Bu araştırma Belediye Başkanı Viyana kenti ve Österreichische Gesellschaft für Laboratoriumsmedizin und Klinische Chemie tıbbi bilimsel Fonu tarafından desteklenmiştir.

Tüm yöntem tanımlamak burada hayvan bakım ve Viyana Tıp Üniversitesi kullanım Komitesi tarafından onaylanmış ve Federasyon, Avrupa laboratuvar hayvan bilim dernekler (FELASA göre) yürütülen. Unutmayın ki bu protokol için açıklanan tüm yordamları yalnızca kurumsal ve hükümet onaylandıktan sonra yanı sıra teknik olarak uzman personel tarafından yapılmalıdır.
1. HFD beslemeli fareler
Not: tüm C57BL/6J fareler yiyecek ve su için 12-h açık/koyu döngüsü ücretsiz erişimi korumak.
<ol><li>6 hafta-in yaş, fareler obezite, ikna etmek için bir HFD (% 40-60 yağ kalori) 8-12 hafta boyunca düşük yağlı diyet (LFD) yalın kontrol grubu beslerken yerleştirin (% 10 yağ kalori).</li>
	<li>Haftalık olarak fareler vücut ağırlığını belirlemek. Ağırlık eğrileri benzer modeller HFD beslemeli grubunda daha yüksek eğimli her iki grup'yi göstermesi gerekir.</li>
</ol>2. OGTT
Not: kan örnekleme zaman Puan OGTT sırasında her 15dk seçilirse deneme en fazla paralel, 15 fareler fare başına en az 1 min işleme-süre için yapılmalıdır.
<ol><li>Bir gün önce OGTT hazırlıkları<ol>
<li>Fareler içme suyuna erişimi olmasını sağlarken fareler taze yatak ve onları gece (14 h), test etmeden önce hızlı bir kafes içine transfer (örneğin, 6:00 de ertesi sabah 8:00 am tarihinde bir başlangıç kez gıda kaldırın). Not: Oruç fareler gecede yaklaşımdır standart, ancak daha kısa hızlı (5-6 h) daha fizyolojik ( tartışma Ayrıntılar için bakınız) fareler için.</li>
	</ol></li>
	<li>Hazırlıklar gün deneme (ama deneme önce)<ol>
<li>10 mL % 20 glukoz çözeltisi hazırlamak (D-(+) dağıtılması-distile su glikoz). Not: hayvanlar için yönetilen tüm reaktifler farmakolojik sınıf olmak zorunda ve steril.</li>
		<li>Her örnekleme süresi noktası ve her fare için bir şey ile 5 µL doldurarak plazma koleksiyonu için bir 96-şey tabak hazırlamak NaEDTA (0,5 M EDTA, pH % 8.0 içinde 0.9 NaCl, depolama, RT). Deneme sırasında bu plaka buz üstünde depolar. Not: Ek Resim 1 ayrıntılı bir denetim listesi için bkz:.</li>
	</ol></li>
	<li>Bütün fareler vücut ağırlığını ölçmek ve fare ismi (örneğin, fare 1 = 1 dash, fare 2 = 2 tire, vb) yapmak için kalıcı bir kalem ile onların kuyrukları işaretlemek.</li>
	<li>Glikoz ölçüm ve kan örnekleme (Şekil 2)<ol>
<li>1-2 mm keskin makas ("değişken A" Şekil 2) kullanarak kuyruk ucu kapalı dikkatle kesin. Her zaman ilk damla kan hemoliz veya kan glikoz tayini için taze kan örnekleri çekmeden önce kirlenme doku sıvısı ile önlemek için yok etmek. (Süresi noktası 0 =) Bazal kan şekeri düzeyini Şeker Ölçüm ile ölçüm için bir küçük kan örneği (~ 3 µL) çizin. Dikkat: Kontrol edin ve üzerinde bir Şeker Ölçüm Çubuğu Strip şarj sayısını ayarlayın. Not: bir keskin neşter bıçak ("varyant B" Şekil 2) bir fare yan kuyruk ven bir alternatif kan örnekleme yöntemi olarak nick. Yanal kuyruk ven genellikle yaklaşık üçte birden fazla örnekleri için kuyruk Bankası doğru hareket kuyruk ucundan kuyruk uzunluğu boyunca erişilir. Bir lokal anestezik krem kullanılması önerilir. Kan akışını durdurmak için en az 30 yumuşak doku üzerinde parmak basınç uygulayarak hayvan onun kafes döndürülmeden önce s.</li>
		<li>Taze kılcal tüp (keep kılcal tüp yatay) kullanarak bir kan örneği (yaklaşık 30 µL) toplamak. Bir pipet pipet ucu kılcal tüp sonuna üstündeki koyarak ve dikkatli 96-şey plaka bir kuyunun içine hava kabarcıkları kaçınırken toplanan kan iterek kullanarak kılcal tüp boş. Bütün fareler - teker teker için bu yordamı yineleyin. Not: alternatif için kan toplama yolu ile kılcal tüp gibi doğru birim (örneğin, 30 µL) ayarlanmış bir pipet kan toplamak veya bir damla toplamak için kuyruk parafin film ve damlalıklı üzerinden EDTA çözümde kan. Sonraki glukoz ve insülin ölçümleri etkileyebilir gibi kesinlikle vazelin kan veya Şeker Ölçüm Çubuğu Strip ile temasından kaçının. Dikkat: OGTT fareler için çok stresli: yalın fareler kaybedebilir civarında kendi vücut ağırlığının % 15 bir gecede Bayramı sırasında. Ayrıca, kan örnekleme farklı zaman noktalarda önemli bir kan kaybına yol açar. Daha kolay kan örnekleme için vazelin ile mouse-tail dikkatle masaj mümkündür. Not: Kurumsal yönergeleri izin verilen bir zaman dilimi içinde toplanan kan miktarını sınırlayabilir. Örnekleme birimleri ve timepoints izin verilen en yüksek değerler aşmayacak şekilde ayarlanmalıdır. Fareler vücut ağırlığını toplamını hesaplamak için kullanılması gereken kan izin verilen para çekme.</li>
	</ol></li>
	<li>Vücut ağırlığı (1 g glikoz/kg vücut ağırlığı; 3 g/kg kadar artış bu can) göre glikoz çözüm gerekli hacmi hesaplamak için her fare oral gavaj tarafından yönetilecek. Örneğin, bir fare ile bir vücut ağırlığı 30 g 30 mg glikoz yönetmek için bir % 20 glikoz çözümün 150 µL gerekir. Not: farenin ağırlığını glikoz dozu üsse standart bir uygulamadır. Vücut kompozisyonu veri yoksa, OGTT hesaplanması gereken glikoz dozu yaslan temel vücut kitle (Ayrıntılar için konuya bakın).</li>
	<li>Glikoz yönetim<ol>
<li>Hazırlamak herşeyi önceden tüm deneme sırasında gerekli (zamanlayıcı, deney kayıt sayfası, glukoz monitör ve şeritler, kılcal damarlar, şırınga, glikoz çözüm, 96-şey plaka, neşter, hesap makinesi, denge, daimi marker, tezgah kağıtları, bir pipet) bahşiş ve eldiven.</li>
		<li>Glikoz kullanma için fareyi sıkıca tarafından scruff tarafından açgözlü dizginlemek. Yeterli sıkılık boynuna dizginlemek dışarı büküm fare engellemek ve düzgün kafasını geri yatırmak için cilde uygulanır. Ayrıca fare düzgün nefes alabilir emin olun. Not: glikoz yönetim başladıktan sonra iyi bir zaman yönetimi çok önemlidir.</li>
		<li>Dikkatle (Adım 2.5 dayalı) glikoz çözüm besleme iğne kullanarak mide doğrudan yönetmek. Dikkatli bir şekilde doğru yemek borusu ağız yoluyla besleme iğne doğrudan. İğne yutmak için fareyi izin: iğne tamamen alt özofagus/karın fare batar. O zaman glikoz çözüm (şekil 3a) enjekte et.<ol>
<li>Herhangi bir direnç olması durumunda ya da hayvan hemen mücadeleler, iğne geri çekilin ve yeniden konumlandırmak. Sonra hemen ilk gavaj Sayacı başlatmak ve glikoz diğer fareler için 1 dk aralıklarla yönetmek. Not: Glikoz çözüm bir damla besleme iğneyi yalamak ve yutma, böylece daha kolay ekleme besleme iğne kolaylaştırmak teşvik edecek fare, ağız için uygulamak yararlı olabilir. Bu cidden hayvan zarar gibi beslenme iğne eklerken basınç uygulamayın.</li>
		</ol>
</li>
	</ol></li>
	<li>15 dk sonra kan şekeri Şeker Ölçüm ile ölçmek ve ayrıca her fare kan örnekleri (~ 30 µL) (olarak açıklandığı ayrıntılı olarak adım 2.4) sırayla enjekte edildi almak. Not: Zaman yönetimi çok önemlidir; sonda ile besleme gelince aynı zaman aralıkları kullanarak mümkün olduğunca yakın olarak izleyin. Sonuçları değiştirebilir stresi azaltmak için mümkün ve sınırı en az tüm prosedürü sırasında frenleyici olarak serbestçe hareket fare izin. Kuyruk tek elle süt ve diğer kan toplamak.</li>
	<li>2.7 beklenen sonuçları (örneğin, 30, 45, 60, 90, 120, 150 ve glikoz yönetim sonra 180 dk at) bağlı olarak seçilen zaman noktalarda arasındaki adımları yineleyin. Seçili zaman Puan 120 dk uzun olması durumunda, fareler içme suyuna erişimi olduğundan emin olun. Fareler her zaman içme suyuna erişimi olduğundan emin olun. Ne zaman tamamlanmak ile deneme, fareler yiyecek ve su ile donatılmış ev onların kafes dönün. Dikkat: OGTT fareler için çok yorucudur. Bu nedenle bir ITT gibi sonraki metabolik test yapmadan önce en az 1 hafta beklemesi.</li>
	<li>Bunu deneyden sonra kan örnekleri 2500 x g, 30 dk, 4 ° c, santrifüj kapasitesi Kuyu plaka boş ve depolamak için süpernatant (plazma)-20 ° C'de analiz kadar aktarın.<ol>
<li>Kayıt örneklerinin hemoliz varsa (bkz. Bölüm 3).</li>
	</ol></li>
	<li>Piyasada bulunan bir ELISA kullanarak plazma insülin düzeyleri Kiti ( Tablo reçetesigörmek) belirlemek kitinin üreticinin yönergeleri izleyin. Not: Açlık durumuna bağlı olarak yanı sıra incelenen farelerin metabolizmasına zorluklar bu tahlil sırasında oluşabilir: gece açlık insülin düzeyleri (süresi noktası 0) çok düşük ve bu nedenle algılama sınıra yakın vardır. Bu sorunu engellemek için önerilen plazma birim miktarı iki katına ve buna göre ELISA tahlil sonucu yarıya indirmek. Fareler insülin OGTT sırasında özellikle HFD beslenen farelerde ulaşmak, öte yandan, insülin düzeyleri algılama sınırı aşabilir: örnek seyreltik (örneğin, 10 kat ile % 0,9 NaCl) ve ELISA tahlil tekrarlayın. Plazma numuneleri hemoliz insülin, okuma değerleri bir düşüş ortaya çıkan bozulma yol açabilir. Zaman, sıcaklık ve hemoglobin konsantrasyonu örnek bozulması bağlıdır. Her zaman hemolyzed örnekleri soğuk veya insülin bozulması azaltmak için buz üzerinde tutun.</li>
</ol>3. ITT
Not: OGTT (fareler, kan, Şeker Ölçüm ve Vazelin kullanım işleme) için açıklanan aynı önlemler aynı zamanda ITT işlemi sırasında uygulanacak olması. 15 fareler paralel olarak test edilir eğer örneğin, tüm enjeksiyon içinde 15 dk 1 dk aralıklarla yapılmalıdır. ITT için sonraki kan örnekleri kılcal tüpler ile isteğe bağlı oluşur.
<ol><li>Deneme önce hazırlıklar<ol>
<li>Hızlı fare fareler içme suyuna erişimin sağlanması ise insülin enjeksiyonu, daha önce en az 2 h için (örneğin, yemek 8: 00'de kaldırmak için test fareler 2-5 h daha sonra).</li>
		<li>İnsülin 1:1,000 %0,9 oranında seyreltin NaCl (Stok: 100 U/mL insülin; çalışma konsantrasyonu 0,1 U/mL) ve % 20 glikoz hazırlamak (D-(+)-glikoz çözüm içinde çözünmüş distile su) fareler Hipoglisemik olursam yönetilecek. Not: hangi aksi takdirde gecede oluşabilir hipoglisemi önlemek için kısa hızlı hayvanlar oruç sonra ITT genellikle gerçekleştirilir. Hayvanlar için yönetilen tüm reaktifler farmakolojik sınıf olmak zorunda ve steril.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Fareler vücut ağırlığı ölçmek, kuyruk işareti, keskin makas kullanarak kuyruk ucu kesilmiş ve OGTT adım 2.4 için daha önce açıklandığı gibi Bazal kan şekeri düzeylerini ölçmek.</li>
	<li>İnsülin enjeksiyon<ol>
<li>İntraperitoneally insülin enjekte etmek (önceden hesaplanan 0,75 U insülin/kg vücut ağırlığı,), fare scruff yöntemle dizginlemek.</li>
		<li>Bir taze kullanın, steril 27-30 iğne rahatsızlık ve herhangi bir enjeksiyon izi enfeksiyon riski önlemek her hayvan için ölçmek. Not: Sterilizasyon deri insülin yönetim süresini uzatmak ve böylece ek bozuklukları için hayvan neden olabilir. Bu nedenle, bu tavsiye edilmez.</li>
		<li>Fare baş hayvan ventral tarafında ortaya çıkarmak için hafif bir açıyla aşağı eğ. Steril iğne eğimi yukarı ve 30 ° açı ile hayvanın karın (şekil 3b) sağ alt çeyreğinde yerleştirin. Hemen ilk fare enjekte edilir sonra Sayacı başlatmak. Not: Düşük doz Üstelik (0.1 U/kg) özellikle hepatik insülin duyarlılığı değerlendirmek için gerçekleştirilen. OGTT gelince, vücut ağırlığı üzerinde tabanlı enjeksiyon hacmi hesaplama standart dozu dayandırarak yordamdır vücut kompozisyon veri yoksa yağsız vücut kitle tercih edilir.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Kan şekeri (örneğin, 15, 30, 45, 60 ve 90 dakika sonra) seçilen zaman noktalarda ölçmek. Not: insülin kısa bir yarı ~ 10 dk fareler13' te olduğu gibi insülin Yönetim (örneğin, sonra 2 s) sonra geç farklılıklar insülin eylem doğrudan bir etkisi yansıtmaz. Bir fare Hipoglisemik olur diye % 20 glikoz çözüm yönetmek (kan şekeri düzeyleri 35 mg/dL altında) ve ölme riski.</li>
	<li>Son kez Puan sonra fareler geri ev onların kafes bol yiyecek ve su ile hazırlanan yerleştirin.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Qatanani, M., Lazar, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+of+obesity-associated+insulin+resistance:+many+choices+on+the+menu.">Mechanisms of obesity-associated insulin resistance: many choices on the menu.</a> Genes Dev. 21 (12), 1443-1455 (2007).</li><li>Wilcox, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insulin+and+insulin+resistance.">Insulin and insulin resistance.</a> Clin Biochem Rev. 26 (2), 19-39 (2005).</li><li>Reaven, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathophysiology+of+insulin+resistance+in+human+disease.">Pathophysiology of insulin resistance in human disease.</a> Physiol Rev. 75 (3), 473-486 (1995).</li><li>Kahn, B. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Type+2+diabetes:+when+insulin+secretion+fails+to+compensate+for+insulin+resistance.">Type 2 diabetes: when insulin secretion fails to compensate for insulin resistance.</a> Cell. 92 (5), 593-596 (1998).</li><li>Gregor, M. F., Hotamisligil, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammatory+mechanisms+in+obesity.">Inflammatory mechanisms in obesity.</a> Annu Rev Immunol. 29, 415-445 (2011).</li><li>Odegaard, J. I., Chawla, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pleiotropic+actions+of+insulin+resistance+and+inflammation+in+metabolic+homeostasis.">Pleiotropic actions of insulin resistance and inflammation in metabolic homeostasis.</a> Science. 339 (6116), 172-177 (2013).</li><li>Srinivasan, K., Ramarao, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+in+type+2+diabetes+research:+an+overview.">Animal models in type 2 diabetes research: an overview.</a> Indian J Med Res. 125 (3), 451-472 (2007).</li><li>Surwit, R. S., Kuhn, C. M., Cochrane, C., McCubbin, J. A., Feinglos, M. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diet-induced+type+II+diabetes+in+C57BL/6J+mice.">Diet-induced type II diabetes in C57BL/6J mice.</a> Diabetes. 37 (9), 1163-1167 (1988).</li><li>Winzell, M. S., Ahren, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+high-fat+diet-fed+mouse:+a+model+for+studying+mechanisms+and+treatment+of+impaired+glucose+tolerance+and+type+2+diabetes.">The high-fat diet-fed mouse: a model for studying mechanisms and treatment of impaired glucose tolerance and type 2 diabetes.</a> Diabetes. 53, S215-S219 (2004).</li><li>Ayala, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Standard+operating+procedures+for+describing+and+performing+metabolic+tests+of+glucose+homeostasis+in+mice.">Standard operating procedures for describing and performing metabolic tests of glucose homeostasis in mice.</a> Dis Model Mech. 3 (9-10), 525-534 (2010).</li><li>Jais, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heme+oxygenase-1+drives+metaflammation+and+insulin+resistance+in+mouse+and+man.">Heme oxygenase-1 drives metaflammation and insulin resistance in mouse and man.</a> Cell. 158 (1), 25-40 (2014).</li><li>Teperino, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hedgehog+partial+agonism+drives+Warburg-like+metabolism+in+muscle+and+brown+fat.">Hedgehog partial agonism drives Warburg-like metabolism in muscle and brown fat.</a> Cell. 151 (2), 414-426 (2012).</li><li>Cresto, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Half+life+of+injected+125I-insulin+in+control+and+ob/ob+mice.">Half life of injected 125I-insulin in control and ob/ob mice.</a> Acta Physiol Lat Am. 27 (1), 7-15 (1977).</li><li>First report of the BVA/FRAME/RSPCA/UFAW joint working group on refinement. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Removal+of+blood+from+laboratory+mammals+and+birds.">Removal of blood from laboratory mammals and birds.</a> Lab Anim. 27 (1), 1-22 (1993).</li><li>McGuill, M., Rowan, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biological+Effects+of+Blood+Loss:+Implications+for+Sampling+Volumes+and+Techniques.">Biological Effects of Blood Loss: Implications for Sampling Volumes and Techniques.</a> ILAR. 31 (4), 5-18 (1989).</li><li>Hoff, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methods+of+Blood+Collection+in+the+Mouse.">Methods of Blood Collection in the Mouse.</a> Lab Animal. 29 (10), 47-53 (2000).</li><li>Jacobson, L., Ansari, T., McGuinness, O. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Counterregulatory+deficits+occur+within+24+h+of+a+single+hypoglycemic+episode+in+conscious,+unrestrained,+chronically+cannulated+mice.">Counterregulatory deficits occur within 24 h of a single hypoglycemic episode in conscious, unrestrained, chronically cannulated mice.</a> Am J Physiol Endocrinol Metab. 290 (4), E678-E684 (2006).</li><li>Guariguata, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+estimates+of+diabetes+prevalence+for+2013+and+projections+for+2035.">Global estimates of diabetes prevalence for 2013 and projections for 2035.</a> Diabetes Res Clin Pract. 103 (2), 137-149 (2014).</li><li>Freeman, H. C., Hugill, A., Dear, N. T., Ashcroft, F. M., Cox, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deletion+of+nicotinamide+nucleotide+transhydrogenase:+a+new+quantitive+trait+locus+accounting+for+glucose+intolerance+in+C57BL/6J+mice.">Deletion of nicotinamide nucleotide transhydrogenase: a new quantitive trait locus accounting for glucose intolerance in C57BL/6J mice.</a> Diabetes. 55 (7), 2153-2156 (2006).</li><li>Pelleymounter, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+the+obese+gene+product+on+body+weight+regulation+in+ob/ob+mice.">Effects of the obese gene product on body weight regulation in ob/ob mice.</a> Science. 269 (5223), 540-543 (1995).</li><li>Chen, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+that+the+diabetes+gene+encodes+the+leptin+receptor:+identification+of+a+mutation+in+the+leptin+receptor+gene+in+db/db+mice.">Evidence that the diabetes gene encodes the leptin receptor: identification of a mutation in the leptin receptor gene in db/db mice.</a> Cell. 84 (3), 491-495 (1996).</li><li>Rossini, A. A., Like, A. A., Dulin, W. E., Cahill, G. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pancreatic+beta+cell+toxicity+by+streptozotocin+anomers.">Pancreatic beta cell toxicity by streptozotocin anomers.</a> Diabetes. 26 (12), 1120-1124 (1977).</li><li>Bailey, C. J., Flatt, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hormonal+control+of+glucose+homeostasis+during+development+and+ageing+in+mice.">Hormonal control of glucose homeostasis during development and ageing in mice.</a> Metabolism. 31 (3), 238-246 (1982).</li><li>Shi, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sexually+different+actions+of+leptin+in+proopiomelanocortin+neurons+to+regulate+glucose+homeostasis.">Sexually different actions of leptin in proopiomelanocortin neurons to regulate glucose homeostasis.</a> Am J Physiol Endocrinol Metab. 294 (3), E630-E639 (2008).</li><li>Collins, S., Martin, T. L., Surwit, R. S., Robidoux, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+vulnerability+to+diet-induced+obesity+in+the+C57BL/6J+mouse:+physiological+and+molecular+characteristics.">Genetic vulnerability to diet-induced obesity in the C57BL/6J mouse: physiological and molecular characteristics.</a> Physiol Behav. 81 (2), 243-248 (2004).</li><li>Heijboer, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sixteen+hours+of+fasting+differentially+affects+hepatic+and+muscle+insulin+sensitivity+in+mice.">Sixteen hours of fasting differentially affects hepatic and muscle insulin sensitivity in mice.</a> J Lipid Res. 46 (3), 582-588 (2005).</li><li>Kohsaka, A., Bass, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+sense+of+time:+how+molecular+clocks+organize+metabolism.">A sense of time: how molecular clocks organize metabolism.</a> Trends Endocrinol Metab. 18 (1), 4-11 (2007).</li><li>Drucker, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Incretin+action+in+the+pancreas:+potential+promise,+possible+perils,+and+pathological+pitfalls.">Incretin action in the pancreas: potential promise, possible perils, and pathological pitfalls.</a> Diabetes. 62 (10), 3316-3323 (2013).</li><li>Andrikopoulos, S., Blair, A. R., Deluca, N., Fam, B. C., Proietto, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluating+the+glucose+tolerance+test+in+mice.">Evaluating the glucose tolerance test in mice.</a> Am J Physiol Endocrinol Metab. 295 (6), E1323-E1332 (2008).</li><li>Ahren, B., Winzell, M. S., Pacini, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+augmenting+effect+on+insulin+secretion+by+oral+versus+intravenous+glucose+is+exaggerated+by+high-fat+diet+in+mice.">The augmenting effect on insulin secretion by oral versus intravenous glucose is exaggerated by high-fat diet in mice.</a> J Endocrinol. 197 (1), 181-187 (2008).</li><li>Bowe, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metabolic+phenotyping+guidelines:+assessing+glucose+homeostasis+in+rodent+models.">Metabolic phenotyping guidelines: assessing glucose homeostasis in rodent models.</a> J Endocrinol. 222 (3), G13-G25 (2014).</li><li>Arioli, V., Rossi, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Errors+related+to+different+techniques+of+intraperitoneal+injection+in+mice.">Errors related to different techniques of intraperitoneal injection in mice.</a> Appl Microbiol. 19 (4), 704-705 (1970).</li><li>Miner, N. A., Koehler, J., Greenaway, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intraperitoneal+injection+of+mice.">Intraperitoneal injection of mice.</a> Appl Microbiol. 17 (2), 250-251 (1969).</li><li>Heikkinen, S., Argmann, C. A., Champy, M. F., Auwerx, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+glucose+homeostasis.">Evaluation of glucose homeostasis.</a> Curr Protoc Mol Biol. Chapter. , 23 (2007).</li><li>Muniyappa, R., Lee, S., Chen, H., Quon, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+approaches+for+assessing+insulin+sensitivity+and+resistance+in+vivo:+advantages,+limitations,+and+appropriate+usage.">Current approaches for assessing insulin sensitivity and resistance in vivo: advantages, limitations, and appropriate usage.</a> Am J Physiol Endocrinol Metab. 294 (1), E15-E26 (2008).</li><li>McGuinness, O. P., Ayala, J. E., Laughlin, M. R., Wasserman, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NIH+experiment+in+centralized+mouse+phenotyping:+the+Vanderbilt+experience+and+recommendations+for+evaluating+glucose+homeostasis+in+the+mouse.">NIH experiment in centralized mouse phenotyping: the Vanderbilt experience and recommendations for evaluating glucose homeostasis in the mouse.</a> Am J Physiol Endocrinol Metab. 297 (4), E849-E855 (2009).</li><li>Pacini, G., Omar, B., Ahren, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methods+and+models+for+metabolic+assessment+in+mice.">Methods and models for metabolic assessment in mice.</a> J Diabetes Res. 2013, 986906 (2013).</li><li>Polonsky, K. S., Rubenstein, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=C-peptide+as+a+measure+of+the+secretion+and+hepatic+extraction+of+insulin.+Pitfalls+and+limitations.">C-peptide as a measure of the secretion and hepatic extraction of insulin. Pitfalls and limitations.</a> Diabetes. 33 (5), 486-494 (1984).</li><li>Hughey, C. C., Wasserman, D. H., Lee-Young, R. S., Lantier, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Approach+to+assessing+determinants+of+glucose+homeostasis+in+the+conscious+mouse.">Approach to assessing determinants of glucose homeostasis in the conscious mouse.</a> Mamm Genome. 25 (9-10), 522-538 (2014).</li></ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

Şeker hastalığı ve dünya nüfusunun ilişkili hastalıkları yüksek yaygınlığı, araştırma moleküler mekanizması, önlenmesi ve tedavisi hastalığı19adresleme için güçlü bir gereklilik vardır. Sunulan Protokolü HFD fareler, nesil metabolik araştırma yanı sıra tüm vücut metabolik değişiklikler değerlendirilmesi için güçlü araçlardır OGTT ve ITT, iletim için kullanılan güçlü bir hayvan modeli için köklü yöntem açıklanır insülin direnci gibi. Bu raporda sunulan yöntemleri şüpheli genler, çevresel faktörler yanı sıra tüm vücut glikoz metabolizması9,10farmakolojik, diyet, fiziksel veya genetik tedaviler rolü eğitim yararlı olabilir. Glikoz insülin salgılanması bir OGTT için asıl uyarıcı olarak hizmet veren iken, sunulan Protokolü (co-) tarafından değiştirilebilir diğer macronutrients ve insülin yanıt2değiştirmek için bilinen hormonlar gibi diğer maddeleri uygulamak. Benzer şekilde, ITT Protokolü (co-) uygulama bireysel araştırma soru göre diğer maddelerin (örneğin, glukagon veya katekolaminler) tarafından değiştirilebilir. Ana veriler açıklanan OGTT ve ITT kurallarının kan şekeri ve insülin konsantrasyonları vardır; Ancak, glukagon, yağ asidi ve lipoprotein düzeyleri gibi diğer kan parametrelerinin yanı sıra çeşitli metabolik işaretleri mRNA ve protein düzeyi üzerinde ölçüm de çalışmanın amacı bağlı olarak yararlı olabilir.
Müfettişler, hipoglisemi, insülin salgılanması, insülin eylem yanı sıra genel olarak metabolik fenotip nöroendokrin yanıtlarını güçlü fareler10genetik arka plan üzerinde bağlıdır dikkat etmelidir. Burada, biz fareler C57BL/6J genetik arka plan içinde şeker hastalığı, bir HFD kaynaklı model olarak glikoz-aracılı insülin salgılanması nedeniyle doğal olarak meydana gelen silme Nikotinamid nükleotit transhydrogenase gen içinde kısmi bir bozukluk olan kullanılan 20, obezite eğitim için uygun bir model geliştirmelerde insülin direnci8,9ilişkili. İletişim kuralları burada açıklanan Mayıs ancak da metabolik olarak insülin direnci ve şeker hastalığı, genellikle monogenic bozuklukları veya β-hücreleri21, kimyasal imha temel alternatif fare modelleri tanımlamak için kullanılan 22 , 23. deneysel tasarım sırasında önlemleri dahil olarak insülin duyarlılık yaş24ile ve aynı cinsiyetten üzerinden farelerde deneyler yürütmek daha fareler, yaş eşlemeli test. Genetik mutasyonlar ve tedavileri seks25,26bağlı olarak farklı fenotipleri neden olabilir gibi aynı zamanda her iki cinsiyette birbirinden ayrı olarak araştırmak için tavsiye olabilir.
Bu protokol için açıklanan kan örnekleme yöntem kalp hızı, kan akımı ve glikoz metabolizması, fizyolojik olmayan sonuçları10verimli etkileyebilir anestezi gerektirmez. Alternatif olarak, bir arter kateter, hangi, vasküler örnekleme stres deneme sırasında işleme olmadan sağlar aynı zamanda deney için çaba, maliyetleri gibi hayvan kaybı riski ekler implante olması. OGTT için fareler genellikle oruç geceleme (14-18 h), hangi fare, güçlü karaciğer glikojen depoları tüketen bir Katabolik durumda kışkırtır. Bu temel kan şekeri düzeyleri değişkenliği azaltır rağmen uzun süreli hızlı metabolizma hızı azalır ve insanlar10,27durumda aksine olan glikoz kullanımını farelerde, geliştirir. Farelerde beslenme alışkanlıkları da insan davranışını taklit değil gibi böylece daha sonra kısa bir hızlı bir OGTT gerçekleştirmek için fizyolojik olabilir. Sirkadiyen ritim sistemik glikoz metabolizması28üzerinde güçlü bir etkisi gibi günün hangi saatinde burada açıklanan deneyler yaptı dikkate almak önemlidir. Fareler metabolizma onların aktif dönemde (karanlık faz) araştırmak için tersine çevrilmiş bir koyu döngüsü daha fazla fizyolojik sonuçları üretmek için değerli olabilir.
Yönetim açıklanan rota aynı zamanda belirli hipotezi sınanmakta bağlı olarak farklı olabilir. Oral glikoz yönetirken glikoz tolerans testi yol açar daha değişken insülin salgılanması için mide boşalma, gastrointestinal hareketliliği, hormonlar (incretins) ve sinirsel giriş değiştirmek ve insülin yanıt2, uzatmak gibi 10. "incretin etkisi", bağırsak yol üzerinden glikoz emilimini oral glikoz teslim insülin yayın29potentiates GLP1 gibi gastrointestinal hormonlar sürümü için iyi sırasında açıklanan. Bu etkileri aşmak için glikoz bolus Ayrıca intravenöz yönetilemez duruma (IVGTT) veya intraperitoneally (IPGTT). Glukoz ve insülin geziler önemli ölçüde bağlı olarak seçilen teslim yolu farklı. Gecikmiş, ama daha fazla sürekli moda30plazma insülin düzeyleri yükselişi iken OGTT için karşılaştırıldığında, glukoz mayi yönetim bir artan ve uzun süreli en yüksek plazma glikoz düzeyleri, yol açar. Benzer şekilde, intravenöz glikoz yönetim tarafından gecikmeli insülin yanıt31karakterizedir. OGTT sırasında elde edilen daha sağlam AUC-insülin verilerin yanı sıra insülin düzeyleri keskin artışlar oral glikoz teslimini chow beslemeli HFD beslenen farelerin30karşı, glikoz metabolizması değişiklikleri algılamak için daha duyarlı olabilir ki öneririz 31. intragastric ve mayi teslim olmakla birlikte intravenöz yönetim genellikle daha zor yanı sıra daha stresli fareler32için hayvan ve teknik zorluk için önem açısından benzer. Sözlü yönetim daha fazla hata % 10-20 oranında intestinal Lümen veya glikoz teslim ve yeniden dağıtım33,34oranını etkileyebilir mide içine mayi enjeksiyonlar sırasında ortadan kaldırır.
Glikoz teslimat en fizyolojik yol olmasına rağmen tok Ayrıca protein, kompleks karbonhidratlar, yağlar, lifler ve mikro içerirken OGTT sadece glikoz emme için muhasebe sınırlıdır. Standart OGTT sırasında genellikle 1-3 g glikoz/kg vücut ağırlığı olmakla birlikte yönetilen35,36fareyi, vücut ağırlığını glikoz dozu üsse yaklaşımdır. Belirli durumlarda, 1g/kg daha yüksek glikoz yükleme bozulmuş glikoz toleransı30ortaya çıkarmak için gerekli olabilir. Glikoz bertarafı ana sitesi, yağsız vücut kitle (kas, beyin ve karaciğer) orantılı olarak değişmez iken obezite ve diyabet birçok fare modelleri değişiklikler vücut kompozisyon, yağ kitlesi, özellikle büyük bir artış ile karakterizedir. Vücut ağırlığı için geleneksel normalleştirme yaklaşım böylece obez bir fare yalın dokusunda maruz glikoz obez sigara fareyi göre orantısız daha yüksek bir doz neden olur. Bu önyargı bir daha yüksek glikoz dozu30ile artar. Vücut kompozisyonu veri kullanılabilir37varsa bu nedenle, en iyi şekilde glikoz (OGTT) olarak (ITT) insülin dozu tabanlı yağsız vücut kitle üzerinde hesaplanmalıdır. Vücut kompozisyonu değerlendirilmesi teknik sınırlamaları nedeniyle mümkün değilse, bir insan OGTT gibi sabit bir doz uygulama son çare Eğer gerekirken dozaj vücut ağırlığı (tamamlayıcı Şekil 2) göre yapılmalıdır Bu testler fareler10,35,36gerçekleştiriliyor. Sunulan protokolünde bir el tam kan monitör OGTT ve ITT gibi küçük kan birimlerin birden fazla örnekleme gerektiren testlerde avantajlı olduğu kan şekeri düzeylerini ölçmek için kullanıldı. Ancak, bu aygıtların azaltılmış bir dinamik alana sahip insan kanı için tasarlanmıştır. Alternatif olarak, glikoz düzeyleri toplanan plazma örnekleri, örneğin, tarafından tam olarak ölçülebilir kimya Analizörleri rutin laboratuarlarında otomatik. İnsülin yanı sıra, C-peptid açıklanan protokollerin aksine insülin38,39karaciğer tarafından çıkarılan değil β-hücre salgı işlevi daha doğrudan bir göstergesi olarak ölçülen. Gluconeogenesis değerlendirilmek gerekiyorsa, pyruvate tolerans testi (BK), hangi başka bir Glisemik geziler pyruvate bolus40yönetim sonra izleme burada açıklanan protokoller çeşididir uygulanabilir.
OGTT ve ITT can burada açıklanan yaklaşımlar sık sık gözlenen glukoz tolerans farklılıkları açıklamak ve daha fazla hangi sonraki, daha karmaşık denemeler sonraki yapılır önermek için hizmet edebilir (örneğin, Hiperglisemik kelepçeler veya izole adacıkları üzerinde çalışmalar). Özetle, bir HFD kaynaklı fare modeli oluşturmak için basit bir protokol sunmak ve hakkında diğer OGTT ve ITT, metabolik fenotip vivo içinde değişikliklere değerlendirmek için güçlü araçlar ve eğitim yararlı olabilir açıklamak metabolizma ilişkili hastalık mekanizmaları yanı sıra yeni tedavi yaklaşımları.

Gelişmiş dünyada obezite ve diyabet fiziksel hareketsizlik ve işlenmiş gıda, aşırı tüketiminin hızlı kentleşme, sanayileşme gibi Küreselleşme tarafından tahrik edilmektedir etkileri nedeniyle salgın boyutlara ulaştı. Her ne kadar araştırma hiperlipidemi ve ateroskleroz, kazanmıştır gibi gibi önem son yıllarda, insülin direnci ve 's komorbiditeler, sağlığı ve hastalıkları metabolizma düzenleyen karmaşık biyolojik mekanizmaları eksik olarak kalır anlaşılır ve hala önlemek ve bu hastalıkları1tedavi yeni tedavi yöntemleri için acil bir ihtiyaç.
İnsülin ve onun counter-regulatory hormon glukagon hücresel enerji temini ve macronutrient denge, böylece de sağlamak uygun sistemik kan şekeri konsantrasyonları2asıl düzenleyiciler hizmet vermektedir. İken diğer macronutrients, humoral faktörler gibi sinirsel giriş daha fazla bu yanıtı değiştirmek glikoz kendisi pankreas β-hücreleri tarafından insülin salgılanması ana Bitikilerin biri olarak davranır. İnsülin anabolik işlemler Federal devletin aşırı kan şekeri Difüzyon kas ve yağ hücrelerinin içine kolaylaştırmak ve daha fazla Glikoliz yanı sıra protein veya yağ asidi sentezi, sırasıyla etkinleştirme sonuç olarak tetikler. Ayrıca, insülin hepatik glikoz çıkış gluconeogenesis engelleyerek bastırır. Kronik aşırı enerji tüketimi ve meta-inflamasyon Hiperinsülinemi ve insülin reseptör ifade hem de değişiklikler böylece Engelli sonuçlanan aşağı akım sinyal yolları içinde aşağı düzenleme nedeniyle periferik insülin direnci yol glikoz insülin-aracılı elden çıkarma gibi yetersiz hepatik glukoz üretimi3,4,5,6inhibisyonu için duyarlılık.
Hayvan modelleri geniş bir hastalık genetik, beslenme veya deneysel indüksiyon ile insülin direnci ve diyabet gibi onun eşlik eden hastalıklar7 çeşitli formları moleküler mekanizmaları incelemek için mükemmel araçlar olmak kanıtlanmıştır . Bir ilk örnek hızlı kilo alımı nedeniyle artan besin alımını birlikte insülin direnci8', kaynaklanan düşük metabolik verimlilik ile karakterizedir yaygın olarak kullanılan ve iyi kurulmuş HFD kaynaklı fare modeli olduğunu 9. hayvan modelleri ve insanlar, açlık kan şekeri ve insülin düzeyleri, bir ayrıcalık hem de glikoz yönetim Engelli bir hoşgörü yanı sıra diğer sistemik değişiklik glukoz ve insülin direnci sık kullanılan göstergeler vardır metabolizma. İzleme kan şekeri ve insülin düzeyleri Bazal devlet veya stimülasyon sonra bu nedenle kolayca erişilebilir veriler vardır.
Mevcut iletişim kuralı HFD beslenen farelerin yanı sıra iki sık kullanılan yöntem, oral glukoz tolerans testi (OGTT) ve insülin direnci testi (ITT), metabolik fenotip karakterize etmek ve incelemek için yararlı olan nesil özetliyor değişiklikler glikoz metabolizması. OGTT bir sözlü olarak yönetilen glikoz yük ve insülin salgısı zaman içinde atılması değerlendiriyor ayrıntılı olarak açıklanmaktadır. Ayrıca, kan glikoz konsantrasyonu insülin yanıt bir bolus olarak izleyerek tüm vücut insülin-eylem araştırmak için ITT kuralları konusunda yönergeler sağlar. Bu makalede açıklanan protokoller köklü ve birden fazla çalışmalar10,11,12' kullanılmıştır. Başarı artırmak için yardımcı olabilir hafif değişiklikler yanı sıra deneysel tasarım ve veri analizi, aynı zamanda yararlı ipuçları potansiyel tuzaklar önlemek için yönergeler sağlar. Burada açıklanan protokoller tüm vücut glikoz metabolizması ve insülin direnci gibi onun ilişkili bozukluklar genetik, farmakolojik, diyet ve diğer çevresel faktörler etkisini araştırmak için çok güçlü araçlar olabilir. Glikoz veya insülin ile stimülasyon yanı sıra, diğer bileşikler çeşitli bireysel araştırma amacına bağlı olarak uyarılması için kullanılabilir. Bu yazının kapsamı, ancak dışında diğer birçok aşağı akım uygulama üzerinde çizilmiş kan örnekleri, glukoz ve insülin (örneğin, lipid ve lipoprotein profilleri) dışındaki kan değerleri çözümlemesi gibi detaylı yanı sıra gerçekleştirilen metabolik işaretleri (örneğin, nicel gerçek zamanlı Polimeraz zincir tepkimesi (PCR), Western blot analizi ve Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) tarafından) analizi. Daha fazla Akış Sitometresi ve floresan aktif hücre sıralama (FACS) transcriptomic, proteomik ve metabolomic yaklaşımlar Ayrıca hedeflenmemiş analiz için kullanılan süre ayrı tek hücre popülasyonlarının, etkileri araştırmak için uygulanabilir.
Genel olarak, biz daha da tüm vücut metabolik değişiklikler, OGTT ve hastalık patogenezinde çalışmak için yararlı araçlar olabilir ITT çalışma için iki güçlü yaklaşım tasvir ederken bir HFD kaynaklı fare modeli oluşturmak için basit bir protokol sağlar ve insülin direnci ve şeker hastalığı gibi metabolizma ilişkili hastalıklar alanında özellikle yeni tedavilerin geliştirilmesi.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Mouse strain: C57BL/6J</td>
			<td>The Jackson Laboratory</td>
			<td>664</td>
			<td>LFD/HFD</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Accu Chek Performa - Glucometer</td>
			<td>Roche</td>
			<td>6870228</td>
			<td>OGTT/ITT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Accu Chek Performa - Strips</td>
			<td>Roche</td>
			<td>6454038</td>
			<td>OGTT/ITT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-(+)-Glucose solution</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G8769</td>
			<td>OGTT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Actrapid - Insulin</td>
			<td>Novo Nordisk</td>
			<td>417642</td>
			<td>ITT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reusable Feeding Needles</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>#18061-22</td>
			<td>OGTT; 22 gauge (-24 gauge for young mice)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Omnifix-Fine dosing syringes</td>
			<td>Braun</td>
			<td>9161406V</td>
			<td>OGTT/ITT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterican Insulin needle (30G x 1/3&#34;; &#248; 0.30 x 13 mm)</td>
			<td>Braun</td>
			<td>304000</td>
			<td>ITT; lean mice</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterican (G 27 x 3/4&#34;; &#248; 0.40 x 20 mm)&#160;&#160;</td>
			<td>Braun</td>
			<td>4657705</td>
			<td>ITT; mice on HFD</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96 Well PCR Plates, non-skirted, flexible</td>
			<td>Braintree Scientific, Inc.</td>
			<td>SP0016</td>
			<td>OGTT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrasensitive Mouse Insulin ELISA kit</td>
			<td>Crystam Chem</td>
			<td>90080</td>
			<td>OGTT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rodent Diet with 60% kcal% fat</td>
			<td>Research Diets Inc</td>
			<td>D12492</td>
			<td>mice on HFD</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rodent Diet with 10% kcal% fat.</td>
			<td>Research Diets Inc</td>
			<td>D12450B</td>
			<td>mice on LFD</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BRAND micro haematocrit capillary</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>BR749321</td>
			<td>OGTT/ITT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vaseline - creme</td>
			<td>Riviera</td>
			<td>P1768677</td>
			<td>OGTT/ITT</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

study of in vivo glucose metabolism in high-fat diet-fed mice using oral glucose tolerance test (ogtt) and insulin tolerance test (itt)

Obezite en önemli tek risk faktörü tip 2 diyabet, insülin uyarılmış glikoz alımı ve Brüt dekompansasyon sistemik glikoz metabolizmasının bir direnç ile karakterize bir hastalık patogenezinde temsil eder. Önlemek ve diyabet tedavisinde yeni yaklaşımlar acilen ihtiyaç vardır glikoz metabolizmasının anlamada önemli ilerlemeye rağmen onun yönetmelikte sağlık ve hastalık moleküler mekanizmaları altında soruşturma, kalır. Sistemik enerji durumu korumak için türetilmiş glikoz hücresel anabolik işlemler asıl regülatör beslenen devlet sırasında hizmet vermektedir ve böylece kan şekeri dengeleri insülin pankreas salgısı uyarır diyet düzeyleri. Kronik overfeeding Tetikleyicileri meta-periferik insülin reseptör ilişkili değişikliklere yol açan inflamasyon, sinyal ve böylece glikoz insülin-aracılı bertaraf karşı hassasiyetini azaltır. Bu olaylar sonuçta bir azalma yanı sıra yükselmiş açlık şekeri ve insülin düzeyleri glikoz toleransı, sırayla insülin direnci önemli göstergeleri olarak hizmet neden. Burada, üretimi ve yüksek yağlı diyet (HFD) metabolik karakterizasyonu için bir iletişim kuralı mevcut-diyet kaynaklı insülin direnci sık kullanılan bir model olarak fareler beslenir. Zaman içinde bir sözlü olarak yönetilen glikoz yük ve insülin salgısı periferik elden izler oral glukoz tolerans testi (OGTT), ayrıntılı olarak gösterilmektedir. Ayrıca, biz tüm vücut insülin eylem izlemek insülin tolerans testi (ITT) için bir iletişim kuralı mevcut. Birlikte, bu yöntemleri ve aşağı akım uygulamaları genel metabolik fenotip farelerin özellikle değişiklikler glikoz metabolizması değerlendirmek için de karakterize etmek için güçlü araçlar temsil eder. İnsülin direnci, diyabet ve obezite daha iyi de patogenezinde etkileri tedavi müdahaleler test olarak anlaşılması için geniş araştırma alanında özellikle yararlı olabilirler.

Şekil 1 şematik saat tablo için fare üstünde yiyecek metabolik fenotipleme göstermektedir. Bir LFD grup kontrol grubu hizmet verebilir süre yaklaşık 6 hafta bir yaşta, fareler bir HFD üzerinde yerleştirilmelidir. Önemlisi, vücut ağırlığı haftalık beklenen artış vücut ağırlığı olup olmadığını gözlemlemek için tespit edilmelidir. Stres (örneğin, gürültü veya saldırgan erkek davranış) her türlü vücut kilo alımı ile engelleyebilir ve hemen bertaraf edilmelidir. Her kohort farelerin diyet deneyler için en az 10 fareler çünkü bu diyet deneyler zaman alıcı ve aykırı sık (örneğin, fare ağırlık veya fareler anormal glikoz veya insülin düzeyleri ile kazanıyor değil) oluşmalıdır. Seçili süreyi (bağlı olarak çalışma hipotez ve beklenen değişiklikler zaman noktası) sonra OGTT ve ITT glikoz toleransı ve insülin eylem değerlendirme için gerçekleştirilebilir. Bu yazıda, geç zaman Puan metabolik test için seçilmiştir.
Önemlisi, bu deneyler önemli kan-kaybına neden ve böylece fareler için çok stresli bir kurtarma zaman OGTT ve ITT arasında en az 1 hafta olmalıdır. Kan toplama birimleri (Eğer bir ITT ek kan toplama olmadan önce performans azalmaörneğin,) varsa, bu iyileşme döneminde olabilir Ayrıca kısaltılmış ya da atlanmış, birden fazla kan berabere, hayvanlar14için kurallar doğrultusunda, 15,16,17.
Toplam 60 C57BL/6J fareler ile büyük bu çalışmada, fareler yarısı HFD veya LFD üzerinde 6 hafta bir yaşta kuruldu (n = 30/grup) ve vücut kilo diyet 16 hafta için sınıf başkanı. Şekil 4' te gösterildiği gibi vücut ağırlığı önemli bir artış HFD tüketimi sonuçlandı. 6 hafta-in yaş, vücut ağırlığı her iki grupta 20.2 g yapıldı. Fareler LFD üzerinde tutarlı, biraz vücut ağırlığı (31.2 g ± 2.7) gözlenen döneminde artan gösterdi ise fareler HFD üzerinde kendi vücut ağırlığı hızla, özellikle ilk hafta boyunca artmış ve diyet 16 hafta sonra kendi vücut ağırlığı maksimum ulaştı. Ağırlık eğrileri deneme sırasında benzer bir yol gösterdi, fareler bir 1.5 - için 2 - kat daha yüksek vücut ağırlığı (44,4 g ± 4.0) ulaştı HFD grubunun LFD beslemeli fareler için karşılaştırıldığında.
İki tabur metabolik fenotip araştırmak için bir OGTT (şekil 5) ve ITT (şekil 6) yapıldı. Kan hacmi küçük kemirgen sınırlı olduğu gibi bir bakım nokta (PT) tahlil Diyabetik insanlar (Şeker Ölçüm) için bu metabolik fenotipleme deneyler sırasında kan glikoz düzeyleri izlemek için kullanıldı. Şekil 2' de gösterildiği gibi kan glukoz monitör kullanımı kolay, sadece küçük bir damla kan ve saniyeler sonra belgeleri için kan şekeri düzeylerini görüntülemek. Şekil 5 saat ders mutlak glikoz (şekil 5a-b) ve mutlak insülin OGTT sırasında (şekil 5 c) seviyeleri sunuyor. Genellikle, normal glukoz toleransı ile sağlıklı bir fare bir karakteristik hızlı artış kan glikoz, gösterir zirveye ulaşan 15-30 dakika sonra glikoz meydan okuma.
Öncelikle kas, yağ dokusu ve karaciğer doku tarafından yürütülen sonraki glikoz alımı kan glukoz konsantrasyonu kademeli bir düşüş için yol açar. Tüm deneyler, LFD beslenen farelerin glikoz hoşgörülü kontrol grubu görev yaptı ve bu nedenle beklenen metabolik profili yerine: ~ 240 mg/dL kan glikoz düzeyleri zirvesine yaklaşık 15 dk sonra glikoz yönetim, hemen ulaşıldı Bazal düzeyleri yaklaşık 60 dk uygun glikoz eleme gösteren glikoz meydan sonra ulaşan bir düşüş ardından. Tezat içinde HFD-fareler ve yaklaşık ~ 320 mg/dL glikoz doruğa glikoz direnç gösteren glikoz, neredeyse hiçbir bertaraf gösterdi. Açlık durumunda (örnekte olduğu gibi bu temsilcisi) kan şekeri düzeyleri iki grubu zaten farklı olduğu zaman, temel glikoz yukarıda (AUC) eğri altındaki alan hesaplama sonuçları (şekil 5a- doğrulamak için yapılmalıdır b).
Ayrıca, dolaşımdaki kan insülin düzeyleri bu modelde temel patofizyolojisi hakkında daha fazla bilgi sağlamak için bir insülin-ELISA testi (şekil 5 c) kullanılarak belirlenmiştir. İnsülin düzeyleri kontrol grubunda neredeyse değişmeden olduğunu ise, bir HFD beslenen farelerin telafi Hiperinsülinemi HFD kaynaklı olarak gösteren bir büyük ölçüde artmış insülin yanıt yanı sıra kontrol grubu ile karşılaştırıldığında düzeyleri oruç 16-fold yükseltilmiş gösterdi insülin direnci tarafından neden glikoz eleme kapasitesi, dengelemek için bir girişim. Ancak, bu test doğrudan insülin eylem değerlendirmez ve insülin direnci hakkında ifadeler sonuç olarak kullanılmamalıdır olarak OGTT sonuçlarını aşırı Yorumlar değil unutmayın.
HFD beslenen farelerde insülin duyarlılığı ölçmek için bir ITT 1 hafta sonra OGTT (şekil 6a) gerçekleştirildi. Bu tahlil hangi kan glukoz konsantrasyonu insülin yönetim takip düşmek derecesi tüm vücut insülin eylem verimliliğini temsil eder. HFD beslenen farelerin böylece insülin direnci düşündüren kan şekeri ITT sırasında tüm zaman noktalarda LFD beslemeli kontrol grubuna göre Engelli bir azalma gösterdi. ITT sonuçlar genellikle glikoz düzeyleri, aynı zamanda Ayrıca AUC temel glikoz aşağıda şekil 6bgösterildiği gibi gösterilebilir ters zaman tabii olarak sunulur. Karşılaştırılır grupları (ki bu deney içinde durum böyle değil) benzer açlık kan şekeri düzeyleri varsa, şekeri ITT sırasında da Bazal glikoz yüzdesi olarak sunulabilir. Kan şekeri ~ 80 mg/dL18düşersen fare olduğu gibi insülin counter-regulatory yanıt etkinleştirilir: belirli fare modeli counter-regulatory bu yanıt kusurları insülin duyarlılığı bir artış yanlış. HFDs ve sonraki metabolik fenotipik deneyler sırasında outliers sık oluşabilir. HFD kilo veya bu anormal açlık şekeri ve/veya insülin düzeylerini gösteren kazanmak değil fareler analizinden dışlanmaları gerekir. Son iki için bir aykırı testi deneysel her grup için ayrı ayrı gerçekleştirilebilir (örneğin, Grubbs test)
Bu çalışmada, örnek olarak biz gösterdi ve metabolik deneyler vivo içindeveri yorumlanır, obezite diyet kaynaklı, glukoz intoleransı ve insülin direnci ile fareler üzerinde yürütülen ve onları normal vücut ağırlığı ile kontrol grubu ile karşılaştırıldığında. Beklendiği gibi bozulmuş glikoz toleransı ve Hiperinsülinemi obez farelerde yaş eşlemeli kontrol fareler karşılaştırıldığında insülin direnci ile tutarlı oldu; Bunu gerçekleştirmek nispeten kolay olan köklü, güvenilir, zaman ve bütçe dostu yöntemler kullanarak ortaya çıkarılmıştır. Glikoz toleransı, tüm OGTT ve ITT sunulan yöntemlerle elde edilen, insülin düzeyleri de insülin duyarlılık, olduğu gibi farklılıkları kez daha sofistike deneyler gibi içerebilir bir çalışmanın sonraki adımlar planlamak için yardımcı olabilir Hiperglisemik veya hyperinsulinemic kelepçeler yanı sıra izole pankreas adacıkları ile deneyler.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56672/56672fig1.jpg"> Şekil 1. Şematik zaman tablo için önerilen diyet rejim ve metabolik in vivodeneyler. İse kontrol grubu bir LFD alır HFD metabolik etkileri farelerde araştırmak için deney grubu hayvanlar üzerinde HFD yaklaşık 6 hafta-in yaş, yerleştirilir. Fareler vücut ağırlığını doğru kilo değerlendirmek için haftalık olarak tespit edilmelidir. Yaklaşık 12 hafta diyet (ya da araştırma hipotezi bağlı olarak seçilen zaman noktası sonra), metabolik fenotip farelerin kurtarma-zaman ve daha sonra bir ITT 1 hafta takip bir OGTT tarafından değerlendirilir. <a href="//cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56672/56672fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56672/56672fig2.jpg"> Şekil 2. Metabolik deneyler sırasında kan örnekleme yöntemleri. OGTT de kan örnekleme nerede gerekli, ITT gelince için dikkatli bir şekilde kan glikoz düzeyleri ile bir şeker ölçüm belirlenmesi ardından 1-2 mm biteviye-in keskin makas (değişken A), kuyruk ucuyla kesme yoluyla kan çizim tavsiye ve daha fazla insülin düzeyleri ve diğer ilgili kan değerleri belirlemek için bir kılcal kan toplanması. Alternatif olarak, kan da Arteryel Kateterizasyon (gösterilmez) veya kuyruk ven (varyant B) aracılığıyla tatmak. <a href="//cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56672/56672fig2large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56672/56672fig3.jpg"> Şekil 3. Glikoz (a) ve mayi insülin enjeksiyon (b) oral gavaj. OGTT (bir) sırasında beslenme iğne ve ITT (b) sırasında insülin enjeksiyon mayi kullanarak oral glukoz yönetim temsilcisi görüntüler. Protokolü ayrıntılı bir açıklama için bkz:. <a href="//cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56672/56672fig3large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56672/56672fig4.jpg"> Şekil 4. Vücut kilo HFD beslenen ve LFD beslenen C57BL/6J farelerin. C57BL/6J fareler vardı her iki seti üzerinde %60 HFD % 10 veya 20 haftalık bir süre için bir denetimi hizmet LFD. Fareler HFD üzerinde beklenen artış vücut ağırlığının, özellikle içinde belgili tanımlık ilk hafta diyet gösterdi ise LFD beslenen farelerin gözlenen döneminde hemen hemen sürekli vücut ağırlığı gösterdi. -Den sonuçlanmak are ortalama ± SEM *p < 0,05, ** p < 0,01, *** p < 0,001. n = 30 grup başına. ANOVA ve Tukey'nın post hoc testi farkları için test etmek için kullanılmıştır. <a href="//cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56672/56672fig4large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56672/56672fig5.jpg"> Şekil 5. OGTT gerçekleştirilen HFD beslenen ve LFD beslenen C57BL/6J hayvanlarda. (bir) glikoz düzeyleri OGTT sırasında. Bir gecede hızlı sonra kan şekeri değeri (mg/dL) oruç devlet ve 15, 30, 45 ve 60 dk glikoz eriyik sonda ile besleme (1 g glikoz/kg) yolu ile sözlü olarak yönetme sonra ölçüldü. Şekeri HFD grubunda açlık durumunda yanı sıra glikoz meydan sonra yüksek. Ardından 15 dakika gecikmiş ve yavaş sonra doruğa artarak azaltın. -Den sonuçlanmak are ortalama ± SEM *p < 0,05, **p < 0,01, ***p < 0,001. n = 30 grup başına. İstatistiksel analizi ANOVA ve Tukey'nın post hoc testi kullanılarak gerçekleştirildi. (b) OGTT sırasında (AUC) eğri altındaki alan glikoz. Taban düzeltilmiş AUC hesaplamak için Bazal glikoz düzeyleri (süresi noktası 0) üzerinden düşülen sonra kan şekeri düzeyleri her fare için tek tek elde edilen, bireysel AUCs hesaplama tarafından takip. Temel glikoz yukarıda AUC HFD beslenen farelerde glikoz direnç gösterir. İstatistiksel analiz yapılan ANOVA ve Tukey'nın post hoc testi (glikoz düzeyleri) veya öğrencinin iki kuyruklu t-testi (AUC). (c) OGTT sırasında insülin düzeyleri. İnsülin (ng/mL) düzeyleri glikoz eriyik sonda ile besleme (1 g glikoz/kg) yolu ile sözlü olarak yönetme sonra bir açlık dönemi 4 h ve 15, 30 ve 60 dk sonra ölçüldü. Sadece kan insülin düzeyleri daha yüksek bir artış ile glikoz enjeksiyon için telafi fare, HFD beslenen Ayrıca başladı ve OGTT kontrol grubuna kıyasla yüksek insülin seviyeleri ile sona erdi. -Den sonuçlanmak are ortalama ± SEM *p < 0,05, **p < 0,01, ***p < 0,001. n = 30 grup başına. İstatistiksel analizi ANOVA ve Tukey'nın post hoc testi kullanılarak gerçekleştirildi. <a href="//cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56672/56672fig5large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56672/56672fig6.jpg"> Şekil 6. Üstelik HFD beslenen ve LFD beslenen C57BL/6J hayvanlarda yapılan. (bir) glikoz düzeyleri ITT sırasında. Şekeri (mg/dL) oruç devlet ve 15, 30, 45 ve 60 dk sonra insülin enjeksiyon intraperitoneally ölçüldü (0,75 U insülin/kg). ITT sırasında HFD beslenen farelerde yüksek glikoz düzeyleri gösterdi. Kan şekeri düzeyleri yeterli HFD beslenen farelerde insülin enjeksiyon sonra indirdi değil. -Den sonuçlanmak are ortalama ± SEM *p < 0,05, **p < 0,01, ***p < 0,001. n = 30 grup başına. İstatistiksel analizi ANOVA ve Tukey'nın post hoc testi kullanılarak gerçekleştirildi. (b) ITT sırasında (AUC) eğri altındaki alan glikoz. Bazal glikoz düzeyleri (süresi noktası 0) temel düzeltilmiş tersini AUC hesaplamak için tüm sonra elde edilen kan şekeri düzeyleri için her fare üzerinden ayrı ayrı düşülen. Değerleri ters (-1 ile çarpma), edildi bireysel AUCs hesaplama tarafından takip. OGTT sırasında HFD beslenen farelerde yüksek glikoz düzeyi sonucu olarak temel AUC alt daha da azalmış insülin duyarlılığı önerilen kontrol fareler için karşılaştırıldığında HFD beslenen farelerde ters düzeltildi. İstatistiksel analiz yapılan ANOVA ve Tukey'nın post hoc testi (glikoz düzeyleri) veya öğrencinin iki kuyruklu t-testi (ters AUC). <a href="//cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56672/56672fig6large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
Ek resim 1. Deney hazırlık için denetim listesi. <a href="https://cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56672/Suppl_Figure1.pdf">Bu dosyayı indirmek için buraya tıklayınız.</a>
Ek Şekil 2. Üstelik sırasında insülin düzeyleri. LFD beslenen karşı benzer dinamikleri plazma insülin düzeyleri insülin enjeksiyon her iki grupta sonra gösterdi HFD beslemeli grupları içinde ITT sırasında plazma insülin düzeyleri. Beklendiği gibi HFD fareler şiddetle artan Bazal insülin düzeyleri kontrol grubuna göre sergiledi. Ayrıca, HFD beslenen farelerde insülin düzeylerinde artış enjekte insülin miktarı temel alınarak tüm vücut kitle (geleneksel normalleştirme yaklaşım) hesaplanıyorsa hangi kısmen yağsız vücut kitle tahmindi tarafından neden olabilir daha güçlü, Bu deneyde gibi. Ancak, insülin yanıt HFD beslemeli grubunda (plazma glukoz düzeylerinin yetersiz Redüksiyon) engelliler, böylece bu hayvanların insüline dirençli durumda vurgulayan daha fazla. -Den sonuçlanmak are ortalama ± SEM *p < 0,05, **p < 0,01, ***p < 0,001. İstatistiksel analizi ANOVA ve Tukey'nın post hoc testi kullanılarak gerçekleştirildi. <a href="https://cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56672/Suppl_Figure2.tif">Bu dosyayı indirmek için buraya tıklayınız.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Study of In Vivo Glucose Metabolism in High-fat Diet-fed Mice Using Oral Glucose Tolerance Test OGTT and Insulin Tolerance Test ITT at JoVE.com

Yüksek Yağlı Diyetle Beslenen Farelerde Oral Glikoz Tolerans Testi OGTT ve İnsülin Tolerans Testi ITT Kullanılarak İn Vivo Glikoz Metabolizmasının İncelenmesi | Tıp | Video

Study of In Vivo Glucose Metabolism in High-fat Diet-fed Mice Using Oral Glucose Tolerance Test OGTT and Insulin Tolerance Test ITT

Vivo glikoz metabolizması farelerde Oral glukoz tolerans testi (OGTT) ve insülin tolerans testi (ITT) kullanarak yüksek yağlı diyet beslenen incelenmesi

Geçerli makalenin üretimi ve yüksek yağlı diyet beslenen farelerin metabolik karakterizasyonu diyet kaynaklı insülin direnci ve obezite bir model olarak açıklar. Daha fazla oral glukoz tolerans testi ve glukoz metabolizma vivo içindetüm vücut değişikliklere izleme insülin tolerans testi gerçekleştirmek için detaylı iletişim kuralları bulunmaktadır.

Obesity represents the most important single risk factor in the pathogenesis of type 2 diabetes, a disease which is characterized by a resistance to ...

study-vivo-glucose-metabolism-high-fat-diet-fed-mice-using-oral

Nanyang Technological University

Research

Education

JoVE Journal

JoVE Core

Biology

Medicine

Study of In Vivo Glucose Metabolism in High-fat Diet-fed Mice Using Oral Glucose Tolerance Test (OGTT) and Insulin Tolerance Test (ITT)

Cellular Processes

Metabolism

SCIENTISTS IN ACTION

67.3K Görüntüleme.  Medical University of Vienna. Geçerli makalenin üretimi ve yüksek yağlı diyet beslenen farelerin metabolik karakterizasyonu diyet kaynaklı insülin direnci ve obezite bir model olarak açıklar. Daha fazla oral glukoz tolerans testi ve glukoz metabolizma vivo içindetüm vücut değişikliklere izleme insülin tolerans testi gerçekleştirmek için detaylı iletişim kuralları bulunmaktadır.

Video: Study of In Vivo Glucose Metabolism in High-fat Diet-fed Mice Using Oral Glucose Tolerance Test OGTT and Insulin Tolerance Test ITT

Making Sense of Listening: The IMAP Test Battery

The ability to hear is only the first step towards making sense of the range of information contained in an auditory signal. Of equal importance are the abilities to extract and use the information encoded in the auditory signal. We refer to these as listening skills (or auditory processing AP). Deficits in these skills are associated with delayed language and literacy development, though the nature of the relevant deficits and their causal connection with these delays is hotly debated.
When a child is referred to a health professional with normal hearing and unexplained difficulties in listening, or associated delays in language or literacy development, they should ideally be assessed with a combination of psychoacoustic (AP) tests, suitable for children and for use in a clinic, together with cognitive tests to measure attention, working memory, IQ, and language skills. Such a detailed examination needs to be relatively short and within the technical capability of any suitably qualified professional. Current tests for the presence of AP deficits tend to be poorly constructed and inadequately validated within the normal population. They have little or no reference to the presenting symptoms of the child, and typically include a linguistic component. Poor performance may thus reflect problems with language rather than with AP. To assist in the assessment of children with listening difficulties, pediatric audiologists need a single, standardized child-appropriate test battery based on the use of language-free stimuli.
We present the IMAP test battery which was developed at the MRC Institute of Hearing Research to supplement tests currently used to investigate cases of suspected AP deficits. IMAP assesses a range of relevant auditory and cognitive skills and takes about one hour to complete. It has been standardized in 1500 normally-hearing children from across the UK, aged 6-11 years. Since its development, it has been successfully used in a number of large scale studies both in the UK and the USA. IMAP provides measures for separating out sensory from cognitive contributions to hearing. It further limits confounds due to procedural effects by presenting tests in a child-friendly game-format. Stimulus-generation, management of test protocols and control of test presentation is mediated by the IHR-STAR software platform. This provides a standardized methodology for a range of applications and ensures replicable procedures across testers. IHR-STAR provides a flexible, user-programmable environment that currently has additional applications for hearing screening, mapping cochlear implant electrodes, and academic research or teaching.

A test battery (IMAP) for performing an in-depth assessment of auditory and cognitive abilities contributing to listening skills is described. It is quick to administer, child-friendly and free from linguistic confounds. Stimulus generation and protocol management are controlled via a software platform (IHR-STAR) to ensure replicable procedures.

Dinlemede Making Sense IMAP Test Batarya:

The ability to hear is only the first step towards making sense of the range of information contained in an auditory signal. Of equal importance are the ...

Tıp

The &alpha;-test: Rapid Cell-free CD4 Enumeration Using Whole Saliva

There is an urgent need for affordable CD4 enumeration to monitor HIV disease. CD4 enumeration is out of reach in resource-limited regions due to the time and temperature restrictions, technical sophistication, and cost of reagents, in particular monoclonal antibodies to measure CD4 on blood cells, the only currently acceptable method. A commonly used cost-saving and time-saving laboratory strategy is to calculate, rather than measure certain blood values. For example, LDL levels are calculated using the measured levels of total cholesterol, HDL, and triglycerides1. Thus, identification of cell-free correlates that directly regulate the number of CD4+ T cells could provide an accurate method for calculating CD4 counts due to the physiological relevance of the correlates.
The number of stem cells that enter blood and are destined to become circulating CD4+ T cells is determined by the chemokine CXCL12 and its receptor CXCR4 due to their influence on locomotion2. The process of stem cell locomotion into blood is additionally regulated by cell surface human leukocyte elastase (HLECS) and the HLECS-reactive active &alpha;1proteinase inhibitor (&alpha;1PI, &alpha;1antitrypsin, SerpinA1)3. In HIV-1 disease, &alpha;1PI is inactivated due to disease processes 4. In the early asymptomatic categories of HIV-1 disease, active &alpha;1PI was found to be below normal in 100% of untreated HIV-1 patients (median=12 &mu;M, and to achieve normal levels during the symptomatic categories4, 5. This pattern has been attributed to immune inactivation, not to insufficient synthesis, proteolytic inactivation, or oxygenation. We observed that in HIV-1 subjects with &gt;220 CD4 cells/&mu;l, CD4 counts were correlated with serum levels of active &alpha;1PI (r2=0.93, p&lt;0.0001, n=26) and inactive &alpha;1PI (r2=0.91, p&lt;0.0001, n=26) 5. Administration of &alpha;1PI to HIV-1 infected and uninfected subjects resulted in dramatic increases in CD4 counts suggesting &alpha;1PI participates in regulating the number of CD4+ T cells in blood 3.
With stimulation, whole saliva contains sufficient serous exudate (plasma containing proteinaceous material that passes through blood vessel walls into saliva) to allow measurement of active &alpha;1PI and the correlation of this measurement is evidence that it is an accurate method for calculating CD4 counts. Briefly, sialogogues such as chewing gum or citric acid stimulate the exudation of serum into whole mouth saliva. After stimulating serum exudation, the activity of serum &alpha;1PI in saliva is measured by its capacity to inhibit elastase activity. Porcine pancreatic elastase (PPE) is a readily available inexpensive source of elastase. PPE binds to &alpha;1PI forming a one-to-one complex that prevents PPE from cleaving its specific substrates, one of which is the colorimetric peptide, succinyl-L-Ala-L-Ala-L-Ala-p-nitroanilide (SA3NA). Incubating saliva with a saturating concentration of PPE for 10 min at room temperature allows the binding of PPE to all the active &alpha;1PI in saliva. The resulting inhibition of PPE by active &alpha;1PI can be measured by adding the PPE substrate SA3NA. (Figure 1). Although CD4 counts are measured in terms of blood volume (CD4 cells/&mu;l), the concentration of &alpha;1PI in saliva is related to the concentration of serum in saliva, not to volume of saliva since volume can vary considerably during the day and person to person6. However, virtually all the protein in saliva is due to serum content, and the protein content of saliva is measurable7. Thus, active &alpha;1PI in saliva is calculated as a ratio to saliva protein content and is termed the &alpha;1PI Index. Results presented herein demonstrate that the &alpha;1PI Index provides an accurate and precise physiologic method for calculating CD4 counts.

The &#945;-test: Rapid Cell-free CD4 Enumeration Using Whole Saliva

A CD4 enumeration method, the &#x03B1;-test, is described which uses whole saliva to provide rapid and accurate CD4 counts. The &alpha;-test costs pennies and eliminates the need for technical training, costly reagents such as monoclonal antibodies, instrumentation, refrigeration, transport of samples, as well as collection and handling of blood.

Α-testi: Tüm Tükürük Kullanarak Hızlı Hücre içermeyen CD4 sayımı

There is an urgent need for affordable CD4 enumeration to monitor HIV disease. CD4 enumeration is out of reach in resource-limited regions due to the time ...

Cardiac Stress Test Induced by Dobutamine and Monitored by Cardiac Catheterization in Mice

Dobutamine is a &beta;-adrenergic agonist with an affinity higher for receptor expressed in the heart (&beta;1) than for receptors expressed in the arteries (&beta;2). When systemically administered, it increases cardiac demand. Thus, dobutamine unmasks abnormal rhythm or ischemic areas potentially at risk of infarction. 
Monitoring of heart function during a cardiac stress test can be performed by either ecocardiography or cardiac catheterization. The latter is an invasive but more accurate and informative technique that the former.
Cardiac stress test induced by dobutamine and monitored by cardiac catheterization accomplished as described here allows, in a single experiment, the measurement of the following hemodynamic parameters: heart rate (HR), systolic pressure, diastolic pressure, end-diastolic pressure, maximal positive pressure development (dP/dtmax) and maximal negative pressure development (dP/dtmin), at baseline conditions and under increasing doses of dobutamine.
As expected, in normal mice we observed a dobutamine dose-related increase in HR, dP/dtmax and dP/dtmin. Moreover, at the highest dose tested (12 ng/g/min) the cardiac decompensation of high fat diet-induced obese mice was unmasked.

We describe the protocol to perform a cardiac stress test induced by dobutamine and monitored by cardiac catheterization in normal mice. Also we show its application to unmask subclinical cardiac disease in high fat diet-induced obese mice.

Kardiyak Stres Testi Dobutamin İndüklemiş ve Farelerde Kalp Kateterizasyonu tarafından İzlenen

Dobutamine is a &beta;-adrenergic agonist with an affinity higher for receptor expressed in the heart (&beta;1) than for receptors expressed in the ...

An in vivo Assay to Test Blood Vessel Permeability

This method is based on the intravenous injection of Evans Blue in mice as the test animal model. Evans blue is a dye that binds albumin. Under physiologic conditions the endothelium is impermeable to albumin, so Evans blue bound albumin remains restricted within blood vessels. In pathologic conditions that promote increased vascular permeability endothelial cells partially lose their close contacts and the endothelium becomes permeable to small proteins such as albumin. This condition allows for extravasation of Evans Blue in tissues. A healthy endothelium prevents extravasation of the dye in the neighboring vascularized tissues. Organs with increased permeability will show significantly increased blue coloration compared to organs with intact endothelium. The level of vascular permeability can be assessed by simple visualization or by quantitative measurement of the dye incorporated per milligram of tissue of control versus experimental animal/tissue. Two powerful aspects of this assay are its simplicity and quantitative characteristics. Evans Blue dye can be extracted from tissues by incubating a specific amount of tissue in formamide. Evans Blue absorbance maximum is at 620 nm and absorbance minimum is at 740 nm. By using a standard curve for Evans Blue, optical density measurements can be converted into milligram dye captured per milligram of tissue. Statistical analysis should be used to assess significant differences in vascular permeability.

An in vivo Assay to Test Blood Vessel Permeability

We are presenting an in vivo assay to test blood vessel permeability. This assay is based on intravenous injection of a dye and subsequent visualization of its diffusion into interstitial spaces.

An<em&gt; In vivo</emKan Gemi Geçirgenlik Test&gt; Test

This method is based on the intravenous injection of Evans Blue in mice as the test animal model. Evans blue is a dye that binds albumin. Under ...

Assessment of Gastric Emptying in Non-obese Diabetic Mice Using a [13C]-octanoic Acid Breath Test

Gastric emptying studies in mice have been limited by the inability to follow gastric emptying changes in the same animal since the most commonly used techniques require killing of the animals and postmortem recovery of the meal1,2. This approach prevents longitudinal studies to determine changes in gastric emptying with age and progression of disease. The commonly used [13C]-octanoic acid breath test for humans3 has been modified for use in mice4-6 and rats7 and we previously showed that this test is reliable and responsive to changes in gastric emptying in response to drugs and during diabetic disease progression8. In this video presentation the principle and practical implementation of this modified test is explained. As in the previous study, NOD LtJ mice are used, a model of type 1 diabetes9. A proportion of these mice develop the symptoms of gastroparesis, a complication of diabetes characterized by delayed gastric emptying without mechanical obstruction of the stomach10.
This paper demonstrates how to train the mice for testing, how to prepare the test meal and obtain 4 hr gastric emptying data and how to analyze the obtained data. The carbon isotope analyzer used in the present study is suitable for the automatic sampling of the air samples from up to 12 mice at the same time. This technique allows the longitudinal follow-up of gastric emptying from larger groups of mice with diabetes or other long-standing diseases.

Assessment of Gastric Emptying in Non-obese Diabetic Mice Using a [13C]-octanoic Acid Breath Test

Determination of gastric emptying with a non-invasive [13C]-octanoic acid breath test for tracking gastroparesis in female NOD LtJ mice.

Bir Kullanarak Non-obez Diyabetik Farelerde Mide boşaltılması Değerlendirilmesi [<sup&gt; 13</sup&gt; C]-oktanoik asit Nefes Testi

Gastric emptying studies in mice have been limited by the inability to follow gastric emptying changes in the same animal since the most commonly used ...

Characterization of Metabolic Status in Nonhuman Primates with the Intravenous Glucose Tolerance Test

The intravenous glucose tolerance test (IVGTT) plays a key role in the characterization of glucose homeostasis. When taken together with serum biochemical profiles, inclusive of blood glucose levels in both the fed and fasted state, HbA1c, insulin levels, clinical history of diet, body composition, and body weight status, an assessment of normal and abnormal glycemic control can be made. Interpretation of an IVGTT is done through measurement of changes in glucose and insulin levels over time in relation to the dextrose challenge. Critical components to be considered are: peak glucose and insulin levels reached in relation to T0 (end of glucose infusion), the glucose clearance rate K derived from the slope of rapid glucose clearance in the first 20 min (T1 to T20), the time to return to glucose baseline, and the area under the curve (AUC). These IVGTT measures will show characteristic changes as glucose homeostasis moves from a healthy to a diseased metabolic state5. Herein we will describe the characterization of nonhuman primates (Rhesus and Cynomolgus macaques), which are the most relevant animal model of Type II diabetes (T2D) in humans and the IVGTT and clinical profiles of these animals from a lean healthy, to obese dysmetabolic, and T2D state 8, 10, 11.

The goal of this protocol is to present a standard method to perform intravenous glucose tolerance tests (IVGTTs) to assess glycemic control in nonhuman primates and assess their metabolic status from healthy to dysmetabolic.

İntravenöz Glikoz Tolerans Testi ile insan olmayan primatlarda Metabolik Durumu Karakterizasyonu

The intravenous glucose tolerance test (IVGTT) plays a key role in the characterization of glucose homeostasis. When taken together with serum biochemical ...

Depletion of Mouse Cells from Human Tumor Xenografts Significantly Improves Downstream Analysis of Target Cells

The use of in vitro cell line models for cancer research has been a useful tool. However, it has been shown that these models fail to reliably mimic patient tumors in different assays1. Human tumor xenografts represent the gold standard with respect to tumor biology, drug discovery, and metastasis research 2-4. Tumor xenografts can be derived from different types of material like tumor cell lines, tumor tissue from primary patient tumors4 or serially transplanted tumors. When propagated in vivo, xenografted tissue is infiltrated and vascularized by cells of mouse origin. Multiple factors such as the tumor entity, the origin of xenografted material, growth rate and region of transplantation influence the composition and the amount of mouse cells present in tumor xenografts. However, even when these factors are kept constant, the degree of mouse cell contamination is highly variable.
Contaminating mouse cells significantly impair downstream analyses of human tumor xenografts. As mouse fibroblasts show high plating efficacies and proliferation rates, they tend to overgrow cultures of human tumor cells, especially slowly proliferating subpopulations. Mouse cell derived DNA, mRNA, and protein components can bias downstream gene expression analysis, next-generation sequencing, as well as proteome analysis 5. To overcome these limitations, we have developed a fast and easy method to isolate untouched human tumor cells from xenografted tumor tissue. This procedure is based on the comprehensive depletion of cells of mouse origin by combining automated tissue dissociation with the benchtop tissue dissociator and magnetic cell sorting. Here, we demonstrate that human target cells can be can be obtained with purities higher than 96% within less than 20 min independent of the tumor type.

Human tumor xenografts are vascularized and infiltrated by cells of mouse origin during the growth phase in vivo. To circumvent the bias caused by these contaminating cells during downstream analysis, we developed a method allowing for comprehensive depletion of all mouse cells by magnetic cell sorting.

İnsan Tümör ksenogratflarının gelen Fare Hücrelerinin tükenmesi Anlamlı Hedef Hücre Alt Analizi geliştirir

The use of in vitro cell line models for cancer research has been a useful tool. However, it has been shown that these models fail to reliably mimic ...

Determining Glucose Metabolism Kinetics Using 18F-FDG Micro-PET/CT

This paper describes the use of 18F-FDG and micro-PET/CT imaging to determine in vivo glucose metabolism kinetics in mice (and is transferable to rats). Impaired uptake and metabolism of glucose in multiple organ systems due to insulin resistance is a hallmark of type 2 diabetes. The ability of this technique to extract an image-derived input function from the vena cava using an iterative deconvolution method eliminates the requirement of the collection of arterial blood samples. Fitting of tissue and vena cava time activity curves to a two-tissue, three compartment model permits the estimation of kinetic micro-parameters related to the 18F-FDG uptake from the plasma to the intracellular space, the rate of transport from intracellular space to plasma and the rate of 18F-FDG phosphorylation. This methodology allows for multiple measures of glucose uptake and metabolism kinetics in the context of longitudinal studies and also provides insights into the efficacy of therapeutic interventions.

Determining Glucose Metabolism Kinetics Using 18F-FDG Micro-PET/CT

This study describes a protocol that uses 18F-FDG and positron emission tomography/computed tomography (PET/CT) imaging, together with kinetic modelling, to quantify the in vivo, real-time uptake of 18F-FDG into tissues.

Kullanımı Glukoz Metabolizma Kinetiği Belirlenmesi<sup&gt; 18</sup&gt; F-FDG Mikro PET / BT

This paper describes the use of 18F-FDG and micro-PET/CT imaging to determine in vivo glucose metabolism kinetics in mice (and is transferable to rats). ...

Improving Strength, Power, Muscle Aerobic Capacity, and Glucose Tolerance through Short-term Progressive Strength Training Among Elderly People

This protocol describes the simultaneous use of a broad span of methods to examine muscle aerobic capacity, glucose tolerance, strength, and power in elderly people performing short-term resistance training (RET). Supervised progressive resistance training for 1 h three times a week over 8 weeks was performed by RET participants (71&#177;1 years, range 65-80). Compared to a control group without training, the RET showed improvements on the measures used to indicate strength, power, glucose tolerance, and several parameters of muscle aerobic capacity. Strength training was performed in a gym with only robust fitness equipment. An isokinetic dynamometer for knee extensor strength permitted the measurement of concentric, eccentric, and static strength, which increased for the RET group (8-12% post- versus pre-test). The power (rate of force development, RFD) at the initial 0-30 ms also showed an increase for the RET group (52%). A glucose tolerance test with frequent blood glucose measurements showed improvements only for the RET group in terms of blood glucose values after 2 h (14%) and the area under the curve (21%). The blood lipid profile also improved (8%). From muscle biopsy samples prepared using histochemistry, the amount of fiber type IIa increased, and a trend towards a decrease in IIx in the RET group reflected a change to a more oxidative profile in terms of fiber composition. Western blot (to determine the protein content related to the signaling for muscle protein synthesis) showed a rise of 69% in both Akt and mTOR in the RET group; this also showed an increase in mitochondrial proteins for OXPHOS complex II and citrate synthase (both ~30%) and for complex IV (90%), in only the RET group. We demonstrate that this type of progressive resistance training offers various improvements (e.g., strength, power, aerobic capacity, glucose tolerance, and plasma lipid profile).

The effect of short-term resistance training on elderly people was investigated through the simultaneous use of several methods. Compared to a control group, many improvements were seen, including on muscle aerobic capacity, glucose tolerance, strength, power, and muscle quality (i.e., protein involved in cell signaling and muscle fiber type composition).

Yaşlılar Arası Kısa Süreli Progresif Güç Eğitimiyle Mukavemet, Güç, Kas Aerobik Kapasitesi ve Glukoz Toleransının Geliştirilmesi

This protocol describes the simultaneous use of a broad span of methods to examine muscle aerobic capacity, glucose tolerance, strength, and power in ...

Studying the Hypothalamic Insulin Signal to Peripheral Glucose Intolerance with a Continuous Drug Infusion System into the Mouse Brain

Insulin regulates systematic metabolism in the hypothalamus and the peripheral insulin response. An inflammatory reaction in peripheral adipose tissues contributes to type 2 diabetes mellitus (T2DM) development and appetite regulation in the hypothalamus. Chemokine CCL5 and C-C chemokine receptor type 5 (CCR5) levels have been suggested to mediate arteriosclerosis and glucose intolerance in type 2 diabetes mellitus (T2DM). In addition, CCL5 plays a neuroendocrine role in the hypothalamus by regulating food intake and body temperature, thus, prompting us to investigate its function in hypothalamic insulin signaling and the regulation of peripheral glucose metabolism.
The micro-osmotic pump brain infusion system is a quick and precise way to manipulate CCL5 function and study its effect in the brain. It also provides a convenient alternative approach to generating a transgenic knockout animal. In this system, CCL5 signaling was blocked by intracerebroventricular (ICV) infusion of its antagonist, MetCCL5, using a micro-osmotic pump. The peripheral glucose metabolism and insulin responsiveness was detected by the Oral Glucose Tolerance Test (OGTT) and Insulin Tolerance Test (ITT). Insulin signaling activity was then analyzed by protein blot from tissue samples derived from the animals.
After 7-14 days of MetCCL5 infusion, the glucose metabolism and insulin responsiveness was impaired in mice, as seen in the results of the OGTT and ITT. The IRS-1 serine302 phosphorylation was increased and the Akt activity was reduced in mice hypothalamic neurons following CCL5 inhibition. Altogether, our data suggest that blocking CCL5 in the mouse brain increases the phosphorylation of IRS-1 S302 and interrupts hypothalamic insulin signaling, leading to a decrease in insulin function in peripheral tissues as well as the impairment of glucose metabolism.

This protocol studies the role of chemokine (C-C motif) ligand 5 (CCL5) in the hypothalamus by delivering an antagonist, MetCCL5, into the mouse brain using a micro-osmotic pump brain infusion system. This transient inhibition of CCL5 activity interrupted hypothalamic insulin signaling, leading to glucose intolerance and peripheral systemic insulin sensitivity.

Hipotalamik insülin sinyal fare beyin içine sürekli uyuşturucu infüzyon sistemi ile periferik glikoz intoleransı için eğitim

Insulin regulates systematic metabolism in the hypothalamus and the peripheral insulin response. An inflammatory reaction in peripheral adipose tissues ...