Method Article
מאמר זה מציג את הליך אופטימלי עבור הדמיה של מצעים העצביים של גירוי שמיעתי במוח ציפור השיר באמצעות תהודה מגנטית תפקודית (fMRI). הוא מתאר את ההכנה של גירויי קול, מיקום של הנושא והרכישה וניתוח שלאחר מכן את נתוני ה-fMRI.
נוירוביולוגיה של ציוץ הציפורים, כמודל לדיבור אנושי, היא אזור בולט של מחקר במדעי המוח התנהגותיים. אילו electrophysiology ומולקולרי גישות לאפשר החקירה או גירויים שונים על כמה תאי עצב, או גירוי אחד בחלקים גדולים של המוח, רמת חמצון בדם תלויה (BOLD) דימות תהודה מגנטית תפקודית (fMRI) מאפשרת שילוב של שני היתרונות, כלומר להשוות את ההפעלה העצבית הנגרם על ידי גירויים שונים במוח כולו בבת אחת. fMRI בציפור שיר מאתגר בגלל גודלו הקטן של המוח שלהם ובגללם את עצמות הגולגולת שלהם ובעיקר מהווה חללי אוויר רבים, גרימת חפצי רגישות חשובות. שיפוע ההד (GE) fMRI BOLD יושם בהצלחה לציפור שיר (1-5 לביקורת, ראה 6). מחקרים אלה התמקדו באזורים במוח השמיעתי הראשוניים ומשניים, שהם אזורים חופשיים של חפצים רגישים. עם זאת, בגלל procהנון של עניין עשוי להתרחש מעבר לאזורים אלה, נדרש כל fMRI BOLD המוח באמצעות רצף ה-MRI פחות רגיש לממצאים אלה. זו יכולה להיות מושגת על ידי שימוש בספין הד (SE) fMRI BOLD 7,8. במאמר זה, אנו מתארים כיצד להשתמש בטכניקה זו בפרושי זברה (Taeniopygia guttata), שהם ציפור שיר קטן עם משקל גוף של 15-25 גרם נחקר רב במדעי מוח התנהגות של ציוץ הציפורים. הנושא העיקרי של מחקרי fMRI על ציפור שיר הוא שיר תפיסה ולמידת שיר. הטבע השמיעתי של הגירויים בשילוב עם רגישות BOLD החלשה של SE (בהשוואה ל-GE) רצפי fMRI מבוסס הופכים את היישום של טכניקה זו מאוד מאתגר.
1. הכנה של הגירויים שמיעתיים
2. הכנת נושא
2.1 נושא וגודל קבוצה
כאן אנו מציגים פרוטוקול במיוחד מותאם לשימוש (למבוגרים בלבד) פינק זברה. הבחירה של המינים תלויים בשאלות מדעיות. עם זאת, שיקולים אחרים כמו חוסן ציפור להרדמה יכולים גם להילקח בחשבון. הזברה פינק (Taeniopygia guttata) צריך להיות שוכנו בבתי גידול תחת אור 12 שעות: photoperiod החשוך 12 שעות ויש לי גישה כלרצונך מודעת מזון ומים לאורך כל תקופת המחקר. המספר מינימאלי של אנשים לניסוי הוא 15. מספר זה לוקח בחשבון את הרגישות של fMRI ספין הד והשונות בין הפרט הטבעי של תופעות ביולוגיות שנמדדו בניסוי.
2.2 התקנת ההתקנה והכנה של בעלי החיים
(לפירוטשל הציוד המשומש, אנו מתייחסים לרשימה של חומרים כימיים וציוד ספציפיים בסוף המאמר זה)
כאמור, מערכת MR 7T משמשת בהתקנה המוצגת. מערכות אחרות MR עם עוצמות שדה שונות הם גם אפשרי, אבל ב7T תושג פשרה טובה בין יחס אות לרעש ורמה של חפצים רגישים (ראה דיון). בעוצמות שדה גבוהות יותר יחס אות לרעש יגדל יחד עם מידת רגישות של חפצים.
3. רכישת נתונים
4. עיבוד נתונים
אלטרנטיבה לכך היא השימוש ב'SPMMouse 'שהוא ארגז כלים המאפשרים SPM לפתוח ולנתח את קבצים של כל ממד voxel. הכלי מאפשר "המוח של הזכוכית" SPM להיווצר מכל תמונה, ומתאים באופן אוטומטי כברירת מחדל סולמות אורך המבוססים על הכותרות של קבצי תמונה או נתונים שהוזנו משתמש. לפיכך, ארגז כלים זה עובד בכיוון ההפוך ממה שאנו מציעים. במקום לשנות את גודל voxel של תמונות כדי להתאים בSPM, את הגדרות ברירת המחדל של SPM משתנות להשתמש בתמונות בגדלים שונים voxel.
אנחנו כאן מוצגים ויזואלית רצף אופטימיזציה של הליכים להדמיה מוצלחת של מצעים עצביים של גירויים שמיעתיים במוח פינק הזברה. ראשית, ההליך המתואר להכנה של תוצאות הגירויים השמיעתיות בגירויים שיכול להיות משולב בתוך ON / OFF הפרדיגמה בלוק (איור 2) וכי הם מנורמלים לחסל את ההבדלים פוטנציאליים ברמת לחץ קול שיכול לעורר תגובת ההפרש במוח . לאחר ההכנה פינק הזברה לסריקת MRI ומיקומה לתוך נשא של המגנט (איור 1), ניתן לרכוש fMRI. בנוסף, תמונה ברזולוציה גבוהה 3D היא נלקחה על מנת לנרמל את הנתונים לזברה פינק אטלס 9. לבסוף, ניתוח מראש ועיבוד הסטטיסטי של הנתונים מאפשר הדמיה של התוצאות שהתקבלו (איור 6).
69/4369fig1.jpg "alt =" איור 1 "עבור: תוכן-width =" 4.5in "עבור: src =" / files/ftp_upload/4369/4369fig1highres.jpg "/>
איור 1. Spectrograms של רעש לבן שנרשם במטרה לבסס תדרים שעברו שיפור / דיכא בתוך המגנט נשא. רעש לבן א מחוץ למגנט נשא. רעש הלבן ב נרשם במיקום של הראש של ציפור בתוך המגנט נשא. ג הלבן רעש לאחר יישום של פונקצית אקולייזר לתיקון תדרים משופרים / מדוכא.
איור 2. סקירה כללית של ON / OFF הפרדיגמה בלוק שבו תקופות גירוי שמיעתיות לסירוגין עם תקופות מנוחה. כל בלוק (גירוי / מנוחה) נמשכת 16 שניות שבמהלכו 2 תמונות נרכשות. את הגירויים השונים מורכבים ממוטיבים מייצגים של שירת ציפורים או סוגים אחרים של צלילבהתאם לניסוי. מוטיבים אלה בשרשור ומשולבים עם תקופות שקטות ומשך תקופות השקטות מותאם כדי לשמור על הסכום הכולל של קול ודממה זהה על כל הגירויים.
איור 3. מיטת התקנה לfMRI השמיעתי בציפור שיר קטן א בעלי חיים הבלעה:.. סקירה סכמטית מפורטת של המיצוב של ציפור במיטת בעלי החיים של הסורק: סליל ראש RF ב ', מסכת ג עם מקור אספקה של גז ההרדמה ד, אוזניות אינן מגנטיות E., חיישן כרית פ פנאומטי ללפקח על קצב הנשימה, הבדיקה טמפרטורת ביוב ג', מערכת חימום מבוקרת ח'משוב כדי לשמור על גוףטמפרטורה של ציפור היציבה בזמן המדידה. לחץ כאן לצפייה בדמות גדולה.
איור 4. גיאומטריה פרוסת הדמיה fMRI המוח כולו. הרכב של צילומי מסך מעורך גיאומטריה בתוכנת פאראוויזיון. רכשו בעבר בתמונות ציריות, sagittal ועטרה נדירה ניווט של משמשות להגדיר את כיוון הפרוסה לסריקת fMRI.
איור 5. תצוגה לרוחב של ייצוג 3D של האונה השמאלית עם מבנים שמסומנים מהזברה פינק 9 האטלס, מוקרן על פרוסה באמצע sagittal שלה. קוד הצבע של הגרעינים שמסומן מוצגת בצד ימין. delineat אלהמבני אד הם חלק ממסלול המנוע הקולני: HVC, גרעין robustus arcopallii (ע"ר), nXII Pars tracheosyringealis (nXIIts); מסלול המוח הקדמי הקדמי: גרעין lateralis magnocellularis Pars lateralis (LMAN), אזור X (X), מערכת השמיעה: שדה L, גרעין ovoidalis (אוב), גרעין mesencephalicus lateralis Pars dorsalis (MLD); מערכת חוש הריח: חוש הריח הנורה (OB); מערכת ראייה ו: גרעין entopalliallis (E), tectum opticum (teo).
איור 6. דוגמה לתגובת BOLD fMRI באזור העיקרי השמיעתי, L שדה, ובאזורים הסמוכים שמיעתיים משניים המתעוררים בעקבות גירויים שמיעתיים שונים בהשוואה למצב המנוחה. הדימויים מורכבים של מפות פרמטריים סטטיסטיות על גבי תמונות אנטומיות ברזולוציה גבוהה מהמוח פינק הזברה אטלס 9. T-ערכים מקודד לפי צבע פיקנה המידה מוצגת באיור ורק voxels בי מבחן t נמצא להיות משמעותי (p <0.001) מוצגים.
בדו"ח זה, אנו מתארים פרוטוקול מותאם לאפיון מפורט בvivo של מצעים עצביים של גירוי שמיעתי בפרושי זברה מורדמים.
בקנה אחד עם הפרוטוקול שהוצג, רוב מחקרי הפעלת מוח תפקודיים בבעלי חיים באמצעות fMRI BOLD, לטשטש את בעלי החיים בזמן הרכישה. אילוף בעלי חיים להרגיל אותם לסביבת המגנט והרעש של הסורק בתקופות הלימוד הוא גם אפשרי, אלא זמן רב ומאתגר, ולכן העסיק רק לעתים נדירות.
למרות שההרדמה ממזערת תופעות מתח מושרה על התגובות הפיזיולוגיות של עניין ומקלה על טיפול בבעלי חיים, השפעתו הן על התגובה העצבית ועל תפקוד ההעברה בין הפעילות העצבית והתגובה נמדדה בBOLD fMRI הוא נושא למחקר מתמשך וחשוב . לכן, את ההשפעות של הרדמה על תגובת BOLD במהלך AUDגירוי itory בפרושי זברה נחקר במעבדה שלנו 2. בהתאם לכך, שלוש הרדמה בשימוש נרחב בפרושי זברה - medetomodine, isoflurane וurethane - הפועל על מערכות עצביות שונות, נחקרו. התוצאות הצביעו על כך שהגירוי שמיעתי הביא לתגובות BOLD ברורות עם כל שלושת חומרי ההרדמה, אלא שההבדלים קלים אירעו בין שלושת חומרים כימיים ביחס ללמשל הרחבה של השטח של הפעלה. בהתבסס על תוצאות מחקר זה ועל העובדה שisoflurane הוא ההרדמה השכיחה ביותר ביישומים קליניים כמו זה יש את היתרון שיש התאוששות מהירה יחסית, ותופעות לוואי קלות מאוד ויש לו הפוטנציאל הגבוה ביותר לשימוש במחקרים ארוכי טווח ובכך, הפך isoflurane ההרדמה של בחירה עבור הזברה פינק fMRI במעבדה שלנו.
בפרוטוקול זה אנו משתמשים בספין הד (SE) fMRI במקום fMRI שיפוע ההד המסורתי יותר (GE). בהשוואה ל-GE fMRI, יש SE fMRIהיתרון של מתן אות למוח כולו כפי שיש הגדול אין נשירת אות בתמונות. יתרון נוסף של SE BOLD fMRI הוא ייחודה מרחבית טובה יותר 10,11. ואכן, בשדה מגנטי גבוה, רכיב intravascular של אות BOLD SE מצטמצם (בגלל TE ארוך) ורכיב extravascular מכלי גדול מודחק (על ידי דופק refocusing ° 180 של רצף ה-MRI SE). אות BOLD SE הוא נשלט על ידי כך אות extravascular מדויקת שמקורם בכלי דם קטנים 12-14. המגבלה העיקרית של SE-fMRI היא הרגישות החלשה יחסית שלה, הדורשת רצפים אופטימיזציה ופרדיגמות גירוי אופטימליות. לעומת זאת יחס רעש (קמ"ג) עולה עם עוצמת שדה 15. TE ארוך גם מגדיל את CNR, אך פוגע ביחס אות לרעש 12,13,15. TE האופטימלי בדרך כלל מתאים לזמן שווה או יותר מ 2 ערך T של הרקמות. אנחנו הראינו כי, ב7T,ערך של 60 אלפיות שני TE מספק CNR ויחס אות לרעש מספיק כדי לזהות הבדלים משמעותיים בתגובות BOLD מופעלות על ידי גירויים שונים (Poirier, 2010).
בהשוואה ל-GE T2 * משוקלל לעומת זאת, SE ניגוד T2 משוקלל דורש TR ארוך (1,500-2,000 אלפיות השנייה ב7T). כדי להיות מסוגל 15 פרוסות תמונה, השתמשנו TR של 2,000 אלפיות שנייה. כדי לשמור על זמן הרכישה בגבול סביר, רצפי ה-MRI SE צריכים להיות לזרז. זו מושגת בדרך כלל באמצעות הד מישוריים ההדמיה (EPI) תכנית דגימת 10,16-19. עם זאת, גורם לעיוותים EPI תמונה כי עלייה בעוצמת השדה המגנטי, ומזהמת את האות המודגשת עם T2 * אפקטים (מה שהופך את האות חזק יותר אך פחות המבוקש). EPI גם מייצר רעש אקוסטי מאוד אינטנסיבי, מה שהופך אותו פחות רלוונטי לשימוש בחקירת גירויים שמיעתיים. כך אנו משמשים רצף נדיר עם גודל מטריצה של 64 x 32, אשר הביא בזמן רכישה של 8 שניות. resolut הזמני זהיון הוא עדיין תואם את תגובת BOLD האיטית הנגרמת על ידי עיצובים לחסום, אבל איטי מדי כדי לטעום את מהלך הזמן של תגובת BOLD מדויק או להשתמש בעיצובים הקשורים לאירוע. עם הרצף הזה, ולכן אנו מתקבלים אות SE T2 משוקללת טהורה, אשר מאופיינת על ידי סגוליות טובה מאוד מרחבית, רגישות גבוהה מספיק כדי לזהות תגובות BOLD דיפרנציאלי והחלטה זמנית תואמת את הפרדיגמה הגירוי משמש 20,21.
יתרונות ומגבלות של השימוש של fMRI בציפורי שיר
במהלך העשורים האחרונים, fMRI הפך לאחד מהטכניקות הדמייה הפופולריות ביותר במדעי המוח הקוגניטיביים קליניים לחקר פעילות המוח במהלך משימות שונות, החל פשוט חושי מוטורית למשימות קוגניטיביות מאוד. במחקר קליני, הוא, לעומת זאת, עדיין בשימוש בשיטה זו רק בקושי. המחסור של ניסויי fMRI הושלם בבעלי חיים קטנים ובעיקר ציפורי שיר עד כה ואולימתייחס לעובדה שהרדמה או הרגעה נדרש כדי להשיג קיבוע מלא של הנושאים (ראה דיון לעיל). לפיכך, זה נחשב לחסרון העיקרי של הטכניקה ומגביל את סוג השאלות שניתן לטפל. עם זאת, למרות fMRI דורש הרדמה ואות BOLD משקפת בעיקר פוטנציאל בתחום מקומי ובכך שונה מפוטנציאל הפעולה שנמדד בגן מוקדם ומיידיים, אלקטרו (IEG) לימודים (למשל 22), fMRI BOLD אישרה תוצאות רבות המתקבלות על ידי טכניקות אלה.
נכון להיום, את הטכניקות הפופולריות ביותר במדעי מוח ציפור שיר הן עדיין ביטוי פעילות תלויה של הקלטות IEG ואלקטרו פעילות יחידה או רבת ליחידה. טכניקות אלו ליהנות מרזולוציה מרחבית גבוהה מאוד (מיקרומטר 5-30; רמה תאית). עם זאת, הם מאוד פולשני או אפילו קטלניים. בנוסף, טכניקות אלקטרו מוגבלות במספר loקטיונים שיכולים להיות שנדגמו בניסוי אחד ולכן דורשים מראש השערות על הלוקליזציה של המצע העצבי המעורבים בתהליך החקירה. לעומת זאת, fMRI BOLD מאפשר גישת המוח כולו - עם רזולוציה מרחבית של 250 מיקרומטר - ולכן יכול לשמש כדי לבצע ניסויים ללא הנחה. לבסוף והכי חשוב, שאינו הפולשנות של ה-MRI מאפשרת אמצעים אורך חוזרים ונשנים באותם נושאים, הפותח מגוון רחב של אפשרויות חדשות.
אין ניגודי האינטרסים הכריזו.
מחקר זה נתמך על ידי מענקים מהקרן לחקר - פלנדריה (FWO, פרויקט מס G.0420.02 וG.0443.11N), קרן הרקולס (מענק מס AUHA0012), פעולות מחקר מרוכזת (מימון GOA) מאוניברסיטת אנטוורפן, ו חסות בחלקו על ידי הנציבות האירופית - FP6 פרויקט דימי, LSHB-CT-2005-512,146 וEC - FP6 פרויקט אמיל LSHC-CT-2,004-503,569 לA.VdL. G.DG וCP הם בחורי דוקטורט של קרן המחקר - פלנדריה (FWO).
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Isoflurane anaesthetic | Isoflo | 05260-05 | |
PC-Sam hardware/software | SA-Instruments | http://www.i4sa.com | |
Monitoring and gating system | 1025 | ||
MR-compatible small rodent heater system | Model 1025 compatible | ||
Rectal temperature probe | RTP-102B | 7'', 0.044'' | |
7T MR scanner | Bruker Biospin | PHS 70/16 | |
Paravision software | 5.1 | ||
Gradient Insert | BGA9S | 400 mT/m, 300A, 500V | |
Gradient Amplifiers | Copley Co., USA | C256 | |
Transmit resonators | Inner diameter: 72 mm, transmit only, active decoupled | ||
Receiver antenna - 20 mm quadrature Mouse Head | Receive only, active decoupled | ||
WaveLab software | Steinberg | ||
Praat software | Paul Boersma, University of Amsterdam | http://www.praat.org | |
Non-magnetic dynamic speakers | Visation, Germany | HK 150 | |
Fiber optic microphone | Optoacoustics, | Optimic 1160 | |
Sound amplifier | Phonic corporation | MM 1002a | |
Presentation software | Neurobehavioral Systems Inc. | ||
MRIcro | Chris Rorden | http://www.cabiatl.com/mricro/mricro/ | |
Statistical Parametric Mapping (SPM) | Welcome Trust Centre for Neuroimaging | 8 | http://www.fil.ion.ucl.ac.uk/spm/ |
Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article
Request PermissionThis article has been published
Video Coming Soon
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved