تلطيخ Picrosirius Red للتقييم النسيجي المرضي شبه الكمي لترسب الكولاجين في نماذج الفئران لرفض الطعم الخيفي المزمن للرئة

يركز بحثنا على تحليل تطور التليف في رفض الطعم الخيفي المزمن للرئة. لذلك نحن مهتمون بالطرق التي تميز حجرة الأنسجة الليفية. لإعادة إنتاج الأمراض المرتبطة بالزرع ، نستخدم نموذج الفأر لزراعة الرئة المفردة الذي قدمناه منذ عدة سنوات.

في هذا النموذج ، ثبت أن زرع الرئة بين سلالات الفئران الخيفية يؤدي إلى مستويات مختلفة من التليف غير المشروع. غالبا ما يتم تقديم بيانات الأنسجة حول إعادة تشكيل الأنسجة الليفية نوعيا. توفر طريقتنا باستخدام تلطيخ Picrosirius Red ميزة التقييم شبه الكمي وتميز بين ألياف الكولاجين السميكة والرقيقة.

للبدء ، قم بترطيب عينات رئة الفأر المضمنة في البارافين في تقليل تركيزات الإيثانول لمدة دقيقتين لكل منهما. تلطخ الشريحة لمدة ثماني دقائق في محلول الدمالوم من ماير. اغسل الشريحة لمدة 10 دقائق تحت ماء الصنبور الجاري ، ثم احتضن الشريحة لمدة ساعة واحدة في محلول Picrosirius Red.

اغمس الشريحة من خمس إلى 10 مرات في محلول حمض الخليك 0.5٪. رج الشريحة برفق لإزالة المحلول. الآن قم بتجفيف الشريحة في زيادة تركيزات الإيثانول و 100٪ Xylol لمدة خمس دقائق لكل منهما.

أضف قطرة واحدة من وسيط التثبيت على العينة لتضمينها وتغطيتها بقلة غطاء. اترك الشرائح تجف تحت غطاء الدخان. تحت المجهر الضوئي ، استخدم برنامج التصوير المناسب لتركيز العينة حتى يتم الحصول على صورة واضحة وحادة.

اضبط درجة مرشح الاستقطاب حتى تصبح الخلفية مظلمة تماما أو سوداء امسح العينة ضوئيا تحت تكبير 20x وقم بتصدير الصور بتنسيق TIFF. نقل الصور إلى برنامج فيجي.

انقر فوق تحرير وحدد مسح في الخارج. ثم انقر فوق تحليل متبوعا بقياس لقياس مساحة السطح الإجمالية. لقياس إجمالي محتوى الكولاجين لكل عينة، انقر فوق الصورة متبوعا بضبط وعتبة اللون.

اضبط درجة اللون بين 2 و 130 والسطوع بين 35 إلى 255. ثم انقر فوق تحليل ، وفي نافذة تحليل الجسيمات ، قم بتعيين الحجم إلى 1 ناقص ما لا نهاية وحدد مربعي مسح وتلخيص. اضبط اللون على اللون الأحمر لتحليل ألياف الكولاجين السميكة والأصفر الأخضر لألياف الكولاجين الرقيقة ، وقم بقياس إجمالي عدد الكولاجين.

أخيرا ، انقر فوق المكونات الإضافية ووحدات الماكرو والسجل لتكوين الماكرو للمعالجة التلقائية. يوضح تلطيخ ماسون ثلاثي الألوان ، هيروفيتشي وبيكروسيوس الأحمر ترسب الكولاجين الشامل للقصبات الهوائية والأوعية الدموية في نموذج مركب التوافق النسيجي الرئيسي غير المتطابق. أظهر النموذج غير المتطابق الطفيف في المقام الأول تسللات ليمفاوية كثيفة مع ترسب كولاجين أقل كثافة.

كشف تلطيخ Picrosirius Red مع مرشح الاستقطاب عن مظهر أخضر للألياف المترسبة في كلا الطرازين. أظهرت أدوات التحكم في الطعم المتساوي أن الكولاجين يقتصر على الحدود المجاورة للقصبات والأوعية الدموية ، على غرار رئتي الفئران الساذجتين. كشف تحليل الصور الرقمية عن زيادة الكولاجين الكلي في ترقيع الرئة المركب غير المتطابق الرئيسي مقارنة بالطعوم الطفيفة غير المتطابقة ، أو أنسجة الرئة الساذجة في الجانب الأيمن ، أو الرئتين اليسرى الساذجة BALB / c.

لم يتم إثبات أي اختلافات في ألياف الكولاجين السميكة. أظهر تحليل ألياف الكولاجين الرقيقة زيادة في النموذج الرئيسي غير المتطابق مقارنة بالنموذج غير المتطابق البسيط ، أو أنسجة الرئة الساذجة في الجانب الأيمن ، أو الرئتين اليسرى الساذجتين.