Donör akciğerlerinin kalitesini iyileştirmek, akciğer naklinin başarı oranını artırmanın anahtarıdır. Ex vivo akciğer bolluğunun etkisini incelemek ve donör akciğerlerinin kalitesini artırmak için basit ve tekrarlanabilir bir hayvan modeli oluşturmayı umuyoruz. EVLP'nin donör akciğerlerinin kalitesini artırmak için etkili bir teknik ölçü olduğu kanıtlanmıştır, ancak EVLP'de hala çalışılması ve açıklığa kavuşturulması gereken birçok sorun vardır.
Perfüzyon koşullarının hala araştırılması gerekmektedir ve EVLP'nin iskemi-reperfüzyon hasarını hafifletme yeteneğinin daha fazla doğrulanması gerekmektedir. Diğer teknik ve modellerle karşılaştırıldığında. sıçan EVLP platformumuz en basit, çalıştırılabilir, tekrarlanabilir, ucuz ve çok daha uygun maliyetlidir, bu da EVLP ile ilgili araştırmalar için verimli bir araştırma platformu sağlar.
Ex vivo akciğer füzyonu teknolojisinin, Çin'deki DCD'ye benzer şekilde marjinal donör akciğerleri üzerindeki terapötik etkisine dikkat edilmelidir. Aynı zamanda, bu teknoloji gelecekteki araştırmalar için bir platform sağlayabilir. Başlamak için, anestezi uygulanmış sıçan sırtüstü bir ameliyat masasına yerleştirin ve dikişlerle sabitleyin.
Kemirgen cerrahi makası kullanarak, trakeanın önünde boynun orta hattı boyunca iki ila üç santimetre uzunlamasına bir kesi yapın. Cildi kesin ve trakeayı tamamen ortaya çıkarmak için trakeanın önündeki kas dokusunu inceleyin. Daha sonra, bir şırınga kullanarak, kilogram başına 1.000 birim heparini kuyruk damarına enjekte edin ve kanın yeterli heparinizasyonunu sağlamak için beş dakika bekleyin.
Trakeanın arkasındaki boşluğu boşaltın. Soluk borusundan 3-0'lık bir dikiş geçirin ve daha sonra kullanmak üzere gevşek bir düğüm atın. Soluk borusundaki düğümün 0,5 santimetre üzerinde V şeklinde bir kesi yapın.
Trakeaya 14 gauge trakeal tüp yerleştirin. Tüpü sabitlemek için dikiş düğümünü sıkın. Trakeal tüpü ventilatöre bağlayın.
Akciğerlerin ventilasyonuna başlamak için ventilatörü açın. Her beş dakikada bir farenin yaşamsal belirtilerini izleyin ve ventilasyonu durdurun. Aşağıdaki parametreleri kullanarak kardiyak arresti takiben sıçan ölümünü doğruladıktan sonra, mekanik ventilasyonu basınç kontrollü modda yeniden başlatın ve beş dakika boyunca havalandırın.
Trakeayı klempleyin ve donör akciğeri bir saatlik ılık iskemik süre boyunca oda sıcaklığında dinlendirin. Daha sonra, akciğeri çıkarmak için ameliyat masasını 45 derece baş yüksekliğinde ve ayaklar düşük eğimli konuma ayarlayın. Bir saç tıraş makinesi kullanarak, farenin göğsünün ve karnının ortasındaki kılları alın.
Cerrahi bölgeyi üç kez iyotla dezenfekte edin ve cerrahi bir havlu ile örtün. Kemirgen cerrahi makası ile karın orta hattı boyunca altı ila yedi santimetre uzunlamasına bir kesi yapın. Cildi kesin, karın duvarını karın boşluğuna açın ve organları açığa çıkarın.
Bir şırınga kullanarak, inferior vena kavaya kilogram başına 1.000 ünite heparin enjekte edin ve kanın yeterli heparinizasyonunu sağlamak için beş dakika bekleyin. Ardından, farenin inferior vena kavasını kesmek için makas kullanın ve akciğerlerin mekanik ventilasyonunu başlatın. Ventilasyondan sonra, ksifoid sürecini kaldırmak için forseps kullanın ve sternum boyunca aşağıdan yukarıya doğru uzunlamasına bir kesi yapın.
Göğüs boşluğunu ortaya çıkarmak için bir kaburga yayıcı kullanın, ardından kalbi ve altındaki ana kan damarlarını ortaya çıkarmak için timus dokusunu çıkarın. Sıçanın aortunu ve pulmoner arterin arkasındaki boşluğu serbest bırakın. Pulmoner arterden 3-0'lık bir dikiş geçirin ve daha sonra kullanmak üzere gevşek bir düğüm atın.
Sağ ventrikül çıkış yolunun ön yüzeyinde iki ila üç milimetre V şeklinde bir kesi yapın. Kesi yoluyla pulmoner artere bir pulmoner arter kanülü yerleştirin ve kanülü sabitlemek için önceden hazırlanmış dikişi sıkın. Sıçan kalp ucunu kesin ve sol ventriküle hemostatik forseps yerleştirin.
Sol atriyal çıkış yolunun temiz olduğundan emin olmak için sol ventrikül ve atriyum arasındaki valfleri bozun. Daha sonra, pulmoner arter kanülünü perfüzyon devresine bağlayın ve kalan kanı dakikada 0,6 ila bir mililitre akış hızında yıkamak için 15 mililitre düşük potasyum çözeltisi kullanın. Kalbin arkasına bir dikiş yerleştirin ve ventrikülü çevreleyin.
Kanülü sol ventriküldeki kesiden yerleştirin ve kanülü sabitlemek için güzel dikişi sıkın. Şimdi, trakeal tüpün üzerindeki trakeayı kesin. Trakeayı kaldırın ve trakeanın arkasındaki bağ dokusunu diyaframa doğru ayırmak için makas kullanın.
Ardından, inferior vena kava'yı ve diyaframın üzerindeki ana pulmoner arteri kesin. Kalbi ve akciğerleri ayırın. Akciğerleri şişirilmiş tutmak için, inhalasyonun sonunda trakeanın alt üçte birini hemen kelepçeleyin.
Kalbi ve akciğerleri toplayın ve koruma için düşük potasyumlu bir çözeltiye koyun. Kalbi ve akciğerleri ex vivo akciğer perfüzyonu veya EVLP devresinin belirlenen konumuna yerleştirin ve sol ventrikül kanülünü perfüzyon devresine bağlayın. EVLP kurulumunu monte ettikten sonra, kabarcıkların akciğerlere girmesini önlemek için kabarcık kapanını yeterli miktarda akciğer perfüzyon onarım solüsyonu ile doldurun.
Kardiyopulmoner üniteyi organ odasına yerleştirin ve EVLP cihazına bağlayın. Ardından ventilatörü ve peristaltik pompayı açın. Akciğer perfüzyonunu hedef akış hızının %20'sinde başlatın.
Hedef akış hızını hesapladıktan sonra, akış hızını bir saat içinde kademeli olarak hedef akış hızına yükseltin. Akciğer sıcaklığını 40 santigrat derece olarak korumak için ısı eşanjörünü 37.5 santigrat dereceye ayarlayın. 20 dakikalık perfüzyondan sonra endotrakeal klempi çıkarın ve aşağıdaki parametreleri kullanarak mekanik ventilasyonu başlatın.
Ardından, hipoksik gaz akışını başlatın. Perfüzyon çözeltisini korumak için, ventilasyon sırasında aynı anda 35 ila 45 milimetre arasında pulmoner artere giren kısmi karbondioksit basıncı. Perfüzyon sırasında, perfüzyon çözeltisi akış hızını, arteriyovenöz basıncı, hava yolu tepe basıncını ve akciğer fonksiyon parametrelerini sürekli izleyin.
DCD donör akciğerlerindeki pulmoner greft oksijenasyon seviyeleri ve vasküler direnç, dört saatlik perfüzyon süresi boyunca önemli bir fark olmaksızın sabit kaldı. DCD donör akciğerlerinin dinamik uyumu, dört saatlik perfüzyon süresi boyunca kademeli olarak azaldı. DCD donör akciğerlerinin perfüzatındaki glikoz seviyeleri, dört saatlik perfüzyon boyunca istikrarlı bir şekilde azaldı.
Sodyum ve potasyum da dahil olmak üzere elektrolit seviyeleri, dört saatlik perfüzyon sırasında gruplar arasında tutarlı kalmıştır. DCD donör grubunda diğer gruplara kıyasla önemli ölçüde daha fazla sayıda apoptotik hücre tespit edildi ve soğuk muhafaza grubu EVLP grubuna göre daha fazla pozitif hücre gösterdi. Akciğer hasarı skoru EVLP grubunda soğuk statik koruma ve kontrol gruplarına göre anlamlı olarak daha düşüktü.
Dört saatlik soğuk statik koruma grubunda alveol duvar kalınlaşması ve alveoler kanama belirginken, EVLP grubunda normal alveol yapısı korundu.
