Picrosirius Red 染色用于慢性肺同种异体移植物排斥反应小鼠模型中胶原蛋白沉积的半定量组织病理学评估

我们的研究重点是分析慢性肺同种异体移植物排斥反应中纤维化的发展。因此，我们对表征纤维化组织隔室的方法感兴趣。为了复制移植相关疾病，我们采用了几年前引入的单肺移植小鼠模型。

在该模型中，同种异体小鼠品系之间的肺移植已被证明会导致不同程度的移植物纤维化。纤维化组织重塑的组织学数据通常以定性方式呈现。我们使用 Picrosirius Red 染色的方法具有半定量评估的优势，可以区分粗胶原纤维和细胶原纤维。

首先，以降低乙醇浓度的水合石蜡包埋的小鼠肺样品，每次水合 2 分钟。在 Meyer 血溶液中对玻片染色 8 分钟。在流来的自来水中清洗玻片 10 分钟，然后在 Picrosirius Red 溶液中孵育玻片 1 小时。

将玻片浸入 0.5% 乙酸溶液中 5 至 10 次。轻轻摇动载玻片以去除溶液。现在，在增加乙醇浓度和 100% 二甲醇的浓度中将玻片脱水，各 5 分钟。

在样品上加入一滴封固剂进行包埋，并用盖玻片盖住。让载玻片在通风橱下干燥。在光学显微镜下，使用适当的成像软件聚焦样品，直到获得清晰锐利的图像。

调整偏振滤镜的程度，直到背景完全变暗或变黑。在 20 倍放大倍率下扫描样品，并以 TIFF 格式导出图像。将图像传输到斐济软件。

单击 Edit 并选择 Clear Outside。然后点击 分析 其次是 测量 测量总表面积。要测量每个样品的总胶原蛋白含量，请单击 图片 其次是 调整 和 颜色阈值.

将色相设置在 2 到 130 之间，将亮度设置在 35 到 255 之间。然后单击 Analyze，并在 Analyze Particles 窗口中，将大小设置为 1 减无穷大，并勾选 Clear 和 Summarize 框。将色相调整为红色以分析粗胶原纤维，将色相调整为黄绿色以分析细胶原纤维，并测量总胶原计数。

最后，单击 插件、宏和 Record 配置宏以进行自动处理。Masson 的三色、Herovici 和 Picrosirius Red 染色表明，在主要组织相容性复合体错配模型中，支气管旁和血管旁胶原沉积广泛。轻微错配模型主要显示致密的淋巴细胞浸润，胶原蛋白沉积强度较低。

使用偏振滤光片进行的 Picrosirius Red 染色显示，两种型号的沉积纤维均为绿色。同种移植物对照显示胶原蛋白局限于支气管旁和血管旁边界，类似于幼稚的小鼠肺。数字图像分析显示，与轻微错配移植物、右侧幼稚肺组织或幼稚 BALB/c 左肺相比，主要组织相容性复合物错配肺移植物中的总胶原蛋白增加。

未证明厚胶原纤维的差异。细胶原纤维的分析显示，与轻微错配模型、幼稚右侧肺组织或幼稚 BALB/c 左肺相比，主要错配模型的存在增加。