אנו מבקשים להבין את תאי הגרנולוזה והתקה המיוחדים של שחלת לנגהנד. אנו חוקרים ביטוי גנים דיפרנציאלי בין שני סוגי התאים בנקודות שונות במהלך הביוץ. זה מספק תובנות לגבי יעילות הרבייה והפוריות שישמשו לשיפור ייצור הביציות באופן בר קיימא.
ביולוגיה של רבייה של עופות נחקרת כיום באמצעות טכנולוגיות ריצוף מהדור הבא ובדיקות מטבוליות. זה נעשה כדי לחקור הן את רקמות הרבייה והן את יחסי הגומלין ההורמונליים המעורבים בבגרות מינית ובביוץ. ייתכן ששכבת תאי הגרנולוזה לא תמיד תצא כיריעה שלמה.
מטופלים בפועל נדרשים להבטיח סיכוי גבוה יותר להצלחה. חלמון נוסף שנותר על שכבת הגרנולוזה הוא דאגה נוספת. זמני דגירה ארוכים יותר ב-PBS קר עשויים להקל על בעיה זו.
אחרת, ייתכן שיידרש ניקוי במורד הזרם. טכניקה זו תאפשר סטנדרטיזציה בקרב ביולוגים של רביית עופות. ככל שטכנולוגיית הריצוף משתפרת, הבהרת התפקידים של תאים מיוחדים בתוך איברים הופכת לנגישה יותר ויותר.
לכן, הדמיה של טכניקה המפרידה בין סוגי תאים מיוחדים היא קריטית לשכפול עתידי. כדי להתחיל, קח זקיקים מבודדים מציפור נקבה בוגרת מינית והניח אותם על קרח. לפני המניפולציה, למד את הזקיקים, תוך ציון מיקום הגבעול, הצלקת והדיסק הנבט.
לאחר מכן מגלגלים בעדינות את הזקיק על מגבת נייר יבשה ושולפים את הסרוזה במידת הצורך מהמשטח הזקיקי. החזק את הזקיק ליד הגבעול מעל קערה מלאה ב-PBS והשתמש בכוח הכבידה כדי לדמיין היכן הגבעול מסתיים על פני הזקיק. בעזרת מספריים חותכים רק את הגבעול מבלי לנקב את פני הזקיק, וממשיכים להסיר את הסרוזה, עד שהיא כבר לא נראית.
השתמש בקופסת האור כדי להאיר, ובדיסק הנבט כהפניה, העבר את הצלקת בצד הנגדי. החזק בעדינות את הזקיק כשצד הצלקת גלוי ומקם את הזקיק ישירות מעל קערת ה-PBS הקר כקרח. לאחר מכן, הרם את האזמל וחתוך בעדינות לאורך הצלקת.
זרוק מיד את הזקיק לתוך ה- PBS כשהחלמון מתחיל לנשור. בעזרת זוג מלקחיים ישרים ללא שיניים, מקלפים בעדינות את השכבה הוורודה של דופן הזקיקים מהחלמון בצד אחד של הפרוסה. המשיכו בתנועות צביטה ומשיכה קטנות כדי להרים את דופן הזקיק מהחלמון.
כדי לבצע הפרדת שכבות, יש להרחיק כחמישה מילימטרים של רקמת דופן זקיקים מהחלמון בכל פעם. לאחר שקטע של חמישה מילימטר נסוג, השתמש במלקחיים זוויתיים במקביל למלקחיים הישרים כדי לחקור לאורך מעטפת הזקיק. לאחר ששכבת הגרנולוזה מאותרת, צבטו אותה היטב לשכבת Theca והמשיכו למשוך את שתי השכבות מהחלמון כפי שתואר קודם לכן.
לאחר מכן, השתמש במלקחיים מעוקלים כדי להבריש קלות את החלמון מהשכבות הצבוטות. טאטא או הסר עודפי חלמון מהקערה מבלי לגרד את שכבת הגרנולוזה כדי למנוע קריעה. לאחר נסיגת כל קטע של חמישה עד 10 מילימטרים של דופן הזקיקים, עצרו והשתמשו במלקחיים כדי לקלף את שכבות התקה והגרנולוזה זו מזו כמו גם מהחלמון.
כעת, התקרב לדיסק הנבט בזהירות באמצעות מלקחיים ישרים. החזק היטב את שכבת הגרנולוזה לשכבת Theca. בעזרת מלקחיים מעוקלים, השתמש בתנועות צחצוח קלות כדי לדחוף את דיסק הנבט הרחק מתאי הגרנולוזה אל פני החלמון.
אם הדיסק הנבט נדרש כדגימת מחקר, יש להבריש את החלמון באמצעות מלקחיים זוויתיים. המשיכו להפריד את החלמון מדופן הזקיקים בעזרת מלקחיים מעוקלים עד שכל כדור הזקיק נטול חלמון. לאחר הברשה של שארית החלמון, הפרד את החלק האחרון של שכבת הגרנולוזה משכבת Theca.
ודא ששכבת הגרנולוזה המופרדת במלואה נקייה ככל האפשר מבלי להיות מצופה בכבדות בחומר עול. מניחים את שכבות הגרנולוזה והתקה במיכלים נפרדים עם ארבע מעלות צלזיוס PBS. לאחר הנחת שכבת הגרנולוזה ושכבות ה-theca במיכל המיועד להן, ערבבו בעדינות את שכבת ה-theca ב-PBS בעזרת מלקחיים כדי לנתק את כל השאריות שנותרו משכבת הגרנולוזה.
