Çalışma desteği ile Schulze Aile Vakfı (için A.S.B.) tarafından gerçekleştirildi.

Tüm yöntem tanımlamak burada kurumsal hayvan bakım ve kullanım Komitesi (IACUC) Mayo Clinic tarafından onaylanmış olan.
 1. titizlik Önkoşullar ve tekrarlanabilirlik uygulamaların her zaman ve herhangi bir hayvan önce IACUC (ya da benzer Komitesi) tarafından iç onay almak iyi laboratuar ulusal standartlara, rigor tasarım sağlamak üzere <ol><li> deneyler karışmakla. 
	Not: Bu protokol bir klinik olarak sadık yaklaşım korumak için tasarlanmıştır. Böylece, malzeme, aletleri ve tekniklerin bir moda yüksek klinik standartlarına insanlarda aynı açıklanmıştır. Örneğin, sıkı steril teknik takip ve zaman aşımına uğramış malzemeleri asla kullanılmalıdır.</li>
	Bu metodoloji tekrarlanabilirlik deneysel bir ortamda desteklemek için <li>iç standart işletim prosedürleri geliştirmek ve kontrol için domuz doğurmak, ağırlık, cinsiyet ve yaş ayrı kohort arasında değişkenlik. 
	Not: Bu protokol tasarımını 38-53 kg ağırlığında domuz kullan seçeneğine göre</li>
</ol> 2. Pre-operative hayvan bakım <ol><li>profilaktik kas içi (IM) ceftiofur, 5 mg/kg, 1 gün önce yordamı verilen yönetmek.</li>
	<li>Hızlı katı gıda hayvanlar ve hayvanlar kısıtlamak kozmetik tedaviler, Yani yağ banyoları, yordamı önce 12 h.</li>
	<li>Neden genel anestezi kullanarak IM tiletamine ve zolazepam, Telazol 5 mg/kg, ve IM xylazine, 2 mg/kg verilen olarak verilen yordam, 1 h içinde</li>
	<li>Bir kez bağlı, 0,18 mg/kg. verilen subkutan (SC) sürekli buprenorfin release (SR), yönetmek</li>
	<li>Bir kulak-ven kateteri yerleştirin ve endotrakeal tüp yerleştirmek için hızlı entübasyon gerçekleştirmek.</li>
	<li>Nabız oksijenlenme ve kalp hızı izlemek için dil işleve izleme ile nabız oksimetre takın.</li>
	<li>Hayvan yüzükoyun sígara yerleştirin ve bir elektrik kesme makinesi kullanarak patolojisi üzerinde cilt klibi. Orta hat sagittal düzlem orta hat koronal uçağa ve boyuna sakral apex skapular dikenleri için uzanan bir büyük, ikili alana saç kırpın. Saç ve serbest yüzer deri kaldırmak için yapışkan bant kullanın.</li>
	<li>Sıcak su ve sabun ile kırpılan alanı ilâ 3 kere fırçalayın ve kuru bir hav bırakmayan havlu kullanarak cilt.</li>
	<li>Bir cerrahi işaretleme kalemi Mark ikili anatomik yerler. Son kaburga, iliyak armalar, spinöz süreçleri ve enine işlemleri işaretlemek. 
	Not: son kaburga, iliyak armalar ve enine süreçleri işaretleyerek, lomber onun üstün, alt ve yan bölümlere sırasıyla kesin. Bu protokol Kılavuzu erişim ve herhangi bir bel DRG ilgi enjeksiyon için dizayn edilmiştir. Başvuru için üstün iliyak armalar L3 veya L4 vertebra düzeyi ile hizalamak.</li>
	<li>Operatif Süiti taşınmaya sıcak bir battaniye ile hayvan kapak.</li>
</ol> 3. Operatif süitte konumlandırma <ol><li>yavaşça Asansör ve değiştirilmiş bir büyük insancıl hayvan hayvan eğilimli pozisyona sling ile yastıklı karın diyafram. 
	Not: Karın diyafram abdominal basınç azalma omurga insan ameliyat sırasında kullanılan Wilson çerçeveye benzer sağlar. Buna karşılık, bu spinal kan damarları intraoperatif kanama azaltır. Bacaklar periferik sinirleri sıkışma hayvan koruyan yastıklı açıklıklar üzerinden durmasýna için izin çünkü sling avantajlıdır. Askı çerçeve metalden yapılmış çünkü ancak, bu elektrik kısa devre ve yanlışlıkla hayvan yanık önlemek için yalıtım ile sıfır. Bir battaniye rulo hayvan büyüklüğüne bağlı olarak rahat bir pozisyonda baş ve boyun konumlandırmak için yerleştirilebilir.</li>
	% 1-3 kullanarak <li>koru genel anestezi etkisi titre (ıh) isoflurane inhale. Gözleri oftalmik merhem ile nemlendirin ve nazikçe onları kapalı teyp.</li>
	<li>Hayati işareti belge sıcaklık, kan basıncı, nabız ve oksijen izlemek için yer satırları. Capnography tarafından havalandırma izlemek.</li>
	<li>Bir yapıştırıcı, tek kullanımlık koter dağıtıcı elektrot sol veya sağ kürek kemiği üzerinde yerleştirin.</li>
	<li>Yönetici ısındı Lactated zil &#39; bakım sıvı kulak-damar kateter aracılığıyla olarak s. 5-10 mL/kg oranında sıvıları vermek/h.</li>
	<li>Zorla-hava ısınma aygıt göğüs ve servikal bölgede yerleştirin ve son kaburga kapsayan kaçının.</li>
</ol> 4. Steril hazırlık operatif alanın sol taraflı enjeksiyon için Not: Şu andan itibaren sıkı steril biçimde devam.
<ol><li>Hazırla % 0.7 iyot povacrylex ve % 74'ü izopropil alkol üreticiye göre geniş uygulama ile lomber başlayan örten deri &#39; s yönergeleri. Kılavuzu iğne daha sonra steril bir şekilde yerleştirilmesini sağlamak için antisepsis orta hat koronal uçak işaretli enine işlemleri geçmiş doğru genişleterek tarafa uygulanması planlanan enjeksiyon lateralize.</li>
	<li>İşaretli bel spinöz süreçleri boyunca orta hat bitti planlanan kesi sitesi belirlemenizi dikdörtgen moda tek kullanımlık cerrahi havlu yerleştirin.</li>
	<li>Bir yapıştırıcı antimikrobiyal deşmek Uygula operatif havlu asmak ve cildin maruz. Perdeler yerde Klamp ve operatif alan perdelik uçurumdan genişletmek.</li>
	<li>Operatif alan ve izleme teknisyen arasında başı olarak askı Polonyalılar için dikey bir örtüsü güvenli.</li>
	Emme ve elektrokoterizasyon steril örtüler sıkma tarafından ameliyat alanı içinde <li>güvenli hatları. Tüpler ve teller ücretsiz uçları dışında steril alan geçmek.</li>
</ol> 5. Cilt kesi ve Subperiosteal diseksiyon <ol><li>bel spinöz süreçleri orta çizgi boyunca muayene et ve 3 ardışık vertebra düzeyi belirlemek.</li>
	<li>Bir 8-12 cm sagittal Ensizyon deşmek örtüsü spinöz işlemleri doğrudan arka üzerinden açmak için #15 neşter kullanın. Gazlı bez tampon ve monopolar elektrokoterizasyon kullanarak hemostaz korumak. 
	Not: Bu paraspinal kas kanama sınırlar, çünkü belgili tanımlık kesme anterior yönde ilerledikçe orta hat değil Sapmakta özen gösterilmelidir. Spinöz işlemler için periyodik palpasyonla ilerleme kolaylaştırır. Kendi kendine Weitlaner, Meyerding veya Gelpi traktör istinat yerleştirilen olabilir ve o diseksiyon kolaylaştırmak için gerektiği gibi yeniden konumlandırılmış. Emme görünürlük sağlamak için kullanılır.</li>
	<li>Subkutan doku ve yağ thoracolumbar fasya ulaşılana kadar monopolar elektrokoterizasyon kullanarak incelemek. Spinöz süreçleri thoracolumbar fasya derin muayene et ve fasya supraspinous bağ spinöz süreçler arasında yayılan ortaya çıkarmak için orta çizgi boyunca kesti. 
	Not: Thoracolumbar fasya bir eğik, medial yönde yanal interweaves bağ dokusu inanmayarak ile organize, Aponevrotik kılıf tanımlanır. Bu noktada, belgili tanımlık kesme 3 spinöz süreçleri diseksiyon alan Merkezi içinde ortaya hizalanmış ortasındaki spinöz proses ile tamamen görünür olmasını sağlamak için her iki yönde üstün ya da daha aşağı uzamış.</li>
	<li>#15 bıçak 2 mm derin parasagittal kesi supraspinous bağ aracılığıyla her spinöz proses için posterior eklemenizi sağlar. Spinöz proses ve arka yüzey boyunca sol üçüncü her kesi yerleştirin.</li>
	<li>Yavaşça supraspinous bağ her Inc boyunca her düzeyde yayın5 mm daha özgür Asansör kullanarak ision.</li>
	<li>Subperiosteal uçak tanımlamak ve bu düzlemde her spinöz proses yanal yüzeyinin içinde incelemek.</li>
	<li>Subperiosteal diseksiyon gerçekleştirmek yumuşak olduğundan emin olmak için paralel bir şekilde her spinöz proses hatta diseksiyon sağlanır.</li>
	<li>Paraspinal kas eki subperiosteal diseksiyon ile uyum içinde monopolar elektrokoterizasyon kullanarak interspinous alanlarda boyunca deşmek.</li>
	<li>Lamina her düzeyde tanımlamak ve subperiosteal diseksiyon yanal 3 maruz vertebra bağlanmak 2 zygapophyseal eklem yanal kenarlığını ulaşmak için ve lamina pars denilen eklem arasında yanal sınırına ulaşmak için devam kurtardı. 
	Not: Pars kurtardı neyin DRG bulunduğu intervertebral deliği arka sınır olduğunu. Bazen, küçük bir damar lamina arka yüzeyinde bulunan bir deliği kaynaklanmaktadır. Bu damarlar subperiosteal diseksiyon sırasında rüptürü eğilimi var. Hemostazın kolayca İki kutuplu elektrokoterizasyon ve deliği için uygulanan kemik balmumu kullanarak elde.</li>
</ol> 6. Tek düzeyli Laminotomy <ol><li>ortasındaki lamina arasında yer alan ve 2 zygapophyseal eklem medial olarak laminotomy hedefi tanımla.</li>
	<li>Lamina Kaudal zygapophyseal ortak bir noktasına bitişik alt artiküler sürecine sadece medial inferior kenarını için iz.</li>
	<li>Caudalmost kenarına lamina ve merkezi kanal arasında geçiş muayene et için 5 mm daha özgür Asansör veya küret kullanın. 
	Not: Bu dural kese ve omurilik başvuracağım gibi palpating enstrüman ön zorlamamak için bakım alınır. Not domuz omurilik lomber 18 genişletir. İntervertebral disk rongeur palpasyonla kolaylaştırmak için bu alan örten ek yumuşak doku kaldırmak için kullanılabilir.</li>
	Kemik piece-wise bir biçimde çıkarmak için <li>bir 2 mm kadar-ısırma, 45 derece Kerrison rongeur kullanın. Kemik spinöz proses bir seviye sadece Transpediküler Kaudal yüzeye Kaudal Superior için taban boyunca kaldırmak ve yanal dışarı onun tam ölçüde.</li>
	<li>Kullanımı kemik kaldırılması ile yardımcı olmak için kemik rongeurs açılı. Laminotomy büyük ölçüde tamamlanıncaya kadar yerde lamina bağlı alt artiküler işlem bırakın.</li>
	<li>Alt artiküler işleminin yalnızca zygapophyseal ek kapsül tarafından serbestçe hareket eden ve ekli olduğunu doğrulayın. #15 veya #11 bıçak kullanarak kapsül deşmek.</li>
	<li>Piece-wise bir biçimde alt artiküler işlemi kaldırmak ama bitişik üstün artiküler işleminin olduğu gibi bırakma. 
	Not: laminotomy tamamlandı olarak hemostaz bipolar elektrokoterizasyon ile gerçekleştirilir. Monopolar elektrokoterizasyon sinirsel yapıları yakınlığı nedeniyle kullanılır. Kemik balmumu maruz kemikten kanama siteleri boyunca yerleştirilebilir ve absorbe jelatin sünger yumuşak doku yakınındaki hemostaz elde etmek için kullanılabilir. Cottonoid fitil Periton sıvısı ve kan diseksiyon uzak için yararlı bir araçtır.</li>
</ol> 7. DRG diseksiyon <ol><li>boşaltın piece-wise bir moda epidural yağ yüzeysel gelen derin hemen başlayan ve yanal devam için. Nazik diseksiyon bipolar forseps ve vakum ile 6-10 Fransız Frazier emme ipuçlarını kullanarak tarafından yağ çıkarmak. 
	Not: Büyüteç büyütme veya diseksiyon mikroskop kullanımı güvenli bir şekilde epidural yağ tahliye ve epidural Venöz pleksus İki kutuplu elektrokoterizasyon kullanarak titiz hemostaz elde etmek için gerekli ayrıntı düzeyini sağlamada yararlıdır.</li>
	<li>Bir yönde superoinferior, Cilt kesi eksenine paralel çalışan orta çizgi boyunca dural kese tanımlayın. Dural kese-ebilmek var olmak seen dural sinir kök kol çıkmasına kadar dural kese boyunca epidural yağ çıkarmak.</li>
	<li>İz dural kol yanal ve kasılır tarafından epidural yağ tahliye kadar DRG büyütmek için görülüyor. 
	Not: oval şekil ve sarı turuncu renk DRG tanımlayın. Orta lomber omurga, DRG genellikle 4-6 mm boyutunda, medial lateral yönüne içinde en uzun ve bulunduğu doğrudan aşağı veya 2-3 mm onun ilgili Transpediküler medial.. Bir künt, dik açılı sinir kanca yavaşça Transpediküler için muayene et için kullanılabilir.</li>
	<li>Tahliye epidural yağ yanal, DRG kadar bitişik omurilik biyopsisi görülür. 
	Not: durotomy ortaya çıkarsa, 6-0 naylon dikiş ve pürüzsüz mikro iğne sürücü içinde basit bir çalışan dikiş kullanarak su geçirmez kapatma tarafından tamir.</li>
</ol> 8. DRG enjeksiyon <ol>32'lik konveksiyon gelişmiş teslimi (CED) iğne yörüngesini kılavuzunu kullanmak bir 22'lik spinal iğne <li>. Cilt ve paraspinal kas 22'lik Kılavuzu iğne ponksiyon. 
	Not: CED iğne doku, olarak da bilinen toplu akış, basınç gradyanları 19 , 20 nedeniyle sıvı konveksiyon elde etmek için tasarlanmıştır.</li>
	<li>Kılavuzu iğne DRG boyuna ekseni yaklasik ve iğne ucunu diseksiyon alan yanal paraspinal duvardan çıkan sonuçları bir yörünge boyunca amacı.</li>
	<li>Fine tune iğne yolu iğne Lümen DRG Merkezi ile hizalar kadar. 
	Not: Kılavuzu iğne asla DRG başvurun için izin verilmelidir.</li>
	<li>Kadar steril injectate steril enjektör çekmek ve şırınga steril infüzyon boru bağlamak.</li>
	<li>Boru CED iğne için güvenli ve şırınga steril alanı dışında el. Şırınga programlanabilir şırınga pompa bağlayın. 
	Not: Kısırlık ve hareketlilik korunduğundan emin olmak için 5 feet uzunluğunda için tüp hazır. Ayrıca, bu hiçbir hava kabarcıkları çözüm olarak sunulması çok önemlidir.</li>
	<li>İnjectate ifade CED iğne uç--dan görülür kadar ilerlemek.</li>
	<li>Kılavuzu iğne Lümen içinde CED iğne yerleştirin ve Kılavuzu iğne ucundan çıkar kadar yavaş yavaş CED iğne ilerlemek. DRG iğne hizalama sırasında delinmiş değil emin olun.</li>
	<li>Fine tune yörüngesini CED ipucu son konumunu belirlemek için kılavuz iğne konumunu uzun ekseni boyunca.</li>
	<li>İğne ve CED iğne derinliği ve hizalama kılavuzu ve CED iğneler elde edilir bir kez birlikte kilitli iğne hub kullanma kılavuzu güvenli.</li>
	<li>Kılavuzu iğne, CED iğne, dahil olmak üzere tüm enjeksiyon aparatı bağlantıları tam olarak korunduğundan ve bağlı boru injectate ile yüklenen onayla.</li>
	<li>Kılavuzu iğne CED iğne ucu ve DRG yaklaştırmak için uzun eksende ilerlemek.</li>
	<li>DRG CED iğne ucu delik.</li>
	<li>Submerse CED iğne ucu DRG üç boyutlu merkezine. Not: DRG üç boyutlu yapısını değişken boyutu ve şekli olduğundan, DRG pozlama CED iğne ucu DRG gerçek Merkezi doğru bir şekilde yerleştirebilmeniz için tamamlanmış olması gerekir. Gerçek DRG Merkezi onun üç anatomik eksen kesiştiği yer alır, ön için arka, lateral Yani, için medial ve üstün alt eksenleri.</li>
	<li>İnjectate bir mezun oranı ve hacmi 3 adımları kullanarak CED tarafından teslim 100 μL.</li>
	<li>Teslim 4 μl 2 μL/min için ilk adım. 8 μL ikinci adım 4 μL/dk'ya sunmak. Üçüncü ve son adım için 8 μL/dk 88 μL teslim. 
	Not: bir 3-dak duraklama adımlar arasında ve basınç denge için izin vermek için son adım sonra izin.</li>
	<li>Son enjeksiyon adım ve pürüzsüz, yumuşak bir hareketle uzun eksende 3-dak duraklama sonra enjeksiyon aparatı çekilme. 
	Not: renksiz enjekte çözümleri için konsantrasyonu % 0,1 ağırlık/hacim injectate dağıtım 12 görsel değerlendirmesine yardımcı olmak için çözümdeki renkli boya dahildir. Ayrıca, hayati boya 4 &#39;, 6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) dahil 0,25 μg/μL bir konsantrasyon, çözümde çalışma tasarım injectate dağıtım 5 histolojik değerlendirme gerektirdiğinde.</li>
</ol> 9. Kapatma <ol><li>sıcak tuzlu sulama seferber ve enkaz, Yani kemik parçaları sitesi floş için kapatma önce cerrahi sitesi uygulamak 3 mermi. Serum ve enkaz kurtarmak için emme kullanın. 
	Not: sulama açık kaldığında titiz hemostaz sağlanmaktadır. Kan durdurucu sargı ajanlar (jelatin sünger) ve cottonoid şu anda kaldırılır. Tüm malzeme ve aletleri kapatma önce kesi siteden temizlendi olun.</li>
	<li>Kapatılması için 3 katmanlı tekniği kullanın.</li>
	<li>0 dikiş bir basit, kesintiye uğramış, noninverted biçimde kullanarak thoracolumbar fasya dikiş. Su geçirmez kapatma elde etmek için bir dikiş her 5-8 mm yerleştirin.</li>
	<li>2-0 Dikiş dikiş ile basit, kesintiye uğramış, ters bir biçimde kullanarak subkutan doku yerleştirilen dikiş her 5 - için 8 mm yeterli gücü elde etmek için.</li>
	<li>Deri çalışan basit bir 0 dikiş kullanarak kapatın veya moda kesildi.</li>
	<li>Yok "Sharps" kayıp olduğundan emin olmak için bir iğne sayacını kullanın şey için</li>
	<li>Cilt serum fizyolojik ile sulamak, Kuru Cilt ve yapışkanlı bandaj şeritler kesi dik yerleştirin.</li>
	<li>Tül bandaj üstüne şeritler ve nihai yapışkan antimikrobiyal eklemek yer örtüsü deşmek.</li>
</ol> 10. Ameliyat sonrası bakım hayvan <ol><li>tüpü, kapak sıcak battaniye ile ve hayvan kurtarma için taşıma.</li>
	<li>Ameliyat sonrası izleme ve hayatta kalma Cerrahi Kurtarma standart kurumsal çalışma yordamları izleyin. En azından, hayvan her 15 dk. bilinç, tam anestezik kurtarma elde kadar saatlik ve günlük değil iki kez dönene dek bundan sonra dikkat.</li>
	<li>4 mg/kg, 5 gün 0'ameliyat sonrası gününden başlayarak günde bir kez verilen anlık ileti veya sözlü carprofen, yönetmek sağlamak operatif ağrı yönetimi. Bir kez ameliyat sonrası günde 2 0,18 mg/kg'dan verilen SC buprenorfin SR, yönetmek.</li>
	<li>Ameliyat sonrası antisepsis IM ceftiofur, bir kez ameliyat sonrası günde 4 5 mg/kg, verilen vererek yönetmek.</li>
	<li>Post operatif gün 5-7 bandaj kaldırmak. Yara iyileşmesi üzerinde genellikle post operatif gün 10-14, tamamlandıktan sonra dikiş kaldırın.</li>
	<li>Çalışma bitiş noktası ulaşıldığında insancıl hayvan standart kurumsal çalışma usulleri göre ötenazi.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Millan, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+induction+of+pain:+An+integrative+review.">The induction of pain: An integrative review.</a> Prog Neurobiol. 57 (1), 1-164 (1999).</li><li>Burma, N. E., Leduc-Pessah, H., Fan, C. Y., Trang, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+chronic+pain:+Advances+and+challenges+for+clinical+translation.">Animal models of chronic pain: Advances and challenges for clinical translation.</a> J Neurosci Res. , (2016).</li><li>Pleticha, J., Maus, T. P., Beutler, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Future+directions+in+pain+management:+integrating+anatomically+selective+delivery+techniques+with+novel+molecularly+selective+agents.">Future directions in pain management: integrating anatomically selective delivery techniques with novel molecularly selective agents.</a> Mayo Clin Proc. 91 (4), 522-533 (2016).</li><li>Standring, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The anatomical basis of clinical practice. , (2005).</li><li>Fischer, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+injection+into+the+dorsal+root+ganglion:+technical,+behavioral,+and+histological+observations.">Direct injection into the dorsal root ganglion: technical, behavioral, and histological observations.</a> J Neurosci Methods. 199 (1), 43-55 (2011).</li><li>Zhao, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+long+noncoding+RNA+contributes+to+neuropathic+pain+by+silencing+Kcna2+in+primary+afferent+neurons.">A long noncoding RNA contributes to neuropathic pain by silencing Kcna2 in primary afferent neurons.</a> Nat Neurosci. 16 (8), 1024-1031 (2013).</li><li>Xu, Y., Gu, Y., Wu, P., Li, G. W., Huang, L. Y. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficiencies+of+transgene+expression+in+nociceptive+neurons+through+different+routes+of+delivery+of+adeno-associated+viral+vectors.">Efficiencies of transgene expression in nociceptive neurons through different routes of delivery of adeno-associated viral vectors.</a> Hum Gene Ther. 14 (9), 897-906 (2003).</li><li>Puljak, L., Kojundzic, S. L., Hogan, Q. H., Sapunar, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+delivery+of+pharmacological+agents+into+rat+dorsal+root+ganglion.">Targeted delivery of pharmacological agents into rat dorsal root ganglion.</a> J Neurosci Methods. 177 (2), 397-402 (2009).</li><li>Mason, M. R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+AAV+serotypes+for+gene+delivery+to+dorsal+root+ganglion+neurons.">Comparison of AAV serotypes for gene delivery to dorsal root ganglion neurons.</a> Mol Ther. 18 (4), 715-724 (2010).</li><li>Jelicic Kadic, A., Boric, M., Kostic, S., Sapunar, D., Puljak, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effects+of+intraganglionic+injection+of+calcium/calmodulin-dependent+protein+kinase+II+inhibitors+on+pain-related+behavior+in+diabetic+neuropathy.">The effects of intraganglionic injection of calcium/calmodulin-dependent protein kinase II inhibitors on pain-related behavior in diabetic neuropathy.</a> Neurosci. 256, 302-308 (2014).</li><li>Greenberg, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Handbook of neurosurgery. , (2010).</li><li>Yu, H., Fischer, G., Hogan, Q. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=AAV-mediated+gene+transfer+to+dorsal+root+ganglion.">AAV-mediated gene transfer to dorsal root ganglion.</a> Methods Mol Biol. 1382, 251 (2016).</li><li>Yaksh, T. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pharmacology+and+toxicology+of+chronically+infused+epidural+clonidine+HCL+in+dogs.">Pharmacology and toxicology of chronically infused epidural clonidine HCL in dogs.</a> Toxicol Sci. 23 (3), 319-335 (1994).</li><li>Federici, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surgical+technique+for+spinal+cord+delivery+of+therapies:+demonstration+of+procedure+in+gottingen+minipigs.">Surgical technique for spinal cord delivery of therapies: demonstration of procedure in gottingen minipigs.</a> J Vis Exp. (70), e4371 (2012).</li><li>Lee, J. H. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+porcine+model+of+traumatic+thoracic+spinal+cord+injury.">A novel porcine model of traumatic thoracic spinal cord injury.</a> J Neurotrauma. 30 (3), 142-159 (2013).</li><li>Raore, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cervical+multilevel+intraspinal+stem+cell+therapy:+assessment+of+surgical+risks+in+Gottingen+minipigs.">Cervical multilevel intraspinal stem cell therapy: assessment of surgical risks in Gottingen minipigs.</a> Spine. 36 (3), e164 (2011).</li><li>Riley, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intraspinal+stem+cell+transplantation+in+amyotrophic+lateral+sclerosis:+A+phase+I+safety+trial,+technical+note,+and+lumbar+safety+outcomes.">Intraspinal stem cell transplantation in amyotrophic lateral sclerosis: A phase I safety trial, technical note, and lumbar safety outcomes.</a> Neurosurg. 71 (2), 405-416 (2012).</li><li>Olmarker, K., Holm, S., Rosenqvist, A., Rydevik, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+nerve+root+compression.++A+model+of+acute,+graded+compression+of+the+porcine+cauda+equina+and+an+analysis+of+neural+and+vascular+anatomy.">Experimental nerve root compression. A model of acute, graded compression of the porcine cauda equina and an analysis of neural and vascular anatomy.</a> Spine. 16 (1), 61-69 (1991).</li><li>Bobo, R. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Convection-enhanced+delivery+of+macromolecules+in+the+brain.">Convection-enhanced delivery of macromolecules in the brain.</a> Proc Natl Acad Sci U.S.A. 91 (6), 2076-2080 (1994).</li><li>Lonser, R. R., Sarntinoranont, M., Morrison, P. F., Oldfield, E. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Convection-enhanced+delivery+to+the+central+nervous+system.">Convection-enhanced delivery to the central nervous system.</a> J Neurosurg. 122 (3), 697-706 (2015).</li><li>Shen, J., Wang, H. Y., Chen, J. Y., Liang, B. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphologic+analysis+of+normal+human+lumbar+dorsal+root+ganglion+by+3D+MR+imaging.">Morphologic analysis of normal human lumbar dorsal root ganglion by 3D MR imaging.</a> AJNR Am J Neuroradiol. 27 (0195–6108 (Print)), 2098-2103 (2006).</li><li>Pleticha, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Minimally+invasive+convection-enhanced+delivery+of+biologics+into+dorsal+root+ganglia:+validation+in+the+pig+model+and+prospective+modeling+in+humans.">Minimally invasive convection-enhanced delivery of biologics into dorsal root ganglia: validation in the pig model and prospective modeling in humans.</a> J Neurosurg. 121 (4), 851-858 (2014).</li></ol>

Hiçbiri; yazarlar için bu çalışma ile ilgili hiçbir çatışması var.

DRG üzerinden laminotomy ve sağlıklı bir büyük hayvan türleri, intraganglionic enjeksiyon cerrahi maruz için bir yöntemi açıklamak aranan özellikle, domuz. Kemirgen, a benzer yöntem ayrıntılı 12 edilmiş ve geleneksel farmakolojik ajanlar 8,10 ve viral vektörler 6,7,9,12 DRG için teslim etmek için kullanılır. Yukarıdaki küçük hayvan çalışmaları sonuçlarından umut verici ve umarız bizim iletişim kuralı başkalarının domuz için önceden bu bulgular çevirmek önünü açacak. Sağlıklı ve hastalıklı hayvanların preklinik araştırma belgili tanımlık yarar küçük hayvanların destekleyen yukarıdaki çalışmalar kullanılmaya başlanmıştır. Kaçınılmaz olarak, büyük hayvan modeller insan DRG boyutu ve injectate dağıtım açısından en iyi kullanılabilir karşılaştırma yapmak için gerekli olacaktır. Örneğin, DRG boyutu tutarsızlık fareler ve insanlar arasında açıkça belirgindir. L5 DRG yetişkin erkek rats yaklaşık 2.6 x 1.5 mm 5 11,6 mm x 6,6 mm'lik yetişkin, erkek insanlar 21göre ölçmek. Radyografik ölçümlerde canlı domuz dayanarak, L5 DRG bulunmuştur yaklaşık 8.0 x 6.0 mm 22olmak. Bu nedenle, domuz preklinik çalışma nedeniyle yapısal benzerlikler ile insan sinir sistemi ve kas-iskelet anatomi yakın için özellikle yararlı bir tür olarak bulunmaktadır. Bu da bu protokole göre klinikte gerçekleştirilen tasarlamak için kullanılan ters çeviri kanıtladığı. Ayrıca, domuz hayvanlar kullanın ve Biyomedikal Araştırma önemi büyüyen vardır. Bu iletişim kuralı önceki bulgular Rodents işten büyük hayvanlar için ilerlemek için enjekte edilebilir çözümler intraganglionic teslimat preklinik çalışmaları destekler. Böylece, bu iletişim kuralını anatomik olarak seçici dağıtım teknikleri hangi biz tahmin, ağrı tıp 3dönüştürmek için potansiyeli olabilir roman tatlı seçici ajanlar ile entegre kronik ağrı tedavisi için yeni stratejiler beslemek.
Başarılı DRG enjeksiyon için ek notlar
Prelaminar kapaklarini domuz Lomber vertebra seviyelerde ligamentum flavum yerine cephalad devam ediyor. Laminotomy sırasında kapaklarini Kerrison rongeur yerleşimini tarafından kolayca ayrılabilen ve dura mater görünümünü taklit edebilir. Diseksiyon yürütülen olarak ligamentum flavum, kapaklarini, epidural yağ ve dura sac ayırt etmek için kritik bir adımdır. Ayrıca, pozlama epidural alan daha verimli ve daha az kanama kapaklarini lamina ile aynı anda kaldırılırsa doğurur. Kapaklarini kemik ile birlikte kaldırılmazsa, bir #11 bıçakla açılan ve temel epidural yağ ortaya çıkarmak için kaldırıldı.
Zarar verme için en öncelikli konudur ve bu DRG erişim ve enjeksiyon hedefi ile dengelenmelidir. Böylece, epidural yağ tahliye anteriorly öteye ilerlemek değil için bakım alınır veya dural kese, dural sinir kök kol ve DRG olumlu kimlik izin vermek için gerekir daha anteromedially. Diseksiyon nerede dural kese dural sinir kök kol açmaktadır anteromedial yönde özellikle tehlikeli olduğu bir boyuna epidural damar karşılaştı. Ayrıca, bu yönde diseksiyon istenmeyen durotomy, beyin omurilik sıvısı çıkış tarafından dural kese yüzeyinden sinyal riskini artırır.
Son bir kritik nokta dural kese, dorsal köklerinden, DRG onun bütünlüğü ve omurilik biyopsisi tanımlama da. 4 adet anatomik meydanlarda, bu kanıt kurmak için yardımcı olacağından emin olmak tam DRG tanımı. DRG bütünüyle tanımlama CED iğne çevreleyen anatomik sınırları Uzaklik en üst düzeye tutarlı basınç gradyan oluşturmak için izin verir, üç boyutlu merkezinde iğne ucu konumlandırmak için gereklidir. İki faktör teslim birimleri ve yaymak intraparenchymal 19,20Aralık büyük ölçüde artırır. İnjectate ne zaman injectate DRG ponksiyon 20yakındaki sitesinden sızıntıları tutarsız baskılara neden için bu alt-optimal enjeksiyon gerçek anatomik Merkezi sonuçlarında değil bir yerde teslim.
DRG enjeksiyon için CED iğne kullanarak bir zorluk bu uyum olduğunu. Enjeksiyon başlandıktan sonra iğne ucu mümkün olduğunca hareketsiz tutulması gerekir ya da basınç gradyanları uyum 20ani değişiklikler nedeniyle dağıtmak olacaktır. Solunum hareket enjeksiyon sırasında sürekli hareket kaynağıdır. Bununla birlikte, iğne hareketi solunum gezi için ikincil riskini büyük ölçüde paraspinal kas öncesinde hareket iğne ve DRG senkronizasyonu ile solunum gibi DRG ponksiyon içinde CED ve Kılavuzu iğne sabitleme tarafından kaldırılır. Enjeksiyon süresi 100 μL toplamları burada açıklanan basamaklı hızda 24 dk bir birim için. Bu süre içinde tüm enjeksiyon cihazları harici bozulma sınırlamak için özen gösterilmelidir. Cerrahi alan, personel ve çevresindeki engellerin enjeksiyon CED iğne ucu ve DRG arasında bozulmamış bir arabirim sağlamak için başlamadan önce gerektiği şekilde değiştirilmesi gerekir.

Dorsal kök gangliyon (DRG) kuvvetli sütun bulunan anatomik olarak ayrık, nöronal koleksiyonlarıdır. Her DRG kodlama ve merkezi sinir sistemi (MSS) çevresel uyaranlara geçiş birincil duyusal sinir hücreleri belirli vücut bölgeleri içerir. Örneğin, osteoartrit ağrı ağrı reseptörleri cigara hakkında yer alan zararlı uyaranlara algıladıkları başlar. Bu işlemi duyusuna olarak adlandırılır. Uzun vadeli zararlı uyaranlara bilincini kronik ağrı 1' e yol açar.
Kronik ağrı bir sık preklinik çalışma 2 bir gol analjezikler intraganglionic enjeksiyon 3gibi hedeflenen teslimat DRG için yararlı yöntemler geliştirmek nerede konusudur. Ancak, DRG erişmek zor çünkü onlar intervertebral foramina 4Kişilik sınırları içinde bulunurlar. Çeşitli gruplar bu engeli kemirgenler 5,6,7,8,9,10omurga cerrahisinde kullanımı ile başarıyla üstesinden geldiler.
Klinikte, laminektomi ortak bir omurga işlemidir ve böylece vertebral kanal 11unroofing vertebral lamina cerrahi olarak çıkarılması için anlamına gelir. Doğrudan DRG erişim göze Cerrahi teknik birleşme kemirgenler 5,12' başarılı olmuştur, ancak, çeviri ilgili yapıları boyutunu gerçekçi göz önüne alındığında farklılıkları ve nasıl bu etkiler olabilir farmakokinetik ya da Teknik fizibilite 13,14. Örneğin, bir çalışmada T10 3.0, 7.0 ve fare, domuz ve insan, sırasıyla 158,2 mm olmak, omurilik Enine çapı belirledi. Böylece, büyük hayvan yaklaşık insan boyutları sinir yapıları daha iyi modelleri.
Domuz, Raore vd. servikal spinal kord birden fazla kesici iğne 16için erişmek için çok düzeyli laminektomi kullanılır. Prosedür iyi tolere ve liderliğindeki bir aşamaya ben klinik nerede karşılaştırılabilir cerrahi sonuçlar belgelenmesine 17edildi. Bu sonuçlar preklinik büyük hayvan modeller kullanmaya devam etmeniz Teknik fizibilite ve Emanet insanlarda belirleyicileri olarak teşvik etmek.
Bugüne kadar cerrahi erişim ve DRG enjeksiyon içinde büyük bir hayvan türlerinin yok detaylı metodoloji bulunmaktadır. Bu çevirim boşluğu daraltmak için DRG pozlama ve enjeksiyon yolu ile domuz laminotomy için bir protokol rapor. Yöntemi modern cerrahi uygulama taklit etmek için tasarlanmıştır ve standart Nöroşirürji teknikleri, aletler ve malzemeler kullanıldı. İntraganglionic enjeksiyon için bel DRG sulu bir çözüm kullanarak göstermek ve Histoloji yoluyla başarılı teslim sonra ameliyat sonrası gün 21 onaylayın.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1311">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:543px;">Large humane animal sling</td>
			<td style="width:167px;">Britz &#38; Company</td>
			<td style="width:119px;">002539</td>
			<td style="width:484px;">Modified to include abdominal aperture</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:543px;">Adhesive patient return electrode - 9 inch</td>
			<td style="width:167px;">Medtronic</td>
			<td style="width:119px;">E7506</td>
			<td style="width:484px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:543px;">Ranger blood &#38; fluid warming system</td>
			<td style="width:167px;">3M</td>
			<td style="width:119px;">24500</td>
			<td style="width:484px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:543px;">Lactated Ringer&#39;s fluid</td>
			<td style="width:167px;">Hospira</td>
			<td style="width:119px;">0409-7953-09</td>
			<td style="width:484px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:543px;">Force air warming device</td>
			<td style="width:167px;">3M</td>
			<td style="width:119px;">77500</td>
			<td style="width:484px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:543px;">Duraprep solution with applicator, 26 ml (0.7% iodine povacrylex, 74% isopropyl alcohol</td>
			<td style="width:167px;">3M</td>
			<td style="width:119px;">8630</td>
			<td style="width:484px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:543px;">Sterile disposable surgical towels</td>
			<td style="width:167px;">Medline</td>
			<td style="width:119px;">MDT2168286</td>
			<td style="width:484px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:543px;">Ioban 2 incise drape</td>
			<td style="width:167px;">3M</td>
			<td style="width:119px;">6651EZSB</td>
			<td style="width:484px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:543px;">Disposable suction canister and tubing</td>
			<td style="width:167px;">Medline</td>
			<td style="width:119px;">DYND44703H</td>
			<td style="width:484px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:543px;">Button switch electrosurgical monopolar pencil</td>
			<td style="width:167px;">Medtronic</td>
			<td style="width:119px;">E2450H</td>
			<td style="width:484px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:543px;">Fine smooth straight bipolar electrosurgical forceps, 4 1/2 inch</td>
			<td style="width:167px;">Bovie</td>
			<td style="width:119px;">A826</td>
			<td style="width:484px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:543px;">#15 blade</td>
			<td style="width:167px;">Miltex</td>
			<td style="width:119px;">4-315</td>
			<td style="width:484px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:543px;">#11 blade</td>
			<td style="width:167px;">Miltex</td>
			<td style="width:119px;">4-311</td>
			<td style="width:484px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:543px;">4x4 surgical gauze</td>
			<td style="width:167px;">Dynarex</td>
			<td style="width:119px;">3262</td>
			<td style="width:484px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:543px;">Weitlaner self-retaining retractor, 8 inch</td>
			<td style="width:167px;">Miltex</td>
			<td style="width:119px;">11-618</td>
			<td style="width:484px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:543px;">Meyerding self-retaining retractor, 1x2 3/8 inch</td>
			<td style="width:167px;">Sklar</td>
			<td style="width:119px;">42-2078</td>
			<td style="width:484px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:543px;">Gelpi self-retaining retractor, 7 inch</td>
			<td style="width:167px;">Sklar</td>
			<td style="width:119px;">60-6570</td>
			<td style="width:484px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:543px;">Freer elevator, 5 mm</td>
			<td style="width:167px;">Medline</td>
			<td style="width:119px;">MDS4641518F</td>
			<td style="width:484px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:543px;">Bone wax</td>
			<td style="width:167px;">Ethicon</td>
			<td style="width:119px;">W31G</td>
			<td style="width:484px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:543px;">Spurling intervertebral disc rongeur, 3 mm</td>
			<td style="width:167px;">Sklar</td>
			<td style="width:119px;">42-2852</td>
			<td style="width:484px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:543px;">Spurling 45-degree, up-biting Kerrison rongeur, 2 mm</td>
			<td style="width:167px;">Medline</td>
			<td style="width:119px;">MDS4052802</td>
			<td style="width:484px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:543px;">Leksell angled rongeur, 2 mm</td>
			<td style="width:167px;">Sklar</td>
			<td style="width:119px;">40-4097</td>
			<td style="width:484px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:543px;">Gelfoam, size 50</td>
			<td style="width:167px;">Pfizer</td>
			<td style="width:119px;">AZL32301</td>
			<td style="width:484px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:543px;">Cottonoid patty</td>
			<td style="width:167px;">Medtronic</td>
			<td style="width:119px;">8004007</td>
			<td style="width:484px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:543px;">Frazier suction tip, 6 Fr</td>
			<td style="width:167px;">Sklar</td>
			<td style="width:119px;">50-2006</td>
			<td style="width:484px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:543px;">Frazier suction tip, 10 Fr</td>
			<td style="width:167px;">Sklar</td>
			<td style="width:119px;">50-2010</td>
			<td style="width:484px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:543px;">Dandy blunt right angle nerve hook</td>
			<td style="width:167px;">Medline</td>
			<td style="width:119px;">MDS4005220</td>
			<td style="width:484px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:543px;">Nylon suture, 6-0</td>
			<td style="width:167px;">Ethicon</td>
			<td style="width:119px;">697G</td>
			<td style="width:484px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:543px;">Castroviejo smooth micro needle holder</td>
			<td style="width:167px;">Medline</td>
			<td style="width:119px;">MDG2428614</td>
			<td style="width:484px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:543px;">22 gauge Quinke point spinal needle</td>
			<td style="width:167px;">Halyard Health</td>
			<td style="width:119px;">18397</td>
			<td style="width:484px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="105">
			<td height="105" style="height:105px;width:543px;">32 gauge CED needle with locking Luer hub</td>
			<td style="width:167px;">See comments</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:484px;">As in: Pleticha, J., Maus, T.P., Christner, J.A., Marsh, M.P., Lee, K.H., Hooten, W.M., Beutler, A.S. Minimally invasive convection-enhanced delivery of biologics into dorsal root ganglia: validation in the pig model and prospective modeling in humans. Technical note. J Neurosurg. 121(4), 851-8 (2014).</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:543px;">Polyethylene tubing, 5 feet</td>
			<td style="width:167px;">Scientific Commodities</td>
			<td style="width:119px;">BB31695-PE/05</td>
			<td style="width:484px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:543px;">Monoject syringe, 3 ml</td>
			<td style="width:167px;">Kendall</td>
			<td style="width:119px;">SY15352</td>
			<td style="width:484px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:543px;">NanoJet syringe pump</td>
			<td style="width:167px;">Chemyx</td>
			<td style="width:119px;">10050</td>
			<td style="width:484px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:543px;">DAPI</td>
			<td style="width:167px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">D9542</td>
			<td style="width:484px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:543px;">Fast Green FCF</td>
			<td style="width:167px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">F7252</td>
			<td style="width:484px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:543px;">Bulb irrigation syringe</td>
			<td style="width:167px;">Medline</td>
			<td style="width:119px;">DYND20125</td>
			<td style="width:484px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:543px;">Fine-toothed Adson forceps</td>
			<td style="width:167px;">Medline</td>
			<td style="width:119px;">MDS1000212</td>
			<td style="width:484px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:543px;">Vicryl suture, 0</td>
			<td style="width:167px;">Ethicon</td>
			<td style="width:119px;">J603H</td>
			<td style="width:484px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:543px;">Vicryl suture, 2-0</td>
			<td style="width:167px;">Ethicon</td>
			<td style="width:119px;">J317H</td>
			<td style="width:484px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:543px;">Needle counter</td>
			<td style="width:167px;">Medline</td>
			<td style="width:119px;">NC20FBRGS</td>
			<td style="width:484px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:543px;">Steri-strip skin closure, 1/2x4 inch</td>
			<td style="width:167px;">3M</td>
			<td style="width:119px;">R1547</td>
			<td style="width:484px;">-</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

laminotomy for lumbar dorsal root ganglion access and injection in swine

Dorsal kök gangliyon (DRG) baş aşağıda tüm birincil duyusal sinir hücreleri içeren anatomik olarak iyi tanımlanmış yapılar vardır. Bu gerçek DRG çekici hedefler roman tedavi kronik ağrı tedavi amaçlı enjeksiyon için yapar. Küçük hayvan modellerinde laminektomi her DRG çevreleyen vertebra kemik cerrahi olarak çıkarılması hattınızda DRG enjeksiyon kolaylaştırmak için kullanılmıştır. Biz büyük bir hayvan türü, yani, domuz bel DRG intraganglionic enjeksiyon için bir tekniği göstermek. Laminotomy DRG standart Nöroşirürji teknikleri, aletler ve malzemeler kullanarak doğrudan erişmesine izin vermek için gerçekleştirilir. Laminektomi ile daha geniş kemik kaldırma ile karşılaştırıldığında, biz yeterli DRG erişim elde ederken omurilik anatomisi korumaya laminotomy uygulamak. DRG enjeksiyon intraoperatif ilerleme bir non-toksik boya kullanarak izlenir. Ameliyat sonrası gün 21 ötenazi, Histoloji, 4', 6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) intraganglionic dağıtımı için enjeksiyon başarısını belirler. Protokol göstermek için biyolojik olarak etkin olmayan bir çözüm enjekte et. Bu yöntem DRG hedef tedavi çözümleri için uygulanan gelecekte preklinik çalışmalar olabilir. Metodolojimiz intraganglionic küçük hayvan paradigmalar translatability içinde büyük bir hayvan türleri test kolaylaştıracaktır. Ayrıca, bu iletişim kuralı bu domuz DRG yerleştirmeye preklinik çalışmaları planlama için önemli bir kaynak hizmet verebilir.

Histolojik değerlendirme injectate yayılması DRG başarılı teslim edilmesi injectate, DAPI yaymak histolojik değerlendirme tarafından belirlenir. Teknik iğne ucu DRG üç boyutlu ortasına konumlandırma içerir. Bu nedenle, başarılı teslim histolojik kesitler (Merkez DRG bölümler) yakınındaki her ikisi de ve uzak (periferik DRG bölümler) boyama için iğne ucu DAPI ölçüde değerlendirilerek belirlenir. Şekil 1A ve şekil 1B bir DRG başarılı bir enjeksiyon temsil eder. DAPI boyama eşit Merkezi ve periferik DRG parankimi ile dağınık. Böylece, başarılı bir DRG enjeksiyon DAPI üç boyutlu DRG mimarisi boyama diffüz yayılan tarafından gösterilmektedir. Alt-optimal enjeksiyon tutarsız boyama tarafından gösterilmektedir. Örneğin, en az (şekil 1 c) Boyama veya Fokal Dış Halka'daki ama DRG parankimi (şekil 1 d) değil iç yüzeyi boyama başarısız enjeksiyon gösterir. Ayrıca, birlikte olarak kabul, şekil 1 c (Merkez DRG bölümü) ve şekil 1 d (periferik DRG bölümü) tutarlı içinde üç boyutlu bu tek bel DRG için boyama a-sizlik çekmek göstermektedir.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56434/56434fig1.jpg"> 
Resim 1 : Üç boyutlu değerlendirme DAPI dağıtım enjekte DRG. (A) bir orta bölümünden bir enjekte bel DRG başarılı bir sonucu temsilcisi. Marker boya DAPI boyama eşit iki boyutta tüm DRG boyunca dağınık. (B) bir paralel periferik bölümü DAPI tutarlılığını gösteren aynı DRG (a), üç boyutlu olarak başarılı bir enjeksiyon teyit bölümünün ikinci bir düzlem içinde yayıldı. (C) bir orta bölümünden bir enjekte bel DRG alt-optimal bir sonucu temsilcisi. Yok DAPI boyama için en az dışında zaman zaman resimde görülmektedir. (D) DAPI kısmi dağıtım DRG çevre boyunca gösteren paralel, periferik bölümü (c), aynı DRG. Mavi: DAPI. Kırmızı: autofluorescence. Ölçek çubukları 500 mikron (A ve C), 100 mikron (B ve D) =. <a href="//ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56434/56434fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Laminotomy for Lumbar Dorsal Root Ganglion Access and Injection in Swine at JoVE.com

Laminotomy for Lumbar Dorsal Root Ganglion Access and Injection in Swine

İntraganglionic enjeksiyon bel dorsal kök gangliyon (DRG) için erişim sağlar domuz laminotomy için bir yöntem açıklanmaktadır. Enjeksiyon ilerleme ameliyathanede ve histolojik olarak kadar ameliyat sonrası 21 güne doğruladı izlenir. Bu iletişim kuralı DRG enjeksiyon ile ilgili gelecekteki preklinik çalışmaları için kullanılabilir.

Lomber Dorsal kök gangliyon erişim ve domuz yerleştirmeye laminotomy

Dorsal root ganglia (DRG) are anatomically well defined structures that contain all primary sensory neurons below the head. This fact makes DRG attractive ...

laminotomy-for-lumbar-dorsal-root-ganglion-access-injection

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Neuroscience

12.6K Görüntüleme.  Mayo Clinic, Translational Science Track, Mayo Graduate School. İntraganglionic enjeksiyon bel dorsal kök gangliyon (DRG) için erişim sağlar domuz laminotomy için bir yöntem açıklanmaktadır. Enjeksiyon ilerleme ameliyathanede ve histolojik olarak kadar ameliyat sonrası 21 güne doğruladı izlenir. Bu iletişim kuralı DRG enjeksiyon ile ilgili gelecekteki preklinik çalışmaları için kullanılabilir.

Video: Laminotomy for Lumbar Dorsal Root Ganglion Access and Injection in Swine

Chromatin Immunoprecipitation from Dorsal Root Ganglia Tissue following Axonal Injury

Axons in the central nervous system (CNS) do not regenerate while those in the peripheral nervous system (PNS) do regenerate 
to a limited extent after injury (Teng et al., 2006). It is recognized that transcriptional programs essential for neurite and axonal outgrowth are 
reactivated upon injury in the PNS (Makwana et al., 2005). However the tools available to analyze neuronal gene regulation in vivo are limited and 
often challenging.
The dorsal root ganglia (DRG) offer an excellent injury model system because both the CNS and PNS are innervated by a 
bifurcated axon originating from the same soma. The ganglia represent a discrete collection of cell bodies where all transcriptional events occur, 
and thus provide a clearly defined region of transcriptional activity that can be easily and reproducibly removed from the animal. Injury of nerve 
fibers in the PNS (e.g. sciatic nerve), where axonal regeneration does occur, should reveal a set of transcriptional programs that are distinct from 
those responding to a similar injury in the CNS, where regeneration does not take place (e.g. spinal cord). Sites for transcription factor binding, 
histone and DNA modification resulting from injury to either PNS or CNS can be characterized using chromatin immunoprecipitation (ChIP). 
Here, we describe a ChIP protocol using fixed mouse DRG tissue following axonal injury. This powerful combination provides a means for characterizing the pro-regeneration chromatin environment necessary for promoting axonal regeneration.

We present a method for chromatin immunoprecipitation from dorsal root ganglia tissue following axonal injury. The approach can be used to identify specific transcription factor binding sites and epigenetic modification of histone and DNA important for the regeneration of injured axons in both the peripheral and central nervous system.

Kromatin Aksonal Yaralanma Dorsal Kök Ganglia Doku Immunoprecipitation

Axons in the central nervous system (CNS) do not regenerate while those in the peripheral nervous system (PNS) do regenerate 
to a limited extent after ...

Nörobilim

Live Imaging of Dorsal Root Axons after Rhizotomy

The primary sensory axons injured by spinal root injuries fail to regenerate into the spinal cord, leading to chronic pain and permanent sensory loss. Regeneration of dorsal root (DR) axons into spinal cord is prevented at the dorsal root entry zone (DREZ), the interface between the CNS and PNS. Our understanding of the molecular and cellular events that prevent regeneration at DREZ is incomplete, in part because complex changes associated with nerve injury have been deduced from postmortem analyses. Dynamic cellular processes, such as axon regeneration, are best studied with techniques that capture real-time events with multiple observations of each living animal. Our ability to monitor neurons serially in vivo has increased dramatically owing to revolutionary innovations in optics and mouse transgenics. Several lines of thy1-GFP transgenic mice, in which subsets of neurons are genetically labeled in distinct fluorescent colors, permit individual neurons to be imaged in vivo1. These mice have been used extensively for in vivo imaging of muscle2-4 and brain5-7, and have provided novel insights into physiological mechanisms that static analyses could not have resolved. Imaging studies of neurons in living spinal cord have only recently begun. Lichtman and his colleagues first demonstrated their feasibility by tracking injured dorsal column (DC) axons with wide-field microscopy8,9. Multi-photon in vivo imaging of deeply positioned DC axons, microglia and blood vessels has also been accomplished10. Over the last few years, we have pioneered in applying in vivo imaging to monitor regeneration of DR axons using wide-field microscopy and H line of thy1-YFP mice. These studies have led us to a novel hypothesis about why DR axons are prevented from regenerating within the spinal cord11.
In H line of thy1-YFP mice, distinct YFP+ axons are superficially positioned, which allows several axons to be monitored simultaneously. We have learned that DR axons arriving at DREZ are better imaged in lumbar than in cervical spinal cord. In the present report we describe several strategies that we have found useful to assure successful long-term and repeated imaging of regenerating DR axons. These include methods that eliminate repeated intubation and respiratory interruption, minimize surgery-associated stress and scar formation, and acquire stable images at high resolution without phototoxicity.

An in vivo imaging protocol to monitor primary sensory axons following dorsal root crush is described. The procedures utilize wide-field fluorescence microscopy and thy1-YFP transgenic mice, and permit repeated imaging of axon regeneration over 4 cm in the PNS and axon interactions with the interface of the CNS.

Rizotomi sonra Dorsal Kök Aksonlar Canlı Görüntüleme

The primary sensory axons injured by spinal root injuries fail to regenerate into the spinal cord, leading to chronic pain and permanent sensory loss. ...

Genetic Study of Axon Regeneration with Cultured Adult Dorsal Root Ganglion Neurons

It is well known that mature neurons in the central nervous system (CNS) cannot regenerate their axons after injuries due to diminished intrinsic ability to support axon growth and a hostile environment in the mature CNS1,2. In contrast, mature neurons in the peripheral nervous system (PNS) regenerate readily after injuries3. Adult dorsal root ganglion (DRG) neurons are well known to regenerate robustly after peripheral nerve injuries. Each DRG neuron grows one axon from the cell soma, which branches into two axonal branches: a peripheral branch innervating peripheral targets and a central branch extending into the spinal cord. Injury of the DRG peripheral axons results in substantial axon regeneration, whereas central axons in the spinal cord regenerate poorly after the injury. However, if the peripheral axonal injury occurs prior to the spinal cord injury (a process called the conditioning lesion), regeneration of central axons is greatly improved4. Moreover, the central axons of DRG neurons share the same hostile environment as descending corticospinal axons in the spinal cord. Together, it is hypothesized that the molecular mechanisms controlling axon regeneration of adult DRG neurons can be harnessed to enhance CNS axon regeneration. As a result, adult DRG neurons are now widely used as a model system to study regenerative axon growth5-7.
Here we describe a method of adult DRG neuron culture that can be used for genetic study of axon regeneration in vitro. In this model adult DRG neurons are genetically manipulated via electroporation-mediated gene transfection6,8. By transfecting neurons with DNA plasmid or si/shRNA, this approach enables both gain- and loss-of-function experiments to investigate the role of any gene-of-interest in axon growth from adult DRG neurons. When neurons are transfected with si/shRNA, the targeted endogenous protein is usually depleted after 3-4 days in culture, during which time robust axon growth has already occurred, making the loss-of-function studies less effective. To solve this problem, the method described here includes a re-suspension and re-plating step after transfection, which allows axons to re-grow from neurons in the absence of the targeted protein. Finally, we provide an example of using this in vitro model to study the role of an axon regeneration-associated gene, c-Jun, in mediating axon growth from adult DRG neurons9.

An in vitro model for genetic study of axon regeneration using cultured adult mouse dorsal root ganglion neurons is described. The method includes a re-suspension/re-plating step to allow axon re-growth from neurons undergoing genetic manipulation. This approach is especially useful for loss-of-function studies of axon regeneration using RNAi-based protein knockdown.

Kültür Yetişkin Dorsal Root Ganglion Nöronlar ile Axon Rejenerasyon Genetik Çalışma

It is well known that mature neurons in the central nervous system (CNS) cannot regenerate their axons after injuries due to diminished intrinsic ability ...

Measuring Spinal Presynaptic Inhibition in Mice By Dorsal Root Potential Recording In Vivo

Presynaptic inhibition is one of the most powerful inhibitory mechanisms in the spinal cord. The underlying physiological mechanism is a depolarization of primary afferent fibers mediated by GABAergic axo-axonal synapses (primary afferent depolarization). The strength of primary afferent depolarization can be measured by recording of volume-conducted potentials at the dorsal root (dorsal root potentials, DRP). Pathological changes of presynaptic inhibition are crucial in the abnormal central processing of certain pain conditions and in some disorders of motor hyperexcitability. Here, we describe a method of recording DRP in vivo in mice. The preparation of spinal cord dorsal roots in the anesthetized animal and the recording procedure using suction electrodes are explained. This method allows measuring GABAergic DRP and thereby estimating spinal presynaptic inhibition in the living mouse. In combination with transgenic mouse models, DRP recording may serve as a powerful tool to investigate disease-associated spinal pathophysiology. In vivo recording has several advantages compared to ex vivo isolated spinal cord preparations, e.g. the possibility of simultaneous recording or manipulation of supraspinal networks and induction of DRP by stimulation of peripheral nerves.

Measuring Spinal Presynaptic Inhibition in Mice By Dorsal Root Potential Recording In Vivo

GABAergic presynaptic inhibition is a powerful inhibitory mechanism in the spinal cord important for motor and sensory signal integration in spinal cord networks. Underlying primary afferent depolarization can be measured by recording of dorsal root potentials (DRP). Here we demonstrate a method of in vivo recording of DRP in mice.

Dorsal Kök Potansiyel Kayıt By Farelerde Spinal Presinaptik Engellenme Ölçme<em&gt; In Vivo</em

Presynaptic inhibition is one of the most powerful inhibitory mechanisms in the spinal cord. The underlying physiological mechanism is a depolarization of ...

In Vitro Modeling of Cancerous Neural Invasion: The Dorsal Root Ganglion Model

One way that solid tumors disseminate is through neural invasion. This route is well-known in cancers of the head and neck, prostate, and pancreas. These neurotropic cancer cells have a unique ability to migrate unidirectionally along nerves towards the central nervous system (CNS). The dorsal root ganglia (DRG)/cancer cell model is a three dimensional (3D) in vitro model frequently used for studying the interaction between neural stroma and cancer cells. In this model, mouse or human cancer cell lines are grown in ECM adjacent to preparations of freshly dissociated cultured DRG. In this article, the DRG isolation protocol from mice, and implantation in petri dishes for co-culturing with pancreatic cancer cells are demonstrated. Five days after implantation, the cancer cells made contact with the DRG neurites. Later, these cells formed bridgeheads to facilitate more extensive polarized, neurotropic migration of cancer cells.

In Vitro Modeling of Cancerous Neural Invasion: The Dorsal Root Ganglion Model

This video article shows the use of the dorsal root ganglia (DRG)/cancer cell model in pancreatic ductal adenocarcinoma.

Sırt kök ganglion Modeli: Kanserli Sinir Invasion Vitro Modelleme

One way that solid tumors disseminate is through neural invasion. This route is well-known in cancers of the head and neck, prostate, and pancreas. These ...

An Approach to Enhance Alignment and Myelination of Dorsal Root Ganglion Neurons

Axon regeneration is a chaotic process due largely to unorganized axon alignment. Therefore, in order for a sufficient number of regenerated axons to bridge the lesion site, properly organized axonal alignment is required. Since demyelination after nerve injury strongly impairs the conductive capacity of surviving axons, remyelination is critical for successful functioning of regenerated nerves. Previously, we demonstrated that mesenchymal stem cells (MSCs) aligned on a pre-stretch induced anisotropic surface because the cells can sense a larger effective stiffness in the stretched direction than in the perpendicular direction. We also showed that an anisotropic surface arising from a mechanical pre-stretched surface similarly affects alignment, as well as growth and myelination of axons. Here, we provide a detailed protocol for preparing a pre-stretched anisotropic surface, the isolation and culture of dorsal root ganglion (DRG) neurons on a pre-stretched surface, and show the myelination behavior of a co-culture of DRG neurons with Schwann cells (SCs) on a pre-stretched surface.

This protocol describes the isolation of dorsal root ganglion (DRG) neurons isolated from rats and the culture of DRG neurons on a static pre-stretched cell culture system to enhance axon alignment, with subsequent co-culture of Schwann Cells (SCs) to promote myelination.

Bir Yaklaşım sırt kök ganglion nöronlar hizalama ve myelinizasyondur Artırma

Axon regeneration is a chaotic process due largely to unorganized axon alignment. Therefore, in order for a sufficient number of regenerated axons to ...

Dorsal Root Ganglion Injection and Dorsal Root Crush Injury as a Model for Sensory Axon Regeneration

Achieving axon regeneration after nervous system injury is a challenging task. As different parts of the central nervous system (CNS) differ from each other anatomically, it is important to identify an appropriate model to use for the study of axon regeneration. By using a suitable model, we can formulate a specific treatment based on the severity of injury, the neuronal cell type of interest, and the desired spinal tract for assessing regeneration. Within the sensory pathway, DRG neurons are responsible for relaying sensory information from the periphery to the CNS. We present here a protocol that uses a DRG injection with a viral vector and a concurrent dorsal root crush injury in the lower cervical spinal cord of an adult rat as a model to study sensory axon regeneration. As demonstrated using a control virus, AAV5-GFP, we show the effectiveness of a direct DRG injection in transducing DRG neurons and tracing sensory axons into the spinal cord. We also show the effectiveness of the dorsal root crush injury in denervating the forepaw as an injury model for evaluating axon regeneration. Despite the requirement for specialized training to perform this invasive surgical procedure, the protocol is flexible, and potential users can modify many parts to accommodate their experimental requirements. Importantly, it can serve as a foundation for those in search of a suitable animal model for their studies. We believe that this article will help new users to learn the procedure in a very efficient and effective manner.

This protocol presents the use of a dorsal root ganglion (DRG) injection with a viral vector and a concurrent dorsal root crush injury in an adult rat as a model to study sensory axon regeneration. This model is suitable for investigating the use of gene therapy to promote sensory axon regeneration.

Sırt kök ganglion Enjeksiyon ve Dorsal Kök Duyusal Axon Rejenerasyon Modeli Olarak Ezilme Yaralanması

Achieving axon regeneration after nervous system injury is a challenging task. As different parts of the central nervous system (CNS) differ from each ...

Analysis of Immune Cells in Single Sciatic Nerves and Dorsal Root Ganglion from a Single Mouse Using Flow Cytometry

Nerve-resident immune cells in the peripheral nervous system (PNS) are essential to maintaining neuronal integrity in a healthy nerve. The immune cells of the PNS are affected by injury and disease, affecting the nerve function and the capacity for regeneration. Neuronal immune cells are commonly analyzed by immunofluorescence (IF). While IF is essential for determining the location of the immune cells in the nerve, IF is only semi-quantitative and the method is limited to the number of markers that can be analyzed simultaneously and the degree of surface expression. In this study, flow cytometry was used for quantitative analysis of leukocyte infiltration into sciatic nerves or dorsal root ganglions (DRGs) of individual mice. Single cell analysis was performed using DAPI and several proteins were analyzed simultaneously for either surface or intracellular expression. Both sciatic nerves from one mouse that were treated according to this protocol generated &#8805; 30,000 single nucleated events. The proportion of leukocytes in the sciatic nerves, determined by expression of CD45, was approximately 5% of total cell content in the sciatic nerve and approximately 5-10% in the DRG. Although this protocol focuses primarily on the immune cell population within the PNS, the flexibility of flow cytometry to measure a number of markers simultaneously means that the other cells populations present within the nerve, such as Schwann cells, pericytes, fibroblasts, and endothelial cells, can also be analyzed using this method. This method therefore provides a new means for studying systemic effects on the PNS, such as neurotoxicology and genetic models of neuropathy or in chronic diseases, such as diabetes.

Quantitative analysis of cell content within the murine sciatic nerve is difficult due to the scarcity of the tissue. This protocol describes a method for tissue digestion and preparation that provides sufficient cells for flow cytometry analysis of immune cell populations from nerves of individual mice.

Bağışıklık hücreleri tek siyatik sinirleri ve Dorsal kök gangliyon üzerinden tek bir fare kullanarak Akış Sitometresi Analizi

Nerve-resident immune cells in the peripheral nervous system (PNS) are essential to maintaining neuronal integrity in a healthy nerve. The immune cells of ...

Dorsal Root Ganglia Isolation and Primary Culture to Study Neurotransmitter Release

Dorsal root ganglia (DRG) contain cell bodies of sensory neurons. This type of neuron is pseudo-unipolar, with two axons that innervate peripheral tissues, such as skin, muscle and visceral organs, as well as the spinal dorsal horn of the central nervous system. Sensory neurons transmit somatic sensation, including touch, pain, thermal, and proprioceptive sensations. Therefore, DRG primary cultures are widely used to study the cellular mechanisms of nociception, physiological functions of sensory neurons, and neural development. The cultured neurons can be applied in studies involving electrophysiology, signal transduction, neurotransmitter release, or calcium imaging. With DRG primary cultures, scientists may culture dissociated DRG neurons to monitor biochemical changes in single or multiple cells, overcoming many of the limitations associated with in vivo experiments. Compared to commercially available DRG-hybridoma cell lines or immortalized DRG neuronal cell lines, the composition and properties of the primary cells are much more similar to sensory neurons in tissue. However, due to the limited number of cultured DRG primary cells that can be isolated from a single animal, it is difficult to perform high-throughput screens for drug targeting studies. In the current article, procedures for DRG collection and culture are described. In addition, we demonstrate the treatment of cultured DRG cells with an agonist of neuropeptide FF receptor type 2 (NPFFR2) to induce the release of peptide neurotransmitters (calcitonin gene-related peptide (CRGP) and substance P (SP)).

Dorsal root ganglia (DRG) primary cultures are frequently used to study physiological functions or pathology-related events in sensory neurons. Here, we demonstrate the use of lumbar DRG cultures to detect the release of neurotransmitters after neuropeptide FF receptor type 2 stimulation with a selective agonist.

Dorsal kök gangliyon yalıtım ve birincil kültür nörotransmitter yayın çalışmaya

Dorsal root ganglia (DRG) contain cell bodies of sensory neurons. This type of neuron is pseudo-unipolar, with two axons that innervate peripheral ...

Investigating Mammalian Axon Regeneration: In Vivo Electroporation of Adult Mouse Dorsal Root Ganglion

Electroporation is an essential non-viral gene transfection approach to introduce DNA plasmids or small RNA molecules into cells. A sensory neuron in the dorsal root ganglion (DRGs) extends a single axon with two branches. One branch goes to the peripheral nerve (peripheral branch), and the other branch enters the spinal cord through the dorsal root (central branch). After the neural injury, the peripheral branch regenerates robustly whereas the central branch does not regenerate. Due to the high regenerative capacity, sensory axon regeneration has been widely used as a model system to study mammalian axon regeneration in both the peripheral nervous system (PNS) and the central nervous system (CNS). Here, we describe a previously established approach protocol to manipulate gene expression in mature sensory neurons in vivo via electroporation. Based on transfection with plasmids or small RNA oligos (siRNAs or microRNAs), the approach allows for both loss- and gain-of-function experiments to study the roles of genes-of-interests or microRNAs in regulation of axon regeneration in vivo. In addition, the manipulation of gene expression in vivo can be controlled both spatially and temporally within a relatively short time course. This model system provides a unique tool to investigate the molecular mechanisms by which mammalian axon regeneration is regulated in vivo.

Investigating Mammalian Axon Regeneration: In Vivo Electroporation of Adult Mouse Dorsal Root Ganglion

Electroporation is an effective approach to deliver genes of interests into cells. By applying this approach in vivo on the neurons of adult mouse dorsal root ganglion (DRG), we describe a model to study axon regeneration in vivo.

Soruşturma memeli Axon rejenerasyon: Vivo Elektroporasyon yetişkin fare Dorsal kök gangliyon

Electroporation is an essential non-viral gene transfection approach to introduce DNA plasmids or small RNA molecules into cells. A sensory neuron in the ...