Yazarlar devre montaj, tadilat ve perfüzyon devresi ve XVIVO Perfüzyon (Daniel Martinelli, ÇKP, CTP) için sorun giderme yardımları için Harvard Aparatı, özellikle Stephanie Pazniokas, MS (Fizyoloji Sistemleri ve Rejeneratif Tıp) yardım kabul etmek istiyorum Klinik olmayan kullanım pulmoner plegia sağlar.

NOT: Tüm işlemler İnsani Laboratuvar Hayvanları Bakım ve Kullanım (IACUC) için Kurumsal Hayvan Bakım ve Ulusal Araştırma Konseyi&#39;nin Kılavuzu kılavuz hatlarına göre yapıldı ve Ohio State Üniversitesi IACUC komitesi tarafından onayı uğramıştır. 1. İlk Kurulum <ol><li> EVLP devresini kurmak ve sıcak (37 ° C) perfüzat önce eski ekilen akciğeri içeren sisteme dolaşan (Şekil 1). </li><li> Sıcak su 37 ° C ceket perfüzat rezervuar, ısı değiştirici, ve yapay göğüs kullanılan banyo, ve dolaşımdaki (Şekil 1) ayarlayın. </li><li> Bir de-oksijenasyon çözüm çalıştırın (örneğin,% 6 O 2,% 8 CO 2,% 84 N 2) Şu anda gaz filtresi perfüzata ile perfüzyon deney için ~% 6 çözünmüş oksijen vardır sağlamak için sayaç. NOT: Bu de-oksijenli perfüzyon değerlendirmesi o sağlarPerfüzat, post-organa içine oksijen ölçerek akciğer fonksiyonu f. </li><li> (EVLP devre ve veri toplama / analog-dijital dönüştürücü kutusuna, trakea diferansiyel basınç sensörü, solunum akış diferansiyel basınç sensörü, akciğer ağırlığı dönüştürücüyü ve pompa hızı transdüseri veri toplama programı açın ve pulmoner arter basınç sensörü bağlamak Şekil 2). </li><li> EVLP devresi (Şekil 3) ile çalışma masası ve çalışma araçları ayarlayın. </li><li> Numuneler elde edilecek EVLP devresi yakın sıvı azot küçük bir kapta ayarlayın. NOT: Yazarın sistem potansiyel akciğer zarar verebilir basınç-akım dinamikleri kesmeden öncesi organ ve sonrası organ perfüzat toplamak için modifiye edilmiştir. </li></ol> Anesteziklerin ve Heparin, Sıçan anestezisi 2. Hazırlık <ol><li> Aşağıdaki kişisel koruyucu ekipman giyinCerrahi maske, cerrahi eldiven, ve tek elbisesi: sıçan ve fare doku dokunmadan önce (KKE). </li><li> Sıçan tartın ve ağırlığı kaydedin. </li><li> 1.200 U / kg heparin hazırlayın. </li><li> İlk ketamin hazırlanması, aynı şırınga içinde, 60 mg / kg ketamin ve 5 mg / kg iksilazin hem hazırlayın. </li><li> Intraperitoneal sıçan içine ketamin ve Xylazine karışımı enjekte ve sıçan için 5 dk bilinçsiz olmak için izin. </li><li> Ayak tutam refleksi kontrol ederek doğru anesthetization onaylayın. Sıçan onun ayak çekilmek değil, bu acı hissetmiyor. </li><li> , Ameliyat masasına sıçan taşı sırtüstü pozisyonda sabitleyin ve sterilizasyon için alkol ile sprey. </li></ol> 3. Ekstraksiyon ve Sıçan Akciğerler Başlangıç ​​Havalandırma <ol><li> 4-20 cm uzunluğunda ipek sütür (yeterli olacaktır 3-0 veya 4-0) hazırlayın. </li><li> Veri toplama programını kullanarak verileri kaydetme başlayın. </li><li> Cerrahi makas periton ca girmek kullanarak, anestezi uygun derinliği kontrol edinBir orta hat laparotomi ile vite ve alt vena cava içine heparin enjekte. </li><li> Trakea maruz kadar boyun manubrium geçmiş cranially kesi taşıyın. Göğüs boşluğu (Şekil 4A) kopma yok. </li><li> Orta hatta trakea posterior incelemek ve trakea (Şekil 4B) bir ipek sütür posterior kaydırın. </li><li> Trakea ön bölümünü kaldırın ve trakea yüksek kıkırdak halkaları arasında bir enine bir kesi yapmak. Bu noktada (Şekil 4C) de trakea arka membranöz kısmı aracılığıyla kesmeyin. </li><li> Ipek sütür (Şekil 4D) ile trakea kanül ve güvenli ile trakea cannulate. Sütür kanül göç azaltmak için çentik sabitlenmiş olduğundan emin olun. </li><li> Havalandırma devresine trakea kanül bağlayın. </li><li> Lu havalandırma mekanik başlatmak için mekanik ventilatöre açınNGS. NOT: Başlangıç ​​ayarları O. cmH 2 2 4 ml / kg ve pozitif ekspiryum sonu basınç (PEEP) bir tidal hacim olarak seçildi Bu ayarlar, başlangıç ​​ayarları olan ve organ ex-vivo perfüzyon sisteminde bir kez deney koşullarına bağlı olarak ayarlanabilir. </li><li> Sternum / xiphoid ile göğüs boşluğu girin ve suprasternal çentik doğru cranially devam ediyor. Akciğerler dokunmamak için özen gösterin. NOT: sıçan akciğer kırılgan olduğu için, herhangi bir yanlışlıkla manipülasyon travma ve pulmoner ödem (Şekil 5A) yol açabilir. </li><li> 2 Ekartörleri kullanarak, düzgün anatomi (Şekil 5A) ortaya çıkarmak için göğüs boşluğu geri çekin. Bir kez daha, akciğerler dokunmamak için özen gösterin. </li><li> Hafif yükseklik ve künt diseksiyon ile timus çıkarın. </li><li> Inferior vena kava (IVC) veya mezenterik ven (MV) ya duyurmak için bir tarafa karın içeriğini Shift. </li><li> IV, ya İnsizyonC veya OG ötenazi sağlayan, sıçan asıl bulbus olfaktoryusları için. </li><li> Pulmoner arter kanülü (Şekil 5B) sabitlemek için hazırlık pulmoner arter ve aorta bir ipek sütür posterior yerleştirin. </li><li> Sağ ventrikül çıkış yolu ön yüzeyinde 2-3 mm kesi yapmak ve insizyon ve ana pulmoner artere kanül yerleştirin ve ipek sütür (Şekil 5C) ile sabitleyin. </li><li> (Sol ventrikül erişime izin vermek için, kalbin apeks transect ve pulmoner arter yoluyla dışarı göğüs boşluğuna kalbin apeks ile ~ akan düşük K + elektrolit solüsyonu 15 ml pulmoner vasküler içinde herhangi pıhtıları temizlemek Şekil 5D). </li><li> EVLP devresine pulmoner arter (PA) kanül bağlayın. PA kanül devre gelen akış çizgisi kalp ve akciğerleri giren herhangi bir hava önlemek için Perfüzat ile astarlanmalıdır olduğundan emin olun. </li><li> AçmakAna peristaltik pompa ve Perfüzat pulmoner arter yoluyla ve göğüs boşluğuna sol ventrikül dışarı çalışmasına izin vermek için hız (2 ml / dak ~) düşük olarak ayarlayın. ** KRİTİK ADIM ** olarak başak değil PA basıncı olun Bu bir tıkanma veya kötü kanülasyon (Şekil 6) ya bir işaretidir. </li><li> Peristaltik pompa kapatın. </li><li> Ventriküllerin (Şekil 7) etrafında, kalp arkasında bir ipek sütür yerleştirin. </li><li> Mitral kapaktan, apeks içine cerrahi forseps küçük bir çift takarak sol atrium cannulating sürecini başlayın, ve sol atrium içine. NOT: Bu Mitral kapak dilate ve kanül kolaylaştıracaktır. Agresif dilatasyon, ya da çok derin dilatasyon, yanlışlıkla etkisiz hale tedarik sol atrium yırtar. </li><li> Kalp forseps çıkarın. </li><li> Mitral kapaktan ve sol içine apeks içine sol atrium kanül takınrium. </li><li> Kalp arkasında ipek sütür (Şekil 8) ile sol atrium kanül sabitleyin. NOT: Bu dikiş kanül kolaylaştırmak için &quot;ön-bağlı&quot; olabilir. </li><li> Ex-vivo akciğer perfüzyon devresi (Şekil 9A), pulmoner arter kanülü takın. Kalp-akciğer bloğu tamamen vücuttan çıkarıldığını kadar EVLP devresine sol atrium kanül bağlamayın. </li><li> Bir hemostatla yemek borusu Kelepçe ve yemek borusu kardiyopulmoner yapılar sefalad yükseltmek için kullanılabilir böylece (kelepçe ve diyafram arasında) kelepçe altında kesti. </li><li> Açık açık çevredeki dokuyu incelemek ve yemek borusu (Şekil 9B) aracılığıyla gündeme ediliyor gibi kalp-akciğer bloğu serbest inen aorta ve yardımcı gemileri kesti. </li><li> Trakeal kanül tamamen ücretsiz kalp-akciğer bloğu sefalada trakea transect. </li><li> Kalp-akciğer bloğu kaldırmak ve desi yerleştirdiğinizEVLP devresi (Şekil 9C) üzerine gnated konum. </li><li> Çıkış hattına sol atrium kanül bağlayın ve ana peristaltik pompa (Şekil 9D) başlatın. </li></ol> Akciğerler 4. Ex Vivo Perfüzyon <ol><li> Hızla EVLP cihazının üst havalandırma hattı çıkarın ve basınç sensörleri ile konut takmak, ardından EVLP cihazının üstünde gövdenin üst havalandırma hattı takın. NOT: Bu havalandırma veriler kaydedildi ve basınç izlenecek sağlayacaktır. </li><li> Hava kabarcıkları (yani, hava embolisi) akciğerlere tanıtıldı böylece kabarcık tuzak Perfüzat yeterli miktarda dolu olduğundan emin olun. </li><li> Yavaşça başlangıç ​​15 dakika boyunca istenilen deneysel seviyelere ventilasyon perfüzyon ayarlarını değiştirin. Buna ek olarak, bu ilk rampa aşamasında, istenen hızda ve / veya basınç perfüzyon akış hızını artırır. NOT: ProgrammAkciğer alanı dışında sıvı hareketini kolaylaştıran aralıklı nefes nefes, üretmek ve bu nedenle ödem başlangıcını geciktirmek için vantilatör ing, tavsiye edilir. Bu iç çekme fonksiyonu ile donatılmış vantilatörle üretilebilir. </li><li> Ventilasyon parametreleri 2 cm H 2 O 4 ml / kg, PEEP bir gelgit hacminde zaman zaman olduğu gibi &quot;Zaman 0&quot; Define ve perfüzyon parametreleri beklenen düzeyde ve sürekli kalan. </li><li> Gerekirse, sıvı azot örnek port, flaş dondurucudan perfüzyon numune almak ve numunelerin zamanını not. </li><li> Deney tamamlandığında, ileri çalışmalar için çözüm sabitleme sıvı azot veya yerinde toplama ve ya flaş dondurma için gerekli anatomik parçaları izole. </li></ol>

<ol>
	<li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> United States Organ Transplantation, Organ Procurement and Transplantation Network &amp; Scientific Registry for Transplant Recipients Annual Report 2011. , (2011).</li><li>Maathuis, M. H., Leuvenink, H. G., Ploeg, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perspectives+in+organ+preservation.">Perspectives in organ preservation.</a> Transplantation. 83, 1289-1298 (2007).</li><li>Cardoso, P. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+perspectives+in+lung+transplantation:+from+conventional+preservation+to+ex+vivo+lung+perfusion+and+lung+reconditioning.">New perspectives in lung transplantation: from conventional preservation to ex vivo lung perfusion and lung reconditioning.</a> Jornal brasileiro de pneumologia : publicacao oficial da Sociedade Brasileira de Pneumologia e Tisilogia. 35, 1057-1059 (2009).</li><li>DeCampos, K. N., Keshavjee, S., Liu, M., Slutsky, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimal+inflation+volume+for+hypothermic+preservation+of+rat+lungs.">Optimal inflation volume for hypothermic preservation of rat lungs.</a> The Journal of heart and lung transplantation : the official publication of the International Society for Heart Transplantation. 17, 599-607 (1998).</li><li>Perrot, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Report+of+the+ISHLT+Working+Group+on+Primary+Lung+Graft+Dysfunction+part+III:+donor-related+risk+factors+and+markers.">Report of the ISHLT Working Group on Primary Lung Graft Dysfunction part III: donor-related risk factors and markers.</a> The Journal of heart and lung transplantation : the official publication of the International Society for Heart Transplantation. 24, 1460-1467 (2005).</li><li>Mulloy, D. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ex+vivo+rehabilitation+of+non-heart-beating+donor+lungs+in+preclinical+porcine+model:+delayed+perfusion+results+in+superior+lung+function.">Ex vivo rehabilitation of non-heart-beating donor lungs in preclinical porcine model: delayed perfusion results in superior lung function.</a> The Journal of thoracic and cardiovascular surgery. 144, 1208-1215 (2012).</li><li>Noda, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Successful+prolonged+ex+vivo+lung+perfusion+for+graft+preservation+in+rats.">Successful prolonged ex vivo lung perfusion for graft preservation in rats.</a> European journal of cardio-thoracic surgery : official journal of the European Association for Cardio-thoracic Surgery. 45, e54-e60 (2014).</li><li>Perrot, M., Liu, M., Waddell, T. K., Keshavjee, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ischemia-reperfusion-induced+lung+injury.">Ischemia-reperfusion-induced lung injury.</a> American journal of respiratory and critical care medicine. 167, 490-511 (2003).</li><li>Steen, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+of+lungs+from+a+non-heart-beating+donor.">Transplantation of lungs from a non-heart-beating donor.</a> The Lancet. 357, 825-829 (2001).</li><li>Perrot, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Strategies+to+optimize+the+use+of+currently+available+lung+donors.">Strategies to optimize the use of currently available lung donors.</a> The Journal of heart and lung transplantation : the official publication of the International Society for Heart Transplantation. 23, 1127-1134 (2004).</li><li>Cypel, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Technique+for+prolonged+normothermic+ex+vivo+lung+perfusion.">Technique for prolonged normothermic ex vivo lung perfusion.</a> The Journal of heart and lung transplantation : the official publication of the International Society for Heart Transplantation. 27, 1319-1325 (2008).</li><li>Cypel, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Normothermic+ex+vivo+perfusion+prevents+lung+injury+compared+to+extended+cold+preservation+for+transplantation.">Normothermic ex vivo perfusion prevents lung injury compared to extended cold preservation for transplantation.</a> American journal of transplantation : official journal of the American Society of Transplantation and the American Society of Transplant Surgeons. 9, 2262-2269 (2009).</li><li>Cypel, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Normothermic+ex+vivo+lung+perfusion+in+clinical+lung+transplantation.">Normothermic ex vivo lung perfusion in clinical lung transplantation.</a> The New England journal of medicine. 364, 1431-1440 (2011).</li><li>Cypel, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Normothermic+Human+Ex+Vivo+Lung+Perfusion+(EVLP)+for+Improved+Assessment+of+Extended+Criteria+Donor+Lungs+for+Transplantation.">Normothermic Human Ex Vivo Lung Perfusion (EVLP) for Improved Assessment of Extended Criteria Donor Lungs for Transplantation.</a> The Journal of Heart and Lung Transplantation. 28, S126-S126 (2009).</li><li>Sanchez, P. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Normothermic+Ex+Vivo+Lung+Perfusion+as+an+Assessment+of.">Normothermic Ex Vivo Lung Perfusion as an Assessment of.</a> Marginal Donor Lungs - The NOVEL Lung Trial. J Heart Lung Transpl. 32, S16-S17 (2013).</li><li>Pego-Fernandes, P. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+model+of+isolated+lung+perfusion+in+rats:+first+Brazilian+experience+using+the+IL-2+isolated+perfused+rat+or+guinea+pig+lung+system.">Experimental model of isolated lung perfusion in rats: first Brazilian experience using the IL-2 isolated perfused rat or guinea pig lung system.</a> Transplantation proceedings. 42, 444-447 (2010).</li><li>Pego-Fernandes, P. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+model+of+isolated+lung+perfusion+in+rats:+technique+and+application+in+lung+preservation+studies.">Experimental model of isolated lung perfusion in rats: technique and application in lung preservation studies.</a> Jornal brasileiro de pneumologia : publicacao oficial da Sociedade Brasileira de Pneumologia e Tisilogia. 36, 490-493 (2010).</li><li>Niemeier, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+isolated+perfused+lung.">The isolated perfused lung.</a> Environmental health perspectives. 56, 35-41 (1984).</li><li>Zhou, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+pulmonary+hypertension+model+induced+by+continuous+pulmonary+air+embolization.">A pulmonary hypertension model induced by continuous pulmonary air embolization.</a> The Journal of surgical research. 170, e11-e16 (2011).</li><li>Harris, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differences+in+responses+between+rat+strains+and+colonies.">Differences in responses between rat strains and colonies.</a> Food and cosmetics toxicology. 3, 199-202 (1965).</li></ol>

SİSTEM İZLEME Ne gibi şeyler deneme de çalışırken gibi görünüyorsun: Kanüller devresinde yerleştirilmiş ve akciğerler havalandırma sonra, düzgün çalışan sistem sağlamak için birden fazla yolu vardır. Hattı boyunca perfüzat hiçbir sızıntı olmamalıdır. pulmoner vasküler direnç (PVD) (sabit bir akış varsayılarak) nispeten sabit kalmalıdır. oksijen alışverişi ventilatör düzgün çalışmıyor ve gaz değişimi için daha fazla alveollere işe akciğerlere genişletiyor kez artmalıdır. Şekil 12A düzgün yapay göğüs içinde EVLP devresine bağlı akciğerlere havalandırılmış ve perfüze gösterir. Ne gibi şeyler deneme iyi çalışmadığı zaman gibi görünüyorsun: Bir EVLP deney başlayan aşamalarında oluşma oranının en yüksek vardı birkaç ortak sorunlar vardır. İlk ve en kolay to çare akciğer çıkan doğrultusunda bir sızıntı olduğunu. Bu devre ve sürekli azalan rezervuar seviye kısmının altına perfüzat havuzu bir havuz belirgindir. Kontrol ve dökülme alanı çevresinde herhangi bir boru konnektörleri sıkın ve sızıntı tüp kendisini kontrol edin. Bu sızıntı akciğer önce olursa, o da akciğer içine kabarcıklar tanıtmak olabilir. Perfüzat hava kabarcıkları doku hasarına neden ve PVR önemli bir artışa neden olacak gibi bu mümkün olduğunca çabuk giderilmelidir. Ayrıca akciğer veya kanül birinden gelen bir sızıntı olabilir. Bu, bir kanül ya da kayma ya da bir basınç oluşmasını sağlayacak çıkan hattı tıkanma neden olabilir. Her iki kanüller sağlamak ne kaymış ya da bükülmüş olan için pozisyon kontrol edin. PA basıncında ani artış, bazı tür bir engel son zamanlarda oluştuğunu açık bir işaretidir çünkü PA basıncı da bu süreçte izlenmelidir. Şekil 12Bnedeniyle yüksek basınçlara rüptüre bir yırtılmış akciğer gösterir. Akciğer kendisinden bir sızıntı dokuya gözyaşı neden olabilir. Bu sorun ya reparable ama yeniden konumlandırma olmak ve kanül yeniden sıkarak Bu senaryoda en iyi seçenek değildir olabilir. Anahtar Öğrenme Noktalar / Fırsatlar: Deneme ve ex-vivo akciğer perfüzyon sisteminin hata gelişimi bize EVLP sisteminin etkin uygulanmasını kolaylaştırmak için buraya anahat birkaç temel sorunları tespit etmek izin verdi. İlk olarak, ihale ile ilgili olarak, standart anestezi teknikleri düzgün gerekli tüm IACUC politikalarına hayvanları (periton içine yeterli anestezik enjeksiyon) ve bağlılığı uyutmak için takip edilmesi önemlidir. (Şekil 13 A, B, ve C ile gösterilen) kanül tekrar tekrar akciğer vasculat içinde herhangi bir pıhtı ve / veya kirleri çıkarmak için yıkanmalıdırure. Hayvan seçimi bakımından, 250-350 g ağırlığında Sprague-Dawley veya Lewis sıçanları kullanılarak göstermektedir. Damarsal zarar vermeden cannulate küçük ve bu nedenle çok daha zor olacaktır gemilerin beri yakın 250 g ağırlığında sıçanlar cannulating özel bir dikkat gerekir. Daha küçük fareler, ya da bir fare modeli, kullanım için, daha küçük bir kanül kullanılması gerekebilir. Dikiş ilk çevreleyen fasya ve önceki kanülasyona diseksiyon sonra trakea bir ipek sütür posterior geçirilerek düzgün güvenli olarak trakeal kanülasyon tipik olarak uzun zorlu değildir. Kanül geçmek için dikiş üzerinde bir ön kesi 1-2 trakea halkaları ile bu izleyin. Daha iyi güvenlik (Şekil 4C) için bir oluk içinde güvence altına almak için trakea halkaları arasındaki kare düğümler. Pulmoner arter (PA) kanülasyon trakeal kanül ile karşılaştırıldığında daha zordur. Aşağıdaki adımlar, bu çalışmada kullanılanBu işlem için. Birincisi, forseps bir çift ile kalp apeks kavramak. Transvers sinüste forseps başka bir çift geçmek ve proksimal PA kanül güvenli bir dikiş iplik. Sağ ventrikül çıkış yolu (RVOT) (Şekil 14A) hemen önce sağ ventrikül İnsizyon. Sağ ventrikül çıkış yolu içine kesi sonra, kanül pulmoner arter çıkış yolu doğru yönlendirileceksiniz. Sağ ventrikülotomi önce pulmoner arter / aorta arkasında konumunda dikiş olması (Şekil 5C) verimliliğini arttırır. kanül çıkmasını önlemek için dikiş ile yerine güvence altına alınmalıdır. PA kanül doğru anatomik yönde değilse önemli bir komplikasyon oluşabilir. kanül çok takılı ve tek şube serpmek ya da mal-konumlandırılmış göğüs boşluğundan çıkarıldıktan sonra kalp-akciğer numunenin büküm ile hale olabilir. Bu kolayca Anatomik doğru açı korumak için orijinal konumuna geri yönlendirilebilircal konumu. Son olarak, Sol Atriyal (LA) kanülasyon prosedürünün en zorlu kısmıdır. LA kanül sol atrium içinde yerleştirilmesi gerekiyor. Dokular son derece kırılgan olması ile, daha sonra deney kurtarılamaz yapacak pulmoner ven &amp; sol atrium içinde gözyaşı önlemek için önemli kuvvet veya bükülmesini kullanmak değil dikkatli olun. PA kanül iyi LA kanül önce yerleştirilir. Apeks çıkarılmasıyla bir sol ventrikülotomi cordae tendinae bozabilir ve mitral kapakçığın aracılığı ile daha kolay erişim sağlamak için gösterilmiştir. Ayrıca, ventrikülotomi daha kolay dilate ve mitral kapak görselleştirmek ve mitral kapaktan kanül beslemek için yapar. Küçük künt uçlu pick-up bir çift ile mitral kapak anulus dilatasyon LA (Şekil 14B) içine yolu görselleştirmek için yapılabilir. Dikiş kanülasyon öncesi kalp arkasına yerleştirilmelidir. Bu Smal bir çift kullanarak kalbini kaldırarak basit yapılabilirl pick-up künt uçlu ve altında ve kalp boyunca dikiş yerleştirerek. La hemen kanüle hazırdır. Düzgün sol atrium içine kanül yerleştirme görselleştirmek için pick-up ile LA kanül besleyin. Geri, sol ventrikül içine kanül çıkarmak için değil özel özen gösterin. dikiş sonra sıkıca sol ventrikül miyokardın boyunca güvence altına alınmalıdır. Sol atriyuma dikiş güvenliğini tamamı veya kanül parçası tıkamaktadır olabilir. İşlem sırasında, hiçbir hava düzeneğinin akış kısmında kalması çok önemlidir. Herhangi bir önemli hava bir hava embolisi, belirli bir basınç için çok daha düşük bir perfüzat akışına neden olan PVR (etkili bir &quot;hava kilidi&quot;) artış üretebilir. Çeşitli puan sistemi içindeki havayı çıkarmak için de kullanılabilir. Çıkış bölümü içinde hava, beklenen ve akciğerler üzerinde herhangi bir zararlı etkisi olmaması gerekir. Pulmoner hipertansiyon için bir domuz model olmuştur8 haftalık süre içinde havanın sürekli küçük miktarlarda patolojiyi yeniden gösterilmiştir. çevre dokulara 19 inflamasyona yol açar sırasında artan hava perfüzyon mevcut miktarını azaltır. perfüzyon başlaması kanulasyonun tamamlandıktan sonra oluşabilir, ancak tüp la gelmeden önce EVLP hattına bağlanmıştır. Perfüzat herhangi bir kan pıhtıları temizlemek için üzerinden çalıştırmak gerektiğini ve bu Perfüzat herhangi bir sorun olmadan göğüs duvarına sızmasına edebilirsiniz. Manuel modda perfüzyon pompa açma ve yavaş yavaş ~ 2 ml akış hızını artırarak / dak PA basıncı yakından takip sağlar. 20-30 cmH 2 O üzerinde baskılar bir engel gösterir ve LA çıkan Perfüzat izlemek için de bir gösterge ama bu görmek çok zor olabilir olabilir. Basınç O 2 cmH 20-30 üzerinde yükselmesi yoksa, pompayı durdurun ve her iki kanülasyonlar tekrar kontrol edin. Basınç yaklaşık 10-20 cmH2O izin inci sabittir keze Perfüzat 2 dakika boyunca ve göğüs boşluğuna çalıştırmak için. Bu anda la hat EVLP devresine bağlanabilir. Perfüzat pompa hızı 5-10 ml / dak artış olabilir. Sıvı kafa devresi içinden ilerledikçe, sıvı nedeniyle baş yüksekliğine artışa ve dolayısıyla statik basınca PA basıncında bir artış olacaktır. Sıvı hattı en yüksek noktasının üzerinde akamaz hattının zıt ucunda bir emme kuvveti uygulamak veya çizginin en yüksek kısmını azaltmak için çalışır birine, gerekli olabilir. Bu sorun aşılır sonra, perfüzyon herhangi bir sorun olmadan dolaşmaya gerekir. Bazı konular ventilatöre açısından izlenmelidir. Akciğerler daha ödemli ve kilo artışları olur Öncelikle, bronşlar / trakea ve kalp-akciğer pozisyonunun büküm oluşabilir. Kanüller nedenle değiştiren, nispeten yakın anatomik pozisyonda kalması için önemlidir ya da her iki kanülE gerekli olabilir. Basınç veya hacim kontrollü fanlar yanı sıra olumlu ya da olumsuz havalandırma bu EVLP sistemi ile kullanılabilir. Sıçan modeli için, biz pozitif basınç, hacim kontrollü ventilasyon 4-10 ml / kg arasında 2-8 cmH 2 O. arasında pozitif ekspiryum sonu basınçları (PEEP) gelgit hacimlerde iyi çalışır kullanarak bulduk Ancak, 8 cmH 2 O PEEP trakea bifürkasyonunda olası bir kopma neden olabilir. Her deney sonrası trakea giden havalandırma hattı trakea kadar seyahat ettim herhangi bronkoalveoler lavaj (BAL) sıvısı temizlenmesi gerekir, (back-to-back yapılan ya da eğer deneyler set). Dokunulmaz ve tamamen havalandırma hattı bloke eğer bu sıvı donacaktır. perfüzat bileşimi başarılı EVLP deney için çok önemlidir. % 5 dekstran karışım, fizyolojik koşullara yakın akciğer perfüzyon sağlayan sıvı b sürücü istikrarlı bir onkotik basıncı korurödem önlemek için damar içine ack ve akciğer damarları içinde trombozu engeller. Bu sıçanların bazı türler akciğer ödemi 20 neden olabilir dekstrana alerjik olabilir dikkat etmek önemlidir. Perfüzat içeriği dolayısıyla dekstran içerik karıştırıcı olmamalı, bu çalışmadaki tüm deney gruplarında tutarlı oldu. onkotik basınç geliştirmek veya doku ödemi üretme potansiyeline sahiptir kritik bir değişkendir. Soğuk statik depolama ya da normotermik perfüzyonları için optimize edilmiş ticari olarak temin edilebilen perfüzyon için solüsyonlar, akciğer canlılığı kat artış bu sistemde kullanılmaktadır. Biz, bu çözümlerin bir albümin içeren ve bir endişe kemirgen akciğer enflamatuar yanıtı tetikleyen sığır albümin olasılığı olduğunu not edin. Optimal Perfüzat kompozisyon soruşturma devam eden bir konu olmasına rağmen, perfüzyon dikkate onkotik basıncı, ozmotik basınç ve tamponlama kapasitesini almak gerekiyor. WÇözelti, bir tadil edilmiş Krebs-Henseleit çözeltisi ya da hücre kültür ortamı dayalı önermektedirler. onkotik basıncı uygulamaya bağlı olarak, dekstran ya da albümin ile muhafaza edilmelidir. perfüzyon basıncı ve akış hızı organı ve üstü fizyolojik perfüzyon parametreleri mekanik travma organ eğilimli yapabilirsiniz etkiler. Deney sırasında Görsel Göstergeler: Bir EVLP deneme iyi çalışıp çalışmadığını belirlemek için kullanılabilir gerçek zamanlı veri birçok görsel ipuçları yanı sıra endikasyonları vardır. Akciğer aynı boyutta kalır ve her nefeste sonra aynı birime Söndür olacaktır. Ayrıca akciğer kendisinden hiçbir sızıntı olmayacak. PVR, akciğer ağırlığı ve uyum nispeten sabit kalır. Oksijen üretimi sabit kalması veya biraz artacaktır. Akciğer bir deney sırasında tehlikeye olur birçok görsel göstergeler vardır. Akciğer ödemli a olurnd boyut ve ağırlık hızla büyüyor. akciğer (beyaz bir açık kahverengi-pembe) değişiklikler ve sıvı cepleri renk dokusunda tespit edilebilir. Barotravma veya şişkinlik üzerinde trakea ya da akciğer patlarsa, yaralanma noktasında (Şekil 12B) orada köpüren olacak. Oksijen üretimi azalacak ve PVR ve uyum dramatik yanı sıra artacaktır. kemirgenler gibi küçük hayvanlar üzerinde bir EVLP modeli kullanarak potansiyel akciğer nakli tedavisi iyileştirilmesi gelecekteki çalışmalar için kapıyı açar. Ancak, küçük bir hayvan modeli gerçekten bir akciğer nakli taklit etmek daha iyi anlaşılmasını gerektirir. Bu model, tıbbi tedaviler geliştirilmesi ve gelecekteki akciğer transplant çalışmaları için taban parametreleri tanımlamak için gelecekte kullanılabilir.

Klinik Alaka Nakli bekleyen 1 ölüyor uzamış bekleme listesi zaman lider ulusal kullanılacak edememek akciğer veya hastaların sadece% 19 ile nakli için kullanılabilir uygun akciğer yetersizdir şu anda yok. sıkıntısı büyük bağışçılar, travma, enfeksiyon, çoklu-sistem organ yetmezliği ve hasat 2 üzerine bazen yaralı donör akciğerlere bağlı olabilir. Buna ek olarak, akciğer göğüs boşluğuna ve standart taşıma ve koruma teknikleri dışında zayıf bir organ bozulması ve cansız akciğerlere götürür. Bu nedenle, bakımı ve akciğer canlılığı ex-vivo iyileştirilmesi son zamanlarda akciğer nakli tıp önemli bir odak noktası haline gelmiştir. Ex-vivo Akciğer Perfüzyon (EVLP) Ex-vivo akciğer perfüzyon (EVLP) sürekli nakli için değerlendirilen organları serpmek gelişti ve tüm bir değerlendirme süresi sağlar ettiAkciğer canlandırma veya rektifiyesiyle potansiyeli akımlarının. EVLP vücut organı iskemik zamanın dışında toplam uzatmak ve bağışlanan organlar daha mesafeleri 3 seyahat için izin verebilirsiniz. Tipik olarak, akciğerler% 50 4% 30 50 toplam akciğer kapasitesinin% veya solunan oksijen fraksiyonu ile pik havayolu basıncı 20 cmH 2 O (FiO 2) havalandırmalı edilir. Koruma solüsyon, insanlara ve büyük hayvanlara 5,6 40-60 ml / kg (100 ml / kg tahmin kalp debisi yaklaşık% 40) ile perfüze edildi, ancak sıçanlar 7 kardiyak çıkışın yaklaşık% 20 ile perfüze edilmiştir. STEEN çözeltisinin eklenmesi insan akciğerleri pulmoner ödem 9 gelişimi olmadan RT ortamlarda yolculuk için izin verdi. Bu öncü çalışma Toronto Üniversitesi Akciğer Nakli Programı 10-13 rafine edilmiş ve nakli 14,15 için marjinal donör akciğer geliştirilmiş değerlendirilmesi için değerlendirilmektedir. Bununla birlikte, uygun havalandırma sisnakli için marjinal ve / veya alt standart akciğerleri yeniden oluşturmak için gerekli n ve perfüzyon koşulları bilinen ve halen aktif bir araştırma alanıdır değildir. Izole akciğer perfüzyon sistemleri akciğer hasarı, solunum yolu hastalıkları, yeniden oluşturma neden küçük hayvanlarda ve iskemik hasar görmesini önlemek için farklı çözümler ile akciğerlere serpmek edilmiştir. Müfettişler insanlar ve büyük hayvanlar 16-18 kullanılabilecek EVLP protokolleri taklit izole akciğer-perfüzyon sistemi kullanılarak akciğer transplantasyonu bir küçük hayvan modeli oluşturduk. Ancak, bu deneysel model, insan fizyolojisini taklit etmek için kullanılan çeşitli teknikler ve parametreler açısından birçok zorlukları vardır. Özellikle, EVLP sırasında akciğer canlılığını muhafaza birçok incelikleri vardır. Bu inceliklerini nedeniyle hasat tekniği, pozitif basınçlı ventilasyon ayarları, perfüzat kompozisyon ve akış koşulları ve akciğer kanülasyona farklılıkları ortaya çıkabilir. Therefore, burada amaç bir kemirgen modelinde EVLP uygulanması için sağlam bir yönteme öne bulduk sorun giderme ve uygulama ipuçları bir dizi araştırma topluluğuna sağlamaktır.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="980">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:339px;">Name of Material/ Equipment</td>
			<td style="width:221px;">Company</td>
			<td style="width:225px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:196px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:339px;">IPL-2 Basic Lung Perfusion System</td>
			<td style="width:221px;">Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:225px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:339px;">Tweezer #5 stainless steel, curved 11cm</td>
			<td style="width:221px;">Kent Scientific Corporation</td>
			<td style="width:225px;">IND500232</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:339px;">Tweezer #5 Dumostar, 11cm</td>
			<td style="width:221px;">Kent Scientific Corporation</td>
			<td style="width:225px;">INS500085-A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:339px;">Tweezer #7 Titanium, 12cm tips curved</td>
			<td style="width:221px;">Kent Scientific Corporation</td>
			<td style="width:225px;">INS600187</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:339px;">McPherson-Vannas Scissors 8cm, Str 5mm</td>
			<td style="width:221px;">Kent Scientific Corporation</td>
			<td style="width:225px;">INS14124</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:339px;">Vannas Scissors 8cm Str 5mm</td>
			<td style="width:221px;">Kent Scientific Corporation</td>
			<td style="width:225px;">INS14003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:339px;">Instrument Sterilization Tray 5&#34; x 7&#34;</td>
			<td style="width:221px;">Kent Scientific Corporation</td>
			<td style="width:225px;">INS800101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:339px;">Heparin 30,000 units per 30mL</td>
			<td style="width:221px;">APP Pharmaceuticals</td>
			<td style="width:225px;">Supplied from OSU Pharmacy</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:339px;">Ketamine 500mg per 5mL</td>
			<td style="width:221px;">JHP Pharmaceuticals</td>
			<td style="width:225px;">Supplied from OSU Pharmacy</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:339px;">Xylazine 100mg per 1mL</td>
			<td style="width:221px;">Akorn</td>
			<td style="width:225px;">Supplied from OSU Pharmacy</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:339px;">10cc insulin syringe 29 Ga x 1/2&#34; needle</td>
			<td style="width:221px;">B-D</td>
			<td style="width:225px;">309301</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:339px;">Hyflex NBR</td>
			<td style="width:221px;">Ansell</td>
			<td>S-17310M</td>
			<td>Bite proof gloves</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:339px;">BL1500</td>
			<td style="width:221px;">Sartarius</td>
			<td style="width:225px;">Practum 1102-1S</td>
			<td>Scale</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:339px;">Large Flat Bottom Restrainer</td>
			<td style="width:221px;">Braintree Scientific Inc</td>
			<td>FB L 3.375 dia x 8.5, 250-500gm rat&#160;</td>
			<td>Rat tunnel for injection</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:339px;">Sterling Nitrile Powder-free Exam Gloves, Large</td>
			<td style="width:221px;">Kiberly-Clark</td>
			<td style="width:225px;">50708</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:339px;">Rapidpoint 405</td>
			<td style="width:221px;">Siemens</td>
			<td style="width:225px;"></td>
			<td>blood gas analyzer</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:339px;">Fiberoxygenator D150</td>
			<td style="width:221px;">Hugo Sachs Elektronik</td>
			<td style="width:225px;">PY2 73-3762</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:339px;">LabChart v7.3.7</td>
			<td style="width:221px;">ADInstruments</td>
			<td style="width:225px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:339px;">Tracheal cannula</td>
			<td style="width:221px;">Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:225px;">733557</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:339px;">Pulmonary Artery cannula</td>
			<td style="width:221px;">Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:225px;">730710</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:339px;">Left Atrium cannula</td>
			<td style="width:221px;">Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:225px;">730712</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:339px;">Peristaltic Pump&#160;</td>
			<td style="width:221px;">Ismatec</td>
			<td style="width:225px;">ISM 827B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:339px;">Small Animal Ventilator model 683</td>
			<td style="width:221px;">Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:225px;">55-000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:339px;">Ecoline Star Edition 003, E100</td>
			<td style="width:221px;">Lauda</td>
			<td style="width:225px;">LCK 1879</td>
			<td>Water Heater</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:339px;">Tubing Cassette</td>
			<td style="width:221px;">Cole-Parmer</td>
			<td style="width:225px;">IS 0649</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:339px;">Connect kit D150</td>
			<td style="width:221px;">Cole-Parmer</td>
			<td style="width:225px;">VK 73-3763</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:339px;">PowerLab 8/35</td>
			<td style="width:221px;">ADInstruments</td>
			<td style="width:225px;">730045</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:339px;">TAM-A transducer amplifier module type 705/1</td>
			<td style="width:221px;">Hugo Sachs - Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:225px;">73-0065</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:339px;">TAM-D transducer amplifier type 705/2</td>
			<td style="width:221px;">Hugo Sachs - Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:225px;">73-1793</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:339px;">SCP Servo controller for perfusion type 704</td>
			<td style="width:221px;">Hugo Sachs - Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:225px;">732806</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:339px;">CFBA carrier frequency bridge amplifier type 672</td>
			<td style="width:221px;">Hugo Sachs - Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:225px;">731747</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:339px;">VCM ventilator control module type 681</td>
			<td style="width:221px;">Hugo Sachs - Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:225px;">731741</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:339px;">TCM time control module type 686</td>
			<td style="width:221px;">Hugo Sachs - Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:225px;">731750</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:339px;">IL2 Tube set for perfusate</td>
			<td style="width:221px;">Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:225px;">733842</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:339px;">Tube set for moist chamber</td>
			<td style="width:221px;">Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:225px;">73V83157</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:339px;">Tygon E-3603 Tubing 2.4mm ID</td>
			<td style="width:221px;">Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:225px;">721017</td>
			<td>perfusate line entering lung</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:339px;">Tygon E-3603 Tubing 3.2mm ID</td>
			<td style="width:221px;">Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:225px;">721019</td>
			<td>perfusate line leaving lung</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:339px;">low potassium dextran glucose solution</td>
			<td style="width:221px;"></td>
			<td style="width:225px;"></td>
			<td>flushing the lung</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

method of isolated ex vivo lung perfusion in a rat model: lessons learned from developing a rat evlp program

Akciğer nakli için kullanılabilir kabul edilebilir donör akciğer sayısı nedeniyle kalitesiz ciddi sınırlıdır. Ex-Vivo Akciğer Perfüzyon (EVLP) insanlarda akciğer transplantasyonu daha kolay kullanılabilir donör havuzu organları değerlendirmek ve genişletmek için yeteneği sağlayarak haline izin verdi. Bu teknoloji geliştirir, potansiyel olarak değerlendirilmesi ve transplanttan önce altı akciğer kalitesini artırmak için yeteneği geliştikçe kritik bir ihtiyaçtır. Daha titiz bir şekilde, bu yaklaşımlar değerlendirmek için, bir yeniden üretilebilir bir hayvan modelinin bağışlanan akciğer geliştirilmiş tekniklerin test ve yönetimi için olduğu gibi akciğer nakli alıcısına sağlayacak tespit edilmesi gerekir. Buna ek olarak, örneğin, ortaya çıkan patolojilerin, bir EVLP hayvan modeli, havalandırma kaynaklı akciğer yaralanması (VILI), bu patolojiler için tedaviler değerlendirmek için yeni bir yöntem temin edecektir. Burada, biz bu benim için bir sıçan EVLP akciğer programı ve inceliklerinin gelişimini açıklamakGelecekteki genişleme için bir tekrarlanabilir model izin metod ile. Biz de bu EVLP sisteminin uygulama sıçan akciğerlerinde VILI model açıklar. amaç anahtar bilgileri ve &quot;bilgelik inci&quot; deneme ve yanılma kaynaklanan ve sağlam ve tekrarlanabilir bir EVLP sistemi kurulması için kritik / teknikleri ile araştırma topluluğuna sağlamaktır.

veri toplama programı aracılığıyla toplanan gerçek zamanlı mekanik veriler kolayca hipotez herhangi bir sayıda test etmek için analiz edilebilir. Örneğin, Şekil 10A hayvanlar 4 ml / kg ve 2 düşük tidal volüm / düşük PEEP cmH 2 O ile ventile edildi 60 dakika 10 sıçan deneyler aracılığıyla ortalama akciğer ağırlığını gösterir Deney boyunca akciğer ağırlığı çok küçük bir artış olmasına rağmen, bu artış istatistiksel olarak anlamlı değildir (ANOVA, p = 0.92). Şekil 10B 12 sıçan deneylerinde 60 dakika boyunca ortalama pulmoner arter basıncı (PAB) gösterir. t sıralarında 10 dakika (ANOVA = 0 dakika sonra zaman noktasında alt PAP tüm deneyler ve PAP başında kullanılan alt akış ve havalandırma ayarları bir sonucudur istatistiksel olarak anlamlı değişiklikler bu kez noktadan sonra sabit kalır, s = 0.89). Şekil 10C 12 sıçan 60 dakika boyunca pulmoner vasküler direnci (PVR) gösterirdeneyler ve t 20 dakika = sonra PVR küçük bir düşüş olmasına rağmen, PVR arasında istatistiksel olarak anlamlı bir fark bu deney sırasında oldu (saflarında ANOVA, p = 0.65). Burada gösterilen DVR verileri ile karşılaştırıldığında, Noda ve ark. 4 saat zamanla biraz artırmak için PVR göstermiştir. Ancak, bu yazarlar 1 yerine deney başlangıç ​​saat ve standart sapma değerleri 7 sağlanır başlayan PVR verileri rapor. Noda ve diğ. Ayrıca, bu nedenle bir karşılaştırma Şekil 10A, burada sunulan veriler ile yapılabilir 4 saat deneyleri için pulmoner ödem veri göstermez. Noda ark büyük farklılıklar. Bu yazıda gösterilen ne göre işlem şunlardır: EVLP önce LPS çözeltisi içinde 1 saat soğuk muhafaza, fareler başlangıçta onları bilinçsiz hale getirmek için izofluran içeren bir gaz karışımı ile ventile edildi, perfüzyon çözüm metilprednizolon 50 mg ve 50 mg ile takviye edildi sefalosporin, toplam flhesaplanan kalp debisinin% 20, perfüzat örnekleri akciğer 5 dakika önce% 100 O 2 havalandırılan olmuştu ve deney 4 saat çalıştırıldı sonra çekildiği gibi akış tanımlandı. Perfüzat gelen deney sırasında alınan örnekler, ayrıca pek çok amaç için analiz edilebilir. Bir örnek olarak, Şekil 11 &#39;de, biz, 60 dakika içinde, bir ön-iltihabik bir cevabı uyandırmak ne kadar yüksek tidal hacim / yüksek PEEP havalandırma göstermektedir. Bu deneyler için, 4 sıçanlardan perfüzyon zararlı koşullarda, yani, 10 ml / kg ve 8 yüksek PEEP cmH2O yüksek tidal hacim altında havalandırılmış, pro- ve anti-enflamatuar sitokinlerin IL1β, TNFa ve IL-4 ile bir standart için analiz edildi ELISA teknikleri. Sitokin düzeyleri, havalandırma önce (0 dakika) ile karşılaştırıldığında, Şekil 11&#39;de gösterildiği gibi, zararlı havalandırma 60 dakika, IL-1β ve TNFa (pro-enflamatuar sitokinler) bir istatistiksel olarak önemli bir artış ile sonuçlanmıştır<html> nd, IL-4 bir değişiklik (bir anti-inflamatuar sitokin,) konsantrasyonu. Bu nedenle, bu EVLP sistemi yaygın mekanik ventilasyon sırasında gözlenen akciğer hasarı profilleri üretebilir. <img alt="Şekil 1," src="/files/ftp_upload/52309/52309fig1highres.jpg" /> Şekil 1. Diyagramı ve küçük hayvan ex-vivo akciğer perfüzyon (EVLP) devrenin fotoğraf. Şemada Mektuplar fotoğraftaki harflerle maç. <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/52309/52309fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <img alt="Şekil 2," src="/files/ftp_upload/52309/52309fig2highres.jpg" /> Şekil 2. Tüm dönüştürücüler güvenli kontrol kutularına bağlıdır.&quot;&gt; Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız. <img alt="Şekil 3," src="/files/ftp_upload/52309/52309fig3highres.jpg" /> Şekil 3. sıçan çalışma tablosu güvenli ex vivo akciğer perfüzyon (EVLP) devre bitişik ayarlanır. <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/52309/52309fig3large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <img alt="Şekil 4," src="/files/ftp_upload/52309/52309fig4highres.jpg" /> Şekil 4. (A), bir insizyon trakea ortaya çıkarmak için kraniyal yapılır. göğüs boşluğu maruz kalmaz. (B) ipek sütür trakea arkasına yerleştirilir. (C), soluk borusu, kısmen kanülasyon için hazırlamak üzere kesilir. (D), trakea kanülü konumlandırılması yerleştirilir<html> n ve bir ipek sütür ile tespit edilmiş. <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/52309/52309fig4large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <img alt="Şekil 5," src="/files/ftp_upload/52309/52309fig5highres.jpg" /> Şekil 5. (A) göğüs boşluğu kalp ve akciğer erişime izin vermek için geri çekilir. Pulmoner arter arkasındaki dikiş yerleştirmek için (B) hazırlanması. (C) pulmoner arter kanüle ve önceden yerleştirilmiş ipek sütür ile bağlıdır. (D) Düşük K + elektrolit solüsyonu herhangi bir kan pıhtıları uzaklaştırmak için pulmoner arter yoluyla ve sol atrium dışarı boşaltılır. <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/52309/52309fig5large.jpg" target="_blank">bir büyük görmek için tıklayınız Bu rakamın sürümü.</a> &gt; &quot;lways <img alt="Şekil 6," src="/files/ftp_upload/52309/52309fig6highres.jpg" /> Kanülasyon doğru olarak yapıldığını ve önemli bir blokaj varsa akciğeri kızarma. Dramatik artırmak için pulmoner arter basıncı neden olabileceği durumlarda pulmoner arter akışını arttırmak Şekil 6., düşmelidir basınç. <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/52309/52309fig6large.jpg" target="_blank">tıklayınız Bu rakamın büyük bir versiyonunu görmek için .</a> <img alt="Şekil 7," src="/files/ftp_upload/52309/52309fig7highres.jpg" /> Şekil 7. İpek sütür sol atrium kanülasyon için hazırlık bütün kalbin etrafında yerleştirilir. <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/52309/52309fig7large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> n-sayfa = &quot;always&quot;&gt; <img alt="Şekil 8," src="/files/ftp_upload/52309/52309fig8highres.jpg" /> Sol atrium kanül ipek sütür ile yerine sabitlenir Şekil 8.. <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/52309/52309fig8large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <img alt="Şekil 9," src="/files/ftp_upload/52309/52309fig9highres.jpg" /> Şekil 9. (A) pulmoner arter kanül ex-vivo akciğer perfüzyon devresine bağlanır. (B) özofagus kenetlendiği ve bağ dokusu açık açık kalp-akciğer bloğu kaldırmak için disseke edilir. (C) kalp-akciğer blok göğüs boşluğundan çıkarılır ve ex-vivo akciğer perfüzyon devresine yerleştirilir. (D) sol atrium ex-vivo akciğer perfüzyon devresine bağlanır.<html> = &quot;https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/52309/52309fig9large.jpg&quot; target = &quot;_ blank&quot; href&gt; bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için burayı tıklayınız. <img alt="Şekil 10," src="/files/ftp_upload/52309/52309fig10highres.jpg" /> Şekil ex vivo olarak akciğer perfüzyon (n = 10), 60 dakika boyunca, erkek Sprague Dawley sıçanları 10 (A), Akciğer ağırlığı. (B), ex vivo olarak, akciğer perfüzyon (n = 12), 60 dakika boyunca erkek Sprague Dawley sıçanlarının pulmoner arter basıncı. (C) ex vivo akciğer perfüzyon (n = 12) 60 dakika boyunca erkek Sprague Dawley pulmoner vasküler rezistans, NS istatistiksel olarak anlamlı bir fark gösterir. <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/52309/52309fig10large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <img alt="&lt;/ Html"><html> &quot;Şekil 11&quot; src = &quot;/ files / ftp_upload / 52309 / 52309fig11highres.jpg&quot; /&gt; Şekil 11. Etkisi perfüzata yanlısı ve anti-inflamatuvar sitokin konsantrasyonları 1 saat yüksek tidal hacimlerde ventilasyon (10 ml / kg) ve yüksek PEEP (8 cmH2O) olarak. N = 4, * ile istatistiksel olarak anlamlı bir fark gösterir saygı 0 saat numune (p &lt;0.05). <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/52309/52309fig11large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <img alt="Şekil 12," src="/files/ftp_upload/52309/52309fig12highres.jpg" /> Şekil 12. (A) düzgün havalandırma ve EVLP devresine bağlı akciğer perfüze. (B) Yüksek pozitif ekspiryum sonu basınç (PEEP) yaralanma oluşmaya ve yapay toraks doldurmak için baloncuklar neden trakea bifürkasyonunda gözyaşı neden olur.<html> es / ftp_upload / 52309 / 52309fig12large.jpg &quot;target =&quot; _ blank &quot;&gt; bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için burayı tıklayınız. <img alt="Şekil 13," src="/files/ftp_upload/52309/52309fig13highres.jpg" /> Şekil 13. (A) Pulmoner arter kanül. Bu kanül sol atrium kanül daha küçüktür. (B) atrium kanül Sol. Bu kanül pulmoner arter kanül çok daha büyüktür. (C) Trakea kanül. Bu kanül ipek sütür ile trakea güvence yardımcı olmak için kaburga vardır. trakea içine sokulur sonu da biraz trakea içine kanül takarak yardımcı işaret edilmektedir. <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/52309/52309fig13large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> 09fig14highres.jpg &quot;/&gt; Şekil 14. (A) Kalp tepe sağ ventrikül pulmoner arter cannulate için çizilerek yaklaşık olarak forseps bir çift tarafından düzenlenmektedir. (B), küçük künt uçlu pick-up bir çift ile mitral kapak anulus dilatasyon kolay sol atrium içine yolu görselleştirmek için yapar. <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/52309/52309fig14large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Method of Isolated Ex Vivo Lung Perfusion in a Rat Model: Lessons Learned from Developing a Rat EVLP Program at JoVE.com

Method of Isolated Ex Vivo Lung Perfusion in a Rat Model: Lessons Learned from Developing a Rat EVLP Program

Ex-Vivo Akciğer Perfüzyon (EVLP) insanlarda akciğer transplantasyonu daha kolay kullanılabilir donör havuzu organları değerlendirmek ve genişletmek için yeteneği sağlayarak haline izin verdi. Burada, bir sıçan EVLP programı ve gelecekteki genişleme için bir tekrarlanabilir model izin ayrıntılandırmaları gelişimini açıklar.

İzole Yöntemi<em&gt; Ex vivo</emBir Rat Modelinde&gt; Akciğer Perfüzyon: Sıçan EVLP Programı Geliştirme Öğrenilmiş Dersler

The number of acceptable donor lungs available for lung transplantation is severely limited due to poor quality. Ex-Vivo Lung Perfusion (EVLP) has allowed ...

method-isolated-ex-vivo-lung-perfusion-rat-model-lessons-learned-from

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Medicine

Method of Isolated Ex Vivo Lung Perfusion in a Rat Model: Lessons Learned from Developing a Rat EVLP Program

27.1K Görüntüleme.  Ohio State University Wexner Medical Center.  Ex-Vivo Akciğer Perfüzyon (EVLP) insanlarda akciğer transplantasyonu daha kolay kullanılabilir donör havuzu organları değerlendirmek ve genişletmek için yeteneği sağlayarak haline izin verdi. Burada, bir sıçan EVLP programı ve gelecekteki genişleme için bir tekrarlanabilir model izin ayrıntılandırmaları gelişimini açıklar. 

Video: Method of Isolated Ex Vivo Lung Perfusion in a Rat Model: Lessons Learned from Developing a Rat EVLP Program

Angiogenesis in the Ischemic Rat Lung

The adult lung is perfused by both the systemic bronchial artery and the entire venous return flowing through the pulmonary arteries. In most lung pathologies, it is the smaller systemic vasculature that responds to a need for enhanced lung perfusion and shows robust neovascularization. Pulmonary vascular ischemia induced by pulmonary artery obstruction has been shown to result in rapid systemic arterial angiogenesis in man as well as in several animal models. Although the histologic assessment of the time course of bronchial artery proliferation in rats was carefully described by Weibel 1, mechanisms responsible for this organized growth of new vessels are not clear. We provide surgical details of inducing left pulmonary artery ischemia in the rat that leads to bronchial neovascularization. Quantification of the extent of angiogenesis presents an additional challenge due to the presence of the two vascular beds within the lung. Methods to determine functional angiogenesis based on labeled microsphere injections are provided.

The lung is perfused by both the systemic bronchial artery and pulmonary arteries. In most lung pathologies, it is the smaller systemic vasculature that shows robust neovascularization. Cessation of pulmonary blood flow promotes brisk bronchial angiogenesis. We provide surgical details of inducing left pulmonary artery ischemia that promotes bronchial neovascularization.

İskemik Sıçan Akciğer Angiogenezis

The  adult lung is perfused by both the systemic bronchial artery and the entire  venous return flowing through the pulmonary arteries. In most lung ...

Tıp

A Simple Method of Mouse Lung Intubation

A simple procedure to intubate mice for pulmonary function measurements would have several advantages in longitudinal studies with limited numbers or expensive animal. One of the reasons that this is not done more routinely is that it is relatively difficult, despite there being several published studies that describe ways to achieve it. In this paper we demonstrate a procedure that eliminates one of the major hurdles associated with this intubation, that of visualizing the trachea during the entire time of intubation. The approach uses a 0.5 mm fiberoptic light source that serves as an introducer to direct the intubation cannula into the mouse trachea. We show that it is possible to use this procedure to measure lung mechanics in individual mice over a time course of at least several weeks. The technique can be set up with relatively little expense and expertise, and it can be routinely accomplished with relatively little training. This should make it possible for any laboratory to routinely carry out this intubation, thereby allowing longitudinal studies in individual mice, thereby minimizing the number of mice needed and increasing the statistical power by using each mouse as its own control.

This paper describes a striaghforward and efficient method of intubating mice for pulmonary function measurements or pulmonary instillation, that allows the mice to recover and be studied at later times. The procedure involves an inexpensive fiberoptic light source that directly illuminates the trachea.

Fare Akciğer Entübasyonun Basit Bir Yöntem

A  simple procedure to intubate mice for pulmonary function measurements would  have several advantages in longitudinal studies with limited numbers or  ...

Glaucoma-inducing Procedure in an In Vivo Rat Model and Whole-mount Retina Preparation

Glaucoma is a disease of the central nervous system affecting retinal ganglion cells (RGCs). RGC axons making up the optic nerve carry visual input to the brain for visual perception. Damage to RGCs and their axons leads to vision loss and/or blindness. Although the specific cause of glaucoma is unknown, the primary risk factor for the disease is an elevated intraocular pressure. Glaucoma-inducing procedures in animal models are a valuable tool to researchers studying the mechanism of RGC death. Such information can lead to the development of effective neuroprotective treatments that could aid in the prevention of vision loss. The protocol in this paper describes a method of inducing glaucoma - like conditions in an in vivo rat model where 50 &#181;l of 2 M hypertonic saline is injected into the episcleral venous plexus. Blanching of the vessels indicates successful injection. This procedure causes loss of RGCs to simulate glaucoma. One month following injection, animals are sacrificed and eyes are removed. Next, the cornea, lens, and vitreous are removed to make an eyecup. The retina is then peeled from the back of the eye and pinned onto sylgard dishes using cactus needles. At this point, neurons in the retina can be stained for analysis. Results from this lab show that approximately 25% of RGCs are lost within one month of the procedure when compared to internal controls. This procedure allows for quantitative analysis of retinal ganglion cell death in an in vivo rat glaucoma model.

Glaucoma-inducing Procedure in an In Vivo Rat Model and Whole-mount Retina Preparation

Glaucoma is characterized by damage to retinal ganglion cells. Inducing glaucoma in animal models can provide insight into the study of this disease. Here, we outline a procedure that induces loss of RGCs in an in vivo rat model and demonstrates the preparation of whole-mount retinas for analysis.

Glokom uyaran bir de Prosedürü<em&gt; İn Vivo</em&gt; Rat Modeli ve Tüm montaj Retina Hazırlık

Glaucoma is a disease of the central nervous system affecting retinal ganglion cells (RGCs). RGC axons making up the optic nerve carry visual input to the ...

Method of Direct Segmental Intra-hepatic Delivery Using a Rat Liver Hilar Clamp Model

Major hepatic surgery with inflow occlusion, and liver transplantation, necessitate a period of warm ischemia, and a period of reperfusion leading to ischemia/reperfusion (I/R) injury with myriad negative consequences. Potential I/R injury in marginal organs destined for liver transplantation contributes to the current donor shortage secondary to a decreased organ utilization rate. A significant need exists to explore hepatic I/R injury in order to mediate its impact on graft function in transplantation. Rat liver hilar clamp models are used to investigate the impact of different molecules on hepatic I/R injury. Depending on the model, these molecules have been delivered using inhalation, epidural infusion, intraperitoneal injection, intravenous administration or injection into the peripheral superior mesenteric vein. A rat liver hilar clamp model has been developed for use in studying the impact of pharmacologic molecules in ameliorating I/R injury. The described model for rat liver hilar clamp includes direct cannulation of the portal supply to the ischemic hepatic segment via a side branch of the portal vein, allowing for direct segmental hepatic delivery. Our approach is to induce ischemia in the left lateral and median lobes for 60 min, during which time the substance under study is infused. In this case, pegylated-superoxide dismutase (PEG-SOD), a free radical scavenger, is infused directly into the ischemic segment. This series of experiments demonstrates that infusion of PEG-SOD is protective against hepatic I/R injury. Advantages of this approach include direct injection of the molecule into the ischemic segment with consequent decrease in volume of distribution and reduction in systemic side effects.

A unique rat liver hilar clamp model was developed for studying the impact of pharmacologic molecules in ameliorating ischemia-reperfusion injury. This model includes direct cannulation of the portal supply to the ischemic liver segment via a branch of the portal vein, allowing for direct hepatic delivery.

Bir Sıçan Karaciğer Hilar Kelepçe Modeli Kullanılarak Doğrudan Segmental İçi hepatik Dağıtım Yöntemi

Major hepatic surgery with inflow occlusion, and liver transplantation, necessitate a period of warm ischemia, and a period of reperfusion leading to ...

A Small Animal Model of Ex Vivo Normothermic Liver Perfusion

There is a significant shortage of liver allografts available for transplantation, and in response the donor criteria have been expanded. As a result, normothermic ex vivo liver perfusion (NEVLP) has been introduced as a method to evaluate and modify organ function. NEVLP has many advantages in comparison to hypothermic and subnormothermic perfusion including reduced preservation injury, restoration of normal organ function under physiologic conditions, assessment of organ performance, and as a platform for organ repair, remodeling, and modification. Both murine and porcine NEVLP models have been described. We demonstrate a rat model of NEVLP and use this model to show one of its important applications &#8212; the use of a therapeutic molecule added to liver perfusate. Catalase is an endogenous reactive oxygen species (ROS) scavenger and has been demonstrated to decrease ischemia-reperfusion in the eye, brain, and lung. Pegylation has been shown to target catalase to the endothelium. Here, we added pegylated-catalase (PEG-CAT) to the base perfusate and demonstrated its ability to mitigate liver preservation injury. An advantage of our rodent NEVLP model is that it is inexpensive in comparison to larger animal models. A limitation of this study is that it does not currently include post-perfusion liver transplantation. Therefore, prediction of the function of the organ post-transplantation cannot be made with certainty. However, the rat liver transplant model is well established and certainly could be used in conjunction with this model. In conclusion, we have demonstrated an inexpensive, simple, easily replicable NEVLP model using rats. Applications of this model can include testing novel perfusates and perfusate additives, testing software designed for organ evaluation, and experiments designed to repair organs.

A Small Animal Model of Ex Vivo Normothermic Liver Perfusion

There is a significant liver donor shortage, and criteria for liver donors have been expanded. Normothermic ex vivo liver perfusion (NEVLP) has been developed to evaluate and modify organ function. This study demonstrates a rat model of NEVLP and tests the ability of pegylated-catalase, to mitigate liver preservation injury.

Ex Vivo Normothermic karaciğer perfüzyon küçük bir hayvan Model

There is a significant shortage of liver allografts available for transplantation, and in response the donor criteria have been expanded. As a result, ...

Acupuncture in a Rat Model of Asthma

A high platform can fix rats without restriction and completely expose the acupoints on the back during acupuncture manipulation. This article describes methods for the fabrication of the high platform, establishes a rat model of asthma and measures changes in respiratory function using a noninvasive and real-time whole-body plethysmography (WBP) system.

Astımın Sıçan Modelinde Akupunktur

A high platform can fix rats without restriction and completely expose the acupoints on the back during acupuncture manipulation. This article describes ...

A Rat Lung Transplantation Model of Warm Ischemia/Reperfusion Injury: Optimizations to Improve Outcomes

From our experience with rat lung transplantation, we have found several areas for improvement. Information in the existing literature regarding methods for choosing appropriate cuff sizes for the pulmonary vein (PV), pulmonary artery (PA), or bronchus (Br) are varied, thus making the determination of proper cuff size during rat lung transplantation an exercise of trial and error. By standardizing the cuffing technique to use the smallest effective cuff appropriate for the size of the vessel or bronchus, one can make the transplantation procedure safer, faster, and more successful. Since diameters of the PV, PA, and Br are related to the body weight of the rat, we present a strategy to choosing an appropriate size using a weight-based guide. Since lung volume is also related to body weight, we recommend that this relationship should also be considered when choosing the proper volume of air for donor lung inflation during warm ischemia as well as for the proper volume of PBS to be instilled during bronchoalveolar lavage (BAL) fluid collection. We also describe methods for 4th intercostal space dissection, wound closure, and sample collection from both the native and transplanted lobes.

Here, we present optimizations to a rat lung transplantation model that serve to improve outcomes. We provide a size guide for cuffs based on body weight, a measurement strategy to ascertain the 4th intercostal space, and methods of wound closure and BAL (bronchoalveolar lavage) fluid and tissue collection.

Sıcak iskemi / reperfüzyon hasarının bir sıçan akciğer transplantasyon modeli: sonuçları iyileştirmek için optimizasyonlar

From our experience with rat lung transplantation, we have found several areas for improvement. Information in the existing literature regarding methods ...

Isolated Lung Perfusion System in the Rabbit Model

The isolated lung perfusion system has been widely used in pulmonary research, contributing to elucidate the lungs&#39; inner workings, both micro and macroscopically. This technique is useful in the characterization of pulmonary physiology and pathology by measuring metabolic activities and respiratory functions, including interactions between circulatory substances and the effects of inhaled or perfused substances, as in drug testing. While in vitro methods involve the slicing and culturing of tissues, the isolated ex vivo lung perfusion system allows to work with a complete functional organ making possible the study of a continuous physiological function while recreating ventilation and perfusion. However, it should be noted that the effects of the absence of central innervation and lymphatic drainage still have to be fully assessed. This protocol aims to describe the assembly of the isolated lung apparatus, followed by the surgical extraction and cannulation of lungs and heart from experimental lab animals, as well as to display the perfusion technique and signal processing of data. The average viability of the isolated lung ranges between 5-8 h; during this period, the pulmonary capillary permeability increases, causing edema and lung injury. The functionality of preserved pulmonary tissue is measured by the capillary filtration coefficient (Kfc), used to determine the extent of pulmonary edema through time.

The isolated rabbit lung preparation is a gold standard tool in pulmonary research. This publication aims to describe the technique as developed for the study of physiological and pathological mechanisms involved in airway reactivity, lung preservation, and preclinical research in lung transplantation and pulmonary edema.

Tavşan Modelinde İzole Akciğer Perfüzyon Sistemi

The isolated lung perfusion system has been widely used in pulmonary research, contributing to elucidate the lungs&#39; inner workings, both micro and ...

Normothermic Negative Pressure Ventilation Ex Situ Lung Perfusion: Evaluation of Lung Function and Metabolism

Lung transplantation (LTx) remains the standard of care for end-stage lung disease. A shortage of suitable donor organs and concerns over donor organ quality exacerbated by excessive geographic transportation distance and stringent donor organ acceptance criteria pose limitations to current LTx efforts. Ex situ lung perfusion (ESLP) is an innovative technology that has shown promise in attenuating these limitations. The physiologic ventilation and perfusion of the lungs outside of the inflammatory milieu of the donor body affords ESLP several advantages over traditional cold static preservation (CSP). There is evidence that negative pressure ventilation (NPV) ESLP is superior to positive pressure ventilation (PPV) ESLP, with PPV inducing more significant ventilator-induced lung injury, pro-inflammatory cytokine production, pulmonary edema, and bullae formation. The NPV advantage is perhaps due to the homogenous distribution of intrathoracic pressure across the entire lung surface. The clinical safety and feasibility of a custom NPV-ESLP device have been demonstrated in a recent clinical trial involving extender criteria donor (ECD) human lungs. Herein, the use of this custom device is described in a juvenile porcine model of normothermic NPV-ESLP over a 12 h duration, paying particular attention to management techniques. Pre-surgical preparation, including ESLP software initialization, priming, and de-airing of the ESLP circuit, and the addition of anti-thrombotic, anti-microbial, and anti-inflammatory agents, is specified. The intraoperative techniques of central line insertion, lung biopsy, exsanguination, blood collection, cardiectomy, and pneumonectomy are described. Furthermore, particular focus is paid to anesthetic considerations, with anesthesia induction, maintenance, and dynamic modifications outlined. The protocol also specifies the custom device's initialization, maintenance, and termination of perfusion and ventilation. Dynamic organ management techniques, including alterations in ventilation and metabolic parameters to optimize organ function, are thoroughly described. Finally, the physiological and metabolic assessment of lung function is characterized and depicted in the representative results.

Normothermic Negative Pressure Ventilation Ex Situ Lung Perfusion: Evaluation of Lung Function and Metabolism

This paper describes a porcine model of negative pressure ventilation ex situ lung perfusion, including procurement, attachment, and management on the custom-made platform. Focus is made on anesthetic and surgical techniques, as well as troubleshooting.

Norannemik Negatif Basınçlı Ventilasyon Ex Situ Akciğer Perfüzyonu: Akciğer Fonksiyonlarının ve Metabolizmasının Değerlendirilmesi

Lung transplantation (LTx) remains the standard of care for end-stage lung disease. A shortage of suitable donor organs and concerns over donor organ ...

Retinal Pathophysiological Evaluation in a Rat Model

A posterior segment eye disease like diabetic retinopathy alters the physiology of the retina. Diabetic retinopathy is characterized by a retinal detachment, breakdown of the blood-retinal barrier (BRB), and retinal angiogenesis. An in vivo rat model is a valuable experimental tool to examine the changes in the structure and function of the retina. We propose three different experimental techniques in the rat model to identify morphological changes of retinal cells, retinal vasculature, and compromised BRB. Retinal histology is used to study the morphology of various retinal cells. Also, quantitative measurement is performed by retinal cell count and thickness measurement of different retinal layers. A BRB breakdown assay is used to determine the leakage of extraocular proteins from the plasma to vitreous tissue due to the breakdown of BRB. Fluorescence angiography is used to study angiogenesis and leakage of blood vessels by visualizing retinal vasculature using FITC-dextran dye.

Diabetic retinopathy is one of the leading causes of blindness. Histology, blood-retinal barrier breakdown assay, and fluorescence angiography are valuable techniques to understand the pathophysiology of the retina, which could further enhance the efficient drug screening against diabetic retinopathy.