يشكر المؤلفون ينيا تانكرد وريدهولم ديانا لتربية الحيوانات.

استخدمت الماوس بالب/ج الجراء من أي من الجنسين وفقا للبيان "استخدام الحيوانات" في أوفثالمولوجيك والبحوث الرؤية، والبروتوكولات كانت وافقت عليها اللجنة في ستوكهولم "بحوث الحيوان الأخلاقية". كانت الفئران في ليتر، جنبا إلى جنب مع الأم المرضعة، مع دورة اليوم/الليل ح 12، وحرية الوصول إلى الغذاء والماء، وترصد يوميا.
ملاحظة: لإجراء العمليات الجراحية، أبقيت الفئران تحت التخدير مع isoflurane متقلبة. يتم تثبيط المراهم العينية خلال إجراءات العين، كما أنها قد تتداخل مع العلاجات والمواد المستخدمة. إذا لزم الأمر، لمنع العين الجاف، يمكن تطبيق قطره المحلول الملحي العادي العقيمة. على الرغم من ثقوب uveal الشفاء الذاتي، تم الحرص خلال ثقوب uveal ضمان العقم مع الأدوات الجراحية. العلاج بعد الجراحة وشملت الماء مع المحلول الملحي العادي تحت الجلد، والتسكين مع الإدارة الموضعية العين هيدروكلوريد جهاز. الجراء سمح باسترداد إلى ريكومبينسي القصية على وسادة تدفئة قبل إعادتهم إلى الأم المرضعة، في قفص نظيف. وأبقى ليتر مع نفس الأم المرضعة لتجنب الإجهاد.
1-التخدير
<ol><li>إعداد قاعة تحريض التخدير، إدارة isoflurane مخدر، وضمان أن قناع الفأرة صغيرة ويقترن أيضا. ملاحظة: إجراء التجارب على الحيوانات كل الاتفاق مع جميع التصاريح الأخلاقية الواجبة التطبيق.</li>
	<li>بريفيل قاعة توجيهي مع 3-4% isoflurane المتطايرة في الهواء الجوي. ملاحظة: مواد مخدر مختلفة أخرى من إيسوفلوراني يمكن، وفقا لتصاريح الأخلاقية. وينبغي أن يتم إجراءات مخدر المتقلبة على غطاء مقاعد البدلاء أو الأبخرة التهوية.</li>
	<li>مكان الولادة (ف) عمرها 12.5 يوما بالب/ج ماوس جرو في قاعة التعريفي. التأكد من أن جهاز تخدير، مستعدة لتقديم إيسوفلوراني إلى الدائرة التعريفي. ملاحظة: يتم الجراء الماوس الهشة ومعالجة أفضل من القفا. الحفاظ الجراء معا كالقمامة أو مع الأم المرضعة لتجنب الإجهاد.</li>
	<li>تسمح ألجرو تكون تخديره تماما.</li>
	<li>بلطف، تلتقط ألجرو الماوس قبل القفا. ملاحظة: الاحتفاظ التعريفي الدائرة المغلقة في جميع الأوقات لتحريض آمنة ومستقرة.</li>
	<li>نقل الماوس إلى قناع القوارض. تأكد من التبديل تدفق مخدر من قاعة التعريفي للقناع عند تحريك الماوس.</li>
	<li>إجراء رشة إصبع القدم للتأكد من التخدير.</li>
</ol>2-الثقب الداخلي تحت ستيريوسكوبي الجراحية
<ol><li>وضع مؤشر الماوس في الموضع الأفقي ريكومبينسي. تأكيد القناع في وضع جيد حتى في مجال الرؤية ستيريوسكوبي العين الماوس.</li>
	<li>بلطف تدوير رأس الماوس حتى العين هو مواجهة تجاه ستيريوسكوبي. ملاحظة: يجب أن يتحقق التركيز الواضح للعين تحت ستيريوسكوبي. لتحديد المواقع، وينصح بير 16 س، بينما 40 س ينبغي أن تستخدم لإجراء العملية الجراحية. إذا الأخلاقية تصاريح تسمح بذلك، التشذيب غيض شعيرات يمكن تسهيل تصور العين.</li>
	<li>استخدام الملقط التلازم الصغيرة، بعناية نتا العين ألجرو بتطبيق الضغط النزولي على الجفون الظهرية والبطني للعين.</li>
	<li>الاحتفاظ بعقد لطيف ولكن الثابت من غطاء العين ألجرو، مع ملقط صغير. ملاحظة: من المستحسن إجراء نتوء العين وغطاء عقد مع الجهة غير المهيمنة، كما اليد المهيمنة يجب إجراء ثقب.</li>
	<li>استخدام ستيريوسكوبي تحديد موقع ليمبوس القرنية. يمكن بسهولة تحديد ألبينو بالب/ج ليمبوس الضفيرة الوعائية الدائري الخلفي للقرنية.</li>
	<li>بإبرة مشطوف الحواف قطرها (30 غ) 0.25 مم، تنفيذ ثقب uveal صغير، قرب حدود حوفي الخلفي عنبية. استخدام سوى غيض الإبرة، ولا يزيد عن نصف المجسم مشطوف الحواف (أي ما يعادل 0.5 مم)، ثقب في عنبية. إذا نفذت بشكل صحيح، ثقوب uveal الختم الذاتي، بعد الحقن داخل مقلة العين لمواد الدراسة يمكن أن تدار من خلال ثقب الجرح نفسه. ملاحظة: إذا واجهت مع الماوس تشريح العين، ينفذ الثقب uveal بين الجسم الهدبي وسيراتا أورا. ويجب الحرص أثناء أداء ثقب uveal لتجنب تمزيق العدسة.</li>
	<li>إجراء ثقب uveal الثاني في الموقع المعاكس للعين من أول موقع الثقب. تحسين المسافة والموقف من ثقوب؛ تنظر 12 ثقوب 06:00 ص, 12:00 م ويجري الظهرية قدر الإمكان.</li>
	<li>كرر الإجراء ثقوب uveal كل أربعة أيام حتى P24.5. قبل كل ثقب uveal المتعاقبة، رصد حالة الحيوان مع إيلاء اهتمام خاص لوجود الساد الصدمة بسبب تلف العدسة خلال ثقب uveal أو ضغط العين تناقص واضح. تهدف لتنفيذ تكرار ثقوب في نفس المواقف ثقوب السابقة للآثار المثلى.</li>
</ol>3-موسع في فيفو الرصد
<ol><li>قبل ثقب أو حقن كل يوم التجريبية، تخدير الماوس كما يؤديها أعلاه.</li>
	<li>باستخدام الماوس في الموضع الأفقي ريكومبينسي، بلطف نتا العين.</li>
	<li>التركيز على المفرج قزحية مع ستيريوسكوبي الجراحية.</li>
	<li>التقاط صورة للمفرج قزحية العين بكاميرا مزودة ستيريوسكوبي الجراحية. ملاحظة: على الرغم من أن ليس من الضروري، الذي يحفز الانقسام يمكن مفيدة لتطبيع المنطقة آيريس للحيوان الواحد. تنظر تصاريح الأخلاقية عند اختيار عامل يحفز الانقسام الاختزالي. تركيز دقيق للمفرج آيريس سيسهل مواصلة التحليل الكمي. ويوصي بقوته 40 س.</li>
</ol>4-بعد العمليات الجراحية الرعاية
<ol><li>إزالة ألجرو بالب/ج من القناع القوارض، وأنه نقل بلطف إلى تدفئة لوحة الطبقات مع حصيرة جراحية.</li>
	<li>تطبيق قطره واحدة من حل جهاز 1% لعيون ثقب. ملاحظة: حلول مسكن أخرى يمكن، وفقا لتصاريح الأخلاقية.</li>
	<li>هيدرات الحيوان بحقنه تحت الجلد من 200 ميليلتر من المحلول الملحي العادي العقيمة.</li>
	<li>العودة ألجرو إلى الأم المرضعة في قفص ماوس نظيفة.</li>
	<li>رصد عملية الاسترداد. ألجرو وينبغي أن تكون قادرة على ديمبولاتي والعودة إلى القمامة.</li>
</ol>5-العين انوكلييشن
<ol><li>Euthanize الحيوان بخلع عنق الرحم. أداء انوكلييشن والتشريح تحت ستيريوسكوبي لرؤية أفضل لهذا الإجراء. ملاحظة: يمكن استخدام إجراءات مختلفة القتل الرحيم. من المستحسن أن تلتزم التصاريح الأخلاقية.</li>
	<li>سحب بعيداً في الجفون لتحسين التعرض للعين.</li>
	<li>جعل قطع صغيرة (حوالي 0.5 سم) قرب كانتوس الجفن العين مع منحنى مقص العين في بون.</li>
	<li>استخدام المساحة بيريوكولار المكشوفة لإدراج الملقط التلازم الصغير خلف (إطار) من أنحاء العالم في المدار.</li>
	<li>انتزاع الأنسجة المحيطة بالعين واجذب إلى أعلى. تجنب التمسك مقلة العين، واستخدام الأنسجة المحيطة بها أقرب إلى محجر العين.</li>
	<li>إدراج منحنى المقص العين بون وراء العالم العين في المدار.</li>
	<li>قطع طريق الأنسجة المحيطة بها حتى يتم الإفراج عن العين من مأخذ التوصيل. ملاحظة: هذا الأسلوب تشريح يحافظ تشريح العين ويفيد التحليل اللاحق.</li>
	<li>الشروع في إزالة أنسجة دخيلة من العين. وتتم إزالة أنسجة غريبة بعد إصلاح، إذا فضلت. ملاحظة: بالب/ج الفئران هي الميلانين ضعيفة، بالتالي، لزيادة التباين، يوصي خلفية داكنة لتيسير إجراء تشريح.</li>
	<li>بإيجاز مليئة شطف الجامع-العين في طبق بتري معقم مخزنة الفوسفات المالحة (PBS).</li>
	<li>نقل العين إلى أنبوب 2 مل تحتوي على 1.5 مل من محلول الفورمالين مخزنة 4%.</li>
	<li>إصلاح العين ح 6 في درجة حرارة الغرفة. ملاحظة: تحديد يضفي صلابة الأنسجة وتسهل تشريح لقزحية العين. وينبغي اختبار تحديد الوقت وتعديلها لتطبيقات مختلفة.</li>
</ol>6-آيريس التشريح الداخلي تحت ستيريوسكوبي
<ol><li>إزالة الحل مثبت من الأنبوب مع ماصة باستور بلاستيك 1.5 مل (أو ما شابه)، وشطف العين ثلاث مرات مع برنامج تلفزيوني جديد.</li>
	<li>ضع العين الثابتة في سطح أملس جافة (تشريح الوقوف) مع الغرفة الأمامية التي تواجه صعودا.</li>
	<li>مع مشطوف الحواف ز 30 إبرة، أداء نقطة إدخال اللاحق ليمبوس.</li>
	<li>عقد الجزء الأمامي مع الملقط التلازم الصغيرة، إدراج تلميح واحد مقص مستقيم كليمان فانس في الفتحة التي تم إنشاؤها مسبقاً. ملاحظة: من المستحسن للتحكم الملقط باليد غير المهيمنة ومقص مع المهيمنة.</li>
	<li>بينما تناوب العين مع الملقط التلازم، قص حول ليمبوس لإزالة الجزء الخلفي من العين. ملاحظة: إجراء تخفيضات جزئية سيسمح الحافة الداخلية مقص الاستمرار في الأنسجة، وإلى حد كبير يسهل العملية.</li>
	<li>ضع الجزء الأمامي تواجه إلى الأسفل، وفضح العدسة.</li>
	<li>قم بإزالة العدسة بعناية قبل الاستيلاء عليه مع ملقط صغير وسحب صعودا. ملاحظة: يمكن استخدام إبرة مشطوف الحواف للثقب وسحب العدسة.</li>
	<li>ضع الجزء الأمامي مع القرنية إلى الأسفل وقطع عمودي على مجال الرؤية.</li>
	<li>بلطف انتزاع الأنسجة الخلفي للجسم الهدبي بالملقط التلازم الصغيرة.</li>
	<li>مع كليمان Vannas مقص مستقيم، نشرع في تقليم فقط عرفت الجسم الهدبي لإزالة ميشوورك ترابيكولار، وعزل قزحية العين. التأكد من أن تتم إزالة ميشوورك ترابيكولار؛ وينبغي نقل القزحية داخل القرنية.</li>
	<li>نقل فنجان العين الأمامي بعناية مع الملقط التلازم الصغيرة، عقد القرنية، لوح 96-كذلك تحتوي على 200 ميليلتر من برنامج تلفزيوني.</li>
	<li>الاستمرار بالضغط القرنية في البئر وتشريح القزحية بالتنظيف مع برنامج تلفزيوني مع ماصة. ملاحظة: إذا كانت ملتصقة تظل قزحية العين للقرنية، بعض ميشوورك ترابيكولار قد تكون حاضرة، والمجسم مشطوف الحواف ز 30 إبرة يمكن للمساعدة مما أدى إلى تشريد قزحية العين.</li>
	<li>إزالة القرنية من 96-جيدا مع الملقط التلازم الصغيرة، وتبقى القزحية معزولة في البئر لمزيد من التحليل.</li>
	<li>تخزين العينات آيريس التعويم الحر في 4 درجات مئوية. ملاحظة: على الرغم من يجري إصلاحها، التخزين على المدى الطويل من عينات آيريس التعويم الحر لا ينصح.</li>
</ol>7-إمكانية Read-Outs التجريبية
<ol><li>تصور الأوعية الدموية في قزحيات تشريح، استخدام التعويم الحر الجامع-جبل immunohistochemistry تلطيخ أساليب لعلامات مثل الصفائح الدموية غشائي خلية التصاق جزيء (بيكم)-1 أو إيسوليكتين B4. بدلاً من ذلك، استخدم نضح الجسم كله مع تلطيخ الأوعية الدموية، مثل ديكسترانس المسمى الفلورية العالية الوزن الجزيئي.</li>
	<li>استخدام في فيفو الصور موسع لتنفيذ في السيليكون مسطحة تركيب وقياس المفرج القزحية التام مع برامج التصوير المناسبة. ملاحظة: يمكن تحديده كمياً المفرج، سواء في فيفو و في المختبر، باستخدام قياس كثافة أو مع المفرج تحليل البرنامج9.</li>
	<li>عملية مقلة العين كاملة للأحماض النووية واستخراج البروتين، متبوعاً بطرق PCR أو إيمونوبلوتينج، لإجراء التحليل الجزيئي لعيون ثقب. ملاحظة: أفضل يتم إجراء التحليل الجزيئي للأنسجة مع أنسجة غير ثابت، ولكن تشريح آيريس غير ثابت صعبة للغاية، واستخدام العين كله أصدرت نتائج يعتد بها إحصائيا في الدراسات السابقة8.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Morrison, J. C., Van Buskirk, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anterior+collateral+circulation+in+the+primate+eye.">Anterior collateral circulation in the primate eye.</a> Ophthalmology. 90 (6), 707-715 (1983).</li><li>Dreyfuss, J. L., Giordano, R. J., Regatieri, C. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ocular+Angiogenesis.">Ocular Angiogenesis.</a> J Ophthalmol. 2015, 892043 (2015).</li><li>Breuss, J. M., Uhrin, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=VEGF-initiated+angiogenesis+and+the+uPA/uPAR+system.">VEGF-initiated angiogenesis and the uPA/uPAR system.</a> Cell Adh Migr. 6 (6), 535-615 (2012).</li><li>Rodrigues, G. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neovascular+glaucoma:+a+review.">Neovascular glaucoma: a review.</a> Int J Retina Vitreous. 2, 26 (2016).</li><li>Stahl, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+mouse+retina+as+an+angiogenesis+model.">The mouse retina as an angiogenesis model.</a> Invest Ophth Vis Sci. 51 (6), 2813-2826 (2010).</li><li>DiPietro, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Angiogenesis+and+wound+repair:+when+enough+is+enough.">Angiogenesis and wound repair: when enough is enough.</a> J Leukocy Biol. 100 (5), 979-984 (2016).</li><li>Eming, S., Brachvogel, B., Odorisio, T., Koch, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+angiogenesis:+Wound+healing+as+a+model.">Regulation of angiogenesis: Wound healing as a model.</a> Prog Histochem Cytoc. 42 (3), 115-170 (2007).</li><li>Beaujean, O., Locri, F., Aronsson, M., Kvanta, A., Andr&#233;, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+in+vivo+model+of+puncture-induced+iris+neovascularization.">A novel in vivo model of puncture-induced iris neovascularization.</a> PloS One. 12 (6), e0180235 (2017).</li><li>Zudaire, E., Gambardella, L., Kurcz, C., Vermeren, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Computational+Tool+for+Quantitative+Analysis+of+Vascular+Networks.">A Computational Tool for Quantitative Analysis of Vascular Networks.</a> PloS One. 6 (11), (2011).</li><li>Dorrell, M., Uusitalo-Jarvinen, H., Aguilar, E., Friedlander, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ocular+neovascularization:+basic+mechanisms+and+therapeutic+advances.">Ocular neovascularization: basic mechanisms and therapeutic advances.</a> Surv Ophthalmol. 52 Suppl 1, S3-S19 (2007).</li><li>Kvanta, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ocular+angiogenesis:+the+role+of+growth+factors.">Ocular angiogenesis: the role of growth factors.</a> Acta Ophthalmol. 84 (3), 282-288 (2006).</li><li>Salman, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intrasilicone+Bevacizumab+Injection+for+Iris+Neovascularization+after+Vitrectomy+for+Proliferative+Diabetic+Retinopathy.">Intrasilicone Bevacizumab Injection for Iris Neovascularization after Vitrectomy for Proliferative Diabetic Retinopathy.</a> Ophthalmic Res. 49 (1), 20-24 (2013).</li><li>Jeong, Y. C., Hwang, Y. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Etiology+and+Features+of+Eyes+with+Rubeosis+Iridis+among+Korean+Patients:+A+Population-Based+Single+Center+Study.">Etiology and Features of Eyes with Rubeosis Iridis among Korean Patients: A Population-Based Single Center Study.</a> PloS One. 11 (8), e0160662 (2016).</li><li>Speier, S., Nyqvist, D., K&#246;hler, M., Caicedo, A., Leibiger, I. B., Berggren, P. -. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noninvasive+high-resolution+in+vivo+imaging+of+cell+biology+in+the+anterior+chamber+of+the+mouse+eye.">Noninvasive high-resolution in vivo imaging of cell biology in the anterior chamber of the mouse eye.</a> Nat Protoc. 3 (8), 1278-1286 (2008).</li><li>Stefansson, E., Landers, M. B., Wolbarsht, M. L., Klintworth, G. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neovascularization+of+the+Iris+-+an+Experimental-Model+in+Cats.">Neovascularization of the Iris - an Experimental-Model in Cats.</a> Invest Ophth Vis Sci. 25 (3), 361-364 (1984).</li><li>Nork, T. M., Tso, M., Duvall, J., Hayreh, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+Mechanisms+of+Iris+Neovascularization+Secondary+to+Retinal+Vein+Occlusion.">Cellular Mechanisms of Iris Neovascularization Secondary to Retinal Vein Occlusion.</a> Arch Ophthalmol-Chic. 107 (4), 581-586 (1989).</li><li>Hjelmeland, L. M., Stewart, M. W., Li, J. W., Toth, C. A., Burns, M. S., Landers, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+Experimental-Model+of+Ectropion+Uveae+and+Iris+Neovascularization+in+the+Cat.">An Experimental-Model of Ectropion Uveae and Iris Neovascularization in the Cat.</a> Invest Ophth Vis Sci. 33 (5), 1796-1803 (1992).</li><li>Tolentino, M. J., Miller, J. W., Gragoudas, E. S., Chatzistefanou, K., Ferrara, N., Adamis, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascular+endothelial+growth+factor+is+sufficient+to+produce+iris+neovascularization+and+neovascular+glaucoma+in+a+nonhuman+primate.">Vascular endothelial growth factor is sufficient to produce iris neovascularization and neovascular glaucoma in a nonhuman primate.</a> Arch Ophthalmol-Chic. 114 (8), 964-970 (1996).</li><li>Paula, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rabbit+Rubeosis+Iridis+Induced+by+Intravitreal+Latex-derived+Angiogenic+Fraction.">Rabbit Rubeosis Iridis Induced by Intravitreal Latex-derived Angiogenic Fraction.</a> Curr Eye Res. 36 (9), 857-859 (2011).</li><li>Takei, A., Ekstr&#246;m, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+Transfer+of+Prolyl+Hydroxylase+Domain+2+Inhibits+Hypoxia-inducible+Angiogenesis+in+a+Model+of+Choroidal+Neovascularization.">Gene Transfer of Prolyl Hydroxylase Domain 2 Inhibits Hypoxia-inducible Angiogenesis in a Model of Choroidal Neovascularization.</a> Sci Rep. 7, 42546 (2017).</li></ol>

الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.

ويرد في هذا البروتوكول، طريقة جديدة لتحريض آيريس استجابة الأوعية الدموية بثقب uveal. يقوم بتشغيل آليات شفاء الجرح الثقب ويعزز استجابات الأوعية الدموية في10،آيريس11. وهذا ما يتفق مع أمراض العين، مثل الديمقراطية الشعبية ونفج، حيث تتوج استجابات الأوعية تفاقم من الشبكية في الجزء الخلفي للعين في حالة سريرية روبيوسيس إيريديس، الأوعية الدموية زيادة القزحية12 ،13.
القرنية هي أفاسكولار وتمتلك بنية الكولاجين غريبة أسفر عن الشفافية. وتمشيا مع هذا، قسطرة للجزء الأمامي من العين لتصور المفرج آيريس يمكن تحقيقه بالتصور المباشر للأوعية الدموية قزحية مع فيفو أساليب موسع13،14. النماذج الحيوانية السابقة من نيوفاسكولاريزيشن آيريس تعتمد على الحيوانات الكبيرة العينين حيث كانت التدخلات الجراحية المعقدة أداء15،،من1617، أو عن طريق الحقن داخل مقلة العين لمواد معينة من الأوعية 18 , 19-في هذا الأسلوب، استخدام الصباغ ناقصة بالب/ج الفئران تمكن المراقبة المباشرة لقزحية المفرج في فيفو، ويسمح الكمي موسع ل neovascularization آيريس في الفئران، مما يوفر أداة جديدة لدراسة المجراة في الأوعية.
وعلاوة على ذلك، يسمح الأسلوب المقدم للماوس آيريس تشريح تحليل neovascularization المستحثة بثقب القزحية مع علامات محددة والأوعية الدموية. وهنا، آيريس سفن كانت ملطخة بالأجسام المضادة بيكم-1 إيلوستراتيفيلي وتصور بالفحص المجهري الأسفار. إيمونوستينينج التعويم الحر, جبل كل البروتوكولات بسهولة تحقيقها وروتينية إلى حد ما. وبالإضافة إلى ذلك، يمكن تنفيذ أساليب نضح للأوعية الدموية في هذا النموذج. تلوين المحددة الأوعية الدموية منح تقييم للقزحية بنية الأوعية الدموية، ومن ثم التحديد الكمي، التي تستند إلى المستخدم أو تحليل البرمجيات، نيوفاسكولاتوري آيريس9. كما هو موضح سابقا8،20، قيمت الرسم التوضيحي لنيوفاسكولاتوري آيريس في اليوم 15 بعد-بونكتوري-التعريفي. ومع ذلك، يمكن ملاحظة آثار على الأوعية الدموية آيريس أقرب يوم 4 مرحلة ما-بونكتوري-الاستقراء، مما يوحي بأنه يمكن إجراء تقييم نموذج neovascularization آيريس المستحثة بثقب في نقاط زمنية مختلفة، استناداً إلى محدد الاحتياجات التجريبية.
جدير بالذكر أن هذا البروتوكول ويعرض بعض التحديات، لا سيما فيما يتصل بحجم عيون الفئران بالنسبة لنموذج الحيوانات الأخرى. ينبغي اتخاذ الحذر الشديد أثناء تنفيذ الإجراء ثقب uveal، لتجنب اللمسات العدسة أو ضرر للعين. مراقبة حالة العين باراماونت، والحيوانات عرض التجريبية المتصلة إعتام عدسة العين أو ينبغي استبعاد انخفاض في ضغط العين و euthanized على نحو ملائم. قزحيات الماوس هشة للغاية ومبتذل إلى حد ما. تشريح سليم والعزلة من الأنسجة ويعرض آخر خطوة حاسمة للبروتوكول. فصل صحيح من ميشوورك ترابيكولار ضروري للتشرد القزحية من الغرفة الأمامية. وعلاوة على ذلك، نظراً لهشاشة، العزلة آيريس يتطلب تثبيت الأنسجة، مما يعيق التحليل الجزيئي المتلقين للمعلومات. رغم ذلك، طبقت بنجاح تحليل جزيئي للعين كل غير المثبتة إلى أسلوب عرضها8.
وباختصار، يقدم البروتوكول وصف نموذجا ماوس neovascularization آيريس رواية التي يسببها ثقب. ويمتاز هذا النموذج السماح في فيفو موسع التصور المباشر للأوعية. وبالإضافة إلى ذلك، يجعل استخدام القوارض الصغيرة نموذج عرض جذابة للدراسات إيريديس روبيوسيس، كما أنه يتجنب استخدام الحيوانات الكبيرة العينين ورافق قيود أخلاقية. وعلاوة على ذلك، يمكن الجمع بين الإجراء بحقن المواد برو أو مكافحة الأوعية من خلال ثقب الختم الذاتي، تعزيز فائدته كنموذج جديد في فيفو تولد الأوعية.

وتضم قزحية العين، جنبا إلى جنب مع الجسم الهدبي والمشيميه، عنبية، الذي هو أكثر vascularized أنسجة العين. المفرج آيريس ضروري للحفاظ على التوازن في الغرفة الأمامية للعين. نتيجة لوفرة اتصالات أناستوموتيك بين الشرايين والاوردة، الأوعية الدموية آيريس توفير المواد الغذائية وإمدادات الأوكسجين إلى قزحية العين نفسها، بل في كامل الجزء الأمامي من العين1.
تشكيل أوعية دموية جديدة، أو الأوعية من تلك القائمة من قبل، هو أمر أساسي في العمليات الفسيولوجية، مثل التنمية والجرح الشفاء2. وتولد الأوعية ناعما ينظم العديد من العوامل المتعارف عليه، مثل عامل نمو الأوعية الدموية غشائي (VEGF) ومثبط منشط البلاسمينوجين (PAI)، فضلا عن عدة عوامل الالتهابات، واختلال هذه العوامل يمكن أن تؤدي إلى باثولوجي 3من الأوعية.
في العين، وهو نيوفاسكولاريزيشن سبب الأمراض التي تهدد البصر، مثل اعتلال الشبكية السكري التكاثري (PDR) والزرق نيوفاسكولار (نفج). في هذه أمراض العين، neovascularization التنسيق يقع عادة في أنسجة الشبكية، إلا أن عدم التوازن في الالتهابات والعوامل الأوعية في كلا الأمامي والخلفي العين دوائر العين ارتبط إيريديس روبيوسيس، مصطلح السريرية لايريس نيوانجيوجينيسيس المرضية4. وتبين هذه الأمراض قدرة القزحية الكبار الخضوع لتولد الأوعية. في الفئران، غير ناضجة المفرج العين بعد الولادة ويستمر نضج بعد الولادة. هو استغلال هذا خصوصية للتنمية في طراز الماوس الأوكسجين الناجم عن اعتلال الشبكية، نموذج الذي يحاكي عن كثب الحالة السريرية لاعتلال الشبكية الخداج5. وباﻹضافة إلى ذلك، تولد الأوعية والتهاب تلعب دوراً محوريا في الجرح الشفاء الآليات6، والجرح شفاء نفسها تم إقرانها مع الأوعية نماذج7.
في هذه الدراسة، يصف لنا نموذج نيوفاسكولاريزيشن التي يسببها ثقب القزحية. وتجري ثقوب uveal قرب الحد الخارجي ليمبوس، الذي حمل neovascularization آيريس بأحداث الجرح الشفاء النظام. يمكن أن يكون سبب شفافية القرنية، القزحية المفرج تحليلها بسهولة في فيفو بأساليب موسع. عيون ثقب الحالي أي بزيادة قدرها سرير الأوعية الدموية في القزحية، التي ارتبطت بزيادة تنشيط البلاسمينوجين وعلامات التهابات8. نموذج عرض إمكانات كبيرة كأداة جديدة لدراسة الأوعية وفحص المركبات الأوعية، ويسمح مباشرة في فيفو التصور عمليات الأوعية.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Bonn eye scissors</td>
			<td>Bausch &#38; Lomb</td>
			<td>23060</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clayman-Vannas curved scissors</td>
			<td>Bausch &#38; Lomb</td>
			<td>E3383 C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clayman-Vannas straight scissors</td>
			<td>Bausch &#38; Lomb</td>
			<td>E3383 S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Objective adapter for camera</td>
			<td>Handcrafted</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Or any system that allows adapting a camera to the microscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating Pad 100-110 watts</td>
			<td>Non Applicable</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Available in pet/veterinarian stores</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hypodermic 30g beveled needle</td>
			<td>KDM GmBH germany</td>
			<td>911914</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iphone 4S</td>
			<td>Apple</td>
			<td>Non Applicable</td>
			<td>Or other high resolution image acquistion device</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Baxter</td>
			<td>KDG 9623</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>McPherson tying forceps</td>
			<td>Bausch &#38; Lomb</td>
			<td>E1815 S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro tying forceps</td>
			<td>Bausch &#38; Lomb</td>
			<td>63140</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Minims tetracaine hydrochloride</td>
			<td>Bausch &#38; Lomb</td>
			<td>N/A</td>
			<td>1 % (w/v) Eye Drops</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neutral-buffered formalin</td>
			<td>Bioreagens</td>
			<td>0018-40</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normal saline solution</td>
			<td>Fresenius Kabi</td>
			<td>210352</td>
			<td>0.9 % (w/v) NaCl in injectable water</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate-buffered saline</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>10010023</td>
			<td>Balanced and buffered PBS pH 7.4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dish 10 cm</td>
			<td>Starstedt</td>
			<td>83.3902</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dish 3 cm</td>
			<td>Starstedt</td>
			<td>83.3900</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Safe Seal Tube 2.0 mL</td>
			<td>Starstedt</td>
			<td>72.685.200</td>
			<td>Or any eppendorf style tubes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TC plate 96-well</td>
			<td>Starstedt</td>
			<td>83.3924</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transfer pipette 3.5 mL</td>
			<td>Starstedt</td>
			<td>86.1171</td>
			<td>Or any other Pasteur pipette style</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Univentor 400 anesthesia unit</td>
			<td>Univentor Limited</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Or equivalent flow regulator with induction chamber and mask for volatile anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wild M650 surgical microscope</td>
			<td>Wild Heerbrugg</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Or other surgical or magnifying stereoscope</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

puncture-induced iris neovascularization as a mouse model of rubeosis iridis

يصف لنا نموذج نيوفاسكولاريزيشن التي يسببها ثقب القزحية كنموذج عام لتقييم موسع للأوعية. هذا النموذج أيضا ذات الصلة لاستهداف نيوفاسكولار الزرق، مضاعفات التي تهدد البصر لاعتلال الشبكية السكري. هذا الأسلوب يرتكز على استحثاث آيريس استجابة الأوعية الدموية بسلسلة من ثقوب uveal الختم الذاتي على الفئران بالب/ج، ويستفيد من نضوج المفرج العين الماوس بعد الولادة. ويخضع الجراء الماوس ثقوب uveal من يوم الولادة 12.5، عندما فتح الجراء عيونهم، حتى يوم الولادة 24.5 بطبيعة الحال. نظراً لشفافية القرنية، القزحية المفرج يمكن تحليلها بسهولة عبر الزمن بأساليب موسع في فيفو . علاوة على ذلك، يمكن أن يكون شبه شفاف قزحية بالب/ج الفئران فلاتمونتيد لتحليل إيمونوهيستولوجيك مفصلة مع تلوين الخلفية غير محددة الحد الأدنى. في هذا النموذج، تولد الأوعية هو أساسا مدفوعا التحريضية وتفعيل نظم البلاسمينوجين. نموذج المستحثة بثقب هو الأول من حمل neovascularization آيريس في القوارض الصغيرة، وفي الاستفادة من السماح المباشر موسع في فيفو تحليل عملية الأوعية. وعلاوة على ذلك، يمكن ضم النموذج مع الأوعية تحوير المواد، الذي يسلط الضوء على إمكاناتها في دراسة الأوعية مع وجهة نظر في فيفو .

ألبينو بالب/ج الماوس الجراء في P12.5 تعرضوا لثقوب uveal، يتكرر كل يوم الرابع (تجريبي اليوم 0، 4، 8، 12)، حتى P24.5. في P27.5، كانت euthanized الفئران وقزحيات بعناية تشريح (15 يوم تجريبي). تم التقاط الصور لعيون الماوس مع كاميرا تعلق على ستيريوسكوبي جراحية قبل كل سلسلة الثقب في كل يوم تجريبية لتقييم تقييم موسع لاستجابة الأوعية الدموية آيريس. حمل ثقوب uveal استجابة الأوعية الدموية من قزحية العين بأحداث الجرح الشفاء نظام (الشكل 1). نظراً لشفافية القرنية وتفتقر إلى الميلانين بالب/ج الفئران، المفرج آيريس زيادة سهولة مرئية من تجريبية يوم 4 (P16.5)، ويزيد من حدة طوال مدة البروتوكول. صور Immunohistochemistry بيكم-1 تدل على زيادة المفرج عموما في قزحيات العيون ثقب مقارنة بعناصر التحكم (الشكل 2).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57398/57398fig1.jpg"> رقم 1: رصد موسع للأوعية التي يسببها ثقب القزحية. صور الممثل اليوم 0، 4، 8 و 12 و 15 من التحكم وعيون ثقب. آيريس استجابة الأوعية الدموية بوضوح من اليوم الرابع فصاعدا في عيون ثقب. مقياس بار = 1 مم. <a href="//cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/57398/57398fig1large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57398/57398fig2.jpg"> رقم 2: آيريس استجابة الأوعية الدموية في العينين الناجم عن ثقب. صور توضيحية لتلطيخ بيكام-1 من قزحيات 15 يوما، عرض كعرض كامل وتضخيم المنطقة (مربعة)، من السيطرة وثقب العينين. شريط المقياس = 400 ميكرون (أعلى)؛ 200 ميكرومتر (أسفل). ملاحظة الزيادة في الفروع الأوعية الدموية في قزحيات ثقب. <a href="//cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/57398/57398fig2large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-</a>

Watch this Scientific Journal Video about Puncture-Induced Iris Neovascularization as a Mouse Model of Rubeosis Iridis at JoVE.com

Puncture-Induced Iris Neovascularization as a Mouse Model of Rubeosis Iridis

نيوفاسكولاريزيشن آيريس، مضاعفة شائعة لترويه الشبكية، قد يؤدي إلى الزرق نيوفاسكولار تهدد البصر. هنا، يمكننا وصف بروتوكول مورين لحمل neovascularization آيريس التجريبية التي يمكن استخدامها لتقييم موسع للأوعية تحوير المواد.

نيوفاسكولاريزيشن آيريس المستحثة بثقب كنموذج الفأر من إيريديس روبيوسيس

We describe a model of puncture-induced iris neovascularization as a general model for noninvasive evaluation of angiogenesis. The model is also relevant ...

puncture-induced-iris-neovascularization-as-mouse-model-rubeosis

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Medicine

8.7K Views.  Karolinska Institutet. نيوفاسكولاريزيشن آيريس، مضاعفة شائعة لترويه الشبكية، قد يؤدي إلى الزرق نيوفاسكولار تهدد البصر. هنا، يمكننا وصف بروتوكول مورين لحمل neovascularization آيريس التجريبية التي يمكن استخدامها لتقييم موسع للأوعية تحوير المواد.

Video: Puncture-Induced Iris Neovascularization as a Mouse Model of Rubeosis Iridis

A Mouse Model of in Utero Transplantation

The transplantation of stem cells and viruses in utero has tremendous potential for treating congenital disorders in the human fetus. For example, in utero transplantation (IUT) of hematopoietic stem cells has been used to successfully treat patients with severe combined immunodeficiency.1,2 In several other conditions, however, IUT has been attempted without success.3 Given these mixed results, the availability of an efficient non-human model to study the biological sequelae of stem cell transplantation and gene therapy is critical to advance this field. We and others have used the mouse model of IUT to study factors affecting successful engraftment of in utero transplanted hematopoietic stem cells in both wild-type mice4-7 and those with genetic diseases.8,9 The fetal environment also offers considerable advantages for the success of in utero gene therapy. For example, the delivery of adenoviral10, adeno-associated viral10, retroviral11, and lentiviral vectors12,13 into the fetus has resulted in the transduction of multiple organs distant from the site of injection with long-term gene expression. in utero gene therapy may therefore be considered as a possible treatment strategy for single gene disorders such as muscular dystrophy or cystic fibrosis. Another potential advantage of IUT is the ability to induce immune tolerance to a specific antigen. As seen in mice with hemophilia, the introduction of Factor IX early in development results in tolerance to this protein.14 
In addition to its use in investigating potential human therapies, the mouse model of IUT can be a powerful tool to study basic questions in developmental and stem cell biology. For example, one can deliver various small molecules to induce or inhibit specific gene expression at defined gestational stages and manipulate developmental pathways. The impact of these alterations can be assessed at various timepoints after the initial transplantation. Furthermore, one can transplant pluripotent or lineage specific progenitor cells into the fetal environment to study stem cell differentiation in a non-irradiated and unperturbed host environment.
The mouse model of IUT has already provided numerous insights within the fields of immunology, and developmental and stem cell biology. In this video-based protocol, we describe a step-by-step approach to performing IUT in mouse fetuses and outline the critical steps and potential pitfalls of this technique.

A Mouse Model of in Utero Transplantation

The mouse model of in utero transplantation is a versatile tool that can be used to study the potential clinical applications of stem cell transplantation and gene therapy in the fetus. In this protocol, we present a general approach to performing this technique

نموذج الفأر من في الرحم زراعة

The transplantation of stem cells and viruses in utero has tremendous potential for treating congenital disorders in the human fetus.  For example, in ...

Mouse Complete Stasis Model of Inferior Vena Cava Thrombosis

Venous thromboembolism (VTE) includes both deep vein thrombosis (DVT) and pulmonary embolism (PE). In the United States (U.S.), the high morbidity and mortality rates make VTE a serious health concern 1-2. After heart disease and stroke, VTE is the third most common vascular disease 3. In the U.S. alone, there is an estimated 900,000 people affected each year, with 300,000 deaths occurring annually 3. A reliable in vivo animal model to study the mechanisms of this disease is necessary.
The advantages of using the mouse complete stasis model of inferior vena cava thrombosis are several. The mouse model allows for the administration of very small volumes of limited availability test agents, reducing costs dramatically. Most promising is the potential for mice with gene knockouts that allow specific inflammatory and coagulation factor functions to be delineated. Current molecular assays allow for the quantitation of vein wall, thrombus, whole blood, and plasma for assays. However, a major concern involving this model is the operative size constraints and the friability of the vessels. Also, due to the small IVC sample weight (mean 0.005 grams) it is necessary to increase animal numbers for accurate statistical analysis for tissue, thrombus, and blood assays such as real-time polymerase chain reaction (RT-PCR), western blot, enzyme-linked immunosorbent (ELISA), zymography, vein wall and thrombus cellular analysis, and whole blood and plasma assays 4-8.
The major disadvantage with the stasis model is that the lack of blood flow inhibits the maximal effect of administered systemic therapeutic agents on the thrombus and vein wall.

The mouse complete stasis model of inferior vena cava thrombosis yields quantifiable amounts of vein wall tissue and thrombus. It has proven useful for evaluating interactions between the vein wall and the occlusive thrombus and in assessing the progression from acute to chronic inflammation.

الفأرة النموذجي ركود كاملة من الوريد الأجوف السفلي التخثر

Venous thromboembolism (VTE) includes both deep vein thrombosis (DVT) and pulmonary embolism (PE).  In the United States (U.S.), the high morbidity and ...

Rapid Point-of-Care Assay of Enoxaparin Anticoagulant Efficacy in Whole Blood

There is the need for a clinical assay to determine the extent to which a patient's blood is effectively anticoagulated by the low-molecular-weight-heparin (LMWH), enoxaparin. There are also urgent clinical situations where it would be important if this could be determined rapidly. The present assay is designed to accomplish this. We only assayed human blood samples that were spiked with known concentrations of enoxaparin. The essential feature of the present assay is the quantification of the efficacy of enoxaparin in a patient's blood sample by degrading it to complete inactivity with heparinase. Two blood samples were drawn into Vacutainer tubes (Becton-Dickenson; Franklin Lakes, NJ) that were spiked with enoxaparin; one sample was digested with heparinase for 5 min at 37 &deg;C, the other sample represented the patient's baseline anticoagulated status. The percent shortening of clotting time in the heparinase-treated sample, as compared to the baseline state, yielded the anticoagulant contribution of enoxaparin. We used the portable, battery operated Hemochron 801 apparatus for measurements of clotting times (International Technidyne Corp., Edison, NJ). The apparatus has 2 thermostatically controlled (37 &deg;C) assay tube wells. We conducted the assays in two types of assay cartridges that are available from the manufacturer of the instrument. One cartridge was modified to increase its sensitivity. We removed the kaolin from the FTK-ACT cartridge by extensive rinsing with distilled water, leaving only the glass surface of the tube, and perhaps the detection magnet, as activators. We called this our minimally activated assay (MAA). The use of a minimally activated assay has been studied by us and others. 2-4 The second cartridge that was studied was an activated partial thromboplastin time (aPTT) assay (A104). This was used as supplied from the manufacturer. The thermostated wells of the instrument were used for both the heparinase digestion and coagulation assays. The assay can be completed within 10 min. The MAA assay showed robust changes in clotting time after heparinase digestion of enoxaparin over a typical clinical concentration range. At 0.2 anti-Xa I.U. of enoxaparin per ml of blood sample, heparinase digestion caused an average decrease of 9.8% (20.4 sec) in clotting time; at 1.0 I.U. per ml of enoxaparin there was a 41.4% decrease (148.8 sec). This report only presents the experimental application of the assay; its value in a clinical setting must still be established.

Demonstration of a rapid quantitative assay of the inhibition of blood coagulation by the low-molecular-weight-heparin, enoxaparin. The contribution of enoxaparin is assessed by removing its influence through digestion with heparinase. A fuller description of the assay is detailed in our published paper.1 The assay still requires clinical confirmation.

السريع في نقاط الفحص من كفاءة الرعاية تخثر الدم الكامل في Enoxaparin

There is the need for a clinical assay to determine the extent to which a patient's blood is effectively anticoagulated by the ...

Intraductal Injection of LPS as a Mouse Model of Mastitis: Signaling Visualized via an NF-&kappa;B Reporter Transgenic

Animal models of human disease are necessary in order to rigorously study stages of disease progression and associated mechanisms, and ultimately, as pre-clinical models to test interventions. In these methods, we describe a technique in which lipopolysaccharide (LPS) is injected into the lactating mouse mammary gland via the nipple, effectively modeling mastitis, or inflammation, of the gland. This simulated infection results in increased nuclear factor kappa B (NF-&kappa;B) signaling, as visualized through bioluminescent imaging of an NF-&kappa;B luciferase reporter mouse1.
Our ultimate goal in developing these methods was to study the inflammation associated with mastitis in the lactating gland, which often includes redness, swelling, and immune cell infiltration2,3. Therefore, we were keenly aware that incision or any type of wounding of the skin, the nipple, or the gland in order to introduce the LPS could not be utilized in our methods since the approach would likely confound the read-out of inflammation. We also desired a straight-forward method that did not require specially made hand-drawn pipettes or the use of micromanipulators to hold these specialized tools in place. Thus, we determined to use a commercially available insulin syringe and to inject the agent into the mammary duct of an intact nipple. This method was successful and allowed us to study the inflammation associated with LPS injection without any additional effects overlaid by the process of injection. In addition, this method also utilized an NF-&kappa;B luciferase reporter transgenic mouse and bioluminescent imaging technology to visually and quantitatively show increased NF-&kappa;B signaling within the LPS-injected gland4.
These methods are of interest to researchers of many disciplines who wish to model disease within the lactating mammary gland, as ultimately, the technique described here could be utilized for injection of a number of substances, and is not limited to only LPS.

Described here is a technique in which lipopolysaccharide is injected into the lactating mouse mammary gland via the nipple to simulate mastitis, a condition commonly caused by bacterial infection. Lipopolysaccharide injection results in increased nuclear factor kappa B (NF-&kappa;B) signaling, visualized through bioluminescent imaging of an NF-&kappa;B luciferase reporter mouse.

تصور اشارة عبر مراسل المعدلة وراثيا NF-كيلوبايت: حقن ينترادوكتال من LPS ونموذج الفأر من التهاب الضرع

Animal models of human disease are necessary in order to rigorously study stages of disease progression and associated mechanisms, and ultimately, as ...

The In ovo CAM-assay as a Xenograft Model for Sarcoma

Sarcoma is a very rare disease that is heterogeneous in nature, all hampering the development of new therapies. Sarcoma patients are ideal candidates for personalized medicine after stratification, explaining the current interest in developing a reproducible and low-cost xenotransplant model for this disease. The chick chorioallantoic membrane is a natural immunodeficient host capable of sustaining grafted tissues and cells without species-specific restrictions. In addition, it is easily accessed, manipulated and imaged using optical and fluorescence stereomicroscopy. Histology further allows detailed analysis of heterotypic cellular interactions.
This protocol describes in detail the in ovo grafting of the chorioallantoic membrane with fresh sarcoma-derived tumor tissues, their single cell suspensions, and permanent and transient fluorescently labeled established sarcoma cell lines (Saos-2 and SW1353). The chick survival rates are up to 75%. The model is used to study graft- (viability, Ki67 proliferation index, necrosis, infiltration) and host (fibroblast infiltration, vascular ingrowth) behavior. For localized grafting of single cell suspensions, ECM gel provides significant advantages over inert containment materials. The Ki67 proliferation index is related to the distance of the cells from the surface of the CAM and the duration of application on the CAM, the latter determining a time frame for the addition of therapeutic products.

The In ovo CAM-assay as a Xenograft Model for Sarcoma

The in ovo chorioallantoic membrane (CAM) is grafted with fresh sarcoma-derived tumor tissues, their single cell suspensions, and permanent and transient fluorescently labeled established sarcoma cell lines. The model is used to study graft- (viability, Ki67 proliferation index, necrosis, infiltration) and host (fibroblast infiltration, vascular ingrowth) behavior.

ال<em&gt; في البيضة</em&gt; CAM-مقايسة باعتبارها Xenograftmodel عن الورم اللحمي

Sarcoma is a very rare disease that is heterogeneous in nature, all hampering the development of new therapies. Sarcoma patients are ideal candidates for ...

An Alkali-burn Injury Model of Corneal Neovascularization in the Mouse

Under normal conditions, the cornea is avascular, and this transparency is essential for maintaining good visual acuity. Neovascularization (NV) of the cornea, which can be caused by trauma, keratoplasty or infectious disease, breaks down the so called &lsquo;angiogenic privilege' of the cornea and forms the basis of multiple visual pathologies that may even lead to blindness. Although there are several treatment options available, the fundamental medical need presented by corneal neovascular pathologies remains unmet. In order to develop safe, effective, and targeted therapies, a reliable model of corneal NV and pharmacological intervention is required. Here, we describe an alkali-burn injury corneal neovascularization model in the mouse. This protocol provides a method for the application of a controlled alkali-burn injury to the cornea, administration of a pharmacological compound of interest, and visualization of the result. This method could prove instrumental for studying the mechanisms and opportunities for intervention in corneal NV and other neovascular disorders.

Neovascularization (NV) of the cornea can complicate multiple visual pathologies. Utilizing a controlled, alkali-burn injury model, a quantifiable level of corneal NV can be produced for mechanistic study of corneal NV and evaluation of potential therapies for neovascular disorders.

والقلوي حرق الإصابات نموذج من القرنية اتساع الأوعية الدموية في ماوس

Under normal conditions, the cornea is avascular, and this transparency is essential for maintaining good visual acuity. Neovascularization (NV) of the ...

Excitotoxic Stimulation of Brain Microslices as an In vitro Model of Stroke

Examining molecular mechanisms involved in neuropathological conditions, such as ischemic stroke, can be difficult when using whole animal systems. As such, primary or &#39;neuronal-like&#39; cell culture systems are commonly utilized. While&#160;these systems are relatively easy to work with, and are useful model systems in which various functional outcomes (such as cell death) can be readily quantified, the examined outcomes and pathways in cultured immature neurons (such as excitotoxicity-mediated cell death pathways) are not necessarily the same as those observed in mature brain, or in intact tissue. Therefore, there is the need to develop models in which cellular mechanisms in mature neural tissue can be examined. We have developed an in vitro technique that can be used to investigate a variety of molecular pathways in intact nervous tissue. The technique described herein utilizes rat cortical tissue, but this technique can be adapted to use tissue from a variety of species (such as mouse, rabbit, guinea pig, and chicken) or brain regions (for example, hippocampus, striatum, etc.). Additionally, a variety of stimulations/treatments can be used (for example, excitotoxic, administration of inhibitors, etc.). In conclusion, the brain slice model described herein can be used to examine a variety of molecular mechanisms involved in excitotoxicity-mediated brain injury.

Excitotoxic Stimulation of Brain Microslices as an In vitro Model of Stroke

We have developed a brain slice model which can be used to examine molecular mechanisms involved in excitotoxicity-mediated brain injury.&#160;This technique generates viable mature brain tissue and reduces animal numbers required for experimentation, whilst keeping the neuronal circuitry, cellular interactions, and postsynaptic compartments partly intact.

excitotoxic المواد تحفيز الدماغ باعتبارها Microslices<em&gt; في المختبر</em&gt; نموذج من السكتة الدماغية

Examining molecular mechanisms involved in neuropathological conditions, such as ischemic stroke, can be difficult when using whole animal systems. As ...

A Mouse Model for Laser-induced Choroidal Neovascularization

The mouse laser-induced choroidal neovascularization (CNV) model has been a crucial mainstay model for neovascular age-related macular degeneration (AMD) research. By administering targeted laser injury to the RPE and Bruch&#8217;s membrane, the procedure induces angiogenesis, modeling the hallmark pathology observed in neovascular AMD. 
First developed in non-human primates, the laser-induced CNV model has come to be implemented into many other species, the most recent of which being the mouse. Mouse experiments are advantageously more cost-effective, experiments can be executed on a much faster timeline, and they allow the use of various transgenic models. The miniature size of the mouse eye, however, poses a particular challenge when performing the procedure. Manipulation of the eye to visualize the retina requires practice of fine dexterity skills as well as simultaneous hand-eye-foot coordination to operate the laser. However, once mastered, the model can be applied to study many aspects of neovascular AMD such as molecular mechanisms, the effect of genetic manipulations, and drug treatment effects. 
The laser-induced CNV model, though useful, is not a perfect model of the disease. The wild-type mouse eye is otherwise healthy, and the chorio-retinal environment does not mimic the pathologic changes in human AMD. Furthermore, injury-induced angiogenesis does not reflect the same pathways as angiogenesis occurring in an age-related and chronic disease state as in AMD.
Despite its shortcomings, the laser-induced CNV model is one of the best methods currently available to study the debilitating pathology of neovascular AMD. Its implementation has led to a deeper understanding of the pathogenesis of AMD, as well as contributing to the development of many of the AMD therapies currently available.

Here, we present the mouse laser-induced choroidal neovascularization (CNV) protocol, an experimental model that re-creates the vascular hallmarks of neovascular age-related macular degeneration (AMD). Once mastered, it can reliably and effectively induce CNV as a model system to test various experimental measures.

نموذج الفأر ليزر بفعل اتساع الأوعية الدموية المشيمية

The mouse laser-induced choroidal neovascularization (CNV) model has been a crucial mainstay model for neovascular age-related macular degeneration (AMD) ...

Tachycardia-Induced Cardiomyopathy As a Chronic Heart Failure Model in Swine

A stable and reliable model of chronic heart failure is required for many experiments to understand hemodynamics or to test effects of new treatment methods. Here, we present such a model by tachycardia-induced cardiomyopathy, which can be produced by rapid cardiac pacing in swine.
A single pacing lead is introduced transvenously into fully anaesthetized healthy swine, to the apex of the right ventricle, and fixated. Its other end is then tunneled dorsally to the paravertebral region. There, it is connected to an in-house modified heart pacemaker unit that is then implanted in a subcutaneous pocket. 
After 4 - 8 weeks of rapid ventricular pacing at rates of 200 - 240 beats/min, physical examination revealed signs of severe heart failure - tachypnea, spontaneous sinus tachycardia, and fatigue. Echocardiography and X-ray showed dilation of all heart chambers, effusions, and severe systolic dysfunction. These findings correspond well to decompensated dilated cardiomyopathy and are also preserved after the cessation of pacing.
This model of tachycardia-induced cardiomyopathy can be used for studying the pathophysiology of progressive chronic heart failure, especially hemodynamic changes caused by new treatment modalities like mechanical circulatory supports. This methodology is easy to perform and the results are robust and reproducible.

Here, we present a protocol to produce tachycardia-induced cardiomyopathy in swine. This model represents a potent way to study the hemodynamics of progressive chronic heart failure and the effects of applied treatment.

اعتلال عضلة القلب الناجم عن عدم انتظام دقات القلب كنموذج فشل القلب مزمن في الخنازير

A stable and reliable model of chronic heart failure is required for many experiments to understand hemodynamics or to test effects of new treatment ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and drugs. It is widely used in many studies on the physiological functions of vascular smooth muscle, the pathogenesis of vascular diseases such as hypertension, and the development of smooth muscle relaxant drugs. The mouse is a widely used model animal with a large pool of disease models and genetically modified strains. We introduced this method to measure the isometric contraction of mouse mesenteric artery in detail. A 1.4-mm segment of mouse mesenteric resistance artery was isolated and mounted on a myograph chamber by passing two steel wires through its lumen. After equilibration and normalization steps, the vessel segment was potentiated by a high-K+ solution twice prior to the contraction assay. As an example of the application of this method in drug development, we measured the relaxant effect of a novel natural substance, neoliensinine, isolated from a Chinese herb, embryos of the lotus seed (Nelumbo nucifera Gaertn.) on mouse mesenteric arteries. The vessel segments mounted on the myograph chamber were stimulated with a high-K+ solution. When the force tension reached a stable sustained phase, cumulative doses of neoliensinine were added to the chamber. We found that neoliensinine had a dose-dependent relaxant effect on smooth muscle contraction, thus suggesting that it bears potential activity against hypertension. In addition, as the vessel segment can survive at least 4 hours after mounting and maintain contractility induced by the high-K+ solution for many times, we suggest that the wire myograph system may be used for the time-consuming process of drug screening.

The wire myograph technique is used to investigate vascular smooth muscle functions and screen new drugs. We report a detailed protocol for measuring the isometric contractility of the mouse mesenteric artery and for screening new relaxants of vascular smooth muscle.

متساوي القياس كونتراكتيليتي القياس الشريان المساريقي العلوي الماوس باستخدام أسلاك ميوجرافي

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...