252fig1.jpg"> 
図 1: パネルを準備します。2 段ボール プラスチック パネル (120 cm × 60 cm) 通常緑、紫は、例のカブトムシをキャプチャする各 2 階建てトラップに使用されます。各パネルはプリズムを作成する三分に折られます。それぞれのプリズム面になります 40 cm x 60 cm<a href="https://ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/55252/55252fig1large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するにはここをクリックしてください。</a> 。
<img alt="Figure 2" src="/files/ftp_upload/55252/55252fig2.jpg"> 
図 2: 塩ビ管を準備します。高さ 3 m、直径 10 cm は、ポリ塩化ビニル (PVC) 管 (スケジュール 40) は、例のカブトムシをキャプチャするため 2 つのプリズム トラップをサポートする使用されます。合計 4 つの穴は、各塩ビ管掘削する必要があります。プリズムを塩ビ管に接続するケーブルタイは、これらの穴を通過します。
<img alt="Figure 3" src="/files/ftp_upload/55252/55252fig3.jpg"> 
図 3:DD と他のトラップの甲虫のキャプチャの例です。男性と女性の例の意味 (+ SE) 数甲虫に撮影した緑漏斗のトラップまたはcis-3 光紫プリズム トラップ-hexenol 灰天蓋でハング、光緑プリズム トラップまたはcis-3 と暗い緑プリズム トラップと -hexenol とcis-ラクトンcis-3 と餌を付けた両方灰おおいか二階建てトラップ (3 m) 2 つの紫のプリズム、または上緑プリズムと低い紫プリズムでハングしていると -hexenol。同性に別の文字によって越えられるバーが大幅に異なる (P &#60; 0.05)。N = 2015年 2 北ミシガン州地点 8 複製されます。<a href="https://ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/55252/55252fig3large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください</a>。

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Building Double-decker Traps for Early Detection of Emerald Ash Borer

効果的なトラップを誘致し、エメラルド灰中くり盤 (例) をキャプチャは、検出し、この侵襲性害虫の管理の重要な要素です。二階建てトラップ、灰木の近く完全な太陽で視覚および嗅覚情報を組み込むし、フィールド試験で他のトラップの設計よりも例をキャプチャする可能性が高い。

エメラルド灰中くり盤の早期発見のため 2 階建てトラップを構築

Emerald ash borer (EAB) (Agrilus planipennis Fairmaire), the most destructive forest insect to have invaded North America, has killed hundreds of millions ...

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Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Environment

7.8K ビュー.  Michigan State University. 効果的なトラップを誘致し、エメラルド灰中くり盤 (例) をキャプチャは、検出し、この侵襲性害虫の管理の重要な要素です。二階建てトラップ、灰木の近く完全な太陽で視覚および嗅覚情報を組み込むし、フィールド試験で他のトラップの設計よりも例をキャプチャする可能性が高い。

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Transcript and Metabolite Profiling for the Evaluation of Tobacco Tree and Poplar as Feedstock for the Bio-based Industry

The global demand for food, feed, energy, and water poses extraordinary challenges for future generations. It is evident that robust platforms for the exploration of renewable resources are necessary to overcome these challenges. Within the multinational framework MultiBioPro we are developing biorefinery pipelines to maximize the use of plant biomass. More specifically, we use poplar and tobacco tree (Nicotiana glauca) as target crop species for improving saccharification, isoprenoid, long chain hydrocarbon contents, fiber quality, and suberin and lignin contents. The methods used to obtain these outputs include GC-MS, LC-MS and RNA sequencing platforms. The metabolite pipelines are well established tools to generate these types of data, but also have the limitations in that only well characterized metabolites can be used. The deep sequencing will allow us to include all transcripts present during the developmental stages of the tobacco tree leaf, but has to be mapped back to the sequence of Nicotiana tabacum. With these set-ups, we aim at a basic understanding for underlying processes and at establishing an industrial framework to exploit the outcomes. In a more long term perspective, we believe that data generated here will provide means for a sustainable biorefinery process using poplar and tobacco tree as raw material. To date the basal level of metabolites in the samples have been analyzed and the protocols utilized are provided in this article.

Plant biomass offers a renewable resource for multiple products, including fuel, feed, food, and a variety of materials. In this paper we investigate the properties of tobacco tree (Nicotiana glauca) and poplar as suitable sources for a biorefinery pipeline.

バイオベースの産業の原料としてたばこ木とポプラの評価のための転写産物および代謝物プロファイリング

The global demand for food, feed, energy, and water poses extraordinary challenges for future generations. It is evident that robust platforms for the ...

環境学

Multimodal Optical Microscopy Methods Reveal Polyp Tissue Morphology and Structure in Caribbean Reef Building Corals

An integrated suite of imaging techniques has been applied to determine the three-dimensional (3D) morphology and cellular structure of polyp tissues comprising the Caribbean reef building corals Montastraeaannularis and M. faveolata. These approaches include fluorescence microscopy (FM), serial block face imaging (SBFI), and two-photon confocal laser scanning microscopy (TPLSM). SBFI provides deep tissue imaging after physical sectioning; it details the tissue surface texture and 3D visualization to tissue depths of more than 2 mm. Complementary FM and TPLSM yield ultra-high resolution images of tissue cellular structure. Results have: (1) identified previously unreported lobate tissue morphologies on the outer wall of individual coral polyps&#160;and (2) created the first surface maps of the 3D distribution and tissue density of chromatophores and algae-like dinoflagellate zooxanthellae endosymbionts. Spectral absorption peaks of 500 nm and 675 nm, respectively, suggest that M. annularis and M. faveolata contain similar types of chlorophyll and chromatophores. However, M. annularis and M. faveolata exhibit significant differences in the tissue density and 3D distribution of these key cellular components. This study focusing on imaging methods indicates that SBFI is extremely useful for analysis of large mm-scale samples of decalcified coral tissues. Complimentary FM and TPLSM reveal subtle submillimeter&#160;scale changes in cellular distribution and density in nondecalcified coral tissue samples. The TPLSM technique affords: (1) minimally invasive sample preparation,&#160;(2) superior optical sectioning ability,&#160;and (3) minimal light absorption and scattering, while still permitting deep tissue imaging.

An integrated suite of imaging techniques has been applied to determine polyp morphology and tissue structure in the Caribbean corals Montastraeaannularis and M. faveolata. Fluorescence, serial block face,&#160;and two-photon confocal laser scanning microscopy have identified lobate structure, polyp walls, and estimated chromatophore and zooxanthellae densities and distributions.

マルチモーダル光学顕微鏡法カリビアン·リーフビルサンゴにポリープの組織形態と構造を明らかに

An integrated suite of imaging techniques has been applied to determine the three-dimensional (3D) morphology and cellular structure of polyp tissues ...

Detection of Foodborne Bacterial Pathogens from Individual Filth Flies

There is unanimous consensus that insects are important vectors of foodborne pathogens. However, linking insects as vectors of the pathogen causing a particular foodborne illness outbreak has been challenging. This is because insects are not being aseptically collected as part of an environmental sampling program during foodborne outbreak investigations and because there is not a standardized method to detect foodborne bacteria from individual insects. To take a step towards solving this problem, we adapted a protocol from a commercially available PCR-based system that detects foodborne pathogens from food and environmental samples, to detect foodborne pathogens from individual flies.Using this standardized protocol, we surveyed 100 wild-caught flies for the presence of Cronobacter spp., Salmonella enterica, and Listeria monocytogenes and demonstrated that it was possible to detect and further isolate these pathogens from the body surface and the alimentary canal of a single fly. Twenty-two percent of the alimentary canals and 8% of the body surfaces from collected wild flies were positive for at least one of the three foodborne pathogens. The prevalence of Cronobacter spp. on either body part of the flies was statistically higher (19%) than the prevalence of S. enterica (7%) and L.monocytogenes (4%). No false positives were observed when detecting S. enterica and L. monocytogenes using this PCR-based system because pure bacterial cultures were obtained from all PCR-positive results. However, pure Cronobacter colonies were not obtained from about 50% of PCR-positive samples, suggesting that the PCR-based detection system for this pathogen cross-reacts with other Enterobacteriaceae present among the highly complex microbiota carried by wild flies. The standardized protocol presented here will allow laboratories to detect bacterial foodborne pathogens from aseptically collected insects, thereby giving public health officials another line of evidence to find out how the food was contaminated when performing foodborne outbreak investigations.

A PCR-based protocol was adapted to detect Cronobacter spp., Salmonella enterica, and Listeria monocytogenes from body surfaces and alimentary canals of individual wild-caught flies. The goal of this protocol is to detect and isolate bacterial pathogens from individual insects collected as part of an environmental sampling program during foodborne outbreak investigations.

個々のフィルスのハエから食中毒細菌性病原体の検出

There is unanimous consensus that insects are important vectors of foodborne pathogens. However, linking insects as vectors of the pathogen causing a ...

The Hawaii Protocol for Scientific Monitoring of Coffee Berry Borer: a Model for Coffee Agroecosystems Worldwide

Coffee berry borer (CBB) is the most devastating insect pest for coffee crops worldwide. We developed a scientific monitoring protocol that is aimed at capturing and quantifying the dynamics and impact of this invasive insect pest as well as the development of its host plant across a heterogeneous landscape. The cornerstone of this comprehensive monitoring system is timely georeferenced data collection on CBB movement, coffee berry infestation, mortality by the fungus Beauveria bassiana, and coffee plant phenology via a mobile electronic data recording application. This electronic data collection system allows field records to be georeferenced through built-in global positioning systems, and is backed by a network of weather stations and records of farm management practices. Comprehensive monitoring of CBB and host plant dynamics is an essential part of an area-wide project in Hawaii to aggregate landscape-level data for research to improve management practices. Coffee agroecosystems in other parts of the world that experience highly variable environmental and socioeconomic factors will also benefit from implementing this protocol, in that it will drive the development of customized integrated pest management (IPM) to manage CBB populations.

Comprehensive monitoring of coffee berry borer and host plant dynamics is essential for aggregating landscape-level data to improve management of this invasive pest. Here, we present a protocol for scientific monitoring of coffee berry borer movement, infestation, mortality, coffee plant phenology, weather, and farm management via a mobile electronic data recording application.

コーヒーのベリーの穴あけ器の科学的なモニタリングのためのハワイ プロトコル: コーヒー生態系世界のモデル

Coffee berry borer (CBB) is the most devastating insect pest for coffee crops worldwide. We developed a scientific monitoring protocol that is aimed at ...

Fluorescent Paper Strips for the Detection of Diesel Adulteration with Smartphone Read-out

Three fluorescent molecular rotors of 4-dimethylamino-4-nitrostilbene (4-DNS) were investigated for their potential use as viscosity probes to indicate the content of kerosene in diesel/kerosene blends, a wide-spread activity to adulterate fuel. In solvents with low viscosity, the dyes rapidly deactivate via a so-called twisted intramolecular charge transfer state, efficiently quenching the fluorescence. Measurements of diesel/kerosene blends revealed a good linear correlation between the decrease in fluorescence and the increase of the fraction of the less viscous kerosene in diesel/kerosene blends. Immobilization of the hydroxy derivative 4-DNS-OH in cellulose paper yielded test strips that preserve the fluorescent indicator&#39;s behavior. Combination of the strips with a reader based on a smartphone and a controlling app allowed to create a simple field test. The method can reliably detect the presence of kerosene in diesel from 7 to 100%, outperforming present standard methods for diesel adulteration.

Here, we present a protocol to detect the adulteration of diesel with kerosene using test strips coated with a fluorescent viscosity probe together with a smartphone-based analysis system.

スマート フォンの読み出しとディーゼルの粗悪品の検出のための蛍光紙のストリップ

Three fluorescent molecular rotors of 4-dimethylamino-4-nitrostilbene (4-DNS) were investigated for their potential use as viscosity probes to indicate ...

Detection of Viruses from Bioaerosols Using Anion Exchange Resin

This protocol demonstrates a customized bioaerosol sampling method for viruses. In this system, anion exchange resin is coupled with liquid impingement-based air sampling devices for efficacious concentration of negatively-charged viruses from bioaerosols. Thus, the resin serves as an additional concentration step in the bioaerosol sampling workflow. Nucleic acid extraction of the viral particles is then performed directly from the anion exchange resin, with the resulting sample suitable for molecular analyses. Further, this protocol describes a custom-built bioaerosol chamber capable of generating virus-laden bioaerosols under a variety of environmental conditions and allowing for continuous monitoring of environmental variables such as temperature, humidity, wind speed, and aerosol mass concentration. The main advantage of using this protocol is increased sensitivity of viral detection, as assessed via direct comparison to an unmodified conventional liquid impinger. Other advantages include the potential to concentrate diverse negatively-charged viruses, the low cost of anion exchange resin (~$0.14 per sample), and ease of use. Disadvantages include the inability of this protocol to assess infectivity of resin-adsorbed viral particles, and potentially the need for the optimization of the liquid sampling buffer used within the impinger.

An anion exchange resin-based method, adapted to liquid impingement-based bioaerosol sampling of viruses is demonstrated. When coupled with downstream molecular detection, the method allows for facile and sensitive detection of viruses from bioaerosols.

陰イオン交換樹脂を用いるバイオエアロゾルからのウイルスの検出

This protocol demonstrates a customized bioaerosol sampling method for viruses. In this system, anion exchange resin is coupled with liquid ...

An Anaerobic Biosensor Assay for the Detection of Mercury and Cadmium

Mercury (Hg) bioavailability to microbes is a key step to toxic Hg biomagnification in food webs. Cadmium (Cd) transformations and bioavailability to bacteria control the amount that will accumulate in staple food crops. The bioavailability of these metals is dependent on their speciation in solution, but more particularly under anoxic conditions where Hg is methylated to toxic monomethylmercury (MeHg) and Cd persists in the rhizosphere. Whole-cell microbial biosensors give a quantifiable signal when a metal enters the cytosol and therefore are useful tools to assess metal bioavailability. Unfortunately, most biosensing efforts have so far been constrained to oxic environments due to the limited ability of existing reporter proteins to function in the absence of oxygen. In this study, we present our effort to develop and optimize a whole-cell biosensor assay capable of functioning anaerobically that can detect metals under anoxic condition in quasi-real time and within hours. We describe how the biosensor can help assess how chemical variables relevant to the environmental cycling of metals affect their bioavailability. The following protocol includes methods to (1) prepare Hg and Cd standards under anoxic conditions, (2) prepare the biosensor in the absence of oxygen, (3) design and execute an experiment to determine how a series of variable affects Hg or Cd bioavailability, and (4) to quantify and interpret biosensor data. We show the linear ranges of the biosensors and provide examples showing the method's ability to distinguish between metal bioavailability and toxicity by utilizing both metal-inducible and constitutive strains.

Here, we present a protocol to use an anaerobic whole-cell microbial biosensor to evaluate how different environmental variables affect the bioavailability of Hg and Cd to bacteria in anoxic environments.

水銀、カドミウムの検出のための嫌気性バイオ アッセイ

Mercury (Hg) bioavailability to microbes is a key step to toxic Hg biomagnification in food webs. Cadmium (Cd) transformations and bioavailability to ...

A Precise and Autonomous System for the Detection of Insect Emergence Patterns

Existing systems to measure insect emergence patterns have limitations; they are only partially automated and are limited in the maximum number of emerging insects they can detect. In order to obtain precise measurement of insect emergence, it is necessary for systems to be semi-automated and able to measure large numbers of emerging insects. We addressed these issues by designing and building a system that is automated and can measure emergence of up to 1200 insects. We modified the existing &#34;falling-ball&#34; system using Arduino microcontrollers to automate data collection and expand the sample size through multiple data channels. Multiple data channels enable the user to not only increase their sample size, but also allows for multiple treatments to be run simultaneously in a single experiment. Furthermore, we created an R script to automatically visualize the data as a bubble plot, while also calculating the median day and time of emergence. The current system was designed using 3D printing so the user can modify the system to be adjusted for different species of insects. The goal of this protocol is to investigate important questions in chronobiology and stress physiology, using this precise and automated system to measure insect emergence patterns.

Measurement of insect emergence patterns requires precision. Existing systems are only semi-automated and sample size is limited. We addressed these issues by designing a system using microcontrollers to precisely measure the time of emergence of large numbers of emerging insects.

昆虫の出現パターンの検出の正確かつ自律システム

Existing systems to measure insect emergence patterns have limitations; they are only partially automated and are limited in the maximum number of ...

Detection of Tilapia Lake Virus Using Conventional RT-PCR and SYBR Green RT-qPCR

The aim of this method is to facilitate the fast, sensitive and specific detection of Tilapia Lake Virus (TiLV) in tilapia tissues. This protocol can be used as part of surveillance programs, biosecurity measures and in TiLV basic research laboratories. The gold standard of virus diagnostics typically involves virus isolation followed by complementary techniques such as reverse-transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) for further verification. This can be cumbersome, time-consuming and typically requires tissue samples heavily infected with virus. The use of RT-quantitative (q)PCR in the detection of viruses is advantageous because of its quantitative nature, high sensitivity, specificity, scalability and its rapid time to result. Here, the entire method of PCR based approaches for TiLV detection is described, from tilapia organ sectioning, total ribonucleic acid (RNA) extraction using a guanidium thiocyanate-phenol-chloroform solution, RNA quantification, followed by a two-step PCR protocol entailing, complementary deoxyribonucleic acid (cDNA) synthesis and detection of TiLV by either conventional PCR or quantitative identification via qPCR using SYBR green I dye. Conventional PCR requires post-PCR steps and will simply inform about the presence of the virus. The latter approach will allow for absolute quantification of TiLV down to as little as 2 copies and thus is exceptionally useful for TiLV diagnosis in sub-clinical cases. A detailed description of the two PCR approaches, representative results from two laboratories and a thorough discussion of the critical parameters of both have been included to ensure that researchers and diagnosticians find their most suitable and applicable method of TiLV detection.

This protocol diagnoses Tilapia Lake Virus (TiLV) in tilapia tissues using RT-PCR methodologies. The entire method is described from tissue dissection to total RNA extraction, followed by cDNA synthesis and detection of TiLV by either conventional PCR or quantitative PCR using dsDNA binding a fluorescent binding dye.

ティラピア湖ウイルスを使用して従来 RT-PCR および SYBR の検出グリーン Rt-qpcr

The aim of this method is to facilitate the fast, sensitive and specific detection of Tilapia Lake Virus (TiLV) in tilapia tissues. This protocol can be ...

Enrichment and Detection of Clostridium perfringens Toxinotypes in Retail Food Samples

Clostridium perfringens (C. perfringens) is a prolific toxin producer and causes a wide range of diseases in various hosts. C. perfringens is categorized into five different toxinotypes, A through E, based on the carriage of four major toxin genes. The prevalence and distribution of these various toxinotypes is understudied, especially their pervasiveness in American retail food. Of particular interest to us are the type B and D strains, which produce epsilon toxin, an extremely lethal toxin suggested to be the environmental trigger of multiple sclerosis in humans. To evaluate the presence of different C. perfringens toxinotypes in various food samples, we developed an easy method to selectively culture these bacteria without the use of an anaerobic container system only involving three culturing steps. Food is purchased from local grocery stores and transported to the laboratory under ambient conditions. Samples are minced and inoculated into modified rapid perfringens media (RPM) and incubated overnight at 37 &#176;C in a sealed, airtight conical tube. Overnight cultures are inoculated onto a bottom layer of solid Tryptose Sulfite Cycloserine (TSC) agar, and then overlaid with a top layer of molten TSC agar, creating a &#34;sandwiched&#34;, anaerobic environment. Agar plates are incubated overnight at 37 &#176;C and then evaluated for appearance of black, sulfite-reducing colonies. C. perfringens-suspected colonies are removed from the TSC agar using sterile eye droppers, and inoculated into RPM and sub-cultured overnight at 37 &#176;C in an airtight conical tube. DNA is extracted from the RPM subculture, and then analyzed for the presence of C. perfringens toxin genes via polymerase chain reaction (PCR). Depending on the type of food sampled, typically 15&#8211;20% of samples test positive for C. perfringens.

Enrichment and Detection of Clostridium perfringens Toxinotypes in Retail Food Samples

The objective of this protocol is to detect different Clostridium perfringens toxinotypes in locally purchased foods, particularly epsilon toxin producing strain types B and D, without the use of anaerobic chambers.

小売食品サンプルにおけるクロストリジウム・パーフリンゲントキシノタイプの濃縮と検出

Clostridium perfringens (C. perfringens) is a prolific toxin producer and causes a wide range of diseases in various hosts. C. perfringens is categorized ...