We would like to thank Chris Wreden and Michelle Bland for comments on the manuscript and for technical help.

Larva 1. Hazırlık <ol><li> Bir hafta davranışı kaydetmeden önce, bir haç (25 bakireler ve 5 erkek en az) kurdu. 25 ° C&#39;de tüm haçlar ve soyunu korumak. Not: kültür koşulları sıcaklığı değiştirilebilir, ancak aşağıda tarif edilen zaman aralığı gelişim hızı değişiklikleri hesaba ayarlanması gerekir. </li><li> 5 gün sabah ilk şey kaydetmeden önce, bir agar / suyu kapağı ve ağar / suyu kap merkezinde maya hamur dab (0.5-1 ml) ile bir toplama kafes içine ortasını yerleştirin. <ol><li> Bir koleksiyon kafes yapmak için, bir 6 oz içine delik karıştırmak. Kare polietilen Drosophila şişe. </li><li> , Ağar / suyu kapaklar hale konik bir şişe içinde 600 ml su ile agar 18 g karıştırın. 200 ml elma suyu ayrı bir şişeye karışımı 20 gr sakaroz. katılar kadar mikrodalga çözülür. Karışım, 60 ° C&#39;ye kadar soğumaya bırakıldıktan, birleştirin ve karıştırın. % 95 etanol içinde 20 mL% 10 metil-p-hidroksibenzoat ekleyin ve karıştırın. Ekle ~ 735 x 10 mm yuvarlak petri kabı alt yarısına mi. Agar / suyu oda sıcaklığında 1 saat boyunca katılaşmaya izin verin. 4 ° C&#39;de saklayın. </li><li> , Maya salçası yapmak hacim kuru maya ve su eşit parçaya ekleyin. 4 ° C&#39;de saklayın. </li></ol></li><li> Larva koleksiyonları sağlığını kontrol edin. <ol><li> Sabah, 4 ve 3 gün kayıttan önce, kapağı çıkarın ve kafes taze bir kap yerleştirin. 24 hr yumurta toplama ve yumurtadan yeni çıkmış larva elde etmek için her gün aynı saatte kapaklarını değiştirin. </li><li> Her kapak kaldırıldıktan sonra, çapraz döşeme kaç yumurta görmek için inceleyin. Yani 500-2.000 yumurta arasında bekleyin. Gerekirse, yetişkinlerin sayısını ayarlayın. NOT: Bir kaç yumurta larva haline yumurtadan gerekirdi, ve yeni yumurtadan larva uzak maya macunundan bulunacaktır. </li><li> 24 saat boyunca her kap yaş. Larvalar sağlıklı olup olmadığını belirlemek için kapağını yeniden inceleyin. NOT: Çoğu yumurta larva haline yumurtadan gerekirdi, ve larva siz içine sürünerek gerekirdiast yapıştırın. kötü sağlık belirtileri bir bağışıklık reaksiyonu gösteren karın önemli koyu yamalar ile bir çıkmamış yumurta çok sayıda uzak maya hamur ölü larva organları ve larvaları içerir. Larvalar sağlıksız ise, kafes değiştirmek taze kapakları / maya hamur yapın ve genotipi kontrol edin. </li><li> Eski kapaklar atın. </li></ol></li><li> Davranışsal kayıtları için larva toplayın. <ol><li> kaydetmeden önce de 2 ve 1 gün, kapağı çıkarın ve taze bir kapak ile değiştirin. </li><li> Her çıkarıldı sınırı etiketi ve 25 ° C de devam edin. Bu davranış kayıtları için larva aşamalı dizi üretecek. İkinci instar (24-48 saat posthatch) ila (0-4 saat posthatch) yeni yumurtadan larvaları kanallar kullanılabilir. gün üst üste kayıtlar için kapaklar kaydedin. </li><li> 48 saat sonra tüm kapakları atın. </li><li> Gerekirse, en fazla 5 ek d 1.4.1-1.4.3 adımları tekrarlayın. Bu az sonra döllenmiş yumurtalar üretilir. </li></ol></li></ol><ol><li> Doğrusal kanal PDMS (polidimetilsiloksan, bir silikon elastomer) döküm kalıp (Şekil 1A) hazırlayın. Döküm PDMS istek üzerine Heckscher laboratuarında temin edebilirsiniz. <ol><li> izopropil alkol ile döküm kalıbı temizleyin. Hava kuru, dab laboratuvar mendil ile kuru veya konserve hava kullanın. </li><li> Bir 10 sm Petri kabı kapağı veya başka bir kap içine döküm kalıbı yerleştirin. </li></ol></li><li> Hazırlayın ve agaroz çözüm dökün. <ol><li> tamamen çözünene dek mikrodalga tarafından su içinde% 3 agaroz çözeltisi (100 ml, 3 g) sağlayın. </li><li> 55 ° C&#39;ye soğutun, kabarcıklar yüzeye yükselmesini bırakarak. </li><li> kalıp sadece kaplıdır, böylece döküm kalıbı içeren petri içine agaroz karışımı dökün. katılaşmış kadar agaroz set edelim. </li></ol></li><li> döküm kalıp agaroz kanalları çıkarın. Bir jilet ile agaroz diskin kenarları kırpın. <ol><li> kanal koymaksu içine batırılmış bir 10 santimetrelik bir petri tabağına s. Bunlar, 7 gün boyunca 4 ° C &#39;de muhafaza edilebilir. </li></ol></li></ol> Kayıt Davranışlarına bir kanal içine larva yükleme 3. NOT: 4 ° C&#39;de kanallar saklamak durumunda, kanallar davranışsal kayıt için kullanmadan önce oda sıcaklığına gelmesini bekleyin. <ol><li> Aşama 2 (Şekil 2A) &#39;da hazırlanmış olan tek bir kanal kesmek için temiz bir tıraş bıçağı kullanma. </li><li> Bir cam lamel (Şekil 2B) kanal yivli yan yukarı yerleştirmek için forseps bir çift kullanın. lamel çapı ve derinliği görüntüleme için kullanılan spesifik kapsama bağlıdır. </li><li> Adım 1&#39;de hazırlanan ağar / meyve suyu kapağından bir larva seçin ve kesme kanalı (Şekil 2C) içine yerleştirmek için ince forseps kullanın. <ol><li> Larva sıkmak yok. forseps tine ucu ile hafifçe toplayın. Iyi bir noktaya sahip bir fırça ile larva işlemek de mümkündür. NOT: Bu önemli larva olarak çok sen olandokunmak sas. bunlar dikkatle ele değilseniz, nosiseptif tepkiler denemenin ilk birkaç saniye boyunca davranışlarını hakim olabilir. </li><li> kısaca suyla daldırarak larvaları yıkayın. </li><li> kesim kanalı üzerine larva yerleştirdikten sonra, yavaşça kanal koru içine larva kızdırmak için forseps tine ucunu kullanın. NOT: Bir çok uygulama için larva genişliği ve kanal genişliği aynı olmalıdır. Farklı gelişim aşamalarında larvaların ortalama genişliği aşağıdaki gibidir: 0 saat posthatch - 140 mikron, 24 saat posthatch - 180 mikron, 48 saat posthatch - 320 mikron, 72 saat posthatch - 500 mikron, 96 saat posthatch - 750 mikron 8. Aşağıdaki genişliklere girmektedirler kanallar 100, 150, 200, 250 ve 300 mikron, ve bütün kanallar 150 um derindir. </li><li> kanal içinde larva konumunu ayarlamak için bir forseps tine ya da fırça ucu kullanın. Bu, herhangi bir yönde yönlendirilmiş olabilir: ventralyukarı, ventral aşağı ventral bir tarafı, ne yapısına bağlı olarak, görüntülenecek olan. </li></ol></li><li> Forseps kullanarak, hafifçe larva kapak camına şimdi olduğu gibi üzerinde kanalı çevirin. Bu, su (Şekil 2D) ile doldurur ve böylece kanalın ucunda su, bir veya iki damla yerleştirin. <ol><li> Yavaşça herhangi bir hava kabarcıklarını çıkarmak için kanalın kenarlarına kaldırın. </li><li> larva yönünü ayarlayın. Bunu yapmak için, hafifçe kanalı değil larva rulo cam kapak dürtmek. Bu yönünü değiştirmek değilse, kapak camı kaldırın ve larva konumunu ayarlamak. Larva yansıması hazırdır. </li><li> Görüntü kanal / ters bir mikroskop lamel. dik bir mikroskop görüntüleme, sadece kanal / lamel ters çevirin. </li></ol></li></ol> Davranış Kayıt İlgi 4. Tedbir Özelliği <ol><li> Ilgi bir yapı için (örneğin, kuyruk, MSS), ilgilenilen bir özelliği ölçmek (örnZamanla, flüoresan yoğunluğu, yer). NOT: baş ve kuyruk gibi yapılar elle açıklamalı edilebilir. Örneğin, baş koyu H-şekilli ağız kanca içeren olarak tespit edilebilir ve kuyruk arka trakeal spiricles içerdiği tespit edilebilir. Bu yazıda sinir kablosu üzerinde duruluyor. Floresan merkezi sinir sistemini (MSS) etiketlemek için bir UAS-myr-GFP transgen (elav&gt; GFP) 9,10 sürmek için nöronal GAL4 hat elav-GAL4 kullanın. MSS posterior (Şekil 3) kadar uzanır sinir kablosu, bağlı iki ön beyin lobu içerir. </li><li> Her zaman noktasında (t) sinir kordonu (f (NC)) piksel yoğunluğunu ölçün. Aşağıda manuel açıklama yaklaşımı açıklar, ancak bu adımı otomatik olabilir. <ol><li> &#39;Analiz&#39; menüsünden Fiji (veya benzer yazılım) ortalama gri değeri ve dilim ve rapor &quot;ayarla Ölçümler ...&quot; diyalog kutusunu kullanıne konumu. </li><li> El ile film (Şekil 3) ilk karesine sinir kablosu merkezinde bir kutu çizin. Bu adım aynı zamanda görüntü segmentasyonu ve kayıt algoritmaları ile otomatik olabilir. </li><li> ilgi kutulu bölgedeki ortalama piksel yoğunluğunu rapor &#39;Analiz&#39; menüsünden &quot;Tedbir&quot; komutunu kullanın. Bu bir &quot;Sonuçlar&quot; penceresi oluşturur. </li><li> Bir sonraki çerçevede, elle ok tuşlarını kullanarak yeniden boyutlandırma olmadan kutuyu yeniden konumlandırmak. Yine &quot;Tedbir&quot; komutunu kullanın. güncellenmiş sonuçlar &quot;Sonuçlar&quot; penceresinde gösterilir. ilgi her kare için bu adımı yineleyin. </li><li> Dosya menüsünden kullanarak &quot;Sonuçlar&quot; &#39;Save As ...&#39; komutunu kaydedin. Sonuçlar bir .xls dosyası olarak ihraç edilecek. </li></ol></li></ol> 5. Ölçümleri analiz <ol><li> &lt;0 ve 1 (z (t arası bir değere (NC) değeri) her bir F normalize/ Em&gt;). <ol><li> e-tabloya (veya başka bir program) olarak Results.xls dosyasını açın. Bu dosya çerçeve numarası ve ortalama floresan yoğunluğu temsil eden iki sütun vardır. </li><li> Yeni bir sütun yapmak ve ([NC] f) normalize floresan değeri oluşturmak için formül z (t) = f (NC [t]) -Min (f [NC]) / max (f [NC]) -Min kullanın her bir zaman noktasında karşılık gelir. </li></ol></li><li> Kayıtta her adım için adım süresini belirleyin. NOT: Bir adım döngü ileri için tekrarlayan tüm vücut hareket birimidir (ve tersi) tarama. Kongre tarafından bu tür bağırsak veya MSS 1 olarak kuyruk, baş ve diğer iç organların ileri hareketi ile ileri adım başlar (ve biter). <ol><li> El ile her adım başlanması sürelerini (i) davranışsal kayıt incelemek ve kayıt (i (Stride Döngüsü [n])). NOT: Aşağıdaki örnekte, ileri hareketCNS bir adım çevriminin başlatılması (Şekil 3) gibi. </li><li> Her adım süresini hesaplamak: Δ t (Adım döngüsü) = i (Stride Döngüsü [n + 1]) -i (Stride Döngüsü [n]). </li></ol></li><li> Kaydın her bir zaman noktası için geçen adım döngüsünün yüzdesini hesaplayın. <ol><li> Bir adım döngüsü (c) başlangıcından beri geçen süreyi temsil eden tablo dosyasında ek bir sütun olun. Saati ayarla her adım başlangıcında sıfıra adım başlatılması beri (c (Stride Döngüsü [n]) = 0). buna göre başladıktan sonra kere ayarlayın. </li><li> . Geçen yüzde adım döngüsü (% adım döngüsü) geçtikten temsil tablo dosyasında ek bir sütun yapmak adım dönemi ayarlanmış kez bölün ve adım döngüsünün yüzdesine dönüştürmek için 100 ile çarpın:% adım döngüsü = (c (Stride Döngüsü [n] )) / (Δ t (Adım döngü) * 100). </li></ol></li></ol> 6. Polar Tarama Döngüsü üzerinden İlgi Yapıların Dinamikleri Temsil Arsalar Koordinat üret <ol><li> MATLAB, güncellenmiş Results.xls almak için Giriş sekmesinde &#39;İthalat Verilerini&#39; diyalog kullanın. </li><li> Make a yeni bir dizi &quot;Teta&quot; içeren yüzde adım döngüsü değerleri (% adım döngüsü). (Q1% adım devrini temsil eder &quot;teta = var1&quot;). </li><li> Yeni bir dizi &quot;Rho&quot; normalize floresan değerleri (z (t)) içerirler olun. (Var2 z (t temsil eden &quot;Rho = var2&quot;)). </li><li> açı olarak yüzde adım döngüsü ve yarıçapı ( &quot;PolarPlot (Teta, Rho)&quot;) olarak floresan ile kutupsal koordinat çizimleri yapmak için &#39;PolarPlot&#39; komutunu kullanın. </li></ol>

<ol>
	<li>Heckscher, E. S., Lockery, S. R., Doe, C. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+Drosophila+larval+crawling+at+the+level+of+organism,+segment,+and+somatic+body+wall+musculature.">Characterization of Drosophila larval crawling at the level of organism, segment, and somatic body wall musculature.</a> J Neurosci. 32 (36), 12460-12471 (2012).</li><li>Marder, E., Calabrese, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Principles+of+rhythmic+motor+pattern+generation.">Principles of rhythmic motor pattern generation.</a> Physiol rev. 76 (3), 687 (1996).</li><li>Mullins, O. J., Hackett, J. T., Buchanan, J. T., Friesen, W. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuronal+control+of+swimming+behavior:+Comparison+of+vertebrate+and+invertebrate+model+systems.">Neuronal control of swimming behavior: Comparison of vertebrate and invertebrate model systems.</a> Prog Neurobiol. 93 (2), 244-269 (2011).</li><li>Ohyama, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+multilevel+multimodal+circuit+enhances+action+selection+in+Drosophila.">A multilevel multimodal circuit enhances action selection in Drosophila.</a> Nature. 520 (7549), 633-639 (2015).</li><li>Landgraf, M., Thor, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+Drosophila+motoneurons:+specification+and+morphology.">Development of Drosophila motoneurons: specification and morphology.</a> Semin cell devl bio. 17 (1), 3-11 (2006).</li><li>Heckscher, E. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Even-Skipped(+)+Interneurons+Are+Core+Components+of+a+Sensorimotor+Circuit+that+Maintains+Left-Right+Symmetric+Muscle+Contraction+Amplitude.">Even-Skipped(+) Interneurons Are Core Components of a Sensorimotor Circuit that Maintains Left-Right Symmetric Muscle Contraction Amplitude.</a> Neuron. 88 (2), 1-16 (2015).</li><li>Green, C. H., Burnet, B., Connolly, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organization+and+patterns+of+inter-and+intraspecific+variation+in+the+behaviour+of+Drosophila+larvae.">Organization and patterns of inter-and intraspecific variation in the behaviour of Drosophila larvae.</a> Anim Behav. 31 (1), 282-291 (1983).</li><li>Graf, S. A., Sokolowski, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rover/Sitter+Drosophila+melanogaster+Larval+Foraging+Polymorphism+as+a+Function+of+Larval+Development,+Food-Patch+Quality,+and+Starvation.">Rover/Sitter Drosophila melanogaster Larval Foraging Polymorphism as a Function of Larval Development, Food-Patch Quality, and Starvation.</a> J Insect Behav. 2 (3), 301-313 (1989).</li><li>Lee, T., Luo, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mosaic+analysis+with+a+repressible+cell+marker+for+studies+of+gene+function+in+neuronal+morphogenesis.">Mosaic analysis with a repressible cell marker for studies of gene function in neuronal morphogenesis.</a> Neuron. 22 (3), 451-461 (1999).</li><li>Rebay, I., Rubin, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Yan+Functions+as+a+General+Inhibitor+of+Differentiation+and+Is+Negatively+Regulated+by+Activation+of+the+Rasl+/+MAPK+Pathway.">Yan Functions as a General Inhibitor of Differentiation and Is Negatively Regulated by Activation of the Rasl / MAPK Pathway.</a> Cell. 81 (6), 857-866 (1995).</li><li>Chen, T. -. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrasensitive+fluorescent+proteins+for+imaging+neuronal+activity.">Ultrasensitive fluorescent proteins for imaging neuronal activity.</a> Nature. 499 (7458), 295-300 (2013).</li><li>Tufte, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The visual display of quantitative information. , (2004).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

Bir mikroakışkan cihaz Drosophila larvaları ağırlayacak doğrusal agaroz kanalları (Şekil 1) yapmak için inşa edilmiştir. Drosophila larvaları, bu lineer agaroz kanallarda yerleştirildiğinde davranışsal repertuarı tarama döngüsü boyunca larva yapıların dinamikleri ayrıntılı gözlem için izin veren, tarama ile sınırlıdır. Bir larva (Şekil 3) ritmik adımlar bir dizi gerçekleştirdiğinizde Başarılı bir kayıt oluşur. Bu oluşmazsa, kanalda bir hava kabarcığı gibi engeller için kontrol edin ve larva sağlığını kontrol edin. Başarılı bir kayıttan bir diğer önemli unsuru larva ilgi yapılarını görselleştirmek için optimal odaklı olmasıdır. Larva doğru yönlendirilmiş değilse larva kanalın sürünerek ise veya basitçe lamel kaldırmak ve larva yeniden bağlayın. Bizim tecrübelerimize göre, ~ larvaların% 20 başlangıçta verim mükemmel davranış kayıtları monte ezelît ayarı. Geçmişte, ölçümler, davranış Tarama sırasında ağız kanca, gut ve karın segmentleri gibi larva yapıların konumu alınmıştır. tarama adım döngüsü boyunca bu yapıların hareketini görselleştirmek için, kutupsal koordinat araziler üretildi. Bu yazıda, sinir kordonunun floresan yoğunluğu ölçüldü ve kutupsal koordinat araziler tarama adım döngüsü (Şekil 4) üzerinde floresan dinamiklerini görselleştirmek için kullandı. Kutupsal koordinat araziler üzerinde veri temsil birkaç avantajı vardır: bir değişken olarak tarama hızı ortadan kaldırır, birçok hayvan ve birçok adımlar verileri özetleyebilirim ve genel eğilimleri ve veri 11 varyasyon hem görselleştirme sağlar. Özellikle, ilgi bir floresan etiketli yapı dinamiklerini ölçmek mümkündür. Prensip olarak, bu analiz, bir tarama döngüsü boyunca ortaya dinamik değişiklik her tür izleme için de geçerlidir. </p&gt; Bu yazıda anlatılan yöntemleri için geniş bir uygulama dizisi vardır. Geçmişte, lineer agaroz kanallar tüm organizma, bölüm ve bireysel kas seviyelerinde 1 de larva davranış kaydetmek için kullanılır olmuştur. Bu veriler larvalar ileriye hem de bir &quot;visseral-pistonlama&quot; mekanizmasını kullanmak ve tarama ters olduğunu gösterdi ve onlar nöromüsküler mekanizma ileri hem sürüş ve 1 belirlenecek sürünerek ters izin verdi. Gelecekte, araştırmacılar farklı genetik geçmişleri taramasını incelemek için kanalları kullanabilirsiniz. Buna ek olarak, tarama sırasında kalsiyum görüntüleme kullanarak larva nöronların aktivitesini analiz etmek için kanalları kullanmak mümkün olmalıdır. Bu nöronlar tarama döngüsünün belirli hareketleri ile fazda ateş hangi bir anlayışa yol açacaktır. Son olarak, kanallar bu makalede sunulan doğrusal tasarım izlemeniz gerekir bir neden yoktur; farklı boyutlarıyla kanallarını kullanarak şüphesiz bir var cevap yardımcı olacakBir bütün olarak Drosophila larva lokomosyon ve motor kontrolü hakkında soru iety.

Bu yöntemin genel amacı ayrıntılı olarak Drosophila larva tarama incelemektir. Lokomosyon üzerinde deneyler geliştirilmesi ve motor kontrolü 2 teorileri test önemli bir rol oynamıştır. Geleneksel olarak hareket su hayvanları (örneğin, sülük taşemen, larva) 3 incelenmiştir. bu hayvanlarda hareketin tekrarlayan doğa lokomosyon sürüş biyofiziksel olayların analizi için, ve lokomosyon eşlik nöral ateşleme desenleri izlenmesi için, ritim yaratılışına çalışması için izin verdi. Yüzeysel genetik, iyi karakterize geliştirme, birinci ve ikinci instars de optik açık bir gövde ve entire devam eden bir transmisyon elektron mikroskobik yeniden: hareketin çalışmaları için Drosophila larva kullanımı diğer model sistemler üzerinde avantaj benzersiz bir bileşimini sunuyor sinir sistemi 4-6. Ancak, Drosophila larva locodüz açık yüzeylerde hareket, duraklamalar da dahil olmak üzere biraz karmaşık döner ve kıvrımlı 7 tarar. Bu yayın larva, düz, ritmik tarama davranışı sürekli gerçekleştirmek şekilde Drosophila larva lokomotor davranışını yönlendirmek için doğrusal agaroz kanalları kullanmak için bir yöntem sunar. Bunun yerine düz açık yüzeylerde davranış, agaroz kanallarda Drosophila larva davranış incelenmesi, çeşitli avantajları vardır. Birincisi, araştırmacılar özellikle larva davranışsal repertuar bir parçası olan pek çok hareketlerinden davranışı tarama seçmenizi sağlar. İkinci olarak, larva vücut büyüklüğü karşısında kanalın genişliğini ayarlayarak, tarama hızı ayarlanabilir. Üçüncü olarak, kanallar larva larva yüklenir ve kanal içinde nasıl yönlendirileceğini bağlı dorsal, ventral ya da yan tarafında görülebilir için izin verir. ilgi herhangi bir yapı tarama sırasında sürekli olarak görünür olması için larva yönde Bu çok yönlülük sağlar. Dördüncü,kanallar mikroskoplar ve hedeflerinin geniş bir yelpazede kullanım için müsait. Örneğin, doğrusal kanal / veya eğirme disk konfokal mikroskoplar 1 yüksek çözünürlüklü görüntüleme ve parlak alan stereoskop düşük çözünürlüklü görüntüleme için kullanılabilir. Beşinci olarak, bu yöntem, herhangi bir genetik arka Optogenetic / thermogenetic nöronal manipülasyonlar ile bir arada kullanılabilir. (Birinci ve ikinci instars at) larva vücut ve agaroz kanallar hem optik açıktır, çünkü genetik olarak kodlanmış floresan problar ile etiketlenen larva yapıların floresan yoğunluğu dinamik hareketleri veya değişiklikleri inceleyerek Son olarak, kanallar kullanılabilir. Tarif edilen yöntem olup, ilk ve ikinci instar Drosophila larva özelliklerinin detaylı kinematik çalışmalar için uygundur. Bu yayın kanallarının kullanımını göstermek için ileri larva tarama sırasında MSS floresan yoğunluğu dinamik değişiklikleri analiz ve bir habercisi olarak Neu içinronal kalsiyum görüntüleme.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="643">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:211px;">6 oz square Drosophila bottle</td>
			<td style="width:101px;">Scimart</td>
			<td style="width:119px;">DR-103</td>
			<td style="width:212px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:211px;">agar</td>
			<td style="width:101px;">sigma</td>
			<td style="width:119px;">A1296</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:211px;">sucrose</td>
			<td style="width:101px;">sigma</td>
			<td style="width:119px;">S9378</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:211px;">apple juice</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>not from concentrate</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:211px;">Tegosept</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>T2300</td>
			<td>methyl-p-hydroxybenzoate</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:211px;">35 x 10 mm round petri dish</td>
			<td style="width:101px;">Fisher</td>
			<td align="right">351008</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:211px;">baker&#39;s yeast</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:211px;">PDMS casting mold</td>
			<td style="width:101px;">FlowJem</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>can be requested from authors</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:211px;">isopropyl alcohol</td>
			<td style="width:101px;">Fisher</td>
			<td style="width:119px;">A417-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:211px;">laboratory wipes</td>
			<td style="width:101px;">Fisher</td>
			<td style="width:119px;">06-666-11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:211px;">canned air</td>
			<td style="width:101px;">Fisher</td>
			<td style="width:119px;">18-431</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:211px;">10 cm petri dish</td>
			<td style="width:101px;">BioPioneer</td>
			<td style="width:119px;">GS82-1473-001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:211px;">agarose</td>
			<td style="width:101px;">Fisher</td>
			<td style="width:119px;">50-444-176</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:211px;">razor blade</td>
			<td style="width:101px;">Fisher</td>
			<td style="width:119px;">12-640</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:211px;">forceps</td>
			<td style="width:101px;">FST</td>
			<td style="width:119px;">11241-40</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:211px;">22 x 40 cover glass, #1.5</td>
			<td style="width:101px;">Fisher</td>
			<td style="width:119px;">50-365-605</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:211px;">Fiji (version 1.51d)</td>
			<td style="width:101px;">NIH</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>fiji.sc</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:211px;">Excel 2016</td>
			<td style="width:101px;">Microsoft</td>
			<td></td>
			<td>www.microsoftstore.com</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:211px;">MATLAB R2016</td>
			<td style="width:101px;">Mathworks</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>www.mathworks.com</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

using linear agarose channels to study drosophila larval crawling behavior

Drosophila larva tarama sensorimotor davranış nöral kontrolünü incelemek için güçlü bir model olarak ortaya çıkmaktadır. , Duraklatma dönüm ve dolambaçlı: Ancak, düz açık yüzeylerde larva tarama davranışı da dahil olmak üzere, karmaşıktır. Hareketin repertuarında Bu karmaşıklık, tek bir tarama adım döngüsü sırasında meydana gelen olayların ayrıntılı analizini engellemektedir. Bu engeli aşmak için, doğrusal agaroz kanallar düz, sürekli, ritmik tarama larva davranış sınırlamak olduğunu yapılmıştır. Agaroz kanalları ve Drosophila larva vücut hem optik açıktır, çünkü prensip olarak, genetik olarak kodlanmış floresan problar ile etiketlenen larva yapıların hareket bozulmamış, serbestçe hareket eden larva izlenebilir. Geçmişte, larva lineer kanal içine yerleştirildi ve bütün organizmada kısım düzeyinde tarama ve kas 1 analiz edilmiştir. Gelecekte, kanallarda tarama larva nöro izlemek için kalsiyum görüntüleme için kullanılabilirNAL aktivitesi. Ayrıca, bu yöntemler, bir genotip larvalarına ve herhangi bir araştırmacı tasarlanmış kanal birlikte kullanılabilir. Böylece aşağıda sunulmuştur protokol motor kontrolünü anlamak için bir model olarak Drosophila larva kullanan çalışmalar için yaygın olarak uygulanabilir.

Bu makalede, agaroz kanalları kullanarak Drosophila larva davranış rehberlik ve bir tarama döngüsü boyunca larva yapıların dinamiklerini ölçmek için bir yöntem açıklanır. Doğrusal kanallarda Larvalar ritmik tarama (Şekil 3) sürekli nöbetleri gerçekleştirin. larva ve kanallar hem de optik açıdan berrak olduğu için, kanalların larva çıkar yapıda ifade floresan probları ifade ile birlikte kullanılabilir. Biz (elav-Gal4 / +; UAS MYR-GFP / +) her nöronlarda GFP&#39;yi tanımlayan larvaları kaydedildi ve tarama döngüsü boyunca sinir kablosu floresan yoğunluğu dinamik değişimleri takip. Biz MSS larva baş ve kuyruk (Şekil 4A-B) olarak öne neredeyse aynı zaman hareket ettiğini göstermektedir. Kas kasılması bir dalga gövdesi ekseni boyunca geçerken, merkezi sinir sistemi içinde hareket eder ve odak düzlemi üzerinden (Şekil 4) değiştirmek için sinir kablosu floresan neden olur. chan ölçmek için<html> çok sayıda hayvan çeşitli adımların sinir kablosu floresan ges bir polar koordinat arsa (Şekil 4C) ile ilgili verileri temsil etmektedir. kutupsal koordinat araziler üzerinde veri komplo adım döngüsü boyunca sinir kordonu floresan dinamikleri tekrarlanabilir bir yol izler olduğunu göstermektedir. <img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/54892/54892fig1.jpg" /> Şekil 1: Lineer Kanallarının Tasarımı Drosophila Larvaların sürünüyor Davranışı Kılavuzu (A) lineer agaroz kanallarını yapmak için kullanılan mikroakışkan cihaz tasarımı gösterilmiştir.. Bu cihazın kanal genişlikleri 50 um artışlarla 100-300 mikron arasında değişir. Derinlik 150 mm. (B) bir Drosophila Larva bir agaroz kanal yüklenir. Bir sırt görünümü sağa anterior (kafa) ile gösterilir. Ölçek çubuğu = 200 mikron.4892 / 54892fig1large.jpg &quot;target =&quot; _ blank &quot;&gt; bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayınız. <img alt="şekil 2" src="/files/ftp_upload/54892/54892fig2.jpg" /> Şekil 2: a. Kanal içine larva Yük nasıl resimliyor Diyagram detayları için protokol bölümüne 3&#39;e bakınız <a href="https://ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/54892/54892fig2large.jpg" target="_blank">bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <img alt="Şekil 3," src="/files/ftp_upload/54892/54892fig3.jpg" /> Şekil 3:. Agaroz Kanal At içine yerleştirilen zaman bir floresan etiketli Drosophila Larva, Ritmik, Lineer Tarama Sürekli gerçekleştirir, (elav&gt; GFP) gösterilen tüm nöronlarda GFP ifade eden bir larva bir şemasını bıraktı. Bir kutu sinir kablosu floresan yoğunluğu (ayırt bölgesini gösterir onunuzun morfoloji) ölçülebilir. Sağ üstteki bir saniye aralıklarla bir kanal boyunca tarama larva örneğidir. Bir sırt görünümü ön yukarı gösterilir. Oklar bir adım başlatılmasını göstermektedir. Ölçek çubuğu = 200 mikron. <a href="https://ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/54892/54892fig3large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <img alt="Şekil 4," src="/files/ftp_upload/54892/54892fig4.jpg" /> Şekil 4: Tarama Döngüsü Aşırı Sinir kord Floresan Değişimlerin Dinamikleri Arsalar Koordinat Polar Gösterilen (A) tek bir adım şeması.. Yüzdeler tamamlanan adım döngüsünün yüzde bakın. Kuyruk, baş ve merkezi sinir sistemi gibi iç organların Kongre doğru hareketinin bir adım (ya da adım çevriminin% 0) başlatılmasını işaret eder. MSS (beyaz) yukarı ve aşağı yanı sıra, ileri ve geri hareket unutmayın. Bir yan view sağa anterior gösterilir. (B) kymograph baş, kuyruk ve MSS hareketini gösterir. adım döngüsü sırasında sinir kablosu floresans yoğunluğu dinamik olduğuna dikkat edin. (C) bir koordinat kutupsal adım çevrim boyunca sinir kablosu normalleştirilmiş floresan yoğunluğu dinamik değişimleri gösterir. Her nokta tek bir zaman noktasında (n = 3 larva, 3 adımlar her) tek bir larva normalleştirilmiş floresan yoğunluğu temsil etmektedir. <a href="https://ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/54892/54892fig4large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Using Linear Agarose Channels to Study Drosophila Larval Crawling Behavior at JoVE.com

Using Linear Agarose Channels to Study Drosophila Larval Crawling Behavior

Drosophila larva davranış nöral kontrolünü incelemek için güçlü bir model sistem. Bu yayın, tekrarlanan tarama davranışı sırasında, larva yapılarının dinamik ölçmek için lineer tarama ve yöntemler sürekli nöbetleri ortaya çıkarmak için, doğrusal agaroz kanallarının kullanımını tarif eder.

Doğrusal Agaroz Kanallar kullanarak Okuyacak<em&gt; Drosophila</em&gt; Larva Tarama Davranış

Drosophila larval crawling is emerging as a powerful model to study neural control of sensorimotor behavior. However, larval crawling behavior on flat ...

using-linear-agarose-channels-to-study-drosophila-larval-crawling

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Using Linear Agarose Channels to Study Drosophila Larval Crawling Behavior

7.3K Görüntüleme.  University of Chicago.  Drosophila larva davranış nöral kontrolünü incelemek için güçlü bir model sistem. Bu yayın, tekrarlanan tarama davranışı sırasında, larva yapılarının dinamik ölçmek için lineer tarama ve yöntemler sürekli nöbetleri ortaya çıkarmak için, doğrusal agaroz kanallarının kullanımını tarif eder. 

Video: Using Linear Agarose Channels to Study Drosophila Larval Crawling Behavior

Single Sensillum Recordings in the Insects Drosophila melanogaster and Anopheles gambiae

The sense of smell is essential for insects to find foods, mates, predators, and oviposition sites3. Insect olfactory sensory neurons (OSNs) are enclosed in sensory hairs called sensilla, which cover the surface of olfactory organs. The surface of each sensillum is covered with tiny pores, through which odorants pass and dissolve in a fluid called sensillum lymph, which bathes the sensory dendrites of the OSNs housed in a given sensillum. The OSN dendrites express odorant receptor (OR) proteins, which in insects function as odor-gated ion channels4, 5. The interaction of odorants with ORs either increases or decreases the basal firing rate of the OSN. This neuronal activity in the form of action potentials embodies the first representation of the quality, intensity, and temporal characteristics of the odorant6, 7.
Given the easy access to these sensory hairs, it is possible to perform extracellular recordings from single OSNs by introducing a recording electrode into the sensillum lymph, while the reference electrode is placed in the lymph of the eye or body of the insect. In Drosophila, sensilla house between one and four OSNs, but each OSN typically displays a characteristic spike amplitude. Spike sorting techniques make it possible to assign spiking responses to individual OSNs. This single sensillum recording (SSR) technique monitors the difference in potential between the sensillum lymph and the reference electrode as electrical spikes that are generated by the receptor activity on OSNs1, 2, 8. Changes in the number of spikes in response to the odorant represent the cellular basis of odor coding in insects. Here, we describe the preparation method currently used in our lab to perform SSR on Drosophila melanogaster and Anopheles gambiae, and show representative traces induced by the odorants in a sensillum-specific manner.

Single Sensillum Recordings in the Insects Drosophila melanogaster and Anopheles gambiae

Electrophysiological responses of olfactory sensory neurons to odorants can be measured in insects using single sensillum recordings. In this video article we will demonstrate how to perform single sensillum recordings in the antennae of the vinegar fly (Drosophila melanogaster) and the maxillary palps of the malaria mosquito (Anopheles gambiae).

Böcekler Tek Sensillum Kayıtlar Drosophila melanogaster Ve Anofel gambiae</em

The sense of smell is essential for insects to find foods, mates, predators, and oviposition sites3. Insect olfactory sensory neurons (OSNs) are enclosed ...

Nörobilim

Laser Capture Microdissection of Drosophila Peripheral Neurons

The dendritic arborization (da) neurons of the Drosophila peripheral nervous system (PNS) provide an excellent model system in which to investigate the molecular mechanisms underlying class-specific dendrite morphogenesis1,2. To facilitate molecular analyses of class-specific da neuron development, it is vital to obtain these cells in a pure population. Although a range of different cell, and tissue-specific RNA isolation techniques exist for Drosophila cells, including magnetic bead based cell purification3,4, Fluorescent Activated Cell Sorting (FACS)5-8, and RNA binding protein based strategies9, none of these methods can be readily utilized for isolating single or multiple class-specific Drosophila da neurons with a high degree of spatial precision. Laser Capture Microdissection (LCM) has emerged as an extremely powerful tool that can be used to isolate specific cell types from tissue sections with a high degree of spatial resolution and accuracy. RNA obtained from isolated cells can then be used for analyses including qRT-PCR and microarray expression profiling within a given cell type10-16. To date, LCM has not been widely applied in the analysis of Drosophila tissues and cells17,18, including da neurons at the third instar larval stage of development. 
Here we present our optimized protocol for isolation of Drosophila da neurons using the infrared (IR) class of LCM. This method allows for the capture of single, class-specific or multiple da neurons with high specificity and spatial resolution. Age-matched third instar larvae expressing a UAS-mCD8::GFP19 transgene under the control of either the class IV da neuron specific ppk-GAL420 driver or the pan-da neuron specific 21-7-GAL421 driver were used for these experiments. RNA obtained from the isolated da neurons is of very high quality and can be directly used for downstream applications, including qRT-PCR or microarray analyses. Furthermore, this LCM protocol can be readily adapted to capture other Drosophila cell types a various stages of development dependent upon the cell type specific, GAL4-driven expression pattern of GFP.

Laser Capture Microdissection of Drosophila Peripheral Neurons

In this video-article we present a method for isolating single or multiple Drosophila da neurons from third instar larvae using the infrared capture (IR) class of Laser Capture Microdissection (LCM). RNA obtained from the isolated neurons can be readily used for downstream applications including qRT-PCR or microarray analyses.

Lazer Yakalama Mikrodisseksiyon Drosophila Periferik Nöronlar

The dendritic arborization (da) neurons of the Drosophila peripheral nervous system (PNS) provide an excellent model system in which to investigate the ...

Visualization of Larval Segmental Nerves in 3rd Instar Drosophila Larval Preparations

Drosophila melanogaster is emerging as a powerful model system for studying the development and function of the nervous system, particularly because of its convenient genetics and fully sequenced genome. Additionally, the larval nervous system is an ideal model system to study mechanisms of axonal transport as the larval segmental nerves contain bundles of axons with their cell bodies located within the brain and their nerve terminals ending along the length of the body. Here we describe the procedure for visualization of synaptic vesicle proteins within larval segmental nerves. If done correctly, all components of the nervous system, along with associated tissues such as muscles and NMJs, remain intact, undamaged, and ready to be visualized. 3rd instar larvae carrying various mutations are dissected, fixed, incubated with synaptic vesicle antibodies, visualized and compared to wild type larvae. This procedure can be adapted for several different synaptic or neuronal antibodies and changes in the distribution of a variety of proteins can be easily observed within larval segmental nerves.

Visualization of Larval Segmental Nerves in 3rd Instar Drosophila Larval Preparations

Drosophila melanogaster larvae provide an ideal model system to investigate the mechanisms of axonal transport within larval segmental nerves. Using this procedure, 3rd instar larvae carrying various mutations can be compared to wild type larvae.

3 Larvaların segmental sinirler Görselleştirme Rd Instar Drosophila Larvaların Hazırlıkları

Drosophila melanogaster is emerging as a powerful model system for studying the development and function of the nervous system, particularly because of ...

Morphological Analysis of Drosophila Larval Peripheral Sensory Neuron Dendrites and Axons Using Genetic Mosaics

Nervous system development requires the correct specification of neuron position and identity, followed by accurate neuron class-specific dendritic development and axonal wiring. Recently the dendritic arborization (DA) sensory neurons of the Drosophila larval peripheral nervous system (PNS) have become powerful genetic models in which to elucidate both general and class-specific mechanisms of neuron differentiation.
There are four main DA neuron classes (I-IV)1. They are named in order of increasing dendrite arbor complexity, and have class-specific differences in the genetic control of their differentiation2-10. The DA sensory system is a practical model to investigate the molecular mechanisms behind the control of dendritic morphology11-13 because: 1) it can take advantage of the powerful genetic tools available in the fruit fly, 2) the DA neuron dendrite arbor spreads out in only 2 dimensions beneath an optically clear larval cuticle making it easy to visualize with high resolution in vivo, 3) the class-specific diversity in dendritic morphology facilitates a comparative analysis to find key elements controlling the formation of simple vs. highly branched dendritic trees, and 4) dendritic arbor stereotypical shapes of different DA neurons facilitate morphometric statistical analyses.
DA neuron activity modifies the output of a larval locomotion central pattern generator14-16. The different DA neuron classes have distinct sensory modalities, and their activation elicits different behavioral responses14,16-20. Furthermore different classes send axonal projections stereotypically into the Drosophila larval central nervous system in the ventral nerve cord (VNC)21. These projections terminate with topographic representations of both DA neuron sensory modality and the position in the body wall of the dendritic field7,22,23. Hence examination of DA axonal projections can be used to elucidate mechanisms underlying topographic mapping7,22,23, as well as the wiring of a simple circuit modulating larval locomotion14-17.
We present here a practical guide to generate and analyze genetic mosaics24 marking DA neurons via MARCM (Mosaic Analysis with a Repressible Cell Marker)1,10,25 and Flp-out22,26,27 techniques (summarized in Fig. 1).

Morphological Analysis of Drosophila Larval Peripheral Sensory Neuron Dendrites and Axons Using Genetic Mosaics

The dendritic arborization sensory neurons of the Drosophila larval peripheral nervous system are useful models to elucidate both general and neuron class-specific mechanisms of neuron differentiation. We present a practical guide to generate and analyze dendritic arborization neuron genetic mosaics.

Morfolojik analiz Drosophila</emGenetik Mozaikler> Larvaların Periferik Duyusal Nöron Dendritler ve Aksonlar

Nervous system development requires the correct specification of neuron position and identity, followed by accurate neuron class-specific dendritic ...

Methods to Assay Drosophila Behavior

Drosophila melanogaster, the fruit fly, has been used to study molecular mechanisms of a wide range of human diseases such as cancer, cardiovascular disease and various neurological diseases1. We have optimized simple and robust behavioral assays for determining larval locomotion, adult climbing ability (RING assay), and courtship behaviors of Drosophila. These behavioral assays are widely applicable for studying the role of genetic and environmental factors on fly behavior. Larval crawling ability can be reliably used for determining early stage changes in the crawling abilities of Drosophila larvae and also for examining effect of drugs or human disease genes (in transgenic flies) on their locomotion. The larval crawling assay becomes more applicable if expression or abolition of a gene causes lethality in pupal or adult stages, as these flies do not survive to adulthood where they otherwise could be assessed. This basic assay can also be used in conjunction with bright light or stress to examine additional behavioral responses in Drosophila larvae. Courtship behavior has been widely used to investigate genetic basis of sexual behavior, and can also be used to examine activity and coordination, as well as learning and memory. Drosophila courtship behavior involves the exchange of various sensory stimuli including visual, auditory, and chemosensory signals between males and females that lead to a complex series of well characterized motor behaviors culminating in successful copulation. Traditional adult climbing assays (negative geotaxis) are tedious, labor intensive, and time consuming, with significant variation between different trials2-4. The rapid iterative negative geotaxis (RING) assay5 has many advantages over more widely employed protocols, providing a reproducible, sensitive, and high throughput approach to quantify adult locomotor and negative geotaxis behaviors. In the RING assay, several genotypes or drug treatments can be tested simultaneously using large number of animals, with the high-throughput approach making it more amenable for screening experiments.

Methods to Assay Drosophila Behavior

Drosophila melanogaster is a genetically and behaviorally tractable model system that has been used to understand the molecular and cellular basis of many important biological processes for over a century 1. Drosophila has been well exploited to gain insights into the genetic basis of fly behavior.

Test için Yöntemler Drosophila Davranış

Drosophila melanogaster, the fruit fly, has been used to study molecular mechanisms of a wide range of human diseases such as cancer, cardiovascular ...

Dissection and Immunohistochemistry of Larval, Pupal and Adult Drosophila Retinas

The compound eye of Drosophila melanogaster consists of about 750 ommatidia (unit eyes). Each ommatidium is composed of about 20 cells, including lens-secreting cone cells, pigment cells, a bristle cell and eight photoreceptors (PRs) R1-R8 2. The PRs have specialized microvillar structures, the rhabdomeres, which contain light-sensitive pigments, the Rhodopsins (Rhs). The rhabdomeres of six PRs (R1-R6) form a trapezoid and contain Rh1 3 4. The rhabdomeres of R7 and R8 are positioned in tandem in the center of the trapezoid and share the same path of light. R7 and R8 PRs stochastically express different combinations of Rhs in two main subtypes5: In the 'p' subtype, Rh3 in pR7s is coupled with Rh5 in pR8s, whereas in the 'y' subtype, Rh4 in yR7s is associated with Rh6 in yR8s 6 7 8.
Early specification of PRs and development of ommatidia begins in the larval eye-antennal imaginal disc, a monolayer of epithelial cells. A wave of differentiation sweeps across the disc9 and initiates the assembly of undifferentiated cells into ommatidia10-11. The 'founder cell' R8 is specified first and recruits R1-6 and then R7 12-14. Subsequently, during pupal development, PR differentiation leads to extensive morphological changes 15, including rhabdomere formation, synaptogenesis and eventually rh expression.
In this protocol, we describe methods for retinal dissections and immunohistochemistry at three defined periods of retina development, which can be applied to address a variety of questions concerning retinal formation and developmental pathways. Here, we use these methods to visualize the stepwise PR differentiation at the single-cell level in whole mount larval, midpupal and adult retinas (Figure 1).

Dissection and Immunohistochemistry of Larval, Pupal and Adult Drosophila Retinas

The Drosophila retina is a crystal-like lattice composed of a small number of cell types that are generated in a stereotyped manner 1. Its amenability to sophisticated genetic analysis allows the study of complex developmental programs. This protocol describes dissections and immunohistochemistry of retinas at three discrete developmental stages, with a focus on photoreceptor differentiation.

Larva, Pupa ve Erişkin diseksiyonu ve İmmünohistokimya<em&gt; Drosophila</em&gt; Retinaları

The compound eye of Drosophila melanogaster consists of about 750 ommatidia (unit eyes). Each ommatidium is composed of about 20 cells, including ...

A Single-fly Assay for Foraging Behavior in Drosophila

For many animals, hunger promotes changes in the olfactory system in a manner that facilitates the search for appropriate food sources. In this video article, we describe an automated assay to measure the effect of hunger or satiety on olfactory dependent food search behavior in the adult fruit fly Drosophila melanogaster. In a light-tight box illuminated by red light that is invisible to fruit flies, a camera linked to custom data acquisition software monitors the position of six flies simultaneously. Each fly is confined to walk in individual arenas containing a food odor at the center. The testing arenas rest on a porous floor that functions to prevent odor accumulation. Latency to locate the odor source, a metric that reflects olfactory sensitivity under different physiological states, is determined by software analysis. Here, we discuss the critical mechanics of running this behavioral paradigm and cover specific issues regarding fly loading, odor contamination, assay temperature, data quality, and statistical analysis.

A Single-fly Assay for Foraging Behavior in Drosophila

In this video article, we describe an automated assay to measure the effect of hunger or satiety on olfactory dependent food search behavior in the adult fruit fly Drosophila melanogaster.

Toplayıcılık Davranış için Tek-sinek Deneyi<em&gt; Drosophila</em

For many animals, hunger promotes changes in the olfactory system in a manner that facilitates the search for appropriate food sources. In this video ...

Live Imaging of Drosophila Larval Neuroblasts

Stem cells divide asymmetrically to generate two progeny cells with unequal fate potential: a self-renewing stem cell and a differentiating cell. Given their relevance to development and disease, understanding the mechanisms that govern asymmetric stem cell division has been a robust area of study. Because they are genetically tractable and undergo successive rounds of cell division about once every hour, the stem cells of the Drosophila central nervous system, or neuroblasts, are indispensable models for the study of stem cell division. About 100 neural stem cells are located near the surface of each of the two larval brain lobes, making this model system particularly useful for live imaging microscopy studies. In this work, we review several approaches widely used to visualize stem cell divisions, and we address the relative advantages and disadvantages of those techniques that employ dissociated versus intact brain tissues. We also detail our simplified protocol used to explant whole brains from third instar larvae for live cell imaging and fixed analysis applications.

Live Imaging of Drosophila Larval Neuroblasts

This protocol details a streamlined method used to conduct live cell imaging in the context of an intact larval brain. Live cell imaging approaches are invaluable for the study of asymmetric neural stem cell divisions as well as other neurogenic and developmental processes, consistently uncovering mechanisms that were previously overlooked.

Canlı Görüntüleme<em&gt; Drosophila</em&gt; Larva nöroblastomun

Stem cells divide asymmetrically to generate two progeny cells with unequal fate potential: a self-renewing stem cell and a differentiating cell. Given ...

Assays to Detect UV-reflecting Structures and Determine their Importance in Mate Preference using the Sailfin Molly Poecilia latipinna

Many organisms use cues and signals beyond human sensitivity during social interactions. It is important to take into account how organisms perceive their worlds when trying to understand their behavior and ecology. Sensitivity to the ultraviolet spectrum (UV; 300 - 400 nm) is found across multiple genera of birds, fish, reptiles, amphibians, and even mammals. This protocol describes a technique for examining organisms for the presence of UV-reflecting structures and a method for testing whether these cues are used as social signals in the context of mate choice. A spectrophotometer is used to detect the presence of UV reflectance and variation in reflective intensity between individuals and sexes. An example of this technique is presented in which a dichotomous mate choice test exposes sexually receptive individuals to opposite sex individuals whose visual appearance can be manipulated by filters that either transmit full spectrum or block UV wavelengths. This system allowed for the determination that female, but not male, sailfin mollies (Poecilia latipinna) were using UV markings as part of their mating decisions. These types of studies serve to expand our knowledge of the range of organisms that utilize UV and provide insight into how UV plays a role in their lives.

Assays to Detect UV-reflecting Structures and Determine their Importance in Mate Preference using the Sailfin Molly Poecilia latipinna

This protocol outlines the use of spectrophotometry to detect ultraviolet-reflecting structures on organisms (in this example, the sailfin molly Poecilia latipinna) and describes dichotomous choice tests for fish that allow inferences to be made on the role of ultraviolet cues during mate selection.

Tahliller UV yansıtan Yapıları Algılama ve Sailfin Molly kullanarak Mate Tercihi kendi Önemi belirleme<em&gt; Poecilia latipinna</em

Many organisms use cues and signals beyond human sensitivity during social interactions. It is important to take into account how organisms perceive their ...

A Simple Way to Measure Alterations in Reward-seeking Behavior Using Drosophila melanogaster

We describe a protocol for measuring ethanol self-administration in fruit flies (Drosophila melanogaster) as a proxy for changes in reward states. We demonstrate a simple way to tap into the fly reward system, modify experiences related to natural reward, and use voluntary ethanol consumption as a measure for changes in reward states. The approach serves as a relevant tool to study the neurons and genes that play a role in experience-mediated changes of internal state. The protocol is composed of two discrete parts: exposing the flies to rewarding and nonrewarding experiences, and assaying voluntary ethanol consumption as a measure of the motivation to obtain a drug reward. The two parts can be used independently to induce the modulation of experience as an initial step for further downstream assays or as an independent two-choice feeding assay, respectively. The protocol does not require a complicated setup and can therefore be applied in any laboratory with basic fly culture tools.

A Simple Way to Measure Alterations in Reward-seeking Behavior Using Drosophila melanogaster

We describe a protocol for inducing rewarding and nonrewarding experiences in fruit flies (Drosophila melanogaster) using voluntary ethanol consumption as a measure for changes in reward states.

Kullanımı Ödül arayan davranış değişiklikleri Tedbir Basit Yolu<em&gt; Drosophila melanogaster</em

We describe a protocol for measuring ethanol self-administration in fruit flies (Drosophila melanogaster) as a proxy for changes in reward states. We ...