نسعى لفهم الخلايا الحبيبية المتخصصة وخلايا ثيكا في مبيض لانغاند. ندرس التعبير الجيني التفاضلي بين نوعي الخلايا في نقاط مختلفة أثناء الإباضة. يوفر هذا رؤى حول الكفاءة الإنجابية والخصوبة التي سيتم استخدامها لتعزيز إنتاج البويضات بشكل مستدام.
يتم حاليا التحقيق في البيولوجيا التناسلية للدواجن باستخدام تقنيات تسلسل الجيل التالي ومقايسات التمثيل الغذائي. يتم ذلك لدراسة كل من الأنسجة التناسلية والتفاعل الهرموني الذي ينطوي عليه النضج الجنسي والإباضة. قد لا تظهر طبقة خلية Granulosa دائما كورقة سليمة.
يطلب من المرضى في الممارسة ضمان احتمالية أكبر للنجاح. يعتبر صفار البيض الإضافي المتبقي على طبقة الحبيبات مصدر قلق آخر. قد تخفف أوقات الحضانة الأطول في PBS الباردة من هذه المشكلة.
خلاف ذلك ، قد تكون هناك حاجة إلى التنظيف النهائي. ستسمح هذه التقنية بالتوحيد القياسي بين علماء الأحياء التناسلية للطيور. مع تحسن تقنية التسلسل ، يصبح توضيح أدوار الخلايا المتخصصة داخل الأعضاء متاحا بشكل متزايد.
لذلك ، فإن تصور تقنية تفصل أنواع الخلايا المتخصصة أمر بالغ الأهمية للتكرار في المستقبل. للبدء ، خذ بصيلات معزولة من أنثى طائر ناضج جنسيا وضعها على الجليد. قبل التلاعب ، ادرس البصيلات ، مع ملاحظة موقع الساق والوصمة والقرص الجرثومي.
ثم قم بلف المسام برفق فوق منشفة ورقية جافة واسحب المصل إذا لزم الأمر من السطح الجريبي. أمسك المسام من الساق فوق وعاء مملوء ب PBS واستخدم الجاذبية لتصور أين تنتهي القصبة عند سطح الجريب. باستخدام المقص ، قم بقص الساق فقط دون ثقب سطح المسام ، واستمر في إزالة المصل ، حتى يصبح غير مرئي.
باستخدام صندوق الضوء للإضاءة ، والقرص الجرثومي كمرجع ، قم بنقل وصمة العار على الجانب الآخر. أمسك المسام برفق مع ظهور جانب وصمة العار وضع المسام مباشرة فوق وعاء PBS المثلج. ثم التقط المشرط وقطعه برفق على طول وصمة العار.
قم بإسقاط المسام على الفور في PBS عندما يبدأ الصفار في التساقط. باستخدام زوج من ملقط الأنسجة المستقيمة غير المسنن ، قم بتقشير الطبقة الوردية من الجدار الجريبي برفق من صفار البيض على جانب واحد من الشريحة. استمر في حركات قرصة صغيرة وسحب لرفع جدار المسام بعيدا عن الصفار.
لإجراء فصل الطبقة ، اسحب ما يقرب من خمسة ملليمترات من أنسجة الجدار الجريبي بعيدا عن صفار البيض في المرة الواحدة. بمجرد سحب مقطع خمسة ملليمترات ، استخدم ملقطا بزاوية جنبا إلى جنب مع الملقط المستقيم للتحقيق على طول غلاف الجريب. بمجرد تحديد موقع طبقة الحبيبات ، قم بقرصها بإحكام على طبقة Theca واستمر في سحب كلتا الطبقتين بعيدا عن صفار البيض كما هو موضح سابقا.
بعد ذلك ، استخدم ملقطا منحنيا لتنظيف الصفار برفق بعيدا عن الطبقات المقروصة. امسح أو أزل الصفار الزائد من الوعاء دون كشط طبقة الحبيبات لتجنب التمزق. بعد سحب كل قسم من خمسة إلى 10 ملم من الجدار الجريبي ، توقف مؤقتا واستخدم الملقط لتقشير طبقات الثيكا والحبيبات بعيدا عن بعضها البعض وكذلك من صفار البيض.
الآن ، اقترب من القرص الجرثومي بعناية باستخدام ملقط مستقيم. أمسك طبقة الحبيبات بإحكام بطبقة Theca. باستخدام الملقط المنحني ، استخدم حركات تنظيف خفيفة لدفع القرص الجرثومي بعيدا عن الخلايا الحبيبية إلى سطح الصفار.
إذا كان القرص الجرثومي مطلوبا كعينة بحثية ، فقم بتنظيف صفار البيض باستخدام ملقط بزاوية. استمر في فصل صفار البيض عن الجدار الجريبي باستخدام ملقط منحني حتى يخلو مجال المسام بالكامل من صفار البيض. بمجرد تنظيف ما تبقى من صفار البيض ، افصل الجزء الأخير من طبقة الحبيبات عن طبقة ثيكا.
تأكد من أن طبقة الحبيبات المنفصلة بالكامل نظيفة قدر الإمكان دون أن تكون مغلفة بشدة بمادة النير. ضع طبقات الحبيبات والثيكا في حاويات منفصلة بأربع درجات مئوية PBS. بعد وضع طبقة الحبيبات وطبقات الثيكا في الحاوية المخصصة لها ، قم بتحريك طبقة الثيكا برفق في PBS باستخدام ملقط لفصل أي بقايا متبقية من طبقة الحبيبات.
