Mekanik ve kimyasal kornea yaralanmalarını incelemek için Ex vivo ve in vivo hayvan modelleri oluşturuldu. Bu teknik, araştırmacıların korneanın mekanik ve kimyasal yaralanmalarını incelemeleri için kolayca oluşturulmuş bir platform sağlar. Bir murin kornea epitel yarası oluşturmak için, anestezi uygulanan farenin merkezi korneasını yaranın iyi sınırlandırılmış ve iyi ölçülebilir bir alanını doğrulamak için bir cilt biyopsi yumruğu kullanarak işaretleyin.
Dairesel bir iz bırakmak için yumruğu merkezi korneanın üzerine hafifçe girintileyin ve kornea epitelini, Bowman'ın tabakasına zarar vermemek için 0,5 milimetrelik bir çapak ile elde tutulan bir kornea pas halkası sökücü kullanarak Bowman'ın tabakasına kadar indirin. Yara kenarındaki artık gevşek dokuları kornea forsepsleri ile çıkarın. Floresan boyama ile debridman alanını, floreseini çözmek için bir floresein kağıdına bir damla normal salin koyarak ve daha sonra floresan içeren damlayı kobalt mavisi ışık altında görselleştirmek için murin epitel defektine yerleştirerek onaylayın.
Göz küresini dışarı itmek için ötenazi yapılmış farelerin üstün ve inferior orbital kenarlarına hafifçe bastırarak murin kornea aşınma yara modelinin ex vivo kültürü ile devam edin. Kapalı kornea makaslarının ucunu, göz küresine nüfuz etmemesini sağlamak için inferior orbital duvar boyunca retrobulber boşluğa sokun. Göz küresini 0.3 milimetrelik kornea forsepsleri ile sabit tutun ve ardından göz küresini izole etmek için optik siniri ve periorbital yumuşak dokuyu kornea makası ile kesin.
Murin göz kürelerinin ex vivo kültürlenmesi için, kuyunun içinde erimiş balmumu ile 48 delikli bir plaka hazırlayın ve katılaşmayı bekleyin, daha sonra konjonktiva forsepslerinin ucuyla, göz kürelerini yerleştirmek için katılaşmış balmumu yüzeyinde yuvarlak bir delik oluşturun. Stabilizasyon sağlamak için hasat edilen göz kürelerini doğrudan balmumu kaplı tabanları ve yan duvarları olan 48 delikli plakaya yerleştirin. Çalışmanın amacına bağlı olarak %1 fetal sığır serumu içeren DMEM ile göz kürelerinin antibiyotikli veya antibiyotiksiz olarak kültürlenmesi.
Göz küresinin yüzmesine neden olmadan oküler yüzeyi kültür ortamına daldırın ve floresein boyama ve kobalt mavisi ışık altında bir dijital kamera ile fotoğraf toplama yoluyla yara iyileşmesinin seyrini belgeleyin. Alkali yanık yaralanmasına neden olmak için, bir Petri kabına 8 milimetre çapında dairesel bir filtre kağıdı yerleştirin. Bir damlalık kullanarak, filtre kağıtlarını ıslatmak için Petri kabına 0.5 normal sodyum hidroksit ekleyin ve fazla çözeltiyi anestezi uygulanmış tavşan korneasına yerleştirmeden önce filtre kağıdından boşaltın.
Göz kapaklarını bir kapak spekulumu ile açtıktan sonra, tavşan niktitasyon zarının filtre kağıdının yerleştirilmesine müdahale etmediğinden emin olun ve alkali ıslatılmış filtre kağıdını 30 saniye boyunca merkezi korneaya yerleştirin. Filtre kağıdını çıkarın ve alkali malzemeyi yıkamak için oküler yüzeyi 10 mililitre normal salin ile durulayın. Kornea defektini tamamlamak için, opasifize edilmiş bölgedeki kornea epiteli, kornea pas halkası sökücü kullanarak Bowman'ın zarına kadar debride edin.
Debridman bölgesini kobalt mavisi ışığı altında floresein boyaması ile onaylayın ve kornea forsepsleri kullanarak artık kornea epitelini çıkarın. Tarsorrafi ile yara durumunu güvence altına almak için, niktitasyon zarının oküler yüzeyi ve burun tarafındaki kornea epitel defektini düzgün bir şekilde kapladığını doğrulayın. Oküler yüzeyi korumak ve tavşanın çizilmesini önlemek için 6-0 sütür kullanarak topikal ajanlarla veya topikal ajanlar olmadan geçici bir tarsorrafi uygulayın, tarsorrafi sütürünün tavşanın dikişleri kırmasını önlemek için dört ila beş bağ ve daha uzun düğümlerle üst ve alt kapak kenar boşluklarından 3 ila 4 milimetre olduğundan emin olun.
Fare kornea epitelinin ex vivo yara iyileşme modelinde, fare kornea epitelinin in vivo debridmanından iki milimetre sonra santralde pozitif floresein boyalı hafif depresif merkezi kornea alanı gözlenmiştir. Balmumu kaplı 48 delikli bir kültür plakasına sabitlenmiş murin göz kürelerinin ex vivo kültürü, stereo mikroskop altında 48 delikli bir kültür plakası içinde günlük olarak incelendi ve belgelendi. Murin kornea epitelinin parçalanmasından bir gün sonra, kobalt mavisi ışık altında elde edilen dijital fotoğraflarda 2 milimetre çapında bir dairesel floresein boyalı epitel defekti ortaya çıkarıldı.
Tavşan kornea epitelinde alkali bir yaralanma oluştuktan sonra, merkezi kornea üzerinde kobalt mavisi ışıklı veya kobalt mavisi ışık olmadan net ve tam dairesel bir kenar boşluğu ile pozitif floresein boyaması gözlendi. Limbustan pannus büyümesi ile kornea epitelyal yarasının yeniden epitelizasyonu gözlendi. En önemli adımlar, fare ve tavşan kornea yüzeylerinde pürüzsüz ve hatta epitel kusurları oluşturmak için prosedürlerdir.
Yeni tıbbi ve cerrahi terapötikler bu platformlarda test edilebilir. İşlemlerden sonra yeniden epitelizasyonun etkisi izlenebilir. Bu protokolde kornea neovaskülarizasyonu ve yaralanma sonrası opaklık, daha fazla araştırma için karşılanmamış bir ihtiyaç olacaktır.
