עבודה זו נתמכה על ידי מענק מטעם משרד הבריאות של פנסילבניה. ד&quot;ר מיגל גרסיה Toscano היה בחור דוקטורט באוניברסיטת טמפל, שמומן על ידי אלפונסו מרטין Escudero הקרן במהלך מחקר זה. אנו רוצים להודות איליה Yordanov וקווין Kotredes לביצוע של הווידאו.

1. קשירת נקר Cecal וכן במודל של עכברים של אלח דם האדם עבור C57BL הליך זה / 6 עכברים (7-9 שבועות) משמשים. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים את העכבר על ידי הזרקת intraperitoneally פתרון של 01:01 קטמין (75mg/kg) ו xylazine (15mg/kg). כנקודת התייחסות, להזריק 30 μl של הפתרון 01:01 לעכבר במשקל 20 גרם. לחלופין, עכברים יכולים להיות מורדם עם isoflurane בשאיפה באמצעות מאדה הרדמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לגלח את הבטן של העכבר ולחטא האזור על ידי יישום הפתרון הראשון בבטאדין ואחריו מנגב עם ספוגית אלכוהול 70% (מספר 1 ברצף בתמונה למטה). Chlorhexidine יכול לשמש חיטוי אלטרנטיבה. אופציונלי: וילון סטרילי ניתן להשתמש כדי לשמור על האזור נקי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בתנאים aseptic, תרגול laparotomy 1-2 ס&quot;מ קו האמצע ולחשוף את cecum עם המעי הסמוך (2 ו -3). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Cecum היא ligated הדוק עם תפר 6.0 משי (6-0 PROLENE, 8680G, Ethicon) בבסיסו מתחת שסתום ileo-cecal, והוא מחורר פעם או פעמיים עם מחט 19-מד (4 ו - 5) על אותו בצד של cecum. שים לב את אורך cecum ligated כהגדרתו המרחק מהקצה הדיסטלי של cecum לנקודה קשירת תקבע את מידת החומרה. מרחק של&gt; 1cm מייצרת אלח דם ציון גבוה תוך מרחק של 1 ס&quot;מ ≤ מייצרת אמצע אלח דם נמוך בכיתה. כמו כן שים לב באמצעות שיטת ניקוב cecal המוצג כאן הוא שונה מן הסטנדרט ולפנים טכניקה לנקב (החדרת מחט דרך cecum). שתי השיטות אמין לייצר את התוצאה אלח דם זהה. עם זאת, חיסרון אחד של הטכניקה ולפנים היא שזה לא לאפשר שליטה על כמות הצואה extruded כאשר cecum נסחט. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Cecum אז היא לחצה בעדינות extrude כמות קטנה של צואה מאתרי ניקוב (6). Cecum הוא חזר אל חלל הצפק ואת הצפק סגור עם 6.0 התפרים משי. (7). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העור הוא סגור עם קליפים 7mm רפלקס (RS-9258, מכשירים Roboz כירורגי) או קליפים מישל הפצע (7 מ&quot;מ, RS-9270) (8). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החייאה על ידי הזרקה תת עורית עכברים 1 מ&quot;ל של תמיסת מלח מחומם מראש 0.9% באמצעות מחט 25 גרם. צעד זה החייאה נוזל יניעו את השלב hyperdynamic של אלח דם. צעד זה קריטי מתואר נוסף בסעיף הדיון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אופציונלי: להזריק תת עורי עצירות (0.05mg / משקל גוף ק&quot;ג) או tramadol (משקל הגוף 20mg/kg) על כאבים שלאחר הניתוח. שים לב לכך אופיאטים אלה יכולים לדכא את הנשימה לתנועה ואת ההשפעות הללו ניתן לפרשנות מוטעית כאילו סימנים של אלח דם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החיות ממוקמים באופן זמני על כרית חימום או לחילופין חזר מיד בכלוב עם חשיפה מנורת חימום אינפרא אדום של 150W עד שהם להתאושש מן ההרדמה. זמן ההחלמה הוא בין 30-1 דקות לשעה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מתן גישה חופשית מזון ומים (הידרוג&#39;ל) שהונחו על הקרקעית של הכלוב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עכברים מנוטרים כל 12 שעות עבור ההישרדות של שבוע עד שבועיים או מורדמים בנקודות זמן שונות לניתוח פרמטרים שונים. </li></ol> כמו לשלוט על עיצוב ניסיוני, חיות דמה יעקבו את הטכניקה laparotomy ללא קשירת ו לנקב. שש עד 12 שעות אחרי העכברים הליך כירורגי יהיה רדום ולהתפתח, piloerection חום, שלשולים, מתכרבלים, וחולשה, כל הסימפטומים של אלח דם. עכברים עם אלח דם חמור מאוד בקושי יכול לזוז לפני מותו ולהציג ירידה דרמטית בחום הגוף. בשלב זה עכברים צעד צריך להיות מורדמים, כדי למנוע סבל ממושך. <img src="/files/ftp_upload/2860/2860fig0.jpg" alt="איור 0" /> 2. פרמטרים ניתחתי שכיחים כדי להעריך את תוצאות ההליך, פרמטרים שונים ניתן לנתח באיברים, תמציות התא או נוזלי גוף. דוגמאות ניתן לאסוף בנקודות זמן שונות מ 3 שעות בשבוע אחד לאחר ההליך הכירורגי. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עכברים הישרדות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ציטוקינים ו chemokines בחלל, סרום הצפק ותמציות איברים. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Interleukin-6: הופק ושוחרר על ידי מונוציטים, תאים דנדריטיים, מקרופאגים, תאים B, ותאי T, גרנולוציטים, תאים התורן סוגי תאים רבים יותר. זה ממלא תפקיד חשוב בתגובה שלב דלקת חריפה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> גידול גורם נמק-α: ציטוקין Pleiotrophic כי תפקיד מרכזי בתהליכים דלקתיים אפופטוזיס. הופק על ידי מונוציטים, מקרופאגים, נויטרופילים, התאים הדנדריטים וגם fibroblasts. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> nterleukin-1β: הופק על ידי מונוציטים, תאים NK, תאים דנדריטים, תאים B ותאי T. גורם חום חריפה סינתזה חלבון שלב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אינטרלויקין 10: מקדם ספיגת phagocytic ותגובות Th2 אבל מדכא antigen מצגת Th1 תגובות מעודדי דלקת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אינטרלויקין 10: מקדם ספיגת phagocytic ותגובות Th2 אבל מדכא מצגת אנטיגן ואת Th1 תגובות מעודדי דלקת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מונוציטים chemotactic חלבון-1 (הידוע גם בשם CCL2): מגייסת ומונוציטים, תאים T זיכרון, תאים דנדריטים לאתרים של פגיעה ברקמות זיהום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> KC (CXCL1): הופק על ידי מקרופאגים ותאי האנדותל. עכבר KC הוא attractant נויטרופילים חזק activator. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> RANTES: chemoattractant מונוציטים. זה יכול chemoattract unstimulated CD4 + / CD45RO + T זיכרון תאים מסוג CD4 + ו מגורה CD8 + T תאים עם יש na ו פנוטיפים זיכרון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אינטרפרון-γ: מופרש על ידי תאים Th1, ותאי T ציטוטוקסיים, תאים דנדריטים טבעי (NK) תאים הרוצח. מגביר מצגת אנטיגן ופעילות ממס ב מקרופאגים ומדכא פעילות התא Th2. מקדם הדבקה ומחייבת נדרש הגירה ליקוציט ומקדמת פעילות התא NK. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ניידות גבוהה מקבוצה B-1 חלבון: ב מונוציטים הוא גורם גרעינית activator kappa B באמצעות קשירה לקולטן התאי glycation לקדם מוצרי קצה (בכעס), הפעלת את שחרורם של מתווכים מעודדי דלקת בשלב מאוחר של אלח דם. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Myeloperoxidase נחישות באיברים כאמצעי של חדירת נויטרופילים. Myeloperoxidase (MPO) הוא האנזים peroxidase ביותר כיום בשפע גרנולוציטים נויטרופילים. זהו חלבון lysosomal מאוחסנים גרגרי azurophilic של נויטרופילים. MPO יש פיגמנט heme, מה שגורם הצבע הירוק שלה בהפרשות עשיר נויטרופילים, כמו מוגלה כמה צורות של ריר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חיידקים לטעון איברים זרם דם, למדוד כמספר המושבה הקמת יחידות למיליליטר. </li></ol> 3. נציג תוצאות ההליך CLP בוצעה תחילה זן C57BL / 6 העכבר. בדקנו מספר פרמטרים לווסת את חומרת אלח דם על ידי שינוי אורך של קשירת ועובי המחט כפי שמוצג איורים 1 ו -2. בין שני הגורמים הללו, אורכו של קשירת נראה להיות יעיל יותר מאשר עובי המחט לשנות את אחוז ההישרדות. כפי שניתן לראות בתרשים 1, להגדיל את אורך של קשירת על ידי יותר מ 1cm מעורר עלייה בתמותה של 100% בהשוואה לעכברים שיש קשירת של ≤ 1cm. הגדלת עובי המחט גם ירד אחוז ההישרדות מ -100% (באמצעות מחט 22g) ל -55% (באמצעות מחט 19G) ובה שני חורים. כמו כן, אנו נבחן את ההשפעה של CLP על C57BL / 6 129SvJ עכברים כדי לקבוע אם העכבר זנים שונים להציג רגישות דומה או ברורים אלח דם CLP-Induced. איור 3 מראה כי בתנאים זהים, עכברים 129SvJ היו רגישים יותר זיהום מאשר C57BL / 6, שמסומן על ידי אחוז תמותה מוגברת. <img src="/files/ftp_upload/2860/2860fig1.jpg" alt="איור 1" /> באיור 1. השפעת אורך של קשירת cecum בהישרדות של בעלי חיים. CLP בוצעה C57BL / 6 עכברים באמצעות שני אורכים שונים של קשירת cecal. זה פרמטר אחד משפיעה באופן דרמטי מאז הישרדות בעלי חיים כל בעלי החיים בקבוצה עם שטח קשירת יותר מ 1 ס&quot;מ מתו פחות מ 3 ימים בהשוואה לקבוצה של בעלי חיים באזור בעל קשירת של כ 1 ס&quot;מ. (N = 8). <img src="/files/ftp_upload/2860/2860fig2.jpg" alt="איור 2" /> איור 2. השפעת עובי המחט על הישרדות. CLP בוצעה C57BL / 6 בעכברים באמצעות מחט בשני גדלים שונים, 19G ו - 22g. עכברים עם cecum מחורר באמצעות מחט 19G הראו הישרדות 55-60%. לעומת זאת, בעכברים עם cecum מחורר באמצעות מחט 22g הראו הישרדות של 100% למרות שהם חוו תסמינים אופייניים של דלקת בימים 3-4 הראשון, אשר נעלם לאחר 4 ימים (n = 8). <img src="/files/ftp_upload/2860/2860fig3.jpg" alt="איור 3" /> איור 3. השוואה בין הרגישות אלח דם בין שני זנים שונים העכבר. המודל CLP בוצעה 129SvJ C57BL ו / 6, בתנאים זהים. בתום תקופת ההערכה הישרדות אחוז המתח 129SvJ היה 25% פחות מאשר זן C57BL / 6, המציין רגישות גבוהה יותר לדלקת הנגרמת על ידי זיהום polymicrobial. (N = 6).

<ol>
	<li>Angus, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology+of+severe+sepsis+in+the+United+States:+analysis+of+incidence,+outcome,+and+associated+costs+of+care.">Epidemiology of severe sepsis in the United States: analysis of incidence, outcome, and associated costs of care.</a> Crit Care Med. 29, 1303-1310 (2001).</li><li>Riedemann, N. C., Guo, R. F., Ward, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+enigma+of+sepsis.">The enigma of sepsis.</a> J Clin Invest. 112, 460-467 (2003).</li><li>Eichacker, P. Q., Gerstenberger, E. P., Banks, S. M., Cui, X., Natanson, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Meta-analysis+of+acute+lung+injury+and+acute+respiratory+distress+syndrome+trials+testing+low+tidal+volumes.">Meta-analysis of acute lung injury and acute respiratory distress syndrome trials testing low tidal volumes.</a> Am J Respir Crit Care Med. 166, 1510-1514 (2002).</li><li>Buras, J. A., Holzmann, B., Sitkovsky, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+sepsis:+setting+the+stage.">Animal models of sepsis: setting the stage.</a> Nat Rev Drug Discov. 4, 854-865 (2005).</li><li>Doi, K., Leelahavanichkul, A., Yuen, P. S., Star, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+sepsis+and+sepsis-induced+kidney+injury.">Animal models of sepsis and sepsis-induced kidney injury.</a> J Clin Invest. 119, 2868-2878 (2009).</li><li>Godshall, C. J., Scott, M. J., Peyton, J. C., Gardner, S. A., Cheadle, W. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+background+determines+susceptibility+during+murine+septic+peritonitis.">Genetic background determines susceptibility during murine septic peritonitis.</a> J Surg Res. 102, 45-49 (2002).</li><li>De Maio, A., Torres, M. B., Reeves, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+determinants+influencing+the+response+to+injury,+inflammation,+and+sepsis.">Genetic determinants influencing the response to injury, inflammation, and sepsis.</a> Shock. 23, 11-17 (2005).</li><li>Diodato, M. D., Knoferl, M. W., Schwacha, M. G., Bland, K. I., Chaudry, I. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gender+differences+in+the+inflammatory+response+and+survival+following+haemorrhage+and+subsequent+sepsis.">Gender differences in the inflammatory response and survival following haemorrhage and subsequent sepsis.</a> Cytokine. 14, 162-169 (2001).</li><li>Turnbull, I. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+age+on+mortality+and+antibiotic+efficacy+in+cecal+ligation+and+puncture.">Effects of age on mortality and antibiotic efficacy in cecal ligation and puncture.</a> Shock. 19, 310-313 (2003).</li><li>Miyaji, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ethyl+pyruvate+decreases+sepsis-induced+acute+renal+failure+and+multiple+organ+damage+in+aged+mice.">Ethyl pyruvate decreases sepsis-induced acute renal failure and multiple organ damage in aged mice.</a> Kidney Int. 64, 1620-1631 (2003).</li><li>Torres, M. B., De Maio, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+exaggerated+inflammatory+response+after+CLP+correlates+with+a+negative+outcome.">An exaggerated inflammatory response after CLP correlates with a negative outcome.</a> J Surg Res. 125, 88-93 (2005).</li><li>Doi, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=AP214,+an+analogue+of+alpha-melanocyte-stimulating+hormone,+ameliorates+sepsis-induced+acute+kidney+injury+and+mortality.">AP214, an analogue of alpha-melanocyte-stimulating hormone, ameliorates sepsis-induced acute kidney injury and mortality.</a> Kidney Int. 73, 1266-1274 (2008).</li><li>Wilson, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluid+resuscitation+attenuates+early+cytokine+mRNA+expression+after+peritonitis.">Fluid resuscitation attenuates early cytokine mRNA expression after peritonitis.</a> J Trauma. 41, 622-627 (1996).</li><li>Zanotti-Cavazzoni, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluid+resuscitation+influences+cardiovascular+performance+and+mortality+in+a+murine+model+of+sepsis.">Fluid resuscitation influences cardiovascular performance and mortality in a murine model of sepsis.</a> Intensive Care Med. 35, 748-754 (2009).</li><li>Hugunin, K. M., Fry, C., Shuster, K., Nemzek, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+tramadol+and+buprenorphine+on+select+immunologic+factors+in+a+cecal+ligation+and+puncture+model.">Effects of tramadol and buprenorphine on select immunologic factors in a cecal ligation and puncture model.</a> Shock. 34, 250-260 (2010).</li></ol>

אין ניגודי אינטרסים הכריז.<br /&gt; ניסויים בבעלי חיים בוצעו בהתאם המכון הלאומי מדריך הבריאות טיפול ושימוש בחיות מעבדה, ואושר על ידי טיפול בבעלי חיים ועדה להשתמש באוניברסיטת טמפל.

כאן אנחנו מראים בפירוט כיצד לבצע את מודל CLP בעכברים לווסת את כיתה של חומרה. בהשוואה במודלים של בעלי חיים אחרים של אלח דם, CLP ניתן לבצע כל זן של העכבר גיל, מין שונות. זהו הליך ניתוחי קל יחסית ולא יקר. במודל זה, הציון של חומרה יש השפעה ישירה על אחוז ההישרדות. אורכו של קשירת, עובי המחט ומספר דקירות פרמטרים שניתן לשלוט לווסת את חומרת / תמותה של CLP. כתוצאה מכך, כדי להשיג שינויים דרמטיים חומרת CLP, המשתמש יכול לשנות את אורכו של קשירת תוך שינוי קל חומרת יכול להיות מוצג על ידי התאמת עובי המחט. פרמטרים חשובים נוספים שיכולים להציג שונות ניכרת בתוצאות CLP הם זן עכבר 6,7, 8 מין וגיל של החיה 9. בהקשר זה אנו מראים כי זנים שונים בעכבר להציג רגישויות שונות הנוהל כאשר היא מבוצעת תחת אותם תנאים. ואכן, ההבדלים ברמות ציטוקינים פלזמה נזק לרקמות זוהו בין זנים שונים העכבר 10-12. הכללה של החייאה נוזלים הממשל משכך כאבים הם גורמים שיכולים להציג את השתנות משמעותית במודל CLP. למשל, החייאה נוזל מגדילה שיעור ההישרדות ככל הנראה על ידי צמצום הייצור של ציטוקינים דלקתיים הפרו מוקדם 11, 13, 14 ובכך מסווה את ההשפעה של התערבויות טיפוליות פוטנציאליים. לעומת זאת, משככי כאבים נרקוטיים יכולים לדכא את הנשימה לתנועה בתוך החיה לעורר השפעה בלתי הפיך שאינו קשור אלח דם. השימוש שלהם, ולכן יכולים להשפיע על שיעור ההישרדות ותפקוד התא החיסונית 15. לסיכום, בעת ביצוע המודל CLP כל התנאים הללו ואת הפרמטרים הטכניים יש לשקול בזהירות על מנת להשיג תוצאות לשחזור ועקבית. לכן, ידע ושליטה עמוקה של ההליך יש צורך בהחלט לבצע את דגם CLP במדויק.

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><th> שם מגיב </th><th> חברה </th><th> מספר קטלוגי </th><th> תגובות </th></tr><tr><td> קטמין </td><td> Ketaset </td><td> 0856-2013-01 </td><td></td></tr><tr><td> Xylazine </td><td> AnaSed </td><td> נדא # 139-236 </td><td></td></tr><tr><td> מזרק אינסולין 29G </td><td> אקסל </td><td> 26028 </td><td></td></tr><tr><td> משי תפר, 6-0 PROLENE </td><td> Ethicon </td><td> 8680G </td><td></td></tr><tr><td> 19G ו 25 גרם מחט </td><td> BD </td><td> 305186 </td><td></td></tr><tr><td> מגלח </td><td> כללי ההיצע </td><td> כללי ההיצע </td><td></td></tr><tr><td> מנורת חימום אינפרא אדום </td><td> כללי ההיצע </td><td> כללי ההיצע </td><td></td></tr><tr><td> מישל פצע קליפים 7mm </td><td> Roboz כירורגי InStr </td><td> RS-9270 </td><td></td></tr><tr><td> האוזן מסכת Loop </td><td> פישר סיינטיפיק </td><td> 19-130-4181 </td><td></td></tr><tr><td> Dissection מספריים </td><td> Roboz כירורגי InStr </td><td> RS-6702 </td><td></td></tr><tr><td> בבטאדין פתרון </td><td> VWR </td><td> 63410-992 </td><td></td></tr><tr><td> כירורגי מלקחיים </td><td> Roboz כירורגי InStr </td><td> RS-5135 </td><td></td></tr><tr><td> 70% משטח איזופרופיל אלכוהול </td><td> פישר סיינטיפיק </td><td> 22-031-350 </td><td></td></tr><tr><td> עצירות </td><td> בדפורד Labs </td><td> 55390-100-10 </td><td></td></tr><tr><td> Tramadol </td><td> סיגמא אולדריץ </td><td> 42965 </td><td></td></tr></tbody></table>

cecal ligation puncture procedure

אלח דם האדם מאופיין על ידי סדרה של תגובות מערכתיות בתגובה זיהום אינטנסיבי מאסיבי שלא הצליחו להיכלל באופן מקומי על ידי המארח. נכון לעכשיו, אלח דם מדרג בין עשרת הגורמים העליון של התמותה ביחידות טיפול נמרץ ארה&quot;ב 1. במהלך אלח דם ישנם שני שלבים haemodynamic נקבע כי עשויים לחפוף. השלב הראשוני (hyperdynamic) מוגדר ייצור מסיבי של ציטוקינים מעודדי דלקת ו מינים החמצן מגיב על ידי מאקרופאגים נויטרופילים המשפיעה על החדירות של כלי הדם (המוביל תת לחץ דם), תפקוד הלב וגורם לשינויים מטבוליים שהגיעה לשיאה נמק רקמות כשל איברים. כתוצאה מכך, הגורם השכיח ביותר לתמותה היא פגיעה כליות חריפה. השלב השני (hypodynamic) הוא תהליך אנטי דלקתיות מעורבים אנטיגן שינו במצגת מונוציטים, ירידה ריבוי לימפוציטים ועל התפקוד אפופטוזיס מוגבר. מצב זה המכונה החיסון או דיכאון החיסונית בחדות מעלה את הסיכון לזיהומים nocosomial ובסופו של דבר, למוות. מנגנונים של תהליכים אלה pathophysiological לא מאופיינים היטב. מכיוון שגם השלבים של אלח דם עלול לגרום לנזק בלתי הפיך וחסר תקנה, זה הכרחי על מנת לקבוע את מעמדם החיסונית הפיזיולוגי של המטופל. זו הסיבה העיקרית מדוע תרופות טיפוליות רבות נכשלו. התרופה ניתנה אותו בשלבים שונים של אלח דם עלול להיות מזיק או טיפולית אחרת או אין השפעה 2,3. אלח דם כדי להבין ברמות שונות חשוב מאוד להיות מודל החיה מתאימה ומקיפה שמעתיק את המסלול הקליני של המחלה. חשוב לאפיין את מנגנוני pathophysiological המתרחשים במהלך אלח דם ושליטה התנאים מודל לבדיקה סוכני טיפולית פוטנציאליים. כדי לחקור את האטיולוגיה של חוקרים אלח דם האדם פיתחו מודלים של בעלי חיים שונים. המודל הקליני הנפוץ ביותר הוא קשירת לנקב cecal ו (CLP). המודל CLP מורכב ניקוב של cecum המאפשר שחרור של חומר צואתי לתוך חלל הצפק כדי לייצר תגובה חיסונית החריפה הנגרמת על ידי זיהום polymicrobial. מודל זה ממלא את המצב האנושי שהוא רלוונטי מבחינה קלינית. כמו אצל בני אדם, עכברים לעבור CLP עם החייאה נוזל להראות את השלב הראשון (מוקדם) hyperdynamic כי בזמן התקדמות לשלב (ז&quot;ל) שנית hypodynamic. בנוסף, ציטוקינים פרופיל דומה לזה לראות אלח דם האדם, שם הוא גדל אפופטוזיס הלימפוציטים (הנסקרת ב 4,5). בשל מנגנונים מרובים חופפים מעורב אלח דם, החוקרים צריכים מודל אלח דם מתאים לחומרת מבוקר כדי להשיג תוצאות עקביות לשחזור.

Watch this Scientific Journal Video about Cecal Ligation Puncture Procedure at JoVE.com

Cecal Ligation Puncture Procedure

במודל עכבר של קשירת לנקב cecal ו ככלי רב ערך לחקר אלח דם האדם.

קשירת Cecal נקר נוהל

Human sepsis is characterized by a set of systemic reactions in response to intensive and massive infection that failed to be locally contained by the ...

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Medicine

54.6K Views.  Temple University. במודל עכבר של קשירת לנקב cecal ו ככלי רב ערך לחקר אלח דם האדם.

Video: Cecal Ligation Puncture Procedure

Coronary Artery Ligation and Intramyocardial Injection in a Murine Model of Infarction

Mouse models are a valuable tool for studying acute injury and chronic remodeling of the myocardium in vivo. With the advent of genetic modifications to the whole organism or the myocardium and an array of biological and/or synthetic materials, there is great potential for any combination of these to assuage the extent of acute ischemic injury and impede the onset of heart failure pursuant to myocardial remodeling. 
Here we present the methods and materials used to reliably perform this microsurgery and the modifications involved for temporary (with reperfusion) or permanent coronary artery occlusion studies as well as intramyocardial injections. The effects on the heart that can be seen during the procedure and at the termination of the experiment in addition to histological evaluation will verify efficacy. 
Briefly, surgical preparation involves anesthetizing the mice, removing the fur on the chest, and then disinfecting the surgical area. Intratracheal intubation is achieved by transesophageal illumination using a fiber optic light. The tubing is then connected to a ventilator. An incision made on the chest exposes the pectoral muscles which will be cut to view the ribs. For ischemia/reperfusion studies, a 1 cm piece of PE tubing placed over the heart is used to tie the ligature to so that occlusion/reperfusion can be customized. For intramyocardial injections, a Hamilton syringe with sterile 30gauge beveled needle is used. When the myocardial manipulations are complete, the rib cage, the pectoral muscles, and the skin are closed sequentially. Line block analgesia is effected by 0.25% marcaine in sterile saline which is applied to muscle layer prior to closure of the skin. The mice are given a subcutaneous injection of saline and placed in a warming chamber until they are sternally recumbent. They are then returned to the vivarium and housed under standard conditions until the time of tissue collection. At the time of sacrifice, the mice are anesthetized, the heart is arrested in diastole with KCl or BDM, rinsed with saline, and immersed in fixative. Subsequently, routine procedures for processing, embedding, sectioning, and histological staining are performed. 
Nonsurgical intubation of a mouse and the microsurgical manipulations described make this a technically challenging model to learn and achieve reproducibility. These procedures, combined with the difficulty in performing consistent manipulations of the ligature for timed occlusion(s) and reperfusion or intramyocardial injections, can also affect the survival rate so optimization and consistency are critical.

Numerous genetic manipulations and/or intramyocardial injections of genes, proteins, cells, and/or biomaterials are superimposed upon the dimension of time in studies of acute ischemia/ reperfusion injury and chronic remodeling in mice. This video illustrates the microsurgical procedures for ischemia/reperfusion, permanent coronary artery ligation, and intramyocardial injection studies.

קשירת עורקים כלילית לבין הזרקת Intramyocardial ב מודל Murine של אוטם

Mouse models are a valuable tool for studying acute injury and chronic remodeling of the myocardium in vivo.  With the advent of genetic modifications to ...

The Application Of Permanent Middle Cerebral Artery Ligation in the Mouse

Focal cerebral ischemia is among the most common type of stroke seen in patients. Due to the clinical significance there has been a prolonged effort to develop suitable animal models to study the events that unfold during ischemic insult. These techniques include transient or permanent, focal or global ischemia models using many different animal models, with the most common being rodents.
The permanent MCA ligation method which is also referred as pMCAo in the literature is used extensively as a focal ischemia model in rodents 1-6. This method was originally described for rats by Tamura et al. in 1981 7. In this protocol a craniotomy was used to access the MCA and the proximal regions were occluded by electrocoagulation. The infarcts involve mostly cortical and sometimes striatal regions depending on the location of the occlusion. This technique is now well established and used in many laboratories 8-13. Early use of this technique led to the definition and description of &#x201C;infarct core&#x201D; and &#x201C;penumbra&#x201D; 14-16, and it is often used to evaluate potential neuroprotective compounds 10, 12, 13, 17. Although the initial studies were performed in rats, permanent MCA ligation has been used successfully in mice with slight modifications 18-20 .
This model yields reproducible infarcts and increased post-survival rates. Approximately 80% of the ischemic strokes in humans happen in the MCA area 21 and thus this is a very relevant model for stroke studies. Currently, there is a paucity of effective treatments available to stroke patients, and thus there is a need for good models to test potential pharmacological compounds and evaluate physiological outcomes. This method can also be used for studying intracellular hypoxia response mechanisms in vivo. 
Here, we present the MCA ligation surgery in a C57/BL6 mouse. We describe the pre-surgical preparation, MCA ligation surgery and 2,3,5 Triphenyltetrazolium chloride (TTC) staining for quantification of infarct volumes.

Middle cerebral artery (MCA) ligation is a technique to study focal cerebral ischemia in animal models. In this method, the middle cerebral artery is exposed by craniotomy and ligated by cauterization. This method gives highly reproducible infarct volumes and increased post-operative survival rates compared to other methods available.

היישום של קשירת העורקים התיכון הקבע מוחין העכבר

Focal cerebral ischemia is among the most common type of stroke seen in patients. Due to the clinical significance there has been a prolonged effort to ...

Modified Technique for Coronary Artery Ligation in Mice

Myocardial infarction (MI) is one of the most important causes of mortality in humans1-3. In order to improve morbidity and mortality in patients with MI we need better knowledge about pathophysiology of myocardial ischemia. This knowledge may be valuable to define new therapeutic targets for innovative cardiovascular therapies4. Experimental MI model in mice is an increasingly popular small-animal model in preclinical research in which MI is induced by means of permanent or temporary ligation of left coronary artery (LCA)5. In this video, we describe the step-by-step method of how to induce experimental MI in mice.
The animal is first anesthetized with 2% isoflurane. The unconscious mouse is then intubated and connected to a ventilator for artificial ventilation. The left chest is shaved and 1.5 cm incision along mid-axillary line is made in the skin. The left pectoralis major muscle is bluntly dissociated until the ribs are exposed. The muscle layers are pulled aside and fixed with an eyelid-retractor. After these preparations, left thoracotomy is performed between the third and fourth ribs in order to visualize the anterior surface of the heart and left lung. The proximal segment of LCA artery is then ligated with a 7-0 ethilon suture which typically induces an infarct size ~40% of left ventricle. At the end, the chest is closed and the animals receive postoperative analgesia (Temgesic, 0.3 mg/50 ml, ip). The animals are kept in a warm cage until spontaneous recovery.

The surgical procedure used to induce experimental myocardial infarction in mice begins with left thoracotomy between the third and the fourth ribs in order to visualize the anterior surface of the heart and left lung. The left coronary artery is ligated, the chest is closed and the mouse is allowed to recover spontaneously.

טכניקה שונה לקשירת עורקים הכליליים בעכברים

Myocardial infarction (MI) is one of the most important causes of mortality in humans1-3. In order to improve morbidity and mortality in patients with MI ...

Bile Duct Ligation in Mice: Induction of Inflammatory Liver Injury and Fibrosis by Obstructive Cholestasis

In most vertebrates, the liver produces bile that is necessary to emulsify absorbed fats and enable the digestion of lipids in the small intestine as well as to excrete bilirubin and other metabolic products. In the liver, the experimental obstruction of the extrahepatic biliary system initiates a complex cascade of pathological events that leads to cholestasis and inflammation resulting in a strong fibrotic reaction originating from the periportal fields. Therefore, surgical ligation of the common bile duct has become the most commonly used model to induce obstructive cholestatic injury in rodents and to study the molecular and cellular events that underlie these pathophysiological mechanisms induced by inappropriate bile flow. In recent years, different surgical techniques have been described that either allow reconnection or reanastomosis after bile duct ligation (BDL), e.g., partial BDL, or other microsurgical methods for specific research questions. However, the most frequently used model is the complete obstruction of the common bile duct that induces a strong fibrotic response after 21 to 28 days. The mortality rate can be high due to infectious complications or technical inaccuracies. Here we provide a detailed surgical procedure for the BDL model in mice that induce a highly reproducible fibrotic response in accordance to the 3R rule for animal welfare postulated by Russel and Burch in 1959.

Disruption of bile flow results in severe inflammatory cholestatic liver injury with a characteristic time-dependent sequence of morphological alterations. Here we present a protocol for the surgical ligation of the common bile duct in mice that allows to induce a strong fibrotic response after 21 to 28 days.

מרה Duct קשירת בעכברים: אינדוקציה של דלקת כבד פגיעה ופיברוזיס ידי חסימתית cholestasis

In most vertebrates, the liver produces bile that is necessary to emulsify absorbed fats and enable the digestion of lipids in the small intestine as well ...

Reduction of Iatrogenic Atrial Septal Defects with an Anterior and Inferior Transseptal Puncture Site when Operating the Cryoballoon Ablation Catheter

The cryoballoon catheter ablates atrial fibrillation (AF) triggers in the left atrium (LA) and pulmonary veins (PVs) via transseptal access. The typical transseptal puncture site is the fossa ovalis (FO) &#8211; the atrial septum&#8217;s thinnest section. A potentially beneficial transseptal site, for the cryoballoon, is near the inferior limbus (IL). This study examines an alternative transseptal site near the IL, which may decrease the frequency of acute iatrogenic atrial septal defect (IASD). Also, the study evaluates the acute pulmonary vein isolation (PVI) success rate utilizing the IL location. 200 patients were evaluated by retrospective chart review for acute PVI success rate with an IL transseptal site. An additional 128 IL transseptal patients were compared to 45 FO transseptal patients by performing Doppler intracardiac echocardiography (ICE) post-ablation to assess transseptal flow after removal of the transseptal sheath. After sheath removal and by Doppler ICE imaging, 42 of 128 (33%) IL transseptal patients demonstrated acute transseptal flow, while 45 of 45 (100%) FO transseptal puncture patients had acute transseptal flow. The difference in acute transseptal flow detection between FO and IL sites was statistically significant (P &#60;0.0001). Furthermore, 186 of 200 patients (with an IL transseptal puncture) did not need additional ablation(s) and had achieved an acute PVI by a &#8220;cryoballoon only&#8221; technique. An IL transseptal puncture site for cryoballoon AF ablations is an effective location to mediate PVI at all four PVs. Additionally, an IL transseptal location can lower the incidence of acute transseptal flow by Doppler ICE when compared to the FO. Potentially, the IL transseptal site may reduce later IASD complications post-cryoballoon procedures.

The goal of this study is to demonstrate the preferential location of transseptal puncture during a cryoballoon catheter ablation procedure for the treatment of atrial fibrillation.

הפחתת הפגמים iatrogenic פרוזדורים במחיצה עם קדמי ואתר Transseptal נקר נחותים בעת הפעלת Cryoballoon אבלציה הצנתר

The cryoballoon catheter ablates atrial fibrillation (AF) triggers in the left atrium (LA) and pulmonary veins (PVs) via transseptal access. The typical ...

Rat Model of the Associating Liver Partition and Portal Vein Ligation for Staged Hepatectomy (ALPPS) Procedure

Recent clinical data support an aggressive surgical approach to both primary and metastatic liver tumors. For some indications, like colorectal liver metastases, the amount of liver tissue left behind after liver resection has become the main limiting factor of resectability of large or multiple liver tumors. A minimal amount of functional tissue is required to avoid the severe complication of post-hepatectomy liver failure, which has high morbidity and mortality. Inducing liver growth of the prospective remnant prior to resection has become more established in liver surgery, either in the form of portal vein embolization by interventional radiologists or in the form of portal vein ligation several weeks prior to resection. Recently, it was shown that liver regeneration is more extensive and rapid, when the parenchymal transection is added to portal vein ligation in a first stage and then, after only one week of waiting, resection performed in a second stage (Associating Liver Partition and Portal vein ligation for Staged hepatectomy = ALPPS). ALPPS has rapidly become popular across the world, but has been criticized for its high perioperative mortality. The mechanism of accelerated and extensive growth induced by this procedure has not been well understood. Animal models have been developed to explore both the physiological and molecular mechanisms of accelerated liver regeneration in ALPPS. This protocol presents a rat model that allows mechanistic exploration of accelerated regeneration.

Rat Model of the Associating Liver Partition and Portal Vein Ligation for Staged Hepatectomy ALPPS Procedure

Inducing rapid liver hypertrophy using Associating Liver Partition and Portal vein ligation for a Staged hepatectomy (ALPPS) has been proposed for resection of borderline resectable liver tumors. This model may elucidate mechanisms involved in rapid hypertrophy and allows testing of drugs that promote or block the acceleration of regeneration.

עכברוש מודל של שיוך מחיצה בכבד, וריד שער הכבד מצדו לניתוח בשלבים Hepatectomy (ALPPS)

Recent clinical data support an aggressive surgical approach to both primary and metastatic liver tumors. For some indications, like colorectal liver ...

Puncture-Induced Iris Neovascularization as a Mouse Model of Rubeosis Iridis

We describe a model of puncture-induced iris neovascularization as a general model for noninvasive evaluation of angiogenesis. The model is also relevant for targeting neovascular glaucoma, a sight-threatening complication of diabetic retinopathy. This method is based on the induction of iris vascular response by a series of self-sealing uveal punctures on BALB/c mice and takes advantage of the postpartum maturation of mouse ocular vasculature. Mouse pups undergo uveal punctures from postnatal day 12.5, when the pups naturally open their eyes, until postnatal day 24.5. Due to the transparency of the cornea, iris vasculature can be analyzed easily through time by noninvasive in vivo methods. Furthermore, the semitransparent iris of BALB/c mice can be flatmounted for detailed immunohistologic analysis with minimal non-specific background staining. In this model, angiogenesis is mainly driven by the inflammatory and plasminogen activating systems. The puncture-induced model is the first to induce iris neovascularization in small rodents, and has the advantage of allowing direct noninvasive in vivo analysis of the angiogenic process. Moreover, the model can be combined with angiogenic modulating substances, which highlights its potential in the study of angiogenesis with an in vivo perspective.

Iris neovascularization, a common complication of ischemic retinal disease, may lead to sight-threatening neovascular glaucoma. Here, we describe a murine protocol for inducing experimental iris neovascularization that may be used for noninvasive evaluation of angiogenesis-modulating substances.

ניקוב-Induced כורוידאלית איריס כמודל העכבר של Rubeosis Iridis

We describe a model of puncture-induced iris neovascularization as a general model for noninvasive evaluation of angiogenesis. The model is also relevant ...

Subclavian Vein Puncture As an Alternative Method of Blood Sample Collection in Rats

Blood collection with enough blood volume is essential in animal experiments. Blood collection from the tail vein of rats is popular and less stressful compared to other more aggressive methods such as retro-orbital plexus sample collection. However, this blood collection method is sometimes limited by an unsatisfactory success rate. Here, we introduce a method for blood collection through the subclavian vein puncture. The subclavian vein is located just under the clavicle and this vein is large enough to fulfill the volume requirements of blood collection. Our results show that this method is safe and applicable for blood collection sampling with the required blood volume. Blood collection through the subclavian vein puncture could serve as an alternative blood collection method in case of failed tail vein blood sampling in rats.

Here, we present a protocol to collect blood samples from the rat subclavian vein.

בריחי וריד לנקב כאמצעי חלופי של איסוף דגימת דם בחולדות

Blood collection with enough blood volume is essential in animal experiments. Blood collection from the tail vein of rats is popular and less stressful ...

Blood Collection Through Subclavian Vein Puncture in Mice

The mouse is the foremost mammalian model for studying human disease and human health. However, blood sample collection from mice is challenging in research work. Tail blood collection is a popular method when a small amount of blood sample is needed. Orbital artery could be considered if a large amount of blood is needed but this blood collection method has ethical issues. Formerly, we demonstrated the feasibility and safety of blood sample collection through subclavian vein puncture in rats, and here we investigate whether this method could be used in mice. We report that this method is safe and practical for blood collection in mice. Blood collection through the subclavian vein puncture in mice can be a convenient method in daily research works.

Here, we present a protocol to take blood samples from the subclavian vein of mice.

איסוף דם באמצעות ניקוב ורידים תת-מותני בעכברים

The mouse is the foremost mammalian model for studying human disease and human health. However, blood sample collection from mice is challenging in ...

Murine Myocardial Infarction Model using Permanent Ligation of Left Anterior Descending Coronary Artery

Myocardial infarction (MI) and acute coronary diseases are among the most prominent causes of death in population with western lifestyle. The murine models of MI with permanent ligation of left-anterior descending (LAD) coronary artery closely mimics MI in humans. Murine models benefit from the extensive genetic engineering available nowadays. Here we propose a reproducible murine surgical model of myocardial infarction by permanent LAD coronary ligation. Our technique comprises anesthesia with ketamine/xylazine that can be rapidly reversed by administration of an antagonist, intubation without tracheotomy for mechanical-assisted ventilation, ventilation with application of extrinsic positive end-expiratory pressure (PEEP) to avoid alveolar collapse, a thoracotomy method limiting to the minimum surgical lesions made to skeletal muscles, and lung inflation without thoracentesis. This method is sparsely invasive, reproducible and reduces post-surgery mortality and complications.

Herein we describe a surgical procedure showing how to achieve permanent ligation of the left-anterior descending coronary artery in mice. This model is of high relevance to investigate the pathophysiology of myocardial infarction and the concomitant biological processes.

מודל אוטם שריר הלב באמצעות הארכה קבועה של עורק שמאלי קדמי כלילי יורד

Myocardial infarction (MI) and acute coronary diseases are among the most prominent causes of death in population with western lifestyle. The murine ...