وأيد هذا العمل من خلال منحة من وزارة الصحة ولاية بنسلفانيا. وكان الدكتور ميغيل غارسيا توسكانو زميل ما بعد الدكتوراه في جامعة تمبل ، الذي تموله مؤسسة ألفونسو مارتن اسكوديرو خلال هذه الدراسة. نريد ان نشكر إيليا يوردانوف وKotredes كيفن لصنع شريط الفيديو.

1. الأعور ربط والبزل نموذجا فأرة للالإنتان الإنسان لهذا الإجراء C57BL / 6 تستخدم الفئران (7-9 أسابيع من العمر). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تخدير عن طريق حقن فأر intraperitoneally حل الكيتامين 1:1 (75mg/kg) وزيلازين (15mg/kg). كمرجع ، وضخ 30 ميكرولتر من الحل في 01:01 ماوس وزنها 20 غراما. بدلا من ذلك ، يمكن أن يكون تخدير الفئران مع isoflurane استنشاق باستخدام المرذاذ مخدر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حلق البطن من الفأر وتطهير المنطقة من قبل أول حل betadine تطبيق تليها المسح مع مسحة الكحول 70 ٪ (رقم 1 في تسلسل الصورة أدناه). ويمكن استخدام الكلورهكسيدين كمطهر البديلة. اختياري : يمكن استخدام ثنى المعقمة للحفاظ على المنطقة نظيفة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحت ظروف معقمة وممارسة 1-2 البطن خط الوسط الطول وفضح الأعور مع الأمعاء المجاورة (2 و 3). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> هو ligated بإحكام الأعور مع خياطة الحرير 6.0 (6-0 PROLENE ، 8680G ؛ Ethicon) عند قاعدته دون صمام اللفائفي الأعور ، ومثقوبة مرة أو مرتين بابرة عيار 19 (4 و 5) على نفس جانب من الأعور. يرجى ملاحظة أن طول الأعور ligated يعرف بأنه المسافة من نهاية القاصية من الأعور إلى نقطة ربط وتحديد درجة شدتها. مسافة&gt; 1cm تنتج الإنتان درجة عالية بينما مسافة 1 سم ≤ تنتج منتصف إلى انخفاض درجة التعفن. نلاحظ أيضا أن استخدام أسلوب ثقب الأعور هو موضح هنا يختلف عن معيار من خلال وعبر تقنية ثقب (إدخال إبرة عبر الأعور). كلا أساليب إنتاج موثوق نتائج الإنتان نفسه. ومع ذلك ، واحدة من عيوب هذه التقنية من خلال وعبر هو أنه لا يسهل التحكم في كمية البراز مقذوف عندما محشورة في الأعور. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ومن ثم الأعور محشورة برفق لقذف كمية صغيرة من البراز من مواقع ثقب (6). يتم إرجاع الأعور إلى التجويف البريتوني وإغلاق الصفاق مع خيوط الحرير 6.0. (7). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إغلاق الجلد مع مقاطع 7mm ريفلكس (RS - 9258 ، الآلات الجراحية Roboz) أو مقاطع الجرح ميشال (7 ملم ، RS - 9270) (8). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إحياء طريق حقن تحت الجلد الفئران 1 مل من محلول ملحي قبل تحسنت بنسبة 0.9 ٪ باستخدام إبرة 25G. وهذا التدبير الانعاش السوائل تحفز مرحلة مفرط الديناميكية الإنتان. وصفت هذه الخطوة الحاسمة في المقطع مزيد من المناقشة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اختياري : حقن تحت الجلد البوبرينورفين (0.05mg / كيلوغرام من وزن الجسم) أو ترامادول (20mg/kg وزن الجسم) لتسكين بعد العملية. أخذ العلم بأن هذه المواد الأفيونية يمكن منع التنفس وتنقل ، ويمكن تفسيره هذه الآثار باعتبارها علامات التسمم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> توضع الحيوانات مؤقتا على وسادة التدفئة أو بدلا من ذلك على الفور وعاد الى قفص مع التعرض لمصباح الأشعة تحت الحمراء التدفئة 150W حتى يشفى من التخدير. الوقت التعافي من أكثر من 30 دقيقة إلى 1 ساعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> توفير حرية الوصول إلى الغذاء والماء (هيدروجيل) وضعت على الجزء السفلي من القفص. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ويتم رصد الفئران كل 12 ساعة للبقاء لمدة أسبوع أو أسبوعين أو الموت الرحيم في نقاط زمنية مختلفة لتحليل معلمات مختلفة. </li></ol> كما تحكم لتصميم تجريبي ، والحيوانات الشام اتبع أسلوب البطن دون ربط والبزل. سوف ست ساعات إلى 12 ساعة بعد العملية الجراحية الفئران تصبح السبات العميق ، وتطوير الحمى ، وانتصاب الشعر ، والإسهال ، جالسين ، والشعور بالضيق ، وكلها أعراض التسمم. يمكن أن الفئران مع التسمم الحاد جدا بالكاد تحرك قبل وفاته ويحمل الانخفاض الكبير في حرارة الجسم. وينبغي في هذه الخطوة يتم التخلص الفئران لتجنب الألم والمعاناة لفترة طويلة. <img src="/files/ftp_upload/2860/2860fig0.jpg" alt="الرقم 0" /> 2. الأكثر شيوعا معلمات حلل لتقييم نتائج هذا الإجراء ، يمكن تحليل المعلمات في الأجهزة المختلفة ، ومقتطفات الخلية أو سوائل الجسم. ويمكن جمع عينات في نقاط زمنية مختلفة في الفترة من 3 ساعات لمدة أسبوع بعد إجراء العملية الجراحية. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الفئران البقاء على قيد الحياة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> السيتوكينات وchemokines في تجويف والمصل البريتوني ومقتطفات الجهاز. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> انترلوكين 6 : إنتاج ، وصدر عن حيدات ، والخلايا الجذعية ، الضامة ، وخلايا B وخلايا T ، المحببة ، والخلايا البدينة وأنواع الخلايا غيرها الكثير. انها تلعب دورا مهما في رد فعل المرحلة الحادة والالتهابات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نخر الورم عامل α : خلوى Pleiotrophic التي تلعب دورا رئيسيا في التهاب وموت الخلايا المبرمج. التي تنتجها حيدات ، الضامة ، العدلات ، والخلايا الجذعية ، والخلايا الليفية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> nterleukin - 1β : إنتاج حيدات ، وخلايا NK ، والخلايا الجذعية ، والخلايا البائية والخلايا التائية. الحث الحمى الحادة وتخليق البروتين المرحلة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> انترلوكين 10 : يعزز امتصاص أكلة واستجابات TH2لكن العرض مستضد ويقمع TH1 ردود proinflammatory. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> انترلوكين 10 : يعزز امتصاص أكلة واستجابات TH2 لكن يقمع العرض مستضد وTH1 ردود proinflammatory. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الوحيدات الكيميائي البروتين - 1 (المعروف أيضا باسم CCL2) : المجندون حيدات ، وخلايا T الذاكرة ، والخلايا الجذعية إلى مواقع الإصابة الأنسجة والعدوى. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> KC (CXCL1) : إنتاج الضامة ، والخلايا البطانية. KC الماوس هو جاذب العدلة ومنشط قوي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> RANTES : A الوحيدات جاذب كيميائي. يمكن أن chemoattract CD4 unstimulated + / + CD45RO الخلايا التائية الذاكرة وCD4 + وحفز الخلايا التائية CD8 + مع هاء والظواهر غير متوفر الذاكرة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> انترفيرون γ : يفرزها TH1 الخلايا ، الخلايا التائية السامة للخلايا ، والخلايا الجذعية ، والخلايا القاتلة الطبيعية (NK). زيادة العرض مستضد والنشاط lytic في الضامة ، ويقمع TH2 نشاط الخلايا. وتعزز التصاق ملزمة المطلوبة للهجرة الكريات البيض ويعزز نشاط الخلايا القاتلة الطبيعية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عالية تنقل مجموعة B - 1 البروتين : وحيدات هي العامل النووي كابا بي منشط بواسطة ملزم لمستقبلات الخلوية للمنتجات مقدما نهاية glycation (الغضب) ، وتفعيل للوساطة في اطلاق سراح proinflammatory في مرحلة متأخرة من التعفن. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تقرير الميلوبيروكسيديز في الهيئات كمقياس للتسلل العدلة. الميلوبيروكسيديز (MPO) هو انزيم البيروكسيديز معظم الحاضرين بكثرة في المحببة العدلة. وهو بروتين الليزوزومية المخزنة في حبيبات أليف اللازورد من العدلات. MPO له صبغة الهيم ، والذي يسبب لونه أخضر في إفرازات غنية العدلات ، مثل القيح وبعض أشكال من المخاط. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحميل البكتيريا في مجرى الدم ، وأجهزة ، وقياس وعدد مستعمرة في الملليمتر الواحد. </li></ol> 3. ممثل النتائج في البداية تم تنفيذ الإجراء CLP في سلالة الفأر C57BL / 6. اختبرنا العديد من المعلمات لتعديل شدة الإنتان عن طريق تغيير طول وسمك ربط الإبرة كما هو موضح في الشكلين 1 و 2. من بين هذه العوامل ، وهما طول الربط يبدو أن يكون أكثر فعالية من سمك الإبرة لتغيير البقاء في المئة. كما هو مبين في الشكل (1) ، وزيادة طول الربط بأكثر من 1cm يثير زيادة في معدل الوفيات بنسبة 100 ٪ مقارنة مع الفئران من وجود ربط ≤ 1cm. زيادة سمك الإبرة انخفضت أيضا بقاء في المئة من 100 ٪ (باستخدام إبرة 22G) إلى 55 ٪ (باستخدام إبرة 19G) مع اثنين من الثقوب. اختبرنا أيضا تأثير على CLP C57BL / 6 و 129SvJ الفئران لتحديد ما إذا سلالات مختلفة الماوس حساسية مماثلة أو عرض متميز لCLP التي يسببها التسمم. الشكل 3 يوضح أنه في ظل الظروف نفسها ، وكانت الفئران 129SvJ أكثر عرضة للإصابة من C57BL / 6 ، وأشار في المئة عن طريق زيادة وفيات. <img src="/files/ftp_upload/2860/2860fig1.jpg" alt="الشكل 1" /> الشكل 1. تم تنفيذ ربط تأثير طول من الأعور في البقاء على قيد الحياة الحيوانية. CLP في C57BL / 6 الفئران باستخدام اثنين من أطوال مختلفة من ربط الأعور. هذا يؤثر بشكل كبير معلمة واحدة البقاء على قيد الحياة الحيوانية حيث أن جميع الحيوانات في المجموعة برصيد منطقة ربط أطول من 1 سم لقوا حتفهم في أقل من 3 أيام بالمقارنة مع مجموعة من الحيوانات وجود مجال للربط حوالي 1 سم. (ن = 8). <img src="/files/ftp_upload/2860/2860fig2.jpg" alt="الشكل 2" /> الشكل 2. أنجز تأثير إبرة سمك على البقاء. CLP في C57BL / 6 الفئران باستخدام إبرة بمرتين مختلفة ، و19G 22G. وأظهرت الفئران مع الأعور مثقبة باستخدام إبرة 19G البقاء على قيد الحياة 55-60 ٪. في المقابل ، أظهرت الفئران مع الأعور مثقبة باستخدام إبرة 22G البقاء على قيد الحياة بنسبة 100 ٪ على الرغم من أنهم من ذوي الخبرة تظهر عليهم اعراض الالتهاب خلال الأيام 3-4 الأولى ، التي اختفت بعد 4 أيام (ن = 8). <img src="/files/ftp_upload/2860/2860fig3.jpg" alt="الشكل 3" /> الشكل 3. المقارنة بين قابلية الإنتان سلالتين الماوس مختلفة. أنجز هذا النموذج في CLP 129SvJ وC57BL 6 / في ظل نفس الظروف. في نهاية فترة التقييم هو البقاء على قيد الحياة في المئة من سلالة 129SvJ 25 ٪ أقل مما كانت عليه في السلالة C57BL / 6 ، مما يدل على ارتفاع القابلية للالتهاب الناجم عن الإصابة متعدد المكروبات. (ن = 6).

<ol>
	<li>Angus, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology+of+severe+sepsis+in+the+United+States:+analysis+of+incidence,+outcome,+and+associated+costs+of+care.">Epidemiology of severe sepsis in the United States: analysis of incidence, outcome, and associated costs of care.</a> Crit Care Med. 29, 1303-1310 (2001).</li><li>Riedemann, N. C., Guo, R. F., Ward, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+enigma+of+sepsis.">The enigma of sepsis.</a> J Clin Invest. 112, 460-467 (2003).</li><li>Eichacker, P. Q., Gerstenberger, E. P., Banks, S. M., Cui, X., Natanson, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Meta-analysis+of+acute+lung+injury+and+acute+respiratory+distress+syndrome+trials+testing+low+tidal+volumes.">Meta-analysis of acute lung injury and acute respiratory distress syndrome trials testing low tidal volumes.</a> Am J Respir Crit Care Med. 166, 1510-1514 (2002).</li><li>Buras, J. A., Holzmann, B., Sitkovsky, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+sepsis:+setting+the+stage.">Animal models of sepsis: setting the stage.</a> Nat Rev Drug Discov. 4, 854-865 (2005).</li><li>Doi, K., Leelahavanichkul, A., Yuen, P. S., Star, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+sepsis+and+sepsis-induced+kidney+injury.">Animal models of sepsis and sepsis-induced kidney injury.</a> J Clin Invest. 119, 2868-2878 (2009).</li><li>Godshall, C. J., Scott, M. J., Peyton, J. C., Gardner, S. A., Cheadle, W. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+background+determines+susceptibility+during+murine+septic+peritonitis.">Genetic background determines susceptibility during murine septic peritonitis.</a> J Surg Res. 102, 45-49 (2002).</li><li>De Maio, A., Torres, M. B., Reeves, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+determinants+influencing+the+response+to+injury,+inflammation,+and+sepsis.">Genetic determinants influencing the response to injury, inflammation, and sepsis.</a> Shock. 23, 11-17 (2005).</li><li>Diodato, M. D., Knoferl, M. W., Schwacha, M. G., Bland, K. I., Chaudry, I. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gender+differences+in+the+inflammatory+response+and+survival+following+haemorrhage+and+subsequent+sepsis.">Gender differences in the inflammatory response and survival following haemorrhage and subsequent sepsis.</a> Cytokine. 14, 162-169 (2001).</li><li>Turnbull, I. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+age+on+mortality+and+antibiotic+efficacy+in+cecal+ligation+and+puncture.">Effects of age on mortality and antibiotic efficacy in cecal ligation and puncture.</a> Shock. 19, 310-313 (2003).</li><li>Miyaji, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ethyl+pyruvate+decreases+sepsis-induced+acute+renal+failure+and+multiple+organ+damage+in+aged+mice.">Ethyl pyruvate decreases sepsis-induced acute renal failure and multiple organ damage in aged mice.</a> Kidney Int. 64, 1620-1631 (2003).</li><li>Torres, M. B., De Maio, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+exaggerated+inflammatory+response+after+CLP+correlates+with+a+negative+outcome.">An exaggerated inflammatory response after CLP correlates with a negative outcome.</a> J Surg Res. 125, 88-93 (2005).</li><li>Doi, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=AP214,+an+analogue+of+alpha-melanocyte-stimulating+hormone,+ameliorates+sepsis-induced+acute+kidney+injury+and+mortality.">AP214, an analogue of alpha-melanocyte-stimulating hormone, ameliorates sepsis-induced acute kidney injury and mortality.</a> Kidney Int. 73, 1266-1274 (2008).</li><li>Wilson, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluid+resuscitation+attenuates+early+cytokine+mRNA+expression+after+peritonitis.">Fluid resuscitation attenuates early cytokine mRNA expression after peritonitis.</a> J Trauma. 41, 622-627 (1996).</li><li>Zanotti-Cavazzoni, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluid+resuscitation+influences+cardiovascular+performance+and+mortality+in+a+murine+model+of+sepsis.">Fluid resuscitation influences cardiovascular performance and mortality in a murine model of sepsis.</a> Intensive Care Med. 35, 748-754 (2009).</li><li>Hugunin, K. M., Fry, C., Shuster, K., Nemzek, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+tramadol+and+buprenorphine+on+select+immunologic+factors+in+a+cecal+ligation+and+puncture+model.">Effects of tramadol and buprenorphine on select immunologic factors in a cecal ligation and puncture model.</a> Shock. 34, 250-260 (2010).</li></ol>

الإعلان عن أي تضارب في المصالح.<br /وقد أجريت تجارب الحيوان&gt; وفقا للمعهد الوطني للصحة دليل لرعاية واستخدام الحيوانات المختبرية ، والتي وافقت عليها لجنة رعاية الحيوانات واستخدامها في جامعة تمبل.

هنا نعرض بالتفصيل كيفية تنفيذ نموذج CLP في الفئران وتعدل الدرجة من الشدة. بالمقارنة مع النماذج الحيوانية الأخرى الإنتان ، ويمكن أن يؤديها في أي سلالة CLP الماوس من مختلف الأعمار والجنس. فمن السهل إجراء العمليات الجراحية وغير مكلفة ?...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><th> اسم كاشف </th><th> شركة </th><th> فهرس العدد </th><th> تعليقات </th></tr><tr><td> الكيتامين </td><td> Ketaset </td><td> 0856-2013-01 </td><td></td></tr><tr><td> زيلازين </td><td> AnaSed </td><td> ندى # 139-236 </td><td></td></tr><tr><td> حقنة الانسولين 29G </td><td> إكسل </td><td> 26028 </td><td></td></tr><tr><td> خياطة الحرير و 6-0 PROLENE </td><td> Ethicon </td><td> 8680G </td><td></td></tr><tr><td> 19G 25G والإبرة </td><td> دينار بحريني </td><td> 305186 </td><td></td></tr><tr><td> صبي </td><td> العرض العام </td><td> العرض العام </td><td></td></tr><tr><td> مصباح الأشعة تحت الحمراء التدفئة </td><td> العرض العام </td><td> العرض العام </td><td></td></tr><tr><td> الجرح ميشال مقاطع 7mm </td><td> Roboz الجراحية INSTR </td><td> RS - 9270 </td><td></td></tr><tr><td> حلقة الأذن قناع </td><td> فيشر العلمية </td><td> 19-130-4181 </td><td></td></tr><tr><td> مقص تشريح </td><td> Roboz الجراحية INSTR </td><td> RS - 6702 </td><td></td></tr><tr><td> Betadine الحل </td><td> VWR </td><td> 63410-992 </td><td></td></tr><tr><td> ملقط جراحي </td><td> Roboz الجراحية INSTR </td><td> RS - 5135 </td><td></td></tr><tr><td> 70 ٪ منصة الآيزوبروبيل الكحول </td><td> فيشر العلمية </td><td> 22-031-350 </td><td></td></tr><tr><td> البوبرينورفين </td><td> بيدفورد مختبرات </td><td> 55390-100-10 </td><td></td></tr><tr><td> ترامادول </td><td> سيغما الدريخ </td><td> 42965 </td><td></td></tr></tbody></table>

cecal ligation puncture procedure

وتتميز الإنتان الإنسان من قبل مجموعة من ردود الفعل الشاملة في الاستجابة للعدوى المكثفة والواسعة النطاق التي فشلت في أن ترد محليا من قبل المضيف. حاليا ، الإنتان صفوف من بين الأسباب العشرة الأولى للوفيات في الولايات المتحدة الأمريكية وحدات الرعاية المركزة 1. خلال الإنتان هناك مرحلتين الديناميكية الدموية التي قد أنشأت التداخل. تعرف المرحلة الأولى (مفرط الديناميكية) وإنتاج هائلة من السيتوكينات proinflammatory وأنواع الاكسجين التفاعلية التي الضامة ، والتي تؤثر على العدلات نفاذية الأوعية الدموية (مما يؤدي إلى انخفاض ضغط الدم) ، وظيفة القلب ويؤدي الى تغييرات الأيضية وبلغت ذروتها في نخر الأنسجة وفشل الجهاز. وبالتالي فإن السبب الأكثر شيوعا للوفيات وإصابات حادة في الكلى. انخفض انتشار الخلايا اللمفاوية والخلايا وظيفة وزيادة في المرحلة الثانية (hypodynamic) هو عملية المضادة للالتهابات التي تنطوي على تغيير العرض مستضد الوحيدات. هذه الحالة تعرف باسم كبت المناعة أو الاكتئاب يزيد من المناعة بشدة لخطر العدوى nocosomial والموت في نهاية المطاف. ليست آليات عملية من هذه العمليات الفيزيولوجية المرضية تتميز أيضا. لأن كلا من مراحل الإنتان قد يسبب ضررا لا يمكن اصلاحه لا رجعة فيه وأنه لا بد من تحديد الحالة المناعية والفسيولوجية للمريض. هذا هو السبب الرئيسي وراء العديد من العقاقير العلاجية قد باءت بالفشل. قد يعطى الدواء نفسه في مراحل مختلفة من التعفن تكون علاجية أو الضارة أو غير ذلك ليس لها أي أثر 2،3 لفهم الإنتان على مختلف المستويات من المهم أن يكون النموذج الحيواني مناسب وشامل يعيد مسار السريرية لهذا المرض. من المهم أن تميز الآليات الفيزيولوجية المرضية التي تحدث أثناء الإنتان والتحكم في ظروف نموذجية لاختبار العوامل العلاجية المحتملة. لدراسة مسببات تسمم الإنسان من الباحثين قد وضعت نماذج حيوانية مختلفة. النموذج الأكثر استخداما السريرية هو ربط الأعور وثقب (CLP). طراز CLP يتكون من ثقب في الأعور السماح بالإفراج عن المواد البرازية في التجويف البريتوني لتوليد استجابة مناعية تتفاقم الناجم عن الإصابة متعدد المكروبات. هذا النموذج يستوفي الشرط البشري الذي هو ذات الصلة سريريا. كما هو الحال في البشر والفئران التي تتعرض CLP مع الانعاش السوائل تظهر الأول (المبكر) المرحلة مفرط الديناميكية التي تقدم في الوقت المناسب للمرحلة (الراحل) الثاني hypodynamic. بالإضافة إلى ذلك ، ملف خلوى مشابهة لتلك التي شوهدت في الإنتان البشرية حيث هناك زيادة في الخلايا اللمفاوية (4،5 في استعراض). يرجع ذلك إلى آليات متعددة ومتداخلة المشاركة في التعفن ، يحتاج الباحثون نموذجا لشدة الإنتان مناسبة للرقابة من أجل الحصول على نتائج متسقة وقابلة للتكرار.

Watch this Scientific Journal Video about Cecal Ligation Puncture Procedure at JoVE.com

Cecal Ligation Puncture Procedure

الفأر نموذج من ربط الأعور وثقب باعتبارها أداة قيمة لدراسة الإنتان الإنسان.

الأعور إجراء ربط البزل

Human sepsis is characterized by a set of systemic reactions in response to intensive and massive infection that failed to be locally contained by the ...

Research

JoVE Journal

Medicine

54.6K Views.  Temple University. الفأر نموذج من ربط الأعور وثقب باعتبارها أداة قيمة لدراسة الإنتان الإنسان.

Video: Cecal Ligation Puncture Procedure

Coronary Artery Ligation and Intramyocardial Injection in a Murine Model of Infarction

Mouse models are a valuable tool for studying acute injury and chronic remodeling of the myocardium in vivo. With the advent of genetic modifications to the whole organism or the myocardium and an array of biological and/or synthetic materials, there is great potential for any combination of these to assuage the extent of acute ischemic injury and impede the onset of heart failure pursuant to myocardial remodeling. 
Here we present the methods and materials used to reliably perform this microsurgery and the modifications involved for temporary (with reperfusion) or permanent coronary artery occlusion studies as well as intramyocardial injections. The effects on the heart that can be seen during the procedure and at the termination of the experiment in addition to histological evaluation will verify efficacy. 
Briefly, surgical preparation involves anesthetizing the mice, removing the fur on the chest, and then disinfecting the surgical area. Intratracheal intubation is achieved by transesophageal illumination using a fiber optic light. The tubing is then connected to a ventilator. An incision made on the chest exposes the pectoral muscles which will be cut to view the ribs. For ischemia/reperfusion studies, a 1 cm piece of PE tubing placed over the heart is used to tie the ligature to so that occlusion/reperfusion can be customized. For intramyocardial injections, a Hamilton syringe with sterile 30gauge beveled needle is used. When the myocardial manipulations are complete, the rib cage, the pectoral muscles, and the skin are closed sequentially. Line block analgesia is effected by 0.25% marcaine in sterile saline which is applied to muscle layer prior to closure of the skin. The mice are given a subcutaneous injection of saline and placed in a warming chamber until they are sternally recumbent. They are then returned to the vivarium and housed under standard conditions until the time of tissue collection. At the time of sacrifice, the mice are anesthetized, the heart is arrested in diastole with KCl or BDM, rinsed with saline, and immersed in fixative. Subsequently, routine procedures for processing, embedding, sectioning, and histological staining are performed. 
Nonsurgical intubation of a mouse and the microsurgical manipulations described make this a technically challenging model to learn and achieve reproducibility. These procedures, combined with the difficulty in performing consistent manipulations of the ligature for timed occlusion(s) and reperfusion or intramyocardial injections, can also affect the survival rate so optimization and consistency are critical.

Numerous genetic manipulations and/or intramyocardial injections of genes, proteins, cells, and/or biomaterials are superimposed upon the dimension of time in studies of acute ischemia/ reperfusion injury and chronic remodeling in mice. This video illustrates the microsurgical procedures for ischemia/reperfusion, permanent coronary artery ligation, and intramyocardial injection studies.

الشريان التاجي ربط Intramyocardial وحقن الفئران في نموذج من احتشاء

Mouse models are a valuable tool for studying acute injury and chronic remodeling of the myocardium in vivo.  With the advent of genetic modifications to ...

The Application Of Permanent Middle Cerebral Artery Ligation in the Mouse

Focal cerebral ischemia is among the most common type of stroke seen in patients. Due to the clinical significance there has been a prolonged effort to develop suitable animal models to study the events that unfold during ischemic insult. These techniques include transient or permanent, focal or global ischemia models using many different animal models, with the most common being rodents.
The permanent MCA ligation method which is also referred as pMCAo in the literature is used extensively as a focal ischemia model in rodents 1-6. This method was originally described for rats by Tamura et al. in 1981 7. In this protocol a craniotomy was used to access the MCA and the proximal regions were occluded by electrocoagulation. The infarcts involve mostly cortical and sometimes striatal regions depending on the location of the occlusion. This technique is now well established and used in many laboratories 8-13. Early use of this technique led to the definition and description of &#x201C;infarct core&#x201D; and &#x201C;penumbra&#x201D; 14-16, and it is often used to evaluate potential neuroprotective compounds 10, 12, 13, 17. Although the initial studies were performed in rats, permanent MCA ligation has been used successfully in mice with slight modifications 18-20 .
This model yields reproducible infarcts and increased post-survival rates. Approximately 80% of the ischemic strokes in humans happen in the MCA area 21 and thus this is a very relevant model for stroke studies. Currently, there is a paucity of effective treatments available to stroke patients, and thus there is a need for good models to test potential pharmacological compounds and evaluate physiological outcomes. This method can also be used for studying intracellular hypoxia response mechanisms in vivo. 
Here, we present the MCA ligation surgery in a C57/BL6 mouse. We describe the pre-surgical preparation, MCA ligation surgery and 2,3,5 Triphenyltetrazolium chloride (TTC) staining for quantification of infarct volumes.

Middle cerebral artery (MCA) ligation is a technique to study focal cerebral ischemia in animal models. In this method, the middle cerebral artery is exposed by craniotomy and ligated by cauterization. This method gives highly reproducible infarct volumes and increased post-operative survival rates compared to other methods available.

تطبيق الربط الدائم الشريان المخي الأوسط في الماوس

Focal cerebral ischemia is among the most common type of stroke seen in patients. Due to the clinical significance there has been a prolonged effort to ...

Modified Technique for Coronary Artery Ligation in Mice

Myocardial infarction (MI) is one of the most important causes of mortality in humans1-3. In order to improve morbidity and mortality in patients with MI we need better knowledge about pathophysiology of myocardial ischemia. This knowledge may be valuable to define new therapeutic targets for innovative cardiovascular therapies4. Experimental MI model in mice is an increasingly popular small-animal model in preclinical research in which MI is induced by means of permanent or temporary ligation of left coronary artery (LCA)5. In this video, we describe the step-by-step method of how to induce experimental MI in mice.
The animal is first anesthetized with 2% isoflurane. The unconscious mouse is then intubated and connected to a ventilator for artificial ventilation. The left chest is shaved and 1.5 cm incision along mid-axillary line is made in the skin. The left pectoralis major muscle is bluntly dissociated until the ribs are exposed. The muscle layers are pulled aside and fixed with an eyelid-retractor. After these preparations, left thoracotomy is performed between the third and fourth ribs in order to visualize the anterior surface of the heart and left lung. The proximal segment of LCA artery is then ligated with a 7-0 ethilon suture which typically induces an infarct size ~40% of left ventricle. At the end, the chest is closed and the animals receive postoperative analgesia (Temgesic, 0.3 mg/50 ml, ip). The animals are kept in a warm cage until spontaneous recovery.

The surgical procedure used to induce experimental myocardial infarction in mice begins with left thoracotomy between the third and the fourth ribs in order to visualize the anterior surface of the heart and left lung. The left coronary artery is ligated, the chest is closed and the mouse is allowed to recover spontaneously.

تقنية لربط تعديل الشريان التاجي في الفئران

Myocardial infarction (MI) is one of the most important causes of mortality in humans1-3. In order to improve morbidity and mortality in patients with MI ...

Bile Duct Ligation in Mice: Induction of Inflammatory Liver Injury and Fibrosis by Obstructive Cholestasis

In most vertebrates, the liver produces bile that is necessary to emulsify absorbed fats and enable the digestion of lipids in the small intestine as well as to excrete bilirubin and other metabolic products. In the liver, the experimental obstruction of the extrahepatic biliary system initiates a complex cascade of pathological events that leads to cholestasis and inflammation resulting in a strong fibrotic reaction originating from the periportal fields. Therefore, surgical ligation of the common bile duct has become the most commonly used model to induce obstructive cholestatic injury in rodents and to study the molecular and cellular events that underlie these pathophysiological mechanisms induced by inappropriate bile flow. In recent years, different surgical techniques have been described that either allow reconnection or reanastomosis after bile duct ligation (BDL), e.g., partial BDL, or other microsurgical methods for specific research questions. However, the most frequently used model is the complete obstruction of the common bile duct that induces a strong fibrotic response after 21 to 28 days. The mortality rate can be high due to infectious complications or technical inaccuracies. Here we provide a detailed surgical procedure for the BDL model in mice that induce a highly reproducible fibrotic response in accordance to the 3R rule for animal welfare postulated by Russel and Burch in 1959.

Disruption of bile flow results in severe inflammatory cholestatic liver injury with a characteristic time-dependent sequence of morphological alterations. Here we present a protocol for the surgical ligation of the common bile duct in mice that allows to induce a strong fibrotic response after 21 to 28 days.

القناة الصفراوية ربط في الفئران: تحريض التهاب الكبد والتليف الإصابات التي كتبها الانسدادي ركود صفراوي

In most vertebrates, the liver produces bile that is necessary to emulsify absorbed fats and enable the digestion of lipids in the small intestine as well ...

Reduction of Iatrogenic Atrial Septal Defects with an Anterior and Inferior Transseptal Puncture Site when Operating the Cryoballoon Ablation Catheter

The cryoballoon catheter ablates atrial fibrillation (AF) triggers in the left atrium (LA) and pulmonary veins (PVs) via transseptal access. The typical transseptal puncture site is the fossa ovalis (FO) &#8211; the atrial septum&#8217;s thinnest section. A potentially beneficial transseptal site, for the cryoballoon, is near the inferior limbus (IL). This study examines an alternative transseptal site near the IL, which may decrease the frequency of acute iatrogenic atrial septal defect (IASD). Also, the study evaluates the acute pulmonary vein isolation (PVI) success rate utilizing the IL location. 200 patients were evaluated by retrospective chart review for acute PVI success rate with an IL transseptal site. An additional 128 IL transseptal patients were compared to 45 FO transseptal patients by performing Doppler intracardiac echocardiography (ICE) post-ablation to assess transseptal flow after removal of the transseptal sheath. After sheath removal and by Doppler ICE imaging, 42 of 128 (33%) IL transseptal patients demonstrated acute transseptal flow, while 45 of 45 (100%) FO transseptal puncture patients had acute transseptal flow. The difference in acute transseptal flow detection between FO and IL sites was statistically significant (P &#60;0.0001). Furthermore, 186 of 200 patients (with an IL transseptal puncture) did not need additional ablation(s) and had achieved an acute PVI by a &#8220;cryoballoon only&#8221; technique. An IL transseptal puncture site for cryoballoon AF ablations is an effective location to mediate PVI at all four PVs. Additionally, an IL transseptal location can lower the incidence of acute transseptal flow by Doppler ICE when compared to the FO. Potentially, the IL transseptal site may reduce later IASD complications post-cryoballoon procedures.

The goal of this study is to demonstrate the preferential location of transseptal puncture during a cryoballoon catheter ablation procedure for the treatment of atrial fibrillation.

الحد من العيوب علاجي المنشأ الحاجزي الأذيني مع الأمامي والسفلي الموقع عبر الحاجز الثقب عند تشغيل Cryoballoon تذرية قسطرة

The cryoballoon catheter ablates atrial fibrillation (AF) triggers in the left atrium (LA) and pulmonary veins (PVs) via transseptal access. The typical ...

Rat Model of the Associating Liver Partition and Portal Vein Ligation for Staged Hepatectomy (ALPPS) Procedure

Recent clinical data support an aggressive surgical approach to both primary and metastatic liver tumors. For some indications, like colorectal liver metastases, the amount of liver tissue left behind after liver resection has become the main limiting factor of resectability of large or multiple liver tumors. A minimal amount of functional tissue is required to avoid the severe complication of post-hepatectomy liver failure, which has high morbidity and mortality. Inducing liver growth of the prospective remnant prior to resection has become more established in liver surgery, either in the form of portal vein embolization by interventional radiologists or in the form of portal vein ligation several weeks prior to resection. Recently, it was shown that liver regeneration is more extensive and rapid, when the parenchymal transection is added to portal vein ligation in a first stage and then, after only one week of waiting, resection performed in a second stage (Associating Liver Partition and Portal vein ligation for Staged hepatectomy = ALPPS). ALPPS has rapidly become popular across the world, but has been criticized for its high perioperative mortality. The mechanism of accelerated and extensive growth induced by this procedure has not been well understood. Animal models have been developed to explore both the physiological and molecular mechanisms of accelerated liver regeneration in ALPPS. This protocol presents a rat model that allows mechanistic exploration of accelerated regeneration.

Rat Model of the Associating Liver Partition and Portal Vein Ligation for Staged Hepatectomy ALPPS Procedure

Inducing rapid liver hypertrophy using Associating Liver Partition and Portal vein ligation for a Staged hepatectomy (ALPPS) has been proposed for resection of borderline resectable liver tumors. This model may elucidate mechanisms involved in rapid hypertrophy and allows testing of drugs that promote or block the acceleration of regeneration.

نموذج الفئران لربط قسم الكبد وربط الوريد البابي لإجراءات مرحلية ظهرت (البس)

Recent clinical data support an aggressive surgical approach to both primary and metastatic liver tumors. For some indications, like colorectal liver ...

Puncture-Induced Iris Neovascularization as a Mouse Model of Rubeosis Iridis

We describe a model of puncture-induced iris neovascularization as a general model for noninvasive evaluation of angiogenesis. The model is also relevant for targeting neovascular glaucoma, a sight-threatening complication of diabetic retinopathy. This method is based on the induction of iris vascular response by a series of self-sealing uveal punctures on BALB/c mice and takes advantage of the postpartum maturation of mouse ocular vasculature. Mouse pups undergo uveal punctures from postnatal day 12.5, when the pups naturally open their eyes, until postnatal day 24.5. Due to the transparency of the cornea, iris vasculature can be analyzed easily through time by noninvasive in vivo methods. Furthermore, the semitransparent iris of BALB/c mice can be flatmounted for detailed immunohistologic analysis with minimal non-specific background staining. In this model, angiogenesis is mainly driven by the inflammatory and plasminogen activating systems. The puncture-induced model is the first to induce iris neovascularization in small rodents, and has the advantage of allowing direct noninvasive in vivo analysis of the angiogenic process. Moreover, the model can be combined with angiogenic modulating substances, which highlights its potential in the study of angiogenesis with an in vivo perspective.

Iris neovascularization, a common complication of ischemic retinal disease, may lead to sight-threatening neovascular glaucoma. Here, we describe a murine protocol for inducing experimental iris neovascularization that may be used for noninvasive evaluation of angiogenesis-modulating substances.

نيوفاسكولاريزيشن آيريس المستحثة بثقب كنموذج الفأر من إيريديس روبيوسيس

We describe a model of puncture-induced iris neovascularization as a general model for noninvasive evaluation of angiogenesis. The model is also relevant ...

Subclavian Vein Puncture As an Alternative Method of Blood Sample Collection in Rats

Blood collection with enough blood volume is essential in animal experiments. Blood collection from the tail vein of rats is popular and less stressful compared to other more aggressive methods such as retro-orbital plexus sample collection. However, this blood collection method is sometimes limited by an unsatisfactory success rate. Here, we introduce a method for blood collection through the subclavian vein puncture. The subclavian vein is located just under the clavicle and this vein is large enough to fulfill the volume requirements of blood collection. Our results show that this method is safe and applicable for blood collection sampling with the required blood volume. Blood collection through the subclavian vein puncture could serve as an alternative blood collection method in case of failed tail vein blood sampling in rats.

Here, we present a protocol to collect blood samples from the rat subclavian vein.

ثقب الوريد Subclavian كطريقة بديلة لجمع عينات الدم في الفئران

Blood collection with enough blood volume is essential in animal experiments. Blood collection from the tail vein of rats is popular and less stressful ...

Blood Collection Through Subclavian Vein Puncture in Mice

The mouse is the foremost mammalian model for studying human disease and human health. However, blood sample collection from mice is challenging in research work. Tail blood collection is a popular method when a small amount of blood sample is needed. Orbital artery could be considered if a large amount of blood is needed but this blood collection method has ethical issues. Formerly, we demonstrated the feasibility and safety of blood sample collection through subclavian vein puncture in rats, and here we investigate whether this method could be used in mice. We report that this method is safe and practical for blood collection in mice. Blood collection through the subclavian vein puncture in mice can be a convenient method in daily research works.

Here, we present a protocol to take blood samples from the subclavian vein of mice.

جمع الدم من خلال ثقب الوريد تحت الترقوة في الفئران

The mouse is the foremost mammalian model for studying human disease and human health. However, blood sample collection from mice is challenging in ...

Murine Myocardial Infarction Model using Permanent Ligation of Left Anterior Descending Coronary Artery

Myocardial infarction (MI) and acute coronary diseases are among the most prominent causes of death in population with western lifestyle. The murine models of MI with permanent ligation of left-anterior descending (LAD) coronary artery closely mimics MI in humans. Murine models benefit from the extensive genetic engineering available nowadays. Here we propose a reproducible murine surgical model of myocardial infarction by permanent LAD coronary ligation. Our technique comprises anesthesia with ketamine/xylazine that can be rapidly reversed by administration of an antagonist, intubation without tracheotomy for mechanical-assisted ventilation, ventilation with application of extrinsic positive end-expiratory pressure (PEEP) to avoid alveolar collapse, a thoracotomy method limiting to the minimum surgical lesions made to skeletal muscles, and lung inflation without thoracentesis. This method is sparsely invasive, reproducible and reduces post-surgery mortality and complications.

Herein we describe a surgical procedure showing how to achieve permanent ligation of the left-anterior descending coronary artery in mice. This model is of high relevance to investigate the pathophysiology of myocardial infarction and the concomitant biological processes.

نموذج احتشاء عضلة القلب Murine باستخدام الربط الدائم للشريان التاجي الأمامي الأيسر

Myocardial infarction (MI) and acute coronary diseases are among the most prominent causes of death in population with western lifestyle. The murine ...