Maria Baumgarten (IQ biyoteknoloji Platform, enfeksiyon tıp, Lund Üniversitesi) gerçekleştirme ve tarama elektron filmler sağlamak için kabul edilmektedir. Bu eser Avrupa üçüncü ortak programlama girişimi Antimikrobiyal direnç (JPIAMR) çağrı "İletim dinamiği." bir parçası olarak gelen İsveçli Araştırma Konseyi Formas (2017-00100) hibe tarafından desteklenmiştir Fon çalışma tasarım, yorumu, yazma, el yazması, göndermek veya karar karar hazırlanması çalışmaları yayımlamak için herhangi bir rolü yoktu.

1. cam kapak modifikasyonu (şablon pullar) notları
<ol><li>Cam kapak makbuzları temizlemek için onları sırayla 10 mL 1,0 M HCl, deiyonize su ve 1,0 M NaOH, sırasıyla, her adımda bir ultrasonik temizleyici oda sıcaklığında 10 dakika bırakın.<ol>
<li>Azot gazı cam kapak torbalarla kuru. Not: Kapak paket fişi buharlaşma gaz azot akışı altında tarafından kurutulur.</li>
	</ol>
</li>
	<li>% 10 (v/v), 3-amino-propil-triethoxysilane (APTES) 1s cam yüzeyinde, oda sıcaklığında amino grupları tanıtmak için etanol içinde 10 mL solüsyon temizlenmiş ve kurutulmuş kapak makbuzları bırakın.<ol>
<li>Kapak makbuzları deiyonize suyla durulayın.</li>
		<li>Azot gazı kapak torbalarla kuru.</li>
	</ol>
</li>
	<li>APTES değiştiren kapak makbuzları % 5 (v/v), 10 mL solüsyon 10 mM fosfat tampon (pH 7,4) oda sıcaklığında6,15yüzeyi amino grupları etkinleştirmek için 2 h için oxazolidin, bırakın.<ol>
<li>Aşırı oxazolidin yüzeyden kaldırmak için 10 mM fosfat tampon (pH 7,4) kapak torbalarla durulayın.</li>
		<li>Azot gazı kapak torbalarla kuru.</li>
	</ol>
</li>
	<li>1.0 mL 0.1 mg/mL konsantrasyonu 10 mM fosfat tampon (pH 7,4) şablonu (protein/bakteriyofaj) çözeltisi hazırlamak. Not: protein fosfat tampon (10 mM, pH 7,4) 1.0 ml 0.1 mg geçiyoruz. Gerekirse, bir Spektrofotometre (280 nm) protein konsantrasyonu belirlemek için kullanılabilir.<ol>
<li>Bu şablon çözüm değiştirilmiş kapak paket fişi üzerine 200 µL bırakın ve gecede 4 ° C'de kuluçkaya. Not: Aşırı şablon çözüm 1-2 daha fazla şablon pullar karakterizasyonu çalışmalarda kullanılmak üzere hazırlamak için kullanılabilir.</li>
		<li>Yüzeyden ilişkisiz şablonunu kaldırmak için 10 mM fosfat tampon (pH 7,4) kapak torbalarla durulayın. Not: elektrotlar durulama için 30 için fosfat tampon (10 mM, pH 7,4) ile yıkama onları s.</li>
		<li>Azot gazı kapak torbalarla kuru. Not: Bunlar polimerizasyon adımda kullanılır kadar kapak paket fişi 4 ° C de saklanmalıdır.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. kapasitif altın elektrotlar modifikasyonu
<ol><li>Elektrotlar temiz küçük bir ölçek, elektrotlar sırayla, 5 mL etanol (% 70), de içeren batırmak deiyonize su, aseton, deiyonize su, asidik piranha çözüm (3:1, H2SO4: H2O2, v/v) ve deiyonize su, sırasıyla her adımda bir ultrasonik temizleyici oda sıcaklığında 10 dakika için.<ol>
<li>Elektrotlar azot gazı ile kuru.</li>
	</ol>
</li>
	<li>İngilizce electropolymerization gerçekleştirmek için 8 mL 10 mM İngilizce çözeltisi 10 mM fosfat tampon (pH 7,4) içeren etanol (2 mL)15dakika içinde hazır olun. Not: İngilizce çözüm hacmi 2 mL etanol de dahil olmak üzere toplam 8 mL olmalıdır.<ol>
<li>Çevrimsel voltammetric (15 döngüleri) bir potansiyel kapsayan bir potansiyostat kullanarak Bu çözümde taramalar aralığı 0 - 1.5 V (Ag/AgCl) ve 50 mV/s30tarama hızı.</li>
		<li>Elektrotlar deiyonize suyla durulayın.</li>
		<li>Elektrotlar azot gazı ile kuru.</li>
	</ol>
</li>
	<li>30 mM acryloyl klorür ve toluen 30 mM trimethylamine içeren bir çözümde elektrotlar bırakın (VToplam 5 mL =) oda sıcaklığında6,15,30gece.<ol>
<li>Elektrotlar deiyonize suyla durulayın. Not: klorür ve trimethylamine artıkları unreacted acryloyl daha iyi bir kaldırılmasını sağlamak için NaOH ile yüzey sonra deiyonize suyla yıkamak mümkündür.</li>
		<li>Elektrotlar azot gazı ile kuru.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. şablon hazırlanması kapasitif altın elektrotlar baskılı
<ol><li>
Bakteriyofaj hazırlanması kapasitif altın elektrotlar baskılı
	<ol>
<li>Polimerizasyon önce monomer (N-hydroxymethyl Akrilamid) ve cross-linker (polietilen glikol-400-dimethacrylate) bir oranı 1:5 (mol/mol) 10 mM fosfat tampon (pH 7,4) 1 ml içeren bir monomer çözüm hazırlamak. Not: farklı oranlarının monomer ve cross-linker içeren monomer çözüm kullanılabilir veya monomer ve cross-linker türleri spesifik etkileşime duruma getirilmesi için şablon göre değiştirilebilir.</li>
		<li>Fotoğraf-başlatıcı 1 mg bu çözüm ekleyin. Not: polimerizasyon UV ışık altında gerçekleştirilirse, daha sonra fotoğraf başlatıcı polimerizasyon başlatmak için kullanılmalıdır. Polimerizasyon serbest radikal polimerizasyon tarafından gerçekleştirilirse, başlatıcı türü değiştirilmelidir.</li>
		<li>Bu çözümün değiştirilmiş altın elektrot altın yüzeyinin 1.5 µL pipet. Not: Altın elektrot yüzeyine şematik Resim 1' de gösterilen.</li>
		<li>Şablon damga monomer çözüm üst kısmında altın elektrot yüzeyi ile temas halinde getir.</li>
		<li>UV polimerizasyon başlatmak (365 nm, 400 W) ve 15 dk31için devam edin. Not: UV polimerizasyon-25 ° C-polimerizasyon işlemini başlatmadan önce ayarlanmış soğutma bir kabine içinde gerçekleştirilir. Sonra sistem kür UV ışığı yanar ve polimerizasyon sistemi kür UV ışığı kapatıp açmadan önce 15 dakikadır devam edilir.</li>
		<li>Şablon damga yüzeyden forseps kullanarak kaldırın. Not: şablon damga yüzeyden kaldırılırken, polimer filmin yüzeyinde bozuk olabilir. Bu nedenle, damga yüzeyden çok dikkatli ve yavaş yavaş güç kullanmadan kaldırılması gerekir.</li>
		<li>Elektrot yüzeyi deiyonize suyla durulayın ve azot gazı ile kuru.</li>
		<li>10 mM 1-dodecanethiol etanol için 20 dk iğne elektrot yüzeyinde karşılamak için hazırlanan 1 ml elektrotlar bırakın.</li>
		<li>Elektrotlar deiyonize suyla durulayın ve elektrotlar azot gazı ile kuru.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Protein hazırlanması kapasitif altın elektrotlar baskılı
	<ol>
<li>Polimerizasyon önce monomerler içeren bir monomer çözüm hazırlamak (Akrilamid: 54 mg; N-hydroxymethylacrylamide: 140 µL; N-isopropylacrylamide: 85,6 mg) ve cross-linker (methylenebisacrylamide: 9,5 mg) ultra saf su30,32820 µL içinde.</li>
		<li>%5 (v/v) N, N, N hazırlamak ', N'-tetramethylethyldiamine (TEMED) ultra saf su.</li>
		<li>TEMED çözümün 20 µL monomer çözüm ekleyin ve 5 min için azot gazı ile tasfiye.</li>
		<li>% 10 (w/v) amonyum persülfat (APS) ultra saf su hazırlamak.</li>
		<li>APS çözüm 20 µL monomer çözüm ekleyin.</li>
		<li>Değiştirilmiş altın elektrot yüzeyine monomer çözümün 1,5 µL pipet.</li>
		<li>Şablon damga monomer tedavi yüzeyi ile temas getir.</li>
		<li>Polimerizasyon oda sıcaklığında başlarlar ve 5 h için. Not: UV-polimerizasyon, yerine protein baskılı altın elektrotlar hazırlanması için serbest radikal polimerizasyonu, oda sıcaklığında (25 ° C) APS-TEMED başlatıcı-katalizör kullanarak gerçekleştirilir.</li>
		<li>Şablon damga yüzeyden forseps kullanarak dikkatli bir şekilde çıkarın.</li>
		<li>Elektrot deiyonize suyla durulayın ve azot gazı ile kuru.</li>
		<li>10 mM 1-dodecanethiol etanol için 20 dk iğne elektrot yüzeyinde karşılamak için hazırlanan 1 ml elektrotlar bırakın.</li>
		<li>Elektrotlar deiyonize suyla durulayın ve elektrotlar azot gazı ile kuru.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. tarama elektron mikroskobu (SEM) olan elektrot yüzeyi karakterizasyonu
<ol><li>Numune alüminyum sahipleri yapışkanlı karbon bant ile bağlama.</li>
	<li>Elektrotlar ile 10 nm Paladyum/altın ceket.</li>
	<li>Elektrotlar SEM ile incelemek</li>
</ol>5. gerçek zamanlı kapasitif ölçümleri şablonu ile Kapasitif altın elektrotlar baskılı
<ol><li>Baskılı kapasitif altın elektrotlar bir kapasitif Biyoalgılayıcı entegre elektrokimyasal akışı hücresine yerleştirin.</li>
	<li>Rejenerasyon tampon (25 mM glisin-HCl, pH 2.5, 50 mM ara-20 de dahil olmak üzere) ve 1 L çalışan tampon 100 mL hazırlamak (bakteriyofaj için baskılı sistemi: 10 mM fosfat, pH 7.4; protein baskılı sistemi için: 50 mM Tris-HCl, pH 7,4).</li>
	<li>Analiz sistemi ile çalışan arabellek 25 min için sistemi yeniden equilibrate yeniden oluşturmak için yeniden oluşturma işlemi tampon enjeksiyon ile başlayın.</li>
	<li>Standart Şablon Çözümleri arabellek çalışan istenen konsantrasyon aralığında hazırlayın. Not: İlk 0.1 mg protein veya yaklaşık 108 pfu bacteriophages, 1.0 mL fosfat tampon (10 mM fosfat, pH 7,4) çözülerek bir hazır şablon çözüm hazır olun. O zaman, standart çözümler on ardışık 10 kat dilutions hisse senedi çözümden yaparak kalibrasyon eğrisi için hazır olun. Bu çözümler adım 5.5 kapasitif Biyoalgılayıcı ile incelenecek. Protein konsantrasyonu ölçülür bir Spektrofotometre kullanarak (280 nm). Bakteriyofaj konsantrasyon ölçmek için bir çift katmanlı agar yöntem, hangi anlatılan kullanılabilir daha önce19detayları.</li>
	<li>Bu standart çözümlerin en uygun koşullar içinde belgili tanımlık sistem için sırayla 250 µL enjekte (akış hızı: 100 µL/dak, sıcaklık: 25 ° C). Not: bakteriyofaj konsantrasyonları aralığı 1.0 x 10 '1 - 105 pfu/mL x 1.0 iken bu uygulamada, standart protein çözümleri 1.0 x 10-4 - 1.0 x 10-14, konsantrasyon aralığında hazırlanmıştır. Çözümler enjeksiyon kapak yerleştirilir ve sırayla triplicates örneklerinde tek şırınga pompa ve birden çok bağlantı noktalı Vana enjekte sistem içine enjekte. Şablon bağlama gelen baskılı boşluklar doğan standart çözümler enjekte sonra kapasitans azalma gerecin yazılım tarafından otomatik olarak izlenir.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Lin, T. Y., Hu, C. H., Chou, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+albumin+concentration+by+MIP-QCM+sensor.">Determination of albumin concentration by MIP-QCM sensor.</a> Biosensors and Bioelectronics. 20 (1), 75-81 (2004).</li><li>Berggren, C., Bjarnason, B., Johansson, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Capacitive+Biosensors.">Capacitive Biosensors.</a> Electroanalysis. 13 (3), 173-180 (2001).</li><li>Zhang, S., Garcia-D'Angeli, A., Brennan, J. P., Huo, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Predicting+detection+limits+of+enzyme-linked+immunosorbent+assay+(ELISA)+and+bioanalytical+techniques+in+general.">Predicting detection limits of enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and bioanalytical techniques in general.</a> The Analyst. 139 (2), 439-445 (2014).</li><li>Mattiasson, B., Teeparuksapun, K., Hedstr&#246;m, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunochemical+binding+assays+for+detection+and+quantification+of+trace+impurities+in+biotechnological+production.">Immunochemical binding assays for detection and quantification of trace impurities in biotechnological production.</a> Trends in Biotechnology. 28 (1), 20-27 (2010).</li><li>Limbut, W., Hedstr&#246;m, M., Thavarungkul, P., Kanatharana, P., Mattiasson, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Capacitive+biosensor+for+detection+of+endotoxin.">Capacitive biosensor for detection of endotoxin.</a> Analytical and Bioanalytical Chemistry. 389 (2), 517-525 (2007).</li><li>Ert&#252;rk, G., Berillo, D., Hedstr&#246;m, M., Mattiasson, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microcontact-BSA+imprinted+capacitive+biosensor+for+real-time,+sensitive+and+selective+detection+of+BSA.">Microcontact-BSA imprinted capacitive biosensor for real-time, sensitive and selective detection of BSA.</a> Biotechnology Reports. 3, 65-72 (2014).</li><li>Arshady, R., Mosbach, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synthesis+of+substrate-selective+polymers+by+host-guest+polymerization.">Synthesis of substrate-selective polymers by host-guest polymerization.</a> Macromolecular Chemistry and Physics. 182 (2), 687-692 (1981).</li><li>Andersson, L. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+imprinting:+developments+and+applications+in+the+analytical+chemistry+field.">Molecular imprinting: developments and applications in the analytical chemistry field.</a> Journal of chromatography. B, Biomedical sciences and applications. 745 (1), 3-13 (2000).</li><li>Li, X., Husson, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two-dimensional+molecular+imprinting+approach+to+produce+optical+biosensor+recognition+elements.">Two-dimensional molecular imprinting approach to produce optical biosensor recognition elements.</a> Langmuir: the ACS Journal of Surfaces and Colloids. 22 (23), 9658-9663 (2006).</li><li>Alexander, C., Davidson, L., Hayes, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imprinted+polymers:+artificial+molecular+recognition+materials+with+applications+in+synthesis+and+catalysis.">Imprinted polymers: artificial molecular recognition materials with applications in synthesis and catalysis.</a> Tetrahedron. 59 (12), 2025-2057 (2003).</li><li>Kryscio, D. R., Peppas, N. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surface+imprinted+thin+polymer+film+systems+with+selective+recognition+for+bovine+serum+albumin.">Surface imprinted thin polymer film systems with selective recognition for bovine serum albumin.</a> Analytica Chimica Acta. 718, 109-115 (2012).</li><li>Inerowicz, H. D., Howell, S., Regnier, F. E., Reifenberger, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiprotein+immunoassay+arrays+fabricated+by+microcontact+printing.">Multiprotein immunoassay arrays fabricated by microcontact printing.</a> Langmuir. 18 (13), 5263-5268 (2002).</li><li>Lin, H. Y., Hsu, C. Y., Thomas, J. L., Wang, S. E., Chen, H. C., Chou, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+microcontact+imprinting+of+proteins:+The+effect+of+cross-linking+monomers+for+lysozyme,+ribonuclease+A+and+myoglobin.">The microcontact imprinting of proteins: The effect of cross-linking monomers for lysozyme, ribonuclease A and myoglobin.</a> Biosensors and Bioelectronics. 22 (4), 534-543 (2006).</li><li>Liao, P. C., Tyan, Y. C., Wang, C. Y., Hsu, J. F., Chou, T. C., Lin, H. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessing+the+binding+selectivity+of+molecularly+imprinted+polymer+artificial+antibodies+by+mass+spectrometry-based+profiling+system.">Assessing the binding selectivity of molecularly imprinted polymer artificial antibodies by mass spectrometry-based profiling system.</a> Journal of Biomedical Materials Research Part A. 91 (2), 597-604 (2009).</li><li>Ert&#252;rk, G., Hedstr&#246;m, M., T&#252;mer, M. A., Denizli, A., Mattiasson, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Real-time+prostate-specific+antigen+detection+with+prostate-specific+antigen+imprinted+capacitive+biosensors.">Real-time prostate-specific antigen detection with prostate-specific antigen imprinted capacitive biosensors.</a> Analytica Chimica Acta. 891, 120-129 (2015).</li><li>Ert&#252;rk, G., Mattiasson, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=From+imprinting+to+microcontact+imprinting-A+new+tool+to+increase+selectivity+in+analytical+devices.">From imprinting to microcontact imprinting-A new tool to increase selectivity in analytical devices.</a> Journal of Chromatography. B, Analytical Technologies in the Biomedical and Life Sciences. 1021, 30-44 (2016).</li><li>Ert&#252;rk, G., Mattiasson, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+Imprinting:+The+Creation+of+Biorecognition+Imprints+on+Biosensor+Surfaces.">Molecular Imprinting: The Creation of Biorecognition Imprints on Biosensor Surfaces.</a> Advanced Molecularly Imprinting Materials. , 523-560 (2017).</li><li>Janczuk-Richter, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-period+fiber+grating+sensor+for+detection+of+viruses.">Long-period fiber grating sensor for detection of viruses.</a> Sensors and Actuators B: Chemical. 250, 32-38 (2017).</li><li>Kropinski, A. M., Mazzocco, A., Waddell, T. E., Lingohr, E., Johnson, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enumeration+of+bacteriophages+by+double+agar+overlay+plaque+assay.">Enumeration of bacteriophages by double agar overlay plaque assay.</a> Methods in Molecular Biology. 501, 69-76 (2009).</li><li>Meillan, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Self-assembled+monolayer+for+AFM+measurements+of+Tobacco+Mosaic+Virus+(TMV)+at+the+atomic+level.">Self-assembled monolayer for AFM measurements of Tobacco Mosaic Virus (TMV) at the atomic level.</a> RSC Adv. 4 (23), 11927 (2014).</li><li>Ymeti, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fast,+ultrasensitive+virus+detection+using+a+Young+interferometer+sensor.">Fast, ultrasensitive virus detection using a Young interferometer sensor.</a> Nano Letters. 7 (2), 394-397 (2007).</li><li>Wei, Y., Wong, L. P., Toh, C. -. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fuel+cell+virus+sensor+using+virus+capture+within+antibody-coated+nanochannels.">Fuel cell virus sensor using virus capture within antibody-coated nanochannels.</a> Analytical Chemistry. 85 (3), 1350-1357 (2013).</li><li>Guliy, O. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunodetection+of+bacteriophages+by+a+piezoelectric+resonator+with+lateral+electric+field.">Immunodetection of bacteriophages by a piezoelectric resonator with lateral electric field.</a> Applied biochemistry and microbiology. 52 (4), 457-463 (2016).</li><li>Reta, N., Michelmore, A., Saint, C., Prieto-Sim&#243;n, B., Voelcker, N. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Porous+silicon+membrane-modified+electrodes+for+label-free+voltammetric+detection+of+MS2+bacteriophage.">Porous silicon membrane-modified electrodes for label-free voltammetric detection of MS2 bacteriophage.</a> Biosensors &amp; Bioelectronics. 80, 47-53 (2016).</li><li>Ert&#252;rk, G., &#214;zen, H., T&#252;mer, M. A., Mattiasson, B., Denizli, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microcontact+imprinting+based+surface+plasmon+resonance+(SPR)+biosensor+for+real-time+and+ultrasensitive+detection+of+prostate+specific+antigen+(PSA)+from+clinical+samples.">Microcontact imprinting based surface plasmon resonance (SPR) biosensor for real-time and ultrasensitive detection of prostate specific antigen (PSA) from clinical samples.</a> Sensors and Actuators B: Chemical. 224, 823-832 (2016).</li><li>Lebogang, L., Mattiasson, B., Hedstr&#246;m, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Capacitive+sensing+of+microcystin+variants+of+Microcystis+aeruginosa+using+a+gold+immunoelectrode+modified+with+antibodies,+gold+nanoparticles+and+polytyramine.">Capacitive sensing of microcystin variants of Microcystis aeruginosa using a gold immunoelectrode modified with antibodies, gold nanoparticles and polytyramine.</a> Microchimica Acta. 181 (9-10), 1009-1017 (2014).</li><li>Loyprasert, S., Hedstr&#246;m, M., Thavarungkul, P., Kanatharana, P., Mattiasson, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sub-attomolar+detection+of+cholera+toxin+using+a+label-free+capacitive+immunosensor.">Sub-attomolar detection of cholera toxin using a label-free capacitive immunosensor.</a> Biosensors &amp; Bioelectronics. 25 (8), 1977-1983 (2010).</li><li>Teeparuksapun, K., Hedstr&#246;m, M., Wong, E. Y., Tang, S., Hewlett, I. K., Mattiasson, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrasensitive+detection+of+HIV-1+p24+antigen+using+nanofunctionalized+surfaces+in+a+capacitive+immunosensor.">Ultrasensitive detection of HIV-1 p24 antigen using nanofunctionalized surfaces in a capacitive immunosensor.</a> Analytical Chemistry. 82 (20), 8406-8411 (2010).</li><li>Labib, M., Hedstr&#246;m, M., Amin, M., Mattiasson, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+capacitive+biosensor+for+detection+of+staphylococcal+enterotoxin+B.">A capacitive biosensor for detection of staphylococcal enterotoxin B.</a> Analytical and Bioanalytical Chemistry. 393 (5), 1539-1544 (2009).</li><li>Ert&#252;rk, G., Hedstr&#246;m, M., Mattiasson, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+sensitive+and+real-time+assay+of+trypsin+by+using+molecular+imprinting-based+capacitive+biosensor.">A sensitive and real-time assay of trypsin by using molecular imprinting-based capacitive biosensor.</a> Biosensors &amp; Bioelectronics. 86, 557-565 (2016).</li><li>Ert&#252;rk, G., Uzun, L., T&#252;mer, M. A., Say, R., Denizli, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fab+fragments+imprinted+SPR+biosensor+for+real-time+human+immunoglobulin+G+detection.">Fab fragments imprinted SPR biosensor for real-time human immunoglobulin G detection.</a> Biosensors &amp; Bioelectronics. 28 (1), 97-104 (2011).</li><li>El-Sharif, H. F., Phan, Q. T., Reddy, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+selectivity+of+hydrogel-based+molecularly+imprinted+polymers+(HydroMIPs)+following+buffer+conditioning.">Enhanced selectivity of hydrogel-based molecularly imprinted polymers (HydroMIPs) following buffer conditioning.</a> Analytica Chimica Acta. 809, 155-161 (2014).</li><li>Wang, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+Salmonella+Typhimurium+on+Spinach+Using+Phage-Based+Magnetoelastic+Biosensors.">Detection of Salmonella Typhimurium on Spinach Using Phage-Based Magnetoelastic Biosensors.</a> Sensors (Basel, Switzerland). 17 (2), (2017).</li><li>Chin, B. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+detection+of+small+quantities+of+specific+bacteria+using+phage-based+wireless+biosensors.">Rapid detection of small quantities of specific bacteria using phage-based wireless biosensors.</a> 2016 10th International Conference on Sensing Technology (ICST). , 1-5 (2016).</li><li>Park, M. -. K., Chin, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+Approach+of+a+Phage-Based+Magnetoelastic+Biosensor+for+the+Detection+of+Salmonella+enterica+serovar+Typhimurium+in+Soil.">Novel Approach of a Phage-Based Magnetoelastic Biosensor for the Detection of Salmonella enterica serovar Typhimurium in Soil.</a> Journal of Microbiology and Biotechnology. 26 (12), 2051-2059 (2016).</li><li>Mack, J. D., Yehualaeshet, T., Park, M. -. K., Tameru, B., Samuel, T., Chin, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phage-Based+Biosensor+and+Optimization+of+Surface+Blocking+Agents+to+Detect+Salmonella+typhimurium+on+Romaine+Lettuce.">Phage-Based Biosensor and Optimization of Surface Blocking Agents to Detect Salmonella typhimurium on Romaine Lettuce.</a> Journal of food safety. 37 (2), 12299 (2017).</li><li>Colomer-Lluch, M., Jofre, J., Muniesa, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antibiotic+resistance+genes+in+the+bacteriophage+DNA+fraction+of+environmental+samples.">Antibiotic resistance genes in the bacteriophage DNA fraction of environmental samples.</a> Plos One. 6 (3), 17549 (2011).</li><li>Lood, R., Ert&#252;rk, G., Mattiasson, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Revisiting+antibiotic+resistance+spreading+in+wastewater+treatment+plants+-+bacteriophages+as+a+much+neglected+potential+transmission+vehicle.">Revisiting antibiotic resistance spreading in wastewater treatment plants - bacteriophages as a much neglected potential transmission vehicle.</a> Frontiers in microbiology. 8, (2017).</li></ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

Bu yöntemi işlenirken, protokol sonrası sırasında dikkate alınması gereken bazı önemli adımlar vardır. Bir kritik adım asidik piranha çözüm ile temizlik adımdır. Adım 2.1 daha--dan 10 min olmaması gerekir. Bu değerler daha önce optimize edilmiş bu yana adım 1.4 için şablon çözüm 0.1 mg/mL, aşmamalıdır. Çevrimsel voltametric taramaları optimum kalınlık elde etmek için 15 döngüleri aşmamalıdır. Adım 3.1.3 için 1,5 µL en iyi duruma getirilmiş bir değerdir. Bu değer elektrot belirli bu tür için daha yüksek olmalıdır. Sistem kür UV 400 W güç varsa, polimerizasyon için en fazla 10-15 dk gerçekleştirilmesi gerekir. En kısa zamanda APS (başlatıcı) TEMED sonra çözüme eklenir, hemen polimerizasyon (Adım 3.2.5) önlemek için sonraki adım çok hızlı bir şekilde gerçekleştirilmesi gerekir.
Yüzeyden gelen şablon damga kaldırıldıktan sonra UV polimerizasyon en önemli adımlardan biri. Bu adımı düzgün gerçekleştirilmez ise, elektrot yüzeyinde polimer film olabilir bir risk ile damga kaldırıldı. Bu nedenle, bu elektrot ve su bir çözümde üstte protein damga polimerizasyon sonra bırakın, daha sonra pul çok yavaş ve dikkatli bir şekilde yüzeyden (Adım 3.1.6) kaldırmak için tavsiye edilir.
Kullanılan şablonu temel alan, değişiklikler türü ve kullanılan monomer (fonksiyonel monomer ve cross-linker) oranı daha yüksek duyarlılık oluşturma açısından değerlendirildi. Bu ampirik olarak belirlenmelidir. Ayrıca, benzeşim bağlama şablon molekülünün genellikle aynı anda birkaç farklı etkileşimleri içerir. Bu nedenle, bu yeniden oluşturma adımları sırasında sorunlara neden. İlişkili şablon yüzeyinden düzgün serbest değilse, bu daha fazla çözümleme için elektrot kullanılırlığı etkileyebilir. Bu çok noktalı benzeşim da zayıf etkileşimler yoluyla bağlama neden olabilir. Tür sistemlerde, non-spesifik bağlama sistemi16selectivity olumsuz etkileyebilir yer alabilir. Bu yöntemin ortak ve genel, sınırlamalar vardır.
Bu belirli sınırlamalar dışında birçok önemli avantajlar tartışılan yöntem mevcut yöntemler vardır. RIA'ları, ELISAs ve Fluorometrik ölçümlere çok hassastır, onlar etiketli malzeme (şablon veya dedektörü), kullanım Biyoalgılayıcı tamamen ise etiket içermeyen gerektirir. Bu yöntemler aynı zamanda daha pahalı ve zaman alıcı. MIPS hızlı, paralel sentezi aynı saat16farklı kompozisyonlarda için Biyoalgılayıcı bir yaklaşım sağlar. Sadece bir kaç microliters monomer çözeltinin hazırlanması için gerekli olduğundan, pahalı ya da başka türlü sınırlı monomerleri kullanırken uygun yöntemdir. Ayrıca, tek MIP elektrotlar diğer mevcut yöntemleri30anlamlı olarak daha yüksek performans, önemli bir azalma olmadan yaklaşık 80 analizleri için kullanılabilir. Yüksek seçicilik ile algılama ve miktar pM aralığı olarak açıklanan yöntemi sağlar iken mevcut yöntemler de, değişen derecelerde düşük duyarlılık ve seçicilik, içinde acı.
Maliyet-etkililik, enstrüman ve gerçek zamanlı hassas algılama varolan yöntemlerine göre kısa sürede çalışma kolaylığı nedeniyle biyosensörler çok olan nokta, umut verici bakım tespit sistemleri alan koşullarında; örneğinhem uygulamalar gelişmekte olan ülkelerde çevre izleme için. Hastalığı tanısı içinde birçok uygulama içinde serum gibi karmaşık bir karışımı bir biyomarker gerçek zamanlı, duyarlı, seçici ve hızlı tespiti gerekli15,25' tir. Burada, biyosensörler sağlamlık ve duyarlılık nedeniyle mevcut yöntemler için özellikle, üstündür. Özellikle enfeksiyöz ajanlar tespiti için bacteriophages son zamanlarda onların ana bilgisayar bakteri özgüllük33,34,35nedeniyle biyosensörler için alternatif biorecognition öğesi olarak kabul edilmektedir. Antikorlar bacteriophages ile yerini maliyeti düşürmek ve istikrarı daha da36artırmak için çok umut verici. Böyle bir sistem de algılama ve belirli phages ortamında ve klinik örneklerinden miktar sağlayacaktır. Bacteriophages ve antibiyotik direnç genleri37,38ile bakteri transduce yeteneğini yaygınlığı nedeniyle, böyle bir yöntem dayanıklı bakteri yayılmasını okuyan değerli olabilir.

Biomolecules miktar bilim, radioimmunoassay (RIA) veya ELISA1gibi yöntemler istihdam içinde birçok farklı araştırma alanlarında kullanılır. Bu yöntemlerden bazıları bir etiketli gerektiren bir Radyoizotop veya enzim gibi reaktif etiketli antikor/antijen, emek yoğun ve karmaşık prosedürleri2zaman alıcı kılan. Ayrıca, sağlamlık, seçicilik ve duyarlılık bu yöntemlerin tüm analizler için yeterli değildir; attogram miktarları piktogram miktarları3yerine çözümlenmesi gerektiğinde özellikle onlar yeterli değildir. Bu amaçla, biyosensörler büyük ilgi4,5, özellikle artan bir sağlamlık için moleküler sürecinden ile birlikte kazandı.
Moleküler sürecinden boşluklar çevresinde mükemmel şablonu7benzer yapay tanıma site oluşturma şablonu6, fonksiyonel monomer polymerizing tarafından oluşturulması ile ilgili dayanır. Bu teknik, ilaç dağıtım sistemleri ve analitik ayırma, dahil olmak üzere çeşitli uygulamaların aynı zamanda biyosensörler8,9,10biorecognition unsurları olarak kullanılmıştır. Ancak, hala bazı sorunlar tatlı baskılı Polimerler (MIPS) protein ve hücreleri11,12gibi makromoleküllerin şablonları için tasarım vardır. Bu nedenle, pek çok araştırmacı şablon protein doğrudan bir substrat üzerine basma böylece hedef protein12tarafından tanınan bir yüzey oluşturmadan odaklanmıştır. Tanıma boşlukları büyük moleküller ve protein içeren derlemeler için istihdam için kullanılan bu yüzey kaplama teknik13,14basma microcontact denir. -Bir şablon damga ve polimer destek - bunun üzerine şablonu bir yüzey15,16adsorbe ve temas getirdim iki yüzeyler arasında polimerizasyon yöntemi genel yordamı bağlıdır monomer tedavi yüzey. Bu arada, bir ince polimer film çekmek yolu ile UV-polimerizasyon üzerinde oluşturulur. Son olarak, şablon, şablon belirli boşluklar baskılı elektrot yüzeyi geride bırakarak kaldırılır. Bu yöntem bazı avantajları baskılı molekül düşük aktivite kaybı da dahil olmak üzere,16,17sürecinden için şablon moleküllerin de gerektiren çok küçük miktarlarda işlem vardır. Böylece, bu düşük maliyetli, istikrarlı, hassas ve seçici yüzeyler herhangi bir şablon kullanıcının tercihine / hedefleme sensör yüzeylerde oluşturulabilir.
Biyoalgılayıcı tek protein ve virüsler de dahil olmak üzere çok daha büyük biomacromolecules tespiti için kullanılabilir. Belirli virüs son faiz kazanıyor bakteri bulaşan bir virüstür bakteriyofaj grubudur. Bacteriophages hızlı ve hassas tespiti önemli sırasında Biyoteknolojik ve bakteri kültürleri ile bacteriophages18adet enfeksiyondan belirlemede biyofarmasotik işlemleri. En sık kullanılan biyolojik tahlil bakteriyofaj tespiti için çift katmanlı agar yöntemi19, zahmetli ve zaman alıcı olan olduğunu. Birkaç denemeden virüs (bacteriophages dahil) için yeni tanı araçları geliştirmek için Atomik Kuvvet Mikroskobu (AFM)20, Interferometry21, elektrokimya22ve sensör sistemi23, gibi yapılmıştır 24. bir sürü iş biyosensörler kullanımı kolay, son derece hassas ve gerçek zamanlı ölçüm15,25kabil varlık olarak kendi avantajları sayesinde üzerinde duruldu. Biyoalgılayıcı belirli bir tip kapasitans değişiklikler temel alır. Bu kapasitif biyosensörler değişiklikleri ölçmek elektrokimyasal algılayıcılar sensör yüzeyinde biorecognition öğesi içeren bir analit etkileşim kurduğunda, Dielektrik özelliklerinde kapasite2,4 azalmasına neden olan . Kapasitif biyosensörler antijenleri, antikor, proteinler ve ağır metal iyonlarının6,26,27,28gibi çeşitli analitlerin tespiti için kullanılmaktadır. Bu tür biyosensörler29etiketleme olmadan doğasında hız, yüksek hassasiyet, basitlik, düşük maliyetli, kolay manipülasyon ve gerçek zamanlı ölçüm gibi pek çok avantajı var.
Burada açıklanan yöntemi algılama ve herhangi bir etiketleme kullanarak gerek kalmadan son derece karmaşık örneklerinde düşük bol biomolecules miktar etkinleştirme hedefleniyor. Özellikle, teknik nereye doğru hedef quantitate için ticari olarak mevcut diğer enstrümanlar başarısız biomolecules, sınav-picogram aralığında en yararlı olur.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:753px;" width="754">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Glass Cover slips</td>
			<td style="width:147px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:224px;">102222</td>
			<td style="width:167px;">protein stamp</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">HCl</td>
			<td style="width:147px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>H1758-500ML</td>
			<td>cleaning</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">NaOH</td>
			<td style="width:147px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>72068-100ML</td>
			<td>cleaning</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Ultrasonic cleaner</td>
			<td style="width:147px;">Branson Ultrasonic</td>
			<td>BRANSONIC M1800- E</td>
			<td>cleaning</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:216px;">3-amino-propyl-triethoxysilane (APTES)</td>
			<td style="width:147px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>A3648-100ML</td>
			<td>modification</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">EtOH</td>
			<td style="width:147px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>1009836010</td>
			<td>rinsing/cleaning</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">glutaraldehyde</td>
			<td style="width:147px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>G5882-100ML</td>
			<td>cross-linker</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">acetone</td>
			<td style="width:147px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>34850-1L-M</td>
			<td>cleaning</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;">H2SO4</td>
			<td style="width:147px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>339741-100ML</td>
			<td>piranha solution</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;">H2O2</td>
			<td style="width:147px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>H1009-500ML</td>
			<td>piranha solution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">tyramine</td>
			<td style="width:147px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>T90344-5G</td>
			<td>modification</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">CompactStat</td>
			<td style="width:147px;">Ivium Technologies</td>
			<td>CompactStat.h: 30mA@10V/3MHz</td>
			<td>potentiostat</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:216px;">Platinum Counter Electrode Kit</td>
			<td style="width:147px;">Equilabrium</td>
			<td>AFCTR5</td>
			<td>potentiostat</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Reference Electrode</td>
			<td style="width:147px;">Equilabrium</td>
			<td>RREF0021</td>
			<td>potentiostat</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">acryloyl chloride</td>
			<td style="width:147px;">EMD Millipore</td>
			<td>8.00826.0100</td>
			<td>modification</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">triethylamine</td>
			<td style="width:147px;">EMD Millipore</td>
			<td>8.08352.0100</td>
			<td>modification</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">toluene</td>
			<td style="width:147px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>244511-100ML</td>
			<td>modification</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">N-hydroxymethyl acrylamide</td>
			<td style="width:147px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>245801-100G</td>
			<td>functional monomer</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:216px;">poly ethylene glycol-400-dimethacrylate</td>
			<td style="width:147px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>409510-250ML</td>
			<td>cross-linker</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">2-Hydroxy-4&#8242;-(2-hydroxyethoxy)-2-methylpropiophenone</td>
			<td style="width:147px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>410896-50G</td>
			<td>functional monomer</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">UV polymerizator</td>
			<td style="width:147px;">Dymax</td>
			<td style="width:224px;">Dymax 5000ECE</td>
			<td>UV-polymerization</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">forceps</td>
			<td style="width:147px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>Z168777-1EA</td>
			<td>consumable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">1-dodecanethiol</td>
			<td style="width:147px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>471364-100ML</td>
			<td>blocking agent</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">acrylamide</td>
			<td style="width:147px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>A3553-100G</td>
			<td>functional monomer</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">N-hydroxymethylacrylamide</td>
			<td style="width:147px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>245801-100G</td>
			<td>functional monomer</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">N-isopropylacrylamide</td>
			<td style="width:147px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>415324-50G</td>
			<td>functional monomer</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">methylenebisacrylamide</td>
			<td style="width:147px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>146072-500G</td>
			<td>cross-linking monomer</td>
		</tr>
		<tr height="48">
			<td height="48" style="height:48px;width:216px;">N,N,N&#39;,N&#39;-tetrametyhlethyldiamine (TEMED)</td>
			<td style="width:147px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>T9281-25ML</td>
			<td>catalyst</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">ammonium persulphate</td>
			<td style="width:147px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>A3678-25G</td>
			<td>initiator</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Capacitive biosensor</td>
			<td style="width:147px;">CapSenze</td>
			<td style="width:224px;"></td>
			<td>Equipment</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Glycine</td>
			<td style="width:147px;">Merck</td>
			<td>1042011000</td>
			<td>regeneration buffer</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Tween-20</td>
			<td style="width:147px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>P9416-50ML</td>
			<td>regeneration buffer</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Trizma base</td>
			<td style="width:147px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>93352-1KG</td>
			<td>running buffer</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Na2HPO4&#160;&#8226; 2H2O</td>
			<td>Calbiochem</td>
			<td>567547-1KG</td>
			<td>running buffer</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">NaH2PO4&#160;&#8226; 2H2O</td>
			<td>Calbiochem</td>
			<td>567549-1KG</td>
			<td>running buffer</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:216px;">DELPHI correlative light and electron microscope</td>
			<td style="width:147px;">Phenom-World</td>
			<td style="width:224px;"></td>
			<td>equipment</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Capacitive gold electrodes</td>
			<td>CapSenze Biosystems</td>
			<td></td>
			<td>consumables</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">2,2&#39;-azobis(2-methypropionitrile)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>441090-25G</td>
			<td>photo-initiator</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:216px;">CapSenze Smart Software</td>
			<td style="width:147px;">CapSenze Biosystems</td>
			<td style="width:224px;"></td>
			<td style="width:167px;">software program</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

ultrasensitive detection of biomarkers by using a molecular imprinting based capacitive biosensor

Algılamak ve biomolecules karmaşık çözümleri quantitate yeteneği her zaman Doğa Bilimleri içinde çok aranan olmuştur; biyolojik, kirleticiler ve diğer moleküller ilgi tespiti için kullanılıyor. Enzim bağlı Immunosorbent Assay (burada sık sık bir antikor belirli hedef molekül doğru yönlendirilir ve ikinci bir etiketli antikor birincil antikor algılama için kullanılır, bırakmak için ELISA), bu amaç için yaygın olarak kullanılan bir teknik olduğunu Mutlak miktar altında eğitim biomolecule. Ancak, kullanım tanımayı öğeler olarak antikorların yöntemi sağlamlık sınırlar; etiketli molekülleri kullanarak ihtiyacı olduğu gibi. Bu sınırlamalarını aşmak için moleküler sürecinden, yapay tanıma site şablonu molekül için tamamlayıcı oluşturma ve antikorlar için ilk bağlama kullanma gerekliliği obsoleting uygulamaya konmuştur. Ayrıca, hatta daha yüksek hassasiyet için ikincil etiketli antikor kapasitans hedef molekül miktar için güvenerek biyosensörler tarafından değiştirilebilir. Bu protokol için hızla ve etiket içermeyen algılamak ve karmaşık örneklerinde, düşük bol biomolecules (protein ve virüsler) önemli ölçüde ELISA gibi yaygın olarak kullanılan algılama sistemleri daha iyi bir hassasiyetle quantitate için bir yöntemi açıklanmaktadır. Tüm bu kapasite Biyoalgılayıcı ile birlikte moleküler sürecinden tarafından aracılık ettiği.

Protokole göre şekil 1, şematik takip ederek çıplak altın elektrot bir biomacromolecule yapısını temsil eden bir şablon ile kaydedilecek. Bu elektrot elektrot şablonunu kararlı uygulanması ve değişiklikleri ölçümü bağlama şablonunun üzerine kapasite sağlayan bir kapasitif Biyoalgılayıcı (Resim 2), uygulanabilir.
Kapasitif Biyoalgılayıcı şematik gösterimi Şekil 2' de gösterilmiştir. Çalışan tampon (10 mM fosfat, pH 7,4) ve rejenerasyon tampon (25 mM glisin-HCl, pH 2.5) sürekli enjeksiyon akışı hücre içine yeniden oluşturma sırasında sorumludur, centris pompa şekilde açıkça görülebilir. Akış hücre çalışma, başvuru ve sayaç elektrotlar oluşur. Enjeksiyon Vana degasser ilk geçen standart protein/bakteriyofaj çözümleri, oluşur ve daha sonra sırayla enjekte içine belgili tanımlık sistem. Belgili tanımlık eriyik akış hücreye eklenen çalışma elektrot ulaşır ulaşmaz, sonuç gerçek zamanlı olarak kontrol edilmektedir. Kapasitans değerleri bilgisayar ekranındaki sensorgrams takip ederek kaydedilebilir.
Şekil 3 ve şekil 4 çıplak ve baskılı altın elektrot yüzeyi arasındaki farklar tasvir. Bu karakterizasyonu adım polimer boşluklar, elektrot yüzeyi pürüzlülük sürecinden sonra görülen sağlamak önemlidir. SEM dışında Ayrıca AFM, iletişim açı ölçüleri, dahil olmak üzere diğer karakterizasyon yöntemleri vardır ellipsometry yüzey sürecinden sonra tanımlamak için kullanılan vb. Bu arada, basma işlemi başarılı ve şablon boşluklar yüzeyde oluşan sağlanabilir. Bu boşluklar içinde şablon yüksek özgüllük ve ilgi ile bağlayabilirsiniz.
Standart çözümler kapasitif sisteme enjekte sonra son beş okuma ortalama otomatik olarak yazılım tarafından hesaplanmıştır ve Kalibrasyon grafikler vs konsantrasyonu kapasite değişikliği komplo tarafından elde edildi analit. Kayıtlı kapasitans azalma şablon bağlama üzerinden ortaya çıktı. Altın elektrot bağlamak daha fazla molekül su yüzüne, daha yüksek toplam kapasitans, azalma kapasitif ölçüm genel ilkesine göre. Şekil 5 ve şekil 6 analit konsantrasyonu artan ile ΔC beklendiği gibi artırır gösterir. Kameranın dinamik alanı (sistem belirli bir hedef tespiti için yararlı nerede konsantrasyon aralığı olduğu arasında) ve algılama (lod olarak) sınırı bu grafikleri analiz ederek değerlendirilebilir. Göre şekil 6,-ebilmek bulmak baskılı bakteriyofaj kapasitif Biyoalgılayıcı bacteriophages 10 konsantrasyon aralığı1 - 105 pfu/mL, bu çalışmada 10 pfu/mL LOD değeri olan. Şekil 5 ve şekil 6 da vurgulamak kalibrasyon eğrisi aynı aralıkta ölçüm gerekliliği şablon konsantrasyon için gerekli olması gerektiği, lineer regresyon konsantrasyonları ( üzerinde farklı olabilir beri Şekil 5), veya farklı yamaçlarında (şekil 6). Ayrıca nedeniyle düşük konsantrasyonlarda kullanılan dikkat edilmelidir, sistem dalgalanmalara (bulanıklık örnek, hava taslak, vb) oldukça hassastır ve bu nedenle, bu en azından çalıştırmak için tavsiye edilir outliers dahil olmak üzere potansiyel azaltmak için triplicates . Aynı nedenle, standart sapma şekil 6' da görüldüğü gibi yüksek oranda seyreltilmiş numune için oldukça önemli olabilir.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57208/57208fig1.jpg"> Resim 1 . Şematik gösterimi yöntemi basma microcontact. Cam kapak kâğıdını (şablon pullar),(a)hazırlık kapasitif altın elektrotlar hazırlanması (B) (C) microcontact sürecinden şablonunun UV-polimerizasyon ve (D) üzerinden altın elektrot yüzeyine elektrot yüzeyi şablondan kaldırılması (çoğaltılamaz Ertürk ve ark., biyoteknoloji raporları 2014 (3): 65-72 izni ile). <a href="//cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/57208/57208fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57208/57208fig2.jpg"> Şekil 2. Şematik gösterimi kapasitif Biyoalgılayıcı. Bu çalışmada kullanılan kapasitif Biyoalgılayıcı genel düzeni (çoğaltılamaz Ertürk ve ark., biyoteknoloji raporları 2014 (3): 65-72 izni ile). <a href="//cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/57208/57208fig2large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57208/57208fig3.jpg"> Şekil 3. Tarama elektron mikroskobu protein baskılı elektrotlar. (A) çıplak altın elektrot SEM görüntüleri (ölçek çubuğu = 20 µm), ve (B) bir protein baskılı kapasitif altın elektrot (ölçek çubuğu 10 µm =). <a href="//cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/57208/57208fig3large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57208/57208fig4.jpg"> Şekil 4. Tarama elektron mikroskobu, bakteriyofaj baskılı elektrotlar. SEM görüntüleri çıplak altın elektrot (ölçek çubuğu 20 µm =)(a)ve farklı büyüklüklerde kapasitif altın elektrot bir bakteriyofaj baskılı (= 6600 x, ölçek çubuğu 10 µm) (B) ve 11, 500 X, ölçek çubuk = 5 mikron) (C); oklar yapıştırılan bacteriophages gösterir). <a href="//cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/57208/57208fig4large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57208/57208fig5.jpg"> Şekil 5. Arabellek oluşturma kalibrasyon grafiklerde etkisi. Kapasitans optimum koşullarda bir protein konsantrasyonu vs içinde değişiklik gösteren kalibrasyon grafik (tampon çalıştıran: 50 mM Tris-HCl, pH 7.4; Rejenerasyon arabellek: 25 mM glisin-HCl, pH 2.5 50 mM ara-20 de dahil olmak üzere; Akış hızı: 100 µL/dak, numune hacmi: 250 µL; T: 25 ° C). <a href="//cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/57208/57208fig5large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57208/57208fig6.jpg"> Şekil 6. Temsilcisi kalibrasyon eğrisi için büyük biomacromolecules. Kapasitans bakteriyofaj konsantrasyon optimum koşullarda vs içinde değişiklik gösteren kalibrasyon grafiği (tampon çalıştıran: 10 mM fosfat, pH 7.4; Rejenerasyon arabellek: 25 mM glisin-HCl, pH 2.5 50 mM ara-20 de dahil olmak üzere; Akış hızı: 100 µL/dak, numune hacmi: 250 µL; T: 25 ° C) <a href="//cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/57208/57208fig6large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Ultrasensitive Detection of Biomarkers by Using a Molecular Imprinting Based Capacitive Biosensor at JoVE.com

Ultrasensitive Detection of Biomarkers by Using a Molecular Imprinting Based Capacitive Biosensor

Burada, algılama ve düşük bol moleküllerin miktar için bir protokol kapasitans Biyoalgılayıcı ile birlikte basma moleküler kullanarak karmaşık çözümlerinde mevcut.

Vericiyi biyolojik moleküler sürecinden kullanarak tespiti kapasitif Biyoalgılayıcı dayalı

The ability to detect and quantitate biomolecules in complex solutions has always been highly sought-after within natural science; being used for the ...

ultrasensitive-detection-biomarkers-using-molecular-imprinting-based

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

11.9K Görüntüleme.  Lund University. Burada, algılama ve düşük bol moleküllerin miktar için bir protokol kapasitans Biyoalgılayıcı ile birlikte basma moleküler kullanarak karmaşık çözümlerinde mevcut.

Video: Ultrasensitive Detection of Biomarkers by Using a Molecular Imprinting Based Capacitive Biosensor

Combination of Adhesive-tape-based Sampling and Fluorescence in situ Hybridization for Rapid Detection of Salmonella on Fresh Produce

This protocol describes a simple approach for adhesive-tape-based sampling of tomato and other fresh produce surfaces, followed by on-tape fluorescence in situ hybridization (FISH) for rapid culture-independent detection of Salmonella spp. Cell-charged tapes can also be placed face-down on selective agar for solid-phase enrichment prior to detection. Alternatively, low-volume liquid enrichments (liquid surface miniculture) can be performed on the surface of the tape in non-selective broth, followed by FISH and analysis via flow cytometry. To begin, sterile adhesive tape is brought into contact with fresh produce, gentle pressure is applied, and the tape is removed, physically extracting microbes present on these surfaces. Tapes are mounted sticky-side up onto glass microscope slides and the sampled cells are fixed with 10% formalin (30 min) and dehydrated using a graded ethanol series (50, 80, and 95%; 3 min each concentration). Next, cell-charged tapes are spotted with buffer containing a Salmonella-targeted DNA probe cocktail and hybridized for 15 - 30 min at 55&deg;C, followed by a brief rinse in a washing buffer to remove unbound probe. Adherent, FISH-labeled cells are then counterstained with the DNA dye 4',6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) and results are viewed using fluorescence microscopy. For solid-phase enrichment, cell-charged tapes are placed face-down on a suitable selective agar surface and incubated to allow in situ growth of Salmonella microcolonies, followed by FISH and microscopy as described above. For liquid surface miniculture, cell-charged tapes are placed sticky side up and a silicone perfusion chamber is applied so that the tape and microscope slide form the bottom of a water-tight chamber into which a small volume (&le; 500 &mu;L) of Trypticase Soy Broth (TSB) is introduced. The inlet ports are sealed and the chambers are incubated at 35 - 37&deg;C, allowing growth-based amplification of tape-extracted microbes. Following incubation, inlet ports are unsealed, cells are detached and mixed with vigorous back and forth pipetting, harvested via centrifugation and fixed in 10% neutral buffered formalin. Finally, samples are hybridized and examined via flow cytometry to reveal the presence of Salmonella spp. As described here, our "tape-FISH" approach can provide simple and rapid sampling and detection of Salmonella on tomato surfaces. We have also used this approach for sampling other types of fresh produce, including spinach and jalape&ntilde;o peppers.

Combination of Adhesive-tape-based Sampling and Fluorescence in situ Hybridization for Rapid Detection of Salmonella on Fresh Produce

This protocol describes a simple adhesive-tape-based approach for sampling of tomato and other fresh produce surfaces, followed by rapid whole cell detection of Salmonella using fluorescence in situ hybridization (FISH).

Yapışkan bant tabanlı Örnekleme ve Floresans kombinasyonu In situ</emHızlı Algılama> Hibridizasyon Salmonella Taze üretin

This protocol describes a simple approach for adhesive-tape-based sampling of tomato and other fresh produce surfaces, followed by on-tape fluorescence in ...

İmmünoloji ve Enfeksiyon

'Bioluminescent' Reporter Phage for the Detection of Category A Bacterial Pathogens

Yersinia pestis and Bacillus anthracis are Category A bacterial pathogens that are the causative agents of the plague and anthrax, respectively 1. Although the natural occurrence of both diseases&#39; is now relatively rare, the possibility of terrorist groups using these pathogens as a bioweapon is real. Because of the disease&#39;s inherent communicability, rapid clinical course, and high mortality rate, it is critical that an outbreak be detected quickly. Therefore methodologies that provide rapid detection and diagnosis are essential to ensure immediate implementation of public health measures and activation of crisis management.
Recombinant reporter phage may provide a rapid and specific approach for the detection of Y. pestis and B. anthracis. The Centers for Disease Control and Prevention currently use the classical phage lysis assays for the confirmed identification of these bacterial pathogens 2-4. These assays take advantage of naturally occurring phage which are specific and lytic for their bacterial hosts. After overnight growth of the cultivated bacterium in the presence of the specific phage, the formation of plaques (bacterial lysis) provides a positive identification of the bacterial target. Although these assays are robust, they suffer from three shortcomings: 1) they are laboratory based; 2) they require bacterial isolation and cultivation from the suspected sample, and 3) they take 24-36 h to complete. To address these issues, recombinant &#34;light-tagged&#34; reporter phage were genetically engineered by integrating the Vibrio harveyi luxAB genes into the genome of Y. pestis and B. anthracis specific phage 5-8. The resulting luxAB reporter phage were able to detect their specific target by rapidly (within minutes) and sensitively conferring a bioluminescent phenotype to recipient cells. Importantly, detection was obtained either with cultivated recipient cells or with mock-infected clinical specimens 7.
For demonstration purposes, here we describe the method for the phage-mediated detection of a known Y. pestis isolate using a luxAB reporter phage constructed from the CDC plague diagnostic phage &#934;A1122 6,7 (Figure 1). A similar method, with minor modifications (e.g. change in growth temperature and media), may be used for the detection of B. anthracis isolates using the B. anthracis reporter phage W&#946;::luxAB 8. The method describes the phage-mediated transduction of a biolumescent phenotype to cultivated Y. pestis cells which are subsequently measured using a microplate luminometer. The major advantages of this method over the traditional phage lysis assays is the ease of use, the rapid results, and the ability to test multiple samples simultaneously in a 96-well microtiter plate format.
<img alt="Figure 1" src="/files/ftp_upload/2740/2740fig1.jpg" /> 
Figure 1. Detection schematic. The phage are mixed with the sample, the phage infects the cell, luxAB are expressed, and the cell bioluminesces. Sample processing is not necessary; the phage and cells are mixed and subsequently measured for light.

A simple method for the identification of priority bacterial pathogens is to use genetically engineered reporter phage. These reporter phage, which are specific to their particular host species, are capable of rapidly transducing a bioluminescent signal response to host cells. Herein, we describe the use of reporter phage for the detection of Yersinia pestis.

Kategori Algılama Bir Bakteriyel Patojenler &#39;Bioluminescent&#39; Muhabir Faj

Yersinia pestis and Bacillus anthracis are Category A bacterial pathogens that are the causative agents of the plague and anthrax, respectively 1. ...

Detection of Toxin Translocation into the Host Cytosol by Surface Plasmon Resonance

AB toxins consist of an enzymatic A subunit and a cell-binding B subunit1. These toxins are secreted into the extracellular milieu, but they act upon targets within the eukaryotic cytosol. Some AB toxins travel by vesicle carriers from the cell surface to the endoplasmic reticulum (ER) before entering the cytosol2-4. In the ER, the catalytic A chain dissociates from the rest of the toxin and moves through a protein-conducting channel to reach its cytosolic target5. The translocated, cytosolic A chain is difficult to detect because toxin trafficking to the ER is an extremely inefficient process: most internalized toxin is routed to the lysosomes for degradation, so only a small fraction of surface-bound toxin reaches the Golgi apparatus and ER6-12.

To monitor toxin translocation from the ER to the cytosol in cultured cells, we combined a subcellular fractionation protocol with the highly sensitive detection method of surface plasmon resonance (SPR)13-15. The plasma membrane of toxin-treated cells is selectively permeabilized with digitonin, allowing collection of a cytosolic fraction which is subsequently perfused over an SPR sensor coated with an anti-toxin A chain antibody. The antibody-coated sensor can capture and detect pg/mL quantities of cytosolic toxin. With this protocol, it is possible to follow the kinetics of toxin entry into the cytosol and to characterize inhibitory effects on the translocation event. The concentration of cytosolic toxin can also be calculated from a standard curve generated with known quantities of A chain standards that have been perfused over the sensor. Our method represents a rapid, sensitive, and quantitative detection system that does not require radiolabeling or other modifications to the target toxin.

In this report, we describe how surface plasmon resonance is used to detect toxin entry into the host cytosol. This highly sensitive method can provide quantitative data on the amount of cytosolic toxin, and it can be applied to a range of toxins.

Yüzey Plasmon Rezonans Host Cytosol Toksin Translokasyon Tespiti

AB toxins consist of an enzymatic A subunit and a cell-binding B subunit1.  These toxins are secreted into the extracellular milieu, but they act upon ...

Detection of Human Leukocyte Antigen Biomarkers in Breast Cancer Utilizing Label-free Biosensor Technology

According to the American Cancer Society, more than 200,000 women will be diagnosed with invasive breast cancer each year and approximately 40,000 will die from the disease. The human leukocyte antigen (HLA) class I samples peptides derived from proteasomal degradation of cellular proteins and presents these fragments on the cell surface for interrogation by circulating cytotoxic T lymphocytes (CTL). Generation of T-cell receptor mimic (TCRm) monoclonal antibodies (mAbs) which recognize breast cancer specific peptide/HLA-A*02:01 complexes such as those derived from macrophage migration inhibitory factor (MIF19-27) and NY-ESO-1157-165 enable detection and destruction of breast cancer cells in the absence of an effective anti-tumor CTL response. Intact class I HLA/peptide complexes are shed by breast cancer cells and represent potentially relevant cancer biomarkers. In this work, a breakthrough biomarker screening system for cancer diagnostics incorporating T-cell receptor mimic monoclonal antibodies combined with a novel, label-free biosensor utilizing guided-mode resonance (GMR) sensor technology is presented. Detection of shed MIF/HLA-A*02:01 complexes in MDA-MB-231 cell supernatants, spiked human serum, and patient plasma is demonstrated. The impact of this work could revolutionize personalized medicine through development of companion disease diagnostics for targeted immunotherapies.

Intact class I HLA/peptide complexes are shed by cancer cells, representing a potential relevant cancer biomarker. Utilizing label-free sensor technology and T-cell receptor mimicking monoclonal antibodies, detection of shed MIF/HLA-A*02:01 complexes in MDA-MB-231 cell supernatants, spiked human serum, and patient plasma is demonstrated, enabling development of a novel cancer diagnostic platform.

Etiket-ücretsiz Biyosensör Teknolojisi kullanılması Meme Kanserinde İnsan Lökosit Antijen BİYOMARKÖRLERİN Algılama

According to the American Cancer Society, more than 200,000 women will be diagnosed with invasive breast cancer each year and approximately 40,000 will ...

Rapid Molecular Detection and Differentiation of Influenza Viruses A and B

Influenza is a contagious respiratory illness caused by influenza viruses A and B in humans and causes a significant amount of morbidity and mortality every year. The Influenza A and B assay was the first CLIA-waived molecular rapid flu test available. The Influenza A and B test works by employing isothermal amplification with influenza-specific primers followed by target detection with molecular beacon probes. Here, the performance of the Influenza A and B assay on frozen, archived nasopharyngeal swab (NPS) specimens stored in viral transport medium (VTM) were compared to a respiratory panel assay.
The performance of the Influenza A and B assay was evaluated by comparing the results to the respiratory panel reference method. The sensitivity for total influenza virus A was 67.5% (95% CI (CI), 56.6-78.5) and the specificity was 86.9% (CI, 71.0-100). For influenza virus B testing, the sensitivity and specificity were 90.2% (CI, 68.5-100) and 98.8% (CI, 68.5-100), respectively.
This system has the advantage of a significantly shorter test time than any other currently available molecular assay and the simple, pipette-free procedure runs on a fully integrated, closed, small-footprint system. Overall, the Influenza A and B assay evaluated in this study has the potential to serve as a point-of-care rapid influenza diagnostic test.

We describe a rapid, molecular-based Influenza A and B assay. The Influenza assay detects each target within 15 min by employing isothermal amplification with influenza-specific primers followed by target detection with molecular beacon probes. The Influenza A and B assay is user-friendly and required minimal hands-on time to perform.

Hızlı moleküler algılama ve Nezle Virüsleri A ve B farklılaşması

Influenza is a contagious respiratory illness caused by influenza viruses A and B in humans and causes a significant amount of morbidity and mortality ...

High-throughput Detection of Respiratory Pathogens in Animal Specimens by Nanoscale PCR

Nanoliter scale real-time PCR uses spatial multiplexing to allow multiple assays to be run in parallel on a single plate without the typical drawbacks of combining reactions together. We designed and evaluated a panel based on this principle to rapidly identify the presence of common disease agents in dogs and horses with acute respiratory illness. This manuscript describes a nanoscale diagnostic PCR workflow for sample preparation, amplification, and analysis of target pathogen sequences, focusing on procedures that are different from microliter scale reactions. In the respiratory panel presented, 18 assays were each set up in triplicate, accommodating up to 48 samples per plate. A universal extraction and pre-amplification workflow was optimized for high-throughput sample preparation to accommodate multiple matrices and DNA and RNA based pathogens. Representative data are presented for one RNA target (influenza A matrix) and one DNA target (equine herpesvirus 1). The ability to quickly and accurately test for a comprehensive, syndrome-based group of pathogens is a valuable tool for improving efficiency and ergonomics of diagnostic testing and for acute respiratory disease diagnosis and management.

High-throughput testing of DNA and RNA based pathogens by nanoscale PCR is described using a syndromic canine and equine respiratory PCR panel.

Nano PCR ile Hayvan Örnekler Solunum Patojenler yüksek verimlilik Algılama

Nanoliter scale real-time PCR uses spatial multiplexing to allow multiple assays to be run in parallel on a single plate without the typical drawbacks of ...

A High-throughput Platform for the Screening of Salmonella spp./Shigella spp.

Fecal-oral transmission of acute gastroenteritis occurs from time to time, especially when people who handled food and water are infected by Salmonella spp./Shigella spp. The gold standard method for the detection of Salmonella spp./Shigella spp. is direct culture but this is labor-intensive and time-consuming. Here, we describe a high-throughput platform for Salmonella spp./Shigella spp. screening, using real-time polymerase chain reaction (PCR) combined with guided culture. There are two major stages: real-time PCR and the guided culture. For the first stage (real-time PCR), we explain each step of the method: sample collection, pre-enrichment, DNA extraction and real-time PCR. If the real-time PCR result is positive, then the second stage (guided culture) is performed: selective culture, biochemical identification and serological characterization. We also illustrate representative results generated from it. The protocol described here would be a valuable platform for the rapid, specific, sensitive and high-throughput screening of Salmonella spp./Shigella spp.

A High-throughput Platform for the Screening of Salmonella spp./Shigella spp.

Salmonella spp./Shigella spp. are common pathogens attributed to diarrhea. Here, we describe a high-throughput platform for the screening of Salmonella spp./Shigella spp. using real-time PCR combined with guided culture.

Salmonella spp. testi ile taranması için yüksek üretilen iş platformu /Shigella spp.

Fecal-oral transmission of acute gastroenteritis occurs from time to time, especially when people who handled food and water are infected by Salmonella ...

Detection of Low Copy Number Integrated Viral DNA Formed by In Vitro Hepatitis B Infection

Hepatitis B Virus (HBV) is a common blood-borne pathogen causing liver cancer and liver cirrhosis resulting from chronic infection. The virus generally replicates through an episomal DNA intermediate; however, integration of HBV DNA fragments into the host genome has been observed, even though this form is not necessary for viral replication. The exact purpose, timing, and mechanism(s) by which HBV DNA integration occurs is not yet clear, but recent data show that it occurs very early after infection. Here, the in vitro generation and detection of HBV DNA integrations are described in detail. Our protocol specifically amplifies single copies of virus-cell DNA integrations and allows both absolute quantification and single-base pair resolution of the junction sequence. This technique has been applied to various HBV-susceptible cell types (including primary human hepatocytes), to various HBV mutants, and in conjunction with various drug exposures. We foresee this technique becoming a key assay to determine the underlying molecular mechanisms of this clinically relevant phenomenon.

Detection of Low Copy Number Integrated Viral DNA Formed by In Vitro Hepatitis B Infection

We describe here the in vitro generation of HBV DNA via a Hepatitis B virus infection system and the highly sensitive detection of its (1&#8211;2 copies) integration using inverse nested PCR.

Algılama düşük kopya sayısı Vitro hepatit B enfeksiyonu tarafından kurulan entegre Viral DNA

Hepatitis B Virus (HBV) is a common blood-borne pathogen causing liver cancer and liver cirrhosis resulting from chronic infection. The virus generally ...

Human Serum Anti-aquaporin-4 Immunoglobulin G Detection by Cell-based Assay

Anti-aquaporin-4 (AQP4) immunoglobulin G (IgG) is the core diagnostic biomarker for neuromyelitis optica spectrum disorders (NMOSD). The cell-based assay (CBA) is a widely used method to detect anti-AQP4 IgG in human serum with high sensitivity and specificity. Briefly, serum anti-AQP4 IgG is captured by AQP4-transfected cell that is fixed on the biochip then detected by a fluorescein-labelled secondary antibody. Fluorescence microscopy is utilized to visualize the fluorescence, and the intensity of fluorescence is evaluated by at least two experienced clinicians. A final diagnosis of NMOSD can be made based on the combination of anti-AQP4 IgG detection results, clinical manifestations, and neuroradiological findings. According to previous studies, CBA is more sensitive and specific than other anti-AQP4 IgG detection methods, and it can be applied to both clinical diagnosis and studies of NMOSD. The method has limitations; for example, an international scale to evaluate serum anti-AQP4 IgG titers is still lacking. Here, a detailed protocol for human serum anti-AQP4 IgG detection using CBA is described.

Cell-based assay is a widely used method to detect serum anti-aquaporin-4 immunoglobulin G. This method could be applied to clinical diagnosis and scientific researches of neuromyelitis optical spectrum disorders.

İnsan Serum Anti-aquaporin-4 immünoglobulin G algılama hücre tabanlı tahlil tarafından

Anti-aquaporin-4 (AQP4) immunoglobulin G (IgG) is the core diagnostic biomarker for neuromyelitis optica spectrum disorders (NMOSD). The cell-based assay ...

Detection of Extravascular Trypanosoma Parasites by Fine Needle Aspiration

Fine Needle Aspiration (FNA) is a routine diagnostic procedure essential to both medical and veterinary practices. It consists of the percutaneous aspiration of cells and/or microorganisms from palpable masses, organs or effusions (fluid accumulation in a body cavity) using a thin needle similar to the regular needle used for the venous puncture. The material collected by FNA is in general highly cellular, and the retrieved aspirate is then smeared, air dried, wet-fixed, stained and observed under a microscope. In the clinical context, FNA is an important diagnostic tool that serves as a guide to the appropriate therapeutic management. Because it is simple, fast, minimally invasive and requires limited investment in the laboratory and human resources, it is extensively used by veterinary practitioners, mostly in domestic, but also in farm animals. In studies using animal models, FNA has the advantage that it can be performed repeatedly in the same animal, enabling longitudinal studies through the collection of cells from tumors and organs/tissues over the course of the disease. In addition to routine microscopy, retrieved material can also be used for immunocytochemistry, electron microscopy, biochemical analysis, flow cytometry, molecular biology or in vitro assays. FNA has been used to identify the protozoan parasite Trypanosoma brucei in the gonads of infected mice, opening the possibility for a future diagnosis in cattle.

Detection of Extravascular Trypanosoma Parasites by Fine Needle Aspiration

Fine Needle Aspiration is a technique, whereby cells are obtained from a lesion or organ using a thin needle. Aspirated material is smeared, stained and examined under a microscope for diagnosis or used for molecular biology, cytometry or in vitro analysis. It is cheap, simple, quick and causes minimal trauma.