Bu eser vatandaşlar United epilepsi (grant numarası 35489); araştırmaları tarafından desteklenmiştir Ulusal (sayı R01NS100954, R01NS099188 vermek) sağlık Enstitüleri; ve Louisiana State Üniversitesi Sağlık Bilimleri Merkezi Malcolm Feist doktora sonrası bursu.

<ol>
	<li>Fisch, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Fisch and Spehlmann's EEG Primer. , (1999).</li><li>Constant, I., Sabourdin, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+EEG+signal:+a+window+on+the+cortical+brain+activity.">The EEG signal: a window on the cortical brain activity.</a> Paediatr. Anaesth. 22 (6), 539-552 (2012).</li><li>Mendez, O. E., Brenner, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increasing+the+yield+of+EEG.">Increasing the yield of EEG.</a> J. Clin. Neurophysiol. 23 (4), 282-293 (2006).</li><li>Smith, S. J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=EEG+in+the+diagnosis,+classification,+and+management+of+patients+with+epilepsy.">EEG in the diagnosis, classification, and management of patients with epilepsy.</a> J. Neurol. Neurosurg. Psychiatry. 76, ii2-ii7 (2005).</li><li>Bauer, G., Trinka, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nonconvulsive+status+epilepticus+and+coma.">Nonconvulsive status epilepticus and coma.</a> Epilepsia. 51 (2), 177-190 (2010).</li><li>Hughes, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Absence+seizures:+a+review+of+recent+reports+with+new+concepts.">Absence seizures: a review of recent reports with new concepts.</a> Epilepsy Behav. 15 (4), 404-412 (2009).</li><li>Mostacci, B., Bisulli, F., Alvisi, L., Licchetta, L., Baruzzi, A., Tinuper, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ictal+characteristics+of+psychogenic+nonepileptic+seizures:+what+we+have+learned+from+video/EEG+recordings--a+literature+review.">Ictal characteristics of psychogenic nonepileptic seizures: what we have learned from video/EEG recordings--a literature review.</a> Epilepsy Behav. 22 (2), 144-153 (2011).</li><li>Smith, S. J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=EEG+in+neurological+conditions+other+than+epilepsy:+when+does+it+help,+what+does+it+add?.">EEG in neurological conditions other than epilepsy: when does it help, what does it add?.</a> J. Neurol. Neurosurg. Psychiatry. 76, ii8-ii12 (2005).</li><li>Kennett, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modern+electroencephalography.">Modern electroencephalography.</a> J. Neurol. 259 (4), 783-789 (2012).</li><li>Thaler, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Only EKG Book You'll Ever Need. , (2012).</li><li>Becker, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fundamentals+of+electrocardiography+interpretation.">Fundamentals of electrocardiography interpretation.</a> Anesth. Prog. 53 (2), 53-63 (2006).</li><li>Luz, E. J. S., Schwartz, W. R., C&#225;mara-Ch&#225;vez, G., Menotti, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ECG-based+heartbeat+classification+for+arrhythmia+detection:+A+survey.">ECG-based heartbeat classification for arrhythmia detection: A survey.</a> Comput. Methods Programs Biomed. 127, 144-164 (2016).</li><li>Bardai, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epilepsy+is+a+risk+factor+for+sudden+cardiac+arrest+in+the+general+population.">Epilepsy is a risk factor for sudden cardiac arrest in the general population.</a> PloS One. 7 (8), e42749 (2012).</li><li>Lamberts, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+prevalence+of+ECG+markers+for+sudden+cardiac+arrest+in+refractory+epilepsy.">Increased prevalence of ECG markers for sudden cardiac arrest in refractory epilepsy.</a> J. Neurol. Neurosurg. Psychiatry. 86 (3), 309-313 (2015).</li><li>Thurman, D. J., Hesdorffer, D. C., French, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sudden+unexpected+death+in+epilepsy:+assessing+the+public+health+burden.">Sudden unexpected death in epilepsy: assessing the public health burden.</a> Epilepsia. 55 (10), 1479-1485 (2014).</li><li>Zayachkivsky, A., Lehmkuhle, M. J., Dudek, F. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+Continuous+EEG+Monitoring+in+Small+Rodent+Models+of+Human+Disease+Using+the+Epoch+Wireless+Transmitter+System.">Long-term Continuous EEG Monitoring in Small Rodent Models of Human Disease Using the Epoch Wireless Transmitter System.</a> J. Vis. Exp. (101), e52554 (2015).</li><li>Bertram, E. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monitoring+for+Seizures+in+Rodents.">Monitoring for Seizures in Rodents.</a> Models of Seizures and Epilepsy. , 97-109 (2017).</li><li>Mishra, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Scn2a+deletion+improves+survival+and+brain-heart+dynamics+in+the+Kcna1-null+mouse+model+of+sudden+unexpected+death+in+epilepsy+(SUDEP).">Scn2a deletion improves survival and brain-heart dynamics in the Kcna1-null mouse model of sudden unexpected death in epilepsy (SUDEP).</a> Hum. Mol. Genet. 26 (11), 2091-2103 (2017).</li><li>Thireau, J., Zhang, B. L., Poisson, D., Babuty, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heart+rate+variability+in+mice:+a+theoretical+and+practical+guide.">Heart rate variability in mice: a theoretical and practical guide.</a> Exp. Physiol. 93 (1), 83-94 (2008).</li><li>Smart, S. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deletion+of+the+K(V)1.1+potassium+channel+causes+epilepsy+in+mice.">Deletion of the K(V)1.1 potassium channel causes epilepsy in mice.</a> Neuron. 20 (4), 809-819 (1998).</li><li>Glasscock, E., Yoo, J. W., Chen, T. T., Klassen, T. L., Noebels, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kv1.1+potassium+channel+deficiency+reveals+brain-driven+cardiac+dysfunction+as+a+candidate+mechanism+for+sudden+unexplained+death+in+epilepsy.">Kv1.1 potassium channel deficiency reveals brain-driven cardiac dysfunction as a candidate mechanism for sudden unexplained death in epilepsy.</a> J. Neurosci. 30 (15), 5167-5175 (2010).</li><li>Moore, B. M., Jerry Jou, ., Tatalovic, C., Kaufman, M., S, E., Kline, D. D., Kunze, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Kv1.1+null+mouse,+a+model+of+sudden+unexpected+death+in+epilepsy+(SUDEP).">The Kv1.1 null mouse, a model of sudden unexpected death in epilepsy (SUDEP).</a> Epilepsia. 55 (11), 1808-1816 (2014).</li><li>Ryvlin, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Incidence+and+mechanisms+of+cardiorespiratory+arrests+in+epilepsy+monitoring+units+(MORTEMUS):+a+retrospective+study.">Incidence and mechanisms of cardiorespiratory arrests in epilepsy monitoring units (MORTEMUS): a retrospective study.</a> Lancet Neurol. 12 (10), 966-977 (2013).</li><li>Stables, C. L., Auerbach, D. S., Whitesall, S. E., D'Alecy, L. G., Feldman, E. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+impact+of+type-1+and+type-2+diabetes+on+control+of+heart+rate+in+mice.">Differential impact of type-1 and type-2 diabetes on control of heart rate in mice.</a> Auton. Neurosci. 194, 17-25 (2016).</li><li>Gehrmann, J., Hammer, P. E., Maguire, C. T., Wakimoto, H., Triedman, J. K., Berul, C. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phenotypic+screening+for+heart+rate+variability+in+the+mouse.">Phenotypic screening for heart rate variability in the mouse.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 279 (2), H733-H740 (2000).</li><li>Goldman, A. M., Glasscock, E., Yoo, J., Chen, T. T., Klassen, T. L., Noebels, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Arrhythmia+in+heart+and+brain:+KCNQ1+mutations+link+epilepsy+and+sudden+unexplained+death.">Arrhythmia in heart and brain: KCNQ1 mutations link epilepsy and sudden unexplained death.</a> Sci. Transl. Med. 1 (2), 2ra6 (2009).</li></ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

Yapılardan ücretsiz yüksek kaliteli EEG-ECG kayıtları elde etmek için her türlü önlemi bozulma ya da implante elektrot ve teller gevşeme önlemek için alınmalıdır. Bir EEG baş implant gevşek hale geldikçe, beyin tel kişilerle düşük sinyal genlikleri için önde gelen düşer. Gevşek implantlar veya zavallı tel kişiler de hareket eserler ve arka plan gürültü kayıtları tanıtımı elektrik sinyallerini bozulma neden olabilir. Potansiyel kafa implantı gevşeme önlemek için diş çimento tabanı implant etrafında bol miktarda maksimal güç ve yapışma sağlamak için kafa derisi insizyon kapatılırken geçerli. Ayrıca özen gösterilmelidir, kürk kalıntıları implant şişlik için önde gelen ve erken ameliyat sonrası iltihap neden olabilir beri dekolmanı implant kafatasına gelen kürk tümüyle kaldırılmasını sağlamak üzere. Zaman içinde baş implantlar tekrarlanan tanıttığım ve hayvan prizden ile ilgili stres nedeniyle gevşetin potansiyeline sahip. Bu nedenle, eğer mümkünse, hayvan birden çok kısa süreli kayıtları yerine tek uzun süre kayıtları gerçekleştirerek takılı/unplugged sayısını en aza indirmek deneyin. Başka bir potansiyel segmanlar implant hasar ve sonraki hayvan yaralanma implant ve wiretop hayvanın eve kafeste arasındaki fiziksel temas kaynağıdır. Wiretops, gıda ihtiyacını ortadan kaldırmak için granül ve nemlendirici jel kafes katta eklenebilir. Son olarak, ECG müşteri adayları bütünlüğünü korumak için hayvan kullanımı, özellikle ECG teller çalıştırdığı vücut kenarları boyunca indirilmelidir.
İmplant veya tel kişi bozulma için buna ek olarak, başka bir potansiyel bir hayvan zinciri kayıt yapılandırmasının hayvan müstakil olma olasılığı (yani, takılı değil veya unhooked) sinyal kaybı için önde gelen bir deney sırasında komplikasyondur. Dekolmanı özellikle çalışan ve sıçrayan ile şiddetli Kasılan nöbetler deneyimi fareler için zahmetli olabilir. Fareyi müstakil olma olasılığını en aza indirmek için tel urgan bolluk miktarını en iyi duruma getirme. En iyi tel uzunluğu genellikle dekolmanı teşvik verebilecek tel kafes her köşesinde keşfetmek hayvan için yeterli bolluk ama değil çok az şey gereksiz gerilim veren arasında bir denge var. En uygun tel uzunluğu belirlemede, orada değil çok olması fare kolayca tel kırık olup olmadığını hangi sinyal kaybına yol açabilir ipinde çiğneyebileceğinden gevşet. Elektrot nanoconnector kullanarak implantlar ile en az 10-telleri (yani, 10-pin/soket çiftleri) 10-telleri daha sık kancasını çıkarmak eğilimi daha azıyla nanoconnectors olarak hayvan zinciri bağlantı için ilave istikrar sağlamak için önemli. Daha fazla hayvan müstakil olma olasılığını azaltmak için bu iletişim kuralı kolayca kayıt odası askıya bir düşük-tork komütatör fare'nın başından telleri bağlarken tarafından değiştirilebilir. Komütatör dikkat edin, böylece fare prizden--dan önleme, burulma zorlanma birikimini azaltmak fare hareket ettikçe çevirerek çalışır.
Büyük bir gücü bu gergin video-EEG-ECG protokol ek uygulamalar için yöntemini değiştirmek için yeteneğidir. Burada açıklandığı gibi sadece altı mevcut on elektrot tel kullanılmaktadır. Ek dört EEG beyin aktivitesinin daha iyi Uzaysal çözünürlük sağlamak için yol açar gibi Ancak, kalan dört teller de implante olması. Alternatif olarak, kullanılmayan kablolar ikisini uyumak/uyanmak durumu belirlemek için önemli olan EEG ile birlikte kas aktivitesi ölçüsü sağlar (EMG), electromyogram kaydetmek için boyun kaslarının içine dikmiş. Başka bir olası değişiklik hayvan tel urgan içerecek şekilde değişiklik tüm vücut pletismografisi odasında kaydetmek olacaktır. Pletismografisi, küçük basınç değişiklikleri ilham ile ilişkili ve sona erme solunum dalga biçimleri dönüştürülür. Bu nedenle, pletismografisi birleşmeyle, video, aynı anda bir kayıt elde etmek teknik olarak mümkün olduğunu EEG, EKG, EMG ve solunum, davranış ve beyin, kalp, kas ve akciğer faaliyetlerinin bir okuma temsil eder. Böyle kapsamlı vivo içinde fizyolojik kayıtları telemetri neredeyse imkansız sistemleri gergin yaklaşım yapmak bugün açıklanan burada farelerde birden fazla biosignals aynı anda sorgulama için özellikle güçlü bir araçtır.

Elektroansefalografi (EEG) ve Elektrokardiyografi (EKG) vivo içinde beyin ve kalp fonksiyonu, sırasıyla değerlendirmek için güçlü ve yaygın olarak kullanılan tekniklerdir. EEG için kafa derisi1elektrotlar takılarak elektrik beyin aktivitesi kaydıdır. Non-invaziv EEG ile kaydedilen sinyal voltaj dalgalanmaları esas olarak kortikal piramidal nöronların1,2tarafından oluşturulan summated eksitatör ve inhibitör postsinaptik potansiyeller kaynaklanan temsil eder. EEG değerlendirilmesi ve epilepsi3,4olan hastalar yönetmek için en yaygın neurodiagnostic testidir. Devamsızlık nöbetler veya şok durum Epileptikus5,6gibi bariz Kasılan davranışsal belirtiler olmadan Epileptik nöbetler ortaya çıktığında özellikle yararlıdır. Diğer taraftan, epilepsi sigara Kasılan bölümleri veya bilinç kaybı neden koşullar olmadan video-EEG izleme7Epileptik nöbetler olarak yanlış teşhis ilgili. Epilepsi alanında kullanışlılığı yanı sıra, uyku bozuklukları, Encephalopathy ve bellek bozuklukları ile ilişkili anormal beyin aktivitesi tespit etmek için hem de genel anestezi ameliyat2 sırasında ek olarak Ayrıca yaygın EEG kullanılır , 8 , 9.
EEG, ECG aksine (veya EKG olarak bazen kısaltılır) kalp10elektriksel aktivitesinin kaydıdır. ECGs genellikle uzuv ekstremitelerde ve kasılma ve gevşeme10,11kalp her döngüsü sırasında Miyokardiyum tarafından üretilen voltaj değişiklikleri algılanmasını sağlar göğüs duvarı elektrotlar takılarak yapılmaktadır. P dalgası, QRS kompleksi ve T dalgası Atriyal depolarizasyon, ventrikül depolarizasyon ve Ventriküler repolarization, sırasıyla10, için karşılık gelen birincil ECG dalga bileşenler normal bir kalp döngüsünün içerir 11. ECG izleme rutin olarak kardiyak aritmiler ve kardiyak iletim sistemi12kusurlarý tanımlamak için kullanılır. Onlar ani kalp durması gibi ani beklenmedik ölümü epilepsi13önemli ölçüde artış riski olduğundan epilepsi hastaları arasında potansiyel olarak yaşamı tehdit eden aritmiler tanımlamak için ECG kullanmanın önemini güçlendirilmiş, 14,15.
Klinik uygulamaları ek olarak, EEG ve ECG kayıtları beyin ve kalp fonksiyon bozukluğu hastalığı fare modelleri tanımlamak için vazgeçilmez bir araç haline gelmiştir. Burada geleneksel olarak bu kayıtlar ayrı olarak gerçekleştirilmiş olsa da, video kaydetmek, EEG ve ECG bir teknik aynı anda farelerde açıklayın. Burada ayrıntılı eş zamanlı video-EEG-ECG yöntemi fare kafasına implante elektrot kayıt cihazları için sabit kablolu olduğu bir hayvan zinciri kayıt yapılandırma kullanır. Tarihsel olarak, bu gergin veya kablolu, yapılandırma standart edilmiş ve en yaygın kullanılan yöntem farelerde EEG kayıtları için; Ancak, kablosuz EEG telemetri sistemleri de son zamanlarda geliştirilmiştir ve popülerlik16kazanmaktadır.
Kablosuz EEG sistemlerine göre hayvan zinciri düzenleme bağlı olarak istediğiniz uygulamayı tercih yapabilir birkaç teknik avantajları sahip olur. Bu avantajı kanalları kayıt EEG veya diğer biopotentials için daha fazla sayıda içerir; elektrot maliyetlerini; elektrot disposability; daha az duyarlılık kaybı sinyal; ve daha büyük frekans bant genişliği (i.e., örnekleme hızı) kayıtları17. Burada anlatılan hayvan zinciri kayıt yöntemi düzgün yapılmazsa, yüksek kaliteli, yapı-Alerjik EEG ve ECG verebilmektedir veri ile birlikte aynı anda, ilgili video davranış izlemek için. Bu EEG ve ECG veri sonra sinirsel, kardiyak tanımlamak için mayınlı veya neurocardiac anormallikler nöbetler, EEG değişimler gibi güç spektrumu, kardiyak iletim bloğu (i.e., kalp atım atlanır) ve kalp hızı değişkenliği değişimler. EEG-ECG nicel yöntemlerin uygulanması göstermek için fare Kcna1 nakavt (- / -) kullanarak bir örnek deney tanıtacağız. Kcna1 - / - fare voltaj Kv1.1 α-alt birimleri eksikliği ve sonuç olarak spontan nöbetler, kardiyak disfonksiyonu ve erken ölüm, yapım onları aynı anda EEG-ECG değerlendirilmesi zararlı için ideal bir model epilepsi ilişkili sergi neurocardiac disfonksiyon.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>VistaVision stereozoom dissecting microscope</td>
			<td>VWR</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dolan-Jenner MI-150 microscopy illuminator, with ring light</td>
			<td>VWR</td>
			<td>MI-150RL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CS Series scale</td>
			<td>Ohaus</td>
			<td>CS200</td>
			<td>for weighing animal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T/Pump professional</td>
			<td>Stryker</td>
			<td></td>
			<td>recirculating water heat pad system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ideal Micro Drill</td>
			<td>Roboz Surgical Instruments</td>
			<td>RS-6300</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ideal Micro Drill Burr Set</td>
			<td>Cell Point Scientific</td>
			<td>60-1000</td>
			<td>only need the 0.8-mm size</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>electric trimmer</td>
			<td>Wahl</td>
			<td>9962</td>
			<td>mini clipper</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>tabletop vise</td>
			<td>Eclipse Tools</td>
			<td>PD-372</td>
			<td>PD-372 Mini-tabletop suction vise</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>fine scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14058-11</td>
			<td>ToughCut, Straight, Sharp/Sharp, 11.5 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Crile-Wood needle holder</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>12003-15</td>
			<td>Straight, Serrated, 15 cm, with lock - For applying wound clips</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont #7 forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11297-00</td>
			<td>Standard Tips, Curved, Dumostar, 11.5 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adson forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11006-12</td>
			<td>Serrated, Straight, 12 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Olsen-Hegar needle holder with suture cutter</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>12002-12</td>
			<td>Straight, Serrated, 12 cm, with lock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>scalpel handle #3</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>10003-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>surgical blades #15</td>
			<td>Havel&#39;s</td>
			<td>FHS15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-0 surgical suture</td>
			<td>Unify</td>
			<td>S-N618R13</td>
			<td>non-absorbable, monofilament, black</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>gauze sponges</td>
			<td>Coviden</td>
			<td>2346</td>
			<td>12 ply, 7.6 cm x 7.6 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>cotton-tipped swabs</td>
			<td>Constix</td>
			<td>SC-9</td>
			<td>15.2-cm total length</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>super glue&#160;</td>
			<td>Loctite</td>
			<td>LOC1364076</td>
			<td>gel control</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Michel wound clips, 7.5mm</td>
			<td>Kent Scientific</td>
			<td>INS700750</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>polycarboxylate dental cement kit</td>
			<td>Prime-dent</td>
			<td>010-036</td>
			<td>Type 1 fine grain</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>tuberculin syringe</td>
			<td>BD</td>
			<td>309623</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>polyethylene tubing</td>
			<td>Intramedic</td>
			<td>427431</td>
			<td>PE160, 1.143 mm (ID) x 1.575 mm (OD)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>chlorhexidine&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C9394</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ethanol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>E7023-500ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Puralube vet ointment</td>
			<td>Dechra Veterinary Products</td>
			<td></td>
			<td>opthalamic eye ointment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mouse anesthetic cocktail</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Ketamine (80 mg/kg), Xylazine (10 mg/kg), and Acepromazine (1 mg/kg)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>carprofen</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Rimadyl (trade name)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HydroGel</td>
			<td>ClearH20</td>
			<td>70-01-5022</td>
			<td>hydrating gel; 56-g cups</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ponemah&#160; software</td>
			<td>Data Sciences International</td>
			<td></td>
			<td>data acquisition and analysis software; version 5.2 or greater with Electrocardiogram Module</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>7700 Digital Signal conditioner</td>
			<td>Data Sciences International</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>12 Channel Isolated Bio-potential Pod</td>
			<td>Data Sciences International</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>fish tank</td>
			<td>Topfin</td>
			<td></td>
			<td>for use as recording chamber; 20.8 gallon aquarium; 40.8 cm (L) X 21.3 cm (W) X 25.5 cm (H)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital Communication Module (DCOM)</td>
			<td>Data Sciences International</td>
			<td>13-7715-70</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>12 Channel Isolated Bio-potential Pod</td>
			<td>Data Sciences International</td>
			<td>12-7770-BIO12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>serial link cable</td>
			<td>Data Sciences International</td>
			<td>J03557-20</td>
			<td>connects DCOM to bio-potential pod</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acquisition Interface (ACQ-7700USB)</td>
			<td>Data Sciences International</td>
			<td>PNM-P3P-7002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>network video camera</td>
			<td>Axis Communications</td>
			<td></td>
			<td>P1343, day/night capability</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>8-Port Gigabit Smart Switch</td>
			<td>Cisco</td>
			<td>SG200-08</td>
			<td>8-port gigabit ethernet swith with 4 power over ethernet supported ports (Cisco Small Business 200 Series)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10-pin male nanoconnector with guide post hole</td>
			<td>Omnetics</td>
			<td>NPS-10-WD-30.0-C-G</td>
			<td>electrode for implantation on the mouse head</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10-socket female nanoconnector with guide post</td>
			<td>Omnetics</td>
			<td>NSS-10-WD-2.0-C-G</td>
			<td>connector for electrode implant</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.5-mm female touchproof connector cables</td>
			<td>PlasticsOne</td>
			<td>441</td>
			<td>1 signal, gold-plated; for connecting the wiring from the head-mount implant to the bio-potential pod</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>soldering iron</td>
			<td>Weller</td>
			<td>WESD51 BUNDLE</td>
			<td>digital soldering station</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>solder</td>
			<td>Bernzomatic</td>
			<td>327797</td>
			<td>lead free, silver bearing, acid flux core solder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>heat shrink tubing</td>
			<td>URBEST</td>
			<td></td>
			<td>collection of tubing with 1.5- to 10-mm internal diameters</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>heat gun</td>
			<td>Dewalt</td>
			<td>D26960</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mounting tape (double-sided)</td>
			<td>3M Scotch</td>
			<td>MMM114</td>
			<td>114/DC Heavy Duty Mounting Tape, 2.54 cm x 1.27 m&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>desktop computer</td>
			<td>Dell</td>
			<td></td>
			<td>recommended minimum requirements: 3rd Gen Intel Core i7-3770 processor with HD4000 graphics; 4 GB RAM, 1 GB AMD Radeon HD 7570 video card; 1 TB hard drive; Windows 7 OS&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>permanent marker</td>
			<td>Sharpie</td>
			<td>37001</td>
			<td>black color, ultra fine point</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>toothpicks</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>for mixing and applying the polycarboxylate dental cement</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LabChart Pro software</td>
			<td>ADInstruments</td>
			<td></td>
			<td>power spectrum software; version 8.1.3 or greater</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kubios HRV software</td>
			<td>Univ. of Eastern Finland</td>
			<td></td>
			<td>HRV analysis software; version 2.2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Notepad</td>
			<td>Microsoft</td>
			<td></td>
			<td>simple text editor software</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

simultaneous video-eeg-ecg monitoring to identify neurocardiac dysfunction in mouse models of epilepsy

Epilepsi, nöbet kalp ritim bozuklukları gibi kalp hızı değişiklikleri, iletim bloklar, asystoles ve potansiyel olarak epilepsi (SUDEP) beklenmedik ani ölüm riskini artırabilir aritmiler uyandırmak. Elektroansefalografi (EEG) ve Elektrokardiyografi (EKG) anormal beyin ve hastalarda kalp ritimleri için izlemek için yaygın olarak kullanılan klinik tanı araçları vardır. Burada, aynı anda video, EEG ve ECG ölçü davranış, beyin ve kalp faaliyetleri, farelerde sırasıyla, kaydetmek için bir teknik kullanılmıştır. Burada açıklanan tekniği bir hayvan zinciri kullanır (kabloluYani) fare kafasına implante elektrot kayıt cihazları için sabit kablolu kayıt yapılandırma. Kablosuz telemetri sistemleri kayıt için karşılaştırıldığında, hayvan zinciri düzenleme kayıt EEG veya diğer biopotentials için kanalları daha olası çok sayıda gibi çeşitli teknik avantajları sahiptir; elektrot maliyetlerini; ve daha büyük frekans bant genişliği (Yani, örnekleme oranı) kayıtları. Bu teknik temelleri de kolayca Elektromiyografi (EMG) veya pletismografisi kas ve solunum aktivite değerlendirmesi gibi diğer biosignals sırasıyla kayıt yerleştirmek için değiştirilebilir. EEG-ECG kayıtları nasıl açıklayan ek olarak, biz de nöbetler, EEG spektral güç, kardiyak fonksiyon ve bir fare ile kullanarak bir örnek deneyde gösteren kalp hızı değişkenliği, elde edilen verileri ölçmek için yöntemler detay epilepsi Kcna1 gen silme nedeniyle. Video-EEG-ECG epilepsi veya diğer nörolojik hastalık fare modellerinde izleme disfonksiyon beyin, kalp ya da beyin-kalp etkileşimleri düzeyde tanımlamak için güçlü bir araç sağlar.

Neurocardiac anormallikleri tanımlamak için EEG-ECG kayıtları verileri çözümlemek nasıl göstermek için sonuçları gösterilir bir Kcna1-/- fare (2 aylık) 24-h EEG-ECG kaydı için. Onlar güvenilir ve yaygın jeneralize Tonik klonik nöbet etkinlik başlangıç sergi beri voltaj Kv1.1 α- Kcna1 gen tarafından kodlanmış alt birimleri eksikliği için tasarlanmıştır, bu mutant hayvanlar epilepsi sık kullanılan bir genetik model vardır yaklaşık 2-3 vasıl hafta-in yaş20. Ek olarak spontan nöbetler, Kcna1-/- fareler de erken ölüm rastlayan epilepsi başlangıcı ile hem de interictal ve kardiyak Disfonksiyonun nöbet ilişkili21, sergi 22. bu nedenle, Kcna1-/- fareler de sık sık epilepsi (SUDEP), epilepsi ile ilgili önde gelen nedenidir ani beklenmedik ölümü temel potansiyel patofizyolojik süreçlerin eğitim için kullanılan nöbet ile ilgili solunum tutuklama tarafından henüz olarak dahil etmek için inanılır, ölüm kötü mekanizmaları23anladım.
Bu deneyde, Kcna1-/- fare kayıtları EEG bileşenidir tipik olarak bir ilk büyük spike adlı kısa gerilim tarafından takip nöbet başlangıç olarak gözlenen sık spontan nöbetler gösterdi. depresyon, yükseldi ve içinde sonlandırma yüksek genlik içine geçiş bastırma desenleri (şekil 8A) patladı. Aynı anda kaydedilen videoyu kullanarak, electrographic bu el koymaların nöbet benzeri davranışlar, daha sonra tüm vücut Tonik-klonik kasılmalar geliştirilmiş yetiştirme ve forelimb clonus ile karakterize sürdüğü bulundu. Belirtmek gerekirse, onlar yalnız davranış tabanlı nöbetler puanlama bir gözlemci tarafından cevapsız anlamı belli davranışları ile ilişkili olmayan "sessiz" electrographic nöbetler tanımlama yeteneği EEG anahtar avantajları biridir. Bu belirli Kcna1-/- fare nöbet insidansı miktar 15 nöbetler (şekil 8B) 24 saat kayıt döneminde ortaya koydu. Bu el koymaların süresi ~ 60 ortalama s, üzerinden yaklaşık arasında değişen 15-105 s (şekil 8B). Bir peri ictal spektrogram (şekil 8 c) oluşturulan ve göreli spektral güç yoğunluğu analiz öncesi ve sonrası ictal dönemin göstermek için 80-s süresinin nöbet güç spektrumu yazılımı kullanarak değerlendirme için seçilmiştir. Delta frekans bandı sonrası ictal göreli spektral güç ~ 50 önceden ictal temel (şekil 8D) göre % artış olmuştur. Buna ek olarak, diğer yüksek frekans EEG bantlarında sonrası ictal göreli gücü (şekil 8D) önceden ictal dönemine göre karşılık gelen düşüşler sergiledi. Sonrası ictal delta gücü artış ve diğer gruplarla sonrası ictal gücünü düşüşler EEG yavaşlama, bu modeli18uzun, şiddetli vakalarının karakteristik bir göstergesidir.
Kcna1-/recording ECG bileşeni analiz- fare, interictal atlanan kalp atım sayısı el ile yukarıda açıklandığı gibi sayımının gerçekleştirildiği. Bu Kcna1-/- fare atlanan kalp atım frekansını 5,84/h (Tablo 1), olan oldu bir > 5-fold artış bizim önceki çalışmaları18,21WT fareler karşılaştırıldığında. Kcna1-/- fareler, EKG'nin içinde atlanan kalp atım kez QRS kompleksi tarafından bir Atriyoventriküler (AV) iletim bloğu21gösteren şekil 9Aiçinde gösterildiği gibi takip değil P dalgası sergi. Ardından, HRV yazılımını kullanarak, HRV bu hayvan kalp fonksiyonları üzerine etkisi otonom sinir sisteminin bir ölçüsü sağlamak için analiz edildi. HRV aşağıdaki zaman etki alanı ölçü Kcna1için-/- fare hesaplanmıştır: Toplam otonomik değişkenlik; dizinidir standart sapma beat beat aralıkları (SDNN), ve parasempatik sesi bir dizini kök ortalama kare ardışık beat beat farklılıklar (RMSSD). 24 Kcna1için-/- fare (şekil 9B), sinyal Alım yazılım tarafından oluşturulan R-R aralığı değerleri kullanarak HRV yazılım bir kalp hızı 737 atım/dk (Tablo 1) hesaplanan , bizim önceki çalışmaları18farelerde WT benzer olduğu. 2.4 ms ve 3.2 ms, SDNN ve RMSSD değerleri hesaplanan sırasıyla (Tablo 1), hangi are 2 - için 3 - kat hakkında bir normal WT fare18daha yüksektir. Etki alanı HRV çalışmalarında bu Kcna1-/- fare göstermek kalbin anormal otonomik denetim düşündüren artan parasempatik sesi yükseltilmiş saat. Daha sonra biz HRV yazılım HRV frekans etki alanında Tablo 1' de özetlenen aşağıdaki değerini hesaplamak için kullanılan: düşük frekans güç yüzdesi (LF); yüksek frekans güç yüzdesi (HF); ve LF/HF oranı. Eğer bileşenler sempatik ve parasempatik25etkiler yansıtmak için düşünülen, ancak HF bileşenleri parasempatik modülasyon, yansıtmak tahmin edilmektedir. LF/HF oranı sempatik ve parasempatik aktivite göreli dengesini yakalamak için kullanılır.
Son olarak, sinir ve kardiyak Disfonksiyonun nicel tedbirleri kaynaklanan ek olarak, EEG-ECG kayıtları da niteliksel potansiyel neurocardiac disfonksiyon tanımlamak için EEG ve ECG anormallikleri arasındaki zamansal ilişki için analiz edilebilir , daha önce21,26bitmiş gibi. Nöbetler veya interictal epileptiform deşarj EEG içinde tanımlanan zaman, örneğin, karşılık gelen EKG'nin iletim blok veya aritmiler, epileptik beyin aktivitesi tarafından uyarılmış gibi kalp anormallikleri için kontrol. Kcna1içinde-/- fareler, nöbetler bazen bradikardi veya ölümcül21,22' ye devam edebileceği asistoli uyandırmak. Başka bir epilepsi modelinde Kcnq1 mutant fare, iletim bloklar ve asystoles patolojik neurocardiac Interplay26sonucu olduklarını düşündüren interictal EEG akışı ile aynı anda gerçekleşir. Böylece, EEG ve ECG eşzamanlı kayıtları nöbetler ölümcül kardiyak Disfonksiyonun uyandırmak bu yana özellikle epilepsi içinde önemli olan kalp ve beyin arasındaki etkileşim daha tam bir resim sağlar.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57300/57300fig1.jpg"> Şekil 1. Cerrahi alet için prosedür gerek. (1) cerrahi bıçak #15; (2) neşter tanıtıcı #3; (3) Adson forseps; (4) Olsen Hegar iğne bağı; (5) iyi makas; (6) Dumont #7 forseps; (7) Michel klipleri yara; (8) Crile-ahşap iğne bağı; (9) 0.8 mm bit mikro matkapla; (10) elektrik düzeltici. <a href="//cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/57300/57300fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57300/57300fig2.jpg"> Şekil 2. Elektrot implantasyon için hazırlanıyor. (A) örneği 10-soket kadın nanoconnector (yani, elektrot). (B) elektrot EEG ve ECG için implante olması telleri ile masa üstü mengene içinde aşağı katlanmış. Tel renkleri gösterilen. Yukarı işaret, kalan teller kesilecektir. İlave tel elektrot dışarı geliyor büyütülmüş bir görünümünü gösterir. (C) nereye yalıtım şerit göstermek için mavi ECG kablo işaretleme. (D) içinde gümüş filamentler açığa tel izolasyon kapalı şerit için bir neşter bıçak kullanma. (E) kesilmiş EEG gösterilen hazırlanan elektrot son yapılandırması teller ve soyulmuş ECG teller montaj bandı ile zirveye yapıştırılır. İlave montaj bandı ve elektrot dışarı geliyor teller büyütülmüş bir görünümünü gösterir. <a href="//cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/57300/57300fig2large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57300/57300fig3.jpg"> Şekil 3. Elektrot cerrahi eki kafatasında. (A) örnek bir fare taraf ile traş (ok ile gösterilen) implantasyon ECG için tel. (B) kürk gözleri ve kulakları kesik için bir yol yapmak arasında ayrılık. (C) bir kafa derisi kesi yapmak bir neşter kullanarak. (D) kafa derisi kesi. (E) örneği kafatası matkabı siteleri belirtmek için kullanılan dört izleri. (F) yerleştirme elektrot burr deliği Delme sonra kafatası üzerinde. <a href="//cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/57300/57300fig3large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57300/57300fig4.jpg"> Şekil 4. Tünel oluşturma ve implantasyon ECG tellerin. Yaklaşık 6 cm için kesilir ve subkutan tünel kolaylaştırmak için bir ucunda eğimli bir polietilen boru (A) örneği. (B) tünel subkutan yan kesi yerinde başlayan polietilen boru ile. (C) elektrot tüpünden kafasına gelen ECG tel besleme. (D) tüp çıkardıktan sonra tel gergin çekerek. (E) dikiş temel doku üzerinde yerinde tutmak için ECG tel yalıtılmamış maruz kalan kısmına uygulanıyor. Yan kesik yara klip ile (F) kapatılması. <a href="//cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/57300/57300fig4large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57300/57300fig5.jpg"> Şekil 5. EEG teller yerleştiriyorlardı. (A) Black aşağıdaki yerleşim tel zemin kırmızı EEG tel açgözlü ve kafatası burr deliğe yatay besleme,. (B) nanoconnector ve implantasyon takip teller son yapılandırması. (C) şematik gösteren ikili EEG ve ECG yerleşimini, başvuru (REF) yanı sıra teller ve zemin (GND) teller. <a href="//cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/57300/57300fig5large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57300/57300fig6.jpg"> Şekil 6. Belgili tanımlık baş kesme kapatma. (A) caudally başlayan ve rostrally devam elektrot tabanı etrafında diş çimento uygulanması. (B) örneği tüm nanoconnector ve teller, hemen önce belgili tanımlık kesme son ermesiyle çevreleyen diş çimento kap. (C) örneği son kapalı kesik. <a href="//cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/57300/57300fig6large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 7" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57300/57300fig7.jpg"> Şekil 7. Video EEG-ECG sinyalleri kayıt. (A) örnek bir kayıt sırasında gergin bir fare. (B) ekipman yapılandırma in vivo hayvan zinciri video-EEG-ECG kayıt sistemi için gösterilen şematik. Kafatasında implante kadın nanoconnector takılan, bir 10-pin erkek nanoconnector üzerinden kablolama 12 kanallı izole biyo-potansiyel pod arabirime bağlı 1.5 mm kadın kabloları lehimli. Bu pod sonra hangi transferler veri için veri toplama yazılımı ile bir masaüstü bilgisayara bağlı bir sinyal Alım arayüz birimi (alma) sayısallaştırılmış dijital iletişim modülü (DCOM), bir seri bağlantı kablosu ile bağlanır. Video da aynı anda bir ağ video kamera dışında konumlandırılmış ve kafes bitişik ile kazanılır. Kamera bilgisayara bir güç üzerinden Ethernet akıllı anahtarı bağlanır. (C) tipik EEG ve ECG temsilcisi izleri veri aşağıdaki filtreleri ile uygulanan sinyal: 60 Hz çentik, 75 Hz düşük ve 0,3 Hz yüksek geçiren grup filtreleri için EEG; ve 3-Hz yüksek geçiren filtrenin ECG için. <a href="//cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/57300/57300fig7large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 8" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57300/57300fig8.jpg"> Şekil 8. EEG sinyallerinin analizi. (A) temsilcisi spontan nöbet içinde gösterilen bir EEG izleme bir Kcna1-/- fare. (B) her nöbet saati sürelerini arsa gözlenen 24 saat kayıt oturumu sırasında Kcna1-/- fare. Barlar ortalama ± standart sapma için karşılık gelir. (C) Peri ictal spektrogram öncesinde, sırasında ve sonra temsilcisi nöbet frekans ve güç yoğunluğu gösterilen. (D) öncesi ve sonrası ictal süresi boyunca her EEG frekans bandında göreli gücü karşılaştırılması bir artış göreli delta gücü ortaya çıkarır ve teta, Alfa, beta ve gama güç azalır. <a href="//cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/57300/57300fig8large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 9" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57300/57300fig9.jpg"> Şekil 9. ECG sinyallerin analizi. (A) bir örnek ECG izleme bir Kcna1-/- QRS tarafından takip edemiyorum bir P dalgası olarak tecelli bir Atriyoventriküler iletim bloğu önceki normal sinüs ritmi karmaşık gösterilen fare. P dalgası, QRS kompleksi ve R-R aralığı başvurusunu etiketli. (B) bir R-R aralığı serisi temsilcisi bir arsa, ECG kaydından elde Kcna1-/- yener arasındaki süre dalgalanmalar gösteren fare. Kırmızı çizgi düşük frekanslı detrending takip R-R aralığı serisinden kaldırıldı eğilim bileşenleri gösterir. <a href="//cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/57300/57300fig9large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td rowspan="4">Atlanan kalp atım / s</td>
			<td colspan="6">Kalp hızı değişkenliği (HRV)</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="3">Saat alan</td>
			<td colspan="3">Frekans</td>
		</tr>
<tr>
<td>İNSAN KAYNAKLARI</td>
			<td>SDNN</td>
			<td>RMSSD</td>
			<td>EĞER</td>
			<td>HF</td>
			<td rowspan="2">LF/HF oranı</td>
		</tr>
<tr>
<td>(atım/dk)</td>
			<td>(ms)</td>
			<td>(ms)</td>
			<td>(%)</td>
			<td>(%)</td>
		</tr>
<tr>
<td>5.84</td>
			<td>736.8</td>
			<td>2.4</td>
			<td>3.2</td>
			<td>52.27</td>
			<td>46.38</td>
			<td>1.127</td>
		</tr>
</tbody></table>Tablo 1. Miktar atlanan kalp atıyor, kalp hızı (HR) ve kalp hızı değişkenliği (HRV) içinde bir Kcna1-/- fare. HRV aşağıdaki zaman etki alanı ölçüsü verilir: beat beat aralıkları (SDNN)'in standart sapması ve kök ortalama kare ardışık beat beat farklılıklar (RMSSD). Frekans alanında aşağıdaki HRV önlemleri gösterilir: düşük frekans güç yüzdesi (Eğer %); yüksek frekans güç yüzdesi (HF %); ve yüksek frekans güç (LF/HF oranı) düşük frekans güç oranı.

Watch this Scientific Journal Video about Simultaneous Video-EEG-ECG Monitoring to Identify Neurocardiac Dysfunction in Mouse Models of Epilepsy at JoVE.com

Simultaneous Video-EEG-ECG Monitoring to Identify Neurocardiac Dysfunction in Mouse Models of Epilepsy

Burada, biyo sinyalleri kullanarak aynı anda video, farelerde kalp ve beyin kaydetmek için bir iletişim kuralı mevcut elektroansefalografi (EEG) ve Elektrokardiyografi (EKG). Ayrıca elde edilen EEG-ECG kayıtları nöbetler, EEG spektral güç, kardiyak fonksiyon ve kalp hızı değişkenliği için analiz yöntemleri açıklar.

Eş zamanlı Video-EEG-EKG Neurocardiac disfonksiyon epilepsi fare modelleri tanımlamak için izleme

In epilepsy, seizures can evoke cardiac rhythm disturbances such as heart rate changes, conduction blocks, asystoles, and arrhythmias, which can ...

simultaneous-video-eeg-ecg-monitoring-to-identify-neurocardiac

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Genetics

25.2K Görüntüleme.  Louisiana State University Health Sciences Center. Burada, biyo sinyalleri kullanarak aynı anda video, farelerde kalp ve beyin kaydetmek için bir iletişim kuralı mevcut elektroansefalografi (EEG) ve Elektrokardiyografi (EKG). Ayrıca elde edilen EEG-ECG kayıtları nöbetler, EEG spektral güç, kardiyak fonksiyon ve kalp hızı değişkenliği için analiz yöntemleri açıklar.

Video: Simultaneous Video-EEG-ECG Monitoring to Identify Neurocardiac Dysfunction in Mouse Models of Epilepsy

Monitoring Spatial Segregation in Surface Colonizing Microbial Populations

Microbes provide an intriguing system to study social interaction among individuals within a population. The short generation times and relatively simple genetic modification procedures of microbes facilitate the development of the sociomicrobiology field. To assess the fitness of certain microbial species, selected strains or their genetically modified derivatives within one population, can be fluorescently labelled and tracked using microscopy adapted with appropriate fluorescence filters. Expanding colonies of diverse microbial species on agar media can be used to monitor the spatial distribution of cells producing distinctive fluorescent proteins.
Here, we present a detailed protocol for the use of green- and red-fluorescent protein producing bacterial strains to follow spatial arrangement during surface colonization, including flagellum-driven community movement (swarming), exopolysaccharide- and hydrophobin-dependent growth mediated spreading (sliding), and complex colony biofilm formation. Non-domesticated isolates of the Gram-positive bacterium, Bacillus subtilis can be utilized to scrutinize certain surface spreading traits and their effect on two-dimensional distribution on the agar-solidified medium. By altering the number of cells used to initiate colony biofilms, the assortment levels can be varied on a continuous scale. Time-lapse fluorescent microscopy can be used to witness the interaction between different phenotypes and genotypes at a certain assortment level and to determine the relative success of either.

The role of assortment (spatial segregation) in evolutionary scenarios can be examined using simple microbial systems in the laboratory that allow controlled adjustment of spatial distribution. By modifying the founder cell density, various assortment levels can be visualized using fluorescently labelled bacterial strains in the colony biofilms of Bacillus subtilis.

Yüzey koloniler Mikrobiyal Populasyonlarında Mekansal Ayrışma İzleme

Microbes provide an intriguing system to study social interaction among individuals within a population. The short generation times and relatively simple ...

Genetik

Preparation of rAAV9 to Overexpress or Knockdown Genes in Mouse Hearts

Controlling the expression or activity of specific genes through the myocardial delivery of genetic materials in murine models permits the investigation of gene functions. Their therapeutic potential in the heart can also be determined. There are limited approaches for in vivo molecular intervention in the mouse heart. Recombinant adeno-associated virus (rAAV)-based genome engineering has been utilized as an essential tool for in vivo cardiac gene manipulation. The specific advantages of this technology include high efficiency, high specificity, low genomic integration rate, minimal immunogenicity, and minimal pathogenicity. Here, a detailed procedure to construct, package, and purify the rAAV9 vectors is described. Subcutaneous injection of rAAV9 into neonatal pups results in robust expression or efficient knockdown of the gene(s) of interest in the mouse heart, but not in the liver and other tissues. Using the cardiac-specific TnnT2 promoter, high expression of GFP gene in the heart was obtained. Additionally, target mRNA was inhibited in the heart when a rAAV9-U6-shRNA was utilized. Working knowledge of rAAV9 technology may be useful for cardiovascular investigations.

In this manuscript, a method to prepare recombinant adeno-associated virus 9 (rAAV9) vectors to manipulate gene expression in the mouse heart is described.

Fare Kalpler eksprese rAAV9 hazırlanması veya demonte Genler

Controlling the expression or activity of specific genes through the myocardial delivery of genetic materials in murine models permits the investigation ...

QTL Mapping and CRISPR/Cas9 Editing to Identify a Drug Resistance Gene in Toxoplasma gondii

Scientific knowledge is intrinsically linked to available technologies and methods. This article will present two methods that allowed for the identification and verification of a drug resistance gene in the Apicomplexan parasite Toxoplasma gondii, the method of Quantitative Trait Locus (QTL) mapping using a Whole Genome Sequence (WGS) -based genetic map and the method of Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats (CRISPR)/Cas9 -based gene editing. The approach of QTL mapping allows one to test if there is a correlation between a genomic region(s) and a phenotype. Two datasets are required to run a QTL scan, a genetic map based on the progeny of a recombinant cross and a quantifiable phenotype assessed in each of the progeny of that cross. These datasets are then formatted to be compatible with R/qtl software that generates a QTL scan to identify significant loci correlated with the phenotype. Although this can greatly narrow the search window of possible candidates, QTLs span regions containing a number of genes from which the causal gene needs to be identified. Having WGS of the progeny was critical to identify the causal drug resistance mutation at the gene level. Once identified, the candidate mutation can be verified by genetic manipulation of drug sensitive parasites. The most facile and efficient method to genetically modify T. gondii is the CRISPR/Cas9 system. This system comprised of just 2 components both encoded on a single plasmid, a single guide RNA (gRNA) containing a 20 bp sequence complementary to the genomic target and the Cas9 endonuclease that generates a double-strand DNA break (DSB) at the target, repair of which allows for insertion or deletion of sequences around the break site. This article provides detailed protocols to use CRISPR/Cas9 based genome editing tools to verify the gene responsible for sinefungin resistance and to construct transgenic parasites.

QTL Mapping and CRISPR/Cas9 Editing to Identify a Drug Resistance Gene in Toxoplasma gondii

Details are presented on how QTL mapping with a whole genome sequence based genetic map can be used to identify a drug resistance gene in Toxoplasma gondii and how this can be verified with the CRISPR/Cas9 system that efficiently edits a genomic target, in this case the drug resistance gene.

QTL Haritalama ve CRISPR / Cas9 Düzenlemesi, bir İlaç Direnç Geninin Belirlenmesi için<emToksoplasma gondii</em

Scientific knowledge is intrinsically linked to available technologies and methods. This article will present two methods that allowed for the ...

RNA Pull-down Procedure to Identify RNA Targets of a Long Non-coding RNA

Long non-coding RNA (lncRNA), which are sequences of more than 200 nucleotides without a defined reading frame, belong to the regulatory non-coding RNA&#39;s family. Although their biological functions remain largely unknown, the number of these lncRNAs has steadily increased and it is now estimated that humans may have more than 10,000 such transcripts. Some of these are known to be involved in important regulatory pathways of gene expression which take place at the transcriptional level, but also at different steps of RNA co- and post-transcriptional maturation. In the latter cases, RNAs that are targeted by the lncRNA have to be identified. That&#39;s the reason why it is useful to develop a method enabling the identification of RNAs associated directly or indirectly with a lncRNA of interest.
This protocol, which was inspired by previously published protocols allowing the isolation of a lncRNA together with its associated chromatin sequences, was adapted to permit the isolation of associated RNAs. We determined that two steps are critical for the efficiency of this protocol. The first is the design of specific anti-sense DNA oligonucleotide probes able to hybridize to the lncRNA of interest. To this end, the lncRNA secondary structure was predicted by bioinformatics and anti-sense oligonucleotide probes were designed with a strong affinity for regions that display a low probability of internal base pairing. The second crucial step of the procedure relies on the fixative conditions of the tissue or cultured cells that have to preserve the network between all molecular partners. Coupled with high throughput RNA sequencing, this RNA pull-down protocol can provide the whole RNA interactome of a lncRNA of interest.

This RNA pull-down method allows identifying the RNA targets of a long non-coding RNA (lncRNA). Based on the hybridization of home-made, designed anti-sense DNA oligonucleotide probes specific to this lncRNA in an appropriately fixed tissue or cell line, it efficiently allows the capture of all RNA targets of the lncRNA.

Uzun kodlamayan RNA, RNA hedefleri tanımlamak için RNA Pull-down yordamı

Long non-coding RNA (lncRNA), which are sequences of more than 200 nucleotides without a defined reading frame, belong to the regulatory non-coding ...

Identification of Homologous Recombination Events in Mouse Embryonic Stem Cells Using Southern Blotting and Polymerase Chain Reaction

Relative to the issues of off-target effects and the difficulty of inserting a long DNA fragment in the application of designer nucleases for genome editing, embryonic stem (ES) cell-based gene-targeting technology does not have these shortcomings and is widely used to modify animal/mouse genome ranging from large deletions/insertions to single nucleotide substitutions. Notably, identifying the relatively few homologous recombination (HR) events necessary to obtain desired ES clones is a key step, which demands accurate and reliable methods. Southern blotting and/or conventional PCR are often utilized for this purpose. Here, we describe the detailed procedures of using those two methods to identify HR events that occurred in mouse ES cells in which the endogenous Myh9 gene is intended to be disrupted and replaced by cDNAs encoding other nonmuscle myosin heavy chain IIs (NMHC IIs). The whole procedure of Southern blotting includes the construction of targeting vector(s), electroporation, drug selection, the expansion and storage of ES cells/clones, the preparation, digestion, and blotting of genomic DNA (gDNA), the hybridization and washing of probe(s), and a final step of autoradiography on the X-ray films. PCR can be performed directly with prepared and diluted gDNA. To obtain ideal results, the probes and restriction enzyme (RE) cutting sites for Southern blotting and the primers for PCR should be carefully planned. Though the execution of Southern blotting is time-consuming and labor-intensive and PCR results have false positives, the correct identification by Southern blotting and the rapid screening by PCR allow the sole or combined application of these methods described in this paper to be widely used and consulted by most labs in the identification of genotypes of ES cells and genetically modified animals.

Here, we present a detailed protocol for identifying homologous recombination events that occurred in mouse embryonic stem cells using Southern blotting and/or PCR. This method is exemplified by the generation of nonmuscle myosin II genetic replacement mouse models using traditional embryonic stem cell-based homologous recombination-mediated targeting technology.

Fare embriyonik kök hücre kullanarak Southern blot ve polimeraz zincir reaksiyonu Homolog rekombinasyon olaylar tanımlaması

Relative to the issues of off-target effects and the difficulty of inserting a long DNA fragment in the application of designer nucleases for genome ...

Characterizing Histone Post-translational Modification Alterations in Yeast Neurodegenerative Proteinopathy Models

Neurodegenerative diseases, such as amyotrophic lateral sclerosis (ALS) and Parkinson&#39;s disease (PD), cause the loss of hundreds of thousands of lives each year. Effective treatment options able to halt disease progression are lacking. Despite the extensive sequencing efforts in large patient populations, the majority of ALS and PD cases remain unexplained by genetic mutations alone. Epigenetics mechanisms, such as the post-translational modification of histone proteins, may be involved in neurodegenerative disease etiology and progression and lead to new targets for pharmaceutical intervention. Mammalian in vivo and in vitro models of ALS and PD are costly and often require prolonged and laborious experimental protocols. Here, we outline a practical, fast, and cost-effective approach to determining genome-wide alterations in histone modification levels using Saccharomyces cerevisiae as a model system. This protocol allows for comprehensive investigations into epigenetic changes connected to neurodegenerative proteinopathies that corroborate previous findings in different model systems while significantly expanding our knowledge of the neurodegenerative disease epigenome.

This protocol outlines experimental procedures to characterize genome-wide changes in the levels of histone post-translational modifications (PTM) occurring in connection with the overexpression of proteins associated with ALS and Parkinson&#39;s disease in Saccharomyces cerevisiae models. After SDS-PAGE separation, individual histone PTM levels are detected with modification-specific antibodies via Western blotting.

Histon translasyonel modifikasyon değişiklikler Maya nörodejeneratif Proteinopathy modellerinde karakterize

Neurodegenerative diseases, such as amyotrophic lateral sclerosis (ALS) and Parkinson&#39;s disease (PD), cause the loss of hundreds of thousands of lives ...

Enhanced Yeast One-hybrid Screens To Identify Transcription Factor Binding To Human DNA Sequences

Identifying the sets of transcription factors (TFs) that regulate each human gene is a daunting task that requires integrating numerous experimental and computational approaches. One such method is the yeast one-hybrid (Y1H) assay, in which interactions between TFs and DNA regions are tested in the milieu of the yeast nucleus using reporter genes. Y1H assays involve two components: a &#8216;DNA-bait&#8217; (e.g., promoters, enhancers, silencers, etc.) and a &#8216;TF-prey,&#8217; which can be screened for reporter gene activation. Most published protocols for performing Y1H screens are based on transforming TF-prey libraries or arrays into DNA-bait yeast strains. Here, we describe a pipeline, called enhanced Y1H (eY1H) assays, where TF-DNA interactions are interrogated by mating DNA-bait strains with an arrayed collection of TF-prey strains using a high density array (HDA) robotic platform that allows screening in a 1,536 colony format. This allows for a dramatic increase in throughput (60 DNA-bait sequences against &#62;1,000 TFs takes two weeks per researcher) and reproducibility. We illustrate the different types of expected results by testing human promoter sequences against an array of 1,086 human TFs, as well as examples of issues that can arise during screens and how to troubleshoot them.

Here, we present an enhanced yeast one-hybrid screening protocol to identify the transcription factors (TFs) that can bind to a human DNA region of interest. This method uses a high-throughput screening pipeline that can interrogate the binding of &#62;1,000 TFs in a single experiment.

İnsan DNA dizileri için bağlama transkripsiyon faktörü belirlemek için gelişmiş Maya bir melez ekranlar

Identifying the sets of transcription factors (TFs) that regulate each human gene is a daunting task that requires integrating numerous experimental and ...

Exploring Sequence Space to Identify Binding Sites for Regulatory RNA-Binding Proteins

Gene regulation plays an important role in all cells. Transcriptional, post-transcriptional (or RNA processing), translational, and post-translational steps are used to regulate specific genes. Sequence-specific nucleic acid-binding proteins target specific sequences to control spatial or temporal gene expression. The binding sites in nucleic acids are typically characterized by mutational analysis. However, numerous proteins of interest have no known binding site for such characterization. Here we describe an approach to identify previously unknown binding sites for RNA-binding proteins. It involves iterative selection and amplification of sequences starting with a randomized sequence pool. Following several rounds of these steps-transcription, binding, and amplification-the enriched sequences are sequenced to identify a preferred binding site(s). Success of this approach is monitored using in vitro binding assays. Subsequently, in vitro and in vivo functional assays can be used to assess the biological relevance of the selected sequences. This approach allows identification and characterization of a previously unknown binding site(s) for any RNA-binding protein for which an assay to separate protein-bound and unbound RNAs exists.

Sequence specificity is critical for gene regulation. Regulatory proteins that recognize specific sequences are important for gene regulation. Defining functional binding sites for such proteins is a challenging biological problem. An iterative approach for identification of a binding site for an RNA-binding protein is described here and is applicable to all RNA-binding proteins.

Düzenleyici RNA Bağlayıcı Proteinler için Bağlayıcı Siteleri Belirlemek için Sıra Alanını Keşfetmek

Gene regulation plays an important role in all cells. Transcriptional, post-transcriptional (or RNA processing), translational, and post-translational ...

Generation of Tumor Organoids from Genetically Engineered Mouse Models of Prostate Cancer

Methods based on homologous recombination to modify genes have significantly furthered biological research. Genetically engineered mouse models (GEMMs) are a rigorous method for studying mammalian development and disease. Our laboratory has developed several GEMMs of prostate cancer (PCa) that lack expression of one or multiple tumor suppressor genes using the site-specific Cre-loxP recombinase system and a prostate-specific promoter. In this article, we describe our method for necropsy of these PCa GEMMs, primarily focusing on dissection of mouse prostate tumors. New methods developed over the last decade have facilitated the culture of epithelial-derived cells to model organ systems in vitro in three dimensions. We also detail a 3D cell culture method to generate tumor organoids from mouse PCa GEMMs. Pre-clinical cancer research has been dominated by 2D cell culture and cell line-derived or patient-derived xenograft models. These methods lack tumor microenvironment, a limitation of using these techniques in pre-clinical studies. GEMMs are more physiologically-relevant for understanding tumorigenesis and cancer progression. Tumor organoid culture is an in vitro model system that recapitulates tumor architecture and cell lineage characteristics. In addition, 3D cell culture methods allow for growth of normal cells for comparison to tumor cell cultures, rarely possible using 2D cell culture techniques. In combination, use of GEMMs and 3D cell culture in pre-clinical studies has the potential to improve our understanding of cancer biology.&#160;

We show a method for necropsy and dissection of mouse prostate cancer models, focusing on prostate tumor dissection. A step-by-step protocol for generation of mouse prostate tumor organoids is also presented.

Prostat kanseri genetiği Işlenmiş fare modelleri tümör Organoids üretimi

Methods based on homologous recombination to modify genes have significantly furthered biological research. Genetically engineered mouse models (GEMMs) ...

In Vivo Forward Genetic Screen to Identify Novel Neuroprotective Genes in Drosophila melanogaster

There is much to understand about the onset and progression of neurodegenerative diseases, including the underlying genes responsible. Forward genetic screening using chemical mutagens is a useful strategy for mapping mutant phenotypes to genes among Drosophila and other model organisms that share conserved cellular pathways with humans. If the mutated gene of interest is not lethal in early developmental stages of flies, a climbing assay can be conducted to screen for phenotypic indicators of decreased brain functioning, such as low climbing rates. Subsequently, secondary histological analysis of brain tissue can be performed in order to verify the neuroprotective function of the gene by scoring neurodegeneration phenotypes. Gene mapping strategies include meiotic and deficiency mapping that rely on these same assays can be followed by DNA sequencing to identify possible nucleotide changes in the gene of interest.

In Vivo Forward Genetic Screen to Identify Novel Neuroprotective Genes in Drosophila melanogaster

We present a protocol using a forward genetic approach to screen for mutants exhibiting neurodegeneration in Drosophila melanogaster. It incorporates a climbing assay, histology analysis, gene mapping and DNA sequencing to ultimately identify novel genes related to the process of neuroprotection.

In vivo Ileri genetik ekran Drosophila melanogaster yeni Nörokoruyucu genler tanımlamak için

There is much to understand about the onset and progression of neurodegenerative diseases, including the underlying genes responsible. Forward genetic ...