Bu video yayın DK 68.055 Programı Projesi Hibe &quot;Enterik Sistemi Patobiyoloji&quot; Diyabet ve Sindirim ve Böbrek hastalıkları Ulusal Enstitüsü (NIDDK) fon ile mümkün olmuştur. Christopher T. Creedon Rochester Public Schools Mentorluk Programı tarafından desteklenmiştir. Biz teknik asistanlığı, sekreterlik hizmetleri ve Los Gatos Research, Inc (Mountain View, CA) &#39;dan Dr Douglas Baer Bayan Kristy Zodrow Sayın Gary Stoltz ederim.

1. Fare Eğitim ve Alışma <ol><li> Analizden önce, test koşullarına onları alıştırmak için sabit hava akışı ile 2-4 saat için test odaları içinde tüm fareler koydu. Bu belirgin aksi gecikmiş mide boşalması aberan algılama neden olabilecek stres seviyelerini azaltır. Farelerin mide boşalma deneyi koşuyormuş gibi aynı şekilde davranın. Oktanoik asit eklemeden yumurta sarısı (daha bakınız) hazırlayın ve her fare için 0.2 g yem. </li><li> Fareler yeterince (genellikle 2-3 kez) eğitilmiştir kadar bu işlemi tekrarlayın. Çevre koşulları aynı tutulur gibi fareler genellikle kolayca sürece alışmışsındır. </li></ol> Not: alışkın fareler hızlı sessizce yeni bir çevre ve geri kalanı razı olurken Sigara alışkın fareler, odasına transferinden sonra yaklaşık 1 saat boyunca hareket ve arınmak ve sık sık idrara çıkma devam ediyor. Hayırte: Deneme sırasında: Böyle aşırı idrara çıkma, defekasyon, yumurta yeme ilgi eksikliği gibi alışkanlık kaybı belirtileri Monitör hayvanlar. Eğer bu durumda yeniden 1-2 kez önceden gastrik boşalma veri elde etmek boş bir odasında habituating düşünün. Bu deney yaparken Tutarlılık son derece önemlidir. Şeyleri aynı şekilde yaparak her zaman güvenilir ve tekrarlanabilir sonuçlar elde etmek için tek yoldur. Bu, kendi kafes arkadaşları itibaren fareler ayıran değil, aynı zamanda, her gün (örneğin insülin) kesinlikle gerekli olmadıkça, fareler açlık ve aynı zamanda mide boşalması Teste başlamadan ve fareler işleme benzer bir şekilde tedavi veren içerir. 2. Testi Öğün İçeren İzotop hazırlanması <ol><li> 50 ml şahin tüp içinde yumurta sarısı 5 g tarttığını ile başlayın. Taze bir sınama yemek hazırlamak için her deneysel gün bu adımları yineleyin. </li><li> Bir concentr ile oktanoik asit için 10 ul ekleyumurta ihtiva eden 50 ml Falcon tüp 2 ul / g tirme ve şahin tüp içinde bir spatula ile 1 dakika boyunca kuvvetli bir şekilde karıştırılır. </li><li> O pıhtılaşır ve tutarlılık küçük toplar yapmak için uygundur kadar yumurta sonra bir cam behere aktarılır ve bir Bunsen brülör üzerinde ısıtılır. Bu genellikle yaklaşık 30 saniye sürer. </li></ol> Not: yumurta sarısı topları fare başına 0.2 g tartmak gerekir. Bu, tüm farelerde kümülatif doz sabit tutmak için önemlidir. 3. Deneme Başlatma <ol><li> Coprophagia önlemek için metal bir &quot;kafes-bottom&quot; açlık raf (12 saat) hızlı fare gecede, mide boşalmasını için bir kez eğitimli ve hazır. Onlar içme suyu ücretsiz olarak sahip olduğunuzdan emin olun. Diyabetik farelerde mevcut deneyde kullanılan olduğundan, onlar fazla 16 saat boyunca oruç edilmemelidir. </li><li> Mide boşalma odaları kurmaya başlayın. Havada kurutulmuş olmuştur temiz odaları ve kapaklar kullanın. Ayrıca, herhangi biranalizörü veya CO 2 hava beslemesi odalarına bağlayan tüpleri nemsiz olmalıdır; su analizörü tarafından okunan sinyal ile etkileşime girebilir </li><li> Sabit bir hava akışını sağlamak giriş tüpleri için odaları bağlayın. Daha sonra makine ile odalarından çıkış boruları bağlayın. Tüpleri kapatın ve hava akımını açın. </li></ol> Not: kolayca ve güvenli bir şekilde kapatmak kapatılır böylece kapağın kapak sonunda vazelin çok küçük bir miktarda uygulanır. Bu sızdırmaz conta fareler tarafından üretilen tüm karbon dioksit toplamak için gereklidir. 4. Deneysel Prosedürler <ol><li> Her fare ağırlığındaki ile başlayın. Vücut ağırlığı onların sürekli sağlıklı bir ölçüdür. Ardından uygun odasında her fare yerleştirin. Bu hava şu anda odalarına akan adres elbette önemlidir. </li><li> Ölçümü başlatmak için, farelerin ayarlamak önce odalarına gelmesini bekleyinhava seviyelerinin ing. </li><li> Fareler sakin görünen sonra, hangi, birkaç dakika sürebilir her fare odası için hava akış hızını ayarlayabilirsiniz. Bu, her bir fare için farklı olabilir. Tipik olarak, hava akış CO 2 kullanılmakta olan herhangi bir ekipman ile tespit edilebilir düzeyde nefes verme ulaşır olduğundan emin olmak için, ve seviye sağlıklı hava devir hızı sağlamak için yeteri kadar düşük kalmasını sağlamak için, deney başında ayarlanır. Biz milyonda 1,000 ve 1,500 parçalar arasındaki ilk CO 2 düzeyleri kullanın. </li><li> Ayarlamaları ile zorluk varsa, hava sızdırmazlığını kontrol edin. Sonra odalarının her biri için işlemi yineleyin ve hava akışı için yapılan düzeltmeler CO 2 seviyesi düzeltilmiş olup olmadığını görmek için ölçümler başka bir tur için izleyebilirsiniz. Bu farelerin beslenme öncesinde okuma istikrarlı bir temel elde etmek için önemlidir. Biz kendi kendine kalibrasyon özelliği olan bir makine kullanabilirsiniz. Bu değilse durum kalibrasyon kontrol edilmelidir. </li><li> Bu elde edildikten sonra, yumurta yemek yönetmekilk olarak fare ve kayıt süre için her bir fare gıda alır. </li><li> Biz her fare için 13 CO 2 zenginleştirme eğri uydurma için yeterli değerlerini elde etmek için 4 saat süreyle yordamı çalıştırın. Fareler üzerinde CO 2 düzeyleri fareler için hala güvenli olduğundan emin olmak için her 30-60 dakika kontrol edin. </li><li> Farelerde test bitti hemen sonra yeme başlayabilirsiniz böylece test bitmeden gıda içeren yeni kutular hazırlayın. </li></ol>

<ol>
	<li>Yeung, C. K., McCurrie, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+method+to+investigate+the+inhibitory+effects+of+drugs+on+gastric+emptying+in+the+mouse+in+vivo.">A simple method to investigate the inhibitory effects of drugs on gastric emptying in the mouse in vivo.</a> J. Pharmacol. Toxicol. Methods. 45, 235-240 (2001).</li><li>Osinski, M. A., Seifert, T. R., Cox, B. F., Gintant, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+improved+method+of+evaluation+of+drug-evoked+changes+in+gastric+emptying+in+mice.">An improved method of evaluation of drug-evoked changes in gastric emptying in mice.</a> J. Pharmacol. Toxicol. Methods. 47, 115-120 (2002).</li><li>Ghoos, Y. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measurement+of+gastric+emptying+rate+of+solids+by+means+of+a+carbon-labeled+octanoic+acid+breath+test.">Measurement of gastric emptying rate of solids by means of a carbon-labeled octanoic acid breath test.</a> Gastroenterology. 104, 1640-1647 (1993).</li><li>Symonds, E., Butler, R., Omari, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noninvasive+breath+tests+can+detect+alterations+in+gastric+emptying+in+the+mouse.">Noninvasive breath tests can detect alterations in gastric emptying in the mouse.</a> Eur. J. Clin. Invest. 32, 341-344 (2002).</li><li>Symonds, E. L., Butler, R. N., Omari, T. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+gastric+emptying+in+the+mouse+using+the+[13C]-octanoic+acid+breath+test.">Assessment of gastric emptying in the mouse using the [13C]-octanoic acid breath test.</a> Clin. Exp. Pharmacol. Physiol. 27, 671-675 (2000).</li><li>Verhulst, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+ghrelin+in+the+relationship+between+hyperphagia+and+accelerated+gastric+emptying+in+diabetic+mice.">Role of ghrelin in the relationship between hyperphagia and accelerated gastric emptying in diabetic mice.</a> Gastroenterology. 135, 1267-1276 (2008).</li><li>Schoonjans, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+13C-octanoic+acid+breath+test:+validation+of+a+new+noninvasive+method+of+measuring+gastric+emptying+in+rats.">The 13C-octanoic acid breath test: validation of a new noninvasive method of measuring gastric emptying in rats.</a> Neurogastroenterol. Motil. 14, 287-293 (2002).</li><li>Choi, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+gastric+emptying+in+nonobese+diabetic+mice.">Determination of gastric emptying in nonobese diabetic mice.</a> Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 293, 1039-1045 (2007).</li><li>Atkinson, M. A., Leiter, E. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+NOD+mouse+model+of+type+1+diabetes:+as+good+as+it+gets?.">The NOD mouse model of type 1 diabetes: as good as it gets?.</a> Nat. Med. 5, 601-604 (1999).</li><li>Camilleri, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+practice.+Diabetic+gastroparesis.">Clinical practice. Diabetic gastroparesis.</a> N. Engl. J. Med. 356, 820-829 (2007).</li><li>Choi, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heme+oxygenase-1+protects+interstitial+cells+of+Cajal+from+oxidative+stress+and+reverses+diabetic+gastroparesis.">Heme oxygenase-1 protects interstitial cells of Cajal from oxidative stress and reverses diabetic gastroparesis.</a> Gastroenterology. 135, 2055-2064 (2008).</li><li>Kashyap, P. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Carbon+monoxide+reverses+diabetic+gastroparesis+in+NOD+mice.">Carbon monoxide reverses diabetic gastroparesis in NOD mice.</a> Am. J. Physiol. GI. G298, G1013-G1019 (2010).</li></ol>

Yazarlar hiçbir rakip mali çıkarlarının olmadığını beyan ederim.

Açıklanan tekniği Burada farelerde katı mide boşalma vivo ölçümü tekrarlanan ve non-invaziv sağlar. Bu sistem, bu serbestçe hareket ve dönüş sağlayan hayvanlar ölçüm haznesi ölçülü olmayan bir avantajı vardır. Bu yabancı bir ortam olduğu için, farelerin hala eğitilmiş ve gastrik boşaltımı üzerindeki stres etkilerini önlemek için test odaları HABITUATED gerekir. Genel olarak, biz ardışık gastrik boşalma testleri arasındaki intra-fare değişkenliği% 10&#39;dan az ise mide boşalmasını veriler güvenilir varsayıyorum. Bu rapor, farelerde 8,11,12 gastrik boşalma ölçümleri önceki raporların daha ayrıntılı bir açıklama ve sistemi ile sorun giderme sorunları hakkında ek bilgi içerir. Ana gaz değiştirme seviyelerini ölçmek için LGR izotop analizörü kullanılmasıdır. Biz bu çalışmada kullanılan analizörü 12 CO ölçer <sub&gt; 2, 13 CO 2 ve H 2 O konsantrasyonları her saniye. Çoklu giriş ünitesinde bilgisayar kontrollü vanalar otomatik fare odaları her 25 sn arasında dedektör akış geçiş. Bu nedenle 12 fareler anda okumalar arasında 5 dk ara ile analiz edilebilir. Bu veriler aynı zamanda dışarı verilen hava ve sonraki analiz elle örnekleme yoluyla elde edilebilir olduğunu belirtmek gerekir. Elle örnekleme veya başka bir aygıt kullanıyorsanız, okumalar yaklaşık 10 dk aralıklarla elde emin olun. Bizim sistem ve örnek toplama sıklığı duyarlılığı mide boşalmasını eğrilerin daha güvenilir, uygun kolay ve bu yüzden biz bu geliştirilmiş bir yöntem ile daha fazla tekrarlanabilir veri almak olduğunu bulduk demektir. Fareler fareler odasına onların alışma kaybetmek ve teknik problemleri algılama sys ile ortaya çıkan durumlarda, ayrılan süre içinde yemek yemek için başarısız olduğunda bu tekniğin büyük tuzaklar ortayamaktadır. Habitüasyon yemek ve kaybı yemeye Başarısızlık genellikle test için düzenli bir program olmasının kritik adım aşağıdaki değil bir sonucudur. 3 ardışık testler 7 gün veya daha az ayrılmış sonra, farelerde test HABITUATED ve yemek yemek olur. Fareler deney geri kalan kısmı için, en azından her 2 haftada bir kere test edilir ise bir kez habitüe, güvenilir veri elde edilir. Nedense fareler 3 hafta veya daha fazla test edilmemiştir, o bir hafta içinde iki eğitim oturumları genellikle habitüasyon sağlayacaktır. Hayvanlar taşıma personeli farelerin yeniden eğitim tavsiye edilir daha sonra değiştirmek ve fareler işleme halk tarafından güçlü kokulu sabun ve / veya parfüm kullanımı vazgeçirmek için özellikle önemlidir. Eğer Algılama sistemi ile zorluklar genellikle bir fare gibi küçük bir hayvan tarafından üretilen 13 CO 2 düşük seviyelerde nedeniyle vardır. Dedektör kalibre ve bu kızıl ötesi tabanlı sistemler gibi bazı dedektörler için, çok imp gerekirölçümler önce en az bir numune su miktarını azaltmak için ortant. Araştırmacının aynı fare 3 gün her seferinde daha sık mide boşalmasını çalışmak istediği sürece birkaç sınırlamalar bu tekniği vardır. Bu yüzden sık sık hızlı fare tavsiye edilmez ve düzenli olarak bu diyet kısıtlaması mide işlevini değiştirebilirsiniz. Tekniğe modifikasyonlar sıvı gastrik boşalmayı ölçmek için yapılmıştır ve bu yöntem için yararlı bir potansiyel bir uygulama olabilir. Sabit bir zaman süreci stres ile ilgili sorunlar ya da her testin sonunda hayvanı öldürmek için ihtiyacı nedeniyle de dahil olmak üzere çok daha fazla sınırlamalar sonra sintigrafi dahil veya ölçüm gastrik boşalma, ölçme diğer yöntemler içeriği korunur. Stres ölçüm sırasında test yemeği ya da hayvan kısıtlama gavaj içerir. Nefes testi ve avantajları fare serbestçe hareket eden ve anestezi uygulanmış olup olmadığınıya da herhangi bir şekilde uyuşturulmuş. Özetle, 13 C-oktanoik asit nefes testi, yaş ve tedavi ve bu veriler ile hastalığın ilerlemesi çalışma daha sonra aynı hayvanın diğer fizyolojik parametrelerde değişiklikler ve histolojik değerlendirme ile korele edilebilir sağlar. Diğer uygulamalar arasında, test de ilaçlar doğrudan hem de hastalık veya diğer müdahaleler nedeniyle mide boşalmasını değişiklikler gelişir hayvanlarda tedaviye yanıtı araştıran olarak mide boşalmasını değiştirebilir nasıl çalışma sağlar.

Bu yazıda farelerde mide boşalma non-invaziv ölçümü dahil teknik ve metodolojik hususlar anlatılmaktadır. Takip ederek protokolü burada açıklanan, araştırmacılar güvenilir ve tekrarlanabilir hastalığından dolayı gelişimi boşalma gastrik değişiklikleri takip edebilirsiniz, mide boşalımını farmakolojik ajanların etkilerini incelemek ve altta yatan hastalıkları veya kusurları 6,8 tedavisinde mide boşalma yanıtı izleyin 11,12. Önceki yayınlarda, 13 C uygulama oktanoik asit nefes testler, insanlarda ve hayvanlarda 3,8 gastrik boşalma ölçmek için yararlı bir yol olduğu gösterilmiştir. Bu çalışma ayrıntılı olarak açıklanmaktadır, 6-8 fazla güvenilir veri elde etmek için gerekli prosedürler diyabetli farelerde mide boşalma boylamsal bir çalışma için gerekli ay. Önceden yayınlanmış yöntemlere göre bu protokol izlenerek avantajları araştırmacı veri obtaine emin olmalarıdırd güvenilir ve tekrarlanabilir olacaktır. Buna ek olarak, toplama ve gaz numuneleri analiz için otomatik bir sistem burada açıklanan bir çalışmada eş zamanlı olarak takip edilebilir hayvanların sayısını artırır. Genel olarak, bu yazının amacı test etmek için farelerin alışma ve bu elde edilen sonuçlar değişkenlik azaltmak korumak anahtar faktörleri tespit etmektir. Mide boşalmasını in vivo ölçümü için, farelerin gecede oruç ve sabit hava akışı şeffaf plastik test odalarına koymak. Fareler tüpleri HABITUATED olsun sonra, bazal 2 seviyeleri belirlenmiş 13 CO ekshale ve hava akımı buna göre ayarlanır. Ardından, 13C-etiketli oktanoik asit ile karıştırılır yumurta sarısı oluşan bir test yemek yönetmek. Fareler oruç ve eğitimli olduğundan, genellikle 2 dakika içinde test yemeği yiyin. Yönetilen oktanoik asit bir mide absorbe değil ama duodenum ele alınacaktırd çevreleyen hava içinde 13 CO 2 &#39;lik bir zenginleşme elde yayımlanır ve nefes verirken 13 CO 2, içine karaciğerde metabolize alacak. Hava örnekleri belirlenen zaman aralıklarında toplanır ve karbon izotop analizci tarafından analiz edilir. Bütün bu süreçte hız sınırlayıcı adım mide boşalmasını ve CO 2 doğrudan etiketli yemek mide boşalımını karşılık 13 pulmoner atılımı olduğunu. <img src="/files/ftp_upload/50301/50301fig1.jpg" alt="Şekil 1" fo:content-width="6in" fo:src="/files/ftp_upload/50301/50301fig1highres.jpg"/> Şekil 1. Gastrik boşalma aparatın şematik. Gecelik açlık sonrası, fareler onları serbestçe hareket ve açmak için izin şeffaf odalarına yerleştirilir. Bir giriş tüpü taze ve sabit hava akını sağlayan ve bir çıkışı 13 C-to-12 ölçmek için izotop analizörü yol açarC oranı soluk verdi. Kamara da [13 C]-oktanoik asit içeren yiyecek teslimat için merkezi bir bağlantı noktası var.

<table border="1"><tbody><tr><td> ADI </td><td> ŞİRKET </td><td> CAT NUMARASI </td><td> YORUMLAR </td></tr><tr><td> Sabit bir hava besleme, akış kaynak yanı sıra kompozisyon </td><td> araştırma tesisi merkezi hava beslemesi </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Hava girişi, hava çıkışı, ve gıda yönetim açılış var 130 ml numune alma odası Hava beslemesi için plastik borular </td><td> In-house inşa </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Oktanoik asit </td><td> Cambridge izotop laboratuvarları (Andover, MA) </td><td> CLM-293-1 </td><td></td></tr><tr><td> Yumurta yemek hazırlamak için: <ul><li> küçük beher </li><li> 50 ml plastik tüp </li><li> Bunsen beki </li><li> yumurta </li><li> spatula </li></ul></td><td> Herhangi bir tedarikçi </td><td></td><td> Çalışınyumurta, besin içeriği ve lezzeti yemek yenmesi ve mide boşalmasını etkileyen beri yumurta tedarikçisi ile tutarlı olması </td></tr><tr><td> Karbon dioksit izotop analizörü </td><td> Los Gatos Research Inc (Mountain View, CA) </td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

assessment of gastric emptying in non-obese diabetic mice using a [13c]-octanoic acid breath test

Farelerde Mide boşalma çalışmaları en sık kullanılan teknikler hayvanlar ve yemek 1,2 postmortem kurtarma öldürülmesi gerektiğinden aynı hayvanda gastrik boşalma değişiklikleri takip etmek yetersizlik ile sınırlı kalmıştır. Bu yaklaşım, yaş ve hastalığın ilerlemesi ile mide boşalmasını değişiklikleri belirlemek için boylamsal çalışmalar önler. Yaygın olarak kullanılan [13C]-oktanoik asit için insanlarda 3 üre nefes testi ve fareler 4-6 Sıçanların 7 kullanılmak üzere modifiye edilmiş ve daha önce bu deney ilaçlara tepki olarak ve sırasında güvenilir ve gastrik boşaltımı değişikliklerine duyarlı olduğunu göstermiştir olmuştur diyabetik hastalık progresyonu 8. Bu video sunumu bu modifiye test prensibi ve pratik uygulama açıklanmıştır. Önceki çalışmada olduğu gibi LTJ NOD fare, tip 1 diyabet 9 olduğu bir örnek kullanılmaktadır. Bu farelerin bir oranda diyabet komplikasyonu, gastroparezi belirtileri gelişires mide 10 mekanik tıkanma olmadan gecikmiş mide boşalması ile karakterize. Bu kağıt testi yemek hazırlamak ve 4 saat gastrik boşalma veri ve nasıl elde edilen veriler analiz edinme, test için fareler eğitmek için nasıl kullanılacağını gösterir. Bu çalışmada kullanılan karbon izotop analiz cihazı aynı zamanda 12 fareler için ikinci hava örneklerinin otomatik numune için uygundur. Bu teknik, diyabet veya diğer uzun süreli hastalığı olan farelerin büyük gruplar mide boşalma boyuna takip sağlar.

Farklı farelerden elde edilen üç set bir temsilci veriler Şekil 2 &#39;de gösterilmiştir. Siyah grafisi normal mide boşalmasını bir fareden veri noktalarını temsil eder. Bu, zamanın bir fonksiyonu olarak ifade saat başına uygulanan dozun bir yüzdesi olarak ifade edilen hava dışarı verilen geri kazanılır 13 C fraksiyonu göstermektedir. Mavi eğri 168 dak &#39;lık bir T yarı değerine sahip bir Gecikmiş mide boşaltımı ile bir fare dan 40 dk ve kırmızı eğri bir T yarı değer ile boşaltma hızlandırılmış bir mide ile bir fare alınmıştır. Olarak bizim laboratuvar 7, bir non-diyabetik NOD fare yaş için normal mide boşalma zamanı bir önceki çalışmada kurulan gri kutu ile temsil olarak 62 131 dk 9-15 hafta arasında değişmektedir. Veri noktaları daha sonra aşağıdaki denklem 8 ile bir non-lineer regresyon eğrisine göre monte edilmiştir: b e-ct nda y = Y yüzdesi olduğu durumlarda <sup&gt; 13 C her nefes vs zaman eğrisi tahmin regresyon sabitleri saat (t) ve a, b ve c her nefeste iyileşti. Boşalma zamanı (T 1/2) Bir ters gama fonksiyonu kullanarak bir sayısal entegrasyon prosedürü hesaplanır. Biz yaklaşık% 10 bir biyolojik intra-fare değişkenliği ile birkaç bin çalışmalardan sonuçlar elde ettik. <img src="/files/ftp_upload/50301/50301fig2.jpg" alt="Şekil 2," fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/50301/50301fig2highres.jpg"/> Şekil 2. Mide boşalmasını üç farklı normal olan farelerde (siyah eğri), gecikmiş (kırmızı eğri) ve hızlandırılmış (mavi eğri) Temsilcisi gastrik boşalma veri. Gri kutu, normal değerlerini vurgulamaktadır. Non-lineer regresyon eğrileri denklem kutu içinde gösterilmiştir.

Watch this Scientific Journal Video about Assessment of Gastric Emptying in Non-obese Diabetic Mice Using a [13C]-octanoic Acid Breath Test at JoVE.com

Assessment of Gastric Emptying in Non-obese Diabetic Mice Using a [13C]-octanoic Acid Breath Test

Bir non-invaziv ile mide boşalma belirlenmesi [<sup&gt; 13</sup&gt; C]-oktanoik dişi NOD LTJ farelerde izleme gastroparezi için asit nefes testi.

Bir Kullanarak Non-obez Diyabetik Farelerde Mide boşaltılması Değerlendirilmesi [<sup&gt; 13</sup&gt; C]-oktanoik asit Nefes Testi

Gastric emptying studies in mice have been limited by the inability to follow gastric emptying changes in the same animal since the most commonly used ...

assessment-gastric-emptying-non-obese-diabetic-mice-using-13c

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Medicine

Assessment of Gastric Emptying in Non-obese Diabetic Mice Using a [13C]-octanoic Acid Breath Test

13.5K Görüntüleme.  Mayo Clinic. Bir non-invaziv ile mide boşalma belirlenmesi [ 13 C]-oktanoik dişi NOD LTJ farelerde izleme gastroparezi için asit nefes testi.

Video: Assessment of Gastric Emptying in Non-obese Diabetic Mice Using a [13C]-octanoic Acid Breath Test

Making Sense of Listening: The IMAP Test Battery

The ability to hear is only the first step towards making sense of the range of information contained in an auditory signal. Of equal importance are the abilities to extract and use the information encoded in the auditory signal. We refer to these as listening skills (or auditory processing AP). Deficits in these skills are associated with delayed language and literacy development, though the nature of the relevant deficits and their causal connection with these delays is hotly debated.
When a child is referred to a health professional with normal hearing and unexplained difficulties in listening, or associated delays in language or literacy development, they should ideally be assessed with a combination of psychoacoustic (AP) tests, suitable for children and for use in a clinic, together with cognitive tests to measure attention, working memory, IQ, and language skills. Such a detailed examination needs to be relatively short and within the technical capability of any suitably qualified professional. Current tests for the presence of AP deficits tend to be poorly constructed and inadequately validated within the normal population. They have little or no reference to the presenting symptoms of the child, and typically include a linguistic component. Poor performance may thus reflect problems with language rather than with AP. To assist in the assessment of children with listening difficulties, pediatric audiologists need a single, standardized child-appropriate test battery based on the use of language-free stimuli.
We present the IMAP test battery which was developed at the MRC Institute of Hearing Research to supplement tests currently used to investigate cases of suspected AP deficits. IMAP assesses a range of relevant auditory and cognitive skills and takes about one hour to complete. It has been standardized in 1500 normally-hearing children from across the UK, aged 6-11 years. Since its development, it has been successfully used in a number of large scale studies both in the UK and the USA. IMAP provides measures for separating out sensory from cognitive contributions to hearing. It further limits confounds due to procedural effects by presenting tests in a child-friendly game-format. Stimulus-generation, management of test protocols and control of test presentation is mediated by the IHR-STAR software platform. This provides a standardized methodology for a range of applications and ensures replicable procedures across testers. IHR-STAR provides a flexible, user-programmable environment that currently has additional applications for hearing screening, mapping cochlear implant electrodes, and academic research or teaching.

A test battery (IMAP) for performing an in-depth assessment of auditory and cognitive abilities contributing to listening skills is described. It is quick to administer, child-friendly and free from linguistic confounds. Stimulus generation and protocol management are controlled via a software platform (IHR-STAR) to ensure replicable procedures.

Dinlemede Making Sense IMAP Test Batarya:

The ability to hear is only the first step towards making sense of the range of information contained in an auditory signal. Of equal importance are the ...

Tıp

Roux-en-Y Gastric Bypass Operation in Rats

Currently, the most effective therapy for the treatment of morbid obesity to induce significant and maintained body weight loss with a proven mortality benefit is bariatric surgery1,2. Consequently, there has been a steady rise in the number of bariatric operations done worldwide in recent years with the Roux-en-Y gastric bypass (gastric bypass) being the most commonly performed operation3. Against this background, it is important to understand the physiological mechanisms by which gastric bypass induces and maintains body weight loss. These mechanisms are yet not fully understood, but may include reduced hunger and increased satiation4,5, increased energy expenditure6,7, altered preference for food high in fat and sugar8,9, altered salt and water handling of the kidney10 as well as alterations in gut microbiota11. Such changes seen after gastric bypass may at least partly stem from how the surgery alters the hormonal milieu because gastric bypass increases the postprandial release of peptide-YY (PYY) and glucagon-like-peptide-1 (GLP-1), hormones that are released by the gut in the presence of nutrients and that reduce eating12.
During the last two decades numerous studies using rats have been carried out to further investigate physiological changes after gastric bypass. The gastric bypass rat model has proven to be a valuable experimental tool not least as it closely mimics the time profile and magnitude of human weight loss, but also allows researchers to control and manipulate critical anatomic and physiologic factors including the use of appropriate controls. Consequently, there is a wide array of rat gastric bypass models available in the literature reviewed elsewhere in more detail 13-15. The description of the exact surgical technique of these models varies widely and differs e.g. in terms of pouch size, limb lengths, and the preservation of the vagal nerve. If reported, mortality rates seem to range from 0 to 35%15. Furthermore, surgery has been carried out almost exclusively in male rats of different strains and ages. Pre- and postoperative diets also varied significantly.
Technical and experimental variations in published gastric bypass rat models complicate the comparison and identification of potential physiological mechanisms involved in gastric bypass. There is no clear evidence that any of these models is superior, but there is an emerging need for standardization of the procedure to achieve consistent and comparable data. This article therefore aims to summarize and discuss technical and experimental details of our previously validated and published gastric bypass rat model.

Numerous studies using gastric bypass rat models have been recently conducted to uncover the underlying physiological mechanisms of Roux-en-Y gastric bypass operations. This article aims to demonstrate and discuss the technical and experimental details of our published gastric bypass rat model to understand advantages and limitations of this experimental tool.

Sıçanlarda Roux-en-Y Gastrik Bypass Operasyonu

Currently, the most effective therapy for the treatment of morbid obesity to induce significant and maintained body weight loss with a proven mortality ...

Fast and Accurate Exhaled Breath Ammonia Measurement

This exhaled breath ammonia method uses a fast and highly sensitive spectroscopic method known as quartz enhanced photoacoustic spectroscopy (QEPAS) that uses a quantum cascade based laser. The monitor is coupled to a sampler that measures mouth pressure and carbon dioxide. The system is temperature controlled and specifically designed to address the reactivity of this compound. The sampler provides immediate feedback to the subject and the technician on the quality of the breath effort. Together with the quick response time of the monitor, this system is capable of accurately measuring exhaled breath ammonia representative of deep lung systemic levels. 
Because the system is easy to use and produces real time results, it has enabled experiments to identify factors that influence measurements. For example, mouth rinse and oral pH reproducibly and significantly affect results and therefore must be controlled. Temperature and mode of breathing are other examples. As our understanding of these factors evolves, error is reduced, and clinical studies become more meaningful. This system is very reliable and individual measurements are inexpensive. 
The sampler is relatively inexpensive and quite portable, but the monitor is neither. This limits options for some clinical studies and provides rational for future innovations.

Ammonia is an important physiologic metabolite relevant to various disease and wellness states. It is also a difficult molecule to measure in breath, which demands particular precautions be taken to obtain accurate results. Not all factors influencing ammonia are known, but progress can be difficult without accounting for these factors.

Hızlı ve Doğru Üfürükle Amonyak Ölçüm

This exhaled breath ammonia method uses a fast and highly sensitive spectroscopic method known as quartz enhanced photoacoustic spectroscopy (QEPAS) that ...

Open Tracheostomy Gastric Acid Aspiration Murine Model of Acute Lung Injury Results in Maximal Acute Nonlethal Lung Injury

Acid pneumonitis is a major cause of sterile acute lung injury (ALI) in humans. Acid pneumonitis spans the clinical spectrum from asymptomatic to acute respiratory distress syndrome (ARDS), characterized by neutrophilic alveolitis, and injury to both alveolar epithelium and vascular endothelium. Clinically, ARDS is defined by acute onset of hypoxemia, bilateral patchy pulmonary infiltrates and non-cardiogenic pulmonary edema. Human studies have provided us with valuable information about the physiological and inflammatory changes in the lung caused by ARDS, which has led to various hypotheses about the underling mechanisms. Unfortunately, difficulties determining the etiology of ARDS, as well as a wide range of pathophysiology have resulted in a lack of critical information that could be useful in developing therapeutic strategies.
Translational animal models are valuable when their pathogenesis and pathophysiology accurately reproduce a concept proven in both in vitro and clinical settings. Although large animal models (e.g., sheep) share characteristics of the anatomy of human trachea-bronchial tree, murine models provide a host of other advantages including: low cost; short reproductive cycle lending itself to greater data acquisition; a well understood immunologic system; and a well characterized genome leading to the availability of a variety of gene deletion and transgenic strains. A robust model of low pH induced ARDS requires a murine ALI that targets mainly the alveolar epithelium, secondarily the vascular endothelium, as well as the small airways leading to the alveoli. Furthermore, a reproducible injury with wide differences between different injurious and non-injurious insults is important.
The murine gastric acid aspiration model presented here using hydrochloric acid employs an open tracheostomy and recreates a pathogenic scenario that reproduces the low pH pneumonitis injury in humans. Additionally, this model can be used to examine interaction of a low pH insult with other pulmonary injurious entities (e.g., food particles, pathogenic bacteria).

This protocol induces acute lung injury in a mouse that has close fidelity to the pathogenesis of acid pneumonitis observed in humans. We generate a maximal acute nonlethal low pH lung injury and account for differences in rodent-human anatomic respiratory structure using an open tracheostomy coupled with circumferential pressure release.

Akut Akciğer Hasarı Açık Trakeostomi Gastrik Asit Aspirasyon Fare Modeli Maksimal Akut Ölümcül olmayan Akciğer Hasarı Sonuçlar

Acid pneumonitis is a major cause of sterile acute lung injury (ALI) in humans. Acid pneumonitis spans the clinical spectrum from asymptomatic to acute ...

Techniques of Sleeve Gastrectomy and Modified Roux-en-Y Gastric Bypass in Mice

Obesity is a major public health issue, with a prevalence of 4 to 28% for men and 6.2 to 36.5% for women in Europe (from 2003 to 2008). Morbid obesity is frequently associated with metabolic complications, such as type 2 diabetes, hypertension, and dyslipidemia, reducing life expectancy and quality. In the absence of any effective noninvasive treatments, bariatric surgery is a valuable therapeutic option for patients with morbid obesity (body mass index (BMI) &#62;40 kg/m2), leading to long-term, sustained weight loss and improvements in metabolic complications. However, the underlying cellular and molecular mechanisms sustaining the beneficial effects of bariatric surgery are not yet fully understood. Due to the numerous genetically-modified strains available, the mouse model is the most convenient animal model to explore the molecular mechanisms behind the pleiotropic beneficial effects of bariatric surgeries. Here, we detailed the optimized healthcare methods and surgical protocols in mice for the two most widely-used bariatric surgeries: the sleeve gastrectomy and the modified Roux-en-Y gastric bypass. Deciphering the molecular mechanisms underlying the therapeutic effects of bariatric surgeries offers the promise of identifying new therapeutics targets.

Bariatric surgery is the most efficient way to reduce body weight and the deadly metabolic complications (diabetes, obesity, and dyslipidemia) frequently associated with morbid obesity. Mouse models of bariatric surgery represent a unique asset for deciphering molecular mechanisms behind the beneficial effects of these surgeries on diabetes, hypertension, and dyslipidemia.

Sleeve gastrektomi Teknikleri ve Farelerde Roux-en-Y Gastrik Bypass Modifiye

Obesity is a major public health issue, with a prevalence of 4 to 28% for men and 6.2 to 36.5% for women in Europe (from 2003 to 2008). Morbid obesity is ...

A Blood-based Test for the Detection of ROS1 and RET Fusion Transcripts from Circulating Ribonucleic Acid Using Digital Polymerase Chain Reaction

We have developed novel methods for the isolation and characterization of tumor-derived circulating ribonucleic acid (cRNA) for blood-based liquid biopsy. Robust detection of cRNA recovered from blood represents a solution to a critical unmet need in clinical diagnostics. The test begins with the collection of whole blood into blood collection tubes containing preservatives that stabilize cRNA. Cell-free, exosomal, and platelet-associated RNA is isolated from plasma in this test system. The cRNA is reverse transcribed to complementary DNA (cDNA) and amplified using digital polymerase chain reaction (dPCR). Samples are evaluated for both the target biomarker as well as a control gene. Test validation included limit of detection, accuracy, and robustness studies with analytic samples. The method developed as a result of these studies reproducibly detect multiple fusion variants for ROS1 (C-Ros proto-oncogene 1; 8 variants) and RET (rearranged during transfection proto-oncogene; 8 variants). The sample processing workflow has been optimized so that test results can consistently be generated within 72 hours of sample receipt.

Detection of circulating ribonucleic acid (cRNA) from blood is an unmet need in clinical diagnostics. Here we describe methods that characterize cRNA from non-small cell lung cancer patients using sensitive and specific digital polymerase chain reaction. The tests meet design requirements to detect fusion variants within 72 hours.

Kan tabanlı Test ROS1 tespiti için ve füzyon transkriptleri ribonükleik asit veya dijital Polimeraz zincir reaksiyonu kullanarak dolaşan gelen RET

We have developed novel methods for the isolation and characterization of tumor-derived circulating ribonucleic acid (cRNA) for blood-based liquid biopsy. ...

Protocol to Create Chronic Wounds in Diabetic Mice

Chronic wounds develop as a result of defective regulation in one or more complex cellular and molecular processes involved in proper healing. They impact ~6.5M people and cost ~$40B/year in the US alone. Although a significant effort has been invested in understanding how chronic wounds develop in humans, fundamental questions remain unanswered. Recently, we developed a novel mouse model for diabetic chronic wounds that have many characteristics of human chronic wounds. Using db/db-/- mice, we can generate chronic wounds by inducing high levels of oxidative stress (OS) in the wound tissue immediately after wounding, using a one-time treatment with inhibitors specific to the antioxidant enzymes catalase and glutathione peroxidase. These wounds have high levels of OS, develop biofilm naturally, become fully chronic within 20 days after treatment and can remain open more for more than 60 days. This novel model has many features of diabetic chronic wounds in humans and therefore can contribute significantly to advancing fundamental understanding of how wounds become chronic. This is a major breakthrough because chronic wounds in humans cause significant pain and distress to patients and result in amputation if unresolved. Moreover, these wounds are very expensive and time-consuming to treat, and lead to significant loss of personal income to patients. Advancements in this field of study through the use of our chronic wound model can significantly improve health care for millions who suffer under this debilitating condition. In this protocol, we describe in great detail the procedure to cause acute wounds to become chronic, which has not been done before.

Chronic wounds are developed from acute wounds on a diabetic mouse model by inducing high levels of oxidative stress after a full-thickness cutaneous wound. The wound is treated with inhibitors for catalase and glutathione peroxidase, resulting in impaired healing and biofilm development by bacteria present in the skin microbiome.

Diyabetik Farelerde Kronik Yaralar Oluşturma Protokolü

Chronic wounds develop as a result of defective regulation in one or more complex cellular and molecular processes involved in proper healing. They impact ...

Non-invasive Assessment of Dorsiflexor Muscle Function in Mice

Assessment of skeletal muscle contractile function is an important measurement for both clinical and research purposes. Numerous conditions can negatively affect skeletal muscle. This can result in a loss of muscle mass (atrophy) and/or loss of muscle quality (reduced force per unit of muscle mass), both of which are prevalent in chronic disease, muscle-specific disease, immobilization, and aging (sarcopenia). Skeletal muscle function in animals can be evaluated by a range of different tests. All tests have limitations related to the physiological testing environment, and the selection of a specific test often depends on the nature of the experiments. Here, we describe an in vivo, non-invasive technique involving a helpful and easy assessment of force frequency-curve (FFC) in mice that can be performed on the same animal over time. This permits monitoring of disease progression and/or efficacy&#160;of a potential therapeutic treatment.

Measurement of rodent skeletal muscle contractile function is a useful tool that can be used to track disease progression as well as efficacy of therapeutic intervention. We describe here the non-invasive, in vivo assessment of the dorsiflexor muscles that can be repeated over time in the same mouse.

Non-invaziv Dorsiflexor kas fonksiyonu farelerde değerlendirilmesi

Assessment of skeletal muscle contractile function is an important measurement for both clinical and research purposes. Numerous conditions can negatively ...

Assessment and Characterization of Hyaloid Vessels in Mice

In the eye, the embryonic hyaloid vessels nourish the developing lens and retina and regress when the retinal vessels develop. Persistent or failed regression of hyaloid vessels can be seen in diseases such as persistent hyperplastic primary vitreous (PHPV), leading to an obstructed light path and impaired visual function. Understanding the mechanisms underlying the hyaloid vessel regression may lead to new molecular insights into the vascular regression process and potential new ways to manage diseases with persistent hyaloid vessels. Here we describe the procedures for imaging hyaloid in live mice with optical coherence tomography (OCT) and fundus fluorescein angiography (FFA) and a detailed technical protocol of isolating and flat-mounting hyaloid ex vivo for quantitative analysis. Low-density lipoprotein receptor-related protein 5 (LRP5) knockout mice were used as an experimental model of persistent hyaloid vessels, to illustrate the techniques. Together, these techniques may facilitate a thorough assessment of hyaloid vessels as an experimental model of vascular regression and studies on the mechanism of persistent hyaloid vessels.

This protocol describes both in vivo and ex vivo methods to fully visualize and characterize hyaloid vessels, a model of vascular regression in mouse eyes, using optical coherence tomography and fundus fluorescein angiography for the live imaging and ex vivo isolation and subsequent flat mount of hyaloid for quantitative analysis.

Farelerde hyaloid damarlarının değerlendirilmesi ve karakterize edilmesi

In the eye, the embryonic hyaloid vessels nourish the developing lens and retina and regress when the retinal vessels develop. Persistent or failed ...

Using a Chemical Biopsy for Graft Quality Assessment

Kidney transplantation is a life-saving treatment for a large number of people with end-stage renal dysfunction worldwide. The procedure is associated with an increased survival rate and greater quality of patient&#8217;s life when compared to conventional dialysis. Regrettably, transplantology suffers from a lack of reliable methods for organ quality assessment. Standard diagnostic techniques are limited to macroscopic appearance inspection or invasive tissue biopsy, which do not provide comprehensive information about the graft. The proposed protocol aims to introduce solid phase microextraction (SPME) as an ideal analytical method for comprehensive metabolomics and lipidomic analysis of all low molecular compounds present in kidneys allocated for transplantation. The small size of the SPME probe enables performance of a chemical biopsy, which enables extraction of metabolites directly from the organ without any tissue collection. The minimum invasiveness of the method permits execution of multiple analyses over time: directly after organ harvesting, during its preservation, and immediately after revascularization at the recipient&#8217;s body. It is hypothesized that the combination of this novel sampling method with a high-resolution mass spectrometer will allow for discrimination of a set of characteristic compounds that could serve as biological markers of graft quality and indicators of possible development of organ dysfunction.

The protocol presents utilization of the chemical biopsy approach followed by comprehensive metabolomic and lipidomic analysis for quality assessment of kidney grafts allocated for transplantation.

Greft Kalite Değerlendirmesi için Kimyasal Biyopsi Kullanımı

Kidney transplantation is a life-saving treatment for a large number of people with end-stage renal dysfunction worldwide. The procedure is associated ...