Method Article
و في الجسم الحي نموذج حيواني من الاصابة. الأسلوب يستفيد من الموقف تحت الجلد من العصب الشظوي. سرعة وتوقيت تفعيل العضلات ، وقوس الحركة كلها سلفا ومتزامنة باستخدام البرمجيات التجارية. ويتم رصد التغيرات إصابة آخر في الجسم الحي MR باستخدام التصوير / الطيفي.
سلالات العضلات هي واحدة من أكثر الشكاوى التي يعامل بها الأطباء. عادة ما يتم تشخيص اصابة في العضلات من تاريخ المريض والفحص البدني وحده ، ولكن يمكن أن تختلف تبعا السريرية إلى حد كبير على مدى الإصابة ، والتسامح المريض الألم ، وما إلى ذلك في المرضى الذين يعانون من اصابة في العضلات أو مرض في العضلات ، وتقييم الأضرار العضلات تقتصر عادة على العلامات السريرية ، مثل حنان النطاق ، قوة الحركة ، وأكثر في الآونة الأخيرة ، والدراسات التصوير. علامات مرتفعة عادة البيولوجية ، مثل مصل مستويات كيناز الكرياتين ، واصابة في العضلات ، ولكن مستوياتها لا تتطابق دائما مع فقدان الإنتاج القوة. هذا صحيح حتى من النتائج النسيجية من الحيوانات ، والتي توفر "تدبير المباشرة" للضرر ، ولكنها لا تمثل خسارة كل وظيفة. وقد جادل البعض بأن المقياس الأكثر شمولا من الصحة العامة للقوة في العضلات مقلص. بسبب اصابة في العضلات هو الحدث الذي يحدث بشكل عشوائي في إطار مجموعة من الشروط النشاط الحيوي ، فإنه من الصعب للدراسة. هنا ، نحن تصف في نموذج حيواني فيفو لقياس عزم الدوران وتنتج من اصابة في العضلات موثوق بها. كما وصفنا نموذجنا لقياس قوة العضلات من معزولة في الموقع. وعلاوة على ذلك ، ونحن لدينا وصف الإجراء حيوان صغير التصوير بالرنين المغناطيسي.
1. النموذجي في إصابة الجسم الحي وقياس عزم متساوي القياس.
2. وفي قياس الموضع من توتر العضلات كلها.
3. المجراة MR و / أو التصوير الطيفي للعضلات الهيكل العظمي القوارض.
يتم إجراء التصوير بالرنين المغناطيسي وجميع MRS على Biospin بروكر (فالجهاز يبث اشعة تماثل ، MA) 7.0 تيسلا نظام MR مجهزة إدراج التدرج 12 سم (660 طن / م التدرج القصوى ، 4570 T / م / ث أقصى معدل افر) يعمل Paravision 5.0 البرمجيات.
4. حصاد وتخزين العضلات.
ويتم حصاد المشرفون الدوليون بعد في نهاية التجارب ، وزنه ، والمفاجئة مجمدة في النيتروجين السائل ، ثم يخزن في -80 درجة مئوية. يمكن تنفيذ ذلك في أي نقطة في الوقت المناسب بعد في التجارب المجراة. ويتم حصاد العضلات مباشرة بعد التجارب في الموقع ، لأن هذا هو الاجراء المحطة. المورفولوجية للدراسات تفصيلية ، يتم إصلاح هذا الحيوان مع بارافورمالدهيد 4 ٪ عن طريق رذاذ من خلال البطين الأيسر.
5. ممثل النتائج.
الشكل 3 يوضح بيانات تمثيلية من الفئران في الجسم الحي في الجهاز يستخدم جهاز في الجسم الحي للحصول على أقصى عزم الدوران التي تولدها عضلات dorsiflexor ؛ كما انها تستخدم للحث على إصابة هذه العضلات نفسها. نظرا لطول العلاقة من التوتر في العضلات ، وعزم الدوران الأقصى متساوي القياس يحدث عادة عندما يتم وضع مفصل الكاحل في حوالي 20 درجة من plantarflexion (مع وضع متعامد القدم في الساق نظرت 0 درجة). بعد الحصول على أقصى عزم متساوي القياس ، ويمكن بعد ذلك قدم توضع في أي موقف للبدء في بروتوكول الاصابة. الشكل 3 يمثل بروتوكول إصابة 30 التكرار مع قوس الحركة من 0 ° -- 70 درجة. نلاحظ الانخفاض المطرد في عزم الدوران الناتجة عن المرحلة متساوي القياس (السهم شغل) ، وإطالة المرحلة (السهم فتح) خلال الانكماش الناجم عن بروتوكول الاصابة. ويسجل عزم الدوران في وحدات من NMM ، ولكن القيمة المطلقة يعتمد على حجم الحيوان وحالته (على سبيل المثال ، جرح العضلات ، والعضلات بالتعب ، أو العضلات التي تفتقر إلى البروتين معينة بسبب إعادة التركيب مثلي).
ويبين الشكل 4 بيانات تمثيلية من الفئران في الجهاز في الوضع الطبيعي. لدينا في الجهاز الموقع لا ينطوي انكماش إطالة ، بل يسمح لنا عزل ، تؤيد بشكل صحيح ، وقياس التوتر القصوى التي ينتجها الفرد في عضلة طول معروفة. الشكل 4 يبين الفقدان التدريجي للقوة التي تحدث أثناء اختبار التعب في العضلات الأمامية الظنبوبي من الفئران. في هذا المثال وجه الخصوص ، أجريت تقلصات تيتانيك مرة واحدة كل ثانية لمدة 5 دقائق. عادة ما يتم تسجيل التوتر (القوة) في نيوتن (أو غراما) ، ولكن مثل عزم الدوران ، والقيمة المطلقة يعتمد على حجم وحالة الحيوان. لأن الحصول على وزن العضلات مباشرة بعد هذا الإجراء ، يمكن تطبيع القوة (وتسمى "القوة الخاصة") إلى منطقة عبور قطاعات العضلات.
ويبين الشكل 5 بيانات تمثيلية من التصوير في الجسم الحي على فأرة الحاسوب ، مثل رسم الخرائط بارامترية T1 و T2 المرجحة (A) ، 3D tractography من نشر الموترة التصوير (B) ، 1 H الطيفي (C) ، و 31 الطيفي ف. وترد التفاصيل في أسطورة الرقم.
الشكل 1 : في أجهزة الجسم الحي.* لإنتاج الإصابة ، واستقر في الساق والقدم تعلق على لوحة بالمحركات. وحفز dorsiflexors الكاحل عبر العصب الشظوي بينما الصفيحة القدمية القوات القدم في ثني أخمصي (السهم منقط).
* & Lovering Deyne دي الميكانيكا J 2005 ، تستخدم مع إذن.
الشكل 2 : في جهاز الموضع هي التي شنت هذه الخلية لتحميل micromanipulator بحيث يمكن تعديل طول TA إلى الراحة والمنحازة بشكل صحيح في X ، Y ، Z والاتجاهات. ويرد في وتر البعيدة للTA إلى الخلية التي يسببها الحمل وتشنجات العضلات واحد في أطوال مختلفة من أجل تحديد L 0. يتم الحصول على أقصى قدر من الانكماش كزازي لتحديد التنشيط مقلص القصوى (ف 0). لا يمكن أن يؤديها التوتر القصوى كزازي مرارا وتكرارا ، وأعرب عن كنسبة مئوية من ف 0 ، توفير مؤشر التعب عند نقطة المطلوبة في الوقت المناسب.
782/2782fig3.jpg "بديل =" الشكل 3 "/>
الشكل 3 : بيانات من عزم الدوران في تسجيلات فيفو جهاز التتبع الممثل من عزم الدوران من إطالة تقلصات في الفئران. في هذا المثال وجه الخصوص ، وحفز العضلات لمدة 200 مللي ثانية للحث على تقلص متساوي القياس الذروة (السهم شغلها) قبل إطالة (السهم فتح) من قبل الصفيحة القدمية من خلال القوس 70 درجة من الحركة في سرعة الزاوي من 900 درجة / ثانية.
الشكل 4 : بيانات من التوتر في الموقع تظهر البيانات الممثل جهاز الهبوط في التوتر القصوى كزازي متساوي القياس خلال التحفيز المتكرر للعضلة الأمامية الظنبوبي (TA) في الفئران. في هذا المثال ، تم عزل TA ، بعد تعديلها لطول الأمثل (L 0) ، وحفزت ثم مع تقلص كزازي 200 مللي مرة واحدة كل ثانية لمدة 5 دقائق.
الشكل 5 : التصوير في فيفو ج : إن الصور تظهر عرضية (محوري) أجزاء من رسم الخرائط بارامترية T1 و T2 المرجحة من العضلات الأمامية الظنبوبي (TA). مربع أحمر منقط يحيط TA تظهر زيادة في زيادة T2 الجرحى (الجانب الأيسر) مقابل يصب (الجانب الأيمن) ب :. tractography 3D الممثل من نشر الموترة التصوير (DTI) C : الطيف H 1 من الماوس يظهر TA يتم الحصول على التفريق بين intramyocellular (IMCL) والدهون extramyocellular قمم (EMCL) باستخدام هذا الأسلوب D ؛ عدة الأصداء الدهون يمكن كشفها : إن الطيف MR ف 31 من الفئران تبين فسفوكرياتين TA (PCR) ، والفوسفات غير العضوية (بي) ، والثلاثة. الأصداء (α ، β ، γ) من الأدينوزين ثلاثي الفوسفات 5' - (ATP).
وقد تم تعريف "الضرر العضلات" ، وتقاس بطرق عديدة. أضرار هيكلية واضحة في نتائج النسيجية 6،9 ، ولكن مشكلة واحدة مع العديد من العلامات البيولوجية المستخدمة لتقييم اصابة في العضلات ، بما في ذلك تلك المستخدمة في الدراسات الحيوانية ، هو أنها عادة لا تتطابق مع فقدان القوة. غالبا ما تعرف تلف العضلات ضمن سياق الفحص المستخدمة للنظر فيها والعثور على واحدة لا يمكن الاعتبار للتغيرات في انقباض بعد الاصابة. منذ الدالة مقلص كامل يمكن أن تستمر على الرغم من وجود علامات الإصابة ، قد يكون فقدان قوة التدبير الأكثر صالحة للإصابة 3 ، وربما أكثرها صلة بالموضوع.
من الصعب دراسة إصابات العضلات في البشر ، كما هو وقوع الحدث العشوائية التي يصعب التنبؤ بها والسريرية تختلف بشكل كبير. ولذلك تم الكثير من البيانات المتعلقة إصابات العضلات التأكد من الدراسات على الحيوانات ، الذي ينص على السيطرة على العديد من المتغيرات والقدرة على دراسة آليات الإصابة والتعافي. لإصابة في الجهاز فيفو وصفناها يوفر طريقة لتقييم وظيفة مقلص دون تشريح العضلات ، وبالتالي من دون الحاجة إلى الموت ببطء الحيوان قيد الدراسة. ويستند نموذجنا اصابة مصمم خصيصا (البراءات لم يبت فيها) على نفس المبادئ التي تستخدمها الأخرى لوضع الانكماش الناجم عن إصابة في الحيوانات 5،12،15،24. على الرغم من توافر النماذج في السوق ، وهناك تعليمات وراء القليل من استخدام الجهاز. نموذجنا والمواصفات من حيث تتوفر مجموعة من الحركة والسرعة الزاوية التي هي مفيدة 17 ، ولكن هدفنا الرئيسي هو المشاركة في الأساليب ؛ حاولنا أن تصف الإجراءات من البداية إلى النهاية لإنتاج بسبب الاصابة. فوائد في نموذج الجسم الحي والتي لم يتم تعديلها في العضلات ، والتشريح والميكانيكا الحيوية وأن الإجراء ليس المحطة. نحن نستخدم نفس الموقع في الساق لجميع القياسات عزم الدوران ، وفقا للإجراءات الصحية وباستخدام إبرة معقمة لكل قياس. يمكن أن تستقر المحطة دون استخدام دبوس transosseus ، ولكن علينا العثور على دبوس لتكون متفوقة من حيث الاعتمادية والقضاء على حركة غريبة أثناء الانقباضات إطالة.
جهاز يستخدم لقياس عزم الدوران في الجسم الحي ومزايا إضافية عديدة. فإنه لا ينطوي على أي تشريح ، لذلك ليس هناك حاجة إلى الموت ببطء الحيوان قيد الدراسة. والنتيجة هي أن المرء لا يستطيع قياس انقباض في نفس الحيوان على مر الزمن ، و / أو في الجسم الحي مثل التصوير بالرنين المغناطيسي. المزايا الأخرى هي أنه لا تغيير التشريح الطبيعي ، وليس تجاوز العصبية لتحفيز (مثل التحضيرات في المختبر) ، وتبقى العضلات في بيئتها الطبيعية ، لذلك يمكن دراسة الآثار المترتبة على الالتهاب ، والهرمونات ، أو غيرها من العوامل. لأنه يتطلب استخدام عدد أقل من الحيوانات التي تتعرض للعضلات أقل التلاعب (على سبيل المثال ، تشريح قبل فحص وظيفة) ، ونحن نفضل أن استخدام القياسات عزم الدوران كلما أمكن ذلك. ومن المعروف الذراع حظة TA الماوس (4) ويمكن أن يكون وزن العضلات عند التضحية الحيوانية. هناك بعض القيود ولكن ، بالمقارنة مع عزل العضلات. على سبيل المثال ، فإنه من الصعب أن تعرف بالضبط طول التغييرات التي تحدث أثناء الانقباضات تطويل ، ولا يمكن أن تقاس كتلة العضلات حتى يتم حصاده (على الرغم من أنه يمكن تقدير حجم يقاس استنادا عبر التصوير بالرنين المغناطيسي) 8.
لتحديد "القوة الخاصة" (القوة لكل وحدة من المساحة المقطعية) من العضلات الفردية ، أن العضلات تحتاج إلى أن تكون معزولة وضعه بشكل صحيح ، وهذا أيضا يتجنب انتقال قوة العضلات القريبة من 10. تم تصميم الموقع في الجهاز لهذا الغرض. أنها توفر بديلا لقياس انقباض العضلات واحدة فقط بطول المعروفة والشامل. ولكن هذا الأسلوب لديه أيضا القيود. على الرغم من أن الوضع الطبيعي في الجهاز يوفر المزيد من السيطرة التجريبية عند قياس قوة العضلات وجود الفرد ، والمفاضلة هي أن التجربة يصبح أقل الفسيولوجية. قياسات القوة في الوضع الطبيعي تتطلب الإفراج الجراحي للعضلة TA ، الذي يمكن ان يغير ويؤثر على التشريح قوة الإرسال. التجربة هي أيضا محطة ، بحيث لا يمكن رصدها في العضلات مع مرور الوقت.
نشر الموترة التصوير (DTI) هو علامة محتملة حتى أكثر حساسية والعضلات في وقت سابق عن الضرر من التصوير بالرنين المغناطيسي T2 المرجحة القياسية. المتغيرات التي تم الحصول عليها مع DTI ، على الأقل في الأنسجة الأخرى مثل الدماغ (1) ، وتظهر استجابة قوية وسريعة للضرر ، في حين أن إشارة T2 يمكن أن يستغرق فترة طويلة للتغيير. ويستند قياس زارة التجارة والصناعة على نشر ما يبدو من الماء في الأنسجة. وقد تمت مقارنة هذه التقنية زارة التجارة والصناعة إلى الباب الطولية الفعليةوقد تبين من ليالي TA الفئران وزارة التجارة والصناعة أن الاتجاهات تمثل الواقع المحلي اتجاهات الألياف العضلية في العضلات الفئران TA 19.
MRS يوفر معلومات عن التركيب الكيميائي للعضلة غير جراحية 12. اعتمادا على نواة لاحظت ، MRS يسمح بملاحظة ذات الطاقة العالية الفوسفات (31 ف MRS) أو الدهون (1 H MRS) (31). MRS P هو أداة مثالية للتحقيق في عملية التمثيل الغذائي في العضلات لأنها غير الغازية ، ويمكن بسهولة تطبق على الدراسات المجراة في العضلات والهيكل العظمي. ويمكن للنهج بديل للمقايسة البيوكيميائية من الأيضات في العضلات الموقع ، مثل إبرة الخزعة ، وإعطاء تخفيضات كبيرة من يغالي بي والظاهر PCR 1. نموذج حيواني يوفر فائدة واضحة لاستخدام اصابة رقابة ومقارنة التغيرات في الجسم الحي MRS إلى النتائج في الكيمياء الحيوية ، علم التشكل ، ووظيفة الأنسجة. واجهت تغييرات في عمليات التمثيل الغذائي الفوسفات عالي الطاقة في الأمراض التي تؤدي إلى تدهور العضلات 2،20. درجة الحموضة داخل الخلايا ، فضلا عن كثافة إشارة نسب السيد بي / PCR (الفوسفات غير العضوية [بي] لفسفوكرياتين [PCR]) ، وPDE / PCR (phosphodiester [PDE] لPCR) ، قد توفر معلومات قيمة حول المسرح وشدة تنكس العضلات.
فإن الكتاب أود أن أشكر الدكتور روبرت بلوخ عن تبرعه السخي من مساحة المختبرات والمرافق والدكتور راو وGullapalli شى دا في التصوير الأساسية للبالحركة في مريلاند (C - TRIM) ، ومركز بحوث بالرنين المغناطيسي (MRRC) للحصول على الدعم الفني. وأيد هذا العمل عن طريق منح لRML من المعاهد الوطنية للصحة (وK01AR053235 1R01AR059179) و من رابطة الضمور العضلي (# 4278) ، ومنحة من مؤسسة JAR جاين.
(جميع المعدات هي نفسها بالنسبة للفئران والجرذان باستثناء الصفيحة القدمية)
Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article
Request PermissionThis article has been published
Video Coming Soon
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved