Buscamos comprender las células especializadas de la granulosa y la teca del ovario de Langhand. Estudiamos la expresión génica diferencial entre los dos tipos de células en diferentes puntos de la ovulación. Esto proporciona información sobre la eficiencia reproductiva y la fertilidad que se utilizará para mejorar la producción de huevos de manera sostenible.
La biología reproductiva avícola se investiga actualmente utilizando tecnologías de secuenciación de próxima generación y ensayos metabólicos. Esto se hace para estudiar tanto los tejidos reproductivos como la interacción hormonal involucrada en la madurez sexual y la ovulación. Es posible que la capa de células de la granulosa no siempre se desprenda como una lámina intacta.
En la práctica, se requiere que los pacientes garanticen una mayor probabilidad de éxito. La yema extra que queda en la capa de la granulosa es otra preocupación. Los tiempos de incubación más largos en PBS fríos pueden aliviar este problema.
De lo contrario, es posible que se requiera una limpieza posterior. Esta técnica permitirá la estandarización entre los biólogos reproductivos de las aves. A medida que mejora la tecnología de secuenciación, cada vez es más accesible dilucidar las funciones de las células especializadas dentro de los órganos.
Por lo tanto, la visualización de una técnica que separa tipos de células especializadas es fundamental para la replicación futura. Para empezar, toma folículos aislados de un ave hembra sexualmente madura y colócalos en hielo. Antes de la manipulación, estudie los folículos, anotando la ubicación del tallo, el estigma y el disco germinal.
A continuación, enrolle suavemente el folículo sobre una toalla de papel seca y retire la serosa si es necesario de la superficie folicular. Sostenga el folículo por el tallo sobre un recipiente lleno de PBS y use la gravedad para visualizar dónde termina el tallo en la superficie del folículo. Con unas tijeras, corte solo el tallo sin perforar la superficie del folículo y continúe quitando la serosa, hasta que ya no sea visible.
Utilizando la caja de luz para iluminar, y el disco germinal como referencia, reubica el estigma en el lado opuesto. Sostenga suavemente el folículo con el lado del estigma visible y coloque el folículo directamente sobre el recipiente de PBS helado. Luego, toma el bisturí y corta suavemente a lo largo del estigma.
Deje caer inmediatamente el folículo en el PBS a medida que la yema comienza a caer. Con un par de pinzas de tejido rectas sin dientes, retire suavemente la capa rosada de la pared folicular de la yema en un lado de la rebanada. Continúe con pequeños movimientos de pellizco y tracción para levantar la pared del folículo lejos de la yema.
Para realizar la separación de capas, retraiga aproximadamente cinco milímetros de tejido de la pared folicular lejos de la yema a la vez. Una vez que se haya retraído una sección de cinco milímetros, use pinzas en ángulo en conjunto con las pinzas rectas para sondear a lo largo de la cubierta del folículo. Una vez localizada la capa de granulosa, pellizca firmemente hasta la capa de Theca y continúa tirando de ambas capas separándolas de la yema como se ha descrito anteriormente.
A continuación, utilice unas pinzas curvas para cepillar ligeramente la yema lejos de las capas pellizcadas. Barre o retira el exceso de yema del bol sin raspar la capa de granulosa para evitar que se rompa. Después de retraer cada sección de cinco a 10 milímetros de la pared folicular, haga una pausa y use las pinzas para despegar las capas de teca y granulosa entre sí, así como de la yema.
Ahora, acércate al disco germinal con cuidado con unas pinzas rectas. Sujete firmemente la capa de granulosa a la capa de teca. Con pinzas curvas, use movimientos ligeros de cepillado para empujar el disco germinal lejos de las células de la granulosa hacia la superficie de la yema.
Si se requiere el disco germinal como muestra de investigación, cepille la yema con pinzas en ángulo. Continúe separando la yema de la pared folicular con pinzas curvas hasta que toda la esfera del folículo esté desprovista de yema. Una vez que se haya cepillado el resto de la yema, separe la última parte de la capa de granulosa de la capa de teca.
Asegúrese de que la capa de granulosa completamente separada esté lo más limpia posible sin estar muy cubierta de yugo. Coloque las capas de granulosa y teca en recipientes separados con cuatro grados centígrados PBS. Después de colocar la capa de granulosa y las capas de teca en su recipiente designado, agite suavemente la capa de teca en PBS con pinzas para separar cualquier resto de la capa de granulosa.
