Method Article
هنا نقدم طريقة جديدة لقياس دقة الاختلافات في درجة الحرارة الجسم في تاق الجهازية السلبي (PSA) والحساسية الغذائية الماوس نماذج استخدام حرارة الأشعة تحت حمراء. تم تكرار هذا الإجراء بدقة في السابق بي إس أية نتائج.
قياس درجة حرارة الجسم الماوس من الأهمية بالنسبة للتحقيق في الحساسية وأعراض تحسسي. المسابر المستقيم لقراءات درجة الحرارة الشائعة، وأنها قد أثبتت أن تكون دقيقة ولا تقدر بثمن في هذا الصدد. ومع ذلك، يتطلب هذا الأسلوب لقياس درجة الحرارة الفئران أن تخديره من أجل إدراج التحقيق دون أذى للحيوان. وهذا يحد من القدرة على مراقبة أخرى تعمل الماوس في وقت واحد. من أجل التحقيق الأخرى تعمل أثناء قياس درجات الحرارة، المسابر المستقيم ليست مثالية، والمطلوب هو أسلوب آخر. هنا، علينا الأخذ بأسلوب موسع لقياس درجة الحرارة التي التعويضي الشرط للتخدير الماوس مع الحفاظ على موثوقية متساوية لتحقيقات المستقيم في قياس درجة حرارة الجسم. ونحن نستخدم حرارة الأشعة تحت حمراء التي يكشف الجسم درجات الحرارة السطحية في يتراوح بين 2 و 150 مم. هذا الأسلوب لقياس درجة حرارة الجسم النجاح في تكرار موثوق اتجاهات تغير درجة الحرارة أثناء تجارب الحساسية المفرطة نظام سلبي في الفئران. ونحن تبين أن درجات الحرارة السطحية في الجسم حوالي 2.0 درجة مئوية أقل من قياسات مسبار المستقيم، ولكن درجة انخفاض درجة الحرارة ويتبع نفس الاتجاه. وعلاوة على ذلك، يمكننا استخدام نفس الأسلوب لمراقبة الفئران في نموذج الحساسية غذائية لتقييم مستويات درجة الحرارة والنشاط في نفس الوقت.
تم قياس درجة حرارة الجسم جزءا أساسيا من رصد آثار أعراض تحسسي في الحيوان نماذج1،2. الاختلافات في درجة الحرارة قيست تقليديا بالحرارة المسبار المستقيمي في الفئران3،4. مع هذه القياسات، محققين موثوق قد يصور الاختلافات في درجة الحرارة بين المتغيرات؛ ومع ذلك، هذا الأسلوب هو إجراء يستغرق وقتاً طويلاً ويسبب الضيق للفئران، التي يمكن أن تزيد من درجة حرارة الجسم الأساسية. سبر المستقيم يمكن أيضا أن يسبب الإصابة وتمزق الأغشية المخاطية3. وعلاوة على ذلك، ينبغي أن تخديره الفئران من أجل إدراج معاملة إنسانية المسبار المستقيمي لقياس درجة الحرارة3. هذه عملية بطيئة، ويحظر بقياس درجات الحرارة المتعاقبة خلال فترة قصيرة من الزمن. وعلاوة على ذلك، لا يمكن ملاحظة تعمل نشاط الفئران خلال هذا الوقت حتى المخدر هو تماما بليت، وهي عملية تستغرق وقتاً طويلاً آخر. في الآونة الأخيرة، استخدمت أساليب أخرى يمكن الاعتماد عليها لقياس درجة حرارة الجسم العلامات مرسل الأشعة تحت الحمراء السلبية مزروع تحت الجلد أو أجهزة البث الإذاعي التي تشمل درجة حرارة استشعار3،،من56. على الرغم من أنها مقبولة كممارسة مثالية ببعض الباحثين، لا يتم استخدام هذه الأساليب على نطاق واسع بسبب ارتفاع التكاليف الأولية والشدة للفئران، بسبب العمليات الجراحية زرع جهاز استشعار درجة الحرارة تحت الجلد أو جزء آخر من الجسم.
من أجل إثبات أن فرق في درجة حرارة انعكاس دقيق للأعراض في مرض نموذج1،2، الفئران يجب أن تكون مستيقظا أثناء قياس درجة الحرارة وتكون قادرة على العودة إلى نشاطهم المظهرية العادية مباشرة قبل وبعد القياس. وتحقيقا لهذه الغاية، سعينا لأسلوب الذي يمكن أن يتحقق هذا.
وكان هدفنا دقة وبتكلفة زهيدة قياس درجة حرارة الجسم الماوس، دون الحاجة للتخدير ودون فرض قيود على النشاط، لتمكين المراقبة السلوكية تعمل أثناء وبعد الوقت لقياس درجة الحرارة. ولتحقيق هذا الهدف، كان من الواضح أن تقنية أقل الغازية من يسبر درجة حرارة المستقيم القياسية المطلوبة. استخدمت الأشعة تحت الحمراء الحرارة لعدة عقود في الطب السريري، لا سيما في طب الأطفال، للحصول على قراءات دقيقة درجة الحرارة. وكان أسلوب بديل التي سمحت للأطباء بسرعة ودقة الحصول على قياسات درجات الحرارة عند الرضع والأطفال صعب أن نشاط متحركة. تنفيذ هذا الأسلوب نفسه في الفئران، وقد تطورت طريقة ناجحة للحصول على درجات حرارة دون تخدير. الأهم من ذلك، نحن تبين أن هذه الطريقة قادرة على تكرار نتائج تاق المنهجية السلبية الراسخة فيما يتعلق بالتغيرات في درجات الحرارة، في حين يجري أيضا قادرة على مراقبة نشاط الماوس في جميع أنحاء القياس. وعلاوة على ذلك، يمكننا استخدام نفس الأسلوب لتقييم درجات حرارة الجسم من الفئران حساسية الغذاء، أثناء التحقيق في نفس الوقت الأعراض الأخرى، لإثبات أن درجة حرارة الجسم هو في الواقع انعكاسا دقيقا لمستوى النشاط والنمط الظاهري عموما من الماوس.
بموافقة جميع التجارب على الحيوانات بالعناية بالحيوان واستخدام اللجنة للمعهد لاخويا للحساسية وعلم المناعة.
1-الماوس قياس درجة حرارة الجسم أثناء أنيسثيتيزاتيون
2. الماوس قياس درجة حرارة الجسم دون مخدر
3. تاق النظامية السلبي7
4-نموذج الماوس للغذاء الحساسية8،9
ملاحظة: يظهر التخطيطي في الشكل 2.
تاق الجهازية السلبي: لحقن رابعا، أسبوع 10 القديمة من الإناث بالب/ج الفئران تم تخديره. قبل الحقن، قمنا بقياس على درجة حرارة الجسم (فيديو 1) كما هو موضح في الخطوة 1. ويبين الشكل 1 الاتجاه درجة الحرارة لكل السكان بعد حقن الرابع. فريق الخبراء الحكومي الدولي توعية الماوس أظهر انخفاض درجة حرارة قصوى 3.0 درجة مئوية في 20 دقيقة، في حين كان الماوس التحكم برنامج تلفزيوني بانخفاض 1.1 درجة مئوية كحد أقصى في 20 دقيقة7. وعلاوة على ذلك، قيمت عشرات النشاط طوال هذه العملية، استناداً إلى تنقل كل الماوس. ولوحظت الفئران أولاً دون أي تحريض. ثم أنها لوحظت مع الانفعالات قبل إدخال اليد للمقيم في القفص وجعل الاتصال لينة مع الماوس. وبناء على ردود أفعالهم، الفئران يتم تقييمها وسجل على مقياس من 1 إلى 3. نقاط 1 يشير إلى ماوس غير متحرك أو المحمول الحد الأدنى مع أو بدون الانفعالات؛ نقاط 2 يشير إلى ماوس متحرك دون الانفعالات وهو المحمول مع الانفعالات دون إجراء حركات مراوغة سريعة؛ ويشير إلى نقاط 3 ماوس متحركة أو متحرك دون الانفعالات والمتنقلة مع الانفعالات ويجعل حركات مراوغة سريعة. فيديو 2 و 3 أمثلة للفريقين التي تجسد أساليب قياس درجة الحرارة فضلا عن قياسات مستوى النشاط المقابلة. الاستخدام للحرارة الأشعة تحت الحمراء يسمح لقياسات درجات الحرارة دون تخدير، الذي يسمح بدوره لتقييم النمط الظاهري السلوكية قبل وأثناء وبعد قياس درجة الحرارة؛ على النقيض من ذلك، تحقيق المستقيم تقليدية تتطلب التخدير وذلك يحول دون أي تقييم السلوكية خلال دقائق عدة قياسات درجات الحرارة المحيطة.
نموذج الفأر من الحساسية الغذائية8: التخطيطي للطراز الماوس هو هو مبين في الشكل 2. الفئران هي الإناث بالب/ج الفئران للإعمار 8 إلى 10 أسابيع من العمر في الوقت للتوعية. ولوحظت الفئران في 10 و 20, 40، و 60 دقيقة بعد كل التحدي لدرجة حرارة الجسم والنشاط. يبين الشكل 3 لتغيير درجة الحرارة نتيجة ممثل أثناء التحدي 7. وأظهرت الفئران انخفاض درجة حرارة قصوى في 10 دقيقة؛ ولذلك، استخدمت في درجات الحرارة 10 دقيقة ترتبط بدرجات حرارة الجسم في مستويات النشاط 10 دقيقة (مع سجل استناداً إلى المعايير المبينة أعلاه). درجة النشاط ودرجة حرارة قطره أظهرت وجود ترابط يعتد به إحصائيا (الشكل 4). كما هو مذكور في المقطع تاق الجهازية السلبي، الملاحظات السلوكية تم إجراؤها بسبب عدم توافر التخدير، واستخدم مقياس الحرارة الأشعة تحت الحمراء. على النقيض من ذلك، أن المسابير المستقيم إحباط أية ملاحظات سلوكية أو التقييمات خلال الوقت لقياس درجة الحرارة. أي وقت أن درجة الحرارة وغيرها من الأنشطة التي يجب أن تسجل تعمل، ضروري للاستفادة من نظام لقياس درجة الحرارة التي لا تتطلب التخدير.
الشكل 1 : تاق الجهازية الكامن في الفئران بالب/ج. اثنين من الفئران كانت الملكية الفكرية حقن بالتثقيف ضد فريق الخبراء الحكومي الدولي في اليوم 0، ثم رابعا حقن المحلول الملحي العادي أو التثقيف يمتلكهما في يوم 1. وتم قياس درجة حرارة الجسم استخدام حرارة الأشعة تحت حمراء قبل الحقن وكل 10 دقيقة بعد الحقن لدقيقة 70 الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الشكل 2 : الغذاء الحساسية الماوس نموذج تخطيطي. في اليوم 0، كانت الفئران بالب/ج وعي الملكية الفكرية مع البويضات والألمنيوم، ومرة أخرى في يوم 14. في يوم 28، 30 دقيقة قبل كل التحدي، كانت الفئران جافاجيد شفويا مع مراقبة برنامج تلفزيوني أو مثبط الحساسية غذائية (طالبات-2CArecombinant الهستامين-الإفراج عن عامل مع سيستينيس اثنين في تبادل مع الانينيس)9. ثم طعن الفئران ig بملغ 25 من البويضات. وأجريت التحديات كل يوم للتحديات 9. وقد لوحظت الفئران لقياس درجة حرارة الجسم والنشاط وسجل 10، 20 و 40 و 60 دقيقة بعد التحدي. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الشكل 3 : نموذج الحساسية الغذائية في الفئران بالب/ج. تغيير درجة الحرارة بعد التحدي البويضات 7 كان يرصدها الحرارة الأشعة تحت الحمراء. يتم إظهار النتائج النموذجية من تجارب مستقلة على الأقل أربعة (* *، ف < 0.01 بين العلاجات برنامج تلفزيوني و 2CA باختبار t للطالب؛ ns: ليس كبيرا). أشرطة الخطأ = sem. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الشكل 4 : العلاقة بين النشاط ودرجة الحرارة في 10 دقيقة في تجارب الحساسية الغذائية- وتعكس النتائج القياسات المأخوذة من 4 مجموعات منفصلة من التجارب. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الفيديو 1: هيئة قياس درجة الحرارة في حين يتم تخديره من الفئران. يمكن أن تؤخذ قياسات درجة حرارة الجسم في الفئران مع أو بدون تخدير. لقياسات متسقة، من الضروري أن تهدف دائماً الحرارة في نفس الموقع في الجسم. من فضلك انقر هنا لمشاهدة هذا الفيديو. (انقر بالزر الأيمن التحميل.)
الفيديو 2: مستوى النشاط في 40 دقيقة بعد حقن يمتلكهما إدارة التخطيط الوطني الرابع- الفئران لوحظت دون إثارة الشغب في البداية، ثم مع الانفعالات. بناء على ردود أفعالهم، قيمت الفئران وسجل على نطاق نشاط من 1 إلى 3. الماوس إلى اليسار (ماوس توعية مكافحة التثقيف) تعطي درجة 1، بينما تعطي الماوس على اليمين (برنامج تلفزيوني التحكم الماوس) نقاط 3. من فضلك انقر هنا لمشاهدة هذا الفيديو. (انقر بالزر الأيمن التحميل.)
الفيديو 3: هيئة قياس درجة الحرارة في 40 دقيقة بعد حقن يمتلكهما إدارة التخطيط الوطني الرابع- وهذا الرقم يوضح قدرة الحرارة الأشعة تحت الحمراء بدقة وقياس درجة حرارة الجسم دون أنيسثيتيزيشن نونينفاسيفيلي. وعلاوة على ذلك، تعكس نشاط عشرات تظاهروا في الفيديو 2 درجة انخفاض درجة الحرارة تقاس في هذا الفيديو. من فضلك انقر هنا لمشاهدة هذا الفيديو. (انقر بالزر الأيمن التحميل.)
4 فيديو: أخطاء في درجة حرارة القراءة بهند مخلب العرقلة من أجهزة الاستشعار- هذا الفيديو يوضح الفرق في درجات الحرارة مع أو بدون القدم داخل محيط الاستشعار. من فضلك انقر هنا لمشاهدة هذا الفيديو. (انقر بالزر الأيمن التحميل.)
بروتوكول وصف أنشئت بهدف قياس درجة حرارة الجسم دون استخدام التخدير. وعلى الرغم من سهولة نسبية مع درجة الحرارة التي يمكن الحصول على قراءات، هناك العديد من المحاذير التي تستوعب هذه التقنية، بالإضافة إلى آثار أكثر وضوحاً مثل التعامل مع الإجهاد ودرجات الحرارة المحيطة مختلفة.
أولاً، بغية الحفاظ على قراءات درجة الحرارة متسقة في جميع أنحاء هذه التجربة، يجب أن سلفا الموقع حيث يتم قياسه درجة الحرارة باستخدام المعالم التشريحية، والمحققين يجب أن تكون قادرة على تكرار قياس الجسم وقال الموقع. بتأمين فوريباوس الماوس على سطح مستقيم الحافة، مثل الشفة من قفص أو الحافة من الحرارة، سهولة يتعرضون البطن لاستشعار الأشعة تحت الحمراء من الحرارة. وبوجه عام، هو البطن مساحة سطحية كبيرة تسمح ببعض المرونة لنتائج متسقة. وعلاوة على ذلك، البطن لكن الشعر من سطح الماوس الظهرية، ويسمح ذلك لقراءة درجة حرارة جسم أكثر دقة.
وثانيا، يجب دائماً رصد آثار أقدام هند عند أخذ قياس درجة حرارة. عندما تكون الحرارة قريبة من البطن، تميل الفئران لوضع أقدامهم على الحرارة نفسها. عند القدمين أو أصابع داخل المحيط من أجهزة الاستشعار، يمكن قراءة درجة الحرارة أقل من البطن، كما هو موضح في الفيديو 4. من المهم السماح للماوس لتنتشر بقدميها على كلا جانبي من أجهزة الاستشعار، مع الحفاظ على محيط خال من أي أجزاء من الجسم أو الكائنات إلى جانب سطح البطن.
ثالثا، لا يمكن أن تكون السطوح البطن للفئران الرطب عند أخذ القياسات. وسوف يغير سطح رطب القدرة الترمومتر لقياس درجة الحرارة بدقة؛ عادة، سوف تكون درجة الحرارة المقاسة أقل من القيمة الفعلية. ويمكن تجنب هذه المسألة عن طريق الحفاظ على الفئران في أقفاص مع الأسرة جديدة أثناء فترة المراقبة. وهذا يضمن أيضا أن جفاف السطح البطني هو موحدة في كل مرة يتم قياس درجات الحرارة.
وأخيراً، الأشعة تحت الحمراء الحرارة يكون هامش الخطأ أكبر من المسابر المستقيم، لو فقط قليلاً. وحدد هامش الخطأ للقياسات مع تحقيقات المستقيم هو ± 0.1 درجة مئوية، بينما هو للأشعة تحت الحمراء الحرارة، ± 0.2 درجة مئوية. هذا هامش الخطأ كان ضئيلا مقارنة بالاختلافات العامة في انخفاض درجة الحرارة بين السكان في التجربة PSA. الأهم من ذلك، مشروع تتطلب فرقا خفية كما ± 0.1 درجة مئوية كما قد تتصور الهامش الأخرى من المسائل خطأ، بغض النظر عما إذا كان حرارة الأشعة تحت الحمراء أو المسبار المستقيمي هو استخدام. أثناء إعداد هذا البروتوكول، قد أظهرت أيضا أن هناك علاقة جيدة جداً بين الهيئة الأساسية درجات الحرارة تقاس درجة الحرارة القابلة للغرس مرسلا ودرجات حرارة سطح الجسم تقاس بالأشعة تحت الحمراء الحرارة أثناء انخفاض حرارة الجسم التي يسببها ليبوبوليساكتشاريدي6.
انخفاض درجة الحرارة في نموذج الحساسية الغذائية المستخدمة قد لا لوحظ سابقا8،10. معياراً للتقييم كان سابقا لتحديد شدة النمط الظاهري بتسجيله الإسهال؛ بيد أن هذا الأسلوب يفتقر إلى الموضوعية. باستخدام الأشعة تحت الحمراء الحرارة، أظهرنا أن درجة حرارة خفية يمكن الكشف عن قطرات. ثم كنا قادرين على ربط هذه مع مستويات النشاط، كما تم تخديره الفئران لا أثناء الإجراء. يسمح هذا الأسلوب بطريقة سريعة ودقيقة وسهلة الاستخدام، وموسع، وغير مكلفة لقياس درجة حرارة الجسم في الفئران حين التمكن من مراقبة أخرى تعمل ستفتقده إلا إذا تم تخديره الفئران لقياسات مسبار المستقيم.
الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.
المنح البحثية في كواكامي وأيده مختبر المعهد الوطني للصحة: R01 AR064418-01A1 ومنظمة العفو الدولية R21 115534-01، و R01 HL124283-01 R41AI124734-01.
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Non-contact infrared thermometer | SinoPie | DT-8861 | |
Anti-dinitrophenyl (DNP) IgE | Sigma Aldrich | D8406-.2MG | |
PrecisionGlide 30 G needle | BD | 305128 | |
PrecisionGlide 26 G needle | BD | 305111 | |
1 mL syringe | BD | 309659 | |
Dinitrophenyl - human serum albumin | Biosearch Technologies | D-5059-10 | |
Ovalbumin from chicken egg white | Sigma Aldrich | A5503-50G | |
Imject Alum | ThermoFisher Scientific | 77161 | |
Animal Feeding Needles, disposable | Fisher Scientific | 01-208-87 |
Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article
Request PermissionThis article has been published
Video Coming Soon
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved