Bu eser hibe Ernst und Berta Grimmke Stiftung ve Deutsche Ophthalmologische Gesellschaft (köpek) tarafından desteklenmiştir.

Bu çalışmada deneysel prosedürler hayvan bakımı Komitesi, Rheinland-Pfalz tarafından Almanya kabul edildi. Hayvan bakımı hayvan oftalmik kullanımı için vizyon ve Oftalmoloji (ARVO) deyiminde araştırma ve vizyon araştırma için kurumsal yönergeleri ve dernek için standartlarla uyumlu. Hayvanlar göre Avrupa Birliği yönetmeliği uyarınca 2010/63/AB hayvan deneyleri için tedavi edildi. 3-4 ay yaşlı erkek C57BL/6J fareler (Jackson laboratuvar, Bar Harbour, bana, ABD) deneyler için kullanılmıştır. Hayvanlar (sıcaklık 23 ± 2 ° C, nem aralığı 55 ± %10 ve 12 h açık/koyu döngüleri) standart koşullar altında yer alan ve standart fare chow ve su ad libitumyetkisi vardı.
1. yalıtım fare Retina
<ol><li>Diseksiyon aletleri hazırlık masaya koyun ve tüm araçları hızlı bir hazırlık etkinleştirmek için tam olup olmadığını kontrol edin.</li>
	<li>Fare CO2 inhalasyon tarafından kurban.</li>
	<li>Fare ile çelik makas başını kesmek, kafatası sagitally makas aynı çifti kullanarak iki yarısı kesilmiş ve çıkarmak belgili tanımlık deri ve göz makas (şekil 1) kullanarak beyin.</li>
	<li>Sadece orbital kemik göz makası kullanarak terk etmek kafatası kemik kesti.</li>
	<li>Yörünge buz gibi Krebs-Henseleit arabellek içeren bir diseksiyon kabına aktarın.</li>
	<li>Buzda diseksiyon çanak tutmak veya arabellek her 10 min değiştirin.</li>
	<li>Göz makas kullanarak orbital kemik kesme ve yavaşça göz küre ile birlikte orbital doku tipi 4 hassas cımbız ve öğrenci kenasen bahar makas (Şekil 2) kullanarak çıkarın.</li>
	<li>Yavaşça Harderian bezi, bağ dokusu ve Ekstraoküler kaslar türü 5 hassas cımbız ve oftalmik arter Ana dalı zarar vermemeye dikkat çekici kenasen capsulotomy makas kullanarak çıkarın.</li>
	<li>Yörünge oftalmik arter dalları ve sonunda 10-0 naylon dikiş (şekil 3) kullanarak oftalmik arter Ana dalı proksimal sonuna ligate.</li>
	<li>Göz dünyanın 10 s kullanarak türü için 4 hassas cımbız % 70 etanol içeren bir Petri kabına aktarın. Göz dünyanın geri diseksiyon çanak yerleştirin ve arabellek taze Krebs çözüm ile değiştirin. Kornea etanol maruz kaldıktan sonra beyazımsı görünür.</li>
	<li>Periferik kornea ile 30 gauge iğne ponksiyon ve kenasen capsulotomy makas kullanarak kornea incelemek. Yavaşça Iris doku kesmek, bir sivri kenasen capsulotomy makas koroid ve retina arasında yerleştirin ve kestim koroid ve sklera. Optik siniri (şekil 4) etrafında scleral bazı doku bırakın.</li>
</ol>2. montaj perfüzyon odası retinada
Not: Retina arteriyol deneyler için kullanılan perfüzyon dolu bir ev yapımı yer. Şeffaf bir rezervuar bir giriş ve çıkış tüp (şekil 5) ile oluşur. Bir silikon tüp bir ucunu histoacryl yapıştırıcı ve üç yollu stopcock bağlı diğer ucunu ile odası altına yapıştırılmış olan. Üçlü stopcock taze Krebs arabelleğe içeren bir şırınga bağlanmak ve tüp arabellek ile doldurun.
<ol><li>İğne bağı ile bir cam micropipette al ve tüp perfüzyon odası alt sonu içine itin. Sonra micropipette ucu 100 µm çapı bir ipucu elde etmek için tip 4 makasla bölün.</li>
	<li>Micropipette ucunda odak ve şırınga tüp bağlı yolu ile yıkayın. Kılcal enkaz tarafından tıkandı değil iyi bak. Durumunda tıkanıklığı, kaldırmak, tüp Temizleme ve başka bir micropipette ekleyin.</li>
	<li>Perfüzyon odası soğuk Krebs arabellek ile doldurun ve stereo mikroskopla odası koymak.</li>
	<li>Şeffaf plastik platformu perfüzyon odasına koyun. Bu platform için optik sinir ve oftalmik arter 1.8 mm genişlikte bir girinti vardır ve 1.6 mm çapı iki çelik teller üzerinde yer alıyor. Sonra bir paslanmaz çelik yüzük 2.8 mm iç çap ve 4.0 mm dış çap platformu üzerine yerleştirin.</li>
	<li>Optik sinir ve ekli oftalmik arter ile retina diseksiyon odasından perfüzyon odanın içine bir kaşık kullanarak aşırı dikkatli aktarın. Bu adım potansiyel önlemek önemlidir bu deney için zararlı olabilir gibi dokuların germe.</li>
	<li>Oftalmik arter proksimal sonu dikilmiş kısmı kapalı kesmek, iki ön şekillendirilmesi döngüler 10-0 naylon sütür micropipette üzerine yerleştirin ve oftalmik arter micropipette ile cannulate. Arter micropipette (şekil 6) ile kravat ve retina fine-nokta-cımbız kullanarak şeffaf platform üzerine yerleştirin.</li>
	<li>Yavaşça ön lens capsula iki ince nokta cımbız ile açık gözyaşı, lens çekin ve microscissors kullanarak tüm objektif capsula kesti.</li>
	<li>Daha sonra dört Radyal insizyon retina pars plana-Optik siniri yarım uzaklık yapmak ve paslanmaz çelik yüzük altına düzeltmek için retina üzerine yerleştirin. Retina şimdi deneme (Şekil 7) için hazırdır.</li>
</ol>3. deney için retina arteriyoller hazırlanması
<ol><li>Perfüzyon odası ışık mikroskop altında yerleştirin. 100 X su-daldırma objektif lens hedefidir.</li>
	<li>İki makaronlar için içinde - ve çıkış - flow pericyclic pompa için bağlanmak ve % 95'i O2 ile oksijenli ve 37 ° C'de % 5 CO2 gazlı Krebs arabelleği ile odası dolaşımda Bir akış hızı 100 ile 120 mL/dk arasında kullanın.</li>
	<li>Bir rezervuar silikon hortum aracılığıyla için üç yollu stopcock için micropipette bağlı, silikon tüp takın. O zaman, 50 mm Hg için karşılık gelen bir yükseklik Krebs arabelleğe ile rezervuar doldurun ama üçlü stopcock henüz açmayın.</li>
	<li>Mikroskop ve odak retina yüzeyinde amaçlarını bakın. Kan damarları veya kırmızı kan hücreleri için arama. Bu kan damarları tamamen, bazen sadece bazı kırmızı kan hücreleri görülebilir daraltıldığını mümkündür.</li>
	<li>Bir kan damarı bulduğumuzda, üzerinde durulması ve üç yollu stopcock açın. Gemi çapını hemen yükseltmeniz gerekir ve kırmızı kan hücreleri de sentirifüjlü, bir arteriyol ise veya centripetally bir venule durumunda taşıyın. Arteriyoller çapı aynı sırada venüller için karşılaştırıldığında küçüktür.</li>
	<li>İyi görünür bir duvar ile bir kan damarı bulunduktan sonra bir denge döneminden sonra bir 30 dk (şekil 8) deneyler için istihdam edilebilir. Denge döneminde arteriyoller luminal çap küçültme az % 10 kaynaklanan sadece zayıf iç sesi geliştirmek.</li>
</ol>4. deneme gerçekleştirme
<ol><li>Gemi thromboxane mimetic 9,11-dideoxy-9α, 11α-methanoepoxy prostaglandin F2α (U46619) ile canlılık banyo çözüm ekleyerek test. Bu Ajan yaklaşık % 50 oranında çapı ≥ 10 konsantrasyonları dinlenme--dan fare retina arteriyoller bitiminde-6 M.</li>
	<li>Gemi uygun onaylandıktan sonra pompa dolaşan by agonist banyo dışarı yıkama ve banyo içine taze Krebs arabellek kaynağı.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Toda, N., Nakanishi-Toda, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nitric+oxide:+ocular+blood+flow,+glaucoma,+and+diabetic+retinopathy.">Nitric oxide: ocular blood flow, glaucoma, and diabetic retinopathy.</a> Prog Retin Eye Res. 26 (3), 205-238 (2007).</li><li>Schuster, A. K., Fischer, J. E., Vossmerbaeumer, C., Vossmerbaeumer, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optical+coherence+tomography-based+retinal+vessel+analysis+for+the+evaluation+of+hypertensive+vasculopathy.">Optical coherence tomography-based retinal vessel analysis for the evaluation of hypertensive vasculopathy.</a> Acta Ophthalmol. 93 (2), e148-e153 (2015).</li><li>Cherecheanu, A. P., Garhofer, G., Schmidl, D., Werkmeister, R., Schmetterer, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ocular+perfusion+pressure+and+ocular+blood+flow+in+glaucoma.">Ocular perfusion pressure and ocular blood flow in glaucoma.</a> Curr Opin Pharmacol. 13 (1), 36-42 (2013).</li><li>Faraci, F. M., Sigmund, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascular+biology+in+genetically+altered+mice+:+smaller+vessels,+bigger+insight.">Vascular biology in genetically altered mice : smaller vessels, bigger insight.</a> Circ Res. 85 (12), 1214-1225 (1999).</li><li>Kornfield, T. E., Newman, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measurement+of+Retinal+Blood+Flow+Using+Fluorescently+Labeled+Red+Blood+Cells.">Measurement of Retinal Blood Flow Using Fluorescently Labeled Red Blood Cells.</a> eNeuro. 2 (2), (2015).</li><li>Guevara-Torres, A., Joseph, A., Schallek, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Label+free+measurement+of+retinal+blood+cell+flux,+velocity,+hematocrit+and+capillary+width+in+the+living+mouse+eye.">Label free measurement of retinal blood cell flux, velocity, hematocrit and capillary width in the living mouse eye.</a> Biomed Opt Express. 7 (10), 4229-4249 (2016).</li><li>Schallek, J., Geng, Y., Nguyen, H., Williams, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphology+and+topography+of+retinal+pericytes+in+the+living+mouse+retina+using+in+vivo+adaptive+optics+imaging+and+ex+vivo+characterization.">Morphology and topography of retinal pericytes in the living mouse retina using in vivo adaptive optics imaging and ex vivo characterization.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 54 (13), 8237-8250 (2013).</li><li>Gericke, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+the+muscarinic+acetylcholine+receptor+subtype+mediating+cholinergic+vasodilation+in+murine+retinal+arterioles.">Identification of the muscarinic acetylcholine receptor subtype mediating cholinergic vasodilation in murine retinal arterioles.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 52 (10), 7479-7484 (2011).</li><li>Gericke, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+role+of+alpha1-adrenoceptor+subtypes+in+murine+ophthalmic+arteries.">Functional role of alpha1-adrenoceptor subtypes in murine ophthalmic arteries.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 52 (7), 4795-4799 (2011).</li><li>Bohmer, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+alpha(1)B+-adrenoceptor+subtype+mediates+adrenergic+vasoconstriction+in+mouse+retinal+arterioles+with+damaged+endothelium.">The alpha(1)B -adrenoceptor subtype mediates adrenergic vasoconstriction in mouse retinal arterioles with damaged endothelium.</a> Br J Pharmacol. 171 (16), 3858-3867 (2014).</li></ol>

Yazarlar hiçbir rakip mali ilgi alanlarına sahip.

Vasküler fare retina yanıt-e doğru ölçü retina damarları küçük boyutu nedeniyle meydan okuyor. Sunulan tekniği ile retina arteriyoller tarafından iletilen ışık mikroskobu görüntülenir. İzole retina yarı saydam olduğundan bu mümkündür. Teknik yüksek optik çözünürlük avantajdır. Hesaplanan Uzaysal çözünürlük 11 px/µm var. Ancak, beyaz ışık kullanır bu optik sistemi için gerçek çözünürlüğünü Abbe kırınım sınırına göre açıkladı 200 ve 300 nm arasındadır. Fare retina arteriyoller ilk Şubesi 20-30 µm bir iç çapı olduğundan, çapı yaklaşık % 1'lik bu sistemi ile tespit değişikliklerdir. Küçük retina arteriyoller5,6,7görselleştirmek için ek teknik cihazlar veya floresan boyalar olarak bildirilen diğer çalışmalarda gerek yoktur. Teknik eğitilmiş müfettişler tarafından 90-120 dakika arasında uzun hazırlık süresi dezavantajdır. Hazırlık süresi 180 dk aşarsa, endotel fonksiyonları zayıflatılmış başlar.
Bu teknikte çeşitli büyük kritik adımlar vardır. İlk olarak, iyice tüm retrobulbar arter dalları ligate önemlidir. Tüp ligasyonu Eksik ise, retina arteriyoller sızıntı nedeniyle basınçlı değil. İkincisi, 10 için etanol içinde daldırma göz dünya açmadan önce s düz kas reaktivite oftalmik arter devre dışı bırakmak önemlidir. Biz daha önce 10 çeker gösterdi s % 70 etanol içinde tamamen devre dışı bırakır oftalmik arter düz kas8. Buna ek olarak, retina arteriyoller bulber duvar tarafından korunan bu yana doğrudan etanol tarafından etkilenen için olası değildir. Bu adımı ihmal edilirse, çapı değişiklikleri oftalmik arter perfüzyon retina etkileyebilir. Not, oftalmik arter reaktivite belirgin yanıt aynı agonist9,10olarak retina arteriyoller, farklı olabilir. Üçüncü olarak, burulma oftalmik arter kaçının. Özellikle retina hazırlık platformu üzerine montaj sırasında oftalmik arter, Lümen tıkanıklığı içinde kaynaklanan bükülmüş haline. Ayrıca, dikkatle cam kılcal ucu retina arteriyoller basınçlandırma etkinleştirmek için tıkandı değil kontrol edin. Çünkü biz asetilkolin yanıtlarını konsantrasyon-yanıt eğrileri için fazla üç kez tekrar ne zaman zayıf oldu gözlenen aynı retina hazırlık olarak, fazla üç ardışık konsantrasyon-yanıt eğrileri yapmak değil öneririz. Ancak, konsantrasyon-yanıt eğrileri bağlı olarak aracı tekrarlanabilirlik ile ilgili farklılıklar uygulanan ve olabilir, böylece, tek tek test edilmelidir.
Ancak bir servo kontrol pompa kullanarak intraluminal perfüzyon da olabilir biz çalışmalarımız, farmakolojik extraluminally uygulanır. Fare ve sıçanlar da dahil olmak üzere küçük laboratuvar hayvanlarının retinanın vasküler reaktivite yerel mekanizmaları için ölçmek için teknik sağlar beri genetiği değiştirilmiş hayvanlar kullanarak gen hedefleme teknolojisinin avantajı-ebilmek var olmak giriş ile bu yöntem .

Retina perfüzyon bozukluğu diabetik retinopati, hipertansif retinopati ve glokom1,2,3gibi çeşitli oküler hastalıkların patogenezinde karıştığı olmuştur. Böylece, retinanın vasküler reaktivite ölçme amaçlı çalışmalar bu hastalıklar Patofizyoloji anlamak önemlidir ve yeni tedavi geliştirmek için yaklaşımlar.
Fare genom gen manipülasyon olasılığı nedeniyle, fare kardiyovasküler sistem4çalışmaları için yaygın olarak kullanılan bir hayvan modeli haline gelmiştir. Ancak, retina kan damarları (≤ 30 µm) küçük boyutu nedeniyle, fare retinanın vasküler reaktivite ölçümü zordur. Örneğin, in vivo ölçüm için stereomicroscopic teknikleri onların optik çözünürlük sınırlı olduğunu ve bu nedenle tam olarak çapı veya kan akışı ile donatılmış ≤ 30 µm çapı az küçük kan değişiklikleri algılamak için yalnızca izin ver Floresan boyalar veya uyarlamalı optik tarama ışık Ophthalmoscope5,6kullanarak confocal mikroskop gibi ek sofistike aygıtlar. Ayrıca, yerel tanımlama amaçlı vivo içinde ölçümleri yorumlanması mekanizmaları retina kan damarlarında Anesteziyoloji, şaşırmış sinyal sistemik kan basıncı ve etkisi retrobulbar kan damarlarının değiştirir.
Bu nedenle, yüksek optik çözünürlük ex vivoile fare retina kan damarlarının yanıtları ölçmek için bir yöntem geliştirdi. Burada sunulan teknik retinal arteriyoller üzerinden iletilen ışık mikroskobu görselleştirme sağlar. Fareler de kullanılabilir, bu yöntem gen teknolojisi oküler vasküler araştırma hedefleme avantajları erişim sağlar.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Steel Scissors</td>
			<td>Carl Roth GmbH</td>
			<td>3576.1</td>
			<td>1x 140 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eye Scissors</td>
			<td>Geuder</td>
			<td>G-19390</td>
			<td>1x straight, 10.5 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Precision tweezers, straight with fine tips</td>
			<td>Carl Roth GmbH</td>
			<td>LH68.1</td>
			<td>2x type 4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Precision tweezers, straight with extra fine tips</td>
			<td>Carl Roth GmbH</td>
			<td>LH53.1</td>
			<td>2x type 5</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vannas capsulotomy scissors</td>
			<td>Geuder</td>
			<td>19760</td>
			<td>1x straight, 77 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Student Vannas Spring Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>91501-09</td>
			<td>1x curved,</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Barraquer Needle Holder</td>
			<td>Geuder</td>
			<td>G-17500</td>
			<td>1x curved, 120 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle</td>
			<td>Becton, Dickinson and Company</td>
			<td>305128</td>
			<td>1x 30 G</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass Capillaries (for producing micropipettes)</td>
			<td>Drummond Scientific Company</td>
			<td>9-000-1211</td>
			<td>1x (1.2 x 0.8 mm; outer/inner diameter)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nylon Suture</td>
			<td>Alcon</td>
			<td>198001</td>
			<td>1x 10-0</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nunclon cell culture dish</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>153066</td>
			<td>1x 35 mm diameter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nunclon cell culture dish</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>172931</td>
			<td>1x 100 mm diameter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Discofix C</td>
			<td>Braun</td>
			<td>16500C</td>
			<td>10 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Histoacryl adhesive</td>
			<td>B. Braun Surgical, S.A.</td>
			<td>1050052</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pericyclic pump&#160; (CYCLO II)</td>
			<td>Carl Roth GmbH</td>
			<td>EP76.1</td>
			<td>1x</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vertical Pipette Puller Model 700C</td>
			<td>David Kopf Instruments</td>
			<td></td>
			<td>1x</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope (Vanox-T AH-2)</td>
			<td>Olympus</td>
			<td></td>
			<td>1x</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water immersion objective LUMPlanFL, 1.0 NA</td>
			<td>Olympus</td>
			<td></td>
			<td>1x</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital camera (TK-C1381)</td>
			<td>JVC</td>
			<td></td>
			<td>1x</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Perfusion chamber</td>
			<td>self-made</td>
			<td></td>
			<td>1x</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Drugs and Solutions</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Carl Roth GmbH</td>
			<td>K928.4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium chloride dihydrate (CaCl2)</td>
			<td>Carl Roth GmbH</td>
			<td>5239.1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kalium chloride (KCl)</td>
			<td>Carl Roth GmbH</td>
			<td>6781.1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kalium dihydrogen phosphate (KH2PO4)</td>
			<td>Carl Roth GmbH</td>
			<td>3904.2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium sulphate (MgSO4)</td>
			<td>Carl Roth GmbH</td>
			<td>261.2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium chloride (NaCl)</td>
			<td>Carl Roth GmbH</td>
			<td>9265.2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium hydrogen carbonate (NaHCO3)</td>
			<td>Carl Roth GmbH</td>
			<td>0965.3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#945;-(D)-(+)- Glucose monohydrate</td>
			<td>Carl Roth GmbH</td>
			<td>6780.1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>9,11-dideoxy-9&#945;,11&#945;-methanoepoxy prostaglandin F2&#945; (U-46619)</td>
			<td>Cayman Chemical</td>
			<td>16450</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetylcholine chloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A6625-25G</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

preparation steps for measurement of reactivity in mouse retinal arterioles ex vivo

Vasküler yetmezlik ve normal retina perfüzyon değişiklikler için çeşitli görme tehdit oküler hastalıklar, Diyabetik retinopati, hipertansif retinopati ve muhtemelen glokom gibi patogenezinde önemli faktörler arasındadır. Bu nedenle, retina mikrovasküler hazırlıklar önemli fizyolojik ve farmakolojik araştırmalar temel patofizyolojik mekanizmaları betimlemek ve hastalıklar için tasarım terapiler için araçlardır. Oftalmik araştırma fare modellerinde geniş kullanılmasına rağmen retinal vasküler reaktivite çalışmaları bu tür azdır. Bu retina kan damarları olan küçük boyutu sayesinde zorlu yalıtım yordamlar büyük sebebi bu tutarsızlık ~ ≤ 30 µm luminal çapındadır. Fare retina vasoactivity-fizyolojik koşullar altında ex vivo çalışmalar sağlar bir yalıtım ve hazırlama tekniği kurduk bu retina yüzdeki fonksiyonel çalışmalar için doğrudan yalıtım sorunu aşmak için . Her ne kadar mevcut deneysel hazırlıklar özellikle fare retina arteriyoller sevk edecektir, bu metodoloji kolayca yüzdeki için sıçanlarından emir istihdam edilebilir.

U-46619 retina arteriyoller konsantrasyon bağımlı vasoconstrictor yanıtlarında vahşi tipi fareler C57Bl/6J arka plan üzerinden üretti. 10-6 M konsantrasyon istirahat çapı ≈50% luminal çapı azalma oldu. Þekil 9A bir retina arteriyol bir temsilcisi konsantrasyon-yanıt eğrisini gösterir. U46619 ile preconstricted arteriyoller içinde asetilkolin toplu yönetim luminal çapı artışlar konsantrasyon bağımlı ≈25% preconstricted çapı 10-5 M, bir bozulmamış vasküler endotel () gösterge, üzerinden uyarılmış Şekil 9B).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56199/56199fig1.jpg"> Şekil 1: fare kafatası diseksiyon. Deri kesik fare kafasına gözleri ve orbital boşluğu ortaya çıkarmak için kaldırılır. <a href="https://cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56199/56199fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56199/56199fig2.jpg"> Şekil 2: yalıtım göz Küre ve orbital doku. Orbital kemik göz makas ve göz küre ile birlikte retrobulbar dokular ile kesilmiş ve optik sinir dikkatli bir şekilde izole edildi. <a href="https://cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56199/56199fig2large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56199/56199fig3.jpg"> Şekil 3: göz Küre ve oftalmik arter hazırlanması. Çevre yörünge dokular ile iyi microscissors disseke, oftalmik arter dikkatle maruz kalmış ve 10-0 naylon monofilament dikiş ile küçük şubeleri bakmaksızın. <a href="https://cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56199/56199fig3large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56199/56199fig4.jpg"> Şekil 4: oküler yapıları diseksiyon. Retina görselleştirmek için sklera ve uvea kenasen capsulotomy makas ile disseke. Optik siniri etrafında scleral bazı doku zarar oftalmik arter önlemek zorunda kalmıştı. <a href="https://cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56199/56199fig4large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56199/56199fig5.jpg"> Şekil 5: Organ odası için gerçek zamanlı video mikroskobu. Odası ev yapıldı. Bir petri 100 mm çapında bir içinde - ve çıkış - flow tüp ile oluşuyordu. Tüpler histoacryl yapıştırıcı ile yapıştırılmış. Dışarıdan oksijenli ve gazlı Krebs-Henseleit arabellek Peristaltik pompa bu tüpler aracılığıyla dağıtılan. Bir silikon tüp bir ucunu odası ve üç yollu stopcock bağlı diğer ucunu altına yapıştırılmış. Tüp sonunda hangi oftalmik arter cannulation için devam eder bir cam micropipette 100 µm ucu ile eklenmiştir. Silikon tüp Krebs arabelleği için 50 mm Hg. karşılık gelen bir seviyeye ile bir silikon tüp doldurarak oftalmik dolaşım basınç altında <a href="https://cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56199/56199fig5large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56199/56199fig6.jpg"> Şekil 6: Cannulation oftalmik arter. Oftalmik arter cam micropipette ile cannulated ve 10-0 naylon dikiş ile dikmiş. <a href="https://cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56199/56199fig6large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 7" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56199/56199fig7.jpg"> Şekil 7: Cannulation oftalmik arter. Retina şeffaf platform üzerine yerleştirerek sonra kapsüler çanta ile objektif kaldırıldı, dört Radyal insizyon retina yapılan ve yüzük 2.8 mm iç çap ve 4.0 mm dış çaplı paslanmaz çelikten b düzeltmek için retina üzerine yerleştirildi alttan. Retina sonra deneme için hazır. <a href="https://cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56199/56199fig7large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 8" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56199/56199fig8.jpg"> Şekil 8: görselleştirme retina kan damarlarının. Bir örnek retina arteriyol ile kırmızı kan hücreleri içinde.
<img alt="Figure 9" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56199/56199fig9.jpg"> Şekil 9: fonksiyonel çalışmalar kullanarak video mikroskobu. Tek bir retina arteriyol gelen temsilcisi konsantrasyon yanıt eğrileri. (A) konsantrasyon-yanıt eğrisi vasoconstrictor, U46619 için (10-9 10-6 M için), (B) ve endotel bağımlı vazodilatör, asetilkolin (10-8 10-5 M için). <a href="https://cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56199/56199fig9large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Preparation Steps for Measurement of Reactivity in Mouse Retinal Arterioles Ex Vivo at JoVE.com

Preparation Steps for Measurement of Reactivity in Mouse Retinal Arterioles Ex Vivo

Vizyon tehdit eden birçok oküler hastalıklar işlevsel olmayan retina yüzdeki ile ilişkilidir. Bu nedenle, retina arteriyol yanıt ölçümü temel patofizyolojik mekanizmaları araştırmak önemlidir. Bu makalede fare retina arteriyol yalıtım ve damar çapı vazoaktif maddelerin etkilerini değerlendirmek için hazırlık için detaylı bir iletişim kuralı.

Fare retina arteriyoller Ex Vivo reaktivite ölçümü için hazırlık adımları

Vascular insufficiency and alterations in normal retinal perfusion are among the major factors for the pathogenesis of various sight-threatening ocular ...

preparation-steps-for-measurement-reactivity-mouse-retinal-arterioles

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Medicine

Preparation Steps for Measurement of Reactivity in Mouse Retinal Arterioles Ex Vivo

7.1K Görüntüleme.  University Medical Center of the Johannes Gutenberg University Mainz. Vizyon tehdit eden birçok oküler hastalıklar işlevsel olmayan retina yüzdeki ile ilişkilidir. Bu nedenle, retina arteriyol yanıt ölçümü temel patofizyolojik mekanizmaları araştırmak önemlidir. Bu makalede fare retina arteriyol yalıtım ve damar çapı vazoaktif maddelerin etkilerini değerlendirmek için hazırlık için detaylı bir iletişim kuralı.

Video: Preparation Steps for Measurement of Reactivity in Mouse Retinal Arterioles Ex Vivo

Ex Vivo Infection of Live Tissue with Oncolytic Viruses

Oncolytic Viruses (OVs) are novel therapeutics that selectively replicate in and kill tumor cells1. Several clinical trials evaluating the effectiveness of a variety of oncolytic platforms including HSV, Reovirus, and Vaccinia OVs as treatment for cancer are currently underway2-5. One key characteristic of oncolytic viruses is that they can be genetically modified to express reporter transgenes which makes it possible to visualize the infection of tissues by microscopy or bio-luminescence imaging6,7. This offers a unique advantage since it is possible to infect tissues from patients ex vivo prior to therapy in order to ascertain the likelihood of successful oncolytic virotherapy8. To this end, it is critical to appropriately sample tissue to compensate for tissue heterogeneity and assess tissue viability, particularly prior to infection9. It is also important to follow viral replication using reporter transgenes if expressed by the oncolytic platform as well as by direct titration of tissues following homogenization in order to discriminate between abortive and productive infection. The object of this protocol is to address these issues and herein describes 1. The sampling and preparation of tumor tissue for cell culture 2. The assessment of tissue viability using the metabolic dye alamar blue 3. Ex vivo infection of cultured tissues with vaccinia virus expressing either GFP or firefly luciferase 4. Detection of transgene expression by fluorescence microscopy or using an In Vivo Imaging System (IVIS) 5. Quantification of virus by plaque assay. This comprehensive method presents several advantages including ease of tissue processing, compensation for tissue heterogeneity, control of tissue viability, and discrimination between abortive infection and bone fide viral replication.

Ex Vivo Infection of Live Tissue with Oncolytic Viruses

Oncolytic viruses are promising for cancer therapeutics. The ability to ascertain the infectability of live tissue specimens obtained from patients prior to treatment is a unique advantage of this therapeutic approach. This protocol describes how to process tissues for ex vivo infection with oncolytic virus and subsequent viral quantification.

Ex Vivo Enfeksiyon Oncolytic Virüsler Canlı Doku

Oncolytic Viruses (OVs) are novel therapeutics that selectively replicate in and kill tumor cells1. Several clinical trials evaluating the effectiveness ...

Tıp

In vivo Measurement of the Mouse Pulmonary Endothelial Surface Layer

The endothelial glycocalyx is a layer of proteoglycans and associated glycosaminoglycans lining the vascular lumen. In vivo, the glycocalyx is highly hydrated, forming a substantial endothelial surface layer (ESL) that contributes to the maintenance of endothelial function. As the endothelial glycocalyx is often aberrant in vitro and is lost during standard tissue fixation techniques, study of the ESL requires use of intravital microscopy. To best approximate the complex physiology of the alveolar microvasculature, pulmonary intravital imaging is ideally performed on a freely-moving lung. These preparations, however, typically suffer from extensive motion artifact. We demonstrate how closed-chest intravital microscopy of a freely-moving mouse lung can be used to measure glycocalyx integrity via ESL exclusion of fluorescently-labeled high molecular weight dextrans from the endothelial surface. This non-recovery surgical technique, which requires simultaneous brightfield and fluorescent imaging of the mouse lung, allows for longitudinal observation of the subpleural microvasculature without evidence of inducing confounding lung injury.

In vivo Measurement of the Mouse Pulmonary Endothelial Surface Layer

The endothelial glycocalyx/endothelial surface layer is ideally studied using intravital microscopy. Intravital microscopy is technically challenging in a moving organ such as the lung. We demonstrate how simultaneous brightfield and fluorescent microscopy may be used to estimate endothelial surface layer thickness in a freely-moving in vivo mouse lung.

Fare Pulmoner Endotelyal Yüzey Katman in vivo ölçümü olarak

The endothelial glycocalyx is a layer of proteoglycans and associated glycosaminoglycans lining the vascular lumen. In vivo, the glycocalyx is highly ...

Steps for the Autologous Ex vivo Perfused Porcine Liver-kidney Experiment

The use of ex vivo perfused models can mimic the physiological conditions of the liver for short periods, but to maintain normal homeostasis for an extended perfusion period is challenging. We have added the kidney to our previous ex vivo perfused liver experiment model to reproduce a more accurate physiological state for prolonged experiments without using live animals. Five intact livers and kidneys were retrieved post-mortem from sacrificed pigs on different days and perfused for a minimum of 6 hr. Hourly arterial blood gases were obtained to analyze pH, lactate, glucose and renal parameters. The primary endpoint was to investigate the effect of adding one kidney to the model on the acid base balance, glucose, and electrolyte levels. The result of this liver-kidney experiment was compared to the results of five previous liver only perfusion models. In summary, with the addition of one kidney to the ex vivo liver circuit, hyperglycemia and metabolic acidosis were improved. In addition this model reproduces the physiological and metabolic responses of the liver sufficiently accurately to obviate the need for the use of live animals. The ex vivo liver-kidney perfusion model can be used as an alternative method in organ specific studies. It provides a disconnection from numerous systemic influences and allows specific and accurate adjustments of arterial and venous pressures and flow.

Steps for the Autologous Ex vivo Perfused Porcine Liver-kidney Experiment

Study of the animal organ physiology can be achieved by performing an experimental ex vivo perfusion system. The addition of a porcine kidney, as a homeostatic organ to our previously developed ex vivo liver perfusion model can be a principal step to achieve a better physiological environment.

The use of ex vivo perfused models can mimic the physiological conditions of the liver for short periods, but to maintain normal homeostasis for an ...

In vivo 19F MRI for Cell Tracking

In vivo 19F MRI allows quantitative cell tracking without the use of ionizing radiation. It is a noninvasive technique that can be applied to humans. Here, we describe a general protocol for cell labeling, imaging, and image processing. The technique is applicable to various cell types and animal models, although here we focus on a typical mouse model for tracking murine immune cells. The most important issues for cell labeling are described, as these are relevant to all models. Similarly, key imaging parameters are listed, although the details will vary depending on the MRI system and the individual setup. Finally, we include an image processing protocol for quantification. Variations for this, and other parts of the protocol, are assessed in the Discussion section. Based on the detailed procedure described here, the user will need to adapt the protocol for each specific cell type, cell label, animal model, and imaging setup. Note that the protocol can also be adapted for human use, as long as clinical restrictions are met.

In vivo 19F MRI for Cell Tracking

We describe a general protocol for in vivo cell tracking using MRI in a mouse model with ex vivo labeled cells. A typical protocol for cell labeling, image acquisition processing and quantification is included.

Hücre Takip için vivo 19 F MRG

In vivo 19F MRI allows quantitative cell tracking without the use of ionizing radiation. It is a noninvasive technique that can be applied to humans. ...

An Ex vivo Model to Study Hormone Action in the Human Breast

The study of hormone action in the human breast has been hampered by lack of adequate model systems. Upon in vitro culture, primary mammary epithelial cells tend to lose hormone receptor expression. Widely used hormone receptor positive breast cancer cell lines are of limited relevance to the in vivo situation. Here, we describe an ex vivo model to study hormone action in the human breast. Fresh human breast tissue specimens from surgical discard material such as reduction mammoplasties or mammectomies are mechanically and enzymatically digested to obtain tissue fragments containing ducts and lobules and multiple stromal cell types. These tissue microstructures kept in basal medium without growth factors preserve their intercellular contacts, the tissue architecture, and remain hormone responsive for several days. They are readily processed for RNA and protein extraction, histological analysis or stored in freezing medium. Fluorescence activated cell sorting (FACS) can be used to enrich for specific cell populations. This protocol provides a straightforward, standard approach for translational studies with highly complex, varied human specimens.

An Ex vivo Model to Study Hormone Action in the Human Breast

We have developed a novel ex vivo model to study hormone action in the human breast. It is based on tissue microstructures isolated from surgical breast tissue specimens which preserve tissue architecture, intercellular interactions, and paracrine signaling.

Bir<em&gt; Ex vivo</em&gt; Model İnsan Meme Hormon Eylem Eğitim için

The study of hormone action in the human breast has been hampered by lack of adequate model systems. Upon in vitro culture, primary mammary epithelial ...

In Vivo Dynamics of Retinal Microglial Activation During Neurodegeneration: Confocal Ophthalmoscopic Imaging and Cell Morphometry in Mouse Glaucoma

Microglia, which are CNS-resident neuroimmune cells, transform their morphology and size in response to CNS damage, switching to an activated state with distinct functions and gene expression profiles. The roles of microglial activation in health, injury and disease remain incompletely understood due to their dynamic and complex regulation in response to changes in their microenvironment. Thus, it is critical to non-invasively monitor and analyze changes in microglial activation over time in the intact organism. In vivo studies of microglial activation have been delayed by technical limitations to tracking microglial behavior without altering the CNS environment. This has been particularly challenging during chronic neurodegeneration, where long-term changes must be tracked. The retina, a CNS organ amenable to non-invasive live imaging, offers a powerful system to visualize and characterize the dynamics of microglia activation during chronic disorders.
This protocol outlines methods for long-term, in vivo imaging of retinal microglia, using confocal ophthalmoscopy (cSLO) and CX3CR1GFP/+ reporter mice, to visualize microglia with cellular resolution. Also, we describe methods to quantify monthly changes in cell activation and density in large cell subsets (200-300 cells per retina). We confirm the use of somal area as a useful metric for live tracking of microglial activation in the retina by applying automated threshold-based morphometric analysis of in vivo images. We use these live image acquisition and analyses strategies to monitor the dynamic changes in microglial activation and microgliosis during early stages of retinal neurodegeneration in a mouse model of chronic glaucoma. This approach should be useful to investigate the contributions of microglia to neuronal and axonal decline in chronic CNS disorders that affect the retina and optic nerve.

In Vivo Dynamics of Retinal Microglial Activation During Neurodegeneration: Confocal Ophthalmoscopic Imaging and Cell Morphometry in Mouse Glaucoma

Microglia activation and microgliosis are key responses to chronic neurodegeneration. Here, we present methods for in vivo, long-term visualization of retinal CX3CR1-GFP+ microglial cells by confocal ophthalmoscopy, and for threshold and morphometric analyses to identify and quantify their activation. We monitor microglial changes during early stages of age-related glaucoma.

Fare Glokomda Konfokal Oftalmoskopik Görüntüleme ve Hücre morfometrisi: Nörodejenerasyonda sırasında Retina Mikroglial Aktivasyonu Vivo Dynamics

Microglia, which are CNS-resident neuroimmune cells, transform their morphology and size in response to CNS damage, switching to an activated state with ...

Depletion of Mouse Cells from Human Tumor Xenografts Significantly Improves Downstream Analysis of Target Cells

The use of in vitro cell line models for cancer research has been a useful tool. However, it has been shown that these models fail to reliably mimic patient tumors in different assays1. Human tumor xenografts represent the gold standard with respect to tumor biology, drug discovery, and metastasis research 2-4. Tumor xenografts can be derived from different types of material like tumor cell lines, tumor tissue from primary patient tumors4 or serially transplanted tumors. When propagated in vivo, xenografted tissue is infiltrated and vascularized by cells of mouse origin. Multiple factors such as the tumor entity, the origin of xenografted material, growth rate and region of transplantation influence the composition and the amount of mouse cells present in tumor xenografts. However, even when these factors are kept constant, the degree of mouse cell contamination is highly variable.
Contaminating mouse cells significantly impair downstream analyses of human tumor xenografts. As mouse fibroblasts show high plating efficacies and proliferation rates, they tend to overgrow cultures of human tumor cells, especially slowly proliferating subpopulations. Mouse cell derived DNA, mRNA, and protein components can bias downstream gene expression analysis, next-generation sequencing, as well as proteome analysis 5. To overcome these limitations, we have developed a fast and easy method to isolate untouched human tumor cells from xenografted tumor tissue. This procedure is based on the comprehensive depletion of cells of mouse origin by combining automated tissue dissociation with the benchtop tissue dissociator and magnetic cell sorting. Here, we demonstrate that human target cells can be can be obtained with purities higher than 96% within less than 20 min independent of the tumor type.

Human tumor xenografts are vascularized and infiltrated by cells of mouse origin during the growth phase in vivo. To circumvent the bias caused by these contaminating cells during downstream analysis, we developed a method allowing for comprehensive depletion of all mouse cells by magnetic cell sorting.

İnsan Tümör ksenogratflarının gelen Fare Hücrelerinin tükenmesi Anlamlı Hedef Hücre Alt Analizi geliştirir

The use of in vitro cell line models for cancer research has been a useful tool. However, it has been shown that these models fail to reliably mimic ...

Echocardiographic Measurement of Right Ventricular Diastolic Parameters in Mouse

Diastolic dysfunction is a prominent feature of right ventricular (RV) remodeling associated with conditions of pressure overload. However, the RV diastolic function is rarely quantified in experimental studies. This might be due to technical difficulties in the visualization of the RV in the apical four-chamber view in rodents. Here we describe two positions facilitating the visualization of the apical four-chamber view in mice to assess the RV diastolic function.
The apical four-chamber view is enabled by tilting the mouse fixation platform to the left and caudally (LeCa) or to the right and cranially (RiCr). Both positions provide images of comparable quality. The results of the RV diastolic function obtained from two positions are not significantly different. Both positions are comparably easy to perform. This protocol can be incorporated into published protocols and enables detailed investigations of the RV function.

Here we describe and compare two positions for obtaining the apical four-chamber view in mice. These positions enable the quantification of the right ventricular function, provide comparable results, and can be used interchangeably.

Fareyle sağ ventriküler diyastolik parametrelerin ekokardiyografik ölçümü

Diastolic dysfunction is a prominent feature of right ventricular (RV) remodeling associated with conditions of pressure overload. However, the RV ...

An Ex Vivo Tissue Culture Model for Fibrovascular Complications in Proliferative Diabetic Retinopathy

Diabetic retinopathy (DR) is the most common microvascular complication of diabetes and one of the leading causes of blindness in working-age adults. No current animal models of diabetes and oxygen-induced retinopathy develop the full-range progressive changes manifested in human proliferative diabetic retinopathy (PDR). Therefore, understanding of the disease pathogenesis and pathophysiology has relied largely on the use of histological sections and vitreous samples in approaches that only provide steady-state information on the involved pathogenic factors. Increasing evidence indicates that dynamic cell-cell and cell-extracellular matrix (ECM) interactions in the context of three-dimensional (3D) microenvironments are essential for the mechanistic and functional studies towards the development of new treatment strategies. Therefore, we hypothesized that the pathological fibrovascular tissue surgically excised from eyes with PDR could be utilized to reliably unravel the cellular and molecular mechanisms of this devastating disease and to test the potential for novel clinical interventions. Towards this end, we developed a novel method for 3D ex vivo culture of surgically-excised patient-derived fibrovascular tissue (FT), which will serve as a relevant model of human PDR pathophysiology. The FTs are dissected into explants and embedded in fibrin matrix for ex vivo culture and 3D characterization. Whole-mount immunofluorescence of the native FTs and end-point cultures allows thorough investigation of tissue composition and multicellular processes, highlighting the importance of 3D tissue-level characterization for uncovering relevant features of PDR pathophysiology. This model will allow the simultaneous assessment of molecular mechanisms, cellular/tissue processes and treatment responses in the complex context of dynamic biochemical and physical interactions within the PDR tissue architecture and microenvironment. Since this model recapitulates PDR pathophysiology, it will also be amenable for testing or developing new treatments.

Here, we present a protocol to study the pathophysiology of proliferative diabetic retinopathy by using patient-derived, surgically-excised, fibrovascular tissues for three-dimensional native tissue characterization and ex vivo culture. This ex vivo culture model is also amenable for testing or developing new treatments.

Bir Ex Vivo doku kültürü modeli Fibrovascular komplikasyon proliferatif diyabetik retinopati

Diabetic retinopathy (DR) is the most common microvascular complication of diabetes and one of the leading causes of blindness in working-age adults. No ...

Preparation Of Gushukang (GSK) Granules for In Vivo and In Vitro Experiments

Traditional Chinese herbal medicine plays a role as an alternative method in treating many diseases, such as postmenopausal osteoporosis (POP). Gushukang (GSK) granules, a marketed prescription in China, have bone-protective effects in treating POP. Before administration to the body, one standard preparation procedure is commonly required, which aims to promote the release of active constituents from raw herbs and enhance the pharmacological effects as well as therapeutic outcomes. This study proposes a detailed protocol for using GSK granules in in vivo and in vitro experimental assays. The authors first provide a detailed protocol to calculate the animal-appropriate dosages of granules for in vivo investigation: weighing, dissolving, storage, and administration. Second, this article describes protocols for micro-CT scanning and the measurement of bone parameters. Sample preparation, protocols for running the micro-CT machine and quantification of bone parameters were evaluated. Third, serum-containing GSK granules are prepared, and drug-containing serum is extracted for in vitro osteoclastogenesis and osteoblastogenesis. GSK granules were intragastrically administered twice per day to rats for three consecutive days. Blood was then collected, centrifuged, inactivated, and filtered. Finally, serum was diluted and used for performing osteoclastogenesis and osteoblastogenesis. The protocol described here can be considered a reference for pharmacological investigations of herbal prescription medicines, such as granules.

Preparation Of Gushukang GSK Granules for In Vivo and In Vitro Experiments

This article provides a detailed protocol for preparing a working solution of Gushukang granules for animal studies and GSK granule containing serum for in vitro experiments. This protocol can be applied to pharmacological investigations of herbal medicines as well as prescriptions for both in vivo and in vitro experiments.

In vivo ve In vitro deneyler için Gushukang (GSK) granül hazırlanması

Traditional Chinese herbal medicine plays a role as an alternative method in treating many diseases, such as postmenopausal osteoporosis (POP). Gushukang ...