Method Article
* Estos autores han contribuido por igual
Este protocolo describe una técnica de manejo de la preñez y la alimentación para conejos transferidos con embriones y modificados genéticamente, destinada a reducir la mortalidad de conejos recién nacidos y mejorar la eficiencia de la preparación de conejos editados genéticamente.
Con el avance de la investigación científica, la demanda de modelos de conejos editados genéticamente está aumentando. Sin embargo, existen sistemas limitados de manejo de la preñez y la alimentación para conejos editados genéticamente, lo que lleva a bajas tasas de supervivencia entre los conejos editados genéticamente preparados por muchos investigadores inexpertos. Por lo tanto, es esencial una orientación adecuada. Este artículo resume las prácticas de preñez y alimentación de conejos genéticamente modificados desarrolladas en el laboratorio del autor y describe un conjunto de procesos fundamentales. Estos incluyen el diagnóstico de embarazo, la atención prenatal, la partería, la lactancia asistida, el destete y otros procedimientos, junto con el rescate y el cuidado de conejos recién nacidos débiles. En comparación con los métodos tradicionales de parto y crianza natural utilizados en las granjas de conejos, este enfoque implica un manejo más refinado, que requiere tiempo y esfuerzo adicionales, pero aumenta significativamente la tasa de supervivencia de los conejos lactantes. Los métodos descritos en este artículo son adecuados para la mayoría de los escenarios de cría en laboratorio que involucran conejos editados genéticamente o transferidos con embriones y proporcionan una referencia sencilla y efectiva para otros investigadores.
Los conejos son un modelo animal clásico para la investigación biomédica y se están convirtiendo cada vez más en el modelo traslacional preferido para cerrar la brecha entre los modelos de roedores y los modelos de animales grandes 1,2. En comparación con los animales grandes, los conejos tienen un tamaño corporal moderado, poco espacio para alimentarse, bajo costo de alimentación y una conveniente recolección de sangre, lo que favorece la recopilación repetida de datos de investigación y operaciones quirúrgicas. Los conejos se caracterizan por una buena capacidad reproductiva, un período de gestación corto (28-32 días para los conejos blancos de Nueva Zelanda), un gran número de nacimientos y un crecimiento rápido 3,4. En comparación con los roedores, los conejos están más cerca de los humanos en filogénesis5. Es un sustituto experimental rentable y práctico de los cerdos y los primates no humanos6. En comparación con otros animales de edición genética de tamaño grande y mediano (cerdos, vacas, ovejas, gatos, perros, monos), el costo de preparación de los conejos de edición genética es bajo y el ciclo es corto. Con el desarrollo de la terapia génica 7,8,9, la terapia con células madre 10,11,12,13, la investigación en ciencias del cerebro14 y otros campos científicos 1,15,16,17,18, la demanda de especies no roedoras en la edición de genes está aumentando.
Los conejos de edición genética fueron considerados una vez como uno de los animales de edición genética de tamaño medio que podían realizar aplicaciones industriales6. Sin embargo, hasta hoy, los conejos editados genéticamente no han podido lograr una producción a gran escala. Una de las principales razones es que la producción y la cría de conejos con edición genética son un desafío, y la dificultad es mucho mayor que la de los ratones o ratas con edición genética. No hay muchos laboratorios que puedan cultivar conejos con edición genética de manera eficiente. A menudo es difícil para los principiantes preparar con éxito conejos de edición genética, y a menudo se encuentran con problemas desagradables como la baja tasa de embarazo19, el aborto20, la distocia21, el rechazo de la lactancia por parte de las conejas22 y la muerte de las conejas lactantes23. Sin embargo, hay pocos datos sistemáticos o guías bibliográficas sobre la gestación y la alimentación de conejos con edición genética o conejos transferidos con embriones. La mayoría de ellos se basan en la experiencia de las granjas de conejos comunes.
Por lo tanto, este artículo resume la experiencia madura del manejo de la gestación y la lactancia de conejos modificados genéticamente desde el laboratorio del autor, e introduce un conjunto de procesos básicos de conejos transferidos con embriones y conejos modificados genéticamente, incluido el diagnóstico de embarazo, atención prenatal, partería, alimentación asistida artificial, ablactación, así como el rescate y la lactancia de conejos bebés débiles. Este proceso está especialmente establecido para la cría de conejos con edición genética o conejos transferidos con embriones. En comparación con el método tradicional de parto y crianza natural de las granjas de conejos, el modelo de manejo del embarazo y la lactancia requiere más tiempo y energía, pero puede reducir en gran medida la mortalidad de los conejos bebés, y el esfuerzo vale la pena.
Todos los protocolos experimentales fueron aprobados por el Comité de Ética para Experimentos con Animales del Centro de Animales de Laboratorio Médico de Guangdong. El número de revisión ética para la cría de conejos modificados genéticamente MKRN3 involucrada en este estudio es B202210-6. El estudio se adhiere a procedimientos de conformidad con las normas éticas descritas en la Declaración de Helsinki de 1975 (revisada en 1983). Los conejos de Nueva Zelanda utilizados en este estudio se obtuvieron del Centro de Animales de Laboratorio Médico de Guangdong en China. El proceso de preñez y alimentación de conejos genéticamente modificados descrito en este artículo es un resumen de las prácticas diarias de cría de animales en el laboratorio del autor. Los detalles sobre los reactivos y el equipo utilizado se enumeran en la Tabla de Materiales.
1. Diagnóstico del embarazo
2. Atención prenatal
3. Parto
NOTA: El día 0 se refiere a poco después de la fertilización y la formación procariota. Los conejos son animales estimulantes de la ovulación que ovulan 10-12 horas después del apareamiento. Los embriones en estadio unicelular obtenidos al día siguiente del apareamiento se consideran enel día 0,5. Si los embriones en estadio unicelular se cultivan in vitro durante solo 2-3 horas y luego se transfieren a conejos sustitutos, también se considera que esel día 0,5 de embarazo.
4. Obstetricia
5. Cuidados posparto
6. Ablactación
Este artículo describe un procedimiento de manejo de preñez y alimentación para conejos transferidos con embriones y modificados genéticamente. A finales de 2022, el laboratorio del autor inició el desarrollo de una plataforma de preparación para conejos modificados genéticamente. Durante este período, se encontraron varios problemas comunes, como el aborto, la falta de parto a término, la distocia, la falta de arranque de pelo para la preparación del nido antes del parto, la falta de voluntad de las conejas madres para amamantar o incidentes de canibalismo, leche materna insuficiente debido al gran tamaño de la camada y las crías de conejo que no bebían leche. Estos desafíos redujeron significativamente la eficiencia reproductiva de los conejos modificados genéticamente.
A partir de la síntesis de experiencias y aprendizajes de estos temas, se elaboró un protocolo de manejo de preñez y lactancia para conejos transferidos con embriones y modificados genéticamente (Figura 3). Este protocolo ha mejorado sustancialmente la tasa de supervivencia de los conejos recién nacidos y ha reducido la mortalidad durante la lactancia (Tabla 1). En la mayoría de los casos, a excepción de los modelos específicos de enfermedades modificadas genéticamente con fenotipos de enfermedades genéticas postnatales graves que conducen a tasas de mortalidad más altas, este enfoque ha demostrado ser eficaz y aceptable.
En la actualidad, el laboratorio de la autora ha pasado de los métodos tradicionales de parto natural y crianza al modelo de gestión del embarazo y la lactancia recientemente establecido. Hasta la fecha, este método ha facilitado la cría exitosa de más de diez nuevas variedades de conejos modificados genéticamente, lo que ha dado lugar a la producción de numerosas crías. Aunque este enfoque aumenta la carga de trabajo, es muy eficaz. La Figura 4 ilustra un ejemplo de la vida real de cría de crías de conejo modificadas genéticamente MKRN3, mostrando el proceso desde el nacimiento hasta el destete.
Figura 1: Disposición de las incubadoras de conejos bebés. Pasos involucrados en la preparación de una incubadora para conejos bebés: (1) Preparación de la incubadora; (2) Acolchado; (3) Extender una toalla; (4) Adición de algodón de plumón artificial; (5) Colocar al conejo bebé adentro; (6) Adjuntar la tarjeta de información. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
Figura 2: Lactancia materna asistida para conejos bebés. (A) Alimentación de conejos bebés de 1-2 días de edad. (B) Alimentación de conejos bebés de más de 2 días de edad. (C) Comparación de los abdómenes de los cachorros de conejo antes y después de la alimentación, mostrando un abultamiento notable y visible leche materna blanca en el estómago (indicado por el círculo rojo). (D) Excreción de meconio del tracto gastrointestinal dentro de los 3 días posteriores al nacimiento (indicado por la flecha roja). El perineo requiere una limpieza regular con una bola de algodón húmeda (indicada por la flecha amarilla). Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
Figura 3: Proceso de manejo de embarazo y lactancia para conejos transferidos con embriones y modificados genéticamente. Etapas en el proceso de tratamiento: Diagnóstico de embarazo; Atención prenatal; Partería; Cuidados posparto; Ablactación. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
Figura 4: Crecimiento y desarrollo de conejos modificados genéticamente desde su nacimiento hasta su ablactación. (A) Imágenes de conejos bebés de 1 a 8 días de edad. (B) Conejitos de quince días de edad, con la coneja madre a la izquierda y los conejitos a la derecha. C) Conejos jóvenes destetados de treinta y cinco días de edad. (D) Curva de crecimiento de los conejos bebés dentro de las primeras tres semanas después del nacimiento. Los conejos bebés pertenecían a la misma camada: ID1, ID2 e ID3 representan conejos modificados genéticamente mkrn3 , mientras que ID4, ID5 e ID6 representan conejos de tipo salvaje. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
Parto y crianza natural tradicional | Manejo del embarazo y la lactancia | |
El número de conejos recién nacidos (8 camadas) | 68 | 71 |
El número de conejos recién nacidos supervivientes | 42 | 66 |
El número de conejos destetados supervivientes | 29 | 63 |
Tasa de supervivencia al nacer (= conejos recién nacidos / conejos recién nacidos supervivientes × 100%) | 61.80% | 93.00% |
Tasa de supervivencia al destete (= conejos destetados supervivientes / conejos recién nacidos × 100%) | 69.00% | 95.50% |
Tabla 1: Supervivencia de crías de conejo bajo diferentes modalidades de manejo de cría. Una comparación de las tasas de supervivencia de las crías de conejo a través de varias estrategias de manejo de la cría.
Los principales pasos en el manejo de la gestación y la lactancia de conejos transferidos con embriones y modificados genéticamente incluyen la partería y la lactancia materna asistida temprana. El parto difícil es un problema común en los conejos19. Los partos prolongados a menudo resultan en isquemia fetal, hipoxia y muerte25. El uso adecuado de la oxitocina puede acortar eficazmente los tiempos de parto y reducir los casos de distocia fetal26. Muchas conejas madres primíparas no logran arrancar el pelo para preparar los nidos, lo que aumenta el riesgo de pérdida de temperatura y mortalidad en conejos recién nacidos27,28. Por lo general, después de una inyección intramuscular de oxitocina, los conejos comienzan el parto dentro de los 5-10 minutos, lo que facilita el parto artificial y mejora la tasa de supervivencia de los recién nacidos. El mal comportamiento maternal o la inexperiencia a menudo dificultan el crecimiento adecuado de las crías de conejo. El manejo de la enfermería asistida garantiza que los conejos recién nacidos reciban una lactancia materna adecuada y se alojen en incubadoras cómodas, mejorando significativamente su supervivencia29.
En este estudio, se utilizó una incubadora simple, empleando algodón de plumón artificial y toallas para calentarse. La temperatura ambiental óptima para los conejos recién nacidos es de 30-32 °C30. Si están disponibles, los equipos de control de temperatura y humedad pueden mejorar aún más los resultados. En las últimas etapas del embarazo, las conejas pueden presentar síntomas como respiración acelerada, estertores respiratorios, vasodilatación del oído y renuencia a comero moverse. Estos síntomas se asemejan a los de la hipertensión inducida por el embarazo humano y requieren atención inmediata. En casos graves, puede producirse la muerte materna y fetal. En tales circunstancias, las conejas preñadas deben ser alojadas en jaulas más espaciosas con trozos de papel para fomentar la fabricación de nidos, se les debe promover el ejercicio y se les debe proporcionar alimento verde fresco. Estas medidas generalmente alivian los síntomas adversos en las conejas preñadas. Sin embargo, en casos críticos, es necesaria una inyección intramuscular de 0,02 mg de cloprostenol para inducir la interrupción precoz del embarazo32.
Este estudio establece un protocolo de manejo de preñez y lactancia para conejos transferidos con embriones y modificados genéticamente, mejorando significativamente la eficiencia reproductiva de los conejos modificados genéticamente. En comparación con los métodos tradicionales de cría de conejos, este enfoque requiere más mano de obra y recursos materiales e implica un proceso más meticuloso. Sin embargo, para entornos de laboratorio estándar, este método satisface las necesidades experimentales y ofrece conocimientos y habilidades prácticas.
Cuando se crían modelos de conejos para enfermedades genéticas específicas, como conejos con atrofia muscular o conejos sin pelo, la débil constitución congénita de estos modelos a menudo resulta en su incapacidad para competir con conejos de tipo salvaje en la misma camada por la leche materna, lo que lleva a altas tasas de mortalidad poco después del nacimiento33,34. El manejo de enfermería asistida mitiga eficazmente estos desafíos, previniendo la muerte prematura de las crías de conejo. Además, este protocolo permite a los investigadores observar y determinar el genotipo de los conejos recién nacidos inmediatamente después del nacimiento, lo que reduce las preocupaciones sobre las conejas que muerden o se comen a sus crías. En general, este protocolo tiene aplicaciones prometedoras en la generación de conejos transferidos con embriones y modificados genéticamente.
Los autores no tienen nada que revelar.
Esta investigación fue apoyada por la Fundación Nacional de Ciencias Naturales de China (Subvención Nº 82101937), el Proyecto del Fondo de Investigación de Ciencia y Tecnología Médica de Guangdong, China (Subvención Nº B2024069), y el Proyecto del Plan de Ciencia y Tecnología de Guangzhou, China (Subvención No. SL2023A04J02229, Asignación Nº 2024A04J4923).
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Artificial down cotton | Yangzhou Anguang Textile Co., Ltd, China | 5490-Jinyu | |
Cloprostenol Sodium Injection | Shanghai Quanyu Biotechnology (Zhumadian) Animal Pharmaceutical Co., Ltd, China | 163232207 | |
Corncob granules | Guangdong Provincial Medical Laboratory Animal Center, China | YUMIXIN | |
Electronic platform scale | Yongkang Runjin weighing instrument Co., Ltd, China | rj-09 | |
Gentamicin | Shanxi Jinfukang Biological Pharmaceutical Co., Ltd, China | 041531504 | |
Glucose injection | Henan Kelun Pharmaceutical Co., Ltd, China | H41022251 | |
Incubator | Foshan Chancheng Hualong Plastic Factory, China | AAA-2 | For newborn rabbits |
Incubator box | Hebei mabao wire mesh products Co., Ltd., China | https://qr.1688.com/s/AJ1K7O3p | As a nest for the mother rabbits |
Inslin Syringe | Becton,Dickinson and Company, USA | Ultra-Fine,328421 | |
Oxytocin injection | Guangzhou Baiyunshan Mingxing Pharmaceutical Co., Ltd | H44025245 | |
Penicillin injection | Guangdong Kangtaiyuan Animal Husbandry Co., Ltd, China | 300012430 | |
Rabbit delivery cage | Suzhou Suhang Technology Equipment Co., Ltd., Suzhou, China | RB42-8G | |
Towel | Zhejiang Jieliya Co., Ltd, China | W3290 |
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