Yazarlar Linnea Tankred ve Diana Rydholm hayvancılık için teşekkür ederiz.

Her iki cinsiyetten BALB/c fare pups göre bildirimi kullanım hayvan Ophthalmologic ve vizyon araştırma için kullanılan ve iletişim kuralları etik hayvan araştırma için Stokholm'ün Komitesi tarafından kabul edildi. Fareler Hemşirelik Anne, 12 h gündüz/gece döngüsü, yiyecek ve su, ücretsiz erişim ile birlikte çöp içinde yer alan ve her gün takip.
Not: cerrahi işlem için fare ile uçucu isoflurane anestezi altında tutuldu. Tedaviler ve kullanılan maddeler ile etkileşebilir gibi oküler merhem oküler işlemler sırasında cesareti. Gerekirse, Kuru göz, önlemek için steril normal tuzlu çözüm bir damla uygulanabilir. Üveal delikler kendi kendini iyileştirme olmasına rağmen bakım kısırlık cerrahi aletler ile sağlamak için Üveal delikler sırasında çekilmiş. Ameliyat sonrası tedavi subkutan, normal serum fizyolojik solüsyonu ile hidrasyon dahil ve oküler topikal yönetimi tetracaine hidroklorür ile analjezi. Belgili tanımlık pups Hemşirelik Anne, temiz bir kafes için iade edilmeden önce bir Isıtma yastık üzerinde sternal recumbency kurtarmak için izin verildi. Çöp stres önlemek için aynı Hemşirelik annesiyle tutuldu.
1. anestezi
<ol><li>İsoflurane anestezik yönetmek ve bir küçük fare maskesi de birleştiğinde emin olmak için anestezi indüksiyon odası, hazır olun. Not: tüm ilgili etik izni ile anlaşma tüm hayvan deneyleri gerçekleştirin.</li>
	<li>İndüksiyon odası ile 3-%4 uçucu isoflurane atmosferik havada prefill. Not: Farklı anestezik maddeler isoflurane başka göre etik izni kullanılabilir. Uçucu anestezik yordamlar havalandırılmış bir tezgah veya duman kaputa yapılmalıdır.</li>
	<li>Bir doğum sonrası (P) 12.5 bayat BALB/c fare yavru indüksiyon odasına koyun. Anestezi cihazları isoflurane indüksiyon odasına teslim etmeye hazır olduğunu doğrulayın. Not: Fare pups kırılgan ve scruff tarafından en iyi işlenmiş. Belgili tanımlık pups arada bir çöp olarak veya stres önlemek için Hemşirelik Anne ile tutmak.</li>
	<li>Yavru tam anestezi sağlar.</li>
	<li>Yavaşça, scruff tarafından fare yavru almak. Not: indüksiyon odası her zaman güvenli ve istikrarlı indüksiyon için kapalı tutun.</li>
	<li>Fare kemirgen maskeyi aktarın. Anestezik akışı indüksiyon odasından maskeyi zaman fareyi hareket ettirerek geçmek emin olun.</li>
	<li>Anestezi onaylamak için bir ayak çimdik gerçekleştirin.</li>
</ol>2. cerrahi Stereoscope altında yordamı ponksiyon
<ol><li>Fare yan recumbency bulunduğu getirin. Yani fare göz stereoscope görüş alanı içinde mask iyi konumlandırılmış onaylayın.</li>
	<li>Yavaşça fare kafa göz stereoscope doğru bakıyor döndürmek. Not: NET odak göz altında stereoscope elde edilmelidir. 40 X cerrahi işlem gerçekleştirmek için kullanılması gereken konumlandırma için 16 X büyütme, önerilir. Etik izni izin veriyorsa, bıyık ucu kırpma göz görselleştirme kolaylaştırabilir.</li>
	<li>Küçük bağlama forseps kullanarak, dikkatle pups göz dorsal ve ventral göze göz kapakları aşağı doğru basınç uygulayarak çıkıntı.</li>
	<li>Pups göz kapağı, bir yumuşak ama sağlam tutun küçük Forseps ile tutun. Not: Bu göz çıkıntı gerçekleştirmek ve sigara dominant eliyle tutarak dominant el ponksiyon yordamı gerçekleştirmelisiniz gibi kapak için tavsiye edilir.</li>
	<li>Kornea limbus bulmak için stereoscope kullanın. Albino BALB/c limbus dairesel vasküler pleksus kornea için posterior kolayca belirlenebilir.</li>
	<li>0,25 mm çap (30 G) eğimli iğne ile uvea posterior limbal sınırı yakınındaki küçük bir Üveal ponksiyon gerçekleştirin. Sadece iğne kullanmanızı ve yarısından fazlası eğimi (0.5 mm fotoğrafçılık eşdeğeri), delinme uvea. Eğer düzgün idam, Üveal delikler kendinden contalı henüz çalışma maddelerin göz içi enjeksiyon aynı yara yönetilemez duruma gelir. Not: Eğer fare ile oküler anatomi deneyimli Üveal ponksiyon silier beden ve ora serrata arasında yürütülür. Üveal ponksiyon yaparken objektif rüptür uzak durmaya özen göstermelidir.</li>
	<li>Gözün ilk ponksiyon sitesinden ters sitedeki ikinci Üveal ponksiyon gerçekleştirin. Mesafe ve delikler konumunu en iyi duruma getir; 12: 00 olarak dorsal olmak ile 12 ve 06: 00 delikler, göz önünde bulundurun.</li>
	<li>Üveal delikler yordamı her dört gün P24.5 kadar yineleyin. Her ardışık Üveal delik önce belirli objektif zarar nedeniyle travmatik katarakt varlığı Üveal ponksiyon veya açık azalmış oküler baskı sırasında dikkat hayvan durumunu izleyin. Önceki delikler için en iyi sonuç olarak aynı pozisyonlarda tekrar delikler yürütmek için nişan al.</li>
</ol>3. noninvaziv Vivo içinde izleme
<ol><li>Delik veya enjeksiyon deneysel her gün önce fare üzerinde gerçekleştirilen gibi anestezi.</li>
	<li>Yanal recumbency pozisyonda fare ile hafifçe göz çıkıntı.</li>
	<li>Iris damarlara ile cerrahi stereoscope odaklan.</li>
	<li>Iris damarlara cerrahi stereoscope donatılmış bir kamera ile fotoğrafını. Not: gerekli değil rağmen mayoz inducing Iris alan hayvan başına normalize etmek yararlı olabilir. Etik izni mayoz indükleyici Ajan seçerken göz önünde bulundurun. Iris damarlara dikkatli odak daha fazla nicel analiz kolaylaştıracaktır. 40 X büyüklüğü önerilir.</li>
</ol>4. ameliyat sonrası bakım
<ol><li>Ve yavaşça bir cerrahi mat ile katmanlı bir Isıtma yastığı için transfer BALB/c yavru kemirgen maskeden çıkarın.</li>
	<li>Bir damla % 1 tetracaine çözüm delinmiş gözler için geçerlidir. Not: Analjezik diğer çözümleri kullanılabilir, göre etik izin verir.</li>
	<li>Steril normal tuzlu çözüm 200 µL Subkutan Enjeksiyon hayvanla hidrat.</li>
	<li>Yavru fok Hemşirelik Anne bir temiz fare kafes içinde dönün.</li>
	<li>Kurtarma işlemi izlemek. Yavru köpek-meli muktedir deambulate ve çöp için dönmek.</li>
</ol>5. göz enükleasyon
<ol><li>Hayvan tarafından servikal çıkığı ötenazi. Enükleasyon ve bir stereoscope altında diseksiyon yordamı daha iyi görselleştirme için gerçekleştirin. Not: Farklı ötenazi yordamlar kullanılabilir. Bu kesinlikle uygun etik izni için önerilir.</li>
	<li>Göz maruz geliştirmek için göz kapakları ayır.</li>
	<li>Küçük bir kesim (yaklaşık 0.5 cm) eğri Bonn göz makasla göz kapaklarının canthus olun.</li>
	<li>Maruz Perioküler alanı arkasında mikro bağlama forseps (altında) Dünya yörüngesinde eklemek için kullanın.</li>
	<li>Göz çevresindeki doku al ve yavaşça yukarı doğru çekin. Göz küresi üzerine tutarak önlemek, göz çukuru daha yakın çevre dokular kullanın.</li>
	<li>Eğri Bonn göz makas göz dünyanın arkasında yörüngede yerleştirin.</li>
	<li>Gözün yuvasından serbest bırakılıncaya kadar çevre dokular ile kesti. Not: Bu diseksiyonu tekniği göz anatomisi korur ve daha sonraki analiz yararlanır.</li>
	<li>Konu dışı doku kaldırılması için göz geçin. Konu dışı doku kaldırılması düzelttikten sonra tercih edilen yapılabilir. Not: BALB/c fare melanin eksikliği, bu nedenle, kontrast, artırmak için olan koyu arka planda diseksiyon yordamı kolaylaştırmak için önerilir.</li>
	<li>Kısaca durulama Petri kabına bütün göz steril fosfat tamponlu tuz ile (PBS) dolu.</li>
	<li>Göz 1,5 mL % 4 arabelleğe alınmış formalin çözeltisi içeren bir 2 mL tüp aktarın.</li>
	<li>6 h için göz oda sıcaklığında düzeltmek. Not: Doku sertlik confers sabitleme ve iris diseksiyon kolaylaştırır. Saat tamir olmalı test ve farklı uygulamalar için ayarlanabilir.</li>
</ol>6. Iris diseksiyon yordamı Stereoscope altında
<ol><li>Sabitleştirici çözümü 1,5 mL plastik Pasteur pipet ile (veya benzeri) tüpünden kaldırmak ve göz üç kez taze PBS ile durulayın.</li>
	<li>Sabit göz pürüzsüz bir kuru yüzey (diseksiyon stand) içinde ön odası ile yukarı bakacak şekilde yerleştirin.</li>
	<li>Eğimli bir 30 G iğne ile bir giriş noktası için limbus arka gerçekleştirin.</li>
	<li>Anterior segment küçük bağlama Forseps ile tutarak, bir ucu Clayman-kenasen düz makas önceden oluşturulmuş ataşını. Not: Bu sigara dominant el ile forseps ve makas ile baskın kontrol etmek için tavsiye edilir.</li>
	<li>Döndürme sırasında göz bağlama Forseps ile gözün arka segment kaldırmak için limbus kesin. Not: kısmi kesim gerçekleştirme, doku ve büyük ölçüde devam etmek için makas iç ucu işlemini kolaylaştırır izin verir.</li>
	<li>Aşağı doğru bakan, objektif ortaya ön parçasının getirin.</li>
	<li>Lens dikkatli bir şekilde küçük Forseps ile kapma ve yukarı doğru çekerek çıkarın. Not: Eğimli bir iğne ponksiyon ve objektif çekmek için kullanılabilir.</li>
	<li>Aşağı bakacak şekilde kornea ve görüş alanı için dikey kesim ile ön parçasının getirin.</li>
	<li>Yavaşça silier vücuda posterior doku küçük bağlama Forseps ile kapmak.</li>
	<li>Clayman-kenasen düz makasla vücut silier'Trabeküler meshwork kaldırmak ve iris yalıtmak için anterior kırpmaya devam edin. Trabeküler meshwork kaldırılmasını onaylamak; gözü kornea içinde hareket etmeliyiz.</li>
	<li>Dikkatli bir şekilde ön kadeh PBS 200 µL içeren bir 96-şey plakasına kornea tutan küçük bağlama Forseps ile aktarın.</li>
	<li>Kornea su kuyusunda tutarak devam edin ve bir pipet ile PBS ile temizlenerek iris incelemek. Not: iris kalır yapışık kornea, Trabeküler bazı meshwork için hediye ve eğimi 30 G iğne olabilir eğer gözü yerinden yardımcı olmak için kullanılabilir.</li>
	<li>Kornea küçük bağlama Forseps ile 96 kuyudan çıkarın ve daha fazla çözümleme için iyi izole Iris tutun.</li>
	<li>Serbest dalgalanma Iris örnekleri 4 ° C'de depolayın Not: sabit varlık rağmen Iris serbest yüzer örnekleri uzun süreli depolama tavsiye edilmez.</li>
</ol>7. olası deneysel okuma
<ol><li>Disseke süsen kan damarlarının görselleştirmek için boyama yöntemleri işaretleri trombosit endotel hücre adezyon molekülü (PECAM) -1 gibi yüzen bütün Dağı immünhistokimya kullanın veya isolectin B4. Alternatif olarak, tüm vücut perfüzyon vasküler, floresan etiketli yüksek molekül ağırlıklı dextrans gibi boyama ile kullanın.</li>
	<li>Vivo noninvaziv resimler silico düz montaj yapmak ve tam Iris damarlara uygun görüntüleme yazılımlarıyla ölçmek için kullanın. Not: Damarlara sayılabilir, in vivo ve in vitroDansitometresi kullanarak, veya damarlara analiz yazılım9.</li>
	<li>Nükleik asitler ve protein çıkarma, delinmiş gözlerin moleküler analizi yapmak için PCR veya immunoblotting yöntemini tarafından takip için bütün göz küresi işlemek. Not: Moleküler analiz dokuların en iyi sabit olmayan doku ile gerçekleştirilir ama sabit olmayan Iris diseksiyon son derece zordur ve tüm göz kullanımı istatistiksel olarak anlamlı sonuçlar önceki çalışmalar8' render.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Morrison, J. C., Van Buskirk, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anterior+collateral+circulation+in+the+primate+eye.">Anterior collateral circulation in the primate eye.</a> Ophthalmology. 90 (6), 707-715 (1983).</li><li>Dreyfuss, J. L., Giordano, R. J., Regatieri, C. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ocular+Angiogenesis.">Ocular Angiogenesis.</a> J Ophthalmol. 2015, 892043 (2015).</li><li>Breuss, J. M., Uhrin, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=VEGF-initiated+angiogenesis+and+the+uPA/uPAR+system.">VEGF-initiated angiogenesis and the uPA/uPAR system.</a> Cell Adh Migr. 6 (6), 535-615 (2012).</li><li>Rodrigues, G. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neovascular+glaucoma:+a+review.">Neovascular glaucoma: a review.</a> Int J Retina Vitreous. 2, 26 (2016).</li><li>Stahl, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+mouse+retina+as+an+angiogenesis+model.">The mouse retina as an angiogenesis model.</a> Invest Ophth Vis Sci. 51 (6), 2813-2826 (2010).</li><li>DiPietro, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Angiogenesis+and+wound+repair:+when+enough+is+enough.">Angiogenesis and wound repair: when enough is enough.</a> J Leukocy Biol. 100 (5), 979-984 (2016).</li><li>Eming, S., Brachvogel, B., Odorisio, T., Koch, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+angiogenesis:+Wound+healing+as+a+model.">Regulation of angiogenesis: Wound healing as a model.</a> Prog Histochem Cytoc. 42 (3), 115-170 (2007).</li><li>Beaujean, O., Locri, F., Aronsson, M., Kvanta, A., Andr&#233;, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+in+vivo+model+of+puncture-induced+iris+neovascularization.">A novel in vivo model of puncture-induced iris neovascularization.</a> PloS One. 12 (6), e0180235 (2017).</li><li>Zudaire, E., Gambardella, L., Kurcz, C., Vermeren, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Computational+Tool+for+Quantitative+Analysis+of+Vascular+Networks.">A Computational Tool for Quantitative Analysis of Vascular Networks.</a> PloS One. 6 (11), (2011).</li><li>Dorrell, M., Uusitalo-Jarvinen, H., Aguilar, E., Friedlander, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ocular+neovascularization:+basic+mechanisms+and+therapeutic+advances.">Ocular neovascularization: basic mechanisms and therapeutic advances.</a> Surv Ophthalmol. 52 Suppl 1, S3-S19 (2007).</li><li>Kvanta, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ocular+angiogenesis:+the+role+of+growth+factors.">Ocular angiogenesis: the role of growth factors.</a> Acta Ophthalmol. 84 (3), 282-288 (2006).</li><li>Salman, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intrasilicone+Bevacizumab+Injection+for+Iris+Neovascularization+after+Vitrectomy+for+Proliferative+Diabetic+Retinopathy.">Intrasilicone Bevacizumab Injection for Iris Neovascularization after Vitrectomy for Proliferative Diabetic Retinopathy.</a> Ophthalmic Res. 49 (1), 20-24 (2013).</li><li>Jeong, Y. C., Hwang, Y. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Etiology+and+Features+of+Eyes+with+Rubeosis+Iridis+among+Korean+Patients:+A+Population-Based+Single+Center+Study.">Etiology and Features of Eyes with Rubeosis Iridis among Korean Patients: A Population-Based Single Center Study.</a> PloS One. 11 (8), e0160662 (2016).</li><li>Speier, S., Nyqvist, D., K&#246;hler, M., Caicedo, A., Leibiger, I. B., Berggren, P. -. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noninvasive+high-resolution+in+vivo+imaging+of+cell+biology+in+the+anterior+chamber+of+the+mouse+eye.">Noninvasive high-resolution in vivo imaging of cell biology in the anterior chamber of the mouse eye.</a> Nat Protoc. 3 (8), 1278-1286 (2008).</li><li>Stefansson, E., Landers, M. B., Wolbarsht, M. L., Klintworth, G. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neovascularization+of+the+Iris+-+an+Experimental-Model+in+Cats.">Neovascularization of the Iris - an Experimental-Model in Cats.</a> Invest Ophth Vis Sci. 25 (3), 361-364 (1984).</li><li>Nork, T. M., Tso, M., Duvall, J., Hayreh, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+Mechanisms+of+Iris+Neovascularization+Secondary+to+Retinal+Vein+Occlusion.">Cellular Mechanisms of Iris Neovascularization Secondary to Retinal Vein Occlusion.</a> Arch Ophthalmol-Chic. 107 (4), 581-586 (1989).</li><li>Hjelmeland, L. M., Stewart, M. W., Li, J. W., Toth, C. A., Burns, M. S., Landers, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+Experimental-Model+of+Ectropion+Uveae+and+Iris+Neovascularization+in+the+Cat.">An Experimental-Model of Ectropion Uveae and Iris Neovascularization in the Cat.</a> Invest Ophth Vis Sci. 33 (5), 1796-1803 (1992).</li><li>Tolentino, M. J., Miller, J. W., Gragoudas, E. S., Chatzistefanou, K., Ferrara, N., Adamis, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascular+endothelial+growth+factor+is+sufficient+to+produce+iris+neovascularization+and+neovascular+glaucoma+in+a+nonhuman+primate.">Vascular endothelial growth factor is sufficient to produce iris neovascularization and neovascular glaucoma in a nonhuman primate.</a> Arch Ophthalmol-Chic. 114 (8), 964-970 (1996).</li><li>Paula, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rabbit+Rubeosis+Iridis+Induced+by+Intravitreal+Latex-derived+Angiogenic+Fraction.">Rabbit Rubeosis Iridis Induced by Intravitreal Latex-derived Angiogenic Fraction.</a> Curr Eye Res. 36 (9), 857-859 (2011).</li><li>Takei, A., Ekstr&#246;m, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+Transfer+of+Prolyl+Hydroxylase+Domain+2+Inhibits+Hypoxia-inducible+Angiogenesis+in+a+Model+of+Choroidal+Neovascularization.">Gene Transfer of Prolyl Hydroxylase Domain 2 Inhibits Hypoxia-inducible Angiogenesis in a Model of Choroidal Neovascularization.</a> Sci Rep. 7, 42546 (2017).</li></ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

Mevcut iletişim kuralında, indüksiyon Üveal ponksiyon tarafından Iris vasküler tepki için yeni bir yöntem sunulur. Ponksiyon yara iyileşme mekanizmalarını tetikler ve vasküler Iris10,11yanıt-e doğru teşvik etmektedir. Gibi PDR ve nerede retina göz posterior segmentte yanıtlarını yaygınlaşacak anjiogenik rubeosis iridis, İris12 artan bir vaskülarizasyon klinik durumda sonuçlanacak NVG, oküler patolojiler anlaşarak bu ,13.
Kornea avasküler ve şeffaflık kaynaklanan kendine özgü kolajen yapısı sahiptir. Buna paralel olarak, gözün iris damarlara görselleştirme için ön segment anjiyografi Iris kan damarlarının vivo içinde noninvaziv yöntemler13,14ile doğrudan görselleştirme tarafından ulaşılabilir olduğunu. Iris neovaskülarizasyon önceki hayvan modelleri karmaşık cerrahi müdahaleler gerçekleştirilen15,16,17, neredeydin büyük gözlü hayvanlar üzerinde veya belirli anjiogenik maddelerin göz içi enjeksiyonla dayanıyordu 18 , 19. Bu yöntemde, pigment eksik BALB/c fare kullanımı Iris damarlara vivo içindedoğrudan gözlem tanır ve böylece eğitim için yeni bir araç sağlayan farelerde, Iris neovaskülarizasyon noninvaziv miktar sağlar içinde vivo angiogenez.
Ayrıca, fare Iris diseksiyon için sunulan yöntem damar belirli işaretleri ile delik kaynaklı Iris neovaskülarizasyon analiz sağlar. Burada, damarları illustratively PECAM-1 antikorlar ile lekeli ve floresan mikroskopi tarafından görüntülenmiştir Iris. Serbest dalgalanma, Bütün-mount immunostaining kurallarıdır kolayca elde ve oldukça sıradan. Buna ek olarak, perfüzyon yöntemleri kan damarları için bu modelde gerçekleştirilebilir. Vasküler belirli boyama Iris damar yapısı ve böylece miktar, kullanıcı tabanlı tarafından değerlendirilmesi veya yazılım analizi, Iris neovasculature9verir. Yukarıda açıklanan8,20, Iris neovasculature, çizim gün 15 sonrası-puncture-indüksiyon değerlendirildi. Yine de, Iris vaskülarizasyon üzerindeki etkileri 4 gün sonrası-puncture-delik kaynaklı Iris neovaskülarizasyon modeli değerlendirilmesi üzerinde özel dayalı farklı zaman noktalarda yürütülen olduğunu düşündüren indüksiyon, gibi erken görülebilir deneysel gereksinimleri.
Bu özellikle diğer hayvan modeli göre fareler gözleri boyutu ile ilgili bazı sorunlar bu protokolü sunar durumuna dikkat çekicidir. Aşırı objektif dokunuşlar önlemek veya göze zarar Üveal ponksiyon yordamı, yürütülürken özen gösterilmelidir. Oküler koşulu gözlenmesi paramount ve hayvanlar ile ilgili deneysel katarakt görüntüleme veya oküler basıncında düşüş hariç ve uygun şekilde euthanized. Fare süsen son derece kırılgan ve biraz yapışkan. Uygun diseksiyon ve yalıtım doku iletişim kuralı için bir kritik adım sunar. Trabeküler meshwork doğru bir ayrılık ön odasından gözü yerinden için gereklidir. Ayrıca, kırılganlık nedeniyle, aşağı akım moleküler analiz bozar doku fiksasyon Iris yalıtımı gerektirir. Yine de, bir moleküler analiz sabitlenmemiş bütün göz sunulan yöntem8' e başarıyla uygulandı.
Özet olarak, açıklanan protokol bir roman ponksiyon kaynaklı Iris neovaskülarizasyon fare modeli sunar. Bu model içinde vivo noninvaziv doğrudan görselleştirme angiogenez izin vermenin avantajına sahiptir. Büyük gözlü hayvan kullanımını önler ve etik kısıtlama eşliğinde gibi Ayrıca, küçük kemirgen kullanımı sunulan modeli rubeosis iridis, çalışmaları için cazip işler. Ayrıca, yordamı kullanışlılığı vivo içinde angiogenez yeni bir model olarak artırılması kendinden contalı ponksiyon yoluyla pro veya anti-anjiogenik maddelerin enjeksiyonu ile kombine edilebilir.

Silier vücut ve koroid ile birlikte iris gözün en bozukluklarına doku uvea oluşmaktadır. Iris damarlara göz ön TMMOB homeostazı korumada esastır. Atar ve toplar damarlardaki arasında bol anastomoz bağlantıları bir sonucu olarak, besin ve oksijen Iris kendisi sadece, ama tüm ön bölümüne göz1temini Iris kan damarları sağlar.
Yeni kan damarları veya önceden varolan olanlardan angiogenez oluşumu geliştirme ve2şifa yara gibi fizyolojik süreçlerde esastır. Angiogenez ince kurallı faktörlere, vasküler endotelyal büyüme faktörü (VEGF) ve plazminojen aktivatör inhibitör (PAI), hem de birden fazla inflamatuar faktörleri çok sayıda tarafından düzenlenir ve bu faktörlerin bir dengesizlik için patolojik yol açabilir angiogenez3.
Gözlerimin içine neovaskülarizasyon proliferatif Diyabetik retinopati (PDR) ve neovasküler glokom (NVG) gibi görme tehdit eden hastalıkların nedeni. Bu oküler hastalıklar, Fokal neovaskülarizasyon yaygın olarak retina dokularının henüz inflamatuar dengesizlik bulunur ve anjiogenik faktörler derinliklerinde her iki arka ve ön oküler göz rubeosis iridis ile ilişkili olmuştur Iris patolojik neoangiogenesis4için klinik terim. Bu patolojiler angiogenez geçmesi yetişkin Iris kapasitesini gösterir. Farelerde, oküler damarlara doğumdan sonra olgunlaşmamış ve olgunlaşma doğum sonrası devam ediyor. Bu özelliği gelişme oksijen kaynaklı retinopati, yakından retinopati Prematüre5klinik durumunu taklit eden bir model fare modeli istismar edilir. Buna ek olarak, anjiogenez ve iltihap yara iyileşme mekanizmalarını6önemli bir rol oynamaktadır ve kendisi şifa yara angiogenez modelleri7ile ilişkili olduğu düşünülmektedir.
Bu çalışmada, delik kaynaklı Iris neovaskülarizasyon modeli açıklar. Üveal delikler limbus, dış sınırı hangi sistem şifa yara tetikleyen tarafından Iris neovaskülarizasyon neden gerçekleştirilir. Nedeniyle şeffaflık kornea, iris damarlara olabilir kolayca vivo içinde noninvaziv yöntemlerle analiz. Delinmiş gözleri plazminojen etkinleştirme ve inflamatuar işaretleri8artış ile ilişkili olduğu düşünülmektedir iris vasküler yatağın bir artış mevcut. Sunulan model anjiogenez ve anjiogenik bileşikler eleme çalışma için yeni bir araç olarak büyük bir potansiyele sahiptir ve anjiogenik işlemleri doğrudan vivo içinde görselleştirme sağlar.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Bonn eye scissors</td>
			<td>Bausch &#38; Lomb</td>
			<td>23060</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clayman-Vannas curved scissors</td>
			<td>Bausch &#38; Lomb</td>
			<td>E3383 C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clayman-Vannas straight scissors</td>
			<td>Bausch &#38; Lomb</td>
			<td>E3383 S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Objective adapter for camera</td>
			<td>Handcrafted</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Or any system that allows adapting a camera to the microscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating Pad 100-110 watts</td>
			<td>Non Applicable</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Available in pet/veterinarian stores</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hypodermic 30g beveled needle</td>
			<td>KDM GmBH germany</td>
			<td>911914</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iphone 4S</td>
			<td>Apple</td>
			<td>Non Applicable</td>
			<td>Or other high resolution image acquistion device</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Baxter</td>
			<td>KDG 9623</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>McPherson tying forceps</td>
			<td>Bausch &#38; Lomb</td>
			<td>E1815 S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro tying forceps</td>
			<td>Bausch &#38; Lomb</td>
			<td>63140</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Minims tetracaine hydrochloride</td>
			<td>Bausch &#38; Lomb</td>
			<td>N/A</td>
			<td>1 % (w/v) Eye Drops</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neutral-buffered formalin</td>
			<td>Bioreagens</td>
			<td>0018-40</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normal saline solution</td>
			<td>Fresenius Kabi</td>
			<td>210352</td>
			<td>0.9 % (w/v) NaCl in injectable water</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate-buffered saline</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>10010023</td>
			<td>Balanced and buffered PBS pH 7.4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dish 10 cm</td>
			<td>Starstedt</td>
			<td>83.3902</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dish 3 cm</td>
			<td>Starstedt</td>
			<td>83.3900</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Safe Seal Tube 2.0 mL</td>
			<td>Starstedt</td>
			<td>72.685.200</td>
			<td>Or any eppendorf style tubes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TC plate 96-well</td>
			<td>Starstedt</td>
			<td>83.3924</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transfer pipette 3.5 mL</td>
			<td>Starstedt</td>
			<td>86.1171</td>
			<td>Or any other Pasteur pipette style</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Univentor 400 anesthesia unit</td>
			<td>Univentor Limited</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Or equivalent flow regulator with induction chamber and mask for volatile anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wild M650 surgical microscope</td>
			<td>Wild Heerbrugg</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Or other surgical or magnifying stereoscope</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

puncture-induced iris neovascularization as a mouse model of rubeosis iridis

Angiogenez noninvaziv değerlendirme için genel bir model olarak delik kaynaklı Iris neovaskülarizasyon modeli açıklar. Model neovasküler Glokom, görme tehdit komplikasyonu diabetik retinopati hedefleme için uygundur. Bu yöntem Iris vasküler yanıt indüksiyon üzerinde kendinden contalı Üveal delikler BALB/c fareler üzerinde bir dizi dayanmaktadır ve fare oküler damarlara doğum sonrası olgunlaşma yararlanır. Fare pups Üveal delikler günden ne zaman belgili tanımlık pups doğal doğum sonrası güne kadar 24,5 onların gözlerini açmak postnatal 12.5, tabi. Nedeniyle saydamlığı kornea Iris damarlara kolayca zaman içinde noninvaziv in vivo yöntemler tarafından çözümlenebilir. Ayrıca, yarı saydam Iris BALB/c farelerin flatmounted en az belirsiz arka plan boyama ile detaylı immunohistologic analiz için olabilir. Bu modelde, anjiogenez esas olarak enflamatuar tarafından tahrik edilmektedir ve plazminojen sistemleri etkinleştirme. Delik kaynaklı modeli Iris neovaskülarizasyon küçük Rodents ikna etmek için ilk ve doğrudan noninvaziv vivo içinde analiz anjiogenik sürecinin izin avantajı vardır. Ayrıca, model anjiogenik modülasyonlu maddelerle, hangi potansiyel angiogenez bir vivo içinde bakış açısı ile çalışmada vurgulamaktadır birleştirilebilir.

Albino BALB/c fare pups P12.5, dördüncü hergün tekrarlanan Üveal delikler için tabi (deneysel gün 0, 4, 8, 12), P24.5 kadar. P27.5, fareler euthanized ve irisler dikkatle (deneysel gün 15) disseke. Fotoğraf fare göz iris vasküler yanıt noninvaziv değerlendirme değerlendirmek için her ponksiyon serisi deneysel her gün önce cerrahi stereoscope bağlı bir kamera ile çekildi. Üveal delikler iris vasküler yanıt sistemi (şekil 1) şifa yara tetikleyen tarafından ikna etmek. Saydam kornea ve melanin eksikliği BALB/c fare nedeniyle artan Iris damarlara deneysel günden 4 (P16.5) kolayca görülebilir ve protokolün süresi boyunca yoğunlaşıyor. PECAM-1 görüntülerde immünhistokimya genel damarlara süsen delinmiş göz kontrollere (Şekil 2) göre artış gösterir.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57398/57398fig1.jpg"> Şekil 1: noninvaziv ponksiyon kaynaklı Iris anjiogenezi izleme. Gün 0, 4, 8, 12 ve 15 delinmiş gözleri ve Denetim Temsilcisi görüntüleri. Iris vasküler yanıt 4 günden itibaren delinmiş gözünde belirgindir. Ölçek çubuğu 1 mm. = <a href="//cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/57398/57398fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57398/57398fig2.jpg"> Şekil 2: delik kaynaklı gözünde Iris vasküler yanıt. PECAM-1 gün 15 süsen, boyama açıklayıcı görüntüleri tam ekran görüntülenir ve denetiminden (kare), alanı büyütülmüş ve gözleri delmiş. Ölçek çubuğu = 400 µm (üst); 200 µm (altta). Vasküler delinmiş süsen dallarında artış dikkat edin. <a href="//cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/57398/57398fig2large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Puncture-Induced Iris Neovascularization as a Mouse Model of Rubeosis Iridis at JoVE.com

Puncture-Induced Iris Neovascularization as a Mouse Model of Rubeosis Iridis

Iris neovaskülarizasyon, iskemik retina hastalığı, ortak bir komplikasyonu görme tehdit neovasküler glokom için neden olabilir. Burada, anjiogenez oransal maddeler noninvaziv değerlendirme için kullanılabilir deneysel Iris neovaskülarizasyon inducing için fare bir protokol açıklayın.

Delici cisim kaynaklı Iris neovaskülarizasyon Rubeosis Iridis bir fare modeli olarak

We describe a model of puncture-induced iris neovascularization as a general model for noninvasive evaluation of angiogenesis. The model is also relevant ...

puncture-induced-iris-neovascularization-as-mouse-model-rubeosis

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Medicine

8.7K Görüntüleme.  Karolinska Institutet. Iris neovaskülarizasyon, iskemik retina hastalığı, ortak bir komplikasyonu görme tehdit neovasküler glokom için neden olabilir. Burada, anjiogenez oransal maddeler noninvaziv değerlendirme için kullanılabilir deneysel Iris neovaskülarizasyon inducing için fare bir protokol açıklayın.

Video: Puncture-Induced Iris Neovascularization as a Mouse Model of Rubeosis Iridis

A Mouse Model of in Utero Transplantation

The transplantation of stem cells and viruses in utero has tremendous potential for treating congenital disorders in the human fetus. For example, in utero transplantation (IUT) of hematopoietic stem cells has been used to successfully treat patients with severe combined immunodeficiency.1,2 In several other conditions, however, IUT has been attempted without success.3 Given these mixed results, the availability of an efficient non-human model to study the biological sequelae of stem cell transplantation and gene therapy is critical to advance this field. We and others have used the mouse model of IUT to study factors affecting successful engraftment of in utero transplanted hematopoietic stem cells in both wild-type mice4-7 and those with genetic diseases.8,9 The fetal environment also offers considerable advantages for the success of in utero gene therapy. For example, the delivery of adenoviral10, adeno-associated viral10, retroviral11, and lentiviral vectors12,13 into the fetus has resulted in the transduction of multiple organs distant from the site of injection with long-term gene expression. in utero gene therapy may therefore be considered as a possible treatment strategy for single gene disorders such as muscular dystrophy or cystic fibrosis. Another potential advantage of IUT is the ability to induce immune tolerance to a specific antigen. As seen in mice with hemophilia, the introduction of Factor IX early in development results in tolerance to this protein.14 
In addition to its use in investigating potential human therapies, the mouse model of IUT can be a powerful tool to study basic questions in developmental and stem cell biology. For example, one can deliver various small molecules to induce or inhibit specific gene expression at defined gestational stages and manipulate developmental pathways. The impact of these alterations can be assessed at various timepoints after the initial transplantation. Furthermore, one can transplant pluripotent or lineage specific progenitor cells into the fetal environment to study stem cell differentiation in a non-irradiated and unperturbed host environment.
The mouse model of IUT has already provided numerous insights within the fields of immunology, and developmental and stem cell biology. In this video-based protocol, we describe a step-by-step approach to performing IUT in mouse fetuses and outline the critical steps and potential pitfalls of this technique.

A Mouse Model of in Utero Transplantation

The mouse model of in utero transplantation is a versatile tool that can be used to study the potential clinical applications of stem cell transplantation and gene therapy in the fetus. In this protocol, we present a general approach to performing this technique

Bir Fare Modeli Utero Organ Nakli

The transplantation of stem cells and viruses in utero has tremendous potential for treating congenital disorders in the human fetus.  For example, in ...

Tıp

Mouse Complete Stasis Model of Inferior Vena Cava Thrombosis

Venous thromboembolism (VTE) includes both deep vein thrombosis (DVT) and pulmonary embolism (PE). In the United States (U.S.), the high morbidity and mortality rates make VTE a serious health concern 1-2. After heart disease and stroke, VTE is the third most common vascular disease 3. In the U.S. alone, there is an estimated 900,000 people affected each year, with 300,000 deaths occurring annually 3. A reliable in vivo animal model to study the mechanisms of this disease is necessary.
The advantages of using the mouse complete stasis model of inferior vena cava thrombosis are several. The mouse model allows for the administration of very small volumes of limited availability test agents, reducing costs dramatically. Most promising is the potential for mice with gene knockouts that allow specific inflammatory and coagulation factor functions to be delineated. Current molecular assays allow for the quantitation of vein wall, thrombus, whole blood, and plasma for assays. However, a major concern involving this model is the operative size constraints and the friability of the vessels. Also, due to the small IVC sample weight (mean 0.005 grams) it is necessary to increase animal numbers for accurate statistical analysis for tissue, thrombus, and blood assays such as real-time polymerase chain reaction (RT-PCR), western blot, enzyme-linked immunosorbent (ELISA), zymography, vein wall and thrombus cellular analysis, and whole blood and plasma assays 4-8.
The major disadvantage with the stasis model is that the lack of blood flow inhibits the maximal effect of administered systemic therapeutic agents on the thrombus and vein wall.

The mouse complete stasis model of inferior vena cava thrombosis yields quantifiable amounts of vein wall tissue and thrombus. It has proven useful for evaluating interactions between the vein wall and the occlusive thrombus and in assessing the progression from acute to chronic inflammation.

İnferior Vena Kava Trombozu Fare Komple Durağanlık Model

Venous thromboembolism (VTE) includes both deep vein thrombosis (DVT) and pulmonary embolism (PE).  In the United States (U.S.), the high morbidity and ...

Rapid Point-of-Care Assay of Enoxaparin Anticoagulant Efficacy in Whole Blood

There is the need for a clinical assay to determine the extent to which a patient's blood is effectively anticoagulated by the low-molecular-weight-heparin (LMWH), enoxaparin. There are also urgent clinical situations where it would be important if this could be determined rapidly. The present assay is designed to accomplish this. We only assayed human blood samples that were spiked with known concentrations of enoxaparin. The essential feature of the present assay is the quantification of the efficacy of enoxaparin in a patient's blood sample by degrading it to complete inactivity with heparinase. Two blood samples were drawn into Vacutainer tubes (Becton-Dickenson; Franklin Lakes, NJ) that were spiked with enoxaparin; one sample was digested with heparinase for 5 min at 37 &deg;C, the other sample represented the patient's baseline anticoagulated status. The percent shortening of clotting time in the heparinase-treated sample, as compared to the baseline state, yielded the anticoagulant contribution of enoxaparin. We used the portable, battery operated Hemochron 801 apparatus for measurements of clotting times (International Technidyne Corp., Edison, NJ). The apparatus has 2 thermostatically controlled (37 &deg;C) assay tube wells. We conducted the assays in two types of assay cartridges that are available from the manufacturer of the instrument. One cartridge was modified to increase its sensitivity. We removed the kaolin from the FTK-ACT cartridge by extensive rinsing with distilled water, leaving only the glass surface of the tube, and perhaps the detection magnet, as activators. We called this our minimally activated assay (MAA). The use of a minimally activated assay has been studied by us and others. 2-4 The second cartridge that was studied was an activated partial thromboplastin time (aPTT) assay (A104). This was used as supplied from the manufacturer. The thermostated wells of the instrument were used for both the heparinase digestion and coagulation assays. The assay can be completed within 10 min. The MAA assay showed robust changes in clotting time after heparinase digestion of enoxaparin over a typical clinical concentration range. At 0.2 anti-Xa I.U. of enoxaparin per ml of blood sample, heparinase digestion caused an average decrease of 9.8% (20.4 sec) in clotting time; at 1.0 I.U. per ml of enoxaparin there was a 41.4% decrease (148.8 sec). This report only presents the experimental application of the assay; its value in a clinical setting must still be established.

Demonstration of a rapid quantitative assay of the inhibition of blood coagulation by the low-molecular-weight-heparin, enoxaparin. The contribution of enoxaparin is assessed by removing its influence through digestion with heparinase. A fuller description of the assay is detailed in our published paper.1 The assay still requires clinical confirmation.

Tüm Kan enoksaparin Antikoagülan Etkinliğinin Rapid Point-of-Care Assay

There is the need for a clinical assay to determine the extent to which a patient's blood is effectively anticoagulated by the ...

Intraductal Injection of LPS as a Mouse Model of Mastitis: Signaling Visualized via an NF-&kappa;B Reporter Transgenic

Animal models of human disease are necessary in order to rigorously study stages of disease progression and associated mechanisms, and ultimately, as pre-clinical models to test interventions. In these methods, we describe a technique in which lipopolysaccharide (LPS) is injected into the lactating mouse mammary gland via the nipple, effectively modeling mastitis, or inflammation, of the gland. This simulated infection results in increased nuclear factor kappa B (NF-&kappa;B) signaling, as visualized through bioluminescent imaging of an NF-&kappa;B luciferase reporter mouse1.
Our ultimate goal in developing these methods was to study the inflammation associated with mastitis in the lactating gland, which often includes redness, swelling, and immune cell infiltration2,3. Therefore, we were keenly aware that incision or any type of wounding of the skin, the nipple, or the gland in order to introduce the LPS could not be utilized in our methods since the approach would likely confound the read-out of inflammation. We also desired a straight-forward method that did not require specially made hand-drawn pipettes or the use of micromanipulators to hold these specialized tools in place. Thus, we determined to use a commercially available insulin syringe and to inject the agent into the mammary duct of an intact nipple. This method was successful and allowed us to study the inflammation associated with LPS injection without any additional effects overlaid by the process of injection. In addition, this method also utilized an NF-&kappa;B luciferase reporter transgenic mouse and bioluminescent imaging technology to visually and quantitatively show increased NF-&kappa;B signaling within the LPS-injected gland4.
These methods are of interest to researchers of many disciplines who wish to model disease within the lactating mammary gland, as ultimately, the technique described here could be utilized for injection of a number of substances, and is not limited to only LPS.

Described here is a technique in which lipopolysaccharide is injected into the lactating mouse mammary gland via the nipple to simulate mastitis, a condition commonly caused by bacterial infection. Lipopolysaccharide injection results in increased nuclear factor kappa B (NF-&kappa;B) signaling, visualized through bioluminescent imaging of an NF-&kappa;B luciferase reporter mouse.

Mastitis Fare Model olarak LPS Intradüktal Enjeksiyon: Sinyal bir NF-KB Reporter Transgenik aracılığı ile görsel

Animal models of human disease are necessary in order to rigorously study stages of disease progression and associated mechanisms, and ultimately, as ...

The In ovo CAM-assay as a Xenograft Model for Sarcoma

Sarcoma is a very rare disease that is heterogeneous in nature, all hampering the development of new therapies. Sarcoma patients are ideal candidates for personalized medicine after stratification, explaining the current interest in developing a reproducible and low-cost xenotransplant model for this disease. The chick chorioallantoic membrane is a natural immunodeficient host capable of sustaining grafted tissues and cells without species-specific restrictions. In addition, it is easily accessed, manipulated and imaged using optical and fluorescence stereomicroscopy. Histology further allows detailed analysis of heterotypic cellular interactions.
This protocol describes in detail the in ovo grafting of the chorioallantoic membrane with fresh sarcoma-derived tumor tissues, their single cell suspensions, and permanent and transient fluorescently labeled established sarcoma cell lines (Saos-2 and SW1353). The chick survival rates are up to 75%. The model is used to study graft- (viability, Ki67 proliferation index, necrosis, infiltration) and host (fibroblast infiltration, vascular ingrowth) behavior. For localized grafting of single cell suspensions, ECM gel provides significant advantages over inert containment materials. The Ki67 proliferation index is related to the distance of the cells from the surface of the CAM and the duration of application on the CAM, the latter determining a time frame for the addition of therapeutic products.

The In ovo CAM-assay as a Xenograft Model for Sarcoma

The in ovo chorioallantoic membrane (CAM) is grafted with fresh sarcoma-derived tumor tissues, their single cell suspensions, and permanent and transient fluorescently labeled established sarcoma cell lines. The model is used to study graft- (viability, Ki67 proliferation index, necrosis, infiltration) and host (fibroblast infiltration, vascular ingrowth) behavior.

<em&gt; Ovo</emSarkoma için bir Xenograftmodel olarak&gt; CAM-testi

Sarcoma is a very rare disease that is heterogeneous in nature, all hampering the development of new therapies. Sarcoma patients are ideal candidates for ...

An Alkali-burn Injury Model of Corneal Neovascularization in the Mouse

Under normal conditions, the cornea is avascular, and this transparency is essential for maintaining good visual acuity. Neovascularization (NV) of the cornea, which can be caused by trauma, keratoplasty or infectious disease, breaks down the so called &lsquo;angiogenic privilege' of the cornea and forms the basis of multiple visual pathologies that may even lead to blindness. Although there are several treatment options available, the fundamental medical need presented by corneal neovascular pathologies remains unmet. In order to develop safe, effective, and targeted therapies, a reliable model of corneal NV and pharmacological intervention is required. Here, we describe an alkali-burn injury corneal neovascularization model in the mouse. This protocol provides a method for the application of a controlled alkali-burn injury to the cornea, administration of a pharmacological compound of interest, and visualization of the result. This method could prove instrumental for studying the mechanisms and opportunities for intervention in corneal NV and other neovascular disorders.

Neovascularization (NV) of the cornea can complicate multiple visual pathologies. Utilizing a controlled, alkali-burn injury model, a quantifiable level of corneal NV can be produced for mechanistic study of corneal NV and evaluation of potential therapies for neovascular disorders.

Fare Kornea Neovaskülarizasyonunun bir Alkali-yanık Yaralanma Modeli

Under normal conditions, the cornea is avascular, and this transparency is essential for maintaining good visual acuity. Neovascularization (NV) of the ...

Excitotoxic Stimulation of Brain Microslices as an In vitro Model of Stroke

Examining molecular mechanisms involved in neuropathological conditions, such as ischemic stroke, can be difficult when using whole animal systems. As such, primary or &#39;neuronal-like&#39; cell culture systems are commonly utilized. While&#160;these systems are relatively easy to work with, and are useful model systems in which various functional outcomes (such as cell death) can be readily quantified, the examined outcomes and pathways in cultured immature neurons (such as excitotoxicity-mediated cell death pathways) are not necessarily the same as those observed in mature brain, or in intact tissue. Therefore, there is the need to develop models in which cellular mechanisms in mature neural tissue can be examined. We have developed an in vitro technique that can be used to investigate a variety of molecular pathways in intact nervous tissue. The technique described herein utilizes rat cortical tissue, but this technique can be adapted to use tissue from a variety of species (such as mouse, rabbit, guinea pig, and chicken) or brain regions (for example, hippocampus, striatum, etc.). Additionally, a variety of stimulations/treatments can be used (for example, excitotoxic, administration of inhibitors, etc.). In conclusion, the brain slice model described herein can be used to examine a variety of molecular mechanisms involved in excitotoxicity-mediated brain injury.

Excitotoxic Stimulation of Brain Microslices as an In vitro Model of Stroke

We have developed a brain slice model which can be used to examine molecular mechanisms involved in excitotoxicity-mediated brain injury.&#160;This technique generates viable mature brain tissue and reduces animal numbers required for experimentation, whilst keeping the neuronal circuitry, cellular interactions, and postsynaptic compartments partly intact.

Bir olarak Beyin Microslices arasında excitotoxic uyarılması<em&gt; In vitro</em&gt; İnme Model

Examining molecular mechanisms involved in neuropathological conditions, such as ischemic stroke, can be difficult when using whole animal systems. As ...

A Mouse Model for Laser-induced Choroidal Neovascularization

The mouse laser-induced choroidal neovascularization (CNV) model has been a crucial mainstay model for neovascular age-related macular degeneration (AMD) research. By administering targeted laser injury to the RPE and Bruch&#8217;s membrane, the procedure induces angiogenesis, modeling the hallmark pathology observed in neovascular AMD. 
First developed in non-human primates, the laser-induced CNV model has come to be implemented into many other species, the most recent of which being the mouse. Mouse experiments are advantageously more cost-effective, experiments can be executed on a much faster timeline, and they allow the use of various transgenic models. The miniature size of the mouse eye, however, poses a particular challenge when performing the procedure. Manipulation of the eye to visualize the retina requires practice of fine dexterity skills as well as simultaneous hand-eye-foot coordination to operate the laser. However, once mastered, the model can be applied to study many aspects of neovascular AMD such as molecular mechanisms, the effect of genetic manipulations, and drug treatment effects. 
The laser-induced CNV model, though useful, is not a perfect model of the disease. The wild-type mouse eye is otherwise healthy, and the chorio-retinal environment does not mimic the pathologic changes in human AMD. Furthermore, injury-induced angiogenesis does not reflect the same pathways as angiogenesis occurring in an age-related and chronic disease state as in AMD.
Despite its shortcomings, the laser-induced CNV model is one of the best methods currently available to study the debilitating pathology of neovascular AMD. Its implementation has led to a deeper understanding of the pathogenesis of AMD, as well as contributing to the development of many of the AMD therapies currently available.

Here, we present the mouse laser-induced choroidal neovascularization (CNV) protocol, an experimental model that re-creates the vascular hallmarks of neovascular age-related macular degeneration (AMD). Once mastered, it can reliably and effectively induce CNV as a model system to test various experimental measures.

Lazer kaynaklı Koroid Neovaskülarizasyonlarında A Fare Modeli

The mouse laser-induced choroidal neovascularization (CNV) model has been a crucial mainstay model for neovascular age-related macular degeneration (AMD) ...

Tachycardia-Induced Cardiomyopathy As a Chronic Heart Failure Model in Swine

A stable and reliable model of chronic heart failure is required for many experiments to understand hemodynamics or to test effects of new treatment methods. Here, we present such a model by tachycardia-induced cardiomyopathy, which can be produced by rapid cardiac pacing in swine.
A single pacing lead is introduced transvenously into fully anaesthetized healthy swine, to the apex of the right ventricle, and fixated. Its other end is then tunneled dorsally to the paravertebral region. There, it is connected to an in-house modified heart pacemaker unit that is then implanted in a subcutaneous pocket. 
After 4 - 8 weeks of rapid ventricular pacing at rates of 200 - 240 beats/min, physical examination revealed signs of severe heart failure - tachypnea, spontaneous sinus tachycardia, and fatigue. Echocardiography and X-ray showed dilation of all heart chambers, effusions, and severe systolic dysfunction. These findings correspond well to decompensated dilated cardiomyopathy and are also preserved after the cessation of pacing.
This model of tachycardia-induced cardiomyopathy can be used for studying the pathophysiology of progressive chronic heart failure, especially hemodynamic changes caused by new treatment modalities like mechanical circulatory supports. This methodology is easy to perform and the results are robust and reproducible.

Here, we present a protocol to produce tachycardia-induced cardiomyopathy in swine. This model represents a potent way to study the hemodynamics of progressive chronic heart failure and the effects of applied treatment.

Kronik kalp yetmezliği model domuz olarak taşikardi kaynaklı kardiyomiyopati

A stable and reliable model of chronic heart failure is required for many experiments to understand hemodynamics or to test effects of new treatment ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and drugs. It is widely used in many studies on the physiological functions of vascular smooth muscle, the pathogenesis of vascular diseases such as hypertension, and the development of smooth muscle relaxant drugs. The mouse is a widely used model animal with a large pool of disease models and genetically modified strains. We introduced this method to measure the isometric contraction of mouse mesenteric artery in detail. A 1.4-mm segment of mouse mesenteric resistance artery was isolated and mounted on a myograph chamber by passing two steel wires through its lumen. After equilibration and normalization steps, the vessel segment was potentiated by a high-K+ solution twice prior to the contraction assay. As an example of the application of this method in drug development, we measured the relaxant effect of a novel natural substance, neoliensinine, isolated from a Chinese herb, embryos of the lotus seed (Nelumbo nucifera Gaertn.) on mouse mesenteric arteries. The vessel segments mounted on the myograph chamber were stimulated with a high-K+ solution. When the force tension reached a stable sustained phase, cumulative doses of neoliensinine were added to the chamber. We found that neoliensinine had a dose-dependent relaxant effect on smooth muscle contraction, thus suggesting that it bears potential activity against hypertension. In addition, as the vessel segment can survive at least 4 hours after mounting and maintain contractility induced by the high-K+ solution for many times, we suggest that the wire myograph system may be used for the time-consuming process of drug screening.

The wire myograph technique is used to investigate vascular smooth muscle functions and screen new drugs. We report a detailed protocol for measuring the isometric contractility of the mouse mesenteric artery and for screening new relaxants of vascular smooth muscle.

İzometrik Contractility ölçüm tel Myography kullanarak fare mezenterik arter

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...