وبفضل ميلودي نيلي، جون الين، أبوعيطة بازل، ودونا رونفت لجهودها في المساعدة على تطوير النموذج الزرد. البحث الذي ذكرته هنا أيده بالمعهد الوطني للحساسية والأمراض المعدية من "معاهد الصحة الوطنية في" إطار جائزة الأرقام R21AI095520 و R01AI127390 (لجيفري فتحي حاء). المحتوى هي المسؤولة الوحيدة عن المؤلفين ولا تمثل بالضرورة وجهات النظر الرسمية "المعاهد الوطنية للصحة".

عليها جميع الأساليب الموصوفة هنا "رعاية الحيوان المؤسسية" واستخدام اللجنة (إياكوك) من جامعة ولاية وين. وكان أول من وصف هذا الأسلوب في رونفت et al. 12
1-تحديد مستويات استعمار الأمعاء
ملاحظة: استعمار الأمعاء هو المقياس الأكثر فائدة في النموذج الزرد كما يمكن استخدامه لمقارنة اللياقة البدنية النسبية من سلالات مختلفة ضد الكوليرا أو آثار الطفرات أو الجينات بالضربة القاضية.
<ol><li>تطعيم الزرد بالغمر ملاحظة: هذا يعني التعرض لتمثل المسار الطبيعي للعدوى.<ol>
<li>إعداد ضد الكوليرا
		<ol>
<li>تلقيح 5 مل مرق ليسوجيني (رطل) مع معزولة ضد الكوليرا مستعمرة من رطل لوحة واحتضان في 37 درجة مئوية مع الهز (180 لفة في الدقيقة) عن 6 – 8 ح (الثقافة بين عشية وضحاها).</li>
			<li>تلقيح 25 مل من الطازجة المتوسطة رطل يعقم في قارورة مخروطية 250 مل مع 50 ميليلتر للثقافة بين عشية وضحاها أعلاه. احتضانها من أجل ح 16 – 18 في 37 درجة مئوية مع الهز (150 لفة في الدقيقة).</li>
			<li>قراءة الكثافة البصرية 600 نانومتر (OD600) من 1/10 إضعاف الثقافة بين عشية وضحاها تقدير العدد من البكتيريا كل مل (OD600 = 1 هو ~ 109 زيمبابوي/mL.)</li>
			<li>حصاد الخلايا باستخدام الطرد المركزي في 6,000 ز لأدنى 10 إزالة وسائل الإعلام مع ماصة أو من أجل إيقاف في حل مطهر. ريسوسبيند الخلايا في برنامج تلفزيوني العقيمة إلى التركيز المطلوب، عادة ما بين 1 × 107 إلى 1 × 1010 لكل مل من برنامج تلفزيوني. ملاحظة: هنا، نشير إلى يعقم ماء التناضح العكسي التي تحتوي على أملاح البحر 60 مغ/لتر كالماء العدوى العقيمة.</li>
		</ol>
</li>
		<li>
التلقيح والحضانة
		<ol>
<li>ضع الزرد أربعة أو خمسة إلى 400 مل كوب يحتوي على 200 مل من الماء العدوى العقيمة.</li>
			<li>أضف 1 مل من ضد الكوليرا (من الخطوة 1.1.1.4.) للحصول على تركيز العدوى المطلوب (عادة 5 × 104 إلى 5 × 107 زيمبابوي/mL) في 200 مل من الماء العدوى.</li>
			<li>تغطية الكأس بغطاء مثقب لمنع السمك من القفز؛ الجزء العلوي من مربع تلميح 200 ميليلتر يعمل جيدا لهذا.</li>
			<li>قم بتسمية كل الكأس ووضعها في حاضنة الزجاج الأمامي تعيين عند 28 درجة مئوية خلال مدة التجربة.</li>
		</ol>
</li>
		<li>
الداخلي للتعرض عابرة ملاحظة: تعرض عابرة إلى ضد الكوليرا (عادة 6 ح) متبوعاً بإزالة البكتيريا إينوكولاتينج مفيد لدراسة الانتقال وتقدير أكثر دقة للبكتيريا أغلبه.<ol>
<li>بعد 6 ح تعرض، صب الماء كوب من خلال شبكة صيد السمك لجمع الأسماك. تجاهل المياه المصابة في وعاء للتبييض بالقتل ضد الكوليرا.</li>
			<li>ضع الأسماك تمت إزالتها في كوب 200 مل من الماء العدوى العقيمة. السماح للأسماك على السباحة في هذه المياه النظيفة لمدة 5 دقائق لإزالة البكتيريا السطحية من الأسماك.</li>
			<li>كرر الإجراء الصافي (الخطوة 1.2.2) والأسماك في كوب جديد 200 مل مياه العدوى العقيمة. الحفاظ على الأسماك في هذا الكأس طوال فترة التجربة.</li>
		</ol>
</li>
	</ol></li>
	<li>القتل الرحيم
	<ol>
<li>عندما وصلت هذه التجربة في النهاية المرجوة، أخذ عينة من الإصابة المياه (15 مل عادة كافية) للسماح للتهم البكتيرية أغلبه، وقياس الإسهال (مثل المقايسة الميوسين محتوى البروتين و/أو OD)، إذا كان المطلوب (القسم 2).</li>
		<li>صب التبييض بالقتل ضد الكوليرا في المياه قبالة ما تبقى المياه من خلال شبكة صيد السمك (لجمع الأسماك).</li>
		<li>ضع السمك في كوب يحتوي على الإصابة بالمياه بالإضافة إلى 336 ميكروغرام/مل من إيثيل 3-أمينوبينزواتي ميثانيسولفوناتي (تريكيني) واحتضان السمك في هذا الحل تريكيني لمدة 20 دقيقة في الرايت ملاحظة: تم تعقيمهن fishnets مع حل التبييض 10%.</li>
	</ol></li>
	<li>تشريح
	<ol>
<li>إعداد الأسماك<ol>
<li>حلج القطن سمكة خارج الحل تريكايني مع ملعقة بلاستيك القابل للتصرف ووضعه على سطح تشريح.</li>
			<li>موقف الأسماك تواجه الجانب البطني إلى الأعلى ورقم التعريف الشخصي أنه عن طريق الفك السفلي، مع نهاية حادة من الدبوس الزاوية بعيداً عن مركز الجسم. مكان طرف آخر الخلفي فقط لفتحه الشرج، الزاوية أيضا بعيداً عن الجسم.</li>
		</ol>
</li>
		<li>التعرض للامعاء<ol>
<li>وانخفض مسحه السطح البطني من الأسماك مع مسح خالية من الوبر في الإيثانول 70%.</li>
			<li>تعقيم دون مشرط ومقص فانس غمس لهم في الإيثانول 70% ويلهب لهم.</li>
			<li>جعل شق صغير طوليا في بطن فقط تحت الجلد باختراق الجداول واستخدام دون مشرط. أن يكون حريصا على عدم قطع عميقا جداً، كما الأمعاء يقع فقط تحت الجلد.</li>
			<li>باستخدام المقص، توسيع الشق بعناية على طول الجسم، وقطع لا أعمق من مستوى الجلد وتجنب فتحه الشرج.</li>
			<li>جعل التخفيضات الجانبية اثنين مع المقص تجاه رئيس الأسماك للسماح فتح الشق.</li>
			<li>دبوس الجلد على كل جانب من الشقوق الجانبية إلى السطح تشريح، الصيد دبابيس، بعيداً عن الجسم. ملاحظة: تم سابقا تعقيمهن نصائح المسامير التي يلهب بها مع الكحول.</li>
		</ol>
</li>
		<li>
إزالة الأمعاء ملاحظة: يجب أن تكون مرئية كأنبوب شاحب، رقيقة جداً على رأس الأجهزة الأخرى في الأمعاء.<ol>
<li>لهب-تعقيم الملقط وثم استخدامها لإزالة كامل الأمعاء (عادة 12 – 15 ملم في الطول). ضع الأمعاء في أنبوب تجانس التي تحتوي على حبات الزجاج (انظر الخطوات 1.4.1–1.4.2) و 1 مل 1 x برنامج تلفزيوني أو رطل, على الجليد.</li>
		</ol>
</li>
	</ol></li>
	<li>تجانس
	<ol>
<li>إعداد أنابيب التجانس مقدما بصب غ ~1.5 من حبات الزجاج 1 ملم إلى 2 مل أنابيب ملولبة (ملء لهم في منتصف الطريق تقريبا) وتعقيم ثم لهم بالتعقيم.</li>
		<li>أضف 1 مل من رطل العقيمة أو برنامج تلفزيوني x 1.</li>
		<li>وبمجرد الأمعاء الزرد المسمار المضافة (الخطوة 1.3.3.1) للأنابيب، القبعات على شكل محكم جداً، وثم تأمين الأنابيب في الخالطون دوامة.</li>
		<li>مجانسة العينات لمدة 1 دقيقة على إعداد الحد الأقصى، ثم بارد لهم على الجليد للحد الأدنى 1 – 2 كرر دورة التجانس هذا مرة أخرى تجانس كامل. ملاحظة: سوف تعمل عدة أساليب بديلة لتحقيق التجانس أيضا.</li>
	</ol></li>
	<li>قياس مستويات استعمار الأمعاء
	<ol>
<li>إعداد الأنابيب (أنابيب اختبار زجاجية صغيرة أو 1.5 مل ميكروسينتريفوجي الأنابيب) لتمييع المسلسل هوموجيناتي عن طريق إضافة ميليلتر 900 رطل أو برنامج تلفزيوني x 1 لكل أنبوبة. لكل الأسماك، إعداد أنابيب 5 – 6 وجعل الوقت تخفيف المسلسل من هوموجيناتي المعوية بإضافة 100 ميليلتر من هوموجيناتي إلى الأنبوب الأول، فورتيكسينج إلى المزيج، ومن ثم إضافة 100 ميليلتر من الأنبوب الأول إلى الأنبوب الثاني.</li>
		<li>كرر هذا الإجراء إلى تخفيف جميع قد أعدت.</li>
		<li>100-200 ميليلتر لتمييع كل رطل أجار لوحات تحتوي على 100 ميكروغرام/مل من ستربتوميسين (في حالة استخدام سلالات مقاومة ستربتوميسين) و 40 ميكروغرام/مل من X-غال (5-bromo-4-chloro-3-indolyl-β-D-galactopyranoside) على لوحة. احتضان لوحات عند 30 درجة مئوية ح 16 – 18.</li>
		<li>بعد الاحتضان بين عشية وضحاها، عد المستعمرات ضد الكوليرا في اللوحات، وأما باستخدام عداد مستعمرة الآلي أو يدوياً عد المستعمرات؛ أنه من المفيد بمناسبة المستعمرات التي تم جردها مع تلميح ماركر.</li>
		<li>تحديد زيمبابوي في الأمعاء السمك بضرب العدد لوحة عامل التخفيف من التعليق، آخذا في الاعتبار وحدة التخزين التي تم مطلي.</li>
	</ol></li>
</ol>2-قياس إسهال السمك
ملاحظة: استخدمت أربعة مقاييس مختلفة لتقييم الإسهال الأسماك: مستويات الميوسين في الماء، ومستويات البروتين أغلبه عموما في الماء، والتطوير التنظيمي600 من الماء، و ضد الكوليرا زيمبابوي في المياه13. الإسهال عادة ما تتضح بصريا حوالي 6 ح بعد تعرض الزرد إلى ضد الكوليرا كما هو موضح أعلاه.
<ol><li>
تحديد مستويات الميوسين ملاحظة: إفراز الميوسين فعل أثناء الاستعمار ضد الكوليرا ، وهو مقياس جيد لمستويات إفراز، خصوصا في المراحل الأولى في إصابة13. والرزن الميوسين اختلاف في حمض الدوري microtiter شيف المقايسة19.<ol>
<li>إعداد المواد التالية: 50% (w/v) حمض الدوري حل الأسهم وحل العامل حمض الدوري 0.1% (10 ميليلتر الأسهم حمض الدوري 50% إضافة إلى 5 مل حمض الخليك 7% — استخدم فورا بعد إجراء)، المعايير الميوسين، ولوحات microtiter 96، حسنا، شيف كاشف.<ol>
<li>إعداد معايير الميوسين بتعليق المبالغ التالية من الميوسين (من نوع المعدة الخنزير الثالث) في المخزن مؤقت خلات صوديوم (pH خلات، يدتا 5 مم، الصوديوم 100 مم إلى 5.5 مع حمض الخليك الجليدية): 400 ميكروغرام/ملليلتر، 300 ميكروغرام/مل، 200 ميكروغرام/مل، 150 ميكروغرام/مل ، 100 ميكروغرام/مل 75 ميكروغرام/مل، 50 ميكروغرام/مل، 25 ميكروغرام/مل و 10 ميكروغرام/مل. إعداد اللوحة عن طريق إضافة 100 ميليلتر من الإصابة بالماء لكل بئر التي سيتم استخدامها في مقايسة النحو التالي: فارغة 1 x PBS؛ الميوسين المعايير كما هو موضح أعلاه، أو عينة مياه من العدوى الأسماك. كل عينة في ثلاث نسخ.</li>
		</ol>
</li>
		<li>إضافة 50 ميليلتر من 0.1% حمض الدوري حل جديدة لكل جيدا مع ماصة متعددة القنوات وأنها مزيج من بيبيتينج صعودا وهبوطاً عدة مرات.</li>
		<li>التفاف اللوحة محكم في غلاف بلاستيكي واحتضان أنه عند 37 درجة مئوية ح 1 – 1.5.</li>
		<li>بارد لوحة وصولاً إلى درجة حرارة الغرفة عن 5 – 10 دقيقة إضافة 100 ميليلتر حل فوكسين (كاشف شيف الشعبية) لكل بئر، وبيبيت صعودا وهبوطاً لمزجها.</li>
		<li>التفاف اللوحة في غلاف بلاستيكي واحتضان في درجة حرارة الغرفة على منصة هزاز حتى وضعت اللون؛ عموما هو وضع اللون ضمن 20 دقيقة قراءة امتصاص في 560 نانومتر باستخدام قارئ لوحة.</li>
		<li>رسم منحنى قياسي الميوسين (OD560مقابل ميكروغرام/مل الميوسين القياسية). تحديد مستويات الميوسين المجهولة بتحديد حيث يسقط OD560 من كل معروف على المنحنى القياسي وقراءة تركيز الميوسين المقابلة لتلك القيمة.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
تحديد مستويات البروتين ملاحظة: وبصرف النظر عن الميوسين، مستويات البروتين عموما في الماء وكيل آخر لمستويات الإسهال (البراز غائم، السائلة) التي تنتجها الأسماك. يستخدم هذا الإجراء فحص برادفورد قياسية لتقدير مستويات البروتين. وتقدر مستويات البروتين على منحنى قياسي ألبومين المصل بقرى (BSA).<ol>
<li>مزيج 100 ميليلتر من أحد المعايير جيش صرب البوسنة (راجع الملاحظة أدناه) أو 100 ميليلتر من الإصابة بالمياه (من الكأس التي تحتوي على الأسماك المصابة) مع ميليلتر 900 من برادفورد كاشف الإنزيم (الكاشف مقايسة البروتين بيرس يعمل جيدا لهذا) في ومبومو المتاح. احتضان جميع العينات في درجة حرارة الغرفة لمدة 2 دقيقة. ملاحظة: استخدمت المعايير جيش صرب البوسنة التالية: 1,800 ميكروغرام/مل 1,000 ميكروغرام/ملليلتر، 750 ميكروغرام/مل، 500 ميكروغرام/مل، 250 ميكروغرام/ملليلتر، 125 ميكروغرام/مل، 50 ميكروغرام/مل و 25 ميكروغرام/مل. كانت تضعف المعايير جيش صرب البوسنة في الماء المقطر يعقم.</li>
		<li>قراءة OD660 كل معيار أو عينة عليها باستخدام جهاز المطياف الضوئي.</li>
		<li>ارسم المنحنى القياسي جيش صرب البوسنة (OD660مقابل ميكروغرام/مل). تحديد مستويات البروتين المجهولة بتحديد حيث تقع على المنحنى القياسي جيش صرب البوسنة OD660 من كل معروف وقراءة تركيز الميوسين المقابلة لتلك القيمة.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
قياس القطر الخارجي600 ملاحظة: وجود الإسهال (البراز غائم، سائلة) واضح وضوحاً بعد عدة ح وعزم600 OD بسيطة يمكن استخدامها لقياس هذا.<ol>
<li>عكس الأنبوب الذي يحتوي على الماء الإصابة عدة مرات توزيعها بالتساوي المحتويات. إضافة 1 مل عينة الماء إلى ومبومو المتاح. استخدم 1 مل من الماء العدوى العقيمة كعنصر سلبي.</li>
		<li>القيام بقياس "فارغة" باستخدام جهاز المطياف الضوئي مبلغ 600 نانومتر باستخدام نموذج المراقبة السلبية. قراءة كل عينة المياه في 600 نانومتر وسجل النتائج.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
تصميم تفرز ضد الكوليرا زيمبابوي/مل بعد الإصابة ملاحظة: يفرز عنصرا رئيسيا من الإسهال التي تنتجها في الزرد ضد الكوليرا. البت في زيمبابوي/مل يمكن استخدامها لأغراض مثل تقدير النسخ المتماثل البكتيرية في الأمعاء الأسماك، وكتدبير الجرعة المعدية في تجارب الإرسال. ويتم هذا التدبير أفضل عندما حدث مرض انتقالي. إذا كان يستخدم عدوى ح 24، سيتم قياس هذا التحليل العدوى المشتركة بالإضافة إلى أغلبه ضد الكوليرا.<ol>
<li>أخذ عينة مياه عند نقطة الوقت المطلوب وتمييع تسلسلياً كما هو موضح سابقا.</li>
		<li>لوحة تخفيف المسلسل على وسائط انتقائية (التي تحتوي على المضادات الحيوية المناسبة آخر أو ستربتوميسين أو DCLS أجار رطل) واحتضانها لهم عند 30 درجة مئوية ح 24.</li>
		<li>عد المستعمرات. حساب زيمبابوي الواحد مل من الماء كما هو موضح في الخطوة 1، 5.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol>
	<li>Harris, J. B., LaRocque, R. C., Qadri, F., Ryan, E. T., Calderwood, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cholera.">Cholera.</a> The Lancet. 379 (9835), 2466-2476 (2012).</li><li>Dutta, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vibrio+cholerae+non-O1,+non-O139+serogroups+and+cholera-like+diarrhea,+Kolkata,+India.">Vibrio cholerae non-O1, non-O139 serogroups and cholera-like diarrhea, Kolkata, India.</a> Emerging Infectious Diseases. 19 (3), 464-467 (2013).</li><li>Huq, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ecological+relationships+between+Vibrio+cholerae+and+planktonic+crustacean+copepods.">Ecological relationships between Vibrio cholerae and planktonic crustacean copepods.</a> Applied and Environmental Microbiology. 45 (1), 275-283 (1983).</li><li>Halpern, M., Landsberg, O., Raats, D., Rosenberg, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Culturable+and+VBNC+Vibrio+cholerae:+interactions+with+chironomid+egg+masses+and+their+bacterial+population.">Culturable and VBNC Vibrio cholerae: interactions with chironomid egg masses and their bacterial population.</a> Microbial Ecology. 53 (2), 285-293 (2007).</li><li>Broza, M., Halpern, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathogen+reservoirs.+Chironomid+egg+masses+and+Vibrio+cholerae.">Pathogen reservoirs. Chironomid egg masses and Vibrio cholerae.</a> Nature. 412 (6842), 40 (2001).</li><li>Halpern, M., Izhaki, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fish+as+hosts+of+Vibrio+cholerae.">Fish as hosts of Vibrio cholerae.</a> Frontiers in Microbiology. 8 (282), (2017).</li><li>Senderovich, Y., Izhaki, I., Halpern, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fish+as+reservoirs+and+vectors+of+Vibrio+cholerae.">Fish as reservoirs and vectors of Vibrio cholerae.</a> PLoS ONE. 5 (1), e8607 (2010).</li><li>Traore, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Occurrence+of+Vibrio+cholerae+in+fish+and+water+from+a+reservoir+and+a+neighboring+channel+in+Ouagadougou,+Burkina+Faso.">Occurrence of Vibrio cholerae in fish and water from a reservoir and a neighboring channel in Ouagadougou, Burkina Faso.</a> The Journal of Infection in Developing Countries. 8 (10), 1334-1338 (2014).</li><li>Booth, L. V., Lang, D. A., Athersuch, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+Vibrio+cholerae+non-01+from+a+Somerset+farmworker+and+his+tropical+fish+tank.">Isolation of Vibrio cholerae non-01 from a Somerset farmworker and his tropical fish tank.</a> Journal of Infection. 20 (1), 55-57 (1990).</li><li>Torres-Vitela, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Incidence+of+Vibrio+cholerae+in+fresh+fish+and+ceviche+in+Guadalajara,+Mexico.">Incidence of Vibrio cholerae in fresh fish and ceviche in Guadalajara, Mexico.</a> Journal of Food Protection. 60 (3), 237-241 (1997).</li><li>Rowe, H. M., Withey, J. H., Neely, M. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+as+a+model+for+zoonotic+aquatic+pathogens.">Zebrafish as a model for zoonotic aquatic pathogens.</a> Developmental &amp; Comparative Immunology. 46 (1), 96-107 (2014).</li><li>Runft, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+as+a+natural+host+model+for+Vibrio+cholerae+colonization+and+transmission.">Zebrafish as a natural host model for Vibrio cholerae colonization and transmission.</a> Applied and Environmental Microbiology. 80 (5), 1710-1717 (2014).</li><li>Mitchell, K. C., Breen, P., Britton, S., Neely, M. N., Withey, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantifying+Vibrio+cholerae+enterotoxicity+in+a+zebrafish+infection+model.">Quantifying Vibrio cholerae enterotoxicity in a zebrafish infection model.</a> Applied and Environmental Microbiology. , (2017).</li><li>Klose, K. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+suckling+mouse+model+of+cholera.">The suckling mouse model of cholera.</a> Trends in Microbiology. 8 (4), 189-191 (2000).</li><li>Formal, S. B., Kundel, D., Schneider, H., Kunevn, H., Sprinz, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studies+with+Vibrio+cholerae+in+the+ligated+loop+of+the+rabbit+intestine.">Studies with Vibrio cholerae in the ligated loop of the rabbit intestine.</a> British Journal of Experimental Pathology. 42, 504-510 (1961).</li><li>Williams, E. M., Dohadwalla, A. N., Dutta, N. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diarrhea+and+accumulation+of+intestinal+fluid+in+infant+rabbits+infected+with+Vibrio+cholerae+in+an+isolated+jejunal+segment.">Diarrhea and accumulation of intestinal fluid in infant rabbits infected with Vibrio cholerae in an isolated jejunal segment.</a> The Journal of Infectious Diseases. 120 (6), 645-651 (1969).</li><li>Spira, W. M., Sack, R. B., Froehlich, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simple+adult+rabbit+model+for+Vibrio+cholerae+and+enterotoxigenic+Escherichia+coli+diarrhea.">Simple adult rabbit model for Vibrio cholerae and enterotoxigenic Escherichia coli diarrhea.</a> Infection and Immunity. 32 (2), 739-747 (1981).</li><li>Ritchie, J. M., Rui, H., Bronson, R. T., Waldor, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Back+to+the+future:+studying+cholera+pathogenesis+using+infant+rabbits.">Back to the future: studying cholera pathogenesis using infant rabbits.</a> mBio. 1 (1), (2010).</li><li>Kilcoyne, M., Gerlach, J. Q., Farrell, M. P., Bhavanandan, V. P., Joshi, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Periodic+acid-Schiff's+reagent+assay+for+carbohydrates+in+a+microtiter+plate+format.">Periodic acid-Schiff's reagent assay for carbohydrates in a microtiter plate format.</a> Analytical Biochemistry. 416 (1), 18-26 (2011).</li><li>Balaji, V., Sridharan, G., Jesudason, M. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytotoxicity+of+non+O1,+non+O139+Vibrios+isolated+from+fresh+water+bodies+in+Vellore,+south+India.">Cytotoxicity of non O1, non O139 Vibrios isolated from fresh water bodies in Vellore, south India.</a> Indian Journal of Medical Research. 110, 155-159 (1999).</li><li>Hasan, N. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nontoxigenic+Vibrio+cholerae+non-O1/O139+isolate+from+a+case+of+human+gastroenteritis+in+the+U.S.+Gulf+Coast.">Nontoxigenic Vibrio cholerae non-O1/O139 isolate from a case of human gastroenteritis in the U.S. Gulf Coast.</a> Journal of Clinical Microbiology. 53 (1), 9-14 (2015).</li></ol>

الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.

الزرد هو نموذج جديد نسبيا لدراسة ضد الكوليرا ولكن يحمل الكثير من الوعود للمستقبل اكتشاف جوانب غير معروفة من قبل ضد الكوليرا البيولوجيا والمرضية11،،من1213 . النموذج الزرد الكبار لديه مزايا كلا طبيعية ضد الكوليرا المضيف يحتوي الحجمية الأمعاء سليمة، وناضجة، ونموذج للبيئة. عيوب النموذج أن اثنين من عوامل الفوعة البشرية الرئيسية والسمية الكوليرا والهياكل كوريجولاتيد السمية، غير مطلوبة لالزرد الاستعمار أو المرضية12. ومع ذلك، وهذا يمكن النظر بدلاً من ذلك كميزة أخرى يمكن أن تمكن من تحديد هوية الرواية ضد الكوليرا الاستعمار العوامل وتسهيل دراسة السموم الأخرى ضد الكوليرا . وهذا ذات الصلة لا سيما أن الغالبية العظمى من غير-O1/O139 "البيئية" ضد الكوليرا سلالات، معظمها لا تنتج الكوليرا السمية أو السمية كوريجولاتيد الهياكل وحتى الآن لا يزال يمكن أن يسبب المرض20،21.
مشاكل الأكثر احتمالاً أن تنشأ باستخدام هذا النموذج ترتبط الحجمية المعوية وفيرة. الطلاء على وسائل الإعلام نونسيليكتيفي سيجعل هذا النموذج أساسا غير صالحة للاستعمال، فإنه سيكون من المستحيل تحديد المستعمرات ضد الكوليرا . خلفية مستعمرات من الحجمية المعوية حتى استخدام وسائط انتقائية أو انتقائية جزئيا مثل رطل زائد ستربتوميسين أو DCLS، سيكون حاضرا. من الضروري للتحقق من أن المستعمرات التي يجري عد النية ضد الكوليرا بالترقيع المستعمرات التي تنتجها الطلاء على وسائط أقل انتقائية إلى وسيلة انتقائية للغاية مثل ثلاثي. بدلاً من ذلك، إدراج علامة انتقائية أفضل في الجينوم من سلالة فائدة إلى حد كبير يبسط تحديد ضد الكوليرا من هوموجيناتيس المعوية.
استفادة الاختبارات المستخدمة لقياس الزرد الإسهال أنها بسيطة وغير مكلفة لتنفيذ13. العيب هو أن هذه الاختبارات إلى حد كبير غير محدد، وبصرف النظر عن عد أغلبه ضد الكوليرا زيمبابوي مباشرة، ويمكن أن يصبح من الصعب على تحديد ما إذا كان الإسهال نتيجة مباشرة ضد الكوليرا المرضية، أو إلى بعض الضغوطات الأخرى . المساعدات وضع الاختلافات هذه أو فحوصات أخرى لتحسين إرادتهم خصوصية المحتمل في المستقبل قياسات ضد الكوليرا المرضية في الزرد.

الضمة الكوليرية هو بكتيريا سلبية الغرام المائية، والذي يسبب مرض الكوليرا فضلا عن الإسهال متفرقة1،2. خامسا-الكوليرا وجدت في البيئة في مناطق كثيرة من العالم، وغالباً ما ترتبط مع غيرها من الكائنات المائية. وتشمل هذه الكائنات تربط العوالق والجماهير بيض الحشرات والرخويات والأسماك الفقارية الأنواع3،4،5،،من67. وقد عزل العديد من الدراسات ضد الكوليرا من أصقاع المعوية من الأسماك في مناطق جغرافية مختلفة7،،من89،10. الوجود ضد الكوليرا في الأسماك يشير إلى أن الأسماك قد تعمل كخزان بيئية. يمكن أن يكون تورط الأسماك أيضا في نقل المرض إلى البشر وفي انتشار جغرافي ضد الكوليرا سلالات6.
لفهم كيفية تفاعل ضد الكوليرا مع الأسماك، وضعت دانيو rerio، المعروف الزرد، كنظام نموذجي لدراسة ضد الكوليراه11. الزرد أصلية في جنوب آسيا، بما في ذلك منطقة خليج البنغال، الذي يعتقد أنه أقرب خزان ضد الكوليرا. قبل بداية وباء الكوليرا الأولى في 1817، لم يبلغ الكوليرا خارج ما هو الآن في الهند وبنغلاديش. ولذلك، الزرد و ضد الكوليرا يكاد يكون من المؤكد المرتبطة مع بعضها البعض عبر مقاييس زمنية تطورية، مما يوحي بأن الزرد مجموعة ضد الكوليرا في البيئة الطبيعية12.
بسيط لتنفيذ نموذج الزرد ضد الكوليرا ويمكن استخدامها لدراسة كامل الممرضة ضد الكوليرا دورة الحياة. تتعرض الأسماك ضد الكوليرا بالاستحمام في المياه التي قد تم تلقيح مع عدد معروف من ضد الكوليرا. في غضون ساعات قليلة، تجري استعمار الأمعاء، يليه إنتاج الإسهال. يتكون الإسهال الميوسين والبروتينات، أغلبه البكتيريا وغيرها من محتويات الأمعاء. يمكن قياس درجة الإسهال باستخدام القياسات البسيطة قليلة13. ضد الكوليرا التي قد تم تفرز بالأسماك المصابة يمكن ثم انتقل إلى تصيب الأسماك السذاجة، واستكمال دورة المعدية. ولذلك، يلخص النموذج الزرد ضد الكوليرا مرض بشري العملية12،14.
الأكثر استخداماً ضد الكوليرا نماذج حيوانية تاريخيا الفئران والأرانب14،،من1516،،من1718. هذه النماذج قد ساعدت في إضافة إلى معرفتنا بالمرضية ضد الكوليرا . ومع ذلك، نظراً للفئران والأرانب ليست طبيعية ضد الكوليرا المضيفين، هناك قيود يمكن أن يدرس ما هي جوانب دورة حياة ضد الكوليرا . الاستعمار ضد الكوليرا من الفئران والأرانب يتطلب عادة غياب المعوية الحجمية أو المعالجة بالمضادات الحيوية للتلف الحجمية المعوية. تتطلب كلا النموذجين تزقيمية لإدخال البكتيريا الجهاز الهضمي أو التلاعب الجراحية مباشرة حقن البكتيريا في الأمعاء. الزرد يتمتعون بميزة هي سهولة استعمرت الأسماك الكبار مع الحجمية الأمعاء سليمة وعملية المعدية يحدث بطبيعة الحال، دون أي تلاعب المطلوبة.
يوضح هذا العمل الاستفادة الزرد كنموذج للإصابة ضد الكوليرا . سوف تكون العدوى وتشريح وتعداد المستعمر ضد الكوليرا، والتحديد الكمي للإسهال الناجم عن ضد الكوليرا وصف12،13. هذا النموذج من المحتمل أن تكون مفيدة للعلماء المهتمين في عملية المرض ضد الكوليرا وفي نمط الحياة البيئية ضد الكوليرا .

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Instrument</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Shaker incubator</td>
			<td>New Brunswick Scientific, Edison, NJ</td>
			<td>Excella E25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incubator</td>
			<td>NUAIRE, Plymouth, MN</td>
			<td>Auto Flow</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spectrophotometer</td>
			<td>Thermo, Waltham, MA</td>
			<td>Geaesys 6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vortex homogenizer</td>
			<td>Minibeadbeater24</td>
			<td>112011</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Weighing Machine</td>
			<td>Ohaus, Columbia, MD</td>
			<td>Adventurer Pro</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heat Stirer</td>
			<td>Corning, Corning, NY</td>
			<td>PC-420D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Burner</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>automated colony counter</td>
			<td>REVSCI</td>
			<td>120417B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Materials</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>400 ml glass beakers</td>
			<td>Pyrex</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>perforated lids</td>
			<td>Microtip holder with holes from tip box</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>disposable plastic spoons</td>
			<td>Office Depot, Boca Raton, FL</td>
			<td>D15-25-7008</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fish Tank System</td>
			<td>Aquaneering, San Diego, CA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RO Water Purifier</td>
			<td>Aqua FX</td>
			<td>TK001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fish net</td>
			<td>Marina</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>fish food</td>
			<td>Tetra fin</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brine Shrimp</td>
			<td>Red jungle brand</td>
			<td>O.S.I. pro 80</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Styrofoam board</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pins</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpels</td>
			<td>Fine Scientific tools, Foster City, CA</td>
			<td>10000-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps</td>
			<td>Fine Scientific tools, Foster City, CA</td>
			<td>11223-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vannas scissors</td>
			<td>Fine Scientific tools, Foster City, CA</td>
			<td>15000-11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2 ml screw cap tubes</td>
			<td>Fisher Scientific, Hampton, NH</td>
			<td>02-681-375</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 mm glass beads</td>
			<td>Bio Spec</td>
			<td>11079110</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass beads for spreading</td>
			<td>Sigma, St. Louis, MO</td>
			<td>18406-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri plate</td>
			<td>Fisher Brand, Hampton, NH</td>
			<td>FB0875713</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.5 ml centrifuge tube</td>
			<td>Midsci, Valley Park, MO</td>
			<td>AVSS1700</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 ml centrifuge tube</td>
			<td>Corning Falcon, Corning, NY</td>
			<td>352098</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Test tubes</td>
			<td>Pyrex</td>
			<td>9820</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass Pipette</td>
			<td>Fisher Brand, Hampton, NH</td>
			<td>13675K</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro pipettes</td>
			<td>Sartorius Biohit, G&#246;ttingen, Germany</td>
			<td>m1000/m200/m20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tips</td>
			<td>Genesee Scientific, San Diego, CA</td>
			<td>24-150RS/24-412</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chemicals</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Instant Ocean salts</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>phosphate buffered saline</td>
			<td>VWR Life Science, Radnor, PA</td>
			<td>K813-500ml</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tricaine (ethyl 3-aminobenzoate methanesulfonate salt</td>
			<td>Sigma, St. Louis, MO</td>
			<td>A5040</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5-Bromo-4-chloro-3-indolyl-&#946;-D-galactopyranoside</td>
			<td>Sigma, St. Louis, MO</td>
			<td>10651745001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Schiff&#8217;s reagent</td>
			<td>Sigma, St. Louis, MO</td>
			<td>84655-250 mL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>periodic acid</td>
			<td>Fisher Scientific, Hampton, NH</td>
			<td>10450-60-9</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mucin from porcine stomach</td>
			<td>Sigma, St. Louis, MO</td>
			<td>M2378-100G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine serum albumin</td>
			<td>Fisher Scientific, Hampton, NH</td>
			<td>9046-46-8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pierce 660nm Protein Assay Reagent</td>
			<td>Thermo, Waltham, MA</td>
			<td>22660</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LB medium</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypton</td>
			<td>BD Biosciences, San Jose, CA</td>
			<td>211705</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Teast Extract</td>
			<td>BD Biosciences, San Jose, CA</td>
			<td>212750</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NACL</td>
			<td>Fisher Scientific, Hampton, NH</td>
			<td>BP358-212</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agar</td>
			<td>BD Biosciences, San Jose, CA</td>
			<td>214010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TCBS Agar</td>
			<td>BD Biosciences, San Jose, CA</td>
			<td>265020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DCLS Agar</td>
			<td>Sigma, St. Louis, MO</td>
			<td>70135-500gm</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Software</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microsoft office</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Prism 5</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

quantifying vibrio cholerae colonization and diarrhea in the adult zebrafish model

الضمة الكوليرية أفضل المعروف كعامل المعدية التي تسبب الكوليرا الأمراض البشرية. خارج المضيف البشرية، ضد الكوليرا أساسا موجود في البيئة المائية، حيث يتفاعل مع مجموعة متنوعة من الأنواع المائية أعلى. الأسماك فقاريات معروفة ليكون مضيف بيئية ومحتملة ضد الكوليرا خزان في الطبيعة. ضد الكوليرا وأنواع الأسماك تيليوست دانيو rerio، المعروف الزرد، تنبع من شبه القارة الهندية، مما يوحي بوجود تفاعل منذ أمد بعيد في البيئات المائية. الزرد كائن نموذج مثالي لدراسة جوانب كثيرة من الأحياء، بما في ذلك الأمراض المعدية. الزرد يمكن أن تكون بسهولة وسرعة من استعمر ضد الكوليرا بعد التعرض في المياه. استعمار الأمعاء ضد الكوليرا يؤدي إلى إنتاج الإسهال وإفراز منسوخة ضد الكوليرا. هذه تفرز البكتيريا يمكن ثم انتقل إلى استعمار جديد الأسماك المضيفين. هنا، نحن لشرح كيفية تقييم ضد الكوليرا-استعمار الأمعاء في الزرد، وكيفية قياس ضد الكوليرا-التي يسببها الإسهال الزرد. نموذج الاستعمار ينبغي أن تكون مفيدة للباحثين الذين يدرسون ما إذا كانت الجينات للفائدة قد تكون هامة لاستعمار المضيف و/أو للبقاء على قيد الحياة البيئية. التحديد الكمي للإسهال الزرد ينبغي أن يكون مفيداً للباحثين الذين يدرسون أي مسببات الأمراض المعوية المهتمين باستكشاف الزرد كنظام نموذجي.

خامسا-الكوليرا الاستعمار المسالك المعوية الزرد
تقديم مثال لمستويات الاستعمار نموذجية نلاحظ، نحن تلقيح 5 × 106 زيمبابوي من تور ش ضد الكوليرا السلالة الجائحة N16961 في 200 مل الماء في كوب يحتوي على عدة الزرد. بعد 6 ح للإصابة، تم غسلها في المياه العذبة الأسماك وتحويلها إلى كوب 200 مل من العدوى يعقم المياه كما هو موضح في البروتوكول. ح 18 بعد نقل (أو 24 ساعة بعد الإصابة الأولية)، وقد euthanized الأسماك، وأخذت الأمعاء لتحديد مستويات الاستعمار. 10 حوالي5 إلى6 10 ضد الكوليرا الخلايا في الأمعاء الأسماك لوحظت عادة في الأمعاء العدوى بعد 24 ساعة (hpi) (الشكل 1) مع حجم 5 × 106 العدوى.
التحديد الكمي لإسهال السمك
وكان كمياً الإسهال باستخدام فحوصات بسيطة الأربعة المذكورة أعلاه. الفحص الأولى، زيمبابوي في أغلبه ضد الكوليرا، يرد في الشكل 1. كانت مطلية بتخفيف المسلسل من hpi 24 الماء العد ضد الكوليرا زيمبابوي. عادة يتم التقيد بمستويات عالية نسبيا من أغلبه ضد الكوليرا ؛ في هذا المثال، حوالي 10 تم الكشف عن5 ضد الكوليرا لكل مل من الماء. لا تنتج الأسماك مصابة المزودة ضد الكوليرا (البيانات لا تظهر).
المقايسة الثانية تستخدم للتحديد الكمي للإسهال هو أغلبه الميوسين. يظهر الشكل 2 آثار ثلاثة مختلفة ضد الكوليرا المعدية جرعات على مستويات الميوسين في المياه 24 hpi. أعلى جرعة معدية يرتبط بأعلى إفراز الميوسين في الماء. كعنصر تحكم، ووضعت الأسماك الأربعة في الكأس متطابقة من المياه، ولكن تمت إضافة برنامج تلفزيوني بدلاً من الوقف ضد الكوليرا . مراقبة الأسماك تفرز الميوسين القليل جداً.
التحليل الكمي الإسهال الثالث هو OD600 من hpi 24 المياه. كما هو موضح في الشكل 3، OD600 من هذه المياه كان أعلى بكثير في كوب يحتوي على الزرد المصابين ضد الكوليرا مما في كوب يحتوي على الزرد مصابة.
وأخيراً، تم قياس مستويات البروتين الكلي في المياه. المياه التي تحتوي على الأسماك المصابة الواردة ما يقرب من ضعف مستويات البروتين الإجمالية التي لوحظت في المياه التي تحتوي على الأسماك غير مصاب (الشكل 4). جماعياً، توضح هذه فحوصات أربعة الآثار ضد الكوليرا عدوى لديه على إفراز الزرد.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57767/57767fig1.jpg"> الشكل 1: استعمار الأمعاء الزرد التي ضد الكوليرا. الأسماك المصابة ح 6، ثم غسلها والمحتضنة لمدة 24 ساعة. ويوضح الجانب الأيمن من الشكل زيمبابوي مجموع كل الأمعاء الأسماك الأربعة (النقاط السوداء). الجانب الأيمن من الشكل يشير إلى ضد الكوليرا زيمبابوي كل مل تقاس بالمياه 24 hpi (المربعات السوداء). تظهر وسيلة لمجموعتي البيانات مع خط أفقي كبير والانحراف المعياري المشار إليها بواسطة أشرطة الخطأ. <a href="/files/ftp_upload/57767/57767fig1large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57767/57767fig2.jpg"> رقم 2: تحليل الميوسين. ثلاثة مختلفة ضد الكوليرا الجرعات المعدية استخدمت، جنبا إلى جنب مع عنصر تحكم غير مصاب، كما هو مبين تحت x-المحور. يتم الإشارة إلى قيم الميوسين الكشف عن في الماء بواسطة حمض الدوري معدلة الاعتداء Schiff (PAS) يعني بأشرطة سوداء فوق كل جرعة المعدية. أشرطة الخطأ تشير إلى الانحراف المعياري. وتشير العلامات النجمية إلى ف < 0.05 كما يحددها الطالب في مزاوج اختبار t. <a href="/files/ftp_upload/57767/57767fig2large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57767/57767fig3.jpg"> الشكل 3: OD600 المقايسة كوكيل للإسهال. إصابة OD600 1 مل من الماء من قنينة تحتوي على أما ضد الكوليرا أو تم قياس الأسماك غير مصاب. أشرطة سوداء تشير إلى القيمة الوسطية وأشرطة الخطأ تشير إلى الانحراف المعياري. وتشير العلامات النجمية إلى ف < 0.05 كما يحددها الطالب في مزاوج اختبار t. <a href="/files/ftp_upload/57767/57767fig3large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57767/57767fig4.jpg"> الشكل 4: مجموع مستويات البروتين في الماء- وقدرت مجموع البروتين مقايسة برادفورد كما هو موضح. أشرطة سوداء تشير إلى قيم المتوسط الحسابي وأشرطة الخطأ تشير إلى الانحراف المعياري. وتشير العلامات النجمية إلى ف < 0.05 كما يحددها الطالب في مزاوج اختبار t. <a href="/files/ftp_upload/57767/57767fig4large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-</a>

Watch this Scientific Journal Video about Quantifying Vibrio cholerae Colonization and Diarrhea in the Adult Zebrafish Model at JoVE.com

Quantifying Vibrio cholerae Colonization and Diarrhea in the Adult Zebrafish Model

هي الزرد طبيعية الكوليرا استضافة ويمكن استخدامها للخص ودراسة دورة المعدية بأكملها من الاستعمار إلى انتقال العدوى. هنا، نحن لشرح كيفية تقييم مستويات الاستعمار ضد الكوليرا والإسهال في الزرد كمياً.

التحديد الكمي لاستعمار الكوليرا والإسهال في النموذج الزرد الكبار

Vibrio cholerae is best known as the infectious agent that causes the human disease cholera. Outside the human host, V. cholerae primarily exists in the ...

quantifying-vibrio-cholerae-colonization-diarrhea-adult-zebrafish

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Quantifying Vibrio cholerae Colonization and Diarrhea in the Adult Zebrafish Model

8.3K Views.  Wayne State University School of Medicine. هي الزرد طبيعية الكوليرا استضافة ويمكن استخدامها للخص ودراسة دورة المعدية بأكملها من الاستعمار إلى انتقال العدوى. هنا، نحن لشرح كيفية تقييم مستويات الاستعمار ضد الكوليرا والإسهال في الزرد كمياً.

Video: Quantifying Vibrio cholerae Colonization and Diarrhea in the Adult Zebrafish Model

Assessing Hepatic Metabolic Changes During Progressive Colonization of Germ-free Mouse by 1H NMR Spectroscopy

It is well known that gut bacteria contribute significantly to the host homeostasis, providing a range of benefits such as immune protection and vitamin synthesis. They also supply the host with a considerable amount of nutrients, making this ecosystem an essential metabolic organ. In the context of increasing evidence of the link between the gut flora and the metabolic syndrome, understanding the metabolic interaction between the host and its gut microbiota is becoming an important challenge of modern biology.1-4
 Colonization (also referred to as normalization process) designates the establishment of micro-organisms in a former germ-free animal. While it is a natural process occurring at birth, it is also used in adult germ-free animals to control the gut floral ecosystem and further determine its impact on the host metabolism. A common procedure to control the colonization process is to use the gavage method with a single or a mixture of micro-organisms. This method results in a very quick colonization and presents the disadvantage of being extremely stressful5. It is therefore useful to minimize the stress and to obtain a slower colonization process to observe gradually the impact of bacterial establishment on the host metabolism.
 In this manuscript, we describe a procedure to assess the modification of hepatic metabolism during a gradual colonization process using a non-destructive metabolic profiling technique. We propose to monitor gut microbial colonization by assessing the gut microbial metabolic activity reflected by the urinary excretion of microbial co-metabolites by 1H NMR-based metabolic profiling. This allows an appreciation of the stability of gut microbial activity beyond the stable establishment of the gut microbial ecosystem usually assessed by monitoring fecal bacteria by DGGE (denaturing gradient gel electrophoresis).6 The colonization takes place in a conventional open environment and is initiated by a dirty litter soiled by conventional animals, which will serve as controls. Rodents being coprophagous animals, this ensures a homogenous colonization as previously described.7
 Hepatic metabolic profiling is measured directly from an intact liver biopsy using 1H High Resolution Magic Angle Spinning NMR spectroscopy. This semi-quantitative technique offers a quick way to assess, without damaging the cell structure, the major metabolites such as triglycerides, glucose and glycogen in order to further estimate the complex interaction between the colonization process and the hepatic metabolism7-10. This method can also be applied to any tissue biopsy11,12.

Assessing Hepatic Metabolic Changes During Progressive Colonization of Germ-free Mouse by 1H NMR Spectroscopy

A progressive colonization procedure is described to further assess its impact on the host hepatic metabolism. Colonization is monitored non invasively by evaluating the urinary excretion of microbial co-metabolites by NMR-based metabolic profiling while hepatic metabolism is assessed by High Resolution Magic Angle Spinning (HR MAS) NMR profiling of intact biopsy.

تقييم التغيرات الأيضية الكبدي خلال الاستعمار التدريجي الماوس مجانا من جرثومة 1 H NMR الطيفي

It is well known that gut bacteria contribute significantly to the host homeostasis, providing a range of benefits such as immune protection and vitamin ...

Colonization of Euprymna scolopes Squid by Vibrio fischeri

Specific bacteria are found in association with animal tissue1-5. Such host-bacterial associations (symbioses) can be detrimental (pathogenic), have no fitness consequence (commensal), or be beneficial (mutualistic). While much attention has been given to pathogenic interactions, little is known about the processes that dictate the reproducible acquisition of beneficial/commensal bacteria from the environment. The light-organ mutualism between the marine Gram-negative bacterium V. fischeri and the Hawaiian bobtail squid, E. scolopes, represents a highly specific interaction in which one host (E. scolopes) establishes a symbiotic relationship with only one bacterial species (V. fischeri) throughout the course of its lifetime6,7. Bioluminescence produced by V. fischeri during this interaction provides an anti-predatory benefit to E. scolopes during nocturnal activities8,9, while the nutrient-rich host tissue provides V. fischeri with a protected niche10. During each host generation, this relationship is recapitulated, thus representing a predictable process that can be assessed in detail at various stages of symbiotic development. In the laboratory, the juvenile squid hatch aposymbiotically (uncolonized), and, if collected within the first 30-60 minutes and transferred to symbiont-free water, cannot be colonized except by the experimental inoculum6. This interaction thus provides a useful model system in which to assess the individual steps that lead to specific acquisition of a symbiotic microbe from the environment11,12.
Here we describe a method to assess the degree of colonization that occurs when newly hatched aposymbiotic E. scolopes are exposed to (artificial) seawater containing V. fischeri. This simple assay describes inoculation, natural infection, and recovery of the bacterial symbiont from the nascent light organ of E. scolopes. Care is taken to provide a consistent environment for the animals during symbiotic development, especially with regard to water quality and light cues. Methods to characterize the symbiotic population described include (1) measurement of bacterially-derived bioluminescence, and (2) direct colony counting of recovered symbionts.

Colonization of Euprymna scolopes Squid by Vibrio fischeri

The method outlines the procedure by which the Hawaiian bobtail squid, Euprymna scolopes and its bacterial symbiont, Vibrio fischeri, are raised separately and then introduced to allow for specific colonization of the squid light organ by the bacteria. Colonization detection by bacterially-derived luminescence and by direct colony counting are described.

استعمار Euprymna scolopes الحبار بواسطة الضمة fischeri</em

Specific bacteria are found in association with animal tissue1-5. Such host-bacterial associations (symbioses) can be detrimental (pathogenic), have no ...

TransFLP &#x2014; A Method to Genetically Modify Vibrio cholerae Based on Natural Transformation and FLP-recombination

Several methods are available to manipulate bacterial chromosomes1-3. Most of these protocols rely on the insertion of conditionally replicative plasmids (e.g. harboring pir-dependent or temperature-sensitive replicons1,2). These plasmids are integrated into bacterial chromosomes based on homology-mediated recombination. Such insertional mutants are often directly used in experimental settings. Alternatively, selection for plasmid excision followed by its loss can be performed, which for Gram-negative bacteria often relies on the counter-selectable levan sucrase enzyme encoded by the sacB gene4. The excision can either restore the pre-insertion genotype or result in an exchange between the chromosome and the plasmid-encoded copy of the modified gene. A disadvantage of this technique is that it is time-consuming. The plasmid has to be cloned first; it requires horizontal transfer into V. cholerae (most notably by mating with an E. coli donor strain) or artificial transformation of the latter; and the excision of the plasmid is random and can either restore the initial genotype or create the desired modification if no positive selection is exerted. Here, we present a method for rapid manipulation of the V. cholerae chromosome(s)5 (Figure 1). This TransFLP method is based on the recently discovered chitin-mediated induction of natural competence in this organism6 and other representative of the genus Vibrio such as V. fischeri7. Natural competence allows the uptake of free DNA including PCR-generated DNA fragments. Once taken up, the DNA recombines with the chromosome given the presence of a minimum of 250-500 bp of flanking homologous region8. Including a selection marker in-between these flanking regions allows easy detection of frequently occurring transformants.
This method can be used for different genetic manipulations of V. cholerae and potentially also other naturally competent bacteria. We provide three novel examples on what can be accomplished by this method in addition to our previously published study on single gene deletions and the addition of affinity-tag sequences5. Several optimization steps concerning the initial protocol of chitin-induced natural transformation6 are incorporated in this TransFLP protocol. These include among others the replacement of crab shell fragments by commercially available chitin flakes8, the donation of PCR-derived DNA as transforming material9, and the addition of FLP-recombination target sites (FRT)5. FRT sites allow site-directed excision of the selection marker mediated by the Flp recombinase10.

A quick method to modify the genome of V. cholerae is described. These modifications include the deletion of single genes, gene clusters and genomic islands as well as the integration of short sequences (e.g. promoter elements or affinity-tag sequences). The method is based on the natural transformation and FLP-recombination.

TransFLP - طريقة لتعديل وراثيا<em&gt; ضمة الكوليرا</em&gt; بناء على التحول الطبيعي وإعادة التركيب، FLP

Several methods are available to manipulate bacterial chromosomes1-3. Most of these protocols rely on the insertion of conditionally replicative plasmids ...

Culturing Microglia from the Neonatal and Adult Central Nervous System

Microglia are the resident macrophage-like cells of the central nervous system (CNS) and, as such, have critically important roles in physiological and pathological processes such as CNS maturation in development, multiple sclerosis, and spinal cord injury. Microglia can be activated and recruited to action by neuronal injury or stimulation, such as axonal damage seen in MS or ischemic brain trauma resulting from stroke. These immunocompetent members of the CNS are also thought to have roles in synaptic plasticity under non-pathological conditions. We employ protocols for culturing microglia from the neonatal and adult tissues that are aimed to maximize the viable cell numbers while minimizing confounding variables, such as the presence of other CNS cell types and cell culture debris. We utilize large and easily discernable CNS components (e.g. cortex, spinal cord segments), which makes the entire process feasible and reproducible. The use of adult cells is a suitable alternative to the use of neonatal brain microglia, as many pathologies studied mainly affect the postnatal spinal cord. These culture systems are also useful for directly testing the effect of compounds that may either inhibit or promote microglial activation. Since microglial activation can shape the outcomes of disease in the adult CNS, there is a need for in vitro systems in which neonatal and adult microglia can be cultured and studied.

We outline methods for the efficient and quick isolation/culture of viable microglia from the neonatal cerebral cortex and adult spinal cord. The dissection and plating of cortical microglia can be accomplished within 90 minutes, with the subsequent microglial harvest taking place ~ 10 days following the initial dissection.

الخلايا الدبقية الصغيرة زراعة من الجهاز العصبي المركزي حديثي الولادة والكبار

Microglia are the resident macrophage-like cells of the central nervous system (CNS) and, as such, have critically important roles in physiological and ...

Investigating the Effects of Probiotics on Pneumococcal Colonization Using an In Vitro Adherence Assay

Adherence of Streptococcus pneumoniae (the pneumococcus) to the epithelial lining of the nasopharynx can result in colonization and is considered a prerequisite for pneumococcal infections such as pneumonia and otitis media. In vitro adherence assays can be used to study the attachment of pneumococci to epithelial cell monolayers and to investigate potential interventions, such as the use of probiotics, to inhibit pneumococcal&#160;colonization.&#160;The protocol described here is used to investigate the effects of the probiotic Streptococcus salivarius on the adherence of pneumococci to the human epithelial cell line CCL-23 (sometimes referred to as HEp-2 cells). The assay involves three main steps: 1) preparation of epithelial and bacterial cells, 2) addition of bacteria to epithelial cell monolayers, and 3) detection of adherent pneumococci by viable counts (serial dilution and plating) or quantitative real-time PCR (qPCR). This technique is relatively straightforward and does not require specialized equipment other than a tissue culture setup. The assay can be used to test other probiotic species and/or potential inhibitors of pneumococcal colonization and can be easily modified to address other scientific questions regarding pneumococcal adherence and invasion.

Investigating the Effects of Probiotics on Pneumococcal Colonization Using an In Vitro Adherence Assay

In vitro adherence assays can be used to study the attachment of Streptococcus pneumoniae to epithelial cell monolayers and to investigate potential interventions such as the use of probiotics for inhibiting pneumococcal colonization.

التحقيق في آثار البروبيوتيك على المكورات الرئوية الاستعمار باستخدام<em&gt; في المختبر</em&gt; الالتزام الفحص

Adherence of Streptococcus pneumoniae (the pneumococcus) to the epithelial lining of the nasopharynx can result in colonization and is considered a ...

Normal and Malignant Muscle Cell Transplantation into Immune Compromised Adult Zebrafish

Zebrafish have become a powerful tool for assessing development, regeneration, and cancer. More recently, allograft cell transplantation protocols have been developed that permit engraftment of normal and malignant cells into irradiated, syngeneic, and immune compromised adult zebrafish. These models when coupled with optimized cell transplantation protocols allow for the rapid assessment of stem cell function, regeneration following injury, and cancer. Here, we present a method for cell transplantation of zebrafish adult skeletal muscle and embryonal rhabdomyosarcoma (ERMS), a pediatric sarcoma that shares features with embryonic muscle, into immune compromised adult rag2E450fs homozygous mutant zebrafish. Importantly, these animals lack T cells and have reduced B cell function, facilitating engraftment of a wide range of tissues from unrelated donor animals. Our optimized protocols show that fluorescently labeled muscle cell preparations from &#945;-actin-RFP transgenic zebrafish engraft robustly when implanted into the dorsal musculature of rag2 homozygous mutant fish. We also demonstrate engraftment of fluorescent-transgenic ERMS where fluorescence is confined to cells based on differentiation status. Specifically, ERMS were created in AB-strain myf5-GFP; mylpfa-mCherry double transgenic animals and tumors injected into the peritoneum of adult immune compromised fish. The utility of these protocols extends to engraftment of a wide range of normal and malignant donor cells that can be implanted into dorsal musculature or peritoneum of adult zebrafish.

Here, we present a protocol for cell transplantation of zebrafish skeletal muscle and embryonal rhabdomyosarcoma (ERMS) into adult immune compromised rag2E450fs homozygous mutant zebrafish. This protocol allows for the efficient analysis of regeneration and malignant transformation of muscle cells.

طبيعي والخبيثة زرع العضلات خلية إلى المناعي للخطر اسماك الزرد الكبار

Zebrafish have become a powerful tool for assessing development, regeneration, and cancer. More recently, allograft cell transplantation protocols have ...

Development of a More Sensitive and Specific Chromogenic Agar Medium for the Detection of Vibrio parahaemolyticus and Other Vibrio Species

Foodborne infections in the US caused by Vibrio species have shown an upward trend. In the genus Vibrio, V. parahaemolyticus is responsible for the majority of Vibrio-associated infections. Thus, accurate differentiation among Vibrio spp. and detection of V. parahaemolyticus is critically important to ensure the safety of our food supply. Although molecular techniques are increasingly common, culture-depending methods are still routinely done and they are considered standard methods in certain circumstances. Hence, a novel chromogenic agar medium was tested with the goal of providing a better method for isolation and differentiation of clinically relevant Vibrio spp. The protocol compared the sensitivity, specificity and detection limit for the detection of V. parahaemolyticus between the new chromogenic medium and a conventional medium. Various V. parahaemolyticus strains (n=22) representing diverse serotypes and source of origins were used. They were previously identified by Food and Drug Administration (FDA) and Centers for Disease Control and Prevention (CDC), and further verified in our laboratory by tlh-PCR. In at least four separate trials, these strains were inoculated on the chromogenic agar and thiosulfate-citrate-bile salts-sucrose (TCBS) agar, which is the recommended medium for culturing this species, followed by incubation at 35-37 &#176;C for 24-96 hr. Three V. parahaemolyticus strains (13.6%) did not grow optimally on TCBS, nonetheless exhibited green colonies if there was growth. Two strains (9.1%) did not yield the expected cyan colonies on the chromogenic agar. Non-V. parahaemolyticus strains (n=32) were also tested to determine the specificity of the chromogenic agar. Among these strains, 31 did not grow or exhibited other colony morphologies. The mean recovery of V. parahaemolyticus on the chromogenic agar was ~96.4% relative to tryptic soy agar supplemented with 2% NaCl. In conclusion, the new chromogenic agar is an effective medium to detect V. parahaemolyticus and to differentiate it from other vibrios.

Development of a More Sensitive and Specific Chromogenic Agar Medium for the Detection of Vibrio parahaemolyticus and Other Vibrio Species

Detection and isolation of clinically relevant Vibrio species require selective and differential culture media. This study evaluated the ability of a new chromogenic medium to detect and identify V. parahaemolyticus and other related species. The new medium was found to have better sensitivity and specificity than the conventional medium.

تطوير أكثر حساسية وخصوصية اللونية آجار المتوسطة للكشف عن<em&gt; الضمة نظيرة الحالة للدم</em&gt; وغيره<em&gt; الضمة</em&gt; الأنواع

Foodborne infections in the US caused by Vibrio species have shown an upward trend. In the genus Vibrio, V. parahaemolyticus is responsible for the ...

A Murine Model of Group B Streptococcus Vaginal Colonization

Streptococcus agalactiae (group B Streptococcus, GBS), is a Gram-positive, asymptomatic colonizer of the human gastrointestinal tract and vaginal tract of 10 - 30% of adults. In immune-compromised individuals, including neonates, pregnant women, and the elderly, GBS may switch to an invasive pathogen causing sepsis, arthritis, pneumonia, and meningitis. Because GBS is a leading bacterial pathogen of neonates, current prophylaxis is comprised of late gestation screening for GBS vaginal colonization and subsequent peripartum antibiotic treatment of GBS-positive mothers. Heavy GBS vaginal burden is a risk factor for both neonatal disease and colonization. Unfortunately, little is known about the host and bacterial factors that promote or permit GBS vaginal colonization. This protocol describes a technique for establishing persistent GBS vaginal colonization using a single &#946;-estradiol pre-treatment and daily sampling to determine bacterial load. It further details methods to administer additional therapies or reagents of interest and to collect vaginal lavage fluid and reproductive tract tissues. This mouse model will further the understanding of the GBS-host interaction within the vaginal environment, which will lead to potential therapeutic targets to control maternal vaginal colonization during pregnancy and to prevent transmission to the vulnerable newborn. It will also be of interest to increase our understanding of general bacterial-host interactions in the female vaginal tract.

A Murine Model of Group B Streptococcus Vaginal Colonization

The purpose of this protocol is to imitate human group B Streptococcus (GBS) vaginal colonization in a murine model. This method may be used to investigate host immune responses and bacterial factors contributing to GBS vaginal persistence, as well as to test therapeutic strategies.

نموذج الفئران من المجموعة الثانية<em&gt; العقدية</em&gt; المهبلية الاستعمار

Streptococcus agalactiae (group B Streptococcus, GBS), is a Gram-positive, asymptomatic colonizer of the human gastrointestinal tract and vaginal tract of ...

Laboratory Techniques Used to Maintain and Differentiate Biotypes of Vibrio cholerae Clinical and Environmental Isolates

The aquatic Gram-negative bacterium Vibrio cholerae is the etiological agent of the infectious gastrointestinal disease cholera. Due to the global prevalence and severity of this disease, V. cholerae has been extensively studied in both environmental and laboratory settings, requiring proper maintenance and culturing techniques. Classical and El Tor are two main biotypes that compose the V. cholerae O1 serogroup, each displaying unique genotypic and phenotypic characteristics that provide reliable mechanisms for biotype characterization, and require distinct virulence inducing culturing conditions. Regardless of the biotype of the causative strain for any given infection or outbreak, the standard treatment for the disease involves rehydration therapy supplemented with a regimen of antibiotics. However, biotype classification may be necessary for laboratory studies and may have broader impacts in the biomedical field. In the early 2000&#39;s clinical isolates were identified which exhibit genotypic and phenotypic traits from both classical and El Tor biotypes. The newly identified hybrids, termed El Tor variants, have caused clinical and environmental isolate biotype identification to become more complex than previous traditional single assay identification protocols. In addition to describing V. cholerae general maintenance and culturing techniques, this manuscript describes a series of gene specific (ctxB and tcpA) PCR-based genetic screens and phenotypic assays (polymyxin B resistance, citrate metabolism, proteolytic activity, hemolytic activity, motility, and glucose metabolism via Voges-Proskauer assay) collectively used to characterize and/or distinguish between classical and El Tor biotypes. Together, these assays provide an efficient systematic approach to be used as an alternative, or in addition, to costly, labor-intensive experiments in the characterization of V. cholerae clinical (and environmental) isolates.

Laboratory Techniques Used to Maintain and Differentiate Biotypes of Vibrio cholerae Clinical and Environmental Isolates

This manuscript describes proper Vibrio cholerae maintenance techniques in addition to a series of biochemical assays, collectively utilized for quick and reliable differentiation between clinical and environmental V. cholerae biotypes in a laboratory setting.

تقنيات المختبر تستخدم للحفاظ على والتمايز بيوتيبس<em&gt; ضمة الكوليرا</em&gt; العوازل السريرية والبيئية

The aquatic Gram-negative bacterium Vibrio cholerae is the etiological agent of the infectious gastrointestinal disease cholera. Due to the global ...

Quantifying Human Monocyte Chemotaxis In Vitro and Murine Lymphocyte Trafficking In Vivo

Chemotaxis is migration along a specific chemical gradient1. Chemokines are chemotactic cytokines that promote cellular trafficking with anatomic and temporal specificity2. Chemotaxis is a critical function of lymphocytes and other immune cells that can be quantitatively assessed in vitro. This manuscript describes methods that permit the evaluation of chemotaxis, both in vitro and in vivo, for diverse cell types including cell lines and native cells. The in vitro, plate-based format permits the comparison of several conditions simultaneously in real-time, and can be completed within 1-4 h. In vitro assay conditions can be manipulated to introduce agonists and antagonists, as well as differentiate chemotaxis from chemokinesis, which is random movement. For in vivo trafficking assessments, immune cells can be labeled with multiple fluorescent dyes and used for adoptive transfer. The differential labeling of cells allows for mixed cell populations to be introduced into the same animal, thereby decreasing variance and reducing the number of animals required for an adequately powered experiment. Migration into lymphoid tissue occurs in as little as 1 h, and multiple tissue compartments can be sampled. Flow cytometry following tissue harvest allows for a rapid and quantitative analysis of the migratory patterns of multiple cell types.

Quantifying Human Monocyte Chemotaxis In Vitro and Murine Lymphocyte Trafficking In Vivo

Protocols for quantitative assessment of lymphocyte chemotaxis and migration are important tools for immunology research. Here, an in vitro protocol is described that permits real-time, multiplexed evaluation of cell migration, as well as a complementary in vivo technique enabling tracking of native cells to spleen.

التحديد الكمي الوحيدات البشرية إنزيمية في المختبر واللمفاويات مورين الاتجار في فيفو

Chemotaxis is migration along a specific chemical gradient1. Chemokines are chemotactic cytokines that promote cellular trafficking with anatomic and ...