Method Article
يوضح هذا المقال إجراء الأمثل للتصوير من ركائز العصبية من التحفيز السمعي في الدماغ الطائر المغرد باستخدام التصوير بالرنين المغناطيسي الوظيفي (الرنين المغناطيسي الوظيفي). فهو يصف إعداد المنبهات الصوتية، وتحديد المواقع من هذا الموضوع، واقتناء وتحليل لاحقة من البيانات الرنين المغناطيسي الوظيفي.
في بيولوجيا الأعصاب من أصوات العصافير، كنموذج لخطاب الإنسان، هي منطقة وضوحا من الأبحاث في علم الأعصاب السلوكي. في حين الكهربية والجزيئية تسمح النهج التحقيق إما محفزات مختلفة على عدد قليل من الخلايا العصبية، أو التحفيز واحد في أجزاء كبيرة من المخ، ومستوى الأوكسجين في الدم تعتمد على (جريئة) التصوير بالرنين المغناطيسي الوظيفي (الرنين المغناطيسي الوظيفي) يسمح الجمع بين كل من المزايا، على سبيل المثال مقارنة تفعيل العصبية الناجم عن محفزات مختلفة في الدماغ كله في آن واحد. الرنين المغناطيسي الوظيفي في الطيور المغردة من الأمور الصعبة نظرا لصغر حجم أدمغتهم، ولأن عظامها وخاصة الجمجمة تشمل العديد من تجاويف الهواء، الأمر الذي أدى التحف قابلية الهامة. التدرج الصدى (GE) وقد تم تطبيق الرنين المغناطيسي الوظيفي BOLD بنجاح إلى الطيور المغردة 1-5 (لمراجعة، انظر 6). ركزت هذه الدراسات على مناطق الدماغ السمعية الأولية والثانوية، التي هي مناطق خالية من القطع الأثرية قابلية. ومع ذلك، لأن بروكesses من الفائدة قد تحدث خارج هذه المناطق، مطلوب كله الدماغ الرنين المغناطيسي الوظيفي BOLD باستخدام التصوير بالرنين المغناطيسي تسلسل أقل عرضة لهذه القطع الأثرية. ويمكن تحقيق ذلك باستخدام تدور الصدى (SE) BOLD الرنين المغناطيسي الوظيفي 7،8. في هذه المقالة، ونحن تصف كيفية استخدام هذه التقنية في العصافير حمار وحشي (Taeniopygia الرقشاء)، والتي هي الطيور المغردة الصغيرة مع وزن الجسم من 15-25 ز درس على نطاق واسع في علوم الأعصاب السلوكية من أصوات العصافير. الموضوع الرئيسي لدراسات الرنين المغناطيسي الوظيفي على الطيور المغردة هي الأغنية الإدراك والتعلم أغنية. طبيعة السمعية من مثيرات جنبا إلى جنب مع ضعف حساسية BOLD من SE (مقارنة مع GE) تسلسل الرنين المغناطيسي الوظيفي القائم يجعل تنفيذ هذه التقنية صعبة للغاية.
1. إعداد التحفيز السمعي
2. إعداد الموضوع
2.1 الموضوع وحجم المجموعة
هنا نقدم بروتوكول تكييفها خصيصا لاستخدام (الكبار) العصافير حمار وحشي. اختيار الأنواع يعتمد على مسألة علمية. ومع ذلك، يمكن أيضا أن تؤخذ اعتبارات أخرى مثل متانة الطيور إلى التخدير في الاعتبار. حمار وحشي العصافير (Taeniopygia الرقشاء) وينبغي أن يضم في الأقفاص تحت 12 ساعة ضوء: 12 ساعة الإضاءة مظلمة والحصول على الغذاء والماء بالمال وبالشهرة أيضا الإعلانية طوال فترة الدراسة. في أقل عدد ممكن من الأفراد في التجربة هو 15. هذا الرقم يأخذ في الاعتبار حساسية الرنين المغناطيسي الوظيفي تدور الصدى وتباين بين فرد طبيعي من الظواهر البيولوجية التي تم قياسها في التجربة.
2.2 تركيب الإعداد والتحضير للحيوان
(للمواصفاتمن المعدات المستخدمة، نشير إلى قائمة الكواشف والمعدات المحددة في نهاية هذه المقالة)
كما ذكر أعلاه، ويستخدم نظام MR 7T في الإعداد المقدمة. نظم MR الأخرى مع شدة المجال مختلفة من الممكن أيضا، ولكن في 7T يتم التوصل إلى حل وسط جيد بين نسبة الإشارة إلى الضوضاء ودرجة قابلية التحف (انظر المناقشة). في شدة المجال أعلى نسبة الإشارة إلى الضوضاء سوف تزيد مع درجة من التحف قابلية.
3. الحصول على البيانات
4. معالجة البيانات
بديل لهذا هو استخدام 'SPMMouse' الذي هو مجموعة أدوات إدارة الأداء الاجتماعي السماح لفتح وتحليل الملفات من أي البعد فوكسل. أداة تسمح ليتم إنشاؤه 'أدمغة زجاج' SPM من أي صورة، وتلقائيا بضبط الإعدادات الافتراضية موازين طول يعتمد على رؤوس من ملفات الصور أو البيانات التي تم إدخالها المستخدم. وبالتالي، يعمل هذا الأدوات في الطريق المعاكس من ما نقترح. بدلا من تغيير حجم فوكسل من الصور لتناسب في إدارة الأداء الاجتماعي، يتم تغيير الإعدادات الافتراضية لإدارة الأداء الاجتماعي لاستخدام الصور بأحجام مختلفة فوكسل.
نحن هنا قدم بصريا تسلسل الأمثل من الإجراءات للتصوير الناجح من ركائز العصبية للمؤثرات السمعية في الدماغ فينش حمار وحشي. أولا، الإجراء الموضح لإعداد السمعية المحفزات النتائج في المحفزات التي يمكن إدراجها إلى ON / OFF نموذج كتلة (الشكل 2)، وأنه تم تطبيع للقضاء على الاختلافات المحتملة في مستوى ضغط الصوت التي يمكن أن تستثير استجابة الفرق في الدماغ . بعد إعداد زيبرا فينش للتصوير بالرنين المغناطيسي مسح وتحديد المواقع هو داخل تجويف من المغناطيس (الشكل 1)، ويمكن الحصول عليها الرنين المغناطيسي الوظيفي. بالإضافة إلى ذلك، يتم أخذ صورة 3D عالية الدقة من أجل تطبيع البيانات إلى حمار وحشي فينش أطلس 9. وأخيرا، وتحليل ما قبل المعالجة والإحصائي للبيانات يسمح التصور من النتائج التي تم الحصول عليها (الشكل 6).
69/4369fig1.jpg "بديل =" الشكل 1 "FO: محتوى العرض =" 4.5in "FO: SRC =" / files/ftp_upload/4369/4369fig1highres.jpg "/>
الشكل 1. الطيفية من الضوضاء البيضاء سجلت من أجل إنشاء نطاقات التردد التي تتعزز / قمعت داخل المغناطيس تحمل. A. الضوضاء البيضاء خارج المغناطيس تحمل. B. الضوضاء البيضاء سجلت في موقع رأس الطائر داخل المغناطيس تحمل. C. الأبيض الضوضاء بعد تطبيق وظيفة التعادل لتصحيح لتعزيز / قمعت نطاقات التردد.
الشكل 2. نظرة عامة على ON / OFF نموذج كتلة في التي تناوبت فترات التحفيز السمعي مع فترات الراحة. كل كتلة (التحفيز / بقية) يدوم 16 ثانية خلالها يتم الحصول على الصور 2. تتكون محفزات مختلفة من الزخارف ممثل أصوات العصافير أو أنواع أخرى من الصوتاعتمادا على التجربة. يتم متصلا هذه الزخارف ومعشق مع فترات الصمت ويتم ضبط مدة فترات الصمت للحفاظ على المبلغ الإجمالي للصوت والصمت متطابقة على كل المحفزات.
الشكل (3). . الإعداد لالرنين المغناطيسي الوظيفي السمعية في الطيور المغردة الصغيرة A. السرير الحيوان أقحم: نظرة عامة التخطيطي المفصل لتحديد المواقع من الطيور في السرير الحيوان من الماسح الضوئي: B. فائف الرأس RF، C. قناع منقار مع D. توريد الغاز مخدر، E. سماعات الرأس غير المغناطيسية، F. الهوائية وسادة استشعار لرصد معدل التنفس، G. مذرقي التحقيق في درجة الحرارة، H. ردود الفعل نظام سخان للرقابة للحفاظ على الجسمدرجة حرارة مستقرة الطيور أثناء عملية القياس. انقر هنا لعرض أكبر شخصية .
الشكل 4. هندسة شريحة للتصوير الرنين المغناطيسي الوظيفي كامل الدماغ. تكوين لقطات من محرر هندسة البرمجيات في ParaVision. وتستخدم المكتسبة سابقا المحوري، السهمي والإكليلي الصور تجريب نادرة لتحديد اتجاه شريحة لفحص الرنين المغناطيسي الوظيفي.
الشكل 5. مشاهدة الوحشي للتمثيل 3D من نصف الكرة المخية الأيسر مع الهياكل المرسومة من حمار وحشي فينش أطلس 9، المتوقعة على شريحة في منتصف السهمي. ويرد رمز اللون من نوى يرسم على اليمين. هذه delineatهياكل إد هي جزء من مسار السيارات الصوتية: HVC، نواة المتين arcopallii (RA)، nXII بارس tracheosyringealis (nXIIts)؛ مسار الدماغ الأمامي الأمامي: نواة الوحشية الكبيرة الخلايا الجزء الوحشي (LMAN)، المنطقة X (X)، والنظام السمعي: مجال L، نواة ovoidalis (OV)، نواة الدماغ المتوسط الوحشي الجزء الظهراني (MLD)، ونظام حاسة الشم: البصلة الشمية (OB)، والنظام البصري: نواة entopalliallis (E)، السقف البصرية لل(تيو).
الشكل (6). مثال على استجابة BOLD الرنين المغناطيسي الوظيفي في المنطقة السمعية الأولية، L الميدانية، والمناطق المتاخمة السمعية الثانوية التي حركها التحفيز السمعي مختلفة بالمقارنة مع حالة الراحة. تتكون الصور من الخرائط الإحصائية المعلمية فرضه على صور تشريحية عالية الدقة من الدماغ فينش حمار وحشي أطلس 9. T-القيم لونا مميزا وفقا لليتم عرض مقياس عرض في الشكل وvoxels الوحيد الذي تم العثور على اختبار t أن تكون معنوية (P <0.001).
في هذا التقرير، وصفنا بروتوكول الأمثل لتوصيف مفصل في الجسم الحي من ركائز العصبية من التحفيز السمعي في العصافير حمار وحشي مخدرة.
وتمشيا مع بروتوكول المعروضة، فإن غالبية الدراسات نشاط المخ وظيفية في الحيوانات باستخدام الرنين المغناطيسي الوظيفي BOLD، تخدير الحيوانات أثناء عملية الاستحواذ. الحيوانات تدريبية لتعويدهم على البيئة مغناطيس والضجيج الماسح الضوئي أثناء فترات الدراسة هو ممكن بل تستغرق وقتا طويلا وتحديا، وبالتالي نادرا ما استخدمت أيضا.
بالرغم من أن المخدر يقلل من آثار الإجهاد الناجم عن الاستجابات الفسيولوجية من الفائدة ويسهل التعامل مع الحيوانات، وتأثيرها على كل من الاستجابة العصبية وعلى نقل وظيفة بين النشاط العصبي والاستجابة BOLD قياسها في الرنين المغناطيسي الوظيفي هو موضوع البحوث الجارية والهامة . ولذلك، فإن آثار التخدير على الاستجابة BOLD خلال AUDوقد تم التحقيق التحفيز itory في العصافير حمار وحشي في المختبر لدينا 2. وفقا لذلك، ثلاث مواد التخدير المستخدمة على نطاق واسع في حمار وحشي العصافير - medetomodine، وisoflurane ويوريثان - تعمل على أنظمة مختلفة العصبي، وتمت دراسة. أشارت النتائج إلى أن التحفيز السمعي أدى إلى ردود BOLD واضحة مع جميع العقاقير المخدرة ثلاثة، ولكن حدث أن اختلافات طفيفة بين الكواشف ثلاثة فيما يتعلق على سبيل المثال تمديد مجال التنشيط. وبناء على نتائج هذه الدراسة وعلى حقيقة أن isoflurane وهي مخدر الأكثر شيوعا في التطبيقات السريرية لأنه يحتوي على ميزة كبيرة من وجود انتعاش سريع نسبيا وآثار جانبية طفيفة، وبالتالي لديها أعلى احتمال للاستخدام في الدراسات الطولية، وأصبح isoflurane و المخدر المفضل للحمار وحشي فينش الرنين المغناطيسي الوظيفي في مختبرنا.
في هذا البروتوكول ونحن نستخدم تدور الصدى (SE) الرنين المغناطيسي الوظيفي بدلا من التدرج الصدى (GE) الرنين المغناطيسي الوظيفي أكثر تقليدية. مقارنة مع GE الرنين المغناطيسي الوظيفي، SE الرنين المغناطيسي الوظيفي لديهاميزة كبيرة لتوفير إشارة إلى الدماغ كله لعدم وجود إشارة التسرب في الصور. ميزة أخرى لSE BOLD الرنين المغناطيسي الوظيفي هو خصوصيته أفضل المكانية 10،11. في الواقع، في مجال مغناطيسي عال، يتم تقليل عنصر داخل الأوعية الدموية للإشارة BOLD SE (بسبب TE طويلة) ويتم قمع المكون من خارج الأوعية السفن الكبيرة (من قبل 180 درجة نبض إعادة تركيز من التصوير بالرنين المغناطيسي تسلسل SE). وهكذا سيطر على إشارة BOLD SE بواسطة إشارة خارج الأوعية الدقيقة النابعة من السفن الصغيرة 12-14. القيد الرئيسي للSE الرنين المغناطيسي الوظيفي هو حساسيتها ضعيفة نسبيا، مما يتطلب تسلسل الأمثل ونماذج التحفيز الأمثل. التباين إلى نسبة الضوضاء (CNR) يزيد مع شدة المجال 15. الشركة المصرية للاتصالات طويلة يزيد أيضا من لجنة المصالحة الوطنية، ولكن ينال من نسبة الإشارة إلى الضوضاء 12،13،15. الشركة المصرية للاتصالات الأمثل عادة يناظر الوقت تساوي أو أطول من قيمة T 2 من الأنسجة. لقد أظهرنا أنه، في 7T،قيمة TE من 60 ميللي ثانية يوفر CNR ونسبة الإشارة إلى الضوضاء كافية للكشف عن فروق ذات دلالة إحصائية في استجابات BOLD نجمت عن محفزات مختلفة (بوارييه، 2010).
مقارنة مع GE T2 * المرجحة النقيض من ذلك، SE النقيض T2 المرجحة يتطلب TR طويلة (1،500-2،000 ميللي ثانية في 7T). لتكون قادرة على صورة شرائح 15، استخدمنا TR من 2،000 ميللي ثانية. للحفاظ على اكتساب الوقت عند حد معقول، SE متواليات التصوير بالرنين المغناطيسي بحاجة إلى التسريع. وعادة ما يتحقق هذا باستخدام الصدى مستو التصوير (EPI) مخطط أخذ العينات 10،16-19. ومع ذلك، برنامج التحصين الموسع يدفع تشوهات الصورة التي تزيد مع حجم الحقل المغناطيسي للأرض، ويلوث إشارة BOLD مع T2 * الآثار (صنع إشارة أقوى ولكن أقل تحديدا). كما تنتج برنامج التحصين الموسع والضجيج مكثفة جدا، مما يجعلها أقل أهمية لاستخدامها في التحقيق في التحفيز السمعي. وبالتالي استخدمنا تسلسل نادرة مع حجم مصفوفة 64 × 32، مما أدى إلى اكتساب الوقت من 8 ثانية. هذا resolut الزمانيأيون لا يزال متوافق مع استجابة BOLD تباطؤ الناجم عن كتلة التصاميم، ولكن بطيئة جدا لأخذ عينات بدقة مدار الساعة من استجابة BOLD أو إلى استخدام تصاميم ذات الصلة بالحدث. مع هذا التسلسل، ونحن بالتالي الحصول على نقية T2 المرجحة SE إشارة، الذي يتميز بخصوصية مكانية جيدة جدا، وحساسية عالية بما فيه الكفاية للكشف عن الاستجابات BOLD التفاضلية والقرار الزماني متوافق مع استخدام نموذج التحفيز 20،21.
مزايا وقيود استخدام الرنين المغناطيسي الوظيفي في الطيور المغردة
خلال العقود الماضية، فقد أصبح الرنين المغناطيسي الوظيفي واحدة من تقنيات تصوير الأعصاب الأكثر شعبية في السريرية علم الأعصاب الإدراكي لدراسة نشاط الدماغ أثناء مختلف المهام التي تتراوح من بسيطة الحسية والحركية للمهام الإدراكية للغاية. في مجال البحوث قبل السريرية، هو، ومع ذلك، لا تزال تستخدم بالكاد فقط هذا الأسلوب. الانتهاء من ندرة التجارب الرنين المغناطيسي الوظيفي في الحيوانات الصغيرة والطيور المغردة وخاصة حتى الآن ربماتتعلق بحقيقة أن التخدير أو التخدير مطلوب لتحقيق الشلل الكامل من الموضوعات (انظر المناقشة أعلاه). وبالتالي، يعتبر هذا العيب الرئيسي من هذه التقنية ويقيد نوع من الأسئلة التي يمكن معالجتها. ومع ذلك، على الرغم من الرنين المغناطيسي الوظيفي يتطلب التخدير وإشارة BOLD يعكس أساسا امكانات الحقل المحلية، وبالتالي يختلف عن إمكانات العمل في قياس الكهربية وفوري الجينات في وقت مبكر (IEG) دراسات (على سبيل المثال 22)، وقد أكد الرنين المغناطيسي الوظيفي BOLD العديد من النتائج التي تم الحصول عليها بواسطة هذه التقنيات.
حتى الآن، التقنيات الأكثر شعبية في الطائر المغرد علم الأعصاب لا تزال التعبير التي تعتمد على النشاط التسجيلات IEG والكهربية من نشاط واحد أو متعددة الوحدات. تستفيد هذه التقنيات من قرار مكانية عالية جدا (5-30 ميكرون؛ المستوى الخلوي). ومع ذلك، فهي الغازية للغاية أو حتى مميتة. بالإضافة إلى ذلك، وتقنيات الكهربية تقتصر من قبل عدد من الصغرىالكاتيونات التي يمكن أن تكون العينة في تجربة واحدة، وبالتالي تتطلب فرضيات مسبقة حول توطين الركيزة العصبية المعنية في عملية التحقيق. في المقابل، الرنين المغناطيسي الوظيفي BOLD يسمح نهج كامل الدماغ - مع قرار المكانية من 250 ميكرون - وبالتالي يمكن استخدامها لإجراء التجارب خالية من الافتراض. وأخيرا والأهم من ذلك، غير الغازية التصوير بالرنين المغناطيسي تمكن التدابير الطولية المتكررة على نفس المواضيع، والذي يفتح طائفة واسعة من الإمكانيات الجديدة.
الإعلان عن أي تضارب في المصالح.
وأيد هذا البحث من المنح المقدمة من مؤسسة أبحاث - فلاندرز (FWO، مشروع العدد G.0420.02 وG.0443.11N)، ومؤسسة هرقل (منحة العدد AUHA0012)، تطبيقات بحوث منسقة (التمويل غوا) من جامعة أنتويرب، و برعاية جزئيا من قبل المفوضية الأوروبية - مشروع FP6 ديمي، LSHB-CT-2005-512146 وEC - FP6 مشروع EMIL LSHC-CT-2004-503569 إلى A.VdL. G.DG وCP هي زملاء ما بعد الدكتوراه من مؤسسة البحوث - فلاندرز (FWO).
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Isoflurane anaesthetic | Isoflo | 05260-05 | |
PC-Sam hardware/software | SA-Instruments | http://www.i4sa.com | |
Monitoring and gating system | 1025 | ||
MR-compatible small rodent heater system | Model 1025 compatible | ||
Rectal temperature probe | RTP-102B | 7'', 0.044'' | |
7T MR scanner | Bruker Biospin | PHS 70/16 | |
Paravision software | 5.1 | ||
Gradient Insert | BGA9S | 400 mT/m, 300A, 500V | |
Gradient Amplifiers | Copley Co., USA | C256 | |
Transmit resonators | Inner diameter: 72 mm, transmit only, active decoupled | ||
Receiver antenna - 20 mm quadrature Mouse Head | Receive only, active decoupled | ||
WaveLab software | Steinberg | ||
Praat software | Paul Boersma, University of Amsterdam | http://www.praat.org | |
Non-magnetic dynamic speakers | Visation, Germany | HK 150 | |
Fiber optic microphone | Optoacoustics, | Optimic 1160 | |
Sound amplifier | Phonic corporation | MM 1002a | |
Presentation software | Neurobehavioral Systems Inc. | ||
MRIcro | Chris Rorden | http://www.cabiatl.com/mricro/mricro/ | |
Statistical Parametric Mapping (SPM) | Welcome Trust Centre for Neuroimaging | 8 | http://www.fil.ion.ucl.ac.uk/spm/ |
Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article
Request PermissionThis article has been published
Video Coming Soon
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved