이 작품은 도이치 Ophthalmologische 분야 (개)와 에른스트 und Berta Grimmke 재단에서 교부 금에 의해 지원 되었다.

이 연구의 실험 절차에 의해는 동물 관리 위원회의 라인란트-Palatinate, 독일 승인 되었다. 동물 보호 안과에서 동물의 사용에 대 한 비전과 안과 (ARVO) 성명에서 연구 및 비전 연구 기관 지침 및 협회에 맞 췄 나. 동물 동물 실험에 대 한 EU 지침 2010/63/EU에 따라 치료 했다. 남성 C57BL/6J 쥐 (The 잭슨 실험실, 바 하버, 나, 미국) 3-4 개월을 세는 실험을 위해 사용 되었다. 동물 표준 조건 (온도 23 ± 2 ° C, 습도 범위 55 ± 10% 및 12 h 명암 주기), 유 숙 했다 그리고 표준 마우스 차 우와 물 광고 libitum에 접근 했다.
1입니다. 마우스 망막의 분리
<ol><li>해 부 악기를 준비 테이블에 놓고 모든 악기 가능 빠른 준비 완료 확인 합니다.</li>
	<li>CO2 흡입에 의해 마우스를 희생.</li>
	<li>스틸가 위 마우스를 목을 벨, 두개골 sagitally가 위의 동일한 쌍을 사용 하 여 두 개의 반쪽으로 잘라 고 피부와 뇌 눈이 위 (그림 1)를 사용 하 여 제거 합니다.</li>
	<li>눈이 위를 사용 하 여 궤도 뼈를 떠나 두개골 뼈를 잘라.</li>
	<li>얼음 처럼 차가운 Krebs Henseleit 버퍼를 포함 하는 해 부 접시에 궤도 전송 합니다.</li>
	<li>얼음에 해 부 접시를 유지 하거나 변경할 버퍼 마다 10 분.</li>
	<li>눈이 위를 사용 하 여 궤도 뼈를 잘라내어 눈 지구 궤도 조직 유형 4 정밀 핀셋과 학생 욕실이 봄이 위 (그림 2)를 사용 하 여 함께 제거.</li>
	<li>부드럽게 Harderian 선, 결합 조직, 그리고 안구 근육 유형 5 정밀 핀셋과 안과 동맥의 주요 분기를 손상 하지 않도록 주의 복용 욕실이 capsulotomy가 위를 사용 하 여 제거 합니다.</li>
	<li>궤도 안과 동맥의 지점과 결국 10-0 나일론 봉합 (그림 3)를 사용 하 여 안과 동맥의 주요 지점의 인접 끝 선.</li>
	<li>10 s 사용 하 여 입력 4 정밀 핀셋에 대 한 70% 에탄올을 포함 하는 배양 접시에 눈 세계를 전송 합니다. 해 부 접시에 다시 눈 지구를 놓고 신선한 Krebs 솔루션으로 버퍼를 대체 합니다. 각 막 에탄올 노출 후 약간 흰 나타납니다.</li>
	<li>주변 막 30 게이지 바늘으로 찔린 고 욕실이 capsulotomy가 위를 사용 하 여 각 막 해 부. 부드럽게 잘라 아이리스 조직, 맥락 막과 망막 사이 욕실이 capsulotomy가 위 한 날카로운 시점 놓고 맥락 막 및 공 막 잘라. (그림 4) 시 신경 주위 scleral 조직 일부를 남겨 주세요.</li>
</ol>2. 망막 관류 챔버에 장착
참고: 망막 되 실험을 위해 사용 하는 관류 챔버는 집에서 만든. -및 유출 관 (그림 5)와 함께 투명 한 저수지 그것에 의하여 이루어져 있다. 실리콘 튜브의 한쪽 끝은 histoacryl 접착제와 3 방향 자 지에 연결 된 반대쪽 챔버의 바닥에 붙어 됩니다. 3 방향 자 지에 신선한 Krebs 버퍼를 포함 하는 주사기를 연결 하 고 버퍼와 튜브를 작성.
<ol><li>바늘 홀더를 가진 유리 제 micropipette 고 관류 챔버의 하단 튜브의 끝에 그것을 밀어. 다음 100 µ m 직경의 팁을 얻기 위해가 위 종류 4는 micropipette의 팁을 휴식.</li>
	<li>micropipette 끝에 집중 하 고 통해 주사기 튜브에 연결 그것을 플러시. 모 세관 파편에 의해 가려진 하지 주의. 폐색, 경우 그것을 제거 하 고 튜브를 플러시 다른 micropipette 삽입.</li>
	<li>차가운 Krebs 버퍼 관류 챔버와 스테레오 현미경 챔버를 넣어.</li>
	<li>관류 챔버에 투명 한 플라스틱 플랫폼을 놓습니다. 이 플랫폼은 시 신경 및 눈 동맥에 대 한 1.8 m m 폭의 들여쓰기 하 고 1.6 m m 직경의 2 개의 강철 와이어에 배치 됩니다. 다음, 2.8 m m 내경 및 플랫폼에 4.0 m m 외부 직경의 스테인레스 스틸 반지 장소.</li>
	<li>숟가락을 사용 하 여 주의 해 부 챔버 관류 챔버로 망막 시 신경 및 연결 된 안과 동맥 전송. 이 단계는 가능성을 방지 하기 위해 중요 한 조직의 스트레칭으로 실험에 해로운 수 있습니다.</li>
	<li>안과 동맥의 근 위 끝의 sutured 부분을, 장소는 micropipette에 10-0 나일론 봉합의 두 미리 형성한 루프 잘라내어는 micropipette와 안과 동맥을 cannulate. Micropipette (그림 6)에 동맥 고 괜 찮 아 요-포인트-핀셋을 사용 하 여 투명 한 플랫폼에 망막을 놓습니다.</li>
	<li>부드럽게 두 괜 찮 포인트 핀셋으로 앞쪽 렌즈 capsula을 열고 눈물, 렌즈를 꺼내와 microscissors를 사용 하 여 전체 렌즈 capsula를 잘라.</li>
	<li>그 후, 망막 시 신경에 동위 플에서 절반 거리에 4 개의 방사형 절 개를 확인 하 고 바닥에 그것을 해결 하기 위해 망막에는 스테인레스 스틸 반지를 배치. 망막은 이제 실험 (그림 7)에 대 한 준비.</li>
</ol>3. 실험에 대 한 망막 Arterioles의 준비
<ol><li>가벼운 현미경 관류 챔버를 놓습니다. 목표는 100 X 물 침수 렌즈입니다.</li>
	<li>Pericyclic 펌프는 두 개의 튜브에 대 한에-및 아웃-flow를 연결 하 고 95% O2 산소 하 고 37 ° c.에 5% CO2 탄산 Krebs 버퍼와 챔버를 순환 100 사이 120 mL/min 유량을 사용 합니다.</li>
	<li>저수지 실리콘 호스를 통해 3 방향 자 지에는 micropipette에 연결 된 실리콘 튜브를 연결 합니다. 그런 다음 Krebs 버퍼 높이 50 mm Hg에 해당 하는 저수지를 채울 하지만 3 방향 자 지 아직 열지 마십시오.</li>
	<li>현미경과 망막 표면에 초점의 목표 통해 보세요. 혈관 또는 붉은 혈액 세포에 대 한 검색. 혈관은 완전히 붕괴, 그래서 때로는 일부 붉은 혈액 세포를 볼 수 있습니다만 가능 하다.</li>
	<li>혈관 발견 되 면 그것에 집중 하 고 3 방향 자 지를 엽니다. 혈관의 직경은 즉시 증가 해야 하 고 붉은 혈액 세포 이동 중 배, 한 되는 경우 또는 centripetally는 venule 경우. arterioles 직경 venules의 순서에 비해 작은 수 있습니다.</li>
	<li>잘 보이는 벽 혈관 발견 되 면 그것은 30 분 (그림 8)의 재래식 기간 뒤 실험에 대 한 사용할 수 있습니다. 재래식 기간 동안는 arterioles 결과 luminal 직경 감소 10% 미만에 약한 내장 음색을 개발 합니다.</li>
</ol>4. 실험 수행
<ol><li>목욕 솔루션에 추가 하 여는 thromboxane 모방 9,11-미치기-9α, 11α methanoepoxy 스타 글란 딘 F2α (U46619)와 혈관의 생존 능력을 테스트 합니다. 이 에이전트는 ≥ 10의 농도에서 휴식 하는 직경에서 약 50% 마우스 망막 arterioles 수축-6 M.</li>
	<li>일단 그릇은 가능한 확인, 순환 펌프에 의해 목욕에서 길 항 제를 세척 하 고 목욕으로 신선한 Krebs 버퍼를 공급.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Toda, N., Nakanishi-Toda, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nitric+oxide:+ocular+blood+flow,+glaucoma,+and+diabetic+retinopathy.">Nitric oxide: ocular blood flow, glaucoma, and diabetic retinopathy.</a> Prog Retin Eye Res. 26 (3), 205-238 (2007).</li><li>Schuster, A. K., Fischer, J. E., Vossmerbaeumer, C., Vossmerbaeumer, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optical+coherence+tomography-based+retinal+vessel+analysis+for+the+evaluation+of+hypertensive+vasculopathy.">Optical coherence tomography-based retinal vessel analysis for the evaluation of hypertensive vasculopathy.</a> Acta Ophthalmol. 93 (2), e148-e153 (2015).</li><li>Cherecheanu, A. P., Garhofer, G., Schmidl, D., Werkmeister, R., Schmetterer, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ocular+perfusion+pressure+and+ocular+blood+flow+in+glaucoma.">Ocular perfusion pressure and ocular blood flow in glaucoma.</a> Curr Opin Pharmacol. 13 (1), 36-42 (2013).</li><li>Faraci, F. M., Sigmund, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascular+biology+in+genetically+altered+mice+:+smaller+vessels,+bigger+insight.">Vascular biology in genetically altered mice : smaller vessels, bigger insight.</a> Circ Res. 85 (12), 1214-1225 (1999).</li><li>Kornfield, T. E., Newman, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measurement+of+Retinal+Blood+Flow+Using+Fluorescently+Labeled+Red+Blood+Cells.">Measurement of Retinal Blood Flow Using Fluorescently Labeled Red Blood Cells.</a> eNeuro. 2 (2), (2015).</li><li>Guevara-Torres, A., Joseph, A., Schallek, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Label+free+measurement+of+retinal+blood+cell+flux,+velocity,+hematocrit+and+capillary+width+in+the+living+mouse+eye.">Label free measurement of retinal blood cell flux, velocity, hematocrit and capillary width in the living mouse eye.</a> Biomed Opt Express. 7 (10), 4229-4249 (2016).</li><li>Schallek, J., Geng, Y., Nguyen, H., Williams, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphology+and+topography+of+retinal+pericytes+in+the+living+mouse+retina+using+in+vivo+adaptive+optics+imaging+and+ex+vivo+characterization.">Morphology and topography of retinal pericytes in the living mouse retina using in vivo adaptive optics imaging and ex vivo characterization.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 54 (13), 8237-8250 (2013).</li><li>Gericke, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+the+muscarinic+acetylcholine+receptor+subtype+mediating+cholinergic+vasodilation+in+murine+retinal+arterioles.">Identification of the muscarinic acetylcholine receptor subtype mediating cholinergic vasodilation in murine retinal arterioles.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 52 (10), 7479-7484 (2011).</li><li>Gericke, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+role+of+alpha1-adrenoceptor+subtypes+in+murine+ophthalmic+arteries.">Functional role of alpha1-adrenoceptor subtypes in murine ophthalmic arteries.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 52 (7), 4795-4799 (2011).</li><li>Bohmer, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+alpha(1)B+-adrenoceptor+subtype+mediates+adrenergic+vasoconstriction+in+mouse+retinal+arterioles+with+damaged+endothelium.">The alpha(1)B -adrenoceptor subtype mediates adrenergic vasoconstriction in mouse retinal arterioles with damaged endothelium.</a> Br J Pharmacol. 171 (16), 3858-3867 (2014).</li></ol>

저자 아무 경쟁 금융 관심사 있다.

마우스 망막에 혈관 반응의 측정은 망막 혈관의 작은 크기 때문에 도전 이다. 제시 기법으로 망막 arterioles 전송된 가벼운 현미경 검사 법에 의해 시각화 됩니다. 이 격리 된 망막은 반투명 하기 때문에 가능 하다. 기술의 장점은 높은 광학 해상도입니다. 계산된 공간 해상도 11 픽셀 / µ m 이다. 그러나, 하얀 빛을 사용 하 여이 광 시스템에 대 한 실제 해상도 Abbe 회절 한계에 의해 설명 된다 200, 300 nm 사이입니다. 마우스 망막 arterioles의 첫 번째 분기에는 20 ~ 30 μ m의 내부 직경, 이후 약 1%의 직경 변화가이 시스템으로 알 수 있습니다. 작은 망막 arterioles5,,67시각화에 추가 기술 장치 또는 다른 연구에서 보고 형광 염료의 필요가 있다. 기술의 단점은 훈련 된 수 사관 90 ~ 120 분 사이 긴 준비 시간입니다. 준비 시간 180 분을 초과 하면 내 피 기능 감쇠 될 시작 합니다.
이 기술에는 여러 주요 중요 한 단계가 있습니다. 첫째, 철저 하 게 모든 retrobulbar 동맥 분기를 위하여 중요 하다. 결 찰 완료 하지 않으면 망막 arterioles 누설 때문 가압 하지 것입니다. 둘째, 10에 대 한 에탄올에 침수 눈 세계를 열기 전에 s은 안과 동맥의 평활 근 반응성을 비활성화 하는 것이 중요. 우리가 이전 10에 대 한 그 immersing 시연 s 70% 에탄올에 완전히 비활성화 안과 동맥 평활 근8. 대조적으로, 망막 arterioles 직접 의해 영향을 받을 에탄올, 안구 벽에 의해 보호 되기 때문에 가능성이 있습니다. 이 단계를 생략 하면 안과 동맥에서 직경 변화 망막의 관류의 영향을 미칠 수 있습니다. 메모의, 안과 동맥의 반응성 망막 arterioles 동일한 주 작동 근9,10에 대 한 응답의 현저 하 게 달라질 수 있습니다. 셋째, 안과 동맥의 비틀림을 하지 마십시오. 특히 망막 준비 플랫폼에 탑재 하는 동안 안과 동맥 수 있습니다 될 트위스트, 폐색 루멘의 결과로. 또한, 신중 하 게 유리 모 세관의 끝의 망막 arterioles 가압 수 있도록 차단 되지 확인 합니다. 아 세 틸 콜린에 대 한 응답 되었다 약한 농도 응답 곡선 이상 세 번 반복 하면 관찰 하기 때문에 동일한 망막 준비에 3 개 이상의 연속 농도-응답 곡선을 수행을 하지 하시기 바랍니다. 그러나, 있을 수 있습니다 에이전트에 따라 농도 응답 곡선의 반복성에 관한 차이 적용 하 고, 따라서, 개별적으로 테스트 해야 합니다.
우리는 적용 하는 약리 에이전트 extraluminally intraluminal 관류 서보 제어 펌프를 사용 하는 것도 가능 하지만 우리의 연구에. 기술은 생쥐와 쥐를 포함 하 여 작은 실험실 동물의 망막 혈관 반응성의 지역 메커니즘에 대 한 측정을 허용, 이후 유전자 변형된 동물을 사용 하 여 유전자를 대상으로 한 기술의 이점은이 방법으로 액세스할 수 있습니다. .

망막 관류에 장애 당뇨병 성 망막 증, 고혈압 성 망막 증, 녹 내장1,2,3등 다양 한 안구 질환의 병 인에 연루 되었습니다. 따라서, 망막 혈관 반응성을 측정 하기 위한 연구는 이러한 질병의 병 태 생리학을 이해 하는 것이 중요 하 고 접근 새로운 치료를 개발 하.
Murine 게놈에서 유전자 조작의 가능성으로 인해 마우스4심장 혈관 시스템 연구에 대 한 널리 사용 되는 동물 모델 되고있다. 그러나, 망막 혈관 (≤ 30 µ m)의 작은 크기 때문에 측정 마우스 망막 혈관 반응성의 도전 이다. 예를 들어 stereomicroscopic vivo에서 측정을 위한 그들의 광학 해상도 제한 기술과 따라서 ≤ 30 µ m 직경 장비 될 때 보다는 더 적은의 작은 피에 지름 또는 혈액 흐름에 변화를 정확 하 게 탐지를 허용합니다 confocal 현미경 또는 적응 광학 스캔 빛 Ophthalmoscope5,6형광 염료를 사용 하 여 같은 추가 정교한 장치 합니다. 또한, 해석 vivo 측정 지역 식별 목적으로 조직 혈압과 retrobulbar 혈관의 영향 변화 신호 망막 혈관에서 메커니즘 마 취약에 의해 혼동 될 수 있습니다.
따라서, 우리는 ex vivo높은 광학 해상도와 마우스 망막 혈관의 반응을 측정 하는 방법을 개발 했다. 여기에 소개 하는 기술 망막 arterioles 통해 전송 가벼운 현미경 검사 법의 시각화 수 있습니다. 이 메서드를 사용할 수 있는 또한 쥐에, 안구 혈관 연구에서 기술을 대상으로 하는 유전자의 장점에 대 한 액세스를 제공 합니다.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Steel Scissors</td>
			<td>Carl Roth GmbH</td>
			<td>3576.1</td>
			<td>1x 140 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eye Scissors</td>
			<td>Geuder</td>
			<td>G-19390</td>
			<td>1x straight, 10.5 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Precision tweezers, straight with fine tips</td>
			<td>Carl Roth GmbH</td>
			<td>LH68.1</td>
			<td>2x type 4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Precision tweezers, straight with extra fine tips</td>
			<td>Carl Roth GmbH</td>
			<td>LH53.1</td>
			<td>2x type 5</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vannas capsulotomy scissors</td>
			<td>Geuder</td>
			<td>19760</td>
			<td>1x straight, 77 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Student Vannas Spring Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>91501-09</td>
			<td>1x curved,</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Barraquer Needle Holder</td>
			<td>Geuder</td>
			<td>G-17500</td>
			<td>1x curved, 120 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle</td>
			<td>Becton, Dickinson and Company</td>
			<td>305128</td>
			<td>1x 30 G</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass Capillaries (for producing micropipettes)</td>
			<td>Drummond Scientific Company</td>
			<td>9-000-1211</td>
			<td>1x (1.2 x 0.8 mm; outer/inner diameter)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nylon Suture</td>
			<td>Alcon</td>
			<td>198001</td>
			<td>1x 10-0</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nunclon cell culture dish</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>153066</td>
			<td>1x 35 mm diameter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nunclon cell culture dish</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>172931</td>
			<td>1x 100 mm diameter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Discofix C</td>
			<td>Braun</td>
			<td>16500C</td>
			<td>10 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Histoacryl adhesive</td>
			<td>B. Braun Surgical, S.A.</td>
			<td>1050052</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pericyclic pump&#160; (CYCLO II)</td>
			<td>Carl Roth GmbH</td>
			<td>EP76.1</td>
			<td>1x</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vertical Pipette Puller Model 700C</td>
			<td>David Kopf Instruments</td>
			<td></td>
			<td>1x</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope (Vanox-T AH-2)</td>
			<td>Olympus</td>
			<td></td>
			<td>1x</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water immersion objective LUMPlanFL, 1.0 NA</td>
			<td>Olympus</td>
			<td></td>
			<td>1x</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital camera (TK-C1381)</td>
			<td>JVC</td>
			<td></td>
			<td>1x</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Perfusion chamber</td>
			<td>self-made</td>
			<td></td>
			<td>1x</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Drugs and Solutions</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Carl Roth GmbH</td>
			<td>K928.4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium chloride dihydrate (CaCl2)</td>
			<td>Carl Roth GmbH</td>
			<td>5239.1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kalium chloride (KCl)</td>
			<td>Carl Roth GmbH</td>
			<td>6781.1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kalium dihydrogen phosphate (KH2PO4)</td>
			<td>Carl Roth GmbH</td>
			<td>3904.2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium sulphate (MgSO4)</td>
			<td>Carl Roth GmbH</td>
			<td>261.2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium chloride (NaCl)</td>
			<td>Carl Roth GmbH</td>
			<td>9265.2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium hydrogen carbonate (NaHCO3)</td>
			<td>Carl Roth GmbH</td>
			<td>0965.3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#945;-(D)-(+)- Glucose monohydrate</td>
			<td>Carl Roth GmbH</td>
			<td>6780.1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>9,11-dideoxy-9&#945;,11&#945;-methanoepoxy prostaglandin F2&#945; (U-46619)</td>
			<td>Cayman Chemical</td>
			<td>16450</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetylcholine chloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A6625-25G</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

preparation steps for measurement of reactivity in mouse retinal arterioles ex vivo

혈관 불충분 그리고 정상 망막 관류 변경 다양 한 시력을 위협 하 고 안구 질환, 당뇨병 성 망막 증, 고혈압 성 망막 증 및 녹 내장 등의 병 인에 대 한 주요 요인 중입니다. 따라서 망막 microvascular 준비 중추적인 도구 기본 병 태 생리 기계 장치 윤곽을 그리 다 생리 및 약리 연구 및 질병에 대 한 치료를 디자인 하는. 안과 연구에 마우스 모델의 광범위 한 사용에도 불구 하 고 망막 혈관 반응성에 대 한 연구는이 종에서 부족. 이 불일치에 대 한 주요 이유는 도전적인 격리 절차는 이러한 망막 혈관의 작은 크기 때문 ~ luminal 직경에서 ≤ 30 µ m. 기능 연구에 대 한 이러한 망막 microvessels의 직접 분리의 문제를 회피, 우리 ex vivo 마우스 망막 vasoactivity 근처 생리 적 조건 하에서 연구를 가능 하 게 절연 및 준비 기술 설립 . 현재 실험 준비 특히 마우스 망막 arterioles를 참조 것입니다, 하지만이 방법은 쉽게 사용할 수 있습니다 microvessels에 쥐에서.

U-46619 농도-종속 vasoconstrictor 응답 망막 arterioles 야생-타입 마우스 C57Bl/6J 배경에서 생산. 10-6 M의 농도에서 luminal 직경에서 감소는 휴식 직경에서 ≈50 %를 했다. 그림 9A 한 망막 되의 대표적인 농도-응답 곡선을 보여 줍니다. U46619와 preconstricted arterioles에 아 세 틸 콜린의 누적 관리 갖는 luminal 직경 농도 의존 증가 ≈25 %를 10-5 M, 그대로 혈관 내 피 (지표에 preconstricted 직경에서 그림 9B)입니다.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56199/56199fig1.jpg"> 그림 1: 마우스 두개골의 해 부. 잘린된 마우스 머리에 피부 노출 눈과 궤도 구멍 제거 됩니다. <a href="https://cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56199/56199fig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56199/56199fig2.jpg"> 그림 2: 눈 글로브와 궤도 조직의 격리. 궤도 뼈는 눈이 눈 세계 retrobulbar 조직 함께 고 시 신경 신중 하 게 고립 되었다. <a href="https://cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56199/56199fig2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56199/56199fig3.jpg"> 그림 3: 눈 글로브와 안과 동맥의 준비. 일단 주변 궤도 조직 했다 괜 찮 아 요 microscissors로 해 부, 안과 동맥은 신중 하 게 노출 되 고 그들의 작은 가지는 10-0 나일론 monofilament 봉합 출혈. <a href="https://cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56199/56199fig3large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56199/56199fig4.jpg"> 그림 4: 눈의 해 부. 망막을 시각화 하 고 sclera uvea 욕실이 capsulotomy가 위 해 부 했다. 시 신경 주위 조직 일부 scleral 안과 동맥의 손상을 방지 하기 위해 남아 있지 않았다. <a href="https://cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56199/56199fig4large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56199/56199fig5.jpg"> 그림 5: 실시간 비디오 현미경 검사 법에 대 한 기관 실. 홈 챔버가 했다. 배양 접시는에서 및 밖으로 flow 튜브 100 m m 직경의 그것에 의하여 이루어져 있다. 튜브는 histoacryl 접착제로 붙어 있었다. 외부에서 산소와 탄산 Krebs Henseleit 버퍼는이 관을 통해 연동 펌프에 의해 유통 되었다. 실리콘 튜브의 한쪽 끝을 챔버와 3 방향 자 지에 연결 된 다른 쪽 끝의 아래쪽에 붙어 했다. 튜브의 끝에, 100 µ m의 끝을 가진 유리 제 micropipette cannulation 안과 동맥의에 대 한 봉사 삽입 되었다. 실리콘 튜브를 통해 안과 순환 50 mm Hg. 해당 수준에 Krebs 버퍼와 실리콘 튜브를 작성 하 여 가압은 <a href="https://cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56199/56199fig5large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56199/56199fig6.jpg"> 그림 6: 안과 동맥의 Cannulation. 안과 동맥 유리 제 micropipette와 cannulated 하 고 10-0 나일론 봉합으로 봉합 했다. <a href="https://cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56199/56199fig6large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 7" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56199/56199fig7.jpg"> 그림 7: 안과 동맥의 Cannulation. 투명 플랫폼에 망막을 삽입 후 capsular 가방 렌즈 제거 되었다, 4 개의 방사형 절 개, 망막에 고 링 2.8 m m 내경 및 외경 4.0 m m의 스테인리스 b에 그것을 해결 하기 위해 망막에 배치 했다 ottom입니다. 망막은 다음 실험을 위해 준비 했습니다. <a href="https://cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56199/56199fig7large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 8" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56199/56199fig8.jpg"> 그림 8: 망막 혈관의 시각화. 적혈구 내부와 모범적인 망막 되.
<img alt="Figure 9" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56199/56199fig9.jpg"> 그림 9: 비디오 현미경을 사용 하 여 기능 연구. 단일 망막 되에서 대표 농도 응답 곡선. (Vasoconstrictor, U46619에 대 한 A) 농도 응답 곡선 (10-9 10-6 M를), 그리고 (B)에 대 한 endothelium 종속 vasodilator, 아 세 틸 콜린 (10 10-5 M를-8 ). <a href="https://cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56199/56199fig9large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>

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Preparation Steps for Measurement of Reactivity in Mouse Retinal Arterioles Ex Vivo

많은 비전을 위협 눈 질병 장애 망막 microvessels와 연결 됩니다. 따라서, 망막 되 응답의 측정은 기본 병 태 생리 기계 장치를 조사 하는 것이 중요. 이 문서에서는 마우스 망막 되 격리와 혈관 직경에 vasoactive 물질의 효과 평가 하기 위해 준비에 대 한 상세한 프로토콜을 설명 합니다.

마우스 망막 Arterioles Ex Vivo 에서 반응의 측정을 위한 준비 단계

Vascular insufficiency and alterations in normal retinal perfusion are among the major factors for the pathogenesis of various sight-threatening ocular ...

preparation-steps-for-measurement-reactivity-mouse-retinal-arterioles

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Medicine

Preparation Steps for Measurement of Reactivity in Mouse Retinal Arterioles Ex Vivo

7.1K 조회수.  University Medical Center of the Johannes Gutenberg University Mainz. 많은 비전을 위협 눈 질병 장애 망막 microvessels와 연결 됩니다. 따라서, 망막 되 응답의 측정은 기본 병 태 생리 기계 장치를 조사 하는 것이 중요. 이 문서에서는 마우스 망막 되 격리와 혈관 직경에 vasoactive 물질의 효과 평가 하기 위해 준비에 대 한 상세한 프로토콜을 설명 합니다.

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Ex Vivo Infection of Live Tissue with Oncolytic Viruses

Oncolytic Viruses (OVs) are novel therapeutics that selectively replicate in and kill tumor cells1. Several clinical trials evaluating the effectiveness of a variety of oncolytic platforms including HSV, Reovirus, and Vaccinia OVs as treatment for cancer are currently underway2-5. One key characteristic of oncolytic viruses is that they can be genetically modified to express reporter transgenes which makes it possible to visualize the infection of tissues by microscopy or bio-luminescence imaging6,7. This offers a unique advantage since it is possible to infect tissues from patients ex vivo prior to therapy in order to ascertain the likelihood of successful oncolytic virotherapy8. To this end, it is critical to appropriately sample tissue to compensate for tissue heterogeneity and assess tissue viability, particularly prior to infection9. It is also important to follow viral replication using reporter transgenes if expressed by the oncolytic platform as well as by direct titration of tissues following homogenization in order to discriminate between abortive and productive infection. The object of this protocol is to address these issues and herein describes 1. The sampling and preparation of tumor tissue for cell culture 2. The assessment of tissue viability using the metabolic dye alamar blue 3. Ex vivo infection of cultured tissues with vaccinia virus expressing either GFP or firefly luciferase 4. Detection of transgene expression by fluorescence microscopy or using an In Vivo Imaging System (IVIS) 5. Quantification of virus by plaque assay. This comprehensive method presents several advantages including ease of tissue processing, compensation for tissue heterogeneity, control of tissue viability, and discrimination between abortive infection and bone fide viral replication.

Ex Vivo Infection of Live Tissue with Oncolytic Viruses

Oncolytic viruses are promising for cancer therapeutics. The ability to ascertain the infectability of live tissue specimens obtained from patients prior to treatment is a unique advantage of this therapeutic approach. This protocol describes how to process tissues for ex vivo infection with oncolytic virus and subsequent viral quantification.

Oncolytic 바이러스 살아있는 조직의 전의 VIVO 감염

Oncolytic Viruses (OVs) are novel therapeutics that selectively replicate in and kill tumor cells1. Several clinical trials evaluating the effectiveness ...

연구

의학

In vivo Measurement of the Mouse Pulmonary Endothelial Surface Layer

The endothelial glycocalyx is a layer of proteoglycans and associated glycosaminoglycans lining the vascular lumen. In vivo, the glycocalyx is highly hydrated, forming a substantial endothelial surface layer (ESL) that contributes to the maintenance of endothelial function. As the endothelial glycocalyx is often aberrant in vitro and is lost during standard tissue fixation techniques, study of the ESL requires use of intravital microscopy. To best approximate the complex physiology of the alveolar microvasculature, pulmonary intravital imaging is ideally performed on a freely-moving lung. These preparations, however, typically suffer from extensive motion artifact. We demonstrate how closed-chest intravital microscopy of a freely-moving mouse lung can be used to measure glycocalyx integrity via ESL exclusion of fluorescently-labeled high molecular weight dextrans from the endothelial surface. This non-recovery surgical technique, which requires simultaneous brightfield and fluorescent imaging of the mouse lung, allows for longitudinal observation of the subpleural microvasculature without evidence of inducing confounding lung injury.

In vivo Measurement of the Mouse Pulmonary Endothelial Surface Layer

The endothelial glycocalyx/endothelial surface layer is ideally studied using intravital microscopy. Intravital microscopy is technically challenging in a moving organ such as the lung. We demonstrate how simultaneous brightfield and fluorescent microscopy may be used to estimate endothelial surface layer thickness in a freely-moving in vivo mouse lung.

마우스 폐 내피 표면 층의 생체 측정

The endothelial glycocalyx is a layer of proteoglycans and associated glycosaminoglycans lining the vascular lumen. In vivo, the glycocalyx is highly ...

Steps for the Autologous Ex vivo Perfused Porcine Liver-kidney Experiment

The use of ex vivo perfused models can mimic the physiological conditions of the liver for short periods, but to maintain normal homeostasis for an extended perfusion period is challenging. We have added the kidney to our previous ex vivo perfused liver experiment model to reproduce a more accurate physiological state for prolonged experiments without using live animals. Five intact livers and kidneys were retrieved post-mortem from sacrificed pigs on different days and perfused for a minimum of 6 hr. Hourly arterial blood gases were obtained to analyze pH, lactate, glucose and renal parameters. The primary endpoint was to investigate the effect of adding one kidney to the model on the acid base balance, glucose, and electrolyte levels. The result of this liver-kidney experiment was compared to the results of five previous liver only perfusion models. In summary, with the addition of one kidney to the ex vivo liver circuit, hyperglycemia and metabolic acidosis were improved. In addition this model reproduces the physiological and metabolic responses of the liver sufficiently accurately to obviate the need for the use of live animals. The ex vivo liver-kidney perfusion model can be used as an alternative method in organ specific studies. It provides a disconnection from numerous systemic influences and allows specific and accurate adjustments of arterial and venous pressures and flow.

Steps for the Autologous Ex vivo Perfused Porcine Liver-kidney Experiment

Study of the animal organ physiology can be achieved by performing an experimental ex vivo perfusion system. The addition of a porcine kidney, as a homeostatic organ to our previously developed ex vivo liver perfusion model can be a principal step to achieve a better physiological environment.

The use of ex vivo perfused models can mimic the physiological conditions of the liver for short periods, but to maintain normal homeostasis for an ...

In vivo 19F MRI for Cell Tracking

In vivo 19F MRI allows quantitative cell tracking without the use of ionizing radiation. It is a noninvasive technique that can be applied to humans. Here, we describe a general protocol for cell labeling, imaging, and image processing. The technique is applicable to various cell types and animal models, although here we focus on a typical mouse model for tracking murine immune cells. The most important issues for cell labeling are described, as these are relevant to all models. Similarly, key imaging parameters are listed, although the details will vary depending on the MRI system and the individual setup. Finally, we include an image processing protocol for quantification. Variations for this, and other parts of the protocol, are assessed in the Discussion section. Based on the detailed procedure described here, the user will need to adapt the protocol for each specific cell type, cell label, animal model, and imaging setup. Note that the protocol can also be adapted for human use, as long as clinical restrictions are met.

In vivo 19F MRI for Cell Tracking

We describe a general protocol for in vivo cell tracking using MRI in a mouse model with ex vivo labeled cells. A typical protocol for cell labeling, image acquisition processing and quantification is included.

세포 추적을위한 생체 19 F MRI에서

In vivo 19F MRI allows quantitative cell tracking without the use of ionizing radiation. It is a noninvasive technique that can be applied to humans. ...

An Ex vivo Model to Study Hormone Action in the Human Breast

The study of hormone action in the human breast has been hampered by lack of adequate model systems. Upon in vitro culture, primary mammary epithelial cells tend to lose hormone receptor expression. Widely used hormone receptor positive breast cancer cell lines are of limited relevance to the in vivo situation. Here, we describe an ex vivo model to study hormone action in the human breast. Fresh human breast tissue specimens from surgical discard material such as reduction mammoplasties or mammectomies are mechanically and enzymatically digested to obtain tissue fragments containing ducts and lobules and multiple stromal cell types. These tissue microstructures kept in basal medium without growth factors preserve their intercellular contacts, the tissue architecture, and remain hormone responsive for several days. They are readily processed for RNA and protein extraction, histological analysis or stored in freezing medium. Fluorescence activated cell sorting (FACS) can be used to enrich for specific cell populations. This protocol provides a straightforward, standard approach for translational studies with highly complex, varied human specimens.

An Ex vivo Model to Study Hormone Action in the Human Breast

We have developed a novel ex vivo model to study hormone action in the human breast. It is based on tissue microstructures isolated from surgical breast tissue specimens which preserve tissue architecture, intercellular interactions, and paracrine signaling.

<em&gt; 생체 내</em&gt; 모델은 인간의 유방암에서 호르몬 행동을 연구하기 위해

The study of hormone action in the human breast has been hampered by lack of adequate model systems. Upon in vitro culture, primary mammary epithelial ...

In Vivo Dynamics of Retinal Microglial Activation During Neurodegeneration: Confocal Ophthalmoscopic Imaging and Cell Morphometry in Mouse Glaucoma

Microglia, which are CNS-resident neuroimmune cells, transform their morphology and size in response to CNS damage, switching to an activated state with distinct functions and gene expression profiles. The roles of microglial activation in health, injury and disease remain incompletely understood due to their dynamic and complex regulation in response to changes in their microenvironment. Thus, it is critical to non-invasively monitor and analyze changes in microglial activation over time in the intact organism. In vivo studies of microglial activation have been delayed by technical limitations to tracking microglial behavior without altering the CNS environment. This has been particularly challenging during chronic neurodegeneration, where long-term changes must be tracked. The retina, a CNS organ amenable to non-invasive live imaging, offers a powerful system to visualize and characterize the dynamics of microglia activation during chronic disorders.
This protocol outlines methods for long-term, in vivo imaging of retinal microglia, using confocal ophthalmoscopy (cSLO) and CX3CR1GFP/+ reporter mice, to visualize microglia with cellular resolution. Also, we describe methods to quantify monthly changes in cell activation and density in large cell subsets (200-300 cells per retina). We confirm the use of somal area as a useful metric for live tracking of microglial activation in the retina by applying automated threshold-based morphometric analysis of in vivo images. We use these live image acquisition and analyses strategies to monitor the dynamic changes in microglial activation and microgliosis during early stages of retinal neurodegeneration in a mouse model of chronic glaucoma. This approach should be useful to investigate the contributions of microglia to neuronal and axonal decline in chronic CNS disorders that affect the retina and optic nerve.

In Vivo Dynamics of Retinal Microglial Activation During Neurodegeneration: Confocal Ophthalmoscopic Imaging and Cell Morphometry in Mouse Glaucoma

Microglia activation and microgliosis are key responses to chronic neurodegeneration. Here, we present methods for in vivo, long-term visualization of retinal CX3CR1-GFP+ microglial cells by confocal ophthalmoscopy, and for threshold and morphometric analyses to identify and quantify their activation. We monitor microglial changes during early stages of age-related glaucoma.

마우스 녹내장에 공 촛점 안저 이미징 및 세포 형태 계측 : 신경 퇴행 중 망막 미세 아교 활성화의 생체 역학

Microglia, which are CNS-resident neuroimmune cells, transform their morphology and size in response to CNS damage, switching to an activated state with ...

Depletion of Mouse Cells from Human Tumor Xenografts Significantly Improves Downstream Analysis of Target Cells

The use of in vitro cell line models for cancer research has been a useful tool. However, it has been shown that these models fail to reliably mimic patient tumors in different assays1. Human tumor xenografts represent the gold standard with respect to tumor biology, drug discovery, and metastasis research 2-4. Tumor xenografts can be derived from different types of material like tumor cell lines, tumor tissue from primary patient tumors4 or serially transplanted tumors. When propagated in vivo, xenografted tissue is infiltrated and vascularized by cells of mouse origin. Multiple factors such as the tumor entity, the origin of xenografted material, growth rate and region of transplantation influence the composition and the amount of mouse cells present in tumor xenografts. However, even when these factors are kept constant, the degree of mouse cell contamination is highly variable.
Contaminating mouse cells significantly impair downstream analyses of human tumor xenografts. As mouse fibroblasts show high plating efficacies and proliferation rates, they tend to overgrow cultures of human tumor cells, especially slowly proliferating subpopulations. Mouse cell derived DNA, mRNA, and protein components can bias downstream gene expression analysis, next-generation sequencing, as well as proteome analysis 5. To overcome these limitations, we have developed a fast and easy method to isolate untouched human tumor cells from xenografted tumor tissue. This procedure is based on the comprehensive depletion of cells of mouse origin by combining automated tissue dissociation with the benchtop tissue dissociator and magnetic cell sorting. Here, we demonstrate that human target cells can be can be obtained with purities higher than 96% within less than 20 min independent of the tumor type.

Human tumor xenografts are vascularized and infiltrated by cells of mouse origin during the growth phase in vivo. To circumvent the bias caused by these contaminating cells during downstream analysis, we developed a method allowing for comprehensive depletion of all mouse cells by magnetic cell sorting.

인간 종양 이종 이식에서 마우스 세포의 고갈은 크게 대상 세포의 다운 스트림 분석을 향상

The use of in vitro cell line models for cancer research has been a useful tool. However, it has been shown that these models fail to reliably mimic ...

Echocardiographic Measurement of Right Ventricular Diastolic Parameters in Mouse

Diastolic dysfunction is a prominent feature of right ventricular (RV) remodeling associated with conditions of pressure overload. However, the RV diastolic function is rarely quantified in experimental studies. This might be due to technical difficulties in the visualization of the RV in the apical four-chamber view in rodents. Here we describe two positions facilitating the visualization of the apical four-chamber view in mice to assess the RV diastolic function.
The apical four-chamber view is enabled by tilting the mouse fixation platform to the left and caudally (LeCa) or to the right and cranially (RiCr). Both positions provide images of comparable quality. The results of the RV diastolic function obtained from two positions are not significantly different. Both positions are comparably easy to perform. This protocol can be incorporated into published protocols and enables detailed investigations of the RV function.

Here we describe and compare two positions for obtaining the apical four-chamber view in mice. These positions enable the quantification of the right ventricular function, provide comparable results, and can be used interchangeably.

마우스의 우심실 확장기 매개변수의 심초음파 측정

Diastolic dysfunction is a prominent feature of right ventricular (RV) remodeling associated with conditions of pressure overload. However, the RV ...

An Ex Vivo Tissue Culture Model for Fibrovascular Complications in Proliferative Diabetic Retinopathy

Diabetic retinopathy (DR) is the most common microvascular complication of diabetes and one of the leading causes of blindness in working-age adults. No current animal models of diabetes and oxygen-induced retinopathy develop the full-range progressive changes manifested in human proliferative diabetic retinopathy (PDR). Therefore, understanding of the disease pathogenesis and pathophysiology has relied largely on the use of histological sections and vitreous samples in approaches that only provide steady-state information on the involved pathogenic factors. Increasing evidence indicates that dynamic cell-cell and cell-extracellular matrix (ECM) interactions in the context of three-dimensional (3D) microenvironments are essential for the mechanistic and functional studies towards the development of new treatment strategies. Therefore, we hypothesized that the pathological fibrovascular tissue surgically excised from eyes with PDR could be utilized to reliably unravel the cellular and molecular mechanisms of this devastating disease and to test the potential for novel clinical interventions. Towards this end, we developed a novel method for 3D ex vivo culture of surgically-excised patient-derived fibrovascular tissue (FT), which will serve as a relevant model of human PDR pathophysiology. The FTs are dissected into explants and embedded in fibrin matrix for ex vivo culture and 3D characterization. Whole-mount immunofluorescence of the native FTs and end-point cultures allows thorough investigation of tissue composition and multicellular processes, highlighting the importance of 3D tissue-level characterization for uncovering relevant features of PDR pathophysiology. This model will allow the simultaneous assessment of molecular mechanisms, cellular/tissue processes and treatment responses in the complex context of dynamic biochemical and physical interactions within the PDR tissue architecture and microenvironment. Since this model recapitulates PDR pathophysiology, it will also be amenable for testing or developing new treatments.

Here, we present a protocol to study the pathophysiology of proliferative diabetic retinopathy by using patient-derived, surgically-excised, fibrovascular tissues for three-dimensional native tissue characterization and ex vivo culture. This ex vivo culture model is also amenable for testing or developing new treatments.

증식 성 당뇨 망막 증에 Fibrovascular 합병증에 대 한 전 비보 조직 문화 모델

Diabetic retinopathy (DR) is the most common microvascular complication of diabetes and one of the leading causes of blindness in working-age adults. No ...

Preparation Of Gushukang (GSK) Granules for In Vivo and In Vitro Experiments

Traditional Chinese herbal medicine plays a role as an alternative method in treating many diseases, such as postmenopausal osteoporosis (POP). Gushukang (GSK) granules, a marketed prescription in China, have bone-protective effects in treating POP. Before administration to the body, one standard preparation procedure is commonly required, which aims to promote the release of active constituents from raw herbs and enhance the pharmacological effects as well as therapeutic outcomes. This study proposes a detailed protocol for using GSK granules in in vivo and in vitro experimental assays. The authors first provide a detailed protocol to calculate the animal-appropriate dosages of granules for in vivo investigation: weighing, dissolving, storage, and administration. Second, this article describes protocols for micro-CT scanning and the measurement of bone parameters. Sample preparation, protocols for running the micro-CT machine and quantification of bone parameters were evaluated. Third, serum-containing GSK granules are prepared, and drug-containing serum is extracted for in vitro osteoclastogenesis and osteoblastogenesis. GSK granules were intragastrically administered twice per day to rats for three consecutive days. Blood was then collected, centrifuged, inactivated, and filtered. Finally, serum was diluted and used for performing osteoclastogenesis and osteoblastogenesis. The protocol described here can be considered a reference for pharmacological investigations of herbal prescription medicines, such as granules.

Preparation Of Gushukang GSK Granules for In Vivo and In Vitro Experiments

This article provides a detailed protocol for preparing a working solution of Gushukang granules for animal studies and GSK granule containing serum for in vitro experiments. This protocol can be applied to pharmacological investigations of herbal medicines as well as prescriptions for both in vivo and in vitro experiments.

구슈강(GSK) 생체내 및 체외 실험을 위한 과립 준비

Traditional Chinese herbal medicine plays a role as an alternative method in treating many diseases, such as postmenopausal osteoporosis (POP). Gushukang ...