JoVE Logo

Sign In

ניהול מורכב 4

Overview

מקור: קיי סטיוארט, RVT, RLATG, CMAR; ואלרי א. שרודר, אר.די.ג'י, אר-אל-ג'י. אוניברסיטת נוטרדאם, IN

ישנם מסלולים נפוצים רבים לניהול מורכב בעכברים במעבדה וחולדות. פרוטוקולים עשויים, עם זאת, לדרוש את השימוש במסלולים פחות נפוצים: תוך לב, footpad, וזריקות רטרו-מסלולית. הכשרה מיוחדת חיונית להליכים אלה להתבצע בהצלחה. ייתכן שיהיה צורך בהצדקה למסלולים אלה כדי לקבל אישור של ועדת טיפול ושימוש בבעלי חיים מוסדיים (IACUC).

Principles

ניהול תוך-לב שימש במגוון יישומים, כולל פיתוח מודל בעלי חיים של גרורות סרטן העצם, כמו גם בדיקה של ההשפעות של לידה תוך-לבבית ישירה על התוצאה של אוטם שריר הלב. הליך זה נעשה לעתים קרובות באמצעות אולטרסאונד כדי להנחות את המחט למיקום הנכון בלב. 2 עם זאת, כאשר מבוצע כראוי ניצול נכון של ציוני דרך נכונה, הליך זה יכול להתבצע ללא שימוש ויזואליזציה אולטרסאונד.

בשל האופי החדיר של ההליך, השימוש בהזרקה תוך-לבבית חייב להיות מוצדק מדעית בפרוטוקול IACUC. רק זריקת הישרדות אחת צריכה להיות מותרת. הליך זה מחייב שימוש בהרדמה כללית, משאיפה או להזרקה, בהתאם להנחיות שנקבעו בתוך הארגון. בחירת מחט צריך להיות הגודל הקטן ביותר האפשרי שיאפשר את הצמיגות של החומר מוזרק; בדרך כלל, מחט 27-30 מד משמש. נפחי הזרקה נעים בין 100 μL למקסימום של 300 μL.

זריקות תוך ורידי בזנב של עכברים הן מאתגרות ולעתים קרובות לא מוצלחות. מסלול חלופי של ניהול תוך ורידי הוא דרך מקלעת רטרו-מסלולית. בעוד טכניקה זו מחייבת אימון ומיומנות לבצע, מחקרים הראו כי יש שיעור הצלחה גבוה יותר עם הזרקת רטרו-מסלולית מאשר עם הזרקת וריד זנב לרוחב. 3, 4, 5 הרדמה נדרשת כדי למנוע מהעכבר לזוז במהלך ההליך. הרדמה משאיפה כללית המועברת באמצעות צנצנת פעמון או תא אינדוקציה המחובר לאידוי מדויק יעילה. עם זאת, אם ייעשה שימוש במשאף, שימו לב כי החיה תתחיל להתאושש במהירות ברגע שהיא תוסר מהתא, ולכן יש להיות מוכנים לבצע את ההזרקה. הרדמה אופטלמית אקטואלית (טטרקאין או פרופראקאין) מומלצת כאשר יש לבצע זריקות מרובות.

המבנה ורידי מסלולית של העכבר והחולדה שונים. לעכבר יש סינוס או התכנסות של מספר כלי שיט, כולל הווריד העל-עורי, וריד האף הגבי, הווריד הפלפבריאלי הנחות, והוורידים הטמפורליים השטחיים הממלאים את החלל במסלול סביב העין. באזור מסלול החולדה, יש רשת או מקלעת של כלי שיט. כמו עם כל הזריקות, המחט שנבחרה צריכה להיות בגודל הקטן ביותר האפשרי; בדרך כלל מחט 27-30 מד. למרות שהיו דיווחים על אמצעי אחסון גדולים יותר, הנפח המרבי הוא 150 μL לעין. 3, 4, 5 זריקה אחת לכל עין, ליום, מומלץ, עם סך של שתי זריקות לכל עין עבור הליכי הישרדות. כמו כן, צריך להיות לפחות מרווח של יום אחד בין זריקות. עבור הליך לאurvivival, אמצעי אחסון עד 500 μL יכול להינתן.

למרות המחלוקת, השימוש כרית כף הרגל כאתר הזרקה עדיין נדרש עבור כמה מחקרים. הוכח כי כאשר מוזרק דרך כרית הרגל, תגובת הנוגדנים בזני עכבר מסוימים הייתה חזקה משמעותית מאשר כאשר מוזרק לתוך למשכן. 6 כל בעלי החיים חייבים להיות במעקב צמוד לסימני כאב, רמת צריכת מזון, ועל אמביציה נורמלית. השחתה עצמית של כף הרגל יכולה להתרחש במידה של כף הרגל נהרסת. זה סימן לכאב כרוני. כל בעל חיים המפגין השחתה עצמית צריך להיקרא מיד לידיעת הצוות הווטרינרי.

מדידות Footpad צריך להיעשות מדי יום ברגע נפיחות ברורה התרחשה. נקודות הקצה חייבות להיות במקומן בהתאם להנחיות IACUC. בדרך כלל, החיה חייבת להיות מורדמת כאשר הנגע או הגידול מפריע ליכולתו של בעל החיים לטבול או להגיע למזון ומים. אמצעי האחסון המרבי שניתן להזריק למשטח רגליים הוא 50 μL. מחט 29-30 מד מומלץ עבור הזרקה.

Procedure

1. הזרקת תוך לב

  1. ציוני דרך ומיצוב: מקם את העכבר או החולדה בנסיגה רוחבית ימנית (כאשר הצד השמאלי פונה כלפי מעלה) או בנסיגה הגבית, וזיהה את ציוני הדרך.
    1. מקם את הלב בערך ברמה עם נקודת המרפק ובדיוק משמאל בעצם החזה.
    2. הכנס את המחט בין הצלעות בנקודת המרפק.
    3. בחיה בנסיגה הגבית, הכנס את המחט לחזה במקביל לשולחן.
    4. בחיה בנסיגה לרוחב, הכנס את המחט לתוך החזה בניצב לשולחן.
  2. הזרקת המאמר
    1. ודא שיש תנועה מינימלית של המחט ברגע שהוא מוכנס לתוך הלב כדי למנוע את השריר מלהיות קרוע ולגרום לדימום לתוך שק קרום הלב, כמו זה פוגע בתפקוד הלב.
    2. שאפו את המזרק כדי לקבוע מיקום נכון. לעתים קרובות יש הבזק של דם לתוך הרכזת של המזרק.
    3. החזק את המזרק כך היד לא ממוקמת מחדש על המזרק להזרקה לאחר המחט כבר ממוקם בלב.
    4. הזריקו את המאמר בצורה איטית ויציבה.
    5. למשוך את המחט לאט כדי למזער את הדימום.
    6. עכברים שחווים מצוקה נשימתית, התקף, כיחלון, אטקסיה ממושכת או המשך אחר הקשור לטראומה בהזרקה חייבים להיות מוערכים על ידי הצוות הווטרינרי ולה מורדם על פי המלצתם.

Figure 1
איור 1. הזרקת תוך לב בעכברים.

2. הזרקה תוך ורידי תוך ורידי תוך שימוש מקלעת רטרו-מסלולית

  1. ציוני דרך ומיצוב הזרקה
    1. מניחים את החיה על משטח שטוח בנסיגה לרוחב.
    2. הכנס את המחט לתוך הקנתוס המהודל של העין בזווית של 45° לאף.
    3. עומק המחט חייב להיות מספיק כדי לחדור את רקמות הלחמית ולקדם מאחורי מסלול העין לתוך מקלעת העין. בעת הצבת המחט, זה לא צריך להיתקל העצם בחלק האחורי של המסלול.
    4. הנח את האצבע המורה על החלק העליון של הראש עם האגודל על הלסת.
    5. יש למשוך בעדינות אחורה ולמטה כדי להדק את העור ולבלט את גלגל העין.
    6. יש להחריד לא להפעיל לחץ על קנה הנשימה ולהגביל את זרימת האוויר.
  2. זריקה
    1. מניחים את המחט מאחורי העין ולא תוך עינית.
    2. ודא כי המחט יש תנועה מינימלית פעם מוכנס לתוך מקלעת רטרו-מסלולית, או כלי השיט יהיה לקרוע גרימת דימום ואובדן של הסוכן לתוך הרקמות מאחורי העין. החזק את המזרק כך היד לא ממוקמת מחדש על המזרק להזרקה לאחר המחט כבר ממוקם מקלעת רטרו-מסלולית.
    3. אל תשאף עם המזרק, כפי שאתה תמוטט את כלי הדם.
    4. הזריקו את המאמר בצורה איטית ויציבה.
    5. למשוך את המחט ולהפעיל לחץ אור על העין כדי לשלוט דימום כדי לספק hemostasis.
    6. עכברים שחווים נפיחות, דלקת הלחמית או המשך אחר הקשור לטראומה בהזרקה חייבים להיות מוערכים על ידי הצוות הווטרינרי ומטופלים או מורדם על פי המלצתם

Figure 2
איור 2. הזרקת מסלול רטרו בעכברים.

3. הזרקת משטח רגליים

  1. לאיפוק, מניחים את החיה בצינור איפוק עם רגל אחורית אחת מבודדת, ומתארכים על ידי אחיזת העור מעל המחניק.
  2. לנגב את הרגל עם מים או אלכוהול כדי להסיר פסולת לפני ההזרקה.
  3. הזרקה תת עורית למרכז כף הרגל האחורית ויוצרת bleb קטן באתר ההזרקה. כדי למנוע את כלי הדם הפועל באורך כף הרגל, להזריק ממש את קו האמצע במקביל לכלי.

Figure 3
איור 3. הזרקת משטח רגליים בעכברים וחולדות.

Application and Summary

ניהול תרכובות לבעלי חיים יכול להיות בעל השפעה משמעותית הן על רווחת החיה והן על התוצאה של הנתונים הניסיוניים והערך המדעי. שיטת המסירה הנכונה חיונית להצלחת הניסוי. גורמים רבים חייבים להיחשב כדי לקבוע את המסלול הטוב ביותר, כולל המטרה המדעית של המחקר, ה- pH של החומר, נפח המינון הנדרש, צמיגות החומר, ואת הרווחה של בעלי החיים. מומחיות טכנית היא גם דרישה לכל שיטות ההזרקה.

Tags

Compound AdministrationIV InjectionIntracardiac InjectionRetro Orbital InjectionFootpad InjectionSpecialized Injection MethodsBiomedical ResearchArterial CirculationVenous CirculationSubcutaneous AdministrationUltrasound GuidanceLandmarksGeneral AnestheticSurvival ProceduresNeedle GaugeMaximum Volume Of AdministrationMiceRats

Skip to...

0:00

Overview

1:02

Considerations for the Specialized Injections

3:40

Intracardiac Injection

6:54

Retro Orbital Injection

8:39

Footpad Injection

10:07

Applications

11:21

Summary

Videos from this collection:

article

Now Playing

ניהול מורכב 4

Lab Animal Research

52.1K Views

article

טכניקות טיפול וריסון מכרסמים

Lab Animal Research

176.0K Views

article

נהלי טיפול בסיסיים

Lab Animal Research

28.1K Views

article

יסודות הרבייה והנגייה

Lab Animal Research

35.9K Views

article

זיהוי מכרסמים I

Lab Animal Research

55.1K Views

article

זיהוי מכרסמים II

Lab Animal Research

25.7K Views

article

ניהול מורכב I

Lab Animal Research

101.4K Views

article

ניהול מתחם II

Lab Animal Research

35.2K Views

article

ניהול מתחם III

Lab Animal Research

31.7K Views

article

נסיגת דם I

Lab Animal Research

172.8K Views

article

נסיגת דם II

Lab Animal Research

74.0K Views

article

אינדוקציה ותחזוקה של הרדמה

Lab Animal Research

51.1K Views

article

שיקולים לניתוח מכרסמים

Lab Animal Research

22.6K Views

article

אבחון נקרופסיה וקציר רקמות

Lab Animal Research

58.5K Views

article

קציר רקמות סטריליות

Lab Animal Research

35.0K Views

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Research

Education

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved