Nous cherchons à comprendre les cellules spécialisées de la granulosa et de la thèque de l’ovaire de Langhand. Nous étudions l’expression différentielle des gènes entre les deux types de cellules à différents moments de l’ovulation. Cela donne un aperçu de l’efficacité de la reproduction et de la fertilité qui seront utilisés pour améliorer durablement la production d’œufs.
La biologie reproductive de la volaille est actuellement étudiée à l’aide de technologies de séquençage de nouvelle génération et de tests métaboliques. Ceci est fait pour étudier à la fois les tissus reproducteurs et l’interaction hormonale impliquée dans la maturité sexuelle et l’ovulation. La couche cellulaire de la granulosa peut ne pas toujours se détacher sous la forme d’une feuille intacte.
Les patients en exercice doivent s’assurer d’une plus grande probabilité de succès. Le jaune supplémentaire restant sur la couche de granulosa est une autre préoccupation. Des temps d’incubation plus longs dans le PBS froid peuvent atténuer ce problème.
Sinon, un nettoyage en aval peut être nécessaire. Cette technique permettra une standardisation parmi les biologistes de la reproduction aviaire. À mesure que la technologie de séquençage s’améliore, il devient de plus en plus accessible d’élucider les rôles des cellules spécialisées au sein des organes.
Par conséquent, la visualisation d’une technique qui sépare les types de cellules spécialisés est essentielle pour la réplication future. Pour commencer, prélevez des follicules isolés d’un oiseau femelle sexuellement mature et placez-les sur de la glace. Avant la manipulation, étudiez les follicules, en notant l’emplacement de la tige, du stigmate et du disque germinal.
Ensuite, roulez doucement le follicule sur une serviette en papier sèche et retirez la séreuse si nécessaire de la surface folliculaire. Tenez le follicule par la tige au-dessus d’un bol rempli de PBS et utilisez la gravité pour visualiser où la tige se termine à la surface du follicule. À l’aide de ciseaux, coupez uniquement la tige sans perforer la surface du follicule et continuez à retirer la séreuse jusqu’à ce qu’elle ne soit plus visible.
À l’aide de la boîte lumineuse pour éclairer et du disque germinal comme référence, déplacez le stigmate du côté opposé. Tenez doucement le follicule avec le côté stigmate visible et positionnez le follicule directement au-dessus du bol de PBS glacé. Ensuite, prenez le scalpel et coupez doucement sur toute la longueur du stigmate.
Déposez immédiatement le follicule dans le PBS lorsque le jaune commence à tomber. À l’aide d’une paire de pinces à tissu droites non dentées, retirez délicatement la couche rose de la paroi folliculaire du jaune d’un côté de la tranche. Continuez avec de petits mouvements de pincement et de traction pour soulever la paroi du follicule loin du jaune.
Pour effectuer la séparation des couches, rétractez environ cinq millimètres de tissu de la paroi folliculaire du jaune à la fois. Une fois qu’une section de cinq millimètres a été rétractée, utilisez une pince coudée en tandem avec la pince droite pour sonder le long de la coquille du follicule. Une fois que la couche de granulosa est localisée, fixez-la en toute sécurité à la couche de Theca et continuez à retirer les deux couches du jaune comme décrit précédemment.
Ensuite, utilisez une pince incurvée pour brosser légèrement le jaune des couches pincées. Balayez ou retirez l’excès de jaune du bol sans gratter la couche de granulosa pour éviter de la déchirer. Après avoir rétracté chaque section de cinq à 10 millimètres de la paroi folliculaire, faites une pause et utilisez la pince pour décoller les couches de thèque et de granulosa l’une de l’autre ainsi que du jaune.
Maintenant, approchez-vous prudemment du disque germinatif à l’aide d’une pince droite. Tenez fermement la couche de granulosa sur la couche de Theca. À l’aide d’une pince incurvée, utilisez de légers mouvements de brossage pour éloigner le disque germinatif des cellules de la granulosa sur la surface du vitellin.
Si le disque germinatif est nécessaire comme spécimen de recherche, brossez le jaune à l’aide d’une pince coudée. Continuez à séparer le jaune de la paroi folliculaire avec des pinces incurvées jusqu’à ce que toute la sphère du follicule soit dépourvue de jaune. Une fois que le reste du jaune a été brossé, séparez la dernière partie de la couche de granulosa de la couche de Théca.
Assurez-vous que la couche de granulosa entièrement séparée est aussi propre que possible sans être fortement recouverte de matière d’empiècement. Placez les couches de granulosa et de thèque dans des récipients séparés à quatre degrés Celsius PBS. Après avoir placé la couche de granulosa et les couches de thèque dans leur récipient désigné, agitez doucement la couche de thèque dans du PBS avec une pince pour détacher tout reste de la couche de granulosa.
