Bu eser Kore hükümeti (NMK-2014R1A1A3049456) tarafından finanse edilen Ulusal Araştırma Vakfı, Kore (NMG) hibe ve Kore sağlık teknoloji R & D proje Kore sağlık sanayi geliştirme Enstitüsü (KHIDI) aracılığıyla bir hibe tarafından desteklenen, Sağlık Bakanlığı ve refah, Kore Cumhuriyeti (HI15C2854) tarafından finanse edilmektedir.

Tüm deneysel yordamlar Kore Katolik Üniversitesi Etik Komitesi tarafından onaylanmış ve bakım ve laboratuvar hayvanlarının kullanımı (NIH Yayınları No. 80-23) için Ulusal Sağlık Rehberi Enstitüleri uygun olarak gerçekleştirilmiştir.
1. SE indüksiyon
<ol><li>8-hafta-yaşlı erkek C57BL/6NHsd fare satın almak ve her fare tartın. Sonra tüm fareler SE indüksiyon sırasında onların kolay tanımlanması için kuyruk işaretlemek için bir işaretleyici kalem kullanın.</li>
	<li>Skopolamin metil bromür (Skopolamin; 2 mg/kg) miktarını hesaplamak, terbutalin hemisulfate (terbutalin; 2 mg/kg) ve fare göre Pilokarpin hidroklorür (Pilokarpin; 280 mg/kg) ağırlık ve serum fizyolojik (%0.9 NaCl, 10 mL/kg) çözümleri yapmak için ekleyin. Not: Örneğin, fare ağırlık 25 g ise, aşağıdaki miktarlarda uygulanır: Skopolamin ve terbutalin: 2 mg/kg * (25 g/1000 g) = 0.05 mg, serum fizyolojik: 10 mL/kg * (25 g/1000 g) 0.25 mL, Pilokarpin =: 280 mg/kg * (25 g/1000 g) = 7 mg , Serum fizyolojik: 10 mL/kg * (25 g/1000 g) 0.25 mL =.</li>
	<li>1 mL şırınga Skopolamin ve terbutalin karışımı 30 G iğne ile yükleyin. Çözüm intraperitoneally her fare enjekte ve fareler için onların kafes dönün. Skopolamin ve terbutalin yönetim sonra 30 dk Pilokarpin çözüm her fare (ı.p.; 1 mL şırınga; 30 G iğne) enjekte. Hemen Pilokarpin enjeksiyon sonra farelerin gözlem için bir kuluçka (28-30 ° C) yerleştirin.</li>
	<li>SE indüklenen kadar dikkatle fareler davranışını izleyin. Sahne 3 veya üstü Racine'in ölçeğine göre karşılık limbik motor nöbetler algıladıysa, zaman kayıt ve nöbetler daha sık olarak ortaya çıkan olup olmadığını belirlemek için fare izlemek. Sürekli motor nöbetler daha--dan 2 dk son kez, oda sıcaklığında yeni bir kafeste fareyi getirin ve 3 h için onların Kasılan nöbetler devam ve SE bağlı olup olmadığını belirlemek izleme tutun. Girmek için başarısız fareler ötenazi SE 2 h sonra Pilokarpin enjeksiyon. Not: Racine'in ölçek; 1. aşama, ağız ve yüz hareketi; Aşama 2, baş başını sallayarak; Sahne 3, forelimb clonus; evre 4, forelimb clonus ile yetiştirme; Sahne 5, yetiştirme ve forelimb clonus16ile düşüyor. Eğer fare kafesi oda sıcaklığında sonra hemen SE indüksiyon aktarılmaz, fare Hipertermi nedeniyle ölebilir.</li>
	<li>3 h davranış akut nöbetleri sonra SE başlangıçlı diazepam çözüm (ı.p. 10 mg/kg 1 mL şırınga; 30 G iğne) enjekte edilerek sonlandırın. Diazepam çözüm % 10 polyoxyl 35 hidrojene Hint yağı diazepam 5 mg/mL serum fizyolojik (ı.p. 10 mL/kg 1 mL şırınga; 30 G iğne) ekleyerek sulandrarak olun. Not: % 10 polyoxyl 35 hidrojene Hint yağı çözüm: 1 mL polyoxyl 35 hidrojene Hint yağı çözüm + 9 mL serum fizyolojik. Çözüm, oda sıcaklığında saklayın. Fare vücut ağırlığı 25 g ise, örneğin, diazepam çözüm 250 µL enjekte: 50 µL diazepam 5 mg/mL + 200 µL % 10 polyoxyl 35 hidrojene castor oil çözüm 250 µL 1 mg/mL diazepam =.</li>
	<li>Sham fareler için Skopolamin metil bromür ve terbutalin hemisulfate karışımı bir ı.p. enjeksiyon gerçekleştirmek (ı.p.; her iki 2 mg/kg, 10 mL/kg; 1 mL şırınga; 30 G iğne). 30 dk sonra intraperitoneally serum enjekte (ı.p. 10 mL/kg 1 mL şırınga; 30 G iğne). Not: Eğer fare vücut ağırlık 25 bin 250 µL serum Pilokarpin yerine enjekte et.</li>
	<li>Diazepam enjeksiyon (ı.p.; 1 mL şırınga; 30 G iğne) sonra % 5 dekstroz bireysel fare (ı.p.; 1 mL şırınga; 26 G iğne) başına 1 mL yönetmek. Not: 1 mL %5 dekstroz enjeksiyonu enerji kaynağı ve sağkalım oranı artırabilir nemlendirme sağlar.</li>
	<li>Kuluçka (28-30 ° C) sonrası bakım sırasında aşırı salgıları tükürük, gözyaşı ve dışkı gibi yok etmek.</li>
	<li>1 gün sonra SE indüksiyon, fareler tartmak ve fazladan bir gün için kuluçka (28-30 ° C) saklayın. Gün 2, sonra SE indüksiyon, fareler tartmak ve ev onların kafes getirin. Onların kurtarma kolaylaştırmak için nemli chow sağlar. Not: Bu deneyde, C57BL/6NHsd için ölüm oranı SE feshinden sonra %8,57 ortalama (3 test 35 farelerin) idi.</li>
	<li>Günlük vücut ağırlığı hayvanların 7 gün sonrası Pilokarpin kadar ölçmek ve fare % 5 dekstroz (ı.p.; 1 mL şırınga; 26 G iğne) enjekte ne zaman vücut ağırlığı değil artmıştır. Fareler vücut ağırlığı yeniden elde etmek ve 2 gün sonra Pilokarpin enjeksiyon, nemli chow zorluk olmadan tüketmek başladığımızda vücut ağırlığı izlemesini durdurun. Not: Bir farenin vücut ağırlığını 7 gün sonrası SE kadar artmamıştır, fare deneyden dışlamak ve karbon dioksit tarafından ötenazi. Fare arka plan bağlı olarak, zaman zaman ölüm meydana gelebilir; Ancak, C57BL/6NHsd söz konusu olduğunda, bu deneylerde fare az % 1 öldü. 7 günden daha uzun bir süre sonra SE indüksiyon yaşama ile fareler nadiren gizli döneminde ölmek.</li>
</ol>2. implantasyonu ameliyatı Video-EEG izlemek için
<ol><li>12-hafta-yaşlı fareler (4 hafta sonra SE indüksiyon) EEG izlemek için telemetri implantasyon gerçekleştirmek için hazır olun. Not: İmplantasyon zamanlaması deneysel amaçlar ve fare suşları bağlı olarak değiştirilebilir.</li>
	<li>Ameliyattan önce fare (4:0.5) ketamin (50 mg/mL) ve karışımı bir doz 2,5 µL/g vücut ağırlığı (ı.p.; 1 mL şırınga; 26 G iğne), serum içinde çözünmüş xylazine (23,3 mg/mL) çözüm ile anestezi. Düzenli aralıklarla (15dk aralığı en fazla) monitör solunum hızı ve fare solunum çaba ve anestezi derinliği pedal çekilme refleks tarafından değerlendirmek.</li>
	<li>Kulak Bar ve bir ısırık plaka ile stereotaksik çerçevesindeki fareyi getirin ve veteriner merhem körlüğü önlemek için her iki gözde uygulayın.</li>
	<li>Ameliyat sırasında steril koşullar korumak için cerrahi siteleri jilet kullanarak tıraş. Cerrahi alan kürk kontaminasyonu önlemek için dikkatli olun. Tıraştan sonra cilt %70 etanol ve iyot çözeltisi ile dezenfekte. Not: Cerrahi steril eldiven ve steril ekipmanları ve aseptik teknikler kullanarak maskeleri, aseptik bir şekilde yapılmalıdır.</li>
	<li>Anestezi derinliği onayladıktan sonra kafatası ortaya çıkarmak için deri bir ensizyon olun. İki burr deliği ile hastanın eksenindeki (AP) Bregma koordinatları stereotaksik aparatı için ekli bir tatbikat yapmak: +0.1 mm, medyolateral eksen (ML): +0.1 mm (başvuru) ve AP: −0.2 mm, ML: +0.22 mm (sol parietal korteks)13.<ol>
<li>PBS batırılmış pamuk swap, % 70 etanol ve iyot çözüm tarafından takip ile cildinizi silin. Boyuna kesik başından ortasında makasla Lambda (sagittal ve lambdoid dikiş buluştuğu nokta), Bregma (koronal sütür sagittal dikiş tarafından kesişim noktası) ve hedef konumu göstermek için yapmak.</li>
		<li>Lambda ve Bregma gibi anatomik simge yapılara tanımlayın. Konumlandırmak matkap Bregma ve Not X, Y koordinatları için bu nokta.</li>
		<li>Bir beyin atlas defterleri kullanıyorsanız veya beyin bölgeleri EEG kaydı için uygun koordinatlarını belirlemek için başvurular yayınlandı. Sonra vida (başvuru ve kayıt) koordinatlarını hesaplamak Bregma koordinatları kullanarak ölçülen 2.5.2 adımda.</li>
		<li>Matkap biraz fazla ileri nereye kafatası incelir noktada ekleme önlemek için dikkatli olmak bir burr delik açmak için matkap yavaşça indirin.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Tek kanal gövdesi EEG verici ense boyun arkasında subkutan kablosuz ve esnek yer ekle kafatası yol açar.</li>
	<li>Paslanmaz çelik vida (2 mm Uzunluk) cımbızla her burr deliğe yerleştirin ve saat yönünde döndür tarafından bir tornavida kullanarak sıkın. Vida beyin zarı veya beyin doku hasarı önlemek için çok çok derine vida dönme derecesi ayarlayarak eklenmez emin olun.</li>
	<li>Yalıtım kat neden ucundan 2 mm şerit ve tel tel ve vida arasında iyi bir bağlantı için vida mili yuvarlamak yeterince germek. Başvuru Kurşun açık vida ve parietal korteks içinde vida kayıt adayına bağlayın. Daha sonra tüm montaj yerinde metal parçalar maruz kalmadan güvenliğini sağlamak için diş çimento uygulayın.</li>
	<li>Diş çimento görsel denetim tarafından tamamen kurudu doğruladıktan sonra deri dikiş ve topikal mupirocin merhem uygulamak. Cerrahi (yaklaşık 30 dk) normale dönene kadar fareyi 30 ° C kuluçka makinesine yalnız getirin. Video-EEG sürekli izlenmesi başlayana kadar sonra fare ev kafese dönelim. Not: 5 mg/kg gentamisin (antibiyotik) ve 5 mg/kg ketoprofen (ağrı kesici) ile ameliyat sonrası (ı.p.; 1 mL şırınga; 30 G iğne) her fare enjekte edilir. Tam olarak ayakta olana hayvanlar izlenmelidir. Verici implante fareler bir iyileşme süresi yaklaşık 1 hafta var.</li>
</ol>3. video ve EEG izleme ve analiz
<ol><li>Bireysel bir kafes içinde bir fare yerleştirin ve Faraday kafesi kesinti, bir bilgisayar, AC çizgiler ve bitişik alıcıları herhangi bir kaynaktan alınan elektrik sinyalleri önlemek için yüklendiği kafes kablosuz alıcı plakalar üzerine yerleştirin. Not: Üreticinin sağladığı el kitabına bakın. Kör noktalar uzak durmaya özen göstermelidir.</li>
	<li>Kablosuz video-EEG telsiz sistemi kullanarak elektrik etkinliklerini kaydetmek.<ol>
<li>Video-EEG kayıt yazılımı açın. "Donanım"'ı tıklatın ve "yapılandırma Düzenle" yi seçin. Alıcı ve verici her fare implante maç. "Yapılandırma kanal" tıklatın ve tüm kanallar etkin olduğunu doğrulayın. Tıklayın "Video yapılandırma" video EEG veri (kararlılık-in 40 x 480 ve kare hızına olan 30,00) ile eşitlemek için. Not: Eğer ince davranış değişiklikleri farelerin geceleri tanımlayabilirsiniz iyi görüntü kaliteleri toplamak için kritik bir IP kamera ile yüksek hassasiyet yükleyin.</li>
		<li>Tıkırtı "Tertibat" ve "P3 kurulumunu" giriş bireysel hayvan bilgi, eşleşen kamera ve grafik ayarı.</li>
		<li>"Satın alma" ve "A/D örnekleme oranı" Kur örneklendirme oranı için'ı tıklatın. Tıklayın "veri kümesi adı" her deney belirlemek için. Not: EEG için örnekleme hızını büyük video ve EEG veri boyutu nedeniyle 500 Hz. daha yüksek olması gerekir, sadece tavsiye edilir 24 saat veri oturum başına işlenmesini sürekli bir 2-hafta kayıt tek bir dosya kullanarak yerine. RAM bellek yetersizliği durumunda 8 h veya 12 h aralıklarla veri ayrı ayrı saklanabilir.</li>
		<li>Manyetik bir çizgiyle verici etkinleştirmek ve "satın alma Başlat" video-EEG kaydı toplamak için. Sürekli fare video-EEG sistemi tarafından en az 2 hafta için monitör. Not: C57BL/6 fareler için SRS kümelerde son yaklaşık 5.2 gün ve nöbet ücretsiz dönemi süresi yaklaşık 6.7 gün17yaşında meydana gelme eğilimi.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Nöbet sıklığı ve süresi analiz yazılımı kullanarak el ile incelemesi tarafından belirler.<ol>
<li>SRS gösterilen alanını işaretlemek ve istatistiksel analizleri için veri verme. Kafa çizilmemesi veya çiğneme tarafından oluşturulan EEG eserler dışlamak için dikkatli olun; Bunlar-ebilmek var olmak çıkarmak video verileri kontrol ederek. Not: SRS ani tekrarlayan epileptiform aktivite spiking tanımlanır (≥ 3 Hz) devam ederse 10'dan fazla s. Kasılan davranışlarını sık etkinlik spiking bir patlama ile eşlik edilebilir için. Sigara Kasılan nöbetler de sarsıcı davranışlar olmadan electrographic spiking faaliyetleri kanıtlamanın. Nöbet fesih ateş sivri temel etkinlik için döndüğünüzde meydana gelen olarak tanımlanır.</li>
		<li>Nöbet frekans analizi için kayıt gün bireysel her hayvan için toplam sayısı 2 hafta boyunca tespit SRS durumlarda toplam sayısına bölün.</li>
		<li>Nöbet süresi analiz için başlangıç zaman faaliyetleri spiking epileptiform sonuna ölçmek.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Video-EEG kaydı tamamlandıktan sonra beyin transcardial perfüzyon tarafından %4 paraformaldehyde ile düzeltmek. Fare anestezi için bir çözüm (4:0.5) ketamin (50 mg/mL) ve serum bir doz 10 μL/g vücut ağırlığı (ı.p.; 1 mL şırınga; 26 G iğne), çözünmüş xylazine (23,3 mg/mL) enjekte. Fare derin anestezi onaylandıktan sonra transcardial perfüzyon gerçekleştirin.</li>
	<li>Fare beyin izole önce verici temizlik sonra yeniden kullanmak üzere fare al.<ol>
<li>Forseps kullanarak müşteri adaylarını etrafında diş çimento kaldırın.</li>
		<li>Diş çimento eriyene kadar diş çimento ile potansiyel müşteriler ucu % 100 aseton içinde bekletin.</li>
		<li>Verici etrafında doku kirletici distile su ile durulama tarafından kaldırın.</li>
		<li>Durulama verici 3 h ve hava için % 70 etanol ile depolama için kuru. Hemen önce sonraki kullanım, vida ve verici % 70 etanol, distile su tarafından takip ile durulayın ve salin koyun. Not: Ne zaman beri fare esnek yol çok kısa iseniz decapitating, sonraki implantasyon ve video-EEG kaydı gürültü artış esnek kablo kesme önlemek için özen göstermelidir.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol>
	<li>Chang, B. S., Lowenstein, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epilepsy.">Epilepsy.</a> N Engl J Med. 349 (13), 1257-1266 (2003).</li><li>Scharfman, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+neurobiology+of+epilepsy.">The neurobiology of epilepsy.</a> Curr Neurol Neurosci Rep. 7 (4), 348-354 (2007).</li><li>Rakhade, S. N., Jensen, F. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epileptogenesis+in+the+immature+brain:+emerging+mechanisms.">Epileptogenesis in the immature brain: emerging mechanisms.</a> Nat Rev Neurol. 5 (7), 380-391 (2009).</li><li>Cavalheiro, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+pilocarpine+model+of+epilepsy.">The pilocarpine model of epilepsy.</a> Ital J Neurol Sci. 16 (1-2), 33-37 (1995).</li><li>Curia, G., Longo, D., Biagini, G., Jones, R. S., Avoli, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+pilocarpine+model+of+temporal+lobe+epilepsy.">The pilocarpine model of temporal lobe epilepsy.</a> J Neurosci Methods. 172 (2), 143-157 (2008).</li><li>Morimoto, K., Fahnestock, M., Racine, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kindling+and+status+epilepticus+models+of+epilepsy:+rewiring+the+brain.">Kindling and status epilepticus models of epilepsy: rewiring the brain.</a> Prog Neurobiol. 73 (1), 1-60 (2004).</li><li>Levesque, M., Avoli, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+kainic+acid+model+of+temporal+lobe+epilepsy.">The kainic acid model of temporal lobe epilepsy.</a> Neuroscience and Biobehavioral Reviews. 37 (10), 2887-2899 (2013).</li><li>Sharma, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mesial+temporal+lobe+epilepsy:+pathogenesis,+induced+rodent+models+and+lesions.">Mesial temporal lobe epilepsy: pathogenesis, induced rodent models and lesions.</a> Toxicol Pathol. 35 (7), 984-999 (2007).</li><li>Hellier, J. L., Dudek, F. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemoconvulsant+model+of+chronic+spontaneous+seizures.">Chemoconvulsant model of chronic spontaneous seizures.</a> Curr Protoc Neurosci. 9, 19 (2005).</li><li>Pitkanen, A., Lukasiuk, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+and+cellular+basis+of+epileptogenesis+in+symptomatic+epilepsy.">Molecular and cellular basis of epileptogenesis in symptomatic epilepsy.</a> Epilepsy Behav. 14, 16-25 (2009).</li><li>Mathern, G. W., Adelson, P. D., Cahan, L. D., Leite, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hippocampal+neuron+damage+in+human+epilepsy:+Meyer's+hypothesis+revisited.">Hippocampal neuron damage in human epilepsy: Meyer's hypothesis revisited.</a> Prog Brain Res. 135, 237-251 (2002).</li><li>Turski, W. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Limbic+seizures+produced+by+pilocarpine+in+rats:+behavioural,+electroencephalographic+and+neuropathological+study.">Limbic seizures produced by pilocarpine in rats: behavioural, electroencephalographic and neuropathological study.</a> Behav Brain Res. 9 (3), 315-335 (1983).</li><li>Brulet, R., Zhu, J., Aktar, M., Hsieh, J., Cho, K. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mice+with+conditional+NeuroD1+knockout+display+reduced+aberrant+hippocampal+neurogenesis+but+no+change+in+epileptic+seizures.">Mice with conditional NeuroD1 knockout display reduced aberrant hippocampal neurogenesis but no change in epileptic seizures.</a> Exp Neurol. 293, 190-198 (2017).</li><li>Cho, K. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aberrant+hippocampal+neurogenesis+contributes+to+epilepsy+and+associated+cognitive+decline.">Aberrant hippocampal neurogenesis contributes to epilepsy and associated cognitive decline.</a> Nat Commun. 6, 6606 (2015).</li><li>Cavalheiro, E. A., Santos, N. F., Priel, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+pilocarpine+model+of+epilepsy+in+mice.">The pilocarpine model of epilepsy in mice.</a> Epilepsia. 37 (10), 1015-1019 (1996).</li><li>Racine, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modification+of+seizure+activity+by+electrical+stimulation.+II.+Motor+seizure.">Modification of seizure activity by electrical stimulation. II. Motor seizure.</a> Electroencephalogr Clin Neurophysiol. 32 (3), 281-294 (1972).</li><li>Hester, M. S., Danzer, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Accumulation+of+abnormal+adult-generated+hippocampal+granule+cells+predicts+seizure+frequency+and+severity.">Accumulation of abnormal adult-generated hippocampal granule cells predicts seizure frequency and severity.</a> J Neurosci. 33 (21), 8926-8936 (2013).</li><li>Shibley, H., Smith, B. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pilocarpine-induced+status+epilepticus+results+in+mossy+fiber+sprouting+and+spontaneous+seizures+in+C57BL/6+and+CD-1+mice.">Pilocarpine-induced status epilepticus results in mossy fiber sprouting and spontaneous seizures in C57BL/6 and CD-1 mice.</a> Epilepsy Research. 49 (2), 109-120 (2002).</li><li>Borges, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuronal+and+glial+pathological+changes+during+epileptogenesis+in+the+mouse+pilocarpine+model.">Neuronal and glial pathological changes during epileptogenesis in the mouse pilocarpine model.</a> Exp Neurol. 182 (1), 21-34 (2003).</li><li>Pavlova, M. K., Shea, S. A., Bromfield, E. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Day/night+patterns+of+focal+seizures.">Day/night patterns of focal seizures.</a> Epilepsy Behav. 5 (1), 44-49 (2004).</li></ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

Bu eser SE indüksiyon ve kronik nöbetler değerlendirilmesi için deneysel yordamlar açıklanır.
Çeşitli faktörler başarılı SE indüksiyon etkiler. Doğru davranış Racine ölçeğin göre izleme SRS gelişimi için önemlidir. Baş başını sallayarak, forelimb clonus, yetiştirme ve düşen davranış akut nöbetleri SE faz4,16geliştirme özellikleridir. İlk motor nöbet algılandığında, girmeden önce daha sonra Kasılan nöbetler arasındaki aralığın uzunluğunu azaltır SE. Ayrıca, davranış nöbetler diazepam5tarafından sonlandırılır sürece SE en az 6 h için sürekli. Bu araştırmacılar davranış nöbetler diazepam enjeksiyon ile çökmek gibi görünüyor olsa bile bu faaliyetleri electrocorticograms yolu ile tespit edilebilir nöbet sürekli olasılık bilmeniz gereken dikkati çekiyor. SE indüksiyon büyük ölçüde SE hayvanlarla sayısını artırabilir kadar ortam sıcaklığı Pilokarpin enjeksiyon sonra artan. Yeterli hidrasyon, beslenme desteği ve ağırlığı yaklaşık % 70-80 daha yüksek sağkalım oranları için ortalama5,18izleme gibi yoğun sonrası nöbet bakım sağlamak önemlidir. Hayvanın genetik arka plan bağlı olarak, duyarlılık Pilokarpin farklı olabilir. Hayvanlar yüksek mortalite ile şiddetli akut nöbetleri görüntülerseniz, Pilokarpin dozaj, SE süresi, veya artan Skopolamin ve terbutalin azaltılması yararlı olabilir. Şiddetli SE SRS, ilgili daha yüksek insidansı yüksek mortalite ile olduğu bilinmektedir iken bu faktörlerin dikkate almak önemlidir. Hipokampal nöronal ölümler sürekli SE sonra gözlenir. 6 h mesaj-SE, hilar interneurons kapsamlı kaybı bildirilen19olmuştur. 7 gün sonra SE, CA3 alt alan piramidal nöronların genellikle ölmek ve piramidal hücre katmanı içinde nöronal hasar ölçüde değişken farelerde olmasına rağmen sürekli olarak 6 hafta sonra SE indüksiyon, gözlenir. Hipokampüs CA1 alt nöronal kaybına da sık sık görülebilir. İlginçtir, hayvanlar girmeyin birden fazla nöbet ile SE neredeyse bozulmamış Hipokampus sham grubuna benzer gösteren histolojik hücre ölümüne yeterince şiddetli akut nöbetlerin iyi bir işaret olabilir gösterdi.
Yaklaşık 4 hafta sonra SE, tüm Pilokarpin tedavi C57BL/6NHsd fareler epileptik oldu ve gösterdi SRS, Binbaşı birini gösteren bu modeli kullanarak yararları. Kronik nöbetler kümelenir beri rağmen kayıt dönemi fare suşları veya deneysel amaçlar17bağlı olarak değiştirilebilir video-EEG sürekli olarak en az 2 hafta yerine zaman zaman, kaydedilmiş olmalıdır. Ayrıca, spontan nöbetler TLE diurnal varyasyonları yüksek SRS frekansa geç öğleden sonra20gösteren var. Pratik olarak, doğru video-EEG kaydı, AC çizgiler, bilgisayarlar, kameralar veya bitişik alıcı fare implante vericileri herhangi bir kaynaktan engellenmesi gerekir. Faraday kafesi ve fotoğraf makinesi yüksek hassasiyet ile yüklenmesi sırasında gece ve gündüz elektriksel gürültü düşürebilir ve tanımlamak için yardım kronik nöbetler, sırasıyla Genelleştirilmiş. Son olarak, yanıltıcı EEG verisi oluşturabilirsiniz gibi vidaları dura mater yüzeyine yerleştirilmiştir beyin hasarı önlemek son derece önemlidir. SRS frekans yüksek olmasına rağmen herhangi bir mekanik kortikal yaralanma zorla vida ekleme tarafından sadece bir hafta içinde Kasılan nöbetler yaratacaktır.
Sonuç olarak, kısıtlamaları modelleme ve gerçekleştirmek için derinlemesine eğitim şartı ameliyatları ve EEG analiz implant rağmen Pilokarpin kaynaklı SE şu anda mevcut hayvan arasında kronik epilepsi çalışmak için en iyi modellerinden birini tam zamanı TLE modelleri. Burada, bir yöntemi inducing se Pilokarpin enjeksiyon ve kronik nöbetler kablosuz telsiz video-EEG sistemi kullanarak değerlendirmek sonra açıklanmaktadır. Bizce bu protokole uygun hayvan modellerinde kronik epilepsi ve epileptogenesis için ayrıntılı bilgiler sağlayabilir.

TLE en yaygın Edinsel epilepsies1biridir. İnsanların epilepsi ile beyin2,3' te anormal nöron faaliyetleri sonucunda tekrarlayan nöbetleri deneyim. TLE kez zorlu verilen bu, epilepsi gelişimi temel temel mekanizmaları anlamak çok önemlidir.
İnsan TLE temel özelliklerini özetlemek hayvan modelleri TLE patofizyolojisi, bize kolayca izlemek ve epileptogenesis kritik faktörler işlemek için izin daha iyi beğenisine sunmaktadır. Bunlar arasında yaygın olarak kullanılan4,5SE chemoconvulsants kaynaklı olmuştur. Hiçbir Hipokampal skleroz ve sağlam SRS6,7,8, gösteren elektriksel stimülasyon gibi diğer epilepsi modellerin aksine chemoconvulsants sistemik enjeksiyon insan TLE klinik patogenezinde taklit edebilen, Yani, ilk beyin hasarı, bir gizli süresini ve kronik bir epileptik tezahür SRS5,9,10sahne. Bu nedenle, bu teknik akut beyin hasarı, epileptogenesis veya nöbet bastırma mekanizmaları açıklayan çeşitli çalışmalarda yararlı olabilir. Ayrıca, histopatolojik değişiklikler chemoconvulsants tarafından indüklenen TLE kemirgen modelleri10,11,12kullanımı için ek bir mantığı sağlayarak insan TLE görülen benzer. Özellikle, yapısal hasar oluşur içeren sürekli olarak her iki kainic asit ve Pilokarpin-kaynaklı SE modelleri yeniden. Ancak, kainic asit enjeksiyon için karşılaştırıldığında, Pilokarpin modeli farelerde kronik epilepsi transgenik fare hatları5, geniş durumu göz önünde bulundurarak eğitim için oldukça büyük avantajlar sunan daha sağlam SRS üretebilir 13 , 14 , 15. epilepsi Pilokarpin modelinin etkin kullanımı için ek kanıt sağlamaktadır bunların yanında nöbet ilerleme sonra Pilokarpin enjeksiyon kainic asit modeli, genellikle daha hızlıdır.
Burada, biz bir yöntemi inducing se Pilokarpin ı.p. enjeksiyonla ve video ve EEG kronik epilepsi izleme gerçekleştirerek göstermek.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:829px;" width="829">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:189px;">C57BL/6</td>
			<td style="width:233px;">Envigo</td>
			<td style="width:175px;">C57BL/6NHsd</td>
			<td style="width:232px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Scopolamine methyl nitrate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S2250</td>
			<td>Make 10X stock</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Terbutaline hemisulfate salt</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T2528</td>
			<td>Make 10X stock</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Pilocarpine hydrochloride</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P6503</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Intensive care unit</td>
			<td>Daejong instrument industry Co., Ltd.</td>
			<td></td>
			<td>28~30&#8451;&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Ketamine hydrochloride</td>
			<td>Yuhan corporation</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Xylazine hydrochloride</td>
			<td>Bayer Korea</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Diazepam</td>
			<td>SAMJIN</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Castor oil (Kolliphor EL)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C5135</td>
			<td>Polyoxyl 35 hydrogenated castor oil</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Saline</td>
			<td>Daihan pharm. Co.</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">5% Dextrose</td>
			<td>Daihan pharm. Co.</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Iodine solution (Povidin)</td>
			<td>Firson</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">vet ointment (Terramycin)</td>
			<td>Pfizer</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Blue Nylon</td>
			<td>AILEE</td>
			<td>NB617</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Mupirocin (Bearoban)</td>
			<td>Daewoong Pharmaceutical Co., Ltd</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Ketoprofen</td>
			<td>Samchundang Pharm. Co., Ltd</td>
			<td></td>
			<td>5 mg/kg</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Gentamicin</td>
			<td>Huons, Ltd.</td>
			<td></td>
			<td>5 mg/kg</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">1 mL syringe</td>
			<td>Sung shim medial Co., Ltd.</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">26 guage needle</td>
			<td>Sung shim medial Co., Ltd.</td>
			<td></td>
			<td>26 G * 13 mm (1/2&#34;)</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">30 guage needle</td>
			<td>Sung shim medial Co., Ltd.</td>
			<td></td>
			<td>30 G * 13 mm (1/2&#34;)</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Razor blade</td>
			<td>Dorco</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Drill</td>
			<td>Saeshin precision Co., Ltd.</td>
			<td></td>
			<td>207A, 35K (speed)</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Telemetry video/EEG system</td>
			<td>Data sciences International. Inc.</td>
			<td>Version 5.20-SP6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Implantable transmitter</td>
			<td>Data sciences International. Inc.</td>
			<td>ETA-F10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Screw</td>
			<td>Sungho Steel</td>
			<td></td>
			<td>M1.4, 2 mm length stainless steel</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Vertex dental material&#160;</td>
			<td>Dentimex</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Acetone</td>
			<td>Duksan pure chemicals Co., Ltd.</td>
			<td></td>
			<td>CAS 67-64-1</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Paraformaldehyde (PFA)</td>
			<td>millipore</td>
			<td>1.04005.1000</td>
			<td>4 %&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Sucrose</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S9378</td>
			<td>30 % solution in 0.01 M PBS</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Cresyl violet acetate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C5042</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Ethanol</td>
			<td>EMD Millipore Co.</td>
			<td>UN1170</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">xylene</td>
			<td>Duksan pure chemicals Co., Ltd.</td>
			<td>UN1307</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Acetic acid glacial</td>
			<td>Junsei chemical</td>
			<td>31010-0350</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">FSC33 Clear&#160;</td>
			<td>Leica biosystems</td>
			<td></td>
			<td>OCT compound for tissue freezing</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">DPX Mounting for histology</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>6522</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Forceps</td>
			<td>Fine science tools</td>
			<td>11002-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Scissors</td>
			<td>Solco biomedical</td>
			<td>02-2445</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:38px;">Stereotaxic frame</td>
			<td>David Kopf Instruments</td>
			<td>E51070012</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

the pilocarpine model of temporal lobe epilepsy and eeg monitoring using radiotelemetry system in mice

Temporal lob epilepsi (TLE) yetişkinlikte ortak bir nörolojik bozukluk var. Kronik epilepsi translasyonel çalışmaları Pilokarpin kaynaklı durumu Epileptikus (SE) sık sık tekrarlayan spontan nöbetler (SRS) özetlemek için seçilir. Burada bir protokol SE indüksiyon Pilokarpin mayi (IP) enjeksiyon ve ele geçirme vakalarının kronik yinelenen bir radyo telemetri video ve electroencephalogram (EEG) sistemi kullanarak canlı hayvanlarda izleme mevcut. Biz Pilokarpin enjeksiyon ve Hipokampal nöronal kayıp onların korelasyon 7 gün ve 6 hafta sonrası Pilokarpin sonra dikkat edilmesi gereken önemli davranış değişiklikleri gösterdi. Ayrıca video ve EEG kaydı elektrot implantasyonu deneysel prosedürler ve frekans analizi ve Kronik Nükseden nöbet süresi açıklar. Son olarak, biz neden beklenen sonuçları her durumda elde değil olası nedenler tartışıyorlar. Bu fareler ve sorun giderme yönergeleri kronik epilepsi modelleme temel bir genel bakış sağlar. Bu iletişim kuralı kronik epilepsi ve epileptogenesis uygun modelleri için bir temel olarak hizmet verebilir inanıyoruz.

Başarılı SE Hipokampal hücre ölümü ve SRS (Resim 1 ve Şekil 2) neden olabilir. Biz SE başlangıçlı sonra 3 h diazepam enjeksiyonla davranış akut nöbetleri sonlandırıldı ve fareler 7 gün veya 6 hafta sonra kurban.
Video-EEG izlenmesi, alınan fareler 4 hafta sonra SE, cerrahi implant ve SRS durumlarda 5-7 hafta sonra SE başlangıçlı 2 hafta boyunca değerlendirildi.
Şekil 1 Kresil Menekşe boyama tarafından değerlendirildi Hipokampus hücre ölümleri gösterir. Sağlam Hipokampus gözlendi, ancak SE sonra 7 gün pyknotic hücreleri dentat gyrus ve Hipokampus (şekil 1Af), CA3 alt piramit hücre tabakası, göbek bölgelerinde (şekil 1reklam) tespit edildi Pilokarpin (şekil 1Aa-c) yerine serum enjekte sham hayvanlarda. İlginçtir, birden fazla nöbetler, yapılan hayvan ama başarısız girmek SE, göbek bölgesi veya piramit hücre Katmanı (şekil 1Ag-i) hiçbir hücre ölümü gösterdi. SE sonra 6 hafta hilar hücreleri (şekil 1Bm) sayısında belirgin bir azalma gözlendi. Buna ek olarak, CA1 nöronal kaybı gözlendi (şekil 1milyar) ve CA3 (şekil 1Bo) bölgeler.
Şekil 2 temsilcisi EEG izlemeler sham ve SE grup (Şekil 2A) gösterir. Fizyolojik elektrik faaliyet gösteren sahte grubuna göre SE grup bazen sarsıcı davranışlar ile eşlik epileptiform deşarj gösterdi. Epidural elektrot yerlerini Şekil 2' deCgösterilmiştir. Resim 2 B bitişik bir monitör gelen elektrik sesler örneği ve sinyal koleksiyonu başarısızlık gösterir. Biz de spontan nöbetler sırasında 2 hafta video-EEG kayıt (Şekil 2E) gösterdi ve kortikal yaralanmaları perfüzyon, muhtemelen aşırı derin yerleşim türetilmiş bulunan sahte manipüle hayvanlar EEG izleri gösterdi epidural vida (Şekil 2D).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56831/56831fig1.jpg"> Resim 1 : Hippocampus nöronal ölümünde sonra Pilokarpin kaynaklı SE. 7 gün grupları(a)ve (B) 6 hafta sonra Pilokarpin veya serum enjeksiyon temsilcisi görüntülerden. Büyütülmüş resimleri göster hilus (bir, j), (b, k), CA1 alt alan ve CA3 alt alan (c, m) Serum tedavi sahte grubunun, hilus (d, m), CA1 alt alan (e, n) ve CA3 alt alan (f, o) SE grup ve hilus (g), CA1 alt alan (h) ve SE. siyah okları , g, ve j geliştirmek mi fareler CA3 alt (ı) temsilcisi hilar hücrelerinin bir kısmını gösterir ve ok uçları d ve m pyknotic hücreleri gösterir. Ölçek çubuğu içinde belgili tanımlık dip sol yan 200 µm, sol sütun, ölçek çubuğunda en tüm geçerli = a ve c = 20 µm, tüm orta sütunda ve sağ sütun için geçerlidir. Bu rakam kısaltmalar: CA1, CA3: Cornu Ammonis Hipokampal alt alanlar; DG: Dentat gyrus. <a href="//cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56831/56831fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56831/56831fig2.jpg"> Resim 2 : Video ve EEG kaydı gösterir tekrarlayan spontan nöbetler epilepsi fare. (A)temsilcisi EEG izleri sahte-(üst) ve SE manipüle hayvanlar (altta). SE-tabi hayvanlar epileptiform aktivite spiking göstermek Not (≥ 3 Hz), sham hayvanlar tarafından sergilenen değil. (B) A temsilcisi görüntü sinyali koleksiyonunun elektrik sesler olup olmadıklarını. Not yüksek genlik tek kutuplu sivri ve elektrikle ilgili sinyal kesilmesi. (C) şeması fare beyni elektrotlar konumlarıyla çizim. (D) iki resim büyük olasılıkla aşırı derin ekleme epidural vidalar nedeniyle kortekste bozulmamış ve yaralı beyin gösterilen. Doğru resimdeki siyah oku kortikal hasar sitesi gösterir. Ölçek çubuğu 250 µm. (E) temsilcisi EEG izleri sham manipüle hayvanlar ya da beyin hasarı olmadan =. Sham manipüle hayvanlarla kortikal yaralanma spiking etkinlik ve sarsıcı SRS oluşturulan unutmayın. <a href="//cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56831/56831fig2large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>

Watch this Scientific Journal Video about The Pilocarpine Model of Temporal Lobe Epilepsy and EEG Monitoring Using Radiotelemetry System in Mice at JoVE.com

The Pilocarpine Model of Temporal Lobe Epilepsy and EEG Monitoring Using Radiotelemetry System in Mice

Bu el yazması sistemik Pilokarpin enjeksiyonu ile durum Epileptikus inducing ve canlı hayvan bir radyo telemetri video ve electroencephalogram sistemi kullanarak tekrarlayan spontan ele geçirme vakaları izleme yöntemi açıklanır. Bu iletişim kuralı kronik epilepsi, epileptogenesis ve akut nöbetleri Etyopatogenezi mekanizmaları eğitim için yararlı olabilir.

Temporal LOB epilepsi ve EEG farelerde Radiotelemetry sistemini kullanarak izleme Pilokarpin modeli

Temporal lobe epilepsy (TLE) is a common neurological disorder in adulthood. For translational studies of chronic epilepsy, pilocarpine-induced status ...

the-pilocarpine-model-temporal-lobe-epilepsy-eeg-monitoring-using

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Medicine

19.5K Görüntüleme.  The Catholic University of Korea. Bu el yazması sistemik Pilokarpin enjeksiyonu ile durum Epileptikus inducing ve canlı hayvan bir radyo telemetri video ve electroencephalogram sistemi kullanarak tekrarlayan spontan ele geçirme vakaları izleme yöntemi açıklanır. Bu iletişim kuralı kronik epilepsi, epileptogenesis ve akut nöbetleri Etyopatogenezi mekanizmaları eğitim için yararlı olabilir.

Video: The Pilocarpine Model of Temporal Lobe Epilepsy and EEG Monitoring Using Radiotelemetry System in Mice

Optimized System for Cerebral Perfusion Monitoring in the Rat Stroke Model of Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion

The translational potential of pre-clinical stroke research depends on the accuracy of experimental modeling. Cerebral perfusion monitoring in animal models of acute ischemic stroke allows to confirm successful arterial occlusion and exclude subarachnoid hemorrhage. Cerebral perfusion monitoring can also be used to study intracranial collateral circulation, which is emerging as a powerful determinant of stroke outcome and a possible therapeutic target. Despite a recognized role of Laser Doppler perfusion monitoring as part of the current guidelines for experimental cerebral ischemia, a number of technical difficulties exist that limit its widespread use. One of the major issues is obtaining a secure and prolonged attachment of a deep-penetration Laser Doppler probe to the animal skull. In this video, we show our optimized system for cerebral perfusion monitoring during transient middle cerebral artery occlusion by intraluminal filament in the rat. We developed in-house a simple method to obtain a custom made holder for twin-fibre (deep-penetration) Laser Doppler probes, which allow multi-site monitoring if needed. A continuous and prolonged monitoring of cerebral perfusion could easily be obtained over the intact skull.

Cerebral perfusion monitoring has been demonstrated to improve accuracy in ischemic stroke models. Technical difficulties often limit the use of this essential tool for cerebrovascular research. In this video, an optimized system is shown to obtain a single or multi-site hemodynamic monitoring during intraluminal middle cerebral artery occlusion in rats.

Intraluminar Orta Serebral Arter Tıkanıklığı ve Sıçan Strok Model Serebral Perfüzyon İzleme için Optimize Sistemi

The translational potential of pre-clinical stroke research depends on the accuracy of experimental modeling. Cerebral perfusion monitoring in animal ...

Tıp

Endotracheal Intubation in Mice via Direct Laryngoscopy Using an Otoscope

Mice, both wildtype and transgenic, are the principal mammalian model in biomedical research currently. Intubation and mechanical ventilation are necessary for whole animal experiments that require surgery under deep anesthesia or measurements of lung function. Tracheostomy has been the standard for intubating the airway in these mice to allow mechanical ventilation. Orotracheal intubation has been reported but has not been successfully used in many studies because of the substantial technical difficulty or a requirement for highly specialized and expensive equipment. Here we report a technique of direct laryngoscopy using an otoscope fitted with a 2.0 mm speculum and using a 20 G&#160;intravenous catheter as an endotracheal tube. We have used this technique extensively and reliably to intubate and conduct accurate assessments of lung function in mice. This technique has proven safe, with essentially no animal loss in experienced hands. Moreover, this technique can be used for repeated studies of mice in chronic models.

Endotracheal Intubation in Mice via Direct Laryngoscopy Using an Otoscope

We have developed a simple, reliable, and relatively inexpensive method for endotracheal intubation in mice via direct laryngoscopy using an otoscope with a 2.0 mm speculum. This technique is atraumatic and can be used for repeated measurements in chronic experiments. We find it superior to tracheostomy or previously reported nonsurgical techniques.

Farelerde Endotrakeal Entübasyon<em&gt; Via</emBir Otoskop Kullanma&gt; Doğrudan Larengoskopi

Mice, both wildtype and transgenic, are the principal mammalian model in biomedical research currently. Intubation and mechanical ventilation are ...

Network Analysis of the Default Mode Network Using Functional Connectivity MRI in Temporal Lobe Epilepsy

Functional connectivity MRI (fcMRI) is an fMRI method that examines the connectivity of different brain areas based on the correlation of BOLD signal fluctuations over time. Temporal Lobe Epilepsy (TLE) is the most common type of adult epilepsy and involves multiple brain networks. The default mode network (DMN) is involved in conscious, resting state cognition and is thought to be affected in TLE where seizures cause impairment of consciousness. The DMN in epilepsy was examined using seed based fcMRI. The anterior and posterior hubs of the DMN were used as seeds in this analysis. The results show a disconnection between the anterior and posterior hubs of the DMN in TLE during the basal state. In addition, increased DMN connectivity to other brain regions in left TLE along with decreased connectivity in right TLE is revealed. The analysis demonstrates how seed-based fcMRI can be used to probe cerebral networks in brain disorders such as TLE.

The Default Mode Network (DMN) in Temporal Lobe Epilepsy (TLE) is analyzed in the resting state of the brain using seed-based functional connectivity MRI (fcMRI).

Temporal Lob Epilepsi Fonksiyonel Bağlantı MRI kullanarak Varsayılan Mod Ağı Ağ Analizi

Functional connectivity MRI (fcMRI) is an fMRI method that examines the connectivity of different brain areas based on the correlation of BOLD signal ...

Monitoring of Systemic and Hepatic Hemodynamic Parameters in Mice

The use of mouse models in experimental research is of enormous importance for the study of hepatic physiology and pathophysiological disturbances. However, due to the small size of the mouse, technical details of the intraoperative monitoring procedure suitable for the mouse were rarely described. Previously we have reported a monitoring procedure to obtain hemodynamic parameters for rats. Now, we adapted the procedure to acquire systemic and hepatic hemodynamic parameters in mice, a species ten-fold smaller than rats. This film demonstrates the instrumentation of the animals as well as the data acquisition process needed to assess systemic and hepatic hemodynamics in mice. Vital parameters, including body temperature, respiratory&#160;rate&#160;and heart&#160;rate were recorded throughout the whole procedure. Systemic hemodynamic parameters consist of carotid artery pressure (CAP) and central venous pressure (CVP). Hepatic perfusion parameters include portal vein pressure (PVP), portal flow rate as well as the flow rate of the common hepatic artery (table 1). Instrumentation and data acquisition to record the normal values was completed within 1.5 h. Systemic and hepatic hemodynamic parameters remained within normal ranges during this procedure.
This procedure is challenging but feasible. We have already applied this procedure to assess hepatic hemodynamics in normal mice as well as during 70% partial hepatectomy and in liver lobe clamping experiments. Mean PVP after resection (n= 20), was 11.41&#177;2.94 cmH2O which was significantly higher (P&#60;0.05) than before resection (6.87&#177;2.39 cmH2O). The results of liver lobe clamping experiment indicated that this monitoring procedure is sensitive and suitable for detecting small changes in portal pressure and portal flow rate. In conclusion, this procedure is reliable in the hands of an experienced micro-surgeon but should be limited to experiments where mice are absolutely needed.

This film demonstrates how to acquire systemic and hepatic hemodynamics in mice. The whole monitoring includes acquisition of vital parameters, systemic blood pressure, central venous pressure, common hepatic artery flow rate, and portal vein pressure as well as the portal flow rate in mice.

Farelerde Sistemik ve Karaciğer Hemodinamik Parametrelerin İzleme

The use of mouse models in experimental research is of enormous importance for the study of hepatic physiology and pathophysiological disturbances. ...

Brain Source Imaging in Preclinical Rat Models of Focal Epilepsy using High-Resolution EEG Recordings

Electroencephalogram (EEG) has been traditionally used to determine which brain regions are the most likely candidates for resection in patients with focal epilepsy. This methodology relies on the assumption that seizures originate from the same regions of the brain from which interictal epileptiform discharges (IEDs) emerge. Preclinical models are very useful to find correlates between IED locations and the actual regions underlying seizure initiation in focal epilepsy. Rats have been commonly used in preclinical studies of epilepsy1; hence, there exist a large variety of models for focal epilepsy in this particular species. However, it is challenging to record multichannel EEG and to perform brain source imaging in such a small animal. To overcome this issue, we combine a patented-technology to obtain 32-channel EEG recordings from rodents2 and an MRI probabilistic atlas for brain anatomical structures in Wistar rats to perform brain source imaging. In this video, we introduce the procedures to acquire multichannel EEG from Wistar rats with focal cortical dysplasia, and describe the steps both to define the volume conductor model from the MRI atlas and to uniquely determine the IEDs. Finally, we validate the whole methodology by obtaining brain source images of IEDs and compare them with those obtained at different time frames during the seizure onset.

This video introduces the preparation, recording, and source analysis procedures of high-resolution EEG on sedated rats with a particular preclinical model of focal epilepsy under noninvasive conditions.

Yüksek Çözünürlüklü EEG Kayıtlar kullanarak Odak Epilepsi Preklinik Rat Modelleri Beyin Kaynak Görüntüleme

Electroencephalogram (EEG) has been traditionally used to determine which brain regions are the most likely candidates for resection in patients with ...

Network Analysis of Foramen Ovale Electrode Recordings in Drug-resistant Temporal Lobe Epilepsy Patients

Approximately 30% of epilepsy patients are refractory to antiepileptic drugs. In these cases, surgery is the only alternative to eliminate/control seizures. However, a significant minority of patients continues to exhibit post-operative seizures, even in those cases in which the suspected source of seizures has been correctly localized and resected. The protocol presented here combines a clinical procedure routinely employed during the pre-operative evaluation of temporal lobe epilepsy (TLE) patients with a novel technique for network analysis. The method allows for the evaluation of the temporal evolution of mesial network parameters. The bilateral insertion of foramen ovale electrodes (FOE) into the ambient cistern simultaneously records electrocortical activity at several mesial areas in the temporal lobe. Furthermore, network methodology applied to the recorded time series tracks the temporal evolution of the mesial networks both interictally and during the seizures. In this way, the presented protocol offers a unique way to visualize and quantify measures that considers the relationships between several mesial areas instead of a single area.

This protocol describes a procedure to track the evolution of mesial network measures in temporal lobe epilepsy (TLE) patients. It is based on the combination of intracranial recordings with a novel numerical technique for data analysis. Specifically, we present a protocol for network analyses of foramen ovale recordings.

İlaca dirençli Temporal Lob Epilepsi Hastalarında Foramen Ovale Elektrot Kayıtları Ağ Analizi

Approximately 30% of epilepsy patients are refractory to antiepileptic drugs. In these cases, surgery is the only alternative to eliminate/control ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and drugs. It is widely used in many studies on the physiological functions of vascular smooth muscle, the pathogenesis of vascular diseases such as hypertension, and the development of smooth muscle relaxant drugs. The mouse is a widely used model animal with a large pool of disease models and genetically modified strains. We introduced this method to measure the isometric contraction of mouse mesenteric artery in detail. A 1.4-mm segment of mouse mesenteric resistance artery was isolated and mounted on a myograph chamber by passing two steel wires through its lumen. After equilibration and normalization steps, the vessel segment was potentiated by a high-K+ solution twice prior to the contraction assay. As an example of the application of this method in drug development, we measured the relaxant effect of a novel natural substance, neoliensinine, isolated from a Chinese herb, embryos of the lotus seed (Nelumbo nucifera Gaertn.) on mouse mesenteric arteries. The vessel segments mounted on the myograph chamber were stimulated with a high-K+ solution. When the force tension reached a stable sustained phase, cumulative doses of neoliensinine were added to the chamber. We found that neoliensinine had a dose-dependent relaxant effect on smooth muscle contraction, thus suggesting that it bears potential activity against hypertension. In addition, as the vessel segment can survive at least 4 hours after mounting and maintain contractility induced by the high-K+ solution for many times, we suggest that the wire myograph system may be used for the time-consuming process of drug screening.

The wire myograph technique is used to investigate vascular smooth muscle functions and screen new drugs. We report a detailed protocol for measuring the isometric contractility of the mouse mesenteric artery and for screening new relaxants of vascular smooth muscle.

İzometrik Contractility ölçüm tel Myography kullanarak fare mezenterik arter

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

Induction and Characterization of Pulmonary Hypertension in Mice using the Hypoxia/SU5416 Model

Pulmonary Hypertension (PH) is a pathophysiological condition, defined by a mean pulmonary arterial pressure exceeding 25 mm Hg at rest, as assessed by right heart&#160;catheterization. A broad spectrum of diseases can lead to PH, differing in their etiology, histopathology, clinical presentation, prognosis, and response to&#160;treatment. Despite significant progress in the last years, PH remains an uncured disease. Understanding the underlying mechanisms can pave the way for the development of new therapies. Animal models are important research tools to achieve this goal. Currently, there are several models available for recapitulating PH. This protocol describes a two-hit mouse PH model. The stimuli for PH development are hypoxia and the injection of SU5416, a vascular endothelial growth factor (VEGF) receptor antagonist. Three weeks after initiation of Hypoxia/SU5416, animals develop pulmonary vascular remodeling imitating the histopathological changes observed in human PH (predominantly Group 1). Vascular remodeling in the pulmonary circulation results in the remodeling of the right&#160;ventricle (RV). The procedures for measuring RV pressures (using the open chest method), the morphometrical analyses of the RV (by dissecting and weighing both cardiac ventricles) and the histological assessments of the remodeling (both pulmonary by assessing vascular remodeling and cardiac by assessing RV cardiomyocyte hypertrophy and fibrosis) are described in detail. The advantages of this protocol are the possibility of the application both in wild type and in genetically modified mice, the relatively easy and low-cost implementation, and the quick development of the disease of interest (3 weeks). Limitations of this method are that mice do not develop a severe phenotype and PH is reversible upon return to normoxia. Prevention, as well as therapy studies, can easily be implemented in this model, without the necessity of advanced skills (as opposed to surgical rodent models).

This protocol describes the induction of pulmonary hypertension (PH) in mice based on the exposure to hypoxia and the injection of a VEGF receptor antagonist. The animals develop PH and right ventricular (RV) hypertrophy 3 weeks after the initiation of the protocol. The functional and morphometrical characterization of the model is also presented.

Hipoksi/SU5416 Modeli kullanılarak Farelerde Pulmoner Hipertansiyonun İndüksiyonu ve Karakterizasyonu

Pulmonary Hypertension (PH) is a pathophysiological condition, defined by a mean pulmonary arterial pressure exceeding 25 mm Hg at rest, as assessed by ...

Assessment of Static Graviceptive Perception in the Roll-Plane using the Subjective Visual Vertical Paradigm

Vestibular disorders are among the most common syndromes in medicine. In recent years, new vestibular diagnostic systems have been introduced that allow the examination of all semicircular canals in the clinical setting. Assessment methods of the otolithic system, which is responsible for the perception of linear acceleration and perception of gravity, are far less in clinical use. There are several experimental approaches for measuring the perception of gravity. The most frequently used method is the determination of the subjective visual vertical. This is usually measured with the head in an upright position. We present here an assessment method for testing otolith function in the roll plane. The subjective visual vertical is measured in the head upright position as well as with head inclination of &#177; 15&#176; and &#177; 30&#176; in the roll plane. This extended functional paradigm is an easy-to-perform clinical test of otolith function and ensures increased information content for the detection of impaired graviceptive perception.

The perception of gravity is commonly determined by the subjective visual vertical in the head upright position. The additional assessment at head tilts of &#177; 15&#176; and &#177; 30&#176; in the roll plane ensures increased information content for the detection of impaired graviceptive perception.

Öznel Görsel Dikey Paradigma kullanılarak Rulo Düzlemde Statik Graviceptive Algının Değerlendirilmesi

Vestibular disorders are among the most common syndromes in medicine. In recent years, new vestibular diagnostic systems have been introduced that allow ...

Multi-system Monitoring for Identification of Seizures, Arrhythmias and Apnea in Conscious Restrained Rabbits

Patients with ion channelopathies are at a high risk of developing seizures and fatal cardiac arrhythmias. There is a higher prevalence of heart disease and arrhythmias in people with epilepsy (i.e., epileptic heart.) Additionally, cardiac and autonomic disturbances have been reported surrounding seizures. 1:1,000 epilepsy patients/year die of sudden unexpected death in epilepsy (SUDEP). The mechanisms for SUDEP remain incompletely understood. Electroencephalograms (EEG) and electrocardiograms (ECG) are two techniques routinely used in the clinical setting to detect and study the substrates/triggers for seizures and arrhythmias. While many studies and descriptions of this methodology are in rodents, their cardiac electrical activity differs significantly from humans. This article provides a description of a non-invasive method for recording simultaneous video-EEG-ECG-oximetry-capnography in conscious rabbits. As cardiac electrical function is similar in rabbits and humans, rabbits provide an excellent model of translational diagnostic and therapeutic studies. In addition to outlining the methodology for data acquisition, we discuss the analytical approaches for examining neuro-cardiac electrical function and pathology in rabbits. This includes arrhythmia detection, spectral analysis of EEG and a seizure scale developed for restrained rabbits.

Using simultaneous video-EEG-ECG-oximetry-capnography, we developed a methodology to evaluate the susceptibility of rabbit models to develop provoked arrhythmias and seizures. This novel recording system establishes a platform to test the efficacy and safety of therapeutics and can capture the complex cascade of multi-system events that culminate in sudden death.

Bilinçli Kısıtlanmış Tavşanlarda Nöbet, Aritmi ve Apnelerin Tanımlanması için Çok Sistemli İzleme

Patients with ion channelopathies are at a high risk of developing seizures and fatal cardiac arrhythmias. There is a higher prevalence of heart disease ...