המחברים מבקשים להודות רוגן אורח, מישל וויבר, וקריסטן יפרט. מימון למחקר זה מסופק על ידי NIH גרנט R03EB009237, כמו גם מענקי NIH הדרכת T32EB001026-06 ממכון הלאומי לדימות וBioengineering ביו T32HL076124-05.

1. הכנת רקמה והתקנת ניסוי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> איבר חזירי קציר מייד לאחר המתת חסד ממתקן משחטה או מחקר ולשטוף את הדם עודף. חתוך את הלב של שומן ורקמה עודפים, שמירת הפרוזדורים ואב העורקים בשלמותה. לחתוך שומן להפריד מעורק הריאה לאב העורקים. אם יש קיצוצים כלשהם ברקמה, להשליך כראוי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עוטף כל אחד בנפרד בנייר לב מקפיא ולאחסן את כל הרקמות במקפיא ° C -80 לפחות 24 שעות כדי להבטיח הקפאה מוחלטת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כשמוכן לשימוש (בדרך כלל פחות מ 3 חודשים), לב הפשרה 1 שלם קפוא חזירי במים מסוג 1 מתחת למים למשך הלילה בכוס 4 ליטר ב 4 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר הלב מופשר לחלוטין, ללטף את הלב יבש, לשקול את הלב, ולהקליט במשקל. לבו של חזיר במשקל שוק צריך לשקול כ 375-450 גרם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חבר צינורות גודל 18 Masterflex לסוף ¼ &quot;של מפחית תיל. הכנס מפחית התיל וצינורות בתוך אב העורקים. 2 תפסי מקום צינור או קשרי zip מאובטחים ברחבי אב העורקים, ממש מתחת לתא מטען brachiocephalic. המפחית והצנרת חייב להישאר מעל לשסתום אב העורקים, ולכן העורקים הכליליים ניתן perfused (איור 1). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש במזרק 30 או 60 מ&quot;ל כדי למלא את הצינור במי סוג I. הכנס את הצינורות בתוך המחסנית של משאבת גלגלת Masterflex באמצע המשוער שלו. הצף את סוף היבוא של הצינורות בחלק התחתון של 4 כוס ליטר מלאה עם 2.5 ליטר מים ולאבטח את הצינור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח את הלב בכוס מלאה במים, וראש המשאבה כדי להסיר בועות אוויר. אם בועות הם נצפו מגיעים מאב העורקים שבו הצינור מוכנס, אב העורקים ייתכן שיהיה הצורך לשנות את מיקום או מאובטח עם קשרים נוספים. חותם אטום הוא חשוב כדי לשמור על לחץ מתאים במשך תהליך decellularization (איור 2). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח את 4 כוס הליטר המכיל 3 ליטר של 0.2% Trypsin/0.05% EDTA/0.05% NaN3 פתרון בצלחת מערבבים ומחמם אותו עד 37 מעלות צלזיוס בהכנת תהליך decellularization. </li></ol> 2. רקמת שטיפות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הגדר את המשאבה לקצב זרימה של 400 מ&quot;ל / דקה, להבטיח כי את גודל הצינורות נכון נבחר. שטוף את הלב עם סוג מים שעבור 15-25 דקות. כמשאבה התחילה, לב צריך להתנפח וeffuse דם מחדרי הלב. פתרון טרי צריך להחליף כל 5-10 דקות, או לפי צורך על בסיס כמות הדם הוסרה מהלב. אם דם לא effused מהלב, להתאים את הצינורות ותפסים במידת צורך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עצור את המשאבה ולהעביר את הלב לכוס נפרדת מלאה בפוספט 2X נאגר מלוח (PBS). אחרי הצינורות הם שקועים בפתרון, מפעיל את המשאבה ולהגביר את קצב הזרימה של 700 מ&quot;ל / דקה. הלב צריך להישאר בתמיסה למשך 15 דקות, שינוי הפתרון כל 5 דקות. כל שינוי דורש פתרון המשאבה צריך לעצור באופן זמני תוך הרקמות והצינורות מועברותלכוס החדשה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להעביר את הלב לסוג מים שעבור 10 דקות ולהגביר את קצב הזרימה ל750 מ&quot;ל / דקה. </li></ol> 3. זלוף Decellularization והפתרון <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להעביר את הלב לכוס המכילה 0.2% Trypsin/0.05% EDTA/0.05% 3 NaN ב 37 ° C. הגדל את מהירות משאבת 1200 מ&quot;ל / דקה ומפעיל את המשאבה. השתמש במוט מערבבים הונח בתחתית הכוס לזרום פתרון במבחנה. הלב צריך להישאר בEDTA/0.05% 3 פתרון 0.2% Trypsin/0.05% NaN על 37 מעלות צלזיוס עבור סכום כולל של שלוש שעות. לאחר השעה 1, להגדיל את מהירות המשאבה ל -1,500 מ&quot;ל / דקה. לאחר שעה נוספת, להגדיל את מהירות המשאבה ל -1,800 מ&quot;ל / דקה. הרקמה היא נתונה באיטיות למהירות מוגברת זלוף למצב הרקמות ולמנוע קרע של כלי הדם. הלב יתפח וכמעט כפול בגודלו במהלך שלב זה של הפרוטוקול. הרקמות תאבדנה את צבעו הטבעי, ומתקדם מהאטרייה לשיא בכל רחבי הדואר הפרוטוקול (איור 3). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר כל זלוף פתרון, 2 שלב שטיפה מתבצע על מנת להסיר שאריות סלולריות, שאריות כימיקלים, ותמוגה תא סיוע. כל השטיפה מורכבת מ10 דקות לשטוף במי סוג I ואחרי 10 דקות לשטוף עם פתרון 2X PBS בטמפרטורת חדר. כל שטיפה מורכבת מהסרת הפתרון מהכוס המקורית, והוסיף לשטוף פתרונות, ומחזור perfusate בתוך הכוס המכילה את הלב מתחת למים. לאחר 3 פתרון NaN 0.2% Trypsin/0.05% EDTA/0.05% מים, ינקבו ב1900 מ&quot;ל / דקה ואז ינקבו 2X PBS ב 1950 מ&quot;ל / דקה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להעביר את הלב לפתרון של 3% X-100/0.05% טריטון EDTA/0.05% 3 NaN בטמפרטורת חדר. הגדל את מהירות המשאבה עד 2,000 מ&quot;ל / פתרון ינקב דקות ובמשך שעה אחת. הסר את התמיסה מהמבחנה ולהחליף עם פתרון חדש, להגדיל את מהירות המשאבה עד 2100 מ&quot;ל / דקה, ותנקב את הפתרון הטרי לשעה נוספת וחצי, מביא את הסך כל זמן ב3% טריטון X-100/0.05% EDTA/0.05% 3 NaN ל -2.5 שעות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שטוף את הרקמה במי סוג I ב2150 מ&quot;ל / דקה ו2X PBS ב 2180 מ&quot;ל / דקה למשך 10 דקות כל אחד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להעביר את הלב ל4% פתרון Deoxycholate נתרן בטמפרטורת חדר. הגדל את מהירות משאבת 2200 מ&quot;ל / דקה ופתרון ינקב עבור 3 שעות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שטוף את הרקמה במי סוג I וב2X PBS ב 2200 מ&quot;ל / דקה במשך 15 דקות כל אחד, משנות את הפתרונים לאחר דקות 5-10 לכל פתרון. ניתן לפצל את צעדי זלוף תואר על ימים מרובים על ידי ביצוע הצעד לשטוף פעמים ואחסון הלב עם צינורות מחוברים בין הלילה ב 4 ° C ושקוע במי סוג I. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> למחרת, בצעו 5 דקות לשטוף עם מי סוג I ב 750 מ&quot;ל / דקה, ואחרי 5 דקות לשטוף ב1X PBS ב 1500 מ&quot;ל / דקה. הפרוטוקול ואז ניתן להמשיך בקצב הזרימה המתוארת בפתרון הראוי. </li></ol> 4. חיטוי ועיבוד סופי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להעביר את הלב לperac 0.1%פתרון ינקב עבור 1.5 שעתי פתרון אתנול 4% וב2200 מ&quot;ל / דקת חומצת etic /. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> את השטיפות הסופיות לרקמות שבוצעו בכל 2200 מ&quot;ל / דקה. תנקב את הרקמה עם 1X PBS במשך 15 דקות, ואחרי 2 דקות 5 שטיפות במי סוג I. זו סדרה של שטיפות חוזרת על עצמו פעם נוספת על מנת להשלים את הליך זלוף פתרון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפעל את המשאבה וניתק את הלב מפתרון לניקוז הלב. חותך את הקשרים מאב העורקים, להסיר את כל הצנרת, ולמקם את הלב בגביע ריק לניקוז לשעה 1. עודף נוזלים יהיו צורך לנקז אותו מדי. הנח את הלב על משטח סופג כדי לנקז את הלב (איור 4) באופן מלא. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר שרוב המים מוסרים, להקליט את המשקל של מטריקס הלב (C-ECM). הלב יכול להיות צפוי לאבד כ 20-25% מהמשקל ההתחלתי שלה במהלך תהליך decellularization. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנתח את חדרי לב הימניים ושמאליים, וכן מחצו חדרית לדנ&quot;א quantificatiובעיבוד היסטולוגית כדי לאשר decellularization המלא של הרקמה (איור 5). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הקפא C-ECM ב-80 מעלות צלזיוס במשך לפחות 2 שעות לפני lyophilization. </li></ol>

<ol>
	<li>Ott, H. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regeneration+and+orthotopic+transplantation+of+a+bioartificial+lung.">Regeneration and orthotopic transplantation of a bioartificial lung.</a> Nat. Med. 16, 927-933 (2010).</li><li>Ott, H. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perfusion-decellularized+matrix:+using+nature's+platform+to+engineer+a+bioartificial+heart.">Perfusion-decellularized matrix: using nature's platform to engineer a bioartificial heart.</a> Nat. Med. , (2008).</li><li>Petersen, T. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue-engineered+lungs+for+in+vivo+implantation.">Tissue-engineered lungs for in vivo implantation.</a> Science. 329, 538-541 (2010).</li><li>Uygun, B. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organ+reengineering+through+development+of+a+transplantable+recellularized+liver+graft+using+decellularized+liver+matrix.">Organ reengineering through development of a transplantable recellularized liver graft using decellularized liver matrix.</a> Nat. Med. , (2010).</li><li>Wainwright, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+of+cardiac+extracellular+matrix+from+an+intact+porcine+heart.">Preparation of cardiac extracellular matrix from an intact porcine heart.</a> Tissue Eng. Part C Methods. 16, 525-532 (2010).</li><li>Crapo, P. M., Gilbert, T. W., Badylak, S. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+overview+of+tissue+and+whole+organ+decellularization+processes.">An overview of tissue and whole organ decellularization processes.</a> Biomaterials. 32, 3233-3243 (2011).</li><li>Gilbert, T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Strategies+for+tissue+and+organ+decellularization.">Strategies for tissue and organ decellularization.</a> Journal of cellular biochemistry. , (2012).</li><li>Gilbert, T. W., Sellaro, T. L., Badylak, S. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Decellularization+of+tissues+and+organs.">Decellularization of tissues and organs.</a> Biomaterials. 27, 3675-3683 (2006).</li><li>Akhyari, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+quest+for+an+optimized+protocol+for+whole-heart+decellularization:+a+comparison+of+three+popular+and+a+novel+decellularization+technique+and+their+diverse+effects+on+crucial+extracellular+matrix+qualities.">The quest for an optimized protocol for whole-heart decellularization: a comparison of three popular and a novel decellularization technique and their diverse effects on crucial extracellular matrix qualities.</a> Tissue Eng. Part C Methods. 17, 915-926 (2011).</li><li>Weymann, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+evaluation+of+a+perfusion+decellularization+porcine+heart+model--generation+of+3-dimensional+myocardial+neoscaffolds.">Development and evaluation of a perfusion decellularization porcine heart model--generation of 3-dimensional myocardial neoscaffolds.</a> Circulation journal : official journal of the Japanese Circulation Society. 75, 852-860 (2011).</li><li>Cortiella, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+acellular+natural+lung+matrix+on+murine+embryonic+stem+cell+differentiation+and+tissue+formation.">Influence of acellular natural lung matrix on murine embryonic stem cell differentiation and tissue formation.</a> Tissue Eng. Part A. 16, 2565-2580 (1089).</li><li>Remlinger, N. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hydrated+xenogeneic+decellularized+tracheal+matrix+as+a+scaffold+for+tracheal+reconstruction.">Hydrated xenogeneic decellularized tracheal matrix as a scaffold for tracheal reconstruction.</a> Biomaterials. 31, 3520-3526 (2010).</li><li>Sellaro, T. L., Ravindra, A. K., Stolz, D. B., Badylak, S. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maintenance+of+hepatic+sinusoidal+endothelial+cell+phenotype+in+vitro+using+organ-specific+extracellular+matrix+scaffolds.">Maintenance of hepatic sinusoidal endothelial cell phenotype in vitro using organ-specific extracellular matrix scaffolds.</a> Tissue Eng. 13, 2301-2310 (2007).</li><li>Wainwright, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Right+ventricular+outflow+tract+repair+with+a+cardiac+biologic+scaffold.">Right ventricular outflow tract repair with a cardiac biologic scaffold.</a> Cells, tissues, organs. 195, 159-170 (2012).</li></ol>

ד&quot;ר גילברט היה בוועדה המדעית המייעצת בACell, Inc בעוד שהמחקר שנעשה, והפך לאחרונה לסגן הנשיא למחקר ופיתוח. ACell, Inc מוכר מטריצת שלפוחית ​​שתן ואין לו עניין מסחרי במחקר הנוכחי.

המחקר הנוכחי תאר מתודולוגיה לdecellularization עקבי והיעיל של לב חזירי. הפרוטוקול היה שינוי ל1 דו&quot;ח שפורסם בעבר, וכלל חשיפה ארוכה יותר לזרימה ולחץ מוגבר, אשר ספקה תוצאות דיר יותר. רקמת decellularized התקבלה עמדה בכל הקריטריונים שפורסמו לdecellularization המוצלח של רקמה 2. שינויים תכופים פתרון בוצעו על מנת להגביל את החידוש של חומר תאי לרקמה, ומשך חשיפה לכל סוכן decellularization היה ממוזער להפחתת השפעות שליליות על ECM. במהלך השלבים הראשונים של הפרוטוקול, שיעור זלוף היה גדל בהדרגה למצב הרקמות ולאפשר לספיקות גבוהות יותר בשלבים המאוחרים יותר של הפרוטוקול. ללא מיזוג הרקמות בשלבים המוקדמים, בכלי הדם של הלב יכולים להיקרע, מה שהופך פרפוזיה של לב בלתי אפשרית. פרוטוcol שמש בשל יעילותה, ואין לה תביעות נעשות לעליונותו על פני פרוטוקולים אחרים. ההרכב המדויק של סוכני decellularization ושיעורי זלוף מתקבל על דעת עשוי להיות מגוון להניב פרוטוקול עם תכונות מכאניות או ביולוגיות טובות יותר, אך העקרונות הכלליים למסירה של הסוכנים ללב חלים. השימור של המבנה המקורי תלת הממדי של הלב יוחס למספר פרוצדורות שבוצעו לאורך פרוטוקול decellularization. ראשית, הרקמה הייתה גזוזה והוקפאה בעת ההגעה. הקפאה קדמה תמוגה תא והיה חשוב לרקמה טרום מיזוג למחזורי זלוף. הרקמה, נבדק ביסודיות לחתכים ו2 סנטימטר שלם אב עורקים שלם מעולים סתם אאורטלי. אם כל קרום לב או epicardium נחתך, האיבר הושלך משום perfusate לא הגיע לאזורים במורד זרם של הלב, והלב לא היה decellularized באופן מלא.בשלב הבא, הרקמה הייתה מופשרת לחלוטין במי סוג שלפני השימוש. המים אפשרו לרקמה להירגע כפי שהפשיר וגם סייעתי להסרת קרישי דם השיורי בתוך הלב. לבסוף, כצינור שהוחדר, הוקפד על מנת להבטיח שסתם אאורטלי נותר על הכן, כך שהוא יוצר חותם אטום למים סביב הצינור, כך שלחץ תקין נשמר וכי הפתרון נכנס בעורקים הכליליים. אחרי כל פרוטוקול decellularization הושלם, סדרה של אמצעי בקרת איכות הושלמה כדי להבטיח הסרה מלאה של חומר תאי. המחקר הנוכחי אשר שהפרוטוקול בוטל מכתים היסטולוגית לגרעין תא, הראה כי פחות מ 50 ng של DNA היה נוכח למ&quot;ג של משקל יבש של הרקמה, וכי כל הדנ&quot;א היה פחות מ 200 נ&quot;ב בגודל 6. שיטות שפורסמו בעבר לdecellularization לב הראו רמות דומות של decellularization במכתים דנ&quot;א וכימות2,5,9,10. decellularization המלא הושג במחקרים אלה באמצעות טיפולים דומים של אנזימים וחומרי ניקוי. עם זאת, במחקר הנוכחי, באורך של חשיפה לכל חומר כימי שעלה, היו יותר שינויי פתרון, ואת קצב הזרימה היה מוגברים. הפרוטוקול הנוכחי גם הגדיל את אורכו של שטיפות כימיות, שעלול לגרום להסרה יעילה יותר של שאריות כימיות ממטריקס. Recellularization לבבות עכברושים decellularized עם תאים ספציפיים לב הניב תוצאות מבטיחות בניסויי מבחנה 2,5. decellularization זלוף איבר השלם אפשר לתחזוקה של מערכת כלי הדם המקורית, שהוא קריטי בrecellularization של הרקמה. גורמי הצמיחה הגלומים, חלבוני מטריצה, וארכיטקטורת סיבים תלת ממדית גם קדמו מצורפים תקין תא, הגירה, ומאותת לרקמות שריר לב לשקם התכווצות. החזירי הלב extracellular מטריצה ​​תהיה קשה יותר לrecellularize בשל גודלו של הפיגום ומספר התאים דרושים לתקשורת סלולרית תקינה ומעבר חומרי מזון. עם זאת, תיקונים שנחתכו ממטריצת הלב עשויים להיות שימושיים עבור ביישומי vivo. מחקרים רבים הראו שיתרון לשימוש במטריצה ​​ספציפית לאתר לבנייה מחדש של רקמות פגועות במודלים של בעלי חיים 11-13. לכן, מטריצת חוץ תאי פיגום נגזר מרקמת לב רצוי עבור יישומי שיקום שריר לב. הארכיטקטורה הפנימית של רקמת הלב עשויה להציג יתרונות על פני פיגום ECM נובע מאיבר אחר או ביולוגי מלאכותית. הפיגום באתר ספציפי עשוי לתמוך חדירת תא מארח ולקדם שיפוץ תגובה בונה, בניגוד להיווצרות רקמת צלקת. נכון להיום, טלאי לב ECM נחקרו in vivo לשחזר פגם שנוצר בקיר שריר הלב 14. העתיד סטהמת יבוצע במבחנה כדי לבחון את יכולתו של הפיגום כדי לתמוך בתאי לב שנזרעו ותרבית על המטריצה. בשיטות המתוארות במסמך זה עשויות גם להיות ישימים decellularization של לב אדם. לסיכום, decellularization לב החזירי היא אפשרי והשיטות הן ישר קדימה. המשך החקירה של חומר זה תספק תובנה לתוך הפוטנציאל שלה לשימוש קליני.

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם מגיב / חומרים </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגים </td><td> תגובות </td></tr><tr><td> טריפסין </td><td> Gibco </td><td> 15090 </td><td></td></tr><tr><td> EDTA </td><td> דיג </td><td> BP120-500 </td><td></td></tr><tr><td> 3 NaN </td><td> סיגמא </td><td> S2002-500G </td><td></td></tr><tr><td> טריטון X-100 </td><td> סיגמא </td><td> X100-1L </td><td></td></tr><tr><td> PBS 10X </td><td> דיג </td><td> BP399-20 </td><td></td></tr><tr><td> Deoxycholate נתרן </td><td> סיגמא </td><td> D6750-500G </td><td></td></tr><tr><td> חומצת Peracetic </td><td> Pfaltz ובאואר </td><td> P05020 </td><td> 35% CAS # 79-21-0 </td></tr><tr><td> אתנול </td><td> Pharmco </td><td> 111000200 </td><td></tד&gt; </tr><tr><td> כונן המשאבה Masterflex </td><td> הקול בן זוגו </td><td> Si-07524-50 </td><td></td></tr><tr><td> אבובי Masterflex </td><td> הקול בן זוגו </td><td> 96400-18 </td><td> גודל 18 </td></tr><tr><td> Reducer תיל </td><td> הקול בן זוגו </td><td> EW-30612-20 </td><td></td></tr><tr><td> כוס 4L </td><td> הפישר סיינטיפיק </td><td> 02-540T </td><td></td></tr></tbody></table>

procedure for decellularization of porcine heart by retrograde coronary perfusion

כל decellularization האיבר זלוף המבוסס צבר לאחרונה עניין בתחום הנדסת רקמות כאמצעי ליצור פיגומים תאיים מטריקס ספציפיים לאתר, תוך שמירה על מידה רבה את הארכיטקטורה המקורית של הפיגום. עד כה, גישה זו נוצלה במגוון רחב של מערכות איברים, כוללת לב, ריאות, הכבד ו1-5. שיטות decellularization קודמות לרקמות ללא רשת כלי דם נגישה הסתמכו על חשיפה ממושכת של רקמות לפתרונות של חומרי ניקוי, חומצות, או טיפולים אנזימטיים כאמצעי כדי להסיר את הרכיבים הסלולריים וגרעיניים מהסביבה התאית 6-8. עם זאת, היעילות של שיטות אלה תלויים על יכולתו של את הפתרונים לחלחל רקמות באמצעות דיפוזיה. לעומת זאת, טפטוף של איברים דרך מערכת כלי הדם הטבעית ביעילות מצמצם את מרחק דיפוזיה ותחבורת הנחייתם של decellularizatiעל סוכנים לרקמה והמרכיבים תאיים מהרקמות. בזאת, אנו מתארים שיטה לdecellularize לב חזירי שלם מלא דרך זלוף המדרדר כלילית. הפרוטוקול הניב decellularized מלוא לב תאי מטריצה ​​(c-ECM) פיגום עם המבנה תלת הממדים של הלב השלם. השיטה שלנו השתמשה בסדרה של אנזימים, חומרי ניקוי, וחומצות בשילוב עם שטיפות hypertonic וhypotonic לסייע בתמוגה וההסרה של תאים. הפרוטוקול המשמש פתרון טריפסין לנתק את התאים מהמטריצה ​​אחרי Triton פתרוני X-100 ונתרן deoxycholate כדי לסייע בהסרה של חומר תאי. הפרוטוקול המתואר משתמש גם במהירויות של יותר מ זלוף 2 ליטר / דקה לפרקי זמן ארוכים. קצב הזרימה הגבוהה, בשילוב עם שינויי פתרון נתן הובלה של סוכנים לרקמות ללא זיהום של פסולת תאית והבטיח יעיל שטיפה של הרקמות. השיטה המתוארת הסירה את כל החומר גרעיני מנתיve רקמת לב חזירית, יצירת לב ECM פיגום באתר ספציפי שיכול לשמש למגוון רחב של יישומים.

ההשפעה של decellularization על לב חזירי שלם באופן טבעי משתנית בהתאם להבדלים בגודל, לחצים, וסידור כלי. לכן, את ההרכב המדויק של הפיגומים התאיים מטריקס הנגזרים לא יהיה אותו הדבר מלב אל לב. השלמת הפרוטוקול המתואר תניב לב שמופיע לבן או שקוף, המציין את האובדן של חומר תאי. עם זאת, מקובל כי רקמה יכולה להיחשב &quot;decellularized&quot;, המבוסס על שילוב של מספר פרמטרים כמותיים יותר 8. פרוטוקול decellularization מוצלח יהיה לייצר מטריצה ​​עם פחות מ 50 ng של גדילי הדנ&quot;א כפול למ&quot;ג של רקמות (איור 6). על מנת להימנע מתגובה חיסונית מארחת על השתלה של מטריקס, את ה-DNA שנותר צריך להכיל גם פחות מ 200 זוגות בסיסים (איור 7). כדי לאשר את הממצאים הללו, ומכתימים Hematoxylin Eosin צריך לחשוף את ההיעדר גרעיניהכתמה בסעיפים מייצגים של חדרי לב ומחץ חדרית (איור 8). Trichrome של מסון נוסף מאשר את האובדן של חבילות שריר לב ושמירה של רשתות קולגן (איור 9). <img src="/files/ftp_upload/50059/50059fig1.jpg" alt="איור 1"/> איור 1. סוף התיל של הצינור מוחדר לעורק הראשי של לב הילידים. הצינורות חייבים להיות מאובטחים עם מהדק צינור או קשרי zip מעל שסתום אב העורקים כדי להבטיח זלוף דרך העורקים הכליליים. <img src="/files/ftp_upload/50059/50059fig2.jpg" alt="איור 2"/> איור 2. הלב הוא שקוע במים בכוס 4L ובועות אוויר יש להסיר מן הצינורות. אם בועות הם נצפו יוצאים מאב העורקים בסמוך לצינורות, קשרים נוספים חייבים לשמש כדי לאבטח את הצינור לt<html> הוא אב עורקים כדי לשמור על לחץ מתאים ברקמות. <img src="/files/ftp_upload/50059/50059fig3.jpg" alt="איור 3"/> איור 3. כמו פתרוני perfused דרך העורקים הכליליים, הלב מאבד את הצבע המקורי שלו, ומתקדם מהאטרייה לשיא של לב והמקומי סביב התקפי לב. <img src="/files/ftp_upload/50059/50059fig4.jpg" alt="איור 4"/> איור 4. לאחר סיום החיטוי ושטיפת מדרגות הפרוטוקול, צינורות מוסר והלב מונח על משטח סופג כדי לאפשר למים העודפים לניקוז מתוך הלב. הדבר מבטיח מדידה מדויקת כאשר משקל הרקמה וגם מאפשר לרקמות כדי להירגע לפני החתך. &quot;Alt =&quot; עמ &#39;איור 5 &quot;/&gt; איור 5. חדר השמאלי (LV) מחדר ימין (RV), והמחיצה חדרית כל יוסר מלב decellularized לעיבוד, הקפאה היסטולוגית וlyophilization, וכימות DNA. <img src="/files/ftp_upload/50059/50059fig6.jpg" alt="איור 6" fo:content-width="4.5in" fo:src="/files/ftp_upload/50059/50059fig6highres.jpg"/> איור 6. ניתוח כמותי של תוכן דנ&quot;א באמצעות assay גרין פיק. חדרי הלב מלב cECM מראים ירידה משמעותית בתוכן ה-DNA בהשוואה לחדרי לב ילידים. ערכי DNA שנצפו מפרוטוקול זה נצפה באו מתחת לרמת 50 ng / מ&quot;ג לרקמות decellularized. <img src="/files/ftp_upload/50059/50059fig7.jpg" alt="איור 7"/> איור 7. גודל קטע DNA, כפי שנקבע על ידי ethidiuמ &#39;רומיד ג&#39;ל, הראה DNA שיורים קטן בחדרי לב decellularized בהשוואה למטריצת שלפוחית ​​שתן (UBM) סטנדרטית. <img src="/files/ftp_upload/50059/50059fig8.jpg" alt="איור 8" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/50059/50059fig8highres.jpg"/> האיור 8. Hematoxylin ומכתים Eosin הראו הסרה מלאה של חומר גרעיני מחדרי הלב לאחר השלמת פרוטוקול decellularization. <img src="/files/ftp_upload/50059/50059fig9.jpg" alt="איור 9" fo:content-width="3in" fo:src="/files/ftp_upload/50059/50059fig9highres.jpg"/> איור 9. מכתימים Trichrome של מסון של) B) חדר לב decellularized יליד ו.

Watch this Scientific Journal Video about Procedure for Decellularization of Porcine Heart by Retrograde Coronary Perfusion at JoVE.com

Procedure for Decellularization of Porcine Heart by Retrograde Coronary Perfusion

שיטת מהירות לחלוטין להסיר רכיבים סלולריים מלב חזירי שלם באמצעות זלוף המדרדר מתוארת. שיטה זו מניבה מטריצת אתר פיגום תאי לבבי ספציפי שבו יש פוטנציאל לשימוש ביישומים קליניים מרובים.

נוהל Decellularization של לב חזירי ידי זלוף כלילית המדרדר

Perfusion-based  whole organ decellularization has recently gained interest in the field of  tissue engineering as a means to create site-specific ...

procedure-for-decellularization-porcine-heart-retrograde-coronary

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Bioengineering

23.8K Views.  McGowan Institute for Regenerative Medicine. שיטת מהירות לחלוטין להסיר רכיבים סלולריים מלב חזירי שלם באמצעות זלוף המדרדר מתוארת. שיטה זו מניבה מטריצת אתר פיגום תאי לבבי ספציפי שבו יש פוטנציאל לשימוש ביישומים קליניים מרובים.

Video: Procedure for Decellularization of Porcine Heart by Retrograde Coronary Perfusion

Decellularization and Recellularization of Whole Livers

The liver is a complex organ which requires constant perfusion for delivery of nutrients and oxygen and removal of waste in order to survive1. Efforts to recreate or mimic the liver microstructure with grounds up approach using tissue engineering and microfabrication techniques have not been successful so far due to this design challenge. In addition, synthetic biomaterials used to create scaffolds for liver tissue engineering applications have been limited in inducing tissue regeneration and repair in large part due to the lack of specific cell binding motifs that would induce the proper cell functions2. Decellularized native tissues such blood vessels3and skin4on the other hand have found many applications in tissue engineering, and have provided a practical solution to some of the challenges. The advantage of decellularized native matrix is that it retains, to an extent, the original composition, and the microstructure, hence enhancing cell attachment and reorganization5.
In this work we describe the methods to perform perfusion-decellularization of the liver, such that an intact liver bioscaffold that retains the structure of major blood vessels is obtained. Further, we describe methods to recellularize these bioscaffolds with adult primary hepatocytes, creating a liver graft that is functional in vitro, and has the vessel access necessary for transplantation in vivo.

Perfusion decellularization is a novel technique to produce whole liver scaffolds that retains the organ's extracellular matrix composition and microarchitecture. Herein, the method of preparing whole organ scaffolds using perfusion decellularization and subsequent repopulation with hepatocytes is described. Functional and transplantable liver grafts can be generated using this technique.

Decellularization ו Recellularization של כבדים שלמים

The liver is a complex organ which requires constant perfusion for delivery of nutrients and oxygen and removal of waste in order to survive1. Efforts to ...

Procedure for Lung Engineering

Lung tissue, including lung cancer and chronic lung diseases such as chronic obstructive pulmonary disease, cumulatively account for some 280,000 deaths annually; chronic obstructive pulmonary disease is currently the fourth leading cause of death in the United States1. Contributing to this mortality is the fact that lungs do not generally repair or regenerate beyond the microscopic, cellular level. Therefore, lung tissue that is damaged by degeneration or infection, or lung tissue that is surgically resected is not functionally replaced in vivo. To explore whether lung tissue can be generated in vitro, we treated lungs from adult rats using a procedure that removes cellular components to produce an acellular lung extracellular matrix scaffold. This scaffold retains the hierarchical branching structures of airways and vasculature, as well as a largely intact basement membrane, which comprises collagen IV, laminin, and fibronectin. The scaffold is mounted in a bioreactor designed to mimic critical aspects of lung physiology, such as negative pressure ventilation and pulsatile vascular perfusion. By culturing pulmonary epithelium and vascular endothelium within the bioreactor-mounted scaffold, we are able to generate lung tissue that is phenotypically comparable to native lung tissue and that is able to participate in gas exchange for short time intervals (45-120 minutes). These results are encouraging, and suggest that repopulation of lung matrix is a viable strategy for lung regeneration. This possibility presents an opportunity not only to work toward increasing the supply of lung tissue for transplantation, but also to study respiratory cell and molecular biology in vitro for longer time periods and in a more accurate microenvironment than has previously been possible.

We have developed a decellularized lung extracellular matrix and novel biomimetic bioreactor that can be used to generate functional lung tissue. By seeding cells into the matrix and culturing in the bioreactor, we generate tissue that demonstrates effective gas exchange when transplanted in vivo for short periods of time.

נוהל הנדסה ריאות

Lung tissue, including lung cancer and chronic lung diseases such as chronic obstructive pulmonary disease, cumulatively account for some 280,000 deaths ...

A Decellularization Methodology for the Production of a Natural Acellular Intestinal Matrix

Successful tissue engineering involves the combination of scaffolds with appropriate cells in vitro or in vivo. Scaffolds may be synthetic, naturally-derived or derived from tissues/organs. The latter are obtained using a technique called decellularization. Decellularization may involve a combination of physical, chemical, and enzymatic methods. The goal of this technique is to remove all cellular traces whilst maintaining the macro- and micro-architecture of the original tissue.
Intestinal tissue engineering has thus far used relatively simple scaffolds that do not replicate the complex architecture of the native organ. The focus of this paper is to describe an efficient decellularization technique for rat small intestine. The isolation of the small intestine so as to ensure the maintenance of a vascular connection is described. The combination of chemical and enzymatic solutions to remove the cells whilst preserving the villus-crypt axis in the luminal aspect of the scaffold is also set out. Finally, assessment of produced scaffolds for appropriate characteristics is discussed.

The article describes a methodology for the production of an acellular matrix from rat intestine. The derivation of intestinal scaffolds is important for future applications in tissue engineering, stem cell biology and drug testing.

Decellularization מתודולוגיה לייצור של המעיים מטריקס הטבעי acellular

Successful tissue engineering involves the  combination of scaffolds with appropriate cells in vitro or in vivo.  Scaffolds may be synthetic, ...

Nonhuman Primate Lung Decellularization and Recellularization Using a Specialized Large-organ Bioreactor

There are an insufficient number of lungs available to meet current and future organ transplantation needs. Bioartificial tissue regeneration is an attractive alternative to classic organ transplantation. This technology utilizes an organ&#39;s natural biological extracellular matrix (ECM) as a scaffold onto which autologous or stem/progenitor cells may be seeded and cultured in such a way that facilitates regeneration of the original tissue. The natural ECM is isolated by a process called decellularization. Decellularization is accomplished by treating tissues with a series of detergents, salts, and enzymes to achieve effective removal of cellular material while leaving the ECM intact. Studies conducted utilizing decellularization and subsequent recellularization of rodent lungs demonstrated marginal success in generating pulmonary-like tissue which is capable of gas exchange in vivo. While offering essential proof-of-concept, rodent models are not directly translatable to human use. Nonhuman primates (NHP) offer a more suitable model in which to investigate the use of bioartificial organ production for eventual clinical use.
The protocols for achieving complete decellularization of lungs acquired from the NHP rhesus macaque are presented. The resulting acellular lungs can be seeded with a variety of cells including mesenchymal stem cells and endothelial cells. The manuscript also describes the development of a bioreactor system in which cell-seeded macaque lungs can be cultured under conditions of mechanical stretch and strain provided by negative pressure ventilation as well as pulsatile perfusion through the vasculature; these forces are known to direct differentiation along pulmonary and endothelial lineages, respectively. Representative results of decellularization and cell seeding are provided.

Whole-organ decellularization produces natural biological scaffolds that may be used for regenerative medicine. The description of a nonhuman primate model of lung regeneration in which whole lungs are decellularized and then seeded with adult stem cells and endothelial cells in a bioreactor that facilitates vascular circulation and liquid media ventilation is presented.

There are an insufficient number of lungs available to meet current and future organ transplantation needs. Bioartificial tissue regeneration is an ...

Procedure for Decellularization of Rat Livers in an Oscillating-pressure Perfusion Device

Decellularization and recellularization of parenchymal organs may enable the generation of functional organs in vitro, and several protocols for rodent liver decellularization have already been published. We aimed to improve the decellularization process by construction of a proprietary perfusion device enabling selective perfusion via the portal vein and/or the hepatic artery. Furthermore, we sought to perform perfusion under oscillating surrounding pressure conditions to improve the homogeneity of decellularization. The homogeneity of perfusion decellularization has been an underestimated factor to date. During decellularization, areas within the organ that are poorly perfused may still contain cells, whereas the extracellular matrix (ECM) in well-perfused areas may already be affected by alkaline detergents. Oscillating pressure changes can mimic the intraabdominal pressure changes that occur during respiration to optimize microperfusion inside the liver. In the study presented here, decellularized rat liver matrices were analyzed by histological staining, DNA content analysis and corrosion casting. Perfusion via the hepatic artery showed more homogenous results than portal venous perfusion did. The application of oscillating pressure conditions improved the effectiveness of perfusion decellularization. Livers perfused via the hepatic artery and under oscillating pressure conditions showed the best results. The presented techniques for liver harvesting, cannulation and perfusion using our proprietary device enable sophisticated perfusion set-ups to improve decellularization and recellularization experiments in rat livers.

The presented techniques for liver harvesting, cannulation and perfusion using our proprietary device enable sophisticated perfusion set-ups to improve decellularization and recellularization experiments in rat livers.

נוהל Decellularization של כבדי עכברוש בהתקן זלוף נדנוד לחץ

Decellularization and recellularization of parenchymal organs may enable the generation of functional organs in vitro, and several protocols for rodent ...

Two Methods for Decellularization of Plant Tissues for Tissue Engineering Applications

The autologous, synthetic, and animal-derived grafts currently used as scaffolds for tissue replacement have limitations due to low availability, poor biocompatibility, and cost. Plant tissues have favorable characteristics that make them uniquely suited for use as scaffolds, such as high surface area, excellent water transport and retention, interconnected porosity, preexisting vascular networks, and a wide range of mechanical properties. Two successful methods of plant decellularization for tissue engineering applications are described here. The first method is based on detergent baths to remove cellular matter, which is similar to previously established methods used to clear mammalian tissues. The second is a detergent-free method adapted from a protocol that isolates leaf vasculature and involves the use of a heated bleach and salt bath to clear the leaves and stems. Both methods yield scaffolds with comparable mechanical properties and low cellular metabolic impact, thus allowing the user to select the protocol which better suits their intended application.

Here we present, and contrast two protocols used to decellularize plant tissues: a detergent-based approach and a detergent-free approach. Both methods leave behind the extracellular matrix of the plant tissues used, which can then be utilized as scaffolds for tissue engineering applications.

שתי שיטות Decellularization של רקמות הצמח ליישומים הנדסת רקמות

The autologous, synthetic, and animal-derived grafts currently used as scaffolds for tissue replacement have limitations due to low availability, poor ...

Decellularization and Recellularization Methodology for Human Saphenous Veins

Vascular conduits used during most vascular surgeries are allogeneic or synthetic grafts that often lead to complications caused by immunosuppression and poor patency. Tissue engineering offers a novel solution to generate personalized grafts with a natural extracellular matrix containing the recipient&#39;s cells using the method of decellularization and recellularization. We show a detailed method for performing decellularization of the human saphenous vein and recellularization by perfusion of peripheral blood. The vein was decellularized by perfusing 1% Triton X-100, 1% tri-n-butyl-phosphate (TnBP) and 2,000 Kunitz units of deoxyribonuclease (DNase). Triton X-100 and TnBP were perfused at 35 mL/min for 4 h while DNase was perfused at 10 mL/min at 37 &#176;C for 4 h. The vein was washed in ultrapure water and PBS and then sterilized in 0.1% peracetic acid. It was washed again in PBS and preconditioned in endothelial medium. The vein was connected to a bioreactor and perfused with endothelial medium containing 50 IU/mL heparin for 1 h. Recellularization was performed by filling the bioreactor with fresh blood, diluted 1:1 in Steen solution, and adding endocrine gland-derived vascular endothelial growth factors (80 ng/mL), basic fibroblast growth factors (4 &#181;L/mL), and acetyl salicylic acid (5 &#181;g/mL). The bioreactor was then moved into an incubator and perfused for 48 h at 2 mL/min while maintaining glucose between 3 - 9 mmol/L. Later, the vein was washed with PBS, filled with endothelial medium and perfused for 96 h in the incubator. Treatment with Triton X-100, TnBP and DNase decellularized the saphenous vein in 5 cycles. The decellularized vein looked white in contrast to normal and recellularized veins (light red). The hematoxylin &#38; eosin (H&#38;E) staining showed the presence of nuclei only in normal but not in decellularized veins. In the recellularized vein, H&#38;E-staining showed the presence of cells on the luminal surface of the vein.

Here, we describe a protocol for the saphenous vein decellularization using detergents and recellularization by perfusion of the peripheral blood and the endothelial medium.

Decellularization ומתודולוגיה Recellularization עבור האדם הורידים saphenous גדולות

Vascular conduits used during most vascular surgeries are allogeneic or synthetic grafts that often lead to complications caused by immunosuppression and ...

Decellularization of Whole Human Heart Inside a Pressurized Pouch in an Inverted Orientation

The ultimate solution for patients with end-stage heart failure is organ transplant. But donor hearts are limited, immunosuppression is required, and ultimately rejection can occur. Creating a functional, autologous bio-artificial heart could solve these challenges. Biofabrication of a heart comprised of scaffold and cells is one option. A natural scaffold with tissue-specific composition as well as micro- and macro-architecture can be obtained by decellularizing hearts from humans or large animals such as pigs. Decellularization involves washing out cellular debris while preserving 3D extracellular matrix and vasculature and allowing &#34;cellularization&#34; at a later timepoint. Capitalizing on our novel finding that perfusion decellularization of complex organs is possible, we developed a more &#34;physiological&#34; method to decellularize non-transplantable human hearts by placing them inside a pressurized pouch, in an inverted orientation, under controlled pressure. The purpose of using a pressurized pouch is to create pressure gradients across the aortic valve to keep it closed and improve myocardial perfusion. Simultaneous assessment of flow dynamics and cellular debris removal during decellularization allowed us to monitor both fluid inflow and debris outflow, thereby generating a scaffold that can be used either for simple cardiac repair (e.g. as a patch or valve scaffold) or as a whole-organ scaffold.

This method enables decellularization of a complex solid organ using a simple protocol based on osmotic shock and perfusion of ionic detergent with minimal organ matrix disruption. It comprises a novel decellularization technique for human hearts inside a pressurized pouch with real-time monitoring of flow dynamics and cellular debris outflow.

Decellularization של הלב האנושי כולו בתוך נרתיק מווסת בכיוון הפוך

The ultimate solution for patients with end-stage heart failure is organ transplant. But donor hearts are limited, immunosuppression is required, and ...

Isolation and Decellularization of a Whole Porcine Pancreas

Tissue engineering of the whole pancreas can improve current treatments for diabetes mellitus. The ultimate goal is to tissue engineer pancreas from an allogeneic or xenogeneic source with human cells. A demonstration of methods for the efficient dissection, decellularization, and recellularization of porcine pancreas might benefit the field. Akin to human pancreases, porcine pancreases have a special anatomical arrangement with three lobes (splenic, duodenal, and connection) rounded by the duodenum and small intestine. The duodenal lobe of the pancreas connects to the duodenum by several small blood vessels. Tissue engineering of the pancreas is complicated because of its exocrine and endocrine nature. In this paper, we show a detailed protocol to dissect the whole porcine pancreas and decellularize it with detergents while saving its structure and some extracellular matrix components. To achieve complete perfusion, the aorta is chosen as inlet and the portal vein as outlet. The other blood vessels (hepatic artery, splenic vein, splenic artery,&#160;mesenteric artery and vein tree) and bile duct are ligated. To prevent the formation of thrombus, the pig is heparinized and, immediately after dissection, the organ is flushed with cold heparin. To inhibit the action of exocrine enzymes, the pancreas decellularization is set at 4 &#176;C. The decellularization is performed by perfusion of Triton X-100, sodium deoxycholate, and deoxyribonuclease, with an intermittent and final extensive washing. With a successful decellularization, the pancreas appears white, and a histological evaluation with hematoxylin and eosin shows an absence of nuclei with a preserved extracellular matrix structure. Thus, the proposed method can be used to successfully dissect and decellularize whole porcine pancreas.

Tissue engineering of the whole pancreas is a challenge because of its exocrine and endocrine functions. We show a method for the dissection of an intact porcine pancreas and the process of successful decellularization by perfusion of detergents Triton X-100, sodium deoxycholate, and deoxyribonuclease.

בידוד, Decellularization פוג'אלאדוצ'נוי זהאלאזי כל חזירי

Tissue engineering of the whole pancreas can improve current treatments for diabetes mellitus. The ultimate goal is to tissue engineer pancreas from an ...

Detection of Endotoxin in Nano-formulations Using Limulus Amoebocyte Lysate (LAL) Assays

When present in pharmaceutical products, a Gram-negative bacterial cell wall component endotoxin (often also called lipopolysaccharide) can cause inflammation, fever, hypo- or hypertension, and, in extreme cases, can lead to tissue and organ damage that may become fatal. The amounts of endotoxin in pharmaceutical products, therefore, are strictly regulated. Among the methods available for endotoxin detection and quantification, the Limulus Amoebocyte Lysate (LAL) assay is commonly used worldwide. While any pharmaceutical product can interfere with the LAL assay, nano-formulations represent a particular challenge due to their complexity. The purpose of this paper is to provide a practical guide to researchers inexperienced in estimating endotoxins in engineered nanomaterials and nanoparticle-formulated drugs. Herein, practical recommendations for performing three LAL formats including turbidity, chromogenic and gel-clot assays are discussed. These assays can be used to determine endotoxin contamination in nanotechnology-based drug products, vaccines, and adjuvants.

Detection of Endotoxin in Nano-formulations Using Limulus Amoebocyte Lysate LAL Assays

Detection of endotoxins in engineered nanomaterials represents one of the grand challenges in the field of nanomedicine. Here, we present a case study that describes the framework composed of three different LAL formats to estimate potential endotoxin contamination in nanoparticles.