We thank the Clinical Microbiology Service staff of the Memorial Sloan-Kettering Cancer Center for help in collecting clinical specimens. This study was supported in part by a research agreement between MSKCC and Alere Scarborough (SK2013-0262).

ETİK TABLOSU: kullanımı sol üzerinde klinik örneklerin onaylanmış ve Memorial Sloan Kettering Kanser Merkezi Kurumsal Değerlendirme Kurulu kuralları izler. 1. Testi Koşu önce NOT: İnfluenza A ve B tahlil nazofarengeal sürüntü örneklerinin ve viral taşıma medya saklanan nazofarengeal sürüntü için onaylanmıştır. Svaplar kit dahil edilir ve en iyi performans için kullanılmalıdır. Ancak, suni ipek, köpük, çubuklar veya polyester burun bezlerden de nazal sürüntü örnekleri toplamak için kullanılabilir akın etti. <ol><li> bir nazal sürüntü örneği toplamak için, en görünür drenaj vardır ya da en sıkışık burun deliğine çubukla yerleştirin. Direnç sağlanana kadar nazik rotasyon ile, burun deliğine çubukla itin ve yavaşça burun deliğinden çıkarmadan önce burun duvara birkaç kez çevirin. bezlerden saklayın ve viral taşıma medya (VTM) 3 ml&#39;lik şişelerde taşırlar. NOT: Dikkatli dikkat appropr içiniate örnek toplama hatalı sonuçlar verebilir yetersiz örnek toplama olarak alınmalıdır. NOT: Swab örnekleri toplandıktan sonra en kısa sürede test edilmelidir. Bununla birlikte, en çok 2 saat oda sıcaklığında muhafaza veya test şimdi kullanılabilir değilse kadar 24 saat boyunca 2-8 ° C&#39;de soğutulmaktadır. Taze toplanan örnekler, testin performansı için idealdir. Yanlış numune işleme, depolama ve / veya taşıma hatalı sonuçlar doğurabilir. NOT: Bir önlem olarak, bu testi bireylerin örneklerini tutarken evrensel önlemler takip ederek potansiyel olarak bulaşıcı tüm örnekleri tedavi gerekir. </li><li> Test öncesinde, oda sıcaklığına kadar tüm örnekler getirin. Not: Tüm test bileşenleri, sadece tek bir kullanım için ve birden fazla testlerini yapmak için kullanılmamalıdır. Farklı lot numaralarına kit bileşenlerini karıştırmayın. son kullanma tarihi geçmiş kit reaktifleri kullanmayın. </li><li> roo mavi örnek alıcı getirTest öncesinde m sıcaklığı. Turuncu test tabanı, oda sıcaklığına kadar ısınmaya gerek kalmadan test edilebilir. </li><li> kadar kullanılmadan hemen önce folyo sarma tüm test parçaları bırakın. Cihazın yan tarafında bulunan güç düğmesine basarak alet açın. Kullanıcı kimliği ve Enter tuşuna basın &#39;Tamam.&#39; </li></ol> 2. Testi Koşu <ol><li> Test sürecine başlamak için, enstrüman ekranda &#39;Run Testi&#39; dokunun. Ekran klavyesini veya barkod tarayıcı ve basın kullanılarak hastaların kimliğini girin &#39;OK.&#39; Kapağı açın ve Portakal testi baz tutucu içine Portakal testi tabanını yerleştirin. </li><li> doğru test ekranı ve basın görüntülendiğini onaylayın &#39;OK.&#39; Mavi numune alıcı tutucu içine mavi örnek alıcısını takın. NOT: Bu doğru çalışma sıcaklığını ulaşmasını elüsyon tamponu engeller ve test performansını etkileyebilir olarak enstrüman yerleştirmeden önce örnek alıcısı açmayın. </li&gt; <li> Örnek alıcı ısınmak için bekleyin. enstrüman tarafından istendiğinde, folyo mühür kaldırmak ve örnek alıcı içine test edilecek hasta bezi yerleştirin. NOT: folyo sökerken, yerinde kalmasını sağlamak için örnek Alıcı kenarında iki parmağınızı yerleştirin. </li><li> Şiddetle size çubukla gelen numune çıkarmak yardımcı karıştırarak olarak numune alıcı tarafında karşı çubukla kafasına basarak, 10 saniye boyunca sıvı içinde çubukla karıştırın. Basın &#39;Tamam&#39; devam etmek. viral taşıma ortamında saklanan test bezlerden, 10 saniye boyunca VTM vorteks sonra numune alıcısına 200 ul ekleyin. </li><li> mavi numune alıcı içine beyaz aktarım kartuşunu basın. turuncu gösterge yükselir kadar örnek alıcısı üzerinde basmaya devam edin. </li><li> Kaldırın ve daha sonra test tabanına aktarma kartuşu takın. Kartuş transferi doğru bağlandığından kez turuncu gösterge gözlemleyin inerler. Kapak kapatın ve &quot;Test Complete&quot; kadar açmayınmesajı ekranda görünür. </li></ol> 3. Kalite Kontrol <ol><li> Ana ekranda &#39;Run QC Testi&#39; dokunun. QC Testi seçmek Run edilecek. &#39;Tamam&#39; dokunarak ve ekrandaki testi tamamlamak ister takip ederek test amaçlı QC örnek eşleşecek test türünü onaylamak. </li></ol> 4. Sonuç Yorumlama <ol><li> test çalıştırması tamamlandıktan sonra, İnfluenza A, B, bilinmeyen alt tiplerin varlığı için yorumlarıyla ekranda test sonuçlarını gözlemleyin. Geçersiz sonuçlar için testi tekrarlayın. </li></ol> 5. Bakım ve Temizlik <ol><li> alet ve% 70 etanol ya da% 10 çamaşır suyu solüsyonu ile günlük olarak çevredeki tezgah temizleyin. temizlemek için nemli, tüy bırakmayan bir bez üzerine temizleme solüsyonu püskürtün. enstrüman üzerinde doğrudan çözüm dökmeyin. </li></ol>

<ol>
	<li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Prevention control of seasonal influenza with vaccines. Recommendations of the Advisory Committee on Immunization Practices--United States, 2013-2014. , 1-43 (2013).</li><li>Poehling, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Underrecognized+Burden+of+Influenza+in+Young+Children.">The Underrecognized Burden of Influenza in Young Children.</a> New England Journal of Medicine. 355 (1), 31-40 (2006).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estimates+of+Deaths+Associated+with+Seasonal+Influenza+---+United+States,+1976-2007.">Estimates of Deaths Associated with Seasonal Influenza --- United States, 1976-2007.</a> MMWR. 59 (33), 1057-1089 (2010).</li><li>Agrawal, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+evaluation+of+real-time+PCR+and+conventional+RT-PCR+during+a+2+year+surveillance+for+influenza+and+respiratory+syncytial+virus+among+children+with+acute+respiratory+infections+in+Kolkata,+India,+reveals+a+distinct+seasonality+of+infection.">Comparative evaluation of real-time PCR and conventional RT-PCR during a 2 year surveillance for influenza and respiratory syncytial virus among children with acute respiratory infections in Kolkata, India, reveals a distinct seasonality of infection.</a> Journal of Medical Microbiology. 58 (12), 1616-1622 (2009).</li><li>Ginocchio, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Strengths+and+Weaknesses+of+FDA-Approved/Cleared+Diagnostic+Devices+for+the+Molecular+Detection+of+Respiratory+Pathogens.">Strengths and Weaknesses of FDA-Approved/Cleared Diagnostic Devices for the Molecular Detection of Respiratory Pathogens.</a> Clinical Infectious Diseases. 52, 312-325 (2011).</li><li>Grohskopf, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prevention+and+control+of+seasonal+influenza+with+vaccines:+recommendations+of+the+Advisory+Committee+on+Immunization+Practices-United+States,+2013-2014.">Prevention and control of seasonal influenza with vaccines: recommendations of the Advisory Committee on Immunization Practices-United States, 2013-2014.</a> MMWR Recomm Rep. 62 (07), 1-43 (2013).</li><li>Molinari, N. -. A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+annual+impact+of+seasonal+influenza+in+the+US:+measuring+disease+burden+and+costs.">The annual impact of seasonal influenza in the US: measuring disease burden and costs.</a> Vaccine. 25 (27), 5086-5096 (2007).</li><li>Aoki, F. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+administration+of+oral+oseltamivir+increases+the+benefits+of+influenza+treatment.">Early administration of oral oseltamivir increases the benefits of influenza treatment.</a> Journal of Antimicrobial Chemotherapy. 51 (1), 123-129 (2003).</li><li>Noyola, D. E., Demmler, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+rapid+diagnosis+on+management+of+influenza+A+infections.">Effect of rapid diagnosis on management of influenza A infections.</a> The Pediatric infectious disease journal. 19 (4), 303-307 (2000).</li><li>Sharma, V., Dowd, M., Slaughter, A. J., Simon, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=EFfect+of+rapid+diagnosis+of+influenza+virus+type+a+on+the+emergency+department+management+of+febrile+infants+and+toddlers.">EFfect of rapid diagnosis of influenza virus type a on the emergency department management of febrile infants and toddlers.</a> Archives of Pediatrics &amp; Adolescent Medicine. 156 (1), 41-43 (2002).</li><li>Dale, S. E., Mayer, C., Mayer, M. C., Menegus, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analytical+and+clinical+sensitivity+of+the+3M+rapid+detection+influenza+A+B+assay.">Analytical and clinical sensitivity of the 3M rapid detection influenza A+B assay.</a> J Clin Microbiol. 46 (11), 3804-3807 (2008).</li><li>van Doorn, H. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+validation+of+a+point-of-care+multiplexed+in+vitro+immunoassay+using+monoclonal+antibodies+(the+MSD+influenza+test)+in+four+hospitals+in+Vietnam.">Clinical validation of a point-of-care multiplexed in vitro immunoassay using monoclonal antibodies (the MSD influenza test) in four hospitals in Vietnam.</a> J Clin Microbiol. 50 (5), 1621-1625 (2012).</li><li>Hurt, A. C., Alexander, R., Hibbert, J., Deed, N., Barr, I. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Performance+of+six+influenza+rapid+tests+in+detecting+human+influenza+in+clinical+specimens.">Performance of six influenza rapid tests in detecting human influenza in clinical specimens.</a> Journal of Clinical Virology. 39 (2), 132-135 (2007).</li><li>Fiore, A. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antiviral+agents+for+the+treatment+and+chemoprophylaxis+of+influenza+---+recommendations+of+the+Advisory+Committee+on+Immunization+Practices+(ACIP).">Antiviral agents for the treatment and chemoprophylaxis of influenza --- recommendations of the Advisory Committee on Immunization Practices (ACIP).</a> MMWR Recomm Rep. 60 (1), 1-24 (2011).</li><li>Harper, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Seasonal+influenza+in+adults+and+children--diagnosis,+treatment,+chemoprophylaxis,+and+institutional+outbreak+management:+clinical+practice+guidelines+of+the+Infectious+Diseases+Society+of+America.">Seasonal influenza in adults and children--diagnosis, treatment, chemoprophylaxis, and institutional outbreak management: clinical practice guidelines of the Infectious Diseases Society of America.</a> Clin Infect Dis. 48 (8), 1003-1032 (2009).</li><li>Hannoun, C., Tumova, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Survey+on+influenza+laboratory+diagnostic+and+surveillance+methods+in+Europe.">Survey on influenza laboratory diagnostic and surveillance methods in Europe.</a> European Journal of Epidemiology. 16 (3), 217-222 (2000).</li><li>Leonardi, G. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+identification+of+2009+H1N1+influenza+A+virus+using+fluorescent+antibody+methods.">Rapid identification of 2009 H1N1 influenza A virus using fluorescent antibody methods.</a> Am J Clin Pathol. 134 (6), 910-914 (2010).</li><li>Chartrand, C., Leeflang, M. M. G., Minion, J., Brewer, T., Pai, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Accuracy+of+Rapid+Influenza+Diagnostic+TestsA+Meta-analysis.">Accuracy of Rapid Influenza Diagnostic TestsA Meta-analysis.</a> Annals of Internal Medicine. 156 (7), 500-511 (2012).</li><li>Lee, G. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+a+rapid+diagnostic+test,+NanoSign(R)+Influenza+A/B+Antigen,+for+detection+of+the+2009+pandemic+influenza+A/H1N1+viruses.">Evaluation of a rapid diagnostic test, NanoSign(R) Influenza A/B Antigen, for detection of the 2009 pandemic influenza A/H1N1 viruses.</a> Virol J. 7, 244 (2010).</li><li>Tang, Y. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+accuracy+of+a+PLEX-ID+flu+device+for+simultaneous+detection+and+identification+of+influenza+viruses+A+and+B.">Clinical accuracy of a PLEX-ID flu device for simultaneous detection and identification of influenza viruses A and B.</a> J Clin Microbiol. 51 (1), 40-45 (2013).</li><li>Bandt, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Economic+high-throughput-identification+of+influenza+A+subtypes+from+clinical+specimens+with+a+DNA-oligonucleotide+microarray+in+an+outbreak+situation.">Economic high-throughput-identification of influenza A subtypes from clinical specimens with a DNA-oligonucleotide microarray in an outbreak situation.</a> Molecular and Cellular Probes. 26 (1), 6-10 (2012).</li><li>Pierce, V. M., Elkan, M., Leet, M., McGowan, K. L., Hodinka, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+the+Idaho+Technology+FilmArray+system+to+real-time+PCR+for+detection+of+respiratory+pathogens+in+children.">Comparison of the Idaho Technology FilmArray system to real-time PCR for detection of respiratory pathogens in children.</a> J Clin Microbiol. 50 (2), 364-371 (2012).</li><li>Teo, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=VereFlu&#8482;:+an+integrated+multiplex+RT-PCR+and+microarray+assay+for+rapid+detection+and+identification+of+human+influenza+A+and+B+viruses+using+lab-on-chip+technology.">VereFlu&#8482;: an integrated multiplex RT-PCR and microarray assay for rapid detection and identification of human influenza A and B viruses using lab-on-chip technology.</a> Archives of Virology. 156 (8), 1371-1378 (2011).</li><li>Babady, N. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+the+Luminex+xTAG+RVP+Fast+assay+and+the+Idaho+Technology+FilmArray+RP+assay+for+detection+of+respiratory+viruses+in+pediatric+patients+at+a+cancer+hospital.">Comparison of the Luminex xTAG RVP Fast assay and the Idaho Technology FilmArray RP assay for detection of respiratory viruses in pediatric patients at a cancer hospital.</a> J Clin Microbiol. 50 (7), 2282-2288 (2012).</li><li>Chidlow, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Duplex+real-time+reverse+transcriptase+PCR+assays+for+rapid+detection+and+identification+of+pandemic+(H1N1)+2009+and+seasonal+influenza+A/H1,+A/H3,+and+B+viruses.">Duplex real-time reverse transcriptase PCR assays for rapid detection and identification of pandemic (H1N1) 2009 and seasonal influenza A/H1, A/H3, and B viruses.</a> J Clin Microbiol. 48 (3), 862-866 (2010).</li><li>Bell, J. J., Selvarangan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+the+Alere+I+influenza+A&amp;B+nucleic+acid+amplification+test+by+use+of+respiratory+specimens+collected+in+viral+transport+medium.">Evaluation of the Alere I influenza A&amp;B nucleic acid amplification test by use of respiratory specimens collected in viral transport medium.</a> J Clin Microbiol. 52 (11), 3992-3995 (2014).</li><li>Nie, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+Alere+i+Influenza+A&amp;B+for+Rapid+Detection+of+Influenza+Viruses+A+and+B.">Evaluation of Alere i Influenza A&amp;B for Rapid Detection of Influenza Viruses A and B.</a> Journal of Clinical Microbiology. 52 (9), 3339-3344 (2014).</li><li>Chapin, K. C., Flores-Cortez, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Performance+of+the+Molecular+Alere+i+Influenza+A&amp;B+Test+Compared+to+That+of+the+Xpert+Flu+A/B+Assay.">Performance of the Molecular Alere i Influenza A&amp;B Test Compared to That of the Xpert Flu A/B Assay.</a> Journal of Clinical Microbiology. 53 (2), 706-709 (2015).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

Grip virüsleri morbidite ve mortalite dünya çapında nedenlerdir. grip hızlı ve doğru tanı, solunum sezonunda grip salgınları yönetmek için en önemli anahtarlarından biridir. Diğer antijen temelli testler, hızlı ve gerçekleştirmek kolaydır; ancak, düşük duyarlılıkları 13 var. Öte yandan, geleneksel moleküler testler hassasiyeti daha iyi, ancak yapmak ve daha pahalı olan daha deneyimli laboratuar teknologlar ihtiyaç var. Bu çalışma ve protokol açıklanan Grip A ve B deney tekniği Biz göstermektedir influenza virüsleri A ve B saptanması ve farklılaşması için izotermal amplifikasyonuna dayanan Influenza A ve B için CLIA-feragat, hızlı moleküler testtir temsilcisi sonuçları başka moleküler temelli solunum paneli tahlile göre değerlendirildi arşivlenmiş, donmuş NPS VTM örneklerinin bir panelde influenza a ve B testinin performansını göstermek için. <p class="jove_content"&gt; RP testi ile &quot;şüpheli&quot; veya &quot;untypeable&quot; olarak belirlenmiştir örnekler İnfluenza A ve B testi ile en düşük hassasiyet vardı. Buna ek olarak, uyumsuz sonuçlar tahlili ile alt saptama oranı daha düşük viral titreleri ile ilişkili olduğunu düşündüren, RP deneylerinde yüksek C T değerleri ile örnekler için daha sık gözlenmiştir. Tahlil gribi virüsünün bir% 90.2 duyarlılık ve% 98.1 özgüllük ile bir algılama üzerine influenza virüsü B tespiti için geliştirilmiş bir performansı vardı. Burada sonuçlar önceden yayınlanmış literatürde 26, 27, 28 ile uyumludur. Bu çalışmanın iki önemli sınırlamaları vardır. İlk olarak, numune platformu üzerinde test etmek için VTM depolanmıştır. Ancak, örnekler test edilmiştir zaman, platform, bu örnek tipi için FDA onayı yoktu. Bu nedenle, VTM içine seyreltme, daha az olabilirDüşük titreli VTM numune algılama. İkinci olarak, influenza A ile test ve oda deney deney numuneleri, RP test ise testten önce alındıkları hemen sonra taze numuneler üzerinde yapılmıştır 6 ila 9 ay boyunca -70 ° C &#39;de muhafaza edilmiştir. Örnekler dondurma daha numunelerde grip algılama düşük olması mümkündür. İnfluenza A ve B tahlil birkaç adım vardır ve gerçekleştirmek için basittir. Ancak, orada uygun tamamlanmalıdır iki önemli adımlar vardır ve bunlar hatalarıyla karşılaşıyorsanız, kullanıcıların giderebilirsiniz söyledi. başlangıçta tahlil kurarken yerine oturana kadar Birincisi, transfer kartuş testi tabanına bağlı olmalıdır. Bu iki parça uygun güvenli değilse, çalışma başarısız olur ve baştan tekrarlanması gerekir. İkinci olarak, enstrüman önce örneği ekleyerek 2 dakika ısınması gerekir. Bu ısınmak süre sonra kullanıcılar, örnek eklemek transferi c bağlamak için 30 saniye varTest tabanına artridge ve kapağı kapatın. Bu adım tamamlanmadan önce zaman geçerse, alet çalıştırmak başarısız olur ve kurmak numune baştan tekrarlanması gerekecektir. testinin sınırlamalar biraz solunum panele kıyasla zaman ve daha düşük hassasiyet eller artan içerir ve daha fazla grip A alt tip değil, testi ile kullanılabilecek tek numune tipleri nazofarengeal sürüntü veya saklanan NPS vardır viral taşıma medya; Böyle alt solunum yolu örneklerinde olduğu gibi herhangi bir başka örnek türü için testin performansı değerlendirilmemiştir. Protokol tüm adımları kritik olduğuna dikkat etmek önemlidir. olarak yazılır protokol herhangi bir değişiklik ya da sapma daha düşük performans veya testin neden olabilir ve kullanıcı tarafından değerlendirilmesi gerekir. Teknolojinin yararı bile sadece teknoloji olsa gerçekleştirmek için 15 dakika sürer ve alet küçük bir ayak izi olmasıdırmoleküler yöntemlerle dayanmaktadır gerçekleştirmek için özel eğitim veya nitelikleri gerektirmez. Bu çalışmada değerlendirilen Grip A ve B deney influenza teşhisi için RIDTs alternatif olarak hizmet etmek için bir potansiyele sahiptir. Sistem, kısa bir toplam test süresi avantajına sahip küçük bir ayak izi vardır ve kullanımı kolaydır. Genel olarak, aletin tasarımı noktası bakım testleri için de uygundur.

Grip virüsü enfeksiyonları morbidite ve mortalite, her yıl 1, 2, 3, önemli bir miktarda sonuçlanır. Komplike olmayan grip, ateş, kas ağrısı, baş ağrısı ve kuru öksürük 4, 5 olarak anayasal ve solunum semptomları ile karakterizedir. Altta yatan eşlik eden yaşlı bireyler, küçük çocuklar, immün sistemi baskılanmış hastalar ve hasta pnömoni, miyokardit, merkezi sinir sistemi hastalığı veya ölüm 6, 7 gibi ciddi komplikasyonlara için daha yüksek risk altındadır. Grip enfeksiyonu hastalığın şiddetini ve süresini 8 azaltabilir semptom başlangıcından 48 saat içinde antiviral tedavinin bu istemi yönetiminde diğer solunum yolu virüsleri benzersizdir. grip hızlı tespiti de olmuşturGereksiz antibiyotik 9, 10 kullanımını azalttığı gösterilmiştir. Ayrıca, grip enfeksiyonu olan yatan hastalar, uygun enfeksiyon kontrol önlemleri ile izole oda yerleştirilmesi gerekir. klinik grip ayırt etmek Ancak, sigara grip virüslerinin neden olduğu solunum yolu hastalıkları zor olabilir. Bu nedenle, grip için hızlı ve doğru tanı testi, klinik hasta yönetimi için çok önemlidir. Çeşitli deneyler tespiti ve grip virüslerinin tanımlanması için kullanılabilir. Kullandıkları ve 15 dakika 11, 12 ila 30 içinde sonuç sağlamak için basit, çünkü hızlı grip antijen saptama testleri (RIDTs) yaygın nokta-bakım testleri gibi klinik pratikte kullanılır; Ancak, onların duyarlılıkları yaygın (% 10-80) üreticisi ve nüfus büyüklüğüne göre test edilmekte değişir ve influenza tip ve subtyPE 13, 14, 15. Doğrudan floresan deneyleri (DFA&#39;ler) RIDTs üzerinde üstün hassasiyetleri sağlar, ancak işlem süresi daha büyük (~ 3 saat) ve vasıflı teknoloji 16, 17 ile tamamlanması gerekir. Viral kültür grip teşhis için altın standart olmuştur ve her iki RIDTs ve DFAs 18 üzerinde hassasiyet geliştirdi. Ancak, grip viral kültür hasta yönetimini 19 yardımında yararını azalan tamamlamak için 2-14 d sürebilir. Son olarak, nükleik asit amplifikasyon testleri (NAAT) grip teşhisi yeni altın standart olarak kültür teknikleri yerini almıştır. NAAT birkaç saat içinde Grip taramada kullanılan büyük hassasiyeti olduğu kabul edilir. Ancak, NAAT en pahalı deneyler ve 5 gerçekleştirmek için özel ekipman ve teknoloji gerektiren <sYukarıya&gt;, 20, 21, 22, 23, 24, 25. Burada anlatılan influenza A ve B tahlil hazır ilk CLIA-feragat moleküler hızlı grip testidir. Bu deney, moleküler işaret probları ile hedef tespiti ve ardından influenzaya spesifik primerler ile izotermal amplifikasyon kullanan bir Kırpma Endonükleaz amplifikasyon reaksiyonu (yakın) kullanılarak çalışmaktadır. Bu deney, B influenza A ayıran kurmak ve bir örnek işlemek için 2 dk gerektirir ve tamamlamak için 15 dakika olmak üzere toplam gerektirir. Burada, Influenza A ve B testi için protokol mevcut. Buna ek olarak, biz örnek bir veri (viral taşıma ortamında saklanan örneklerinin arşivlenmiş nazofarengeal sürüntü (NPS) üzerine Influenza A performans ve B testi karşılaştıran VT set sağlamakBaşka solunum patojen paneli tahlil M).

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="660">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:231px;">Alere i Instrument</td>
			<td style="width:64px;">Alere</td>
			<td style="width:303px;">NAT-000 (Global), NAT-024 (US)</td>
			<td style="width:64px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Alere i Influenza A &#38; B 24 Test Kit</td>
			<td>Alere</td>
			<td style="width:303px;">425-000 (Global), 425-024 (US)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Alere i Barcode Scanner</td>
			<td>Alere</td>
			<td>EQ001001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Alere Universal Printer</td>
			<td>Alere</td>
			<td style="width:303px;">55115 (Global), alereiprinter&#160;(US)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">200 &#181;L precision pipette</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">200 &#181;L disposable pipette tips</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Viral transport medium</td>
			<td>Remel</td>
			<td>M4-RT</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

rapid molecular detection and differentiation of influenza viruses a and b

Grip insanlarda grip virüslerinin A ve B&#39;nin neden olduğu bulaşıcı bir solunum yolu hastalığı olan ve morbidite ve mortalite her yıl önemli miktarda neden olur. Grip A ve B tahlil birinci CLIA-feragat moleküler hızlı gribi testi kullanılabilir. Grip A ve B test moleküler işaret probları ile hedef tespiti ve ardından influenzaya spesifik primerler ile izotermal amplifikasyon kullanılarak çalışmaktadır. Burada, donmuş Grip A performans ve B tahlil, bir solunum paneli deneyi ile karşılaştırılmıştır örneklerinin viral taşıma ortamı (VTM) saklanan nazofarengeal çubukla (NPS) arşivlenmiş. Grip A ve B testinin performansı solunum paneli referans yöntemi sonuçları karşılaştırılarak değerlendirildi. toplam grip virüsü A duyarlılık% 67.5 (% 95 CI (CI), 56,6-78,5) ve özgüllük 86.9% (CI, 71,0-100) idi. İnfluenza virüsü B testi için, duyarlılık ve seçicilik% 90.2 idi (CI, 68,5-100sırasıyla) ve% 98.8 (Cl, 68,5-100),. Bu sistem tam entegre, kapalı, az yer kaplayan sistemi üzerinde çalışan herhangi bir başka mevcut moleküler tahlil ve basit, pipet serbest prosedür daha kısa bir test süresi avantajına sahiptir. Genel olarak, bu çalışmada değerlendirilen Influenza A ve B tahlil, bir nokta-bakım hızlı grip tanı testi olarak hizmet etme potansiyeline sahiptir.

Bu çalışmada, arşivlenmiş NPS örnekleri 2013 NPS örnekleri 3 ml sunuldu 15 Aralık 2012 ve 1 Mart arasında bir grip salgını sırasında Memorial Sloan-Kettering Kanser Merkezi&#39;nde (MSKCC) de grip benzeri semptomlar ile başvuran yatan hasta toplandı VTM ve çalışma süresince Influenza A, A-1, A-3, ve B olmak üzere solunum yolu virüsleri (RP), bir panel tespit moleküler testi ile rutin klinik pratikte bir parçası olarak test 3675 NPS örnekler sunuldu test için MSKCC klinik laboratuvara. Bu örneklerin, 45, 425, 37 ve 77 sırasıyla RP ile, A-1, A-3, A-un subtypable (Au), ve B influenza testi pozitif virüsler. 360 pozitif örneklerin, grip alt tiplerinin her biri 40 numune ve 37 Au toplam. Buna ek olarak, hemen önce ya da pozitif örneklerin her birinden sonra laboratuvara geldi 1-2 olumsuz örnekler sonraki Testi için seçildigrip A ve B test ile ng. Toplamda, İnfluenza A ve B tahlil 79 influenza virüsü A, 37 influenza virüsü B, 240 negatif ve 4 geçersiz sonuçlar (iç kontrollerin yetersizliği) (Tablo 1) tespit edilmiştir. RP sadece ve İnfluenza A pozitif iki ve sadece B tahlil pozitif 44 örnekleri ile 46 farklı sonuçlar vardı. Üçüncü moleküler temelli grip tahlil 33/43 algılandı 44 uyumsuz numuneler üzerinde yapılan (8 influenza virüsü A, 21 Au ve 2 influenza virüsü B) RP ile pozitif ve 0/1 pozitif (influenza virüsü A) Grip A ve B yöntemi ile. İki veya daha fazla tahliller arasında bir anlaşma doğru bir tanımlama olarak kabul edildi. toplam grip virüsü A influenza A genel ve B tahlil duyarlılığı (% 95 CI (CI), 56,6-78,5)% 67.5 idi. influenza A duyarlılık A-1,% 84.6 (CI, 58,5-100), A- oldu<html> 3,% 90.2 (CI, 62,8-100) ve Au,% 21.9 (CI, 19,6-24,1). grip virüsü A genel özgüllük% 86.9 (Cl, 71,0-100) idi. İnfluenza virüsü B testi için duyarlılık ve özgüllük sırasıyla% 90.2 (CI, 68,5-100) ve 98.8% (CI, 68,5-100) idi. (Şekil 1); Genel olarak, uyumsuz sonuçlar örneklerin ortalama BT değerleri uyumlu sonuçlar (p&gt; 0.000 16.4 ± 0.48 vs 25.7 ± 0.51) için elde edilenden daha anlamlı olarak yüksek bulundu. <img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/54312/54312fig1.jpg" /> Şekil 1: sırasıyla, her influenza alt tipi için deney ile pozitif ve negatif olan örnekler için RP deneyi ile belirlenen ortalama CT değerleri. Hata çubukları, standart sapmayı temsil ederler. ** P &lt;0.01; *** P &lt;0.001.1large.jpg &quot;target =&quot; _ blank &quot;&gt; bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayınız. <img alt="tablo 1" src="/files/ftp_upload/54312/54312table1.jpg" /> Tablo 1: VTM üzerinde İnfluenza A &amp; B Performansı referans sonuçlarına göre örneklerinin.

Watch this Scientific Journal Video about Rapid Molecular Detection and Differentiation of Influenza Viruses A and B at JoVE.com

Rapid Molecular Detection and Differentiation of Influenza Viruses A and B

Biz moleküler temelli İnfluenza A, hızlı ve B tahlil açıklar. Grip deneyi moleküler işaret probları ile hedef tespiti ve ardından influenzaya spesifik primerler ile izotermal amplifikasyon kullanılarak 15 dakika içinde her bir hedef tespit eder. Grip A ve B tahlil kullanıcı dostu ve gerçekleştirmek için en az eller-zaman gerekli.

Hızlı moleküler algılama ve Nezle Virüsleri A ve B farklılaşması

Influenza is a contagious respiratory illness caused by influenza viruses A and B in humans and causes a significant amount of morbidity and mortality ...

rapid-molecular-detection-differentiation-influenza-viruses

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

15.5K Görüntüleme.  Memorial Sloan Kettering Cancer Center.  Biz moleküler temelli İnfluenza A, hızlı ve B tahlil açıklar. Grip deneyi moleküler işaret probları ile hedef tespiti ve ardından influenzaya spesifik primerler ile izotermal amplifikasyon kullanılarak 15 dakika içinde her bir hedef tespit eder. Grip A ve B tahlil kullanıcı dostu ve gerçekleştirmek için en az eller-zaman gerekli. 

Video: Rapid Molecular Detection and Differentiation of Influenza Viruses A and B

Combination of Adhesive-tape-based Sampling and Fluorescence in situ Hybridization for Rapid Detection of Salmonella on Fresh Produce

This protocol describes a simple approach for adhesive-tape-based sampling of tomato and other fresh produce surfaces, followed by on-tape fluorescence in situ hybridization (FISH) for rapid culture-independent detection of Salmonella spp. Cell-charged tapes can also be placed face-down on selective agar for solid-phase enrichment prior to detection. Alternatively, low-volume liquid enrichments (liquid surface miniculture) can be performed on the surface of the tape in non-selective broth, followed by FISH and analysis via flow cytometry. To begin, sterile adhesive tape is brought into contact with fresh produce, gentle pressure is applied, and the tape is removed, physically extracting microbes present on these surfaces. Tapes are mounted sticky-side up onto glass microscope slides and the sampled cells are fixed with 10% formalin (30 min) and dehydrated using a graded ethanol series (50, 80, and 95%; 3 min each concentration). Next, cell-charged tapes are spotted with buffer containing a Salmonella-targeted DNA probe cocktail and hybridized for 15 - 30 min at 55&deg;C, followed by a brief rinse in a washing buffer to remove unbound probe. Adherent, FISH-labeled cells are then counterstained with the DNA dye 4',6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) and results are viewed using fluorescence microscopy. For solid-phase enrichment, cell-charged tapes are placed face-down on a suitable selective agar surface and incubated to allow in situ growth of Salmonella microcolonies, followed by FISH and microscopy as described above. For liquid surface miniculture, cell-charged tapes are placed sticky side up and a silicone perfusion chamber is applied so that the tape and microscope slide form the bottom of a water-tight chamber into which a small volume (&le; 500 &mu;L) of Trypticase Soy Broth (TSB) is introduced. The inlet ports are sealed and the chambers are incubated at 35 - 37&deg;C, allowing growth-based amplification of tape-extracted microbes. Following incubation, inlet ports are unsealed, cells are detached and mixed with vigorous back and forth pipetting, harvested via centrifugation and fixed in 10% neutral buffered formalin. Finally, samples are hybridized and examined via flow cytometry to reveal the presence of Salmonella spp. As described here, our "tape-FISH" approach can provide simple and rapid sampling and detection of Salmonella on tomato surfaces. We have also used this approach for sampling other types of fresh produce, including spinach and jalape&ntilde;o peppers.

Combination of Adhesive-tape-based Sampling and Fluorescence in situ Hybridization for Rapid Detection of Salmonella on Fresh Produce

This protocol describes a simple adhesive-tape-based approach for sampling of tomato and other fresh produce surfaces, followed by rapid whole cell detection of Salmonella using fluorescence in situ hybridization (FISH).

Yapışkan bant tabanlı Örnekleme ve Floresans kombinasyonu In situ</emHızlı Algılama> Hibridizasyon Salmonella Taze üretin

This protocol describes a simple approach for adhesive-tape-based sampling of tomato and other fresh produce surfaces, followed by on-tape fluorescence in ...

İmmünoloji ve Enfeksiyon

ampliPHOX Colorimetric Detection on a DNA Microarray for Influenza

DNA microarrays have emerged as a powerful tool for pathogen detection.1-5 For instance, many examples of the ability to type and subtype influenza virus have been demonstrated.6-11 The identification and subtyping of influenza on DNA microarrays has applications in both public health and the clinic for early detection, rapid intervention, and minimizing the impact of an influenza pandemic. Traditional fluorescence is currently the most commonly used microarray detection method. However, as microarray technology progresses towards clinical use,1 replacing expensive instrumentation with low cost detection technology exhibiting similar performance characteristics to fluorescence will make microarray assays more attractive and cost-effective.
The ampliPHOX colorimetric detection technology is intended for research applications, and has a limit of detection within one order of magnitude of traditional fluorescence11, with a main advantage being an approximate ten-fold lower instrument cost compared to the confocal microarray scanners required for fluorescence microarray detection. Another advantage is the compact size of the instrument which allows for portability and flexibility, unlike traditional fluorescence instruments. Because the polymerization technology is not as inherently linear as fluorescence detection, however, it is best suited for lower density microarray applications in which a yes/no answer for the presence of a certain sequence is desired, such as for pathogen detection arrays. Currently the maximum spot density compatible with ampliPHOX detection is &tilde;1800 spots/array. Because of the spot density limitations, higher density microarrays are not suitable for ampliPHOX detection.
Here, we present ampliPHOX colorimetric detection technology as a method of signal amplification on a low density microarray developed for the detection and characterization of influenza viruses (FluChip). Although this protocol uses the FluChip (a DNA microarray) as one specific application of ampliPHOX detection, any microarray incorporating biotinylated target can be labeled and detected in a similar manner. The microarray design and biotinylation of the target to be captured are the responsibility of the user. Once the biotinylated target has been captured on the array, ampliPHOX detection can be performed by first tagging the array with a streptavidin-label conjugate (ampliTAG). Upon light exposure using the ampliPHOX Reader instrument, polymerization of a monomer solution (ampliPHY) occurs only in regions containing ampliTAG-labeled targets. The polymer formed can be subsequently stained with a non-toxic solution to improve visual contrast, followed by imaging and analysis using a simple software package (ampliVIEW). The entire FluChip assay from un-extracted sample to result can be performed in about 6 hours, and the ampliPHOX detection steps described above can be completed in about 30 min.

ampliPHOX colorimetric detection technology is presented as an inexpensive alternative to fluorescence detection for microarrays. Based on photopolymerization, ampliPHOX produces solid polymer spots visible to the naked eye in just a few minutes. Results are then imaged and automatically interpreted with a simple yet powerful software package.

Grip için DNA Mikroarray ampliPHOX Kolorimetrik Algılama

DNA microarrays have emerged as a powerful tool for pathogen detection.1-5  For instance, many examples of the ability to type and subtype influenza virus ...

High-throughput Detection Method for Influenza Virus

Influenza virus is a respiratory pathogen that causes a high degree of morbidity and mortality every year in multiple parts of the world. Therefore, precise diagnosis of the infecting strain and rapid high-throughput screening of vast numbers of clinical samples is paramount to control the spread of pandemic infections. Current clinical diagnoses of influenza infections are based on serologic testing, polymerase chain reaction, direct specimen immunofluorescence and cell culture 1,2.
Here, we report the development of a novel diagnostic technique used to detect live influenza viruses. We used the mouse-adapted human A/PR/8/34 (PR8, H1N1) virus 3 to test the efficacy of this technique using MDCK cells 4. MDCK cells (104 or 5 x 103 per well) were cultured in 96- or 384-well plates, infected with PR8 and viral proteins were detected using anti-M2 followed by an IR dye-conjugated secondary antibody. M2 5 and hemagglutinin 1 are two major marker proteins used in many different diagnostic assays. Employing IR-dye-conjugated secondary antibodies minimized the autofluorescence associated with other fluorescent dyes. The use of anti-M2 antibody allowed us to use the antigen-specific fluorescence intensity as a direct metric of viral quantity. To enumerate the fluorescence intensity, we used the LI-COR Odyssey-based IR scanner. This system uses two channel laser-based IR detections to identify fluorophores and differentiate them from background noise. The first channel excites at 680 nm and emits at 700 nm to help quantify the background. The second channel detects fluorophores that excite at 780 nm and emit at 800 nm. Scanning of PR8-infected MDCK cells in the IR scanner indicated a viral titer-dependent bright fluorescence. A positive correlation of fluorescence intensity to virus titer starting from 102-105 PFU could be consistently observed. Minimal but detectable positivity consistently seen with 102-103 PFU PR8 viral titers demonstrated the high sensitivity of the near-IR dyes. The signal-to-noise ratio was determined by comparing the mock-infected or isotype antibody-treated MDCK cells.
Using the fluorescence intensities from 96- or 384-well plate formats, we constructed standard titration curves. In these calculations, the first variable is the viral titer while the second variable is the fluorescence intensity. Therefore, we used the exponential distribution to generate a curve-fit to determine the polynomial relationship between the viral titers and fluorescence intensities. Collectively, we conclude that IR dye-based protein detection system can help diagnose infecting viral strains and precisely enumerate the titer of the infecting pathogens.

This method describes the use of Infrared dye based imaging system for detection of H1N1 in bronchioalveolar lavage (BAL) fluid of infected mice at a high sensitivity. This methodology can be performed in a 96- or 384-well plate, requires &lt;10 &mu;l volume of test material and has the potential for concurrent screening of multiple pathogens.

Gribi için yüksek verimlilik Tespit Yöntemi

Influenza virus is a respiratory pathogen that causes a high degree of morbidity and mortality every year in multiple parts of the world. Therefore, ...

Rapid Analysis of Chromosome Aberrations in Mouse B Lymphocytes by PNA-FISH

Defective DNA repair leads to increased genomic instability, which is the root cause of mutations that lead to tumorigenesis. Analysis of the frequency and type of chromosome aberrations in different cell types allows defects in DNA repair pathways to be elucidated. Understanding mammalian DNA repair biology has been greatly helped by the production of mice with knockouts in specific genes. The goal of this protocol is to quantify genomic instability in mouse B lymphocytes. Labeling of the telomeres using PNA-FISH probes (peptide nucleic acid - fluorescent in situ hybridization) facilitates the rapid analysis of genomic instability in metaphase chromosome spreads. B cells have specific advantages relative to fibroblasts, because they have normal ploidy and a higher mitotic index. Short-term culture of B cells therefore enables precise measurement of genomic instability in a primary cell population which is likely to have fewer secondary genetic mutations than what is typically found in transformed fibroblasts or patient cell lines.

DNA repair pathways are essential for maintenance of genomic integrity and preventing mutation and cancer. The goal of this protocol is to quantify genomic instability by direct observation of chromosome aberrations in metaphase spreads from mouse B cells using fluorescent in situ hybridization (FISH) for telomeric DNA repeats.

PNA-FISH ile Fare B Lenfositlerindeki kromozom anormallikleri hızlı Analizi

Defective DNA repair leads to increased genomic instability, which is the root cause of mutations that lead to tumorigenesis. Analysis of the frequency ...

Detection of True IgE-expressing Mouse B Lineage Cells

B lymphocyte immunoglobulin heavy chain (IgH) class switch recombination (CSR) is a process wherein initially expressed IgM switches to other IgH isotypes, such as IgA, IgE and IgG. Measurement of IgH CSR in vitro is a key method for the study of a number of biologic processes ranging from DNA recombination and repair to aspects of molecular and cellular immunology. In vitro CSR assay involves the flow cytometric measurement surface Ig expression on activated B cells. While measurement of IgA and IgG subclasses is straightforward, measurement of IgE by this method is problematic due to soluble IgE binding to Fc&#949;RII/CD23 expressed on the surface of activated B cells. Here we describe a unique procedure for accurate measurement of IgE-producing mouse B cells that have undergone CSR in culture. The method is based on trypsin-mediated cleavage of IgE-CD23 complexes on cell surfaces, allowing for detection of IgE-producing B lineage cells by cytoplasmic staining. This procedure offers a convenient solution for flow cytometric analysis of CSR to IgE.

In vitro analysis of class switch recombination in mice is challenging due to cytophilic IgE molecules bound to Fc receptors on the surface of B cells. We describe a method for IgE detection using trypsin-mediated cleavage of surface-bound IgE prior to fixation and permeabilization for cytoplasmic fluorescence staining.

Doğru Algılama Fare B Lineage Hücreleri IgE-ifade

B lymphocyte immunoglobulin heavy chain (IgH) class switch recombination (CSR) is a process wherein initially expressed IgM switches to other IgH ...

Intranasal Administration of Recombinant Influenza Vaccines in Chimeric Mouse Models to Study Mucosal Immunity

Vaccines are one of the greatest achievements of mankind, and have saved millions of lives over the last century. Paradoxically, little is known about the physiological mechanisms that mediate immune responses to vaccines perhaps due to the overall success of vaccination, which has reduced interest into the molecular and physiological mechanisms of vaccine immunity. However, several important human pathogens including influenza virus still pose a challenge for vaccination, and may benefit from immune-based strategies. 
Although influenza reverse genetics has been successfully applied to the generation of live-attenuated influenza vaccines (LAIVs), the addition of molecular tools in vaccine preparations such as tracer components to follow up the kinetics of vaccination in vivo, has not been addressed. In addition, the recent generation of mouse models that allow specific depletion of leukocytes during kinetic studies has opened a window of opportunity to understand the basic immune mechanisms underlying vaccine-elicited protection. Here, we describe how the combination of reverse genetics and chimeric mouse models may help to provide new insights into how vaccines work at physiological and molecular levels, using as example a recombinant, cold-adapted, live-attenuated influenza vaccine (LAIV). We utilized laboratory-generated LAIVs harboring cell tracers as well as competitive bone marrow chimeras (BMCs) to determine the early kinetics of vaccine immunity and the main physiological mechanisms responsible for the initiation of vaccine-specific adaptive immunity. In addition, we show how this technique may facilitate gene function studies in single animals during immune responses to vaccines. We propose that this technique can be applied to improve current prophylactic strategies against pathogens for which urgent medical countermeasures are needed, for example influenza, HIV, Plasmodium, and hemorrhagic fever viruses such as Ebola virus.

There is an overall lack of knowledge about how vaccines work. Here we propose the combined use of reverse genetics and bone marrow chimeric mice to gain insight into the early host immune responses to vaccines with a special focus on dendritic cells and T cell immunity.

Kimerik fare modellerinde Rekombinant Grip aşıların burun içinde yoluyla mukozal bağışıklık Okumak

Vaccines are one of the greatest achievements of mankind, and have saved millions of lives over the last century. Paradoxically, little is known about the ...

Nasal Wipes for Influenza A Virus Detection and Isolation from Swine

Surveillance for influenza A viruses in swine is critical to human and animal health because influenza A virus rapidly evolves in swine populations and new strains are continually emerging. Swine are able to be infected by diverse lineages of influenza A virus making them important hosts for the emergence and maintenance of novel influenza A virus strains. Sampling pigs in diverse settings such as commercial swine farms, agricultural fairs, and live animal markets is important to provide a comprehensive view of currently circulating IAV strains. The current gold-standard ante-mortem sampling technique (i.e. collection of nasal swabs) is labor intensive because it requires physical restraint of the pigs. Nasal wipes involve rubbing a piece of fabric across the snout of the pig with minimal to no restraint of the animal. The nasal wipe procedure is simple to perform and does not require personnel with professional veterinary or animal handling training. While slightly less sensitive than nasal swabs, virus detection and isolation rates are adequate to make nasal wipes a viable alternative for sampling individual pigs when low stress sampling methods are required. The proceeding protocol outlines the steps needed to collect a viable nasal wipe from an individual pig.

The authors present a protocol to collect swine nasal wipes to detect and isolate influenza A viruses.

Domuz influenza A virüs Algılama ve İzolasyonu için Burun Mendil

Surveillance for influenza A viruses in swine is critical to human and animal health because influenza A virus rapidly evolves in swine populations and ...

Detection and Enrichment of Rare Antigen-specific B Cells for Analysis of Phenotype and Function

B cells reactive with a specific antigen usually occur at a frequency of &lt;0.05% of lymphocytes. For decades researchers have sought methods to isolate and enrich these rare cells for studies of their phenotype and biology. Approaches are inevitably based on the principle that B cells recognize native antigen by virtue of cell surface receptors that are representative in specificity of antibodies that will eventually be secreted by their differentiated daughters. Perhaps the most obvious approach to the problem involves use of fluorochrome-conjugated antigens in conjunction with fluorescence-activated cell sorting (FACS). However, the utility of these methods is limited by cell frequency and the achievable rate of analysis and isolation by electronic sorting. A novel method to enrich rare antigen-specific B cells using magnetic nanoparticles that results in high yield enrichment of antigen-reactive B cells from large starting cell populations is described. This method enables improved monitoring of the phenotype and biology of antigen reactive cells before and following in vivo antigen encounter, such as after immunization or during development of autoimmunity.

A simple yet effective method that employs magnetic nanoparticles to detect and enrich antigen-reactive B cells for functional and phenotypic analysis is described.

Fenotip ve Fonksiyon Analizi için algılama ve Nadir zenginleştirilmesi antijene özgü B hücreleri

B cells reactive with a specific antigen usually occur at a frequency of &lt;0.05% of lymphocytes. For decades researchers have sought methods to isolate ...

Fluorescence-based Neuraminidase Inhibition Assay to Assess the Susceptibility of Influenza Viruses to The Neuraminidase Inhibitor Class of Antivirals

The neuraminidase (NA) inhibitors are the only class of antivirals approved for the treatment and prophylaxis of influenza that are effective against currently circulating strains. In addition to their use in treating seasonal influenza, the NA inhibitors have been stockpiled by a number of countries for use in the event of a pandemic. It is therefore important to monitor the susceptibility of circulating influenza viruses to this class of antivirals. There are different types of assays that can be used to assess the susceptibility of influenza viruses to the NA inhibitors, but the enzyme inhibition assays using either a fluorescent substrate or a chemiluminescent substrate are the most widely used and recommended. This protocol describes the use of a fluorescence-based assay to assess influenza virus susceptibility to NA inhibitors. The assay is based on the NA enzyme cleaving the 2&#8242;-(4-Methylumbelliferyl)-&#945;-D-N-acetylneuraminic acid (MUNANA) substrate to release the fluorescent product 4-methylumbelliferone (4-MU). Therefore, the inhibitory effect of an NA inhibitor on the influenza virus NA is determined based on the concentration of the NA inhibitor that is required to reduce 50% of the NA activity, given as an IC50 value.

We describe the use of a phenotypic fluorescence-based neuraminidase inhibition assay to assess the susceptibility of influenza A and B viruses to the neuraminidase inhibitor class of antivirals.

Floresans tabanlı Nöraminidaz İnhibisyonu Tahlili antivirallerin nöraminidaz inhibitörü Class Nezle Virüslerinden eğilimi değerlendirilebilir

The neuraminidase (NA) inhibitors are the only class of antivirals approved for the treatment and prophylaxis of influenza that are effective against ...

Measuring Influenza Neutralizing Antibody Responses to A(H3N2) Viruses in Human Sera by Microneutralization Assays Using MDCK-SIAT1 Cells

Neutralizing antibodies against hemagglutinin (HA) of influenza viruses are considered the main immune mechanism that correlates with protection for influenza infections. Microneutralization (MN) assays are often used to measure neutralizing antibody responses in human sera after influenza vaccination or infection. Madine Darby Canine Kidney (MDCK) cells are the commonly used cell substrate for MN assays. However, currently circulating 3C.2a and 3C.3a A(H3N2) influenza viruses have acquired altered receptor binding specificity. The MDCK-SIAT1 cell line with increased &#945;-2,6 sialic galactose moieties on the surface has proven to provide improved infectivity and more faithful replications than conventional MDCK cells for these contemporary A(H3N2) viruses. Here, we describe a MN assay using MDCK-SIAT1 cells that has been optimized to quantify neutralizing antibody titers to these contemporary A(H3N2) viruses. In this protocol, heat inactivated sera containing neutralizing antibodies are first serially diluted, then incubated with 100 TCID50/well of influenza A(H3N2) viruses to allow antibodies in the sera to bind to the viruses. MDCK-SIAT1 cells are then added to the virus-antibody mixture, and incubated for 18 - 20 h at 37 &#176;C, 5% CO2 to allow A(H3N2) viruses to infect MDCK-SIAT1 cells. After overnight incubation, plates are fixed and the amount of virus in each well is quantified by an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) using anti-influenza A nucleoprotein (NP) monoclonal antibodies. Neutralizing antibody titer is defined as the reciprocal of the highest serum dilution that provides &#8805;50% inhibition of virus infectivity.

Measuring Influenza Neutralizing Antibody Responses to AH3N2 Viruses in Human Sera by Microneutralization Assays Using MDCK-SIAT1 Cells

Influenza neutralizing antibodies correlate with protection of influenza infections. Microneutralization assays measure neutralizing antibodies in human sera and are often used for influenza human serology. We describe a microneutralization assay using MDCK-SIAT1 cells to measure neutralizing antibody titers to contemporary 3C.2a and 3C.3a A(H3N2) viruses following influenza vaccination or infection.

MDCK-SIAT1 hücreleri kullanarak antikor yanıt için Microneutralization tarafından insan Sera A(H3N2) virüsleri nötralize grip ölçme deneyi

Neutralizing antibodies against hemagglutinin (HA) of influenza viruses are considered the main immune mechanism that correlates with protection for ...