Dr. Wei Qi He (Soochow Üniversitesi, Suzhou, Çin) ve Dr. Yan Ning Qiao (Shaanxi Normal Üniversitesi, Xi'an, Çin Halk Cumhuriyeti) Teknik yardım için teşekkür ederiz. Bu eser Ulusal Doğa Bilimleri Foundation of China (Grant 31272311, 81373295 ve 81473420) ve proje finanse öncelik Akademik Program geliştirme, Jiangsu Yükseköğretim kurumlarının (Grant No tarafından desteklenmiştir ysxk-2016).

Hayvan manipülasyonlar kurumsal hayvan bakım ve kullanım Komitesi (IACUC) modeli hayvan araştırma merkezi Nanjing Üniversitesi tarafından onaylanmıştır.
1. çözüm hazırlık
<ol><li>137.0 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 1.8 mM CaCl2, 1 mM MgCl2∙6H2O, 5.6 mM D-glukoz ve 10 mM HEPES, kullanarak HEPES Tyrode solüsyonu (H-T) hazırlamak pH 7.3 7.4.</li>
	<li>Kalsiyum olmadan HEPES Tyrode çözüm hazırlamak (Ca2 +-H-T ücretsiz) 140.6 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 1 mM MgCl2∙6H2O, 5.6 mM D-glukoz ve 10 mM HEPES, pH 7.3 7.4 kullanarak.</li>
	<li>124 mM 15.7 mM NaCl, 124,0 mM KCl, 1.8 mM CaCl2, 1 mM MgCl2∙6H2O, 5.6 mM D-glukoz ve 10 mM HEPES, pH kullanarak KCl (yüksek K+) kullanarak HEPES Tyrode solüsyonu hazırlayın 7.3 7.4.</li>
</ol>2. deney hazırlık
<ol><li>H-T ve 37 ° C su banyosu kullanarak yüksek-K+ çözümler onceden.</li>
	<li>Myograph sistem, veri edinme donanım ve bilgisayarı açın.</li>
	<li>Dikkatle tüm myograph odaları 5 mL H-T çözeltisi ile doldurun.</li>
	<li>Petri tabağı 4 ° C H-T ve Ca2 +20 mL ile doldurulması-H-T çözümleri, sırasıyla ücretsiz ve depolamak buzda.</li>
	<li>10 cm boyalı Petri kabına 20 mL H-T çözeltisi ile doldurun ve oda sıcaklığında korumak.</li>
</ol>3. fare mezenterik arter diseksiyonu
<ol><li>8-12-hafta-yaşlı C57BL/6J kadın ya da erkek fare tarafından servikal çıkığı ötenazi. Fare yukarı bakacak şekilde, karın ile pin.</li>
	<li>Karın % 70 etanol ile nemlendirin. O zaman, cilt makas ile ventral orta çizgi boyunca kasığından ve kesikler ilk kesik başından itibaren aşağıya doğru bacaklar her iki tarafta yapın. Cilt her iki tarafta çek; Karın zarını açmaya benzer insizyon olun.</li>
	<li>Makas kullanarak, özofagus, iki nokta üst üste ve tamamen damarlara vücuttan beslenme ile gastrointestinal sistem izole etmek için diğer bağ dokusu kesmek.</li>
	<li>Forseps ile izole segment kanı yıkamak için H-T 2.4 adımda hazırlanan ve yavaşça doku birkaç kez H-T çözümde Durulama soğuk içeren çanak içine taşıyın.</li>
	<li>İzole segment içine 2.5 adımda hazırlanan kuşe Petri kabına aktarmak ve mezenterik arter diseksiyonu oda sıcaklığında gerçekleştirin.</li>
	<li>Mide, değişir, ileum ve caecum yönünde düzeltmek ve mide ve caecum sırasıyla sol ve sağ tarafında, pin.</li>
	<li>Mezenterik damarlara yatak germek ve bağırsak disseke mezenterik arterler ortaya çıkarmak için pin ile düzeltin. Not: Bu koşullar altında üstüne damar damar vardır.</li>
	<li>Stereoskopik mikroskop iletim ışık kaynağında açmak ve arterler mikroskop altında incelemek. Tüm doku çözümde dalmış emin olun.</li>
	<li>Forseps ile arterlerin çevresinde yağ dokuları klamp ve diseksiyon makasla keserek bağ dokusu arterler yalıtmak. Damarların yaralanmasına kaçının.</li>
</ol>4. arteryel montaj
<ol><li>Aktarım ve mezenterik arter ağaç soğuk Ca2 +sokmak-ücretsiz (2.4 adımda hazırlanan) H-T çözüm forseps ile aşırı arterler sıkma tarafından.</li>
	<li>Arter 1.4 mm kısmı bir mezenterik arcade Bağırsak duvarına proksimal kesmek ve iki forseps bu arter parçasının her iki dikkatlice açın.</li>
	<li>Paslanmaz çelik tel 2,5 cm uzunluğunda iki kesimi hazırlamak ve onları aynı çanak yerleştirin.</li>
	<li>Forseps kullanarak atardamara bir ucunu yavaşça kelepçe ve dikkatlice iki tel, başka bir forseps yardımıyla tek tek arter lümen yerleştirin. Teller düz tutulur ve endotel dokunmayın emin olun.</li>
	<li>İki forseps kullanarak, iki çelik teller dişli geminin dışında aynı anda kelepçe ve dikkatle gemi daha önce H-T çözüm (adım 2.3) ile dolu bir myograph odasına Petri kabına aktarın.</li>
	<li>Jaws ayrı montaj için yer açmak için canı cehenneme. Her iki tarafında iki forseps kullanarak iki eklenen kablolardan biri klamp ve taşıyıcıyı çene boşluğu (Şekil 1A) koyun.</li>
	<li>Her iki vidayı mikrometre (Şekil 1B) bağlı çene etrafında klempe tel sarın.</li>
	<li>Sol taraftaki vidayı saat yönünde büküm tarafından tamir. Sağ forseps kullanarak Tel düzeltmek, daha sonra saat yönünde (Şekil 1 c) büküm sağ taraftaki vidayı düzeltmek. Gemi her zaman çene boşluğu içinde olduğundan emin olun, ama zarar görmemesi için çene dokunmayın.</li>
	<li>Mikrometre (Şekil 1 d) kullanarak iki jaws kapatın. Onlar birbirleriyle ve sabitlenmemiş tel üst kısmında sabit tel olduğunu dokunma ama bu iki jaws yeterince yakın olduğundan emin olun.</li>
	<li>Sağ taraftaki forseps kullanarak, dikkatle unscrewed Tel Dönüştürücü zorlamak için bağlı çene köşesinde katlayın ve sağdaki vida (Şekil 1E) etrafında saat yönünde kaydırmak. O zaman, vida saptamak. Tel sol tarafında bu adımı yineleyin ve sol taraftaki vidayı (Şekil 1F) düzeltin.</li>
	<li>Biraz ayrı jaws dikkatle mikrometre (Şekil 1G) döndürerek hareket ettirin. Gemi germe kaçının. Forseps tel tel dönüştürücü yan yatay düzlemde de mikrometre tarafından taşımak için kullanın. Dikkatle iki çene arasındaki boşluğu sadece iki kablo ağırlayacak mikrometre döndürür.</li>
	<li>Arterler diğer odaları üzerine takmak için 4.2-4.11 adımları yineleyin. Tüm odalar için RGB sinyali, odaları kapsar, % 100 oksijen kaynağı ve sıcaklık probu takın ve 37 ° C'ye ısınma başlangıç Grafik yazılımı açık ve kayıt işlemini başlatmak için Grafiği görünümü penceresinde Başlat düğmesine basın.</li>
	<li>Yaklaşık 20 dk equilibrate.</li>
</ol>5. normalleştirme
Not: deneysel koşullar standartlaştırmak amacıyla ve gemilerin güvenilir fizyolojik yanıt elde etmek için bir normalleştirme yordam gerekli15' tir. Aktif güç ve geminin iç çevresi arasındaki ilişkiyi göre Tel myograph sistemi takılı gemi5,8iç çevresi (IC) değerlendirmek için bir standart normalleştirme program vardır, 9. Kısaca, IC (µm) hesapladığınızda, mikrometre okumak ve değeri X değeri ve dönüştürücü giriş çıkış için kuvvet, duvar gerilimi (mN/mm), dinlenme Yani, Y değeri olarak kullanılır. Program ile donatılmış bir eğri (x, Y) dönmek ve 100 mmHg (IC100) transmural basınç için karşılık gelen IC hesaplamak. Gemi normalleştirilmiş iç çevresi (IC1) için küme etkin yanıt maksimal ne zaman.
<ol><li>Kuvvetleri tüm kanallar için sıfıra küme aygıtta ve başka bir 1-2 min için equilibrate.</li>
	<li>Normalleştirme ayarları seçin "DMT menüve parametreleri aşağıdaki gibi ayarlayın: Mercek kalibrasyon (mm/div): 0,36; Hedef basınç (kPa): 13,3; IC1/IC100: 0.9; Online ortalama süre (saniye): 2; Gecikme süresi (saniye): 60. DMT normalleştirme ayarları penceresini kapatmak için Tamam düğmesini tıklatın.</li>
	<li>Kanal ilgi DMT menü bir DMT normalleştirme karşılık gelen kanal penceresini seçin. Sabit değerleri penceresine aşağıdaki gibi girin: doku endpoints a1: 0.1; Doku endpoints a2: 4; Tel çapı (µm): 40. Pencerenin 1,40 mm hesaplanan gemi uzunluğu görüntüler.</li>
	<li>Uygun doku odası mikrometre okuyun. Mikrometre okuma kutusuna değer girin ve Noktası Ekle düğmesini tıklatın. Bu değer ilk (X0) X değeridir. Sonra 60 s gecikme süresi, kuvvet ve etkili basınç (ERTP) bu mikrometre değerine karşılık gelen pencerede görüntülenir. Aynı anda, mikrometre okuma kutusunu etkin hale gelir.</li>
	<li>Saat yönünün tersi yönde mikrometre çevirerek normalleştirilmiş gemi germek. Mikrometre değer mikrometre okuma kutusuna girin ve Noktası Ekle düğmesini tıklatın. 60 dinleme için bekleyin tekrar s.</li>
	<li>Adımları yineleyin 5.5, gemi germek ve pencere "onun IC1gemi germek için gereken hesaplanan mikrometre ayardır mikrometre X1" değerini görüntüler kadar ölçüm değerleri eklemek devam edin.</li>
	<li>Mikrometre X1 değeri ayarlayın. Not: Normalleştirilmiş gerilim genellikle 1-2 mN olduğunu.</li>
</ol>6. arter daralma kayıt
Not: H-T ve yüksek-K+ çözüm bu bölümde kullanılan da dahil olmak üzere tüm çözümler adım 2.1 hazırlanmıştır.
<ol><li>Normalleştirme sonra 15-20 dk odasında gemi equilibrate. Not: Bu çözüm bu adımda değiştirmenize gerek yoktur.</li>
	<li>Gemi yüksek-K+ çözüm ile iki kez meydan.<ol>
<li>Gemi meydan okumak için 5 mL daralma 10 dk, 3 - 4 kez 5 mL H-T çözeltisi ile yıkayarak takip için ikna etmek için yüksek-K+ çözeltisi ile H-T çözüm değiştirin. Not: Tipik daralma 3 mN ve 2.5 mN12etrafında sabit bir sürekli güç üzerinde bir maksimal kuvvet sahiptir. İlk challenge 2.5 mN aşağıda bir maksimal güç üretir veya sürekli gücü zamanla azalır veya ikinci sorun ilk doz daha daha daha düşük bir kuvvet oluşturur, gemi atılır ve daha fazla araştırma yapılması için kullanılmaz.</li>
	</ol>
</li>
	<li>5 mL daralma ikna etmek için yüksek-K+ çözeltisi ile gemi meydan. 5 dk sonra 0.5 µL neoliensinine hisse senedi çözüm (DMSO 10 mM)14 gemi 1 µM neoliensinine son bir konsantrasyon, dinlenmek için odasına ekleyin.</li>
	<li>Kuvvet ne zaman istikrarlı (Bu genellikle birkaç dakika sürer), t oluşturmak için 4, 6, 8 ve 10 µM için konsantrasyonu artırmak için hisse senedi çözüm her zaman konsantrasyonu için 2 µM. eklemek 1 µL artırmak için odasına neoliensinine hisse senedi çözümü başka bir 0.5 µL Ekle o doz-yanıt eğrisi. Not: Stok ve çalışma konsantrasyonları ilaçlar arasında değişir.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Bevan, J. A., Osher, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+direct+method+for+recording+tension+changes+in+the+wall+of+small+blood+vessels+in+vitro.">A direct method for recording tension changes in the wall of small blood vessels in vitro.</a> Agents and Actions. 2 (5), 257-260 (1972).</li><li>Mulvany, M. J., Halpern, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanical+properties+of+vascular+smooth+muscle+cells+in+situ.">Mechanical properties of vascular smooth muscle cells in situ.</a> Nature. 260 (5552), 617-619 (1976).</li><li>Mulvany, M. J., Halpern, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contractile+Properties+of+Small+Arterial+Resistance+Vessels+in+Spontaneously+Hypertensive+and+Normotensive+Rats.">Contractile Properties of Small Arterial Resistance Vessels in Spontaneously Hypertensive and Normotensive Rats.</a> Circulation Research. 41 (1), 19-26 (1977).</li><li>Mulvany, M. J., Nyborg, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+increased+calcium+sensitivity+of+mesenteric+resistance+vessels+in+young+and+adult+spontaneously+hypertensive+rats.">An increased calcium sensitivity of mesenteric resistance vessels in young and adult spontaneously hypertensive rats.</a> British Journal of Pharmacology. 71 (2), 585-596 (1980).</li><li>Mulvany, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Procedures for investigation of small vessels using small vessel myograph. , (2004).</li><li>Halpern, W., Mulvany, M. J., Warshaw, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanical+properties+of+smooth+muscle+cells+in+the+walls+of+arterial+resistance+vessels.">Mechanical properties of smooth muscle cells in the walls of arterial resistance vessels.</a> The Journal of Physiology. 275, 88-101 (1978).</li><li>Michael, S. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+blood+pressure+arising+from+a+defect+in+vascular+function.">High blood pressure arising from a defect in vascular function.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 105 (18), 6702-6707 (2008).</li><li>Bridges, L. E., Williams, C. L., Pointer, M. A., Awumey, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mesenteric+artery+contraction+and+relaxation+studies+using+automated+wire+myography.">Mesenteric artery contraction and relaxation studies using automated wire myography.</a> Journal of Visualized Experiments. (55), (2011).</li><li>del Campo, L., Ferrer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Wire Myography to Study Vascular Tone and Vascular Structure of Isolated Mouse Arteries. , (2015).</li><li>Fisher, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascular+smooth+muscle+phenotypic+diversity+and+function.">Vascular smooth muscle phenotypic diversity and function.</a> Physiological Genomics. 42 (3), 169-187 (2010).</li><li>Crowley, S. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+roles+for+the+kidney+and+systemic+tissues+in+blood+pressure+regulation+by+the+renin-angiotensin+system.">Distinct roles for the kidney and systemic tissues in blood pressure regulation by the renin-angiotensin system.</a> The Journal of Clinical Investigation. 115 (4), 1092-1099 (2005).</li><li>Qiao, Y. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myosin+phosphatase+target+subunit+1+(MYPT1)+regulates+the+contraction+and+relaxation+of+vascular+smooth+muscle+and+maintains+blood+pressure.">Myosin phosphatase target subunit 1 (MYPT1) regulates the contraction and relaxation of vascular smooth muscle and maintains blood pressure.</a> The Journal of Biological Chemistry. 289 (32), 22512-22523 (2014).</li><li>He, W. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+myosin+light+chain+kinase+in+regulation+of+basal+blood+pressure+and+maintenance+of+salt-induced+hypertension.">Role of myosin light chain kinase in regulation of basal blood pressure and maintenance of salt-induced hypertension.</a> American Journal of Physiology-Heart and Circulatory Physiology. 301 (2), H584-H591 (2011).</li><li>Yang, G. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+identification+of+a+tribenzylisoquinoline+alkaloid+from+Nelumbo+nucifera+Gaertn,+a+novel+potential+smooth+muscle+relaxant.">Isolation and identification of a tribenzylisoquinoline alkaloid from Nelumbo nucifera Gaertn, a novel potential smooth muscle relaxant.</a> Fitoterapia. 124, 58-65 (2018).</li><li>Slez&#225;k, P., Waczul&#237;kov&#225;, I., Bali&#353;, P., P&#250;zserov&#225;, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Accurate+Normalization+Factor+for+Wire+Myography+of+Rat+Femoral+Artery.">Accurate Normalization Factor for Wire Myography of Rat Femoral Artery.</a> Physiological Research. 59 (6), 1033-1036 (2010).</li><li>Kearney, P. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+burden+of+hypertension:+analysis+of+worldwide+data.">Global burden of hypertension: analysis of worldwide data.</a> The Lancet. 365 (9455), 217-223 (2005).</li><li>Good, N. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hydrogen+Ion+Buffers+for+Biological+Research.">Hydrogen Ion Buffers for Biological Research.</a> Biochemistry. 5 (2), 467-477 (1966).</li></ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

Hipertansiyon ciddi komplikasyonlar kardiyovasküler dahil olmak üzere ve böbrek hastalıkları16nedeniyle yaygın halk sağlığı mücadeledir. Hipertansiyon patogenezinde anlama ve keşfetmek daha fazla Anti-Hipertansif İlaçlar Bu alandaki acil bir görev haline gelmiştir. Kan basıncı oluşturulur ve dolaşım periferik direnç tarafından yapılmaktadır. Poiseuille'nın kanunen nispeten küçük arterlerin dolaşım direnci büyük bir kısmı oluşturmak ve kan basıncı3,10baskın yapımcısı olarak hizmet vermektedir. Böylece, büyük arter yerine küçük-direnç arterler ölçümü daha kan basıncı çalışmalar için uygundur. Tel myograph teknoloji küçük-direnç arterler fizyolojik fonksiyonları ve vasküler hastalıklar patogenezi okumaya en iyi yöntemleri biridir.
Küçük gemi tel myograph sistemi de diğer raporlarda belgelenmiş oldu ve sıçan mezenterik arterler8 ve fare arter aort9gibi daralma ölçmek için kullanılan. Genetik manipülasyon, çeşitli hastalık modelleri ve uyuşturucu tarama modelleri, fare yararlanarak çok alanda yaygın olarak kullanılan model hayvan haline gelmiştir. Bu nedenle, burada, biz bu yöntemi fare mezenterik arter daralma ölçümü için değiştirilmiş bir protokol sağladı. Bu raporda, başarıyla fare mezenterik arterler contractility değişiklikler temel arabellekleri ve montaj adımları ile ölçülür. Ex vivo vasocontractility ölçüm üzerinde birçok çalışma çözümleri NaHCO3, gibi Krebs çözümleri, içeren fizyolojik tuz solüsyonu taklit etmek için kullanılır. Ancak, bu tür arabellekleri CO2 CaCO3üretiminde kaynaklanan ölçüm boyunca pH değeri ayarlamanız gerekir. H-T çözüm tampon sistemi seçilen ve iyi çalıştı bulundu. SıcaklıkpKdeğeri HEPES üzerinde küçük bir etkisi beri çözüm pH değeri uygun oda sıcaklığında ayarlanır ve 37 ° C 17, değişmez. Buna ek olarak, kullandığımız Ca2 +-ücretsiz H-T çözüm olarak teller gemi daralma Ca2 +tarafından önlemek için gemi lümen aracılığıyla rehberlik. Bu iletişim kuralı içinde başka bir değişiklik montaj prosedürü olduğunu. Bazı raporlar8,9 ve aygıt el ile5 ilk teli çenene sabitleme sonra ikinci tel rehberlik öneririz. Bulduğumuz iki kablo bu yöntem dönüştürücü sınırlı odası alanı yüzünden olası hasar azaltmak çünkü gemi montaj önce gemi lümen yönlendirilir daha iyi çalışır.
Bu yöntem yüksek tekrarlanabilirlik rağmen bazı önemli adımlar daha fazla dikkat edelim. Forseps ve makas neden damarlarına zarar görmemesi için en önemli şey. Gemi diseksiyon sırasında operatör ve forseps hafifçe yağ dokusu uzanan zaman kullanmanız gereken bağ dokusu kesme dikkatle makas kullanın. Buna ek olarak, fiksasyon için gemi sıkma nazikçe yapılmalı ve endotel hasarı endotel hasar gemi anormal yanıt, e.gartış verecektir çünkü teller rehberlik zaman kaçınılmalıdır. normal gemi bir gevşetici etkisi gösterirken , hasarlı gemi belirgin güç gerilim stimülasyon ile asetilkolin, sonra gösterir. Bu fenomen için hasarlı endotel nitrik oksit düzgün üretemez açıklamadır. Not daralma endotel ile ilgili içeren denemede endotel durum güç ölçüm önce test edilmelidir. Dönüştürücü kolayca zor bir güçle uyguladıysanız zarar için buna ek olarak, biz de dikkatle gemi üzerinde jaws monte. Son olarak, biz genellikle sürekli artış değeri üzerinde mikrometre normalleştirme işlemi sırasında kullanmayın. Artış değeri 30 veya 20 µm başlangıçta ise ve 10 µm etkili basınç sonra 11-12 kPa ulaşır. Bu yöntem normalleştirme zamanı azaltabilir ve esneme, böylece gemi hasar inceltiyorum engel olabilir.
Her ne kadar bizim soruşturma fare mezenterik arterler üzerinde duruldu, bu yöntem de aort, bronşlar ve diğer böbrek de dahil olmak üzere küçük gemiler, beyin ve pulmoner arterler için kullanılabilir. Bu sistem dört kanal içerir, aynı anda dört paralel örnekleri ölçüm için uygun oldu. Buna ek olarak, tüm bir mezenterik vasküler yatağın en az dört arter kesimleri sağlayabilir, böylece farklı deneysel grupları tasarlamak çok kolaydır. Bizim deneyim göre her arter kesiminin en az 4 saat hayatta ve iyi yanıt-e doğru yüksek-K+ çözüm için en az 6 tekrar üzerinde tutar. Bu özellik çeşitli eklemeler çeşitli aday ilaçların etkileri ölçümleri için son derece yararlıdır. Ancak, aynı zamanda tel myograph sistemi için sınırlamalar vardır. Ex vivo tel myograph deneme sadece izometrik vasocontractility ölçmek mümkün, ancak genellikle gemi karmaşık analiz için diğer ölçümleri ile birleştirilmelidir.
Özetle, biz çok tel myograph sistemini kullanarak fare mezenterik arter isomeric contractility ölçülmesi için bir yöntem nitelendirdi. Bu yöntem vasküler düz kas ve düz kas gevşetici ekran işlevleri değerlendirmek için kullanılabilir.

Burada kullanılan küçük gemi myograph sistem ölçmek için küçük direniş damarlarının iç çapı 100 400 µm. izole küçük gemiler için (yaklaşık 2 mm uzun) arasında değişen izometrik kasılma iki 40-µm çapı kablo tarafından eklenmiş ve o zamanlar oldu mikrometre tarafı ve dönüştürücü tarafı jaws sıralı olarak monte edilmiş. Bu myograph teknik ilk 19721 ' önerdi ve öncelikle Mulvany ve onun meslektaşları2,3,4,5,6tarafından geliştirildi. Şimdi kararlı donanımları, kolay performans ve bir standart normalleştirme yordamı7,8,9ile olgun bir tekniktir. Biz bazı değişikliklerle bu yöntem için fare mezenterik arter ölçümlerde kullanılan.
Vasküler düz kas hemen hemen tüm kan damarlarının duvarlarında hatları. Temel işlevleri çeşitli uyaranlara yanıt olarak Kuvvetleri kasılması ile oluşturmaktır. Vasküler düz kas normal contractility için kan basıncı düzenleme esastır ve beslenme ek10. Anormal kan basıncı sonuçları hastalıkları, hipertansiyon, kalp yetmezliği ve iskemisi. de dahil olmak üzere çeşitli Yönetmeliği Çeşitli çalışmalarda anormal kan basıncı her zaman işlevsel olmayan vasküler düz kas contractility7,11,12,13ile ilişkili olduğunu düşündürmektedir. Myograph yöntemi izometrik contractility vasoconstrictors, inhibitörleri ve ilaçlar da dahil olmak üzere çeşitli uyaranlara tarafından indüklenen fare damarlarının incelenmesi sağlar. Başarılı ölçümleri daralma kan basıncı bakım ve yeni tedavi yaklaşımları keşfetmek için ve vasküler düz kas ilişkili hastalıkların patogenezinde mekanizmaları anlamamıza yardımcı olacaktır.
Birçok Çince otlar yaygın damar hastalıkları klinik tedavisi için kullanılmıştır; Ancak, onların etkili maddeler genellikle bilinmeyen kalır. Böylece, yalıtım ve etkili bileşenleri kimliği roman uyuşturucu gelişimi için çok önemli. Çoklu tel myograph teknoloji otlar aktif bileşenleri süzmek için basit bir yaklaşım sunmaktadır. Biz fare mezenterik arter daralma araştırmak için küçük gemi myograph sistemini kullanarak çeşitli çalışmalarda bildirdi ve doğal bileşikler ile Anti-hipertansiyon etkinlik12,13,14tespit. Burada, biz ayrıntılı tarif protokol için myograph yöntemi ve lotus tohum (Nelumbo nucifera Gaertn.) embriyolar izole neoliensinine gevşetici etkisini değerlendirmek 14.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Multi wire myograph system</td>
			<td>DMT</td>
			<td>610-M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless steel wire</td>
			<td>DMT</td>
			<td>400447</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Geuder dissection scissor</td>
			<td>DMT</td>
			<td>400431</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont forceps</td>
			<td>DMT</td>
			<td>300413</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PowerLab/8SP</td>
			<td>ADInstruments</td>
			<td>ML785</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Software</td>
			<td>ADInstruments</td>
			<td>LabChart 5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>SigmaAldrich</td>
			<td>S5886</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KCl</td>
			<td>SigmaAldrich</td>
			<td>P5405</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCl2</td>
			<td>SigmaAldrich</td>
			<td>C4901</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgCl2&#183;6H2O</td>
			<td>SigmaAldrich</td>
			<td>M2393</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-Glucose</td>
			<td>SigmaAldrich</td>
			<td>G6152</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>A100511-0250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaOH</td>
			<td>SigmaAldrich</td>
			<td>S8045</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMSO</td>
			<td>SigmaAldrich</td>
			<td>D2650</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isometric contractility measurement of the mouse mesenteric artery using wire myography

Telli myograph teknik vasküler düz kaslar yanıt-e doğru depolarization, GPCR agonistler/inhibitörleri ve uyuşturucu. contractility değerlendirmek için kullanılır Vasküler düz kas fizyolojik fonksiyonları, vasküler hastalıklar hipertansiyon gibi patogenezi ve düz kas gevşetici ilaçlar gelişimi üzerinde birçok çalışma yaygın olarak kullanılır. Yaygın olarak kullanılan model hayvan hastalık modelleri ve genetiği değiştirilmiş suşları büyük bir havuz faredir. Biz fare mezenterik arter ayrıntılı izometrik kasılma ölçmek için bu yöntem tanıttı. Fare mezenterik direnç arter 1.4 mm segmentinin izole ve onun Lümen ile iki çelik tel geçirerek myograph odası üzerinde monte edilmiş. Denge ve normalleştirme adımlardan sonra gemi kesimi tarafından iki kez önce daralma tahlil bir yüksek-K+ çözüm potentiated. Bu yöntemde ilaç geliştirme uygulama örneği, fare mezenterik bir Çin bitki, lotus tohum (Nelumbo nucifera Gaertn.) embriyolar izole bir roman doğal madde, neoliensinine, gevşetici etkisi ölçülen arterler. Myograph odası üzerinde monte edilmiş gemi kesimleri ile a yüksek-K+ eriyik teşvik. İstikrarlı bir sürekli faz güç gerilim ulaştığı zaman toplu neoliensinine doz odasına eklenmiştir. Biz o neoliensinine düz kas kasılması, bir doz bağımlı gevşetici etkisi vardı böylece hipertansiyon karşı potansiyel etkinlik ayılar düşündüren bulundu. Buna ek olarak, gemi segment montaj sonra en az 4 saat hayatta kalmak ve çoğu zaman, biz önermek için yüksek-K+ çözüm tarafından indüklenen contractility korumak gibi tel myograph sistem uyuşturucu tarama zaman alan işlem için kullanılabilir.

Biz bir çok tel myograph sistemi kullanarak fare mezenterik arter izometrik contractility ölçülen ve lotus tohum (Nelumbo nucifera Gaertn.) embriyo saf neoliensinine gevşetici etkisi değerlendirildi 14. fare mezenterik direnç arter izole, bağ dokuların temizlenmesi ve 1.4 mm parça halinde kesilmiş. Arter segment Ca2 +iki çelik teller tarafından eklenmiş-ücretsiz bir petri çözümde H-T ve sonra segment myograph odası (Şekil 2A) iki jaws monte edilmiştir. Segment takma sonra iki tel yakın birbirlerine (Şekil 2B) değil ama müessir paralel, olmak için ayarlandı. Kuvvet ölçüm önce gemi bölüt normalleştirilmiş ve gemi stabilize etmek için iki kez yüksek-K+ çözüm potentiated. Normalleştirme işlemi sırasında gemi birkaç kez IC100, değerini erişene dek gergin ve streç her döngüsü sağlam bir kasılma, hızlı gevşeme ve kuvvet bakım dahil 60 s (Şekil 3). Genellikle yüksek-K+ çözüm tarafından indüklenen vasküler düz kas kasılması iki aşamadan, sağlam bir faz ve sürekli faz (Şekil 3) gösterdi. Gemi segment olabilir yüksek-K+için daha fazla deneyler sadece eğer kullanılan-uyarılmış daralma görünür normal ve tekrarlanabilir. Neoliensinine ile tipik bir ölçüm Şekil 4' te gösterilir. Ne zaman kuvvet gerilimi yüksek-sürekli aşama ulaştı K tarafından+ indüklenen, toplu neoliensinine (1, 2, 4, 6, 8 ve 10 µM) deliklerden doz odası kapak eklenir. Dozları arttıkça, kuvvet bir doz bağımlı şekilde azalır. Sonuç o neoliensinine potansiyel bir aday Anti-hipertansiyon uyuşturucu14olarak davranan bir vasküler düz kas gevşetici madde belirtilir.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58064/58064fig1.jpg"> Şekil 1: yordam montaj arter şematik. Mavi çizgiler teller temsil ve kırmızı dikdörtgen arter temsil eder. <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/58064/58064fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58064/58064fig2.jpg"> Resim 2: bir fare mezenterik arter kesimi monte myograph odası. (A) bir fare mezenterik arter kesimi üzerinde iki jaws iki çelik teller kullanarak monte. Beyaz çubuğu 2 mm. (B) bir mikroskopik resim bağlı fare mezenterik arter segmentin paneli (A) =. Siyah bar = 0.5 mm. <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/58064/58064fig2large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58064/58064fig3.jpg"> Şekil 3: normalleştirme yordam ve kullanılmasının muhtemelen yüksek-K+ çözüm tarafından gösterilen temsilcisi orijinal tracings. Sonra ikinci yüksek-K+ stimülasyon, düzenli deneme yapılabilir. <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/58064/58064fig3large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58064/58064fig4.jpg"> Şekil 4: yüksek tarafından sözleşmeli fare mezenterik arter temsilcisi izleme-K + çözüm ve birikmiş neoliensinine doz ekleyerek rahat. Dozları arttıkça, kuvvet azaltılmış doz bağımlı bir şekilde <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/58064/58064fig4large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography at JoVE.com

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

İzometrik Contractility ölçüm tel Myography kullanarak fare mezenterik arter

Telli myograph teknik vasküler düz kas fonksiyonları ve ekran yeni ilaçlar araştırmak için kullanılır. Biz fare mezenterik arter izometrik contractility ölçme ve vasküler düz kas yeni gevşetici süzmek için detaylı bir protokol raporu.

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

isometric-contractility-measurement-mouse-mesenteric-artery-using

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Medicine

14.6K Görüntüleme.  Nanjing University. Telli myograph teknik vasküler düz kas fonksiyonları ve ekran yeni ilaçlar araştırmak için kullanılır. Biz fare mezenterik arter izometrik contractility ölçme ve vasküler düz kas yeni gevşetici süzmek için detaylı bir protokol raporu.

Video: Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

Mouse Model of Middle Cerebral Artery Occlusion

Stroke is the most common fatal neurological disease in the United States 1. The majority of strokes (88%) result from blockage of blood vessels in the brain (ischemic stroke) 2. Since most ischemic strokes (~80%) occur in the territory of middle cerebral artery (MCA) 3, many animal stroke models that have been developed have focused on this artery. The intraluminal monofilament model of middle cerebral artery occlusion (MCAO) involves the insertion of a surgical filament into the external carotid artery and threading it forward into the internal carotid artery (ICA) until the tip occludes the origin of the MCA, resulting in a cessation of blood flow and subsequent brain infarction in the MCA territory 4. The technique can be used to model permanent or transient occlusion 5. If the suture is removed after a certain interval (30 min, 1 h, or 2 h), reperfusion is achieved (transient MCAO); if the filament is left in place (24 h) the procedure is suitable as a model of permanent MCAO. This technique does not require craniectomy, a neurosurgical procedure to remove a portion of skull, which may affect intracranial pressure and temperature 6. It has become the most frequently used method to mimic permanent and transient focal cerebral ischemia in rats and mice 7,8. To evaluate the extent of cerebral infarction, we stain brain slices with 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) to identify ischemic brain tissue 9. In this video, we demonstrate the MCAO method and the determination of infarct size by TTC staining.

We demonstrate in the video a method for producing a middle cerebral artery occlusion in adult mice using an intraluminal monofilament. We also show how to evaluate the extent of cerebral infarction by 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) staining.

Orta Serebral Arter Tıkanıklığı Fare Modeli

Stroke is the most common fatal neurological disease in the United States 1. The majority of strokes (88%) result from blockage of blood vessels in the ...

Tıp

The Application Of Permanent Middle Cerebral Artery Ligation in the Mouse

Focal cerebral ischemia is among the most common type of stroke seen in patients. Due to the clinical significance there has been a prolonged effort to develop suitable animal models to study the events that unfold during ischemic insult. These techniques include transient or permanent, focal or global ischemia models using many different animal models, with the most common being rodents.
The permanent MCA ligation method which is also referred as pMCAo in the literature is used extensively as a focal ischemia model in rodents 1-6. This method was originally described for rats by Tamura et al. in 1981 7. In this protocol a craniotomy was used to access the MCA and the proximal regions were occluded by electrocoagulation. The infarcts involve mostly cortical and sometimes striatal regions depending on the location of the occlusion. This technique is now well established and used in many laboratories 8-13. Early use of this technique led to the definition and description of &#x201C;infarct core&#x201D; and &#x201C;penumbra&#x201D; 14-16, and it is often used to evaluate potential neuroprotective compounds 10, 12, 13, 17. Although the initial studies were performed in rats, permanent MCA ligation has been used successfully in mice with slight modifications 18-20 .
This model yields reproducible infarcts and increased post-survival rates. Approximately 80% of the ischemic strokes in humans happen in the MCA area 21 and thus this is a very relevant model for stroke studies. Currently, there is a paucity of effective treatments available to stroke patients, and thus there is a need for good models to test potential pharmacological compounds and evaluate physiological outcomes. This method can also be used for studying intracellular hypoxia response mechanisms in vivo. 
Here, we present the MCA ligation surgery in a C57/BL6 mouse. We describe the pre-surgical preparation, MCA ligation surgery and 2,3,5 Triphenyltetrazolium chloride (TTC) staining for quantification of infarct volumes.

Middle cerebral artery (MCA) ligation is a technique to study focal cerebral ischemia in animal models. In this method, the middle cerebral artery is exposed by craniotomy and ligated by cauterization. This method gives highly reproducible infarct volumes and increased post-operative survival rates compared to other methods available.

Fare Daimi Orta Serebral Arter ligasyon Of Uygulama

Focal cerebral ischemia is among the most common type of stroke seen in patients. Due to the clinical significance there has been a prolonged effort to ...

Mesenteric Artery Contraction and Relaxation Studies Using Automated Wire Myography

Proximal resistance vessels, such as the mesenteric arteries, contribute substantially to the peripheral resistance. These small vessels of between 100-400 &mu;m in diameter function primarily in directing blood flow to various organs according to the overall requirements of the body. The rat mesenteric artery has a diameter greater than 100 &mu;m. The myography technique, first described by Mulvay and Halpern1, was based on the method proposed by Bevan and Osher2. The technique provides information about small vessels under isometric conditions, where substantial shortening of the muscle preparation is prevented. Since force production and sensitivity of vessels to different agonists is dependent on the extent of stretch, according to active tension-length relation, it is essential to conduct contraction studies under isometric conditions to prevent compliance of the mounting wires. Stainless steel wires are preferred to tungsten wires because of oxidation of the latter, which affects recorded responses3.The technique allows for the comparison of agonist-induced contractions of mounted vessels to obtain evidence for normal function of vascular smooth muscle cell receptors.
We have shown in several studies that isolated mesenteric arteries that are contracted with phenylyephrine relax upon addition of cumulative concentrations of extracellular calcium (Ca2+e). The findings led us to conclude that perivascular sensory nerves, which express the G protein-coupled Ca2+-sensing receptor (CaR), mediate this vasorelaxation response. Using an automated wire myography method, we show here that mesenteric arteries from Wistar, Dahl salt-sensitive(DS) and Dahl salt-resistant (DR) rats respond differently to Ca2+e. Tissues from Wistar rats showed higher Ca2+-sensitivity compared to those from DR and DS. Reduced CaR expression in mesenteric arteries from DS rats correlates with reduced Ca2+e-induced relaxation of isolated, pre-contracted arteries. The data suggest that the CaR is required for relaxation of mesenteric arteries under increased adrenergic tone, as occurs in hypertension, and indicate an inherent defect in the CaR signaling pathway in Dahl animals, which is much more severe in DS.
The method is useful in determining vascular reactivity ex vivo in mesenteric resistance arteries and similar small blood vessels and comparisons between different agonists and/or antagonists can be easily and consistently assessed side-by-side6,7,8.

An automated myography method for force measurements in isolated mesenteric arteries is described. It employs a Mulvany-Halpern Auto Dual Wire Myograph 510A to determine responses to phenylephrine and extracellular calcium. The method allows consistent determination of isometric responses to agonists in small vessels of diameters of 60 - 300 &mu;m, independently.

Otomatik Tel kasılmaların kâğıda çizilmesi Yüklü daralma ve Rahatlama Çalışmaları

Proximal resistance vessels, such as the mesenteric arteries, contribute substantially to the peripheral resistance. These small vessels of between ...

Epidural Intracranial Pressure Measurement in Rats Using a Fiber-optic Pressure Transducer

Elevated intracranial pressure (ICP) is a significant problem in several forms of ischemic brain injury including stroke, traumatic brain injury and cardiac arrest. This elevation may result in further neurological injury, in the form of transtentorial herniation1,2,3,4, midbrain compression, neurological deficit or increased cerebral infarct2,4. Current therapies are often inadequate to control elevated ICP in the clinical setting5,6,7 . Thus there is a need for accurate methods of ICP measurement in animal models to further our understanding of the basic mechanisms and to develop new treatments for elevated ICP.
In both the clinical and experimental setting ICP cannot be estimated without direct measurement. Several methods of ICP catheter insertion currently exist. Of these the intraventricular catheter has become the clinical 'gold standard' of ICP measurement in humans8. This method involves the partial removal of skull and the instrumentation of the catheter through brain tissue. Consequently, intraventricular catheters have an infection rate of 6-11%9. For this reason, subdural and epidural cannulations have become the preferred methods in animal models of ischemic injury. 
Various ICP measurement techniques have been adapted for animal models, and of these, fluid-filled telemetry catheters10 and solid state catheters are the most frequently used11,12,13,14,15. The fluid-filled systems are prone to developing air bubbles in the line, resulting in false ICP readings. Solid state probes avoid this problem (Figure 1). An additional problem is fitting catheters under the skull or into the ventricles without causing any brain injury that might alter the experimental outcomes. Therefore, we have developed a method that places an ICP catheter contiguous with the epidural space, but avoids the need to insert it between skull and brain. 
An optic fibre pressure catheter (420LP, SAMBA Sensors, Sweden) was used to measure ICP at the epidural location because the location of the pressure sensor (at the very tip of the catheter) was found to produce a high fidelity ICP signal in this model. There are other manufacturers of similar optic fibre technologies13 that may be used with our methodology. Alternative solid state catheters, which have the pressure sensor located at the side of the catheter tip, would not be appropriate for this model as the signal would be dampened by the presence of the monitoring screw. 
Here, we present a relatively simple and accurate method to measure ICP. This method can be used across a wide range of ICP related animal models.

A novel technique to record the pressures within the skull is described. The minimally invasive method uses a fibre-optic pressure sensing system to accurately measure intracranial pressure (ICP) in anaesthetized rats without causing significant brain trauma. The technique may be used in a wide range of experimental models.

Bir Fiber optik Basıç kullanarak Sıçanlarda Epidural İntrakraniyal Basınç Ölçümü

Elevated intracranial pressure (ICP) is a significant problem in several forms of ischemic brain injury including stroke, traumatic brain injury and ...

In vivo Measurement of the Mouse Pulmonary Endothelial Surface Layer

The endothelial glycocalyx is a layer of proteoglycans and associated glycosaminoglycans lining the vascular lumen. In vivo, the glycocalyx is highly hydrated, forming a substantial endothelial surface layer (ESL) that contributes to the maintenance of endothelial function. As the endothelial glycocalyx is often aberrant in vitro and is lost during standard tissue fixation techniques, study of the ESL requires use of intravital microscopy. To best approximate the complex physiology of the alveolar microvasculature, pulmonary intravital imaging is ideally performed on a freely-moving lung. These preparations, however, typically suffer from extensive motion artifact. We demonstrate how closed-chest intravital microscopy of a freely-moving mouse lung can be used to measure glycocalyx integrity via ESL exclusion of fluorescently-labeled high molecular weight dextrans from the endothelial surface. This non-recovery surgical technique, which requires simultaneous brightfield and fluorescent imaging of the mouse lung, allows for longitudinal observation of the subpleural microvasculature without evidence of inducing confounding lung injury.

In vivo Measurement of the Mouse Pulmonary Endothelial Surface Layer

The endothelial glycocalyx/endothelial surface layer is ideally studied using intravital microscopy. Intravital microscopy is technically challenging in a moving organ such as the lung. We demonstrate how simultaneous brightfield and fluorescent microscopy may be used to estimate endothelial surface layer thickness in a freely-moving in vivo mouse lung.

Fare Pulmoner Endotelyal Yüzey Katman in vivo ölçümü olarak

The endothelial glycocalyx is a layer of proteoglycans and associated glycosaminoglycans lining the vascular lumen. In vivo, the glycocalyx is highly ...

Assessing Myogenic Response and Vasoactivity In Resistance Mesenteric Arteries Using Pressure Myography

Small resistance arteries constrict and dilate respectively in response to increased or decreased intraluminal pressure; this phenomenon known as myogenic response is a key regulator of local blood flow. In isobaric conditions small resistance arteries develop sustained constriction known as myogenic tone (MT), which is a major determinant of systemic vascular resistance (SVR). Hence, ex vivo&#160;pressurized preparations of small resistance arteries are major tools to study microvascular function in near-physiological states. To achieve this, a freshly isolated intact segment of a small resistance artery (diameter ~260 &#956;m) is mounted onto two small glass cannulas and pressurized. These arterial preparations retain most in vivo characteristics and permit assessment of vascular tone in real-time. Here we provide a detailed protocol for assessing vasoactivity in pressurized small resistance mesenteric arteries from rats; these arteries develop sustained vasoconstriction - approximately 25% of maximal diameter - when pressurized at 70 mmHg. These arterial preparations may be used to study the effect of investigational compounds on relationship between intra-arterial pressure and vasoactivity and determine changes in microvascular function in animal models of various diseases.

Pressure myography is used to assess vasoactivity of small arteries that develop sustained constriction when pressurized. This manuscript provides a detailed protocol to assess in isolated segments of small mesenteric arteries from rats, vasoactivity and the effect of intraluminal pressure on vascular diameter.

Basınç myography kullanma Direnç Mezenterik Arter ise andMyogenic Tepkisi ve vazoaktiviteye Değerlendirilmesi

Small resistance arteries constrict and dilate respectively in response to increased or decreased intraluminal pressure; this phenomenon known as myogenic ...

Isolating and Using Sections of Bovine Mesenteric Artery and Vein as a Bioassay to Test for Vasoactivity in the Small Intestine

Mammalian gastrointestinal systems are constantly exposed to compounds (desirable and undesirable) that can have an effect on blood flow to and from that system. Changes in blood flow to the small intestine can result in effects on the absorptive functions of the organ. Particular interest in toxins liberated from feedstuffs through fermentative and digestive processes has developed in ruminants as an area where productive efficiencies could be improved. The video associated with this article describes an in vitro bioassay developed to screen compounds for vasoactivity in isolated cross-sections of bovine mesenteric artery and vein using a multimyograph. Once the blood vessels are mounted and equilibrated in the myograph, the bioassay itself can be used: as a screening tool to evaluate the contractile response or vasoactivity of compounds of interest; determine the presence of receptor types by pharmacologically targeting receptors with specific agonists; determine the role of a receptor with the presence of one or more antagonists; or determine potential interactions of compounds of interest with antagonists. Through all of this, data are collected real-time, tissue collected from a single animal can be exposed to a large number of different experimental treatments (an in vitro advantage), and represents vasculature on either side of the capillary bed to provide an accurate picture of what could be happening in the afferent and efferent blood supply supporting the small intestine.

The small intestine is frequently exposed to toxins that can influence blood flow and negatively impact nutrient absorption. Using a multimyograph and mesenteric artery and vein isolates, compounds or toxins of interest can be screened for vasoactivity.

Bir Biyoassay olarak Sığır Mezenterik Arter ve Ven Bölüm yalıtma ve kullanma İnce Barsak vazoaktiviteye için Test

Mammalian gastrointestinal systems are constantly exposed to compounds (desirable and undesirable) that can have an effect on blood flow to and from that ...

Measurement of the Pressure-volume Curve in Mouse Lungs

In recent decades the mouse has become the primary animal model of a variety of lung diseases. In models of emphysema or fibrosis, the essential phenotypic changes are best assessed by measurement of the changes in lung elasticity. To best understand specific mechanisms underlying such pathologies in mice, it is essential to make functional measurements that can reflect the developing pathology. Although there are many ways to measure elasticity, the classical method is that of the total lung pressure-volume (PV) curve done over the whole range of lung volumes. This measurement has been made on adult lungs from nearly all mammalian species dating back almost 100 years, and such PV curves also played a major role in the discovery and understanding of the function of pulmonary surfactant in fetal lung development. Unfortunately, such total PV curves have not been widely reported in the mouse, despite the fact that they can provide useful information on the macroscopic effects of structural changes in the lung. Although partial PV curves measuring just the changes in lung volume are sometimes reported, without a measure of absolute volume, the nonlinear nature of the total PV curve makes these partial ones very difficult to interpret. In the present study, we describe a standardized way to measure the total PV curve. We have then tested the ability of these curves to detect changes in mouse lung structure in two common lung pathologies, emphysema and fibrosis. Results showed significant changes in several variables consistent with expected structural changes with these pathologies. This measurement of the lung PV curve in mice thus provides a straightforward means to monitor the progression of the pathophysiologic changes over time and the potential effect of therapeutic procedures.

Here we present a protocol to simply and reliably measure the lung pressure-volume curve in mice, showing that it is sufficiently sensitive to detect phenotypic parenchymal changes in two common lung pathologies, pulmonary fibrosis and emphysema. This metric provides a means to quantify the lung&#8217;s structural changes with developing pathology.

Fare Akciğerler Basınç-hacim Eğrisi Ölçümü

In recent decades the mouse has become the primary animal model of a variety of lung diseases. In models of emphysema or fibrosis, the essential ...

Murine Model of Femoral Artery Wire Injury with Implantation of a Perivascular Drug Delivery Patch

Percutaneous interventions including balloon angioplasty and stenting have been used to restore blood flow in vessels with occlusive vascular disease. While these therapies lead to the rapid restoration of blood flow, these technologies remain limited by restenosis in the case of bare metal stents and angioplasty, or reduced healing and possibly enhanced risk of thrombosis in the case of drug eluting stents. A key pathophysiological mechanism in the formation of restenosis is intimal hyperplasia caused by the activation of vascular smooth muscle cells and inflammation due to arterial stretch and injury. Surgeries that induce arterial injury in genetically modified mice are useful for the mechanistic study of the vascular response to injury but are often technically challenging to perform in mouse models due to the their small size and lack of appropriate sized devices. We describe two approaches for a surgical technique that induces endothelial denudation and arterial stretch in the femoral artery of mice to produce robust neointimal hyperplasia. The first approach creates an arteriotomy in the muscular branch of the femoral artery to obtain vascular access. Following wire injury this arterial branch is ligated to close the arteriotomy. A second approach creates an arteriotomy in the main femoral artery that is later closed through localized cautery. This method allows for vascular access through a larger vessel and, consequently, provides a less technically demanding procedure that can be used in smaller mice. Following either method of arterial injury, a degradable drug delivery patch can be placed over or around the injured artery to deliver therapeutic agents.

We describe a surgical technique that produces wire injury in the femoral artery of mice to induce neointimal hyperplasia to serve as a model testing system for the perivascular delivery of therapeutic compounds for the inhibition of restenosis.

Bir Perivasküler Drug Delivery Patch İmplantasyonunda ile Femoral Arter Tel Yaralanma sıçan Modeli

Percutaneous interventions including balloon angioplasty and stenting have been used to restore blood flow in vessels with occlusive vascular disease. ...

Induction of Accelerated Atherosclerosis in Mice: The "Wire-Injury" Model

Atherosclerosis is a proliferative fibro-inflammatory disease developing in the arterial wall, inducing a deficient blood flow or a lack of blood flow. Moreover, by rupture of the defective vascular wall, atherosclerosis induces occlusive thrombus formation, which represents the main cause of myocardial infarction or stroke and the most frequent cause of death. Despite the advances in the cardiovascular field, many questions remain unanswered, and additional basic research is essential to improve our understanding of the molecular mechanisms during atherosclerosis and its effects. Due to limited clinical studies, there is a need for representative animal models recreating atherosclerotic conditions such as neointima formation after stent implantation, balloon angioplasty, or endarterectomy. Since the mouse presents many advantages and is the most frequently used model for studying molecular processes, the current study proposes an invasive procedure of endothelial denudation, also known as the wire-injury model, which is representative of the human condition of neointima formation in arteries after revascularization procedures.

This study describes an invasive procedure for the induction of accelerated atherosclerosis in mice. In comparison to other methods using electric- or cryo-induced injury, mechanical-induced injury mimics the human condition of restenosis after revascularization therapies and is ideal for the study of the molecular mechanisms involved.

Farelerde Hızlandırılmış Ateroskleroz Indüksiyonu: "Tel-Yaralanma" Modeli

Atherosclerosis is a proliferative fibro-inflammatory disease developing in the arterial wall, inducing a deficient blood flow or a lack of blood flow. ...