המחברים מודים Linnea Tankred ודיאנה Rydholm על גידול בעלי חיים.

BALB/c העכבר הגורים של מין או על פי המשפט שימשו את השימוש של בעלי חיים Ophthalmologic ומחקר חזון, הפרוטוקולים אושרו על ידי הוועדה של שטוקהולם לחקר בעלי חיים אתיים. עכברים היו בבניין המלטות, יחד עם האמא סיעוד, עם מחזור יום/לילה 12 שעות, גישה חופשית מזון ומים, ולא תחת פיקוח יומיומי.
הערה: עבור הליך כירורגי, עכברים נשמרו תחת הרדמה עם איזופלוריין נדיף. משחות עינית הן רוחך במהלך הליכי עינית, כפי שהם עשויים להפריע טיפולים וחומרים בשימוש. במידת הצורך, כדי למנוע עין-יבש, טיפה של פתרון סטרילי מלוחים נורמלי יכול להיות מיושם. אך דקירות uveal הריפוי העצמי, הוקדשה במהלך דקירות uveal כדי להבטיח עקרות כלי ניתוח. טיפול לאחר ניתוח כולל שתיה עם תמיסת מלח רגיל subcutaneously, שיכוך כאבים עם עינית הממשל אקטואלי של tetracaine הידרוכלוריד. הגורים הורשו לשחזר recumbency בחזה ובצלעות על כרית החימום לפני מוחזר אם מניקה, בתוך כלוב נקי. המלטות נשמרו עם האם ההנקה באותו להימנע ממתח נפשי.
1. הרדמה
<ol><li>הכינו את התא אינדוקציה של הרדמה, לנהל איזופלוריין הרדמה ולהבטיח כי מסכת עכבר קטן זה משולב גם. הערה: לבצע ניסויים בבעלי חיים כל מסכים עם כל האישורים אתיים החלים.</li>
	<li>Prefill תא אינדוקציה עם 3-4% איזופלוריין נדיפים באוויר האטמוספרי. הערה: הרדמה חומרים שונים חוץ מאשר איזופלוריין עשוי לשמש, על-פי היתרים אתית. נדיף הרדמה הליכי צריכה להתבצע על ברדס ספסל או fume מאוורר.</li>
	<li>המקום לאחר הלידה (P) בת 12.5 יום BALB/c העכבר גור בבית הבליעה אינדוקציה. לאשר המנגנון הרדמה הוא מוכן למסור את איזופלוריין אל התא אינדוקציה. הערה: העכבר הגורים הם מאוד שבירים ויכולים טיפל בצורה הטובה ביותר עורפה. לשמור יחד את הגורים בהמלטה או עם האם ההנקה להימנע ממתח נפשי.</li>
	<li>לאפשר הכלבלב להיות מורדם לחלוטין.</li>
	<li>. בעדינות, תרים את הכלבלב העכבר הזה. הערה: לשמור את התא אינדוקציה סגורים בבית כל הזמן אינדוקציה יציבה ובטוחה.</li>
	<li>להעביר את העכבר המסכה מכרסמים. הקפד להחליף את זרימת הרדמה מן החדר אינדוקציה למסיכה בעת הזזת העכבר.</li>
	<li>לבצע צביטה הבוהן כדי לאשר הרדמה.</li>
</ol>2. לנקב הליך תחת סטריאוסקופ כירורגי
<ol><li>מיקום העכבר במצב recumbency לרוחב. לאשר שהמסכה היא ממוצבת היטב כך העין העכבר נמצא שדה הראייה של סטריאוסקופ.</li>
	<li>סובב בעדינות את הראש העכבר כך העין פונה מעלה, לעבר סטריאוסקופ. הערה: מיקוד של העין צריך להיעשות תחת סטריאוסקופ. עבור מיקום, מומלץ על ההגדלה של 16 X, בעוד 40 X אמור לשמש לביצוע הליך כירורגי. אם היתרים אתית מאפשרות זאת, חיתוך קצה נכון יכול להקל את הפריט החזותי של העין.</li>
	<li>באמצעות מלקחיים קשירת קטן, בזהירות בולטות העין של הכלבלב על ידי הפעלת לחץ כלפי מטה על העפעפיים הגבי ו הגחון לעין.</li>
	<li>לשמור על אחיזה עדינה, אך המשרד ליד של הגורים העין, עם מלקחיים קטנים. הערה: מומלץ לבצע את חדירת העין, מכסה מחזיק ביד האחרת, כמו היד הדומיננטית צריך לבצע את ההליך פנצ'רים.</li>
	<li>השתמש את סטריאוסקופ כדי לאתר את הקרנית לימבוס. הלבקן BALB/c לימבוס ניתן לזהות בקלות על ידי מקלעת וסקולרית מעגלית האחורי בקרנית.</li>
	<li>עם מחט בקוטר (30 גרם) 0.25 mm משופע, לבצע ניקוב uveal קטן, ליד הגבול limbal האחורי הענבייה. השתמש רק את קצה המחט, לא יותר מחצי שיקוע (שקול ל- 0.5 מ מ), לנקב את uvea. אם מבוצע כהלכה, הנקבים uveal הם עצמית איטום, אבל תוך-עיני הזרקת חומר הלימוד יכול להינתן דרך הפצע לנקב אותו. הערה: אם חווה עם עכבר עינית האנטומיה, הניקוב uveal מבוצע בין ריסי הגוף serrata אורה. חייבים להקפיד בעת ביצוע הניקוב uveal כדי למנוע קריעה העדשה.</li>
	<li>לבצע הניקוב uveal השני באתר הנגדי של העין מן החדירה הראשונה. למטב את המרחק והמיקום של הנקבים; שקול 12, שעה 6 נקבים, עם 12 השעה להיות כמו הגבי ככל האפשר.</li>
	<li>חזור על הפעולות דקירות uveal כל 4 ימים עד P24.5. לפני כל ניקוב uveal רצופים, לנטר מצב החיות תשומת לב מיוחדת הימצאות קטרקט טראומטי עקב נזק לעדשה במהלך חדירה uveal, או ברור לחץ עינית מופחתת. המטרה עבור ביצוע דקירות. אני חוזר-באותן משרות כמו דקירות קודמות על השפעות אופטימאליות.</li>
</ol>3. לא פולשנית in Vivo ניטור
<ol><li>לפני ' דקירה או זריקות בכל יום ניסיוני, עזים ומתנגד העכבר כפי שבוצע לעיל.</li>
	<li>עם העכבר במצב recumbency לרוחב, בעדינות בולטות לעין.</li>
	<li>מתמקדים איריס להערכת עם סטריאוסקופ כירורגי.</li>
	<li>לצלם להערכת איריס עם מצלמה התאימה ל סטריאוסקופ כירורגית. הערה: אם כי לא הכרחי, גרימת מיוזה עשויה להועיל לנרמל את איריס שטח, בעלי חיים. קח בחשבון היתרים אתית בעת בחירת סוכן בתדר מיוזה. זהירות מוקד להערכת איריס יקל עוד ניתוח כמותי. בסדר גודל של 40 X מומלץ.</li>
</ol>4. לאחר הניתוח טיפול
<ol><li>הכלבלב BALB/c להסיר המסכה מכרסמים, בעדינות להעביר אותו כרית החימום שכבתית עם מזרן כירורגי.</li>
	<li>טיפה אחת של 1% פתרון tetracaine חלות על העיניים מנוקבת. הערה: פתרונות כאבים אחרים ניתן להשתמש, על-פי היתרים אתית.</li>
	<li>מימה החיה עם זריקה תת עורית של µL 200 תמיסת סטרילית נורמלי.</li>
	<li>לחזור הגורים האמא סיעוד בתוך כלוב עכבר נקי.</li>
	<li>לפקח על תהליך ההחלמה. הכלבלב אמור להיות מסוגל deambulate ולחזור הגורים.</li>
</ol>5. עין העקירה
<ol><li>להרדימו על ידי נקע בצוואר הרחם. לבצע את העקירה לנתיחה תחת סטריאוסקופ להמחשת טוב יותר של ההליך. הערה: המתת חסד שונות ניתן להשתמש בהליכים. מומלץ לדבוק בקפדנות היתרים אתית.</li>
	<li>להפריד את העפעפיים כדי לשפר את החשיפה לעין.</li>
	<li>לעשות חתך קטן (כ 0.5 ס מ) ליד canthus של בעפעפיים במספריים העין מעוקל של בון.</li>
	<li>להשתמש בשטח חשוף periocular להוספת מיקרו מלקחיים קשירה מאחור (תחת) כדור הארץ במסלול.</li>
	<li>. תפוס את הרקמות הסובבות את העין ומשוך בעדינות כלפי מעלה. להימנע המעצר על גבי גלגל העין, השתמש הרקמות הסובבות קרוב כדי ארובת העין.</li>
	<li>הכנס את המספריים העין בון מעוקל מאחורי העולם העין מסלולו.</li>
	<li>לחתוך דרך הרקמות הסובבות עד העין הוא שוחרר מן השקע. הערה: טכניקה דיסקציה זו שומרת על העין אנטומיה ויתרונות חשפה.</li>
	<li>המשך הסרת רקמה שאינם שייכים מהעין. הסרת רקמת חיצוני יכול להתבצע לאחר תיקון, אם מועדף. הערה: BALB/c עכברים הם מלנין לקוי, לכן, כדי להגדיל את החדות, רקע כהה מומלץ כדי להקל על הליך לנתיחה.</li>
	<li>בקצרה שטיפה העין כולה בצלחת פטרי מלא מלח סטרילית באגירה פוספט (PBS).</li>
	<li>להעביר את העין צינור 2 מ"ל המכיל 1.5 מ של 4% פורמלין buffered פתרון.</li>
	<li>לתקן את העין במשך 6 שעות בטמפרטורת החדר. הערה: תיקון מקנה את הנוקשות של הרקמה ואסטמה ומקילה על ניתוח של הקשתית. תיקון זמן עליו נבדק, מותאם עבור יישומים שונים.</li>
</ol>6. איריס הליך ניתוח תחת סטריאוסקופ
<ol><li>הסר את הפתרון מקבע הצינור עם פיפטה פסטר פלסטיק של 1.5 mL (או דומה), ולשטוף את העין 3 פעמים עם PBS טריים.</li>
	<li>מקום העין קבוע משטח יבש חלק (דיסקציה מעמד) לחדר הקדמיות כלפי מעלה.</li>
	<li>עם מחט 30 G משופע, לבצע נקודת כניסה האחורי לימבוס.</li>
	<li>מחזיק את המקטע הקדמי עם מלקחיים קשירת קטן, להוסיף עצה אחת מספריים ישר קליימן-Vannas לתוך הפתח שנוצרו בעבר. הערה: מומלץ כדי לשלוט המלקחיים עם היד הלא דומיננטית, את המספריים עם הדומיננטי.</li>
	<li>תוך כדי סיבוב את העין עם המלקחיים קשירה, לעקוף לימבוס להסיר את המקטע האחורי של העין. הערה: ביצוע חלקית הקיצוצים יאפשר הקצה הפנימי של המספריים להמשיך בתוך רקמת ו מאוד מקלה על התהליך.</li>
	<li>מקם את המקטע הקדמי מופנות כלפי מטה, לחשוף את העדשה.</li>
	<li>הסר את העדשה בקפידה על ידי תופס אותו עם מלקחיים קטנים ומושך כלפי מעלה. הערה: מחט משופע יכול לשמש כדי לנקב ומשוך את העדשה.</li>
	<li>מקם את המקטע הקדמי עם הקרנית פונה כלפי מטה, החתך בניצב שדה הראייה.</li>
	<li>בעדינות לתפוס את הרקמה האחורי לגוף ריסי עם המלקחיים קשירת קטן.</li>
	<li>במספריים ישר קליימן-Vannas, להמשיך לקצץ רק והשתרשה עמוק בלבה לגוף ריסי כדי להסיר את trabecular meshwork ולבודד את הקשתית. לאשר כי meshwork trabecular מוסר; הקשתית צריכה להעביר בתוך הקרנית.</li>
	<li>בזהירות להעביר את עיינית הקדמי עם המלקחיים קשירת קטן, מחזיק את הקרנית, על צלחת 96-ובכן המכיל 200 µL ל- PBS.</li>
	<li>המשך החזקת הקרנית בבאר ומנתחים את הקשתית על ידי שטיפה עם PBS עם פיפטה. הערה: אם כנצרות שרידים איריס בקרנית, meshwork trabecular מסוימים ייתכן ההוה שיפוע של מחט 30 G יכול לשמש כדי לעזור ועקרו מבתיהם את הקשתית.</li>
	<li>להסיר את הקרנית 96-ובכן עם המלקחיים קשירת קטן, ולשמור את הקשתית מבודד בתוך הבאר לניתוח נוסף.</li>
	<li>לאחסן דגימות איריס לתרשים ב 4 º C. הערה: למרות להיות קבוע, אחסון לטווח ארוך של הדגימות לתרשים איריס אינה מומלצת.</li>
</ol>7. אפשרי הקריאות ניסיוני
<ol><li>כדי להמחיש את כלי הדם ב- האיריסים גזור, השתמש לתרשים אימונוהיסטוכימיה כולה-הר מכתים שיטות כגון טסיות תא אנדותל אדהזיה מולקולה (PECAM)-1 או isolectin B4. לחלופין, השתמש זלוף לכל הגוף עם צביעת כלי דם, כגון התווית על-ידי פלורסנט משקל מולקולרי גבוה dextrans.</li>
	<li>השתמש ויוו תמונות לא פולשנית כדי לבצע סיליקו שטוח-הרכבה ולכמת להערכת איריס מלא עם תוכנת הדמיה המתאימה. הערה: להערכת ניתן לכמת, הן ויוו והן במבחנה, באמצעות densitometry או להערכת ניתוח תוכנה9.</li>
	<li>לעבד את כל גלגל העין עבור חומצות גרעין והפקת חלבונים, ואחריו בשיטות PCR או immunoblotting, לבצע ניתוח מולקולרית של העיניים מנוקבת. הערה: אנליזה מולקולרית של הרקמות מבוצעת בצורה הטובה ביותר עם רקמת שאינו קבוע, אבל ניתוח של איריס שאינו קבוע הוא מאוד מאתגר, השימוש של העין כל הפכה תוצאות משמעותיות מבחינה סטטיסטית מחקרים קודמים8.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Morrison, J. C., Van Buskirk, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anterior+collateral+circulation+in+the+primate+eye.">Anterior collateral circulation in the primate eye.</a> Ophthalmology. 90 (6), 707-715 (1983).</li><li>Dreyfuss, J. L., Giordano, R. J., Regatieri, C. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ocular+Angiogenesis.">Ocular Angiogenesis.</a> J Ophthalmol. 2015, 892043 (2015).</li><li>Breuss, J. M., Uhrin, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=VEGF-initiated+angiogenesis+and+the+uPA/uPAR+system.">VEGF-initiated angiogenesis and the uPA/uPAR system.</a> Cell Adh Migr. 6 (6), 535-615 (2012).</li><li>Rodrigues, G. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neovascular+glaucoma:+a+review.">Neovascular glaucoma: a review.</a> Int J Retina Vitreous. 2, 26 (2016).</li><li>Stahl, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+mouse+retina+as+an+angiogenesis+model.">The mouse retina as an angiogenesis model.</a> Invest Ophth Vis Sci. 51 (6), 2813-2826 (2010).</li><li>DiPietro, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Angiogenesis+and+wound+repair:+when+enough+is+enough.">Angiogenesis and wound repair: when enough is enough.</a> J Leukocy Biol. 100 (5), 979-984 (2016).</li><li>Eming, S., Brachvogel, B., Odorisio, T., Koch, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+angiogenesis:+Wound+healing+as+a+model.">Regulation of angiogenesis: Wound healing as a model.</a> Prog Histochem Cytoc. 42 (3), 115-170 (2007).</li><li>Beaujean, O., Locri, F., Aronsson, M., Kvanta, A., Andr&#233;, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+in+vivo+model+of+puncture-induced+iris+neovascularization.">A novel in vivo model of puncture-induced iris neovascularization.</a> PloS One. 12 (6), e0180235 (2017).</li><li>Zudaire, E., Gambardella, L., Kurcz, C., Vermeren, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Computational+Tool+for+Quantitative+Analysis+of+Vascular+Networks.">A Computational Tool for Quantitative Analysis of Vascular Networks.</a> PloS One. 6 (11), (2011).</li><li>Dorrell, M., Uusitalo-Jarvinen, H., Aguilar, E., Friedlander, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ocular+neovascularization:+basic+mechanisms+and+therapeutic+advances.">Ocular neovascularization: basic mechanisms and therapeutic advances.</a> Surv Ophthalmol. 52 Suppl 1, S3-S19 (2007).</li><li>Kvanta, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ocular+angiogenesis:+the+role+of+growth+factors.">Ocular angiogenesis: the role of growth factors.</a> Acta Ophthalmol. 84 (3), 282-288 (2006).</li><li>Salman, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intrasilicone+Bevacizumab+Injection+for+Iris+Neovascularization+after+Vitrectomy+for+Proliferative+Diabetic+Retinopathy.">Intrasilicone Bevacizumab Injection for Iris Neovascularization after Vitrectomy for Proliferative Diabetic Retinopathy.</a> Ophthalmic Res. 49 (1), 20-24 (2013).</li><li>Jeong, Y. C., Hwang, Y. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Etiology+and+Features+of+Eyes+with+Rubeosis+Iridis+among+Korean+Patients:+A+Population-Based+Single+Center+Study.">Etiology and Features of Eyes with Rubeosis Iridis among Korean Patients: A Population-Based Single Center Study.</a> PloS One. 11 (8), e0160662 (2016).</li><li>Speier, S., Nyqvist, D., K&#246;hler, M., Caicedo, A., Leibiger, I. B., Berggren, P. -. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noninvasive+high-resolution+in+vivo+imaging+of+cell+biology+in+the+anterior+chamber+of+the+mouse+eye.">Noninvasive high-resolution in vivo imaging of cell biology in the anterior chamber of the mouse eye.</a> Nat Protoc. 3 (8), 1278-1286 (2008).</li><li>Stefansson, E., Landers, M. B., Wolbarsht, M. L., Klintworth, G. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neovascularization+of+the+Iris+-+an+Experimental-Model+in+Cats.">Neovascularization of the Iris - an Experimental-Model in Cats.</a> Invest Ophth Vis Sci. 25 (3), 361-364 (1984).</li><li>Nork, T. M., Tso, M., Duvall, J., Hayreh, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+Mechanisms+of+Iris+Neovascularization+Secondary+to+Retinal+Vein+Occlusion.">Cellular Mechanisms of Iris Neovascularization Secondary to Retinal Vein Occlusion.</a> Arch Ophthalmol-Chic. 107 (4), 581-586 (1989).</li><li>Hjelmeland, L. M., Stewart, M. W., Li, J. W., Toth, C. A., Burns, M. S., Landers, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+Experimental-Model+of+Ectropion+Uveae+and+Iris+Neovascularization+in+the+Cat.">An Experimental-Model of Ectropion Uveae and Iris Neovascularization in the Cat.</a> Invest Ophth Vis Sci. 33 (5), 1796-1803 (1992).</li><li>Tolentino, M. J., Miller, J. W., Gragoudas, E. S., Chatzistefanou, K., Ferrara, N., Adamis, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascular+endothelial+growth+factor+is+sufficient+to+produce+iris+neovascularization+and+neovascular+glaucoma+in+a+nonhuman+primate.">Vascular endothelial growth factor is sufficient to produce iris neovascularization and neovascular glaucoma in a nonhuman primate.</a> Arch Ophthalmol-Chic. 114 (8), 964-970 (1996).</li><li>Paula, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rabbit+Rubeosis+Iridis+Induced+by+Intravitreal+Latex-derived+Angiogenic+Fraction.">Rabbit Rubeosis Iridis Induced by Intravitreal Latex-derived Angiogenic Fraction.</a> Curr Eye Res. 36 (9), 857-859 (2011).</li><li>Takei, A., Ekstr&#246;m, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+Transfer+of+Prolyl+Hydroxylase+Domain+2+Inhibits+Hypoxia-inducible+Angiogenesis+in+a+Model+of+Choroidal+Neovascularization.">Gene Transfer of Prolyl Hydroxylase Domain 2 Inhibits Hypoxia-inducible Angiogenesis in a Model of Choroidal Neovascularization.</a> Sci Rep. 7, 42546 (2017).</li></ol>

המחברים אין לחשוף.

בפרוטוקול הנוכחי, מוצגת שיטה עבור אינדוקציה של איריס תגובת כלי הדם על ידי ניקוב uveal. הניקוב מפעיל מנגנוני ריפוי הפצע ומקדם תגובות כלי הדם איריס10,11. . זה מסכים עם פתולוגיות עינית, כגון PDR ו- NVG, שבו האנגיוגנזה החמירה תגובות מן הרשתית בקטע האחורי של העין, מסתיימים המצב הקליני של rubeosis iridis, אמוניה בסביבות מוגברת הקשתית12 ,13.
הקרנית avascular, בעל מבנה מוזר קולגן וכתוצאה מכך שקיפות. בקו זה, שקיות של המקטע הקדמי של העין עבור ויזואליזציה של איריס להערכת הוא בר השגה על ידי פריט חזותי ישיר של איריס כלי דם עם ויוו שיטות לא פולשנית13,14. דגמים בעלי חיים קודמים של איריס כורוידאלית הסתמכה על חיות גדולות-עיניים איפה התערבויות כירורגיות מורכבות היו שבוצעו15,16,17, או על-ידי הזרקה תוך-עיני של חומרים ספציפיים אנגיוגנזה 18 , 19. בשיטה זו, השימוש של עכברים BALB/c חסר פיגמנט מאפשר התבוננות ישירה של ה איריס להערכת ויוו, ומאפשר לא פולשנית כימות כורוידאלית איריס בעכברים, ובכך לספק כלי חדש ללמוד אין ויוו אנגיוגנזה.
יתר על כן, שיטת הציג עבור העכבר איריס לנתיחה מאפשר ניתוח של איריס פנצ'רים-induced כורוידאלית עם כלי דם סמנים ספציפיים. . הנה, איריס כלי illustratively היו מוכתמים נוגדנים PECAM-1, דמיינו ידי קרינה פלואורסצנטית מיקרוסקופ. פרוטוקולים לתרשים, כולה-הר immunostaining הם בקלות מושגת, שגרתיות למדי. בנוסף, שיטות זלוף כלי הדם יכול להתבצע במודל זה. צביעת ספציפית לכלי הדם מעניק הערכה של איריס מבנה כלי הדם ובכך כמת, מאת מבוססי-משתמש או תוכנת ניתוח, איריס neovasculature9. כפי שתואר קודם לכן8,20, האיור של איריס neovasculature נאמד ב יום 15 פוסט-puncture-אינדוקציה. עם זאת, ההשפעות על איריס vascularization יכול להיות שנצפו מוקדם ככל יום 4 פוסט-puncture-אינדוקציה, רומז כי ההערכה של המודל כורוידאלית איריס הנוצרות על-ידי ניקוב יכולים להתבצע בנקודות זמן שונות, בהתאם ספציפי דרישות ניסיוני.
ראוי לציין למצב שבו פרוטוקול זה מציג כמה אתגרים, במיוחד הקשורים לגודל העיניים עכברים ביחס מודל בעל חיים אחר. נקטו זהירות יש לנקוט בעת ביצוע ההליך ניקוב uveal, כדי להימנע נגיעות עדשה או נזק לעין. תצפית של מצב עינית היא פרמאונט, ובעלי הצגת ניסיוני הקשורות קטרקט או ירידה בלחץ עינית צריך להיות לא נכלל כראוי מורדמים. קשתיות העין העכבר הם רגישים במיוחד דביק במקצת. ניתוח ראוי ובידוד של הרקמה מציג עוד צעד קריטי עבור הפרוטוקול. הפרדה נכונה בין meshwork trabecular הוא הכרחי עבור הזחה של הקשתית מן החדר הקדמי. יתר על כן, בשל השבריריות, איריס בידוד מחייב קיבעון של הרקמה, הפוגע אנליזה מולקולרית במורד הזרם. למרות זאת, ניתוח מולקולרית של עין-כל מבולבל יושם בהצלחה שיטת הציג8.
לסיכום, הפרוטוקול המתואר מציג מודל העכבר כורוידאלית איריס הנוצרות על-ידי ניקוב הרומן. מודל זה יש יתרון המאפשר ויוו לא פולשנית פריט חזותי ישיר של אנגיוגנזה. בנוסף, השימוש של מכרסמים קטנים רינדור דגם הציג אטרקטיבי עבור מחקרים של rubeosis iridis, כפי שהוא מונע את השימוש בבעלי חיים גדולים-עיניים מלווה הגבלת אתית. יתר על כן, ההליך יכול להיות משולב עם הזרקה של חומרים פרו - או אנטי-אנגיוגנזה חדירה עצמית איטום, לשיפור השימושיות שלה בתור מודל חדש של ויוו אנגיוגנזה.

איריס, יחד עם גוף ריסי, דמית, כוללת את uvea, המהווה הרקמה vascularized ביותר של העין. איריס להערכת חיוני בשמירה על הומאוסטזיס בתא הקדמי של העין. כתוצאה שופע קשרים anastomotic בין העורקים והוורידים, כלי דם איריס לספק חומרים מזינים אספקת החמצן לא רק את הקשתית עצמה, אלא על כל קטע הקדמי של העין1.
היווצרות של כלי דם חדשים, או אנגיוגנזה מכל אלה קיימים, היא מהותית תהליכים פיזיולוגיים, כגון פיתוח ו-2ריפוי הפצע. אנגיוגנזה דק מוסדר על ידי מספר רב של גורמים הקנוני, כגון כלי הדם צמיחה אנדותל (VEGF) והמעכב activator plasminogen (PAI), וכן מספר גורמים דלקתיים, והוא חוסר איזון של גורמים אלה יכול להוביל ל פיפטות אנגיוגנזה3.
בעיניים, כורוידאלית הוא הגורם למחלות מסכנות הראייה, כמו רטינופתיה סוכרתית המקדימות (PDR) ו neovascular גלאוקומה (NVG). אלה מחלות עינית, מוקד כורוידאלית בדרך כלל ממוקם רקמות ברשתית, ובכל זאת חוסר איזון של דלקתיות, גורמי אנגיוגנזה בנבכי בשני האחורי ו הקדמי עינית העין שויכה rubeosis iridis, מונח רפואי עבור איריס פתולוגיים neoangiogenesis4. פתולוגיות אלה מציינים את היכולת של הקשתית הבוגרים לעבור אנגיוגנזה. בעכברים, להערכת עינית לא בוגר לאחר הלידה וממשיך לאחר לידה התבגרות. זה ייחודו של הפיתוח הוא מנוצל במודל עכבר של חמצן-induced רטינופתיה, מודל זה מקרוב מחקה את המצב הקליני של רטינופתיה prematurity5. בנוסף, אנגיוגנזה ודלקת לשחק תפקיד מרכזי מנגנונים6ריפוי הפצע, פצע מרפא את עצמו שויכה אנגיוגנזה מודלים7.
במחקר זה, נתאר מודל של איריס פנצ'רים-induced כורוידאלית. דקירות uveal מבוצעות ליד הגבול של לימבוס, אשר זירוז איריס כורוידאלית על ידי מפעילה מערכת ריפוי הפצע. בשל שקיפות הקרנית, איריס להערכת יכול להיות מנותח בקלות ויוו באמצעות שיטות לא פולשנית. העיניים מנוקבת להציג עלייה של המיטה כלי הדם של הקשתית, אשר היה קשור עם עלייה של הפעלת plasminogen וסמנים דלקתיים8. המודל שהוצגו יש פוטנציאל גדול כמו כלי חדש ללמוד אנגיוגנזה וסינון האנגיוגנזה תרכובות ומאפשרת ישירה ויוו ויזואליזציה של תהליכי אנגיוגנזה.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Bonn eye scissors</td>
			<td>Bausch &#38; Lomb</td>
			<td>23060</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clayman-Vannas curved scissors</td>
			<td>Bausch &#38; Lomb</td>
			<td>E3383 C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clayman-Vannas straight scissors</td>
			<td>Bausch &#38; Lomb</td>
			<td>E3383 S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Objective adapter for camera</td>
			<td>Handcrafted</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Or any system that allows adapting a camera to the microscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating Pad 100-110 watts</td>
			<td>Non Applicable</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Available in pet/veterinarian stores</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hypodermic 30g beveled needle</td>
			<td>KDM GmBH germany</td>
			<td>911914</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iphone 4S</td>
			<td>Apple</td>
			<td>Non Applicable</td>
			<td>Or other high resolution image acquistion device</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Baxter</td>
			<td>KDG 9623</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>McPherson tying forceps</td>
			<td>Bausch &#38; Lomb</td>
			<td>E1815 S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro tying forceps</td>
			<td>Bausch &#38; Lomb</td>
			<td>63140</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Minims tetracaine hydrochloride</td>
			<td>Bausch &#38; Lomb</td>
			<td>N/A</td>
			<td>1 % (w/v) Eye Drops</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neutral-buffered formalin</td>
			<td>Bioreagens</td>
			<td>0018-40</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normal saline solution</td>
			<td>Fresenius Kabi</td>
			<td>210352</td>
			<td>0.9 % (w/v) NaCl in injectable water</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate-buffered saline</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>10010023</td>
			<td>Balanced and buffered PBS pH 7.4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dish 10 cm</td>
			<td>Starstedt</td>
			<td>83.3902</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dish 3 cm</td>
			<td>Starstedt</td>
			<td>83.3900</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Safe Seal Tube 2.0 mL</td>
			<td>Starstedt</td>
			<td>72.685.200</td>
			<td>Or any eppendorf style tubes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TC plate 96-well</td>
			<td>Starstedt</td>
			<td>83.3924</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transfer pipette 3.5 mL</td>
			<td>Starstedt</td>
			<td>86.1171</td>
			<td>Or any other Pasteur pipette style</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Univentor 400 anesthesia unit</td>
			<td>Univentor Limited</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Or equivalent flow regulator with induction chamber and mask for volatile anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wild M650 surgical microscope</td>
			<td>Wild Heerbrugg</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Or other surgical or magnifying stereoscope</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

puncture-induced iris neovascularization as a mouse model of rubeosis iridis

נתאר מודל של איריס פנצ'רים-induced כורוידאלית כמודל כללי להערכה לא פולשנית של אנגיוגנזה. המודל הוא גם רלוונטי עבור מיקוד neovascular גלאוקומה, סיבוך סכנת הראייה של רטינופתיה סוכרתית. שיטה זו מבוססת על אינדוקציה של איריס תגובת כלי הדם על ידי סדרה של דקירות uveal עצמית איטום על עכברים BALB/c, מנצל ההבשלה לאחר לידה של עכבר עינית להערכת. הגורים העכבר לעבור דקירות uveal מיום כמחנכת 12.5, כאשר הגורים באופן טבעי לפקוח את עיניהם, עד ליום כמחנכת 24.5. בשל שקיפות הקרנית, איריס להערכת ניתן לנתח בקלות בזמן על ידי שיטות לא פולשנית ויוו . יתר על כן, הקשתית שקוף למחצה של עכברים BALB/c ניתן flatmounted לניתוח נתונים היסטוריים immunohistologic עם רקע שאינם ספציפיים מכתים. במודל זה, אנגיוגנזה הוא מונע בעיקר על ידי דלקתיות, הפעלת מערכות plasminogen. המודל הנוצרות על-ידי ניקוב הוא הראשון כדי לגרום כורוידאלית איריס, מכרסמים קטנים, ויש לו יתרון המאפשר ישירה לא פולשנית ויוו ניתוח של תהליך אנגיוגנזה. יתר על כן, המודל יכול להיות משולב עם חומרים להתכוונן האנגיוגנזה, אשר מדגיש את הפוטנציאל במחקר של אנגיוגנזה בפרספקטיבה ויוו .

הגורים העכבר BALB/c לבקן-P12.5 היו נתונים נקבים uveal, חוזר על עצמו בכל יום הרביעי (ניסיוני יום 0, 4, 8, 12), עד P24.5. P27.5, עכברים היו מורדמים, אירוסים גזור בקפידה (ניסיוני יום 15). תמונות של העכבר העיניים צולמו עם מצלמה מחוברת סטריאוסקופ כירורגי לפני כל סדרת לנקב בכל יום ניסיוני להעריך הערכה לא פולשנית של איריס תגובת כלי הדם. דקירות uveal לגרום לתגובה כלי הדם של הקשתית ידי המעוררים את הפצע ריפוי מערכת (איור 1). בשל שקיפות הקרנית, עכברים BALB/c מלנין לקויה, להערכת איריס מוגבר ברצון גלוי מיום ניסיוני 4 (P16.5), ומעצים לאורך משך הפרוטוקול. אימונוהיסטוכימיה תמונות עבור PECAM-1 מציינות עלייה להערכת הכללית בקשתיות עיניים מנוקבת לעומת שולט (איור 2).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57398/57398fig1.jpg"> איור 1: ניטור לא פולשנית של איריס הנוצרות על-ידי ניקוב אנגיוגנזה. תמונות נציג של יום 0, 4, 8, 12 ו- 15 של שליטה והעיניים מנוקבת. תגובת כלי הדם איריס ניכרת מיום 4 ואילך בעיניים מנוקבת. סרגל קנה מידה = 1 מ מ. <a href="//cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/57398/57398fig1large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57398/57398fig2.jpg"> איור 2: איריס תגובת כלי הדם בעיניים פנצ'רים-induced. תמונות המחשה של PECAM-1 מכתים מן היום 15 קשתיות העין, כתמונות תצוגה מלאה יוגדל שטח (מרובע), מתוך שליטה, ניקב את העיניים. סרגל קנה מידה = 400 מיקרומטר (למעלה); 200 מיקרומטר (למטה). הערה הגידול של כלי הדם סניפים קשתיות מנוקבת. <a href="//cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/57398/57398fig2large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Puncture-Induced Iris Neovascularization as a Mouse Model of Rubeosis Iridis at JoVE.com

Puncture-Induced Iris Neovascularization as a Mouse Model of Rubeosis Iridis

איריס כורוידאלית, סיבוך נפוץ של מחלת רשתית איסכמי, עלול להוביל סכנת הראייה neovascular גלאוקומה. כאן, אנו מתארים את פרוטוקול מאתר להשראת כורוידאלית איריס ניסיוני העשויות לשמש להערכה לא פולשנית של חומרים להתכוונן אנגיוגנזה.

ניקוב-Induced כורוידאלית איריס כמודל העכבר של Rubeosis Iridis

We describe a model of puncture-induced iris neovascularization as a general model for noninvasive evaluation of angiogenesis. The model is also relevant ...

puncture-induced-iris-neovascularization-as-mouse-model-rubeosis

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Medicine

8.7K Views.  Karolinska Institutet. איריס כורוידאלית, סיבוך נפוץ של מחלת רשתית איסכמי, עלול להוביל סכנת הראייה neovascular גלאוקומה. כאן, אנו מתארים את פרוטוקול מאתר להשראת כורוידאלית איריס ניסיוני העשויות לשמש להערכה לא פולשנית של חומרים להתכוונן אנגיוגנזה.

Video: Puncture-Induced Iris Neovascularization as a Mouse Model of Rubeosis Iridis

A Mouse Model of in Utero Transplantation

The transplantation of stem cells and viruses in utero has tremendous potential for treating congenital disorders in the human fetus. For example, in utero transplantation (IUT) of hematopoietic stem cells has been used to successfully treat patients with severe combined immunodeficiency.1,2 In several other conditions, however, IUT has been attempted without success.3 Given these mixed results, the availability of an efficient non-human model to study the biological sequelae of stem cell transplantation and gene therapy is critical to advance this field. We and others have used the mouse model of IUT to study factors affecting successful engraftment of in utero transplanted hematopoietic stem cells in both wild-type mice4-7 and those with genetic diseases.8,9 The fetal environment also offers considerable advantages for the success of in utero gene therapy. For example, the delivery of adenoviral10, adeno-associated viral10, retroviral11, and lentiviral vectors12,13 into the fetus has resulted in the transduction of multiple organs distant from the site of injection with long-term gene expression. in utero gene therapy may therefore be considered as a possible treatment strategy for single gene disorders such as muscular dystrophy or cystic fibrosis. Another potential advantage of IUT is the ability to induce immune tolerance to a specific antigen. As seen in mice with hemophilia, the introduction of Factor IX early in development results in tolerance to this protein.14 
In addition to its use in investigating potential human therapies, the mouse model of IUT can be a powerful tool to study basic questions in developmental and stem cell biology. For example, one can deliver various small molecules to induce or inhibit specific gene expression at defined gestational stages and manipulate developmental pathways. The impact of these alterations can be assessed at various timepoints after the initial transplantation. Furthermore, one can transplant pluripotent or lineage specific progenitor cells into the fetal environment to study stem cell differentiation in a non-irradiated and unperturbed host environment.
The mouse model of IUT has already provided numerous insights within the fields of immunology, and developmental and stem cell biology. In this video-based protocol, we describe a step-by-step approach to performing IUT in mouse fetuses and outline the critical steps and potential pitfalls of this technique.

A Mouse Model of in Utero Transplantation

The mouse model of in utero transplantation is a versatile tool that can be used to study the potential clinical applications of stem cell transplantation and gene therapy in the fetus. In this protocol, we present a general approach to performing this technique

במודל עכבר של בתוך הרחם השתלה

The transplantation of stem cells and viruses in utero has tremendous potential for treating congenital disorders in the human fetus.  For example, in ...

Mouse Complete Stasis Model of Inferior Vena Cava Thrombosis

Venous thromboembolism (VTE) includes both deep vein thrombosis (DVT) and pulmonary embolism (PE). In the United States (U.S.), the high morbidity and mortality rates make VTE a serious health concern 1-2. After heart disease and stroke, VTE is the third most common vascular disease 3. In the U.S. alone, there is an estimated 900,000 people affected each year, with 300,000 deaths occurring annually 3. A reliable in vivo animal model to study the mechanisms of this disease is necessary.
The advantages of using the mouse complete stasis model of inferior vena cava thrombosis are several. The mouse model allows for the administration of very small volumes of limited availability test agents, reducing costs dramatically. Most promising is the potential for mice with gene knockouts that allow specific inflammatory and coagulation factor functions to be delineated. Current molecular assays allow for the quantitation of vein wall, thrombus, whole blood, and plasma for assays. However, a major concern involving this model is the operative size constraints and the friability of the vessels. Also, due to the small IVC sample weight (mean 0.005 grams) it is necessary to increase animal numbers for accurate statistical analysis for tissue, thrombus, and blood assays such as real-time polymerase chain reaction (RT-PCR), western blot, enzyme-linked immunosorbent (ELISA), zymography, vein wall and thrombus cellular analysis, and whole blood and plasma assays 4-8.
The major disadvantage with the stasis model is that the lack of blood flow inhibits the maximal effect of administered systemic therapeutic agents on the thrombus and vein wall.

The mouse complete stasis model of inferior vena cava thrombosis yields quantifiable amounts of vein wall tissue and thrombus. It has proven useful for evaluating interactions between the vein wall and the occlusive thrombus and in assessing the progression from acute to chronic inflammation.

עכבר דגם השלם הקיפאון של פקקת נחותים הווריד הנבוב

Venous thromboembolism (VTE) includes both deep vein thrombosis (DVT) and pulmonary embolism (PE).  In the United States (U.S.), the high morbidity and ...

Rapid Point-of-Care Assay of Enoxaparin Anticoagulant Efficacy in Whole Blood

There is the need for a clinical assay to determine the extent to which a patient's blood is effectively anticoagulated by the low-molecular-weight-heparin (LMWH), enoxaparin. There are also urgent clinical situations where it would be important if this could be determined rapidly. The present assay is designed to accomplish this. We only assayed human blood samples that were spiked with known concentrations of enoxaparin. The essential feature of the present assay is the quantification of the efficacy of enoxaparin in a patient's blood sample by degrading it to complete inactivity with heparinase. Two blood samples were drawn into Vacutainer tubes (Becton-Dickenson; Franklin Lakes, NJ) that were spiked with enoxaparin; one sample was digested with heparinase for 5 min at 37 &deg;C, the other sample represented the patient's baseline anticoagulated status. The percent shortening of clotting time in the heparinase-treated sample, as compared to the baseline state, yielded the anticoagulant contribution of enoxaparin. We used the portable, battery operated Hemochron 801 apparatus for measurements of clotting times (International Technidyne Corp., Edison, NJ). The apparatus has 2 thermostatically controlled (37 &deg;C) assay tube wells. We conducted the assays in two types of assay cartridges that are available from the manufacturer of the instrument. One cartridge was modified to increase its sensitivity. We removed the kaolin from the FTK-ACT cartridge by extensive rinsing with distilled water, leaving only the glass surface of the tube, and perhaps the detection magnet, as activators. We called this our minimally activated assay (MAA). The use of a minimally activated assay has been studied by us and others. 2-4 The second cartridge that was studied was an activated partial thromboplastin time (aPTT) assay (A104). This was used as supplied from the manufacturer. The thermostated wells of the instrument were used for both the heparinase digestion and coagulation assays. The assay can be completed within 10 min. The MAA assay showed robust changes in clotting time after heparinase digestion of enoxaparin over a typical clinical concentration range. At 0.2 anti-Xa I.U. of enoxaparin per ml of blood sample, heparinase digestion caused an average decrease of 9.8% (20.4 sec) in clotting time; at 1.0 I.U. per ml of enoxaparin there was a 41.4% decrease (148.8 sec). This report only presents the experimental application of the assay; its value in a clinical setting must still be established.

Demonstration of a rapid quantitative assay of the inhibition of blood coagulation by the low-molecular-weight-heparin, enoxaparin. The contribution of enoxaparin is assessed by removing its influence through digestion with heparinase. A fuller description of the assay is detailed in our published paper.1 The assay still requires clinical confirmation.

Point-of-Care Assay המהיר של יעילות קרישת הדם enoxaparin בכל

There is the need for a clinical assay to determine the extent to which a patient's blood is effectively anticoagulated by the ...

Intraductal Injection of LPS as a Mouse Model of Mastitis: Signaling Visualized via an NF-&kappa;B Reporter Transgenic

Animal models of human disease are necessary in order to rigorously study stages of disease progression and associated mechanisms, and ultimately, as pre-clinical models to test interventions. In these methods, we describe a technique in which lipopolysaccharide (LPS) is injected into the lactating mouse mammary gland via the nipple, effectively modeling mastitis, or inflammation, of the gland. This simulated infection results in increased nuclear factor kappa B (NF-&kappa;B) signaling, as visualized through bioluminescent imaging of an NF-&kappa;B luciferase reporter mouse1.
Our ultimate goal in developing these methods was to study the inflammation associated with mastitis in the lactating gland, which often includes redness, swelling, and immune cell infiltration2,3. Therefore, we were keenly aware that incision or any type of wounding of the skin, the nipple, or the gland in order to introduce the LPS could not be utilized in our methods since the approach would likely confound the read-out of inflammation. We also desired a straight-forward method that did not require specially made hand-drawn pipettes or the use of micromanipulators to hold these specialized tools in place. Thus, we determined to use a commercially available insulin syringe and to inject the agent into the mammary duct of an intact nipple. This method was successful and allowed us to study the inflammation associated with LPS injection without any additional effects overlaid by the process of injection. In addition, this method also utilized an NF-&kappa;B luciferase reporter transgenic mouse and bioluminescent imaging technology to visually and quantitatively show increased NF-&kappa;B signaling within the LPS-injected gland4.
These methods are of interest to researchers of many disciplines who wish to model disease within the lactating mammary gland, as ultimately, the technique described here could be utilized for injection of a number of substances, and is not limited to only LPS.

Described here is a technique in which lipopolysaccharide is injected into the lactating mouse mammary gland via the nipple to simulate mastitis, a condition commonly caused by bacterial infection. Lipopolysaccharide injection results in increased nuclear factor kappa B (NF-&kappa;B) signaling, visualized through bioluminescent imaging of an NF-&kappa;B luciferase reporter mouse.

הזרקת Intraductal של LPS כמודל עכבר של דלקת בשד: איתות מדמיינת דרך NF-κB כתב מהונדס

Animal models of human disease are necessary in order to rigorously study stages of disease progression and associated mechanisms, and ultimately, as ...

The In ovo CAM-assay as a Xenograft Model for Sarcoma

Sarcoma is a very rare disease that is heterogeneous in nature, all hampering the development of new therapies. Sarcoma patients are ideal candidates for personalized medicine after stratification, explaining the current interest in developing a reproducible and low-cost xenotransplant model for this disease. The chick chorioallantoic membrane is a natural immunodeficient host capable of sustaining grafted tissues and cells without species-specific restrictions. In addition, it is easily accessed, manipulated and imaged using optical and fluorescence stereomicroscopy. Histology further allows detailed analysis of heterotypic cellular interactions.
This protocol describes in detail the in ovo grafting of the chorioallantoic membrane with fresh sarcoma-derived tumor tissues, their single cell suspensions, and permanent and transient fluorescently labeled established sarcoma cell lines (Saos-2 and SW1353). The chick survival rates are up to 75%. The model is used to study graft- (viability, Ki67 proliferation index, necrosis, infiltration) and host (fibroblast infiltration, vascular ingrowth) behavior. For localized grafting of single cell suspensions, ECM gel provides significant advantages over inert containment materials. The Ki67 proliferation index is related to the distance of the cells from the surface of the CAM and the duration of application on the CAM, the latter determining a time frame for the addition of therapeutic products.

The In ovo CAM-assay as a Xenograft Model for Sarcoma

The in ovo chorioallantoic membrane (CAM) is grafted with fresh sarcoma-derived tumor tissues, their single cell suspensions, and permanent and transient fluorescently labeled established sarcoma cell lines. The model is used to study graft- (viability, Ki67 proliferation index, necrosis, infiltration) and host (fibroblast infiltration, vascular ingrowth) behavior.

<em&gt; באוב</em&gt; CAM-assay כXenograftmodel לסרקומה

Sarcoma is a very rare disease that is heterogeneous in nature, all hampering the development of new therapies. Sarcoma patients are ideal candidates for ...

An Alkali-burn Injury Model of Corneal Neovascularization in the Mouse

Under normal conditions, the cornea is avascular, and this transparency is essential for maintaining good visual acuity. Neovascularization (NV) of the cornea, which can be caused by trauma, keratoplasty or infectious disease, breaks down the so called &lsquo;angiogenic privilege' of the cornea and forms the basis of multiple visual pathologies that may even lead to blindness. Although there are several treatment options available, the fundamental medical need presented by corneal neovascular pathologies remains unmet. In order to develop safe, effective, and targeted therapies, a reliable model of corneal NV and pharmacological intervention is required. Here, we describe an alkali-burn injury corneal neovascularization model in the mouse. This protocol provides a method for the application of a controlled alkali-burn injury to the cornea, administration of a pharmacological compound of interest, and visualization of the result. This method could prove instrumental for studying the mechanisms and opportunities for intervention in corneal NV and other neovascular disorders.

Neovascularization (NV) of the cornea can complicate multiple visual pathologies. Utilizing a controlled, alkali-burn injury model, a quantifiable level of corneal NV can be produced for mechanistic study of corneal NV and evaluation of potential therapies for neovascular disorders.

פגיעה דגם אלקלי לשרוף של הקרנית neovascularization בעכבר

Under normal conditions, the cornea is avascular, and this transparency is essential for maintaining good visual acuity. Neovascularization (NV) of the ...

Excitotoxic Stimulation of Brain Microslices as an In vitro Model of Stroke

Examining molecular mechanisms involved in neuropathological conditions, such as ischemic stroke, can be difficult when using whole animal systems. As such, primary or &#39;neuronal-like&#39; cell culture systems are commonly utilized. While&#160;these systems are relatively easy to work with, and are useful model systems in which various functional outcomes (such as cell death) can be readily quantified, the examined outcomes and pathways in cultured immature neurons (such as excitotoxicity-mediated cell death pathways) are not necessarily the same as those observed in mature brain, or in intact tissue. Therefore, there is the need to develop models in which cellular mechanisms in mature neural tissue can be examined. We have developed an in vitro technique that can be used to investigate a variety of molecular pathways in intact nervous tissue. The technique described herein utilizes rat cortical tissue, but this technique can be adapted to use tissue from a variety of species (such as mouse, rabbit, guinea pig, and chicken) or brain regions (for example, hippocampus, striatum, etc.). Additionally, a variety of stimulations/treatments can be used (for example, excitotoxic, administration of inhibitors, etc.). In conclusion, the brain slice model described herein can be used to examine a variety of molecular mechanisms involved in excitotoxicity-mediated brain injury.

Excitotoxic Stimulation of Brain Microslices as an In vitro Model of Stroke

We have developed a brain slice model which can be used to examine molecular mechanisms involved in excitotoxicity-mediated brain injury.&#160;This technique generates viable mature brain tissue and reduces animal numbers required for experimentation, whilst keeping the neuronal circuitry, cellular interactions, and postsynaptic compartments partly intact.

הפעלת יתר רעיל גירוי של המוח כMicroslices<em&gt; במבחנה</em&gt; דגם של שבץ

Examining molecular mechanisms involved in neuropathological conditions, such as ischemic stroke, can be difficult when using whole animal systems. As ...

A Mouse Model for Laser-induced Choroidal Neovascularization

The mouse laser-induced choroidal neovascularization (CNV) model has been a crucial mainstay model for neovascular age-related macular degeneration (AMD) research. By administering targeted laser injury to the RPE and Bruch&#8217;s membrane, the procedure induces angiogenesis, modeling the hallmark pathology observed in neovascular AMD. 
First developed in non-human primates, the laser-induced CNV model has come to be implemented into many other species, the most recent of which being the mouse. Mouse experiments are advantageously more cost-effective, experiments can be executed on a much faster timeline, and they allow the use of various transgenic models. The miniature size of the mouse eye, however, poses a particular challenge when performing the procedure. Manipulation of the eye to visualize the retina requires practice of fine dexterity skills as well as simultaneous hand-eye-foot coordination to operate the laser. However, once mastered, the model can be applied to study many aspects of neovascular AMD such as molecular mechanisms, the effect of genetic manipulations, and drug treatment effects. 
The laser-induced CNV model, though useful, is not a perfect model of the disease. The wild-type mouse eye is otherwise healthy, and the chorio-retinal environment does not mimic the pathologic changes in human AMD. Furthermore, injury-induced angiogenesis does not reflect the same pathways as angiogenesis occurring in an age-related and chronic disease state as in AMD.
Despite its shortcomings, the laser-induced CNV model is one of the best methods currently available to study the debilitating pathology of neovascular AMD. Its implementation has led to a deeper understanding of the pathogenesis of AMD, as well as contributing to the development of many of the AMD therapies currently available.

Here, we present the mouse laser-induced choroidal neovascularization (CNV) protocol, an experimental model that re-creates the vascular hallmarks of neovascular age-related macular degeneration (AMD). Once mastered, it can reliably and effectively induce CNV as a model system to test various experimental measures.

מודל עכבר לneovascularization Choroidal מושרה לייזר

The mouse laser-induced choroidal neovascularization (CNV) model has been a crucial mainstay model for neovascular age-related macular degeneration (AMD) ...

Tachycardia-Induced Cardiomyopathy As a Chronic Heart Failure Model in Swine

A stable and reliable model of chronic heart failure is required for many experiments to understand hemodynamics or to test effects of new treatment methods. Here, we present such a model by tachycardia-induced cardiomyopathy, which can be produced by rapid cardiac pacing in swine.
A single pacing lead is introduced transvenously into fully anaesthetized healthy swine, to the apex of the right ventricle, and fixated. Its other end is then tunneled dorsally to the paravertebral region. There, it is connected to an in-house modified heart pacemaker unit that is then implanted in a subcutaneous pocket. 
After 4 - 8 weeks of rapid ventricular pacing at rates of 200 - 240 beats/min, physical examination revealed signs of severe heart failure - tachypnea, spontaneous sinus tachycardia, and fatigue. Echocardiography and X-ray showed dilation of all heart chambers, effusions, and severe systolic dysfunction. These findings correspond well to decompensated dilated cardiomyopathy and are also preserved after the cessation of pacing.
This model of tachycardia-induced cardiomyopathy can be used for studying the pathophysiology of progressive chronic heart failure, especially hemodynamic changes caused by new treatment modalities like mechanical circulatory supports. This methodology is easy to perform and the results are robust and reproducible.

Here, we present a protocol to produce tachycardia-induced cardiomyopathy in swine. This model represents a potent way to study the hemodynamics of progressive chronic heart failure and the effects of applied treatment.

טכיקרדיה-Induced קרדיומיופתיה כמודל אי ספיקת לב כרונית, חזיר

A stable and reliable model of chronic heart failure is required for many experiments to understand hemodynamics or to test effects of new treatment ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and drugs. It is widely used in many studies on the physiological functions of vascular smooth muscle, the pathogenesis of vascular diseases such as hypertension, and the development of smooth muscle relaxant drugs. The mouse is a widely used model animal with a large pool of disease models and genetically modified strains. We introduced this method to measure the isometric contraction of mouse mesenteric artery in detail. A 1.4-mm segment of mouse mesenteric resistance artery was isolated and mounted on a myograph chamber by passing two steel wires through its lumen. After equilibration and normalization steps, the vessel segment was potentiated by a high-K+ solution twice prior to the contraction assay. As an example of the application of this method in drug development, we measured the relaxant effect of a novel natural substance, neoliensinine, isolated from a Chinese herb, embryos of the lotus seed (Nelumbo nucifera Gaertn.) on mouse mesenteric arteries. The vessel segments mounted on the myograph chamber were stimulated with a high-K+ solution. When the force tension reached a stable sustained phase, cumulative doses of neoliensinine were added to the chamber. We found that neoliensinine had a dose-dependent relaxant effect on smooth muscle contraction, thus suggesting that it bears potential activity against hypertension. In addition, as the vessel segment can survive at least 4 hours after mounting and maintain contractility induced by the high-K+ solution for many times, we suggest that the wire myograph system may be used for the time-consuming process of drug screening.

The wire myograph technique is used to investigate vascular smooth muscle functions and screen new drugs. We report a detailed protocol for measuring the isometric contractility of the mouse mesenteric artery and for screening new relaxants of vascular smooth muscle.

Contractility איזומטרי מדידה של עורק מצע המעי העליון העכבר באמצעות חוט Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...