Funding was provided by State Water Resources Control Board (Agreements No. 10-096-250 and 14-090-270). We thank S. Abbasi, M. Connor, S. Engelage, K. North, J. Armstrong, S. Asato, M. Dojiri, D. Schlenk, S. Snyder, S. Westerheide, B. Escher, F. Leusch, G. Pelanek, K. Bi, and J. Printen. The authors declare no conflict of interest, and reference to trade names does not imply endorsement.

1. Toplama ve Proses Suyu Numune (Escher ve ark Modifiye. 9) <ol><li> Çevrede su numunesi ile en 1 g sodyum azid ve 50 mg askorbik asit ihtiva eden bir temizleme 1 L amber cam şişe doldurun. 72 saat sonra 4 ° C saklayınız numune ve proses. NOT: Sodyum azit çok zehirlidir ve dikkatle ele alınması gerekir. koruyucu giysiler (göz / yüz, eldiven, giysi) kullanın ve düzgün işleyen bir duman başlığı içinde tartın. tartmak için metal bir spatula kullanmayın. </li><li> 1.6 uM cam elyaf filtre ile ve daha sonra 5-10 ml / dakika bir akış hızında, bir ön şartlandırılmış Katı Faz Ekstraksiyon (SPE) kartuşundan örnek geçirin. akış hızını kontrol etmek için vakum pompasının basıncı ayarlayın. </li><li> Vakum, 15 dakika boyunca kartuş kurutun. </li><li> 10 ml aseton içindeki ardından 10 ml metanol, kartuşu Zehir: heksan (1: 1, hac / hac). </li><li> Yüksek saflıkta, hafif bir azot akımı altında yaklaşık 1 ml&#39;ye elüat konsantre edilir. çözücüdimetilsülfoksid (DMSO) 500 ul ekleyerek ve aşağı 500 ul özü buharlaştırılması ile değişimi. </li><li> Bir amber cam bir numune alıcı viale aktarın özü. -20 ° C&#39;de saklayın. </li></ol> 2. Deney Özgü Referans Kimya ve Su Özü dilüsyonları hazırlayın <ol><li> Kalibrasyon eğrisi için 9 dilüsyonları hazırlayın. <ol><li> % 100 DMSO içinde deney özel bir referans kimyasal bir stok çözeltisi yapın. nihai konsantrasyon ER analizi için 2 uM 17β-estradiol ve GR analizi için 100 uM deksametazon olmalıdır. -20 ° C&#39;de stok solüsyonları saklayın. </li><li> steril bir tüp içinde deney ortamı 285 ul uygun referans kimyasal stokunun 15 ul ekleyin (tüp # 1). Yukarı ve aşağı pipetleme tarafından örnek karıştırın. </li><li> 8 ek borular (borular # 2-9) &#39;de deney ortamı içinde,% 5 DMSO içeren bir çözeltiye 200 ul ekle. </li><li> küvet ile tüp # 2 tüp # 1 100 ul tablet aktarınE # 9, 3 katlı bir seyreltme serisi gerçekleştirmek için. Her bir seyreltilmiş örnek bir tümbölen alınarak ve aşağıdaki borunun eklemeden önce bir pipet ile iyice karıştırılması gerekir. </li></ol></li><li> deney ortamı 190 ul DMSO içerisinde 10 ul karıştırılmasıyla bir çözücü kontrol örneği hazırlayın. </li><li> Her su ekstraktı için dört dilüsyonları hazırlayın. <ol><li> birinci tüp içinde, deney ortamı 95 uL su özütü 5 ul ekleyin ve iyice karıştırın. Diğer üç tüplerde deney ortamı içinde,% 5 DMSO, 50 ul ekle. </li><li> sonraki bir tüpten çözeltisi 50 ul transfer ile 2 kat seyreltme gerçekleştirin. </li></ol></li></ol> 3. FRET Biyoassay Davranış Hücre Süspansiyon Hazırlamak <ol><li> üreticinin talimatlarına göre analiz, belirli bir ortam hazırlar. Deney ortamı, 4 ° C&#39;de saklanır ve kullanılmadan önce bir su banyosunda 37 ° C&#39;ye kadar ısıtılmalıdır. </li><li> kriyojenik serbest üzerinden ER veya GR bölünme-tutuklanan hücrelerin bir şişe alınzer yumuşak çalkalama ile 2 dakika süreyle 37 ° C su banyosu içinde flakon yerleştirerek hücrelerin hızlı bir şekilde eritin. % 70 etanol ile şişeyi arındırmak ve Sınıf II biyolojik güvenlik kabininde yerleştirin. </li><li> aseptik teknikler kullanılarak şişe açılır ve deney ortamında 10 ml hücre transfer edin. </li><li> 5 dakika boyunca 200 x g&#39;de santrifüjleyin. </li><li> steril bir cam pipet kullanılarak süpernatan aspire ve deney ortamında 6 ml hücre pelletini. </li><li> Bir canlı bir boya çözeltisi 5 ul hücre süspansiyonu 5 ul karıştırın ve bir sayma bölmesine bir kısım ilave edin. </li><li> ışık mikroskobu ya da otomatik hücre sayacı kullanılarak canlı hücre sayısını ve hücre süspansiyonu, canlı hücrelerin yoğunluğunu tahmin ediyoruz. Deney ortamı, ml başına 550.000 canlı hücreler bir son yoğunluk elde etmek gerektiğinde seyreltilir. </li></ol> 4. Plaka 96-kuyu Siyah Duvar Clear-alt Plate Hücreler ve seyreltilmiş Su Extract ekle <ol><li> bir tabak oluşturunHer su ekstraktı için 9-nokta denemesi özel kalibrasyon eğrisi, QA / QC örnekleri ve çoklu dilüsyonları içeren düzen. 96 oyuklu bir plaka taslağına bir örnek, Şekil 1 &#39;de gösterilmiştir. </li><li> tekrarlanan hücresiz kontrol oyuklarına deney ortamı 90 ul ekle. </li><li> steril pipet haznesindeki hücre süspansiyonu dökün ve çok kanallı pipet kullanılarak kuyu hücre süspansiyonu 90 ul ekle. </li><li> Uygun oyuklara kademe 2 sırasında hazırlanan seyreltilmiş numunelerin 10 ul ekle. oyuk başına nihai DMSO konsantrasyonu% 0.5 düzeyinde olmalıdır. </li><li> Bir kapak plakası kapatılır ve 16 saat 37 ° C&#39;de bir% 5 CO2 inkübatöründe yerleştirin. </li></ol><img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/54725/54725fig1.jpg" /> Şekil 1: a. 96 oyuklu plaka taslağına Örnek çok-yuvalı plaka bir deney, belirli bir kalibrasyon eğrisi, 3 tip içerecek şekilde tasarlanmıştırQA / QC kontrolleri ve su ekstraktı başına 4 dilüsyonları (medya sadece DMSO içinde temiz bir ortamda hücreler ve hücreler orta çivili). Her kontrol ve su ekstresinin seyreltme üçlü kuyular analiz edilir. <a href="https://ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/54725/54725fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> 5. Yükleme Çözüm hazırlayın ve her Şey ekle <ol><li> İnkübasyondan sonra, plaka, oda sıcaklığında dengelenmeye bırakın. Bu FRET Biyolojik deney için, 5.6 ile 5.2, doğrudan ışık olmadan yapılmalıdır yineleyin. </li><li> üreticinin talimatlarına göre bir 6x yükleme çözeltisi hazırlayın. </li><li> her bir kuyunun 6x yükleme solüsyonu 20 ul ekleyin. </li><li> seyreltilmiş, su Sitotoksisitenin değerlendirmek için her bir oyuğa Hücre canlılığı reaktifi 10 ul ekle. </li><li> alüminyum yapışkan film ile plaka mühür. </li><li> 2 saat boyunca oda sıcaklığında karanlıkta plaka inkübe edin. </li></ol> 6. ölçün Sitotoksisite ve Endokrin Etkinlik Tepki <ol><li> Üreticinin talimatları izleyerek alt-okuma yetenekleri ile mikroplaka okuyucu ayarlayın. </li><li> FRET transaktivasyon Biyoassay, mavi floresan (409/460 nm, uyarma (Ex) / emisyon (Em) dalga boyu) ve yeşil (409 Ex / 530 Em nm) kanalları ölçün. </li><li> sitotoksisite deneyi için 560 Ex / 590 Em nm&#39;de floresan ölçmek. </li></ol> 7. Veri Kalitesinin belirleme QA / QC Çekler değerlendirin <ol><li> ve hücreler sadece (temiz analiz ortamında hücreleri) kontrol hücre içermeyen (sadece medya) ortalama ham floresan karşılaştırın. Ortam sadece arka plan flüoresan hücrelerin sadece kontrol cevabına kıyasla en az% 25 daha düşük olması gerekir. </li><li> Ham FRET veri işlemek. hem &#39;blue&#39; ve &#39;yeşil&#39; veri setleri için de içeren tüm hücreden hücre içermeyen kontrol çukurlarında ortalama floresan çıkarmak. hesaplamakHer deneysel kuyu için mavi / yeşil oranı. </li><li> DMSO kontrolleri ile sadece hücreler-ve hücrelerin mavi / yeşil oranını karşılaştırın. bu denetimlerin floresan değerleri% 15 Bağıl Standart Sapma (RSD) içinde olmalıdır. </li><li> bir günlük moleküler kütleye (M log) olarak ifade numune konsantrasyonuna karşı mavi / yeşil oranı olarak tahlil özel kalibrasyon eğrisi çizilir. Eğim, R 2 hesaplayın ve EC 50 (% 50 etki konsantrasyonu) oturum açın. Kalibrasyon parametreleri Tablo 1 &#39;de listelenen beklenen aralıkta olmalıdır. </li><li> tüm üçlü kuyular için RSD hesaplayın. çoğaltır arasında değişkenlik% 20 daha az olmalıdır. </li><li> sitotoksisite verileri (560 EX / 590 Em nm), tüm hücre içeren kaynaklardan gelen hücre içermeyen kontrol ortalaması (örneğin, ortam geri plan) çıkarılır. </li><li> Her numune için ortalama arka plan çıkarılır floresan hesaplayın. DMSO kontrolü bir yüzdesi olarak ortaya çıkan floresan verilerini çizilir. Numune seyreltileri olmamalıhücreleri yalnızca DMSO kontrollere göre% 20&#39;den fazla, hücre ölüm sergiler. </li></ol> 8. Veri Analizleri <ol><li> Asgari kalibrasyon tepki artı yanıt ortalamanın iki standart sapma olarak Algılama (LOD) tahlil Sınırı hesaplayın. </li><li> Bir doz tepkisini gösteren örnekler için AK 50 türetmek &#160; Referans kimyasal 10 ve% 50 etki konsantrasyonları arasındaki kalibrasyon eğrisinin lineer regresyonunun eğim ile su ekstresi. </li><li> / EC sayılı su numunesi 50 referans kimyasal BEQ = EC 50: formülü kullanarak Biyoanalitik Eşdeğer Konsantrasyon (BEQ) hesaplayın. </li></ol>

<ol>
	<li>Dix, D. J., Houck, K. A., Martin, M. T., Richard, M. A., Setzer, R. W., Kavlock, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+ToxCast+program+for+prioritizing+toxicity+testing+of+environmental+chemicals.">The ToxCast program for prioritizing toxicity testing of environmental chemicals.</a> Toxicol. Sci. 95 (1), 5-12 (2007).</li><li>Reif, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endocrine+profiling+and+prioritization+of+environmental+chemicals+using+ToxCast+data.">Endocrine profiling and prioritization of environmental chemicals using ToxCast data.</a> Environ. Health Perspect. 118 (12), 1714-1720 (2010).</li><li>Maruya, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+tiered,+integrated+biological+and+chemical+monitoring+framework+for+contaminants+of+emerging+concern+(CECs)+in+aquatic+ecosystems.">A tiered, integrated biological and chemical monitoring framework for contaminants of emerging concern (CECs) in aquatic ecosystems.</a> Integr. Environ. Assess. Manag. , (2015).</li><li>Van der Linden, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+multiple+hormonal+activities+in+wastewater+effluents,+surface+water,+using+a+panel+of+steroid+receptor+CALUX+bioassays.">Detection of multiple hormonal activities in wastewater effluents, surface water, using a panel of steroid receptor CALUX bioassays.</a> Environ. Sci. Technol. 42 (15), 5814-5820 (2008).</li><li>Leusch, F. D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+five+in+vitro+bioassays+to+measure+estrogenic+activity+in+environmental+waters.">Comparison of five in vitro bioassays to measure estrogenic activity in environmental waters.</a> Environ. Sci. Technol. 44 (10), 3853-3860 (2010).</li><li>Jarosova, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Europe-wide+survey+of+estrogenicity+in+wastewater+treatment+plant+effluents:+the+need+for+effect-based+monitoring.">Europe-wide survey of estrogenicity in wastewater treatment plant effluents: the need for effect-based monitoring.</a> Environ. Sci. Pollut. Res. 21 (18), 10970-10982 (2014).</li><li>Sonneveld, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+in+vitro+and+in+vivo+screening+models+for+androgenic+and+estrogenic+activities.">Comparison of in vitro and in vivo screening models for androgenic and estrogenic activities.</a> Toxicol. Sci. 89 (1), 173-187 (2006).</li><li>Piersma, A. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+an+alternative+in+vitro+test+battery+for+detecting+reproductive+toxicants.">Evaluation of an alternative in vitro test battery for detecting reproductive toxicants.</a> Reprod. Toxicol. 38, 53-64 (2013).</li><li>Escher, B. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Benchmarking+organic+micropollutants+in+wastewater,+recycled+water+and+drinking+water+with+in+vitro+bioassays.">Benchmarking organic micropollutants in wastewater, recycled water and drinking water with in vitro bioassays.</a> Environ. Sci. Technol. 48 (3), 1940-1956 (2014).</li><li>U.S. Environmental Protection Agency (USEPA) Endocrine Disruptor Screening Program. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Prioritization of the endocrine disruptor screening program universe of chemicals for an estrogen receptor adverse outcome pathway using computational toxicology tools. , (2012).</li><li>Leusch, F. D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+wastewater+and+recycled+water+quality:+a+comparison+of+lines+of+evidence+from+in+vitro,+in+vivo+and+chemical+analyses.">Assessment of wastewater and recycled water quality: a comparison of lines of evidence from in vitro, in vivo and chemical analyses.</a> Water Res. 50, 420-431 (2014).</li><li>Jia, A., Wu, S., Daniels, K. D., Snyder, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Balancing+the+budget:+accounting+for+glucocorticoid+bioactivity+and+fate+during+water+treatment.">Balancing the budget: accounting for glucocorticoid bioactivity and fate during water treatment.</a> Environ. Sci. Technol. 50 (6), 2870-2880 (2016).</li><li>Huang, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemical+genomics+profiling+of+environmental+chemical+modulation+of+human+nuclear+receptors.">Chemical genomics profiling of environmental chemical modulation of human nuclear receptors.</a> Environ. Health Perspect. 119 (8), 1142-1148 (2011).</li><li>Mehinto, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interlaboratory+comparison+of+in+vitro+bioassays+for+screening+of+endocrine+active+chemicals+in+recycled+water.">Interlaboratory comparison of in vitro bioassays for screening of endocrine active chemicals in recycled water.</a> Water Res. 83, 303-309 (2015).</li><li>Ternes, T. A., Joss, A., Siegrist, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Scrutinizing+pharmaceuticals+and+personal+care+products+in+wastewater+treatment.">Scrutinizing pharmaceuticals and personal care products in wastewater treatment.</a> Environ. Sci. Technol. 38 (20), 392A-399A (2004).</li><li>Tang, J. Y. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toxicity+characterization+of+urban+stormwater+with+bioanalytical+tools.">Toxicity characterization of urban stormwater with bioanalytical tools.</a> Water Res. 47, 5594-5606 (2013).</li><li>Scott, P. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+assessment+of+endocrine+activity+in+Australian+rivers+using+chemical+and+in+vitro+analyses.">An assessment of endocrine activity in Australian rivers using chemical and in vitro analyses.</a> Environ. Sci. Pollut. Res. 21 (22), 12951-12967 (2014).</li><li>Vidal-Dorsch, D. E., Bay, S. M., Maruya, K., Snyder, S. A., Trenholm, R. A., Vanderford, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contaminants+of+emerging+concern+in+municipal+wastewater+effluents+and+marine+receiving+water.">Contaminants of emerging concern in municipal wastewater effluents and marine receiving water.</a> Environ. Toxicol. Chem. 31 (12), 2674-2682 (2012).</li><li>WateReuse Research Foundation (WRRF). <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Direct potable reuse: a path forward. , (2011).</li><li>Leusch, F. D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+the+application+of+bioanalytical+tools+as+surrogate+measure+of+chemical+contaminants+in+recycled+water.">Assessment of the application of bioanalytical tools as surrogate measure of chemical contaminants in recycled water.</a> Water Res. 49, 300-315 (2014).</li><li>Schriks, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Occurrence+of+glucocorticoid+activity+in+various+surface+waters+in+the+Netherlands.">Occurrence of glucocorticoid activity in various surface waters in the Netherlands.</a> Chemosphere. 93 (2), 450-454 (2013).</li><li>Suzuki, G., Sato, K., Isobe, T., Takigami, H., Brouwer, A., Nakayama, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+glucocorticoid+receptor+agonist+in+effluents+from+sewage+treatment+plants+in+Japan.">Detection of glucocorticoid receptor agonist in effluents from sewage treatment plants in Japan.</a> Sci. Tot. Environ. 527-528, 328-334 (2015).</li><li>Purdom, C. E., Hardiman, P. A., Byea, V. V. J., Enoa, N. C., Tyler, C. R., Sumpter, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estrogenic+effects+of+effluents+from+sewage+treatment+works.">Estrogenic effects of effluents from sewage treatment works.</a> Chemistry and Ecology. 8 (4), 275-285 (1994).</li><li>Kidd, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Collapse+of+a+fish+population+after+exposure+to+a+synthetic+estrogen.">Collapse of a fish population after exposure to a synthetic estrogen.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. 104 (21), 8897-8901 (2007).</li><li>Kojima, H., Katsura, E., Takeuchi, S., Niiyama, K., Kobayashi, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Screening+of+estrogen+and+androgen+receptor+activities+in+200+pesticides+by+in+vitro+reporter+gene+assays+using+Chinese+hamster+ovary+cells.">Screening of estrogen and androgen receptor activities in 200 pesticides by in vitro reporter gene assays using Chinese hamster ovary cells.</a> Environ. Health Perspect. 112 (5), 524-531 (2004).</li><li>Kugathas, S., Sumpter, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synthetic+glucocorticoids+in+the+environment:+First+results+on+their+potential+impacts+on+fish.">Synthetic glucocorticoids in the environment: First results on their potential impacts on fish.</a> Environ. Sci. Technol. 45, 2377-2383 (2011).</li><li>Van der Linden, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+panel+of+high-throughput+reporter-gene+assays+to+detect+genotoxicity+and+oxidative+stress.">Development of a panel of high-throughput reporter-gene assays to detect genotoxicity and oxidative stress.</a> Mutat. Res. Genet. Toxicol. Environ. Mutagen. 760, 23-32 (2014).</li><li>Cwiertny, D. M., Snyder, S. A., Schlenk, D., Kolodziej, E. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Environmental+designer+drugs:+when+transformation+may+not+eliminate+risk.">Environmental designer drugs: when transformation may not eliminate risk.</a> Environ. Sci. Technol. 48, 11737-11745 (2014).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

Bu 17β-estradiol (E2), ng / L konsantrasyonlarda 23,24 de, bu maddeler için garanti tarama çevresel estrojenler iyi belgelenmiş gücü. Bu çalışmada, atık su Pis su ER tepkisi (BEQ aralığı: 2,3-17 ng E2 / L) E2 / L ng 4 0.5 &lt;yüzey suyuna (için BEQs ise, Avustralyalı atıksu arıtma tesislerinin 20 ikincil atık bildirilen biraz daha yüksek oldu ) E2 ng 11 / L) 16 yerde yüzey ve yağmur suyu (&lt;1 için rapor aralığında idi. yüzey suyu numunelerinde ölçülen ER aktivitesinin düşük seviyelerde olmasına rağmen, bu testte su kalitesinin değerlendirilmesi için uygun bir tarama bitiş noktası temsil eder. bisfenol A ve alkilfenol sürfaktanlar gibi östrojenler, genellikle su ortamında tespit edilir, ancak konvansiyonel analitik kimya kullanılarak ölçülmesi zor olabilir. Kojima ve ark gösterildiği gibi ER-hücresi tahlilleri de şu anda çalışan ve yeni kayıtlı pestisit taranmasında yararlı olabilir25. GR aktivitesi Bu çalışmada (Tablo 2) analiz edilen tüm 4 atık numunelerinde büyüklük sırasına göre ER aktivite aştı. Bu eğilim atiksuyun 14 önceki çalışmalarla uyumludur ve GR-BEQs için aralık biraz daha yüksek ama aynı in vitro biyoassay 12 kullanan diğer ikincil atık için bildirilen karşılaştırılabilir burada rapor. Farklı bir hücre biyolojik tayini kullanılarak, Japonya&#39;da atık su arıtma tesislerinden atık için GR-BEQs için aralık Bu çalışmada 22 ikincil atık için rapor daha düşük (&lt;3-78 ng Dex / L) idi. Düşük aktivite bildirdi Hollandalı yüzey 21 sular için 30 ng Dex / L (Tablo 2, örnek E) maksimum GR tepki kayıtlı tek yüzey suyu numunesi hariç, kalan yüzey suyu numunelerinde GR aktivitesi tutarlı . Ancak, çevre imGR aktif kimyasallar için anlaşma daha az yüksek mertebeden efektleri bir meydan okuma potansiyeli değerlendirme yaparak, 26 aktif kimyasal ER daha karakterizedir. geleneksel kimyasal analizi, yazılı protokoller ve performansa dayalı QA kullanarak ölçümlerin doğrulama bağlılık gibi / QC yaklaşım veri kalitesi ve sağlamlığı üst düzeye çıkarır. Su kalitesi değerlendirmesi için uyarlanmış hücre biyoanalizlere doğrulama ilk Mehinto ve ark., 14 özetlenen ve bu çalışmada uygulanan QA / QC parametrelerinin ölçümü sonuçlarımız önceden belirlenmiş kılavuz değerler de içinde olduğunu gösterdi, gelişmeye ve geliştirmeye devam edecektir rağmen (Tablo 1 ). Bu Biyoanalizlerin için kalibrasyon eğrisi parametreleri temel fark eden hücreler (örneğin, sitotoksisite) canlılığını değerlendirmek kriterlerin eklenmesi ile (örneğin, GC-MS), diğer analitik protokolleri kalibrasyonu için kullanılan, ayna. başka bir operasyonelyüksek bir verim formatında hücreleri kullanılarak mümkün farkı biyoaktivite (Şekil. 2) ölçüldüğü zaman beklenen konsantrasyona bağımlı tepki gösteren çok sayıda numune seyreltisi dahil edilmesi. Kontrol üç ikincil atık örneklere göre üçüncül atık (örnek D) örnek ölçümleri, alt ER ve GR yanıtları gözden (AC) Tablo bizim biyoassay tarama sonuçlarının göreli doğruluğu ek delil sağlar 2. Kuruluş veya ilgi matrisi temsil referans örnekleri, bu durumda su içinde, daha içinde ve özellikle ölçüm varlıkları arasında biyoassay sonuçları karşılaştırmak için yeteneğini geliştirmek istiyorum. Bu çalışmada kullanılan ER ve GR transaktivasyon hücre çizgilerinin tepkileri, sırasıyla, mutlaka agonistleri E2 ve deksametazon aktivitesi göre ifade edildi. biyoaktivite kantitatif tahmini bir ifade için bu izin verirSA Biyoassay olarak denk bir konsantrasyonunu (BEQ). Bu da örneğin, geleneksel analitik kimya ile belirlenen bireysel agonistlerin konsantrasyonları ile BEQs doğrudan karşılaştırmak biyo-analizi yanıta katkıda kimyasal incelenmesi, sağlar. Bu kavram aynı zamanda etkileri yönettiği analizi olarak da bilinir etken, tanısal inceleme yönlendirilmesinde bioscreening ilave yardımcı altını çizmektedir. SPE sulardan gelen ilaç ve diğer &quot;yükselen kirletici&quot; geniş bir izole etmek için kullanıldığı için, biz su hidrofilik hem de hidrofobik kimyasal yakalamak için tasarlanmış bir emici özellikli, önceden yayınlanmış bir protokol 9, 20 kullanılabilir. Bu teknik kullanılarak, tüm biyolojik olarak aktif organik bileşiklerin kantitatif yakalama kabul da, ek bir iş tamamen standartlaştırmak ve özütleme yöntemleri performansını doğrulamak için gereklidir. Bu çalışmada kullanılan hücre tahlilinde türü ortaya çıkabilirBaşka bir sınırlama. Bu deneyler kirletici ve nükleer reseptörler arasındaki etkileşimi ölçmek ve bu tür kimyasal-zar reseptörü olarak hesap diğer olası etkileşimleri, içine almazlar. Bu nedenle, burada ölçülen bir tarama yanıtları hafife ki mümkündür. Örnek çıkarma gibi, hiçbir standart yöntemler hücre deneyi verilerini analiz etmek ve farklı yaklaşımlar, farklı sonuçlar doğurabilir vardır. Kalibrasyon eğrisinin alt yarısı için yanıt modeli, bu çalışmada kullanılan doğrusal regresyon model yanıtı, bu çalışmada yer alan nispeten dar bir aralık ötesine uzanır, özellikle, bütün hücre tahlilleri için uygun olmayabilir. Yukarıdaki konularda ek araştırma bu araçlar sağlam bir izleme aracı olarak uygulanabilir hangi ölçüde anlamak için gereklidir. olan temel çok endokrin aktif kimyasallar için ekranlar gibi ER ve GR için atılmaktadır Oysa, araştırmacılar kapsamının genişletilmesi vardırbiyoanalitik araçları diğer ilgili örneğin eylemlerin modu, androjenikliği, genotoksisite, nörotoksisite ve İmmunotoksisite 9,27 içerecek şekilde. Daha kapsamlı bir araç çeşitli sucul ortamlarda 19, 28, şimdi ve gelecekte oluşabilecek bilinen ve / veya bilinmeyen kimyasalların dönüşüm ürünleri de dahil olmak üzere biyoaktif kimyasallar, taranması için yeteneğini artıracaktır.

Mevcut su kalitesi izleme doğru ve kesin yaban hayatı ve insanlar maruz kalma bir vekil olarak kimyasal kirleticilerin oluşumunu ölçmek için yeteneği esas alınmaktadır. Ancak, bu kimyasal-by-kimyasal izleme ve değerlendirme paradigma Karşı karşıya olduğumuz sürekli değişen kimyasal evren ayak uydurmak mümkün değil. Biz kader ve sentetik ve doğal kimyasalların etkileri hakkında daha fazla bilgi edinmek, biz biyolojik etkileri beklenen hitap eden ölçüm araçları aramaya devam, ve aynı zamanda bu kimyasal üretim, kullanım ve çevre girdi değişikliklere karşı bağışık bulunmaktadır. Bu tür araçlar bilinmeyen ya da yeni kimyasallar ve dönüşüm ürünleri, dikkatimizi hak edip anlamak için özellikle önemlidir. Ayrıca, suda mevcut kimyasallar kompleks karışımlar zayıf tek tek kimyasal izleme ile ele alınmaktadır. Böylece, daha iyi adrese yüzey suları tha bu sorunları mevcut izleme araç kutusunu modernizasyonu sorunuyla karşı karşıyat tedavi atiksuyun ve kentsel / yağmursuyu ikinci tur atılmasını alırsınız. Son yıllarda, biyoanalitik teknikler su kalitesi değerlendirmesi için tarama araçları olarak söz göstermiştir. Bilinen yoluyla hareket eden kimyasallara tepki özellikle, in&#39;vitro biyoanalizlere olarak, eylemin 1,2 spesifik modları çevresel izleme topluma 3 büyük ilgi görmektedir. Sayısız araştırmalar içme, yüzey ve Atıksuların 4 -6 endokrin aktivitesini ölçmek için in vitro biyoanalizlere istihdam var. Ayrıca, biyo-deneylerde bir dizi molekül başlatma olaylar (örneğin, reseptör aktivasyonu), potansiyel olarak istenmeyen sonuç yolu ile zararlı etkileri ile bağlantılı olabilir 7,8 analiz hedef alır. Su kalitesi değerlendirmesi için bioscreening evrimi açısından değerlendirilmiştir edilerek in vitro biyoassay uç noktaları farklı yüzlerce nispeten hızlı olmuştur onlarınyarar 9,10. Şu anda, Biyoanalizlerin sadece bir avuç su kaliteleri 5,6 arasında ayrım yeteneği gösterirken (laboratuarlar içinde) iyi ölçüm hassasiyeti elde gösterilmiştir. Özellikle muamele edilmiş atık suyun, östrojenler ve glukokortikoid steroid oluşumu başarılı olmuştur nitro trans aktivasyon 11,12 kullanarak oluşturmaktadır. kimin hücre hatları tescilli (ve dolayısıyla yaygın olarak kullanılabilir değil) Ancak bugüne kadar birçok çalışma istihdam var biyoassayler, sürekli bakım ve manipülasyon, ya da her ikisi gerektirir. Sonuç olarak, yetenek topluluk engellenmiş kalır su kaynaklarına bu tarama teknolojisini transfer etmek sonuçta, protokolleri standardize laboratuvarlar arası kalibrasyon egzersizleri, ve. ABD ToxCast programı ile incelenen in vitro biyo-deneyler arasında en az bir teslimatçı &quot;dondurma ve çözme, kullanımı kolay 13 ticari olarak temin edilebilir4; biçimleri. Bu takım durdurulmuş hücreli &quot;setleri&quot; tedavi 14 farklı seviyelerde ifade eden sudan ekstre kimyasal aktivitesinin ölçülmesi sağlam olması gösterilmiştir. satıcı protokolleri bireysel kimyasalların veya karışımların biyo ekrana mevcut olmasına rağmen onlar su numunelerinin uygulanabilir önce, bazıları değişiklik gerektirir. Arıtılmış atıksu çıkış 15, yağmursuyu akış 16, alıcı sular 17,18 ve daha yakın dönüştürülmüş su 19,20 su kalitesi, topluluğun ilgileneceği olan sulu ortam asal örnekleridir. Bu çalışma, ticari olarak mevcut kullanarak su örneklerinde endokrin aktivitesini ölçmek için tek bir standart protokol sunar, bölünme-tutuklandı in vitro trans biyo-deneylerde. Biz tw için tepki arka doz cevap verebilen ve tekrarlanabilirlik kapsamlı bir değerlendirme ile protokol sağlamlığını gösterdiÖzellikle faiz Östrojen ve Glukokortikoid Reseptör transaktivasyonunun (ER ve GR, sırasıyla) o bitiş noktaları. protokol Kaliforniya&#39;da tatlı su sistemlerinden tedavi atiksuyun ve yüzey suyunun ekran örneklerine uygulanmıştır.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="826">
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:43px;width:275px;">GeneBLAzer ER alpha DA assay kit</td>
			<td style="width:123px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:115px;">K1393</td>
			<td style="width:313px;">Kit includes ER division arrested (DA) cells and LiveBLAzer FRET loading kit.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:43px;width:275px;">GeneBLAzer GR DA assay kit</td>
			<td style="width:123px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:115px;">K1391</td>
			<td style="width:313px;">Kit includes GR division arrested (DA) cells and LiveBLAzer FRET loading kit.</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:23px;width:275px;">PrestoBlue cell viability reagent&#160;</td>
			<td style="width:123px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:115px;">A-13261</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:23px;width:275px;">Trypan blue, 0.4% in PBS</td>
			<td style="width:123px;">Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td style="width:115px;">T8154</td>
			<td>Also available at ThermoFisher</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:23px;width:275px;">Corning 96 well black wall, clear-bottom plate</td>
			<td style="width:123px;">Corning</td>
			<td style="width:115px;">3603</td>
			<td style="width:313px;">Individually wrapped, sterile with lid</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:23px;width:275px;">Whatman glass fiber filters, GF/A, 1.6 &#181;M</td>
			<td style="width:123px;">Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td style="width:115px;">WHA1820025</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:23px;width:275px;">Microplate aluminum sealing film</td>
			<td style="width:123px;">E&#38;K Scientific</td>
			<td style="width:115px;">T592100</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:23px;width:275px;">Oasis HLB 6 cc cartridge, 200 mg sorbent</td>
			<td style="width:123px;">Waters</td>
			<td style="width:115px;">WAT106202</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:23px;width:275px;">17&#946; Estradiol</td>
			<td style="width:123px;">Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td style="width:115px;">E2758</td>
			<td style="width:313px;">CAS #50-28-2</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:23px;width:275px;">Ascorbic acid</td>
			<td style="width:123px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:115px;">A61-100</td>
			<td style="width:313px;">Also available at Sigma-Aldrich</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:23px;width:275px;">Dexamethasone&#160;</td>
			<td style="width:123px;">Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td style="width:115px;">D4902</td>
			<td style="width:313px;">CAS #50-02-2</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:23px;width:275px;">Dimethyl sulfoxide (DMSO)</td>
			<td style="width:123px;">Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td style="width:115px;">D8418</td>
			<td>Molecular grade</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:23px;width:275px;">Solvents (acetone, hexane, methanol)</td>
			<td style="width:123px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:115px;"></td>
			<td style="width:313px;">HPLC grade</td>
		</tr>
		<tr height="83">
			<td height="83" style="height:83px;width:275px;">Sodium azide</td>
			<td style="width:123px;">Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td style="width:115px;">S2002</td>
			<td style="width:313px;">Chemical is highly toxic and must be handled with caution. Use protective clothing and weigh under a fumehood. Also available at EMD Millipore.</td>
		</tr>
		<tr height="46">
			<td height="46" style="height:47px;width:275px;">Automated cell counter or hemocytometer</td>
			<td style="width:123px;">Various*</td>
			<td style="width:115px;"></td>
			<td style="width:313px;">Suppliers include Bio-Rad, Fisher Scientific, Sigma-Aldrich and ThermoFisher.</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:23px;width:275px;">Class II biological safety cabinet</td>
			<td style="width:123px;">Various*</td>
			<td style="width:115px;"></td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:23px;width:275px;">CO2 incubator</td>
			<td style="width:123px;">Various*</td>
			<td style="width:115px;"></td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:43px;width:275px;">Cryogenic freezer&#160;</td>
			<td style="width:123px;">Various*</td>
			<td style="width:115px;"></td>
			<td style="width:313px;">Liquid nitrogen storage dewar is recommended.&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:43px;width:275px;">Fluorescence microplate reader</td>
			<td style="width:123px;">Various*</td>
			<td style="width:115px;"></td>
			<td style="width:313px;">&#160;The reader must have bottom read capabilities.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td colspan="4" height="21" style="height:21px;">* No recommended source, the choice of this equipment depends on budget, frequency of use, and lab space.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

screening for endocrine activity in water using commercially-available in vitro transactivation bioassays

In vitro trans biyoanalizlere Bununla birlikte onların benimsenmesi ve yaygın uygulama nedeniyle standart yöntem ve sağlam, kullanıcı dostu teknoloji kullanılabilirlik eksikliği kısmen engellemiştir edilmiştir, su kalitesi izleme araçları olarak söz göstermiştir. Bu çalışmada, piyasada mevcut, bölünme-tutuklandı hücre hatları kantitatif çevresel kalite uzmanları ilgilendiren su örneklerinde bulunan kimyasalların endokrin faaliyeti taranması için kullanılmıştır. Kapsamlı kalite güvence / kalite kontrol dahil tek, standart bir protokol (QA / QC) denetler hücre tabanlı Floresan Rezonans Enerji Transferi (FRET) testi kullanılarak (sırasıyla, ER ve GR) Östrojen ve Glukokortikoid Reseptör aktivitesi için geliştirilmiştir. Kaliforniya (ABD) tatlı su sistemlerinden tedavi belediye atık suyun ve yüzey suyunun numuneleri, katı faz ekstraksiyon kullanılarak çıkarılan ve standardize proto kullanarak endokrin aktivitesi için analiz edildiCol. Arka plan ve bitiş noktası özgü referans kimyasallar için doz-yanıt güvenilir ölçümü için gerekli gördüğü QA / QC kurallarına araya geldi. Yüzey su örnekleri için biyoassay tarama yanıtı büyük ölçüde saptanabilir değildi. Bunun aksine, ikincil arıtma tesisleri atık örnekleri ER 392 ng deksametazon GR / L ve 17 ng 17β-estradiyol / L&#39;ye kadar, tahmini biyo-analizi eşdeğer konsantrasyonlarda (BEQs) ile en yüksek ölçülebilir aktiviteye sahiptir. bir tersiyer atık su örneği için biyolojik yanıtın, tedaviden sonra endokrin aktif kimyasalların daha düşük bir bakiye gösteren ikincil atık için ölçülen daha düşüktü. Bu protokol, ticari olarak temin edilebilir kullanan nitro trans biyo-deneylerde, bölme durdurulmuş hücreli &quot;setleri&quot;, su içinde endokrin aktivitesi için taranması için adapte edilebileceğini göstermiştir.

Bu çalışmada, tedavi belediye atiksuyun 4x 24 saat kompozit numuneler, Güney Kaliforniya&#39;da tatlı su sistemlerinden yüzey sularının 6 kapmak örnekleri ve ultra saf su içeren bir alan boş bu protokolü göstermek için seçildi. 4 atık örneklerinin 3 konvansiyonel aktif çamur atıksu arıtma tesislerinde ( &quot;ikincil atık&quot;), ve kum / karbon filtrasyon eklendi sonrası biyolojik arıtma ( &quot;üçüncül atık&quot;) ile gelişmiş atık su arıtma tesisi dördüncü birinden idi. Yüzey suyu numuneleri (açık, tarım ve kentsel) farklı arazi kullanımı temsil havzalarda toplanmıştır. Su ekstrelerinin seyreltimi DMSO kontrol (Tablo 1) ile karşılaştırıldığında gözlenen% 20&#39;den daha az, hücre mortalite ile belirgin bir sitotoksisite göstermiştir. Hücre içermeyen (medya sadece) arka plan düşüktü ve cSadece hücre-ve DMSO yanıtlarla hücreler arasında omparison çözücü fluoresans ölçümleri üzerinde ölçülebilir bir etkiye sahip olduğunu göstermiştir. Eğim ve EC 50 günlük olmak üzere tahlil özel kalibrasyon eğrileri parametreleri, zamanla kalibrasyon eğrileri iyi tekrarlanabilirlik gösteren kabul edilebilir tarihi değerleri (Tablo 1) aralığında idi. ER deney için kabul edilebilir bir kalibrasyon eğrisinin bir örneği, Şekil 2&#39;de gösterilmiştir. 17β-estradiyol ve deksametazon noktası referans kimyasal tahlili yanıt diğer araştırmacılar tarafından arıtılan atık suyun ve tarihi kullanımda meydana gelme olasılığı gücüne göre gibi 20- 22. Üç numune arasındaki karşılık olarak değişkenlik en az% 20 RSD idi. Böylece, tüm veriler kabul edilebilir kalitede olduğu kabul edildi ve daha sonra atık su ve yüzey suyu numunelerinde ER ve (ng / L BEQ olarak ifade edilir) GR biyoaktivitelerini tahmin etmek için kullanılmıştır. <p clafo ss = &quot;jove_content&quot;: keep-together.within-page = &quot;1&quot;&gt; 5 ila 10 ve numune başına 4 seyreltileri bu çalışmada analiz su numunelerinin tarama için uygun göründü bir Bağıl Zenginleştirme Faktörü (REF). AAT çıkış örneklerinin çoğu, her iki ER ve GR biyo analizler için LOD üzerinde bir doz tepki gösterdi; en düşük sulandırma kalibrasyon eğrisi içinde bir yanıt vardı ve en yüksek seyreltme genellikle LOD altındaki (Şekil 3). Ancak, yüzey su ekstreleri güçlü ER veya GR aktivite yoktu. 10 bir REF rağmen, floresan tepkiler veya LOD altında genellikle yakın idi. alan boşluğu için biyoassay yanıtlarının yokluğu LOD, yukarıda belirtilen algılamalar örnekleme ya da usul laboratuar eserler sonucu olmadığını doğruladı. ER ve GR aktiviteleri E2 / L ng 17 BEQs en yüksek olan, 7 tespit ve 10 temsilci su örneklerinde sırasıyla (Tablo 2) 4 edildi<html> ve 392 ikincil atık bulunan Dex / L ng. üçüncül atık numunesi GR aktivitesi biyoassay LOD altında oldu. Aynı şekilde, çoğu yüzeysel su numuneleri hiçbir GR LOD yukarıdaki faaliyet ve ikincil atık daha ER aktivite çok daha düşük düzeylerde sergiledi. <img alt="şekil 2" src="/files/ftp_upload/54725/54725fig2.jpg" /> Şekil 2:. ER Deney doz-yanıt eğrisi için kalibrasyon eğrisi örnek, ortalama floresans oranı (± SEM) olarak çizilmiştir, sigmoidal EC 10 ve EC50 değerlerinin belirlenmesi için kullanılmaktadır. Eğrinin bu bölümü lineer regresyon kullanılarak monte ve bir biyoassay eşdeğer konsantrasyonu türetmek için kullanılır. <a href="https://ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/54725/54725fig2large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> les / ftp_upload / 54725 / 54725fig3.jpg &quot;/&gt; Şekil 3:. TheRrelative Zenginleştirme Faktörü Biyoassay Eşdeğer konsantrasyonlarına karşı çizildiği Su Örneklerinin Ortalama Mavi / yeşil floresan Oranı (± SEM) (BEQ) olan seyreltme serisi sınırının üzerinde iki nokta arasında en az bir konsantrasyon bağımlı-tepki göstermek numuneler için hesaplanır algılama (LOD) evi. <a href="https://ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/54725/54725fig3large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td></td><td colspan="2"> Östrojen reseptörü (ER) Deneyi </td><td colspan="2"> Glukokortikoid reseptörü (GR) Tahlili </td></tr><tr><td></td><td> Araştırma sonuçları </td><td> Kabul şartları </td><td> Araştırma sonuçları </td&gt; <td> Kabul şartları </td></tr><tr><td> kalibrasyon parametreleri </td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> EC50 (M) log ortalama </td><td> -9,6 </td><td> -10,1 -9,1 Ile </td><td> -8.5 </td><td> -9.0 Ile -8.0 </td></tr><tr><td> eğim ortalama </td><td> 1.1 </td><td> 0,9-1,5 </td><td> 2.0 </td><td> 1,8-2,4 </td></tr><tr><td> R2 </td><td> 0.99 </td><td> &gt; 0.95 </td><td> 0.99 </td><td> &gt; 0.95 </td></tr><tr><td> QA / QC kontrolleri </td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Medya arka plan </td><td> Evet </td><td> medya sadece &lt;hücre + medya </td><td> Evet </td><td> medya sadece &lt;hücre + medya </td></tr><tr><td> Sitotoksisite (% mortalite) </td><td> 0% </td><td> &lt;% 20 mortalite </td><td> 0% 5 </td><td> &lt;% 20 mortalite </td></tr><tr><td> Örnek hassas (% RSD) &lt;/ Td&gt; <td> 2-18% </td><td> &lt;% 20 </td><td> 4-13% </td><td> &lt;% 20 </td></tr></tbody></table> Tablo 1: Tedavi Atıksu Atıksularının Biyoanalitik Tarama ve Yüzeysel Su Örneklerden QA / QC Sonuçların Özeti. <table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td> Numune Kimliği ve Açıklama </td><td> ER-BEQ (ng E2 / L) </td><td> GR-BEQ (ng Dex / L) </td></tr><tr><td> A - Tam ikincil arıtma tesisinden gelen son çıkış </td><td> 6.4 </td><td> 248 </td></tr><tr><td> B - Tam ikincil arıtma tesisinden gelen son çıkış </td><td> 13 </td><td> 392 </td></tr><tr><td> C - Tam ikincil arıtma tesisinden gelen son çıkış </td><td> 17 </td><td> 236 </td></tr><tr><td> D - üçüncül arıtma p nihai atıklant </td><td> 2.3 </td><td> &lt;22 </td></tr><tr><td> E - tarım alanı yüzey suyu </td><td> &lt;0.5 </td><td> 30 </td></tr><tr><td> F - tarım alanı yüzey suyu </td><td> &lt;0.5 </td><td> &lt;22 </td></tr><tr><td> G - kentsel bölgede yüzey suyu </td><td> 4 </td><td> &lt;22 </td></tr><tr><td> H - kentsel bölgede yüzey suyu </td><td> 0.9 </td><td> &lt;22 </td></tr><tr><td> I - açık alanda yüzey suyu </td><td> 0.8 </td><td> &lt;22 </td></tr><tr><td> J - açık alanda yüzey suyu </td><td> &lt;0.5 </td><td> &lt;22 </td></tr><tr><td> K - alan boş (saf su) </td><td> &lt;0.5 </td><td> &lt;22 </td></tr></tbody></table> Tablo 2: östrojen reseptörü (ER-BEQ) ve glukokortikoid reseptörüne Biyo eşdeğer konsantrasyonları (GR-BEQ) ac. tivity Kaliforniya (ABD) toplanan örneklerin Üç çeşit analiz edilmektedir: belediye atık su atık (AD), yüzey suyu (EJ), ve alan boş (K).

Watch this Scientific Journal Video about Screening for Endocrine Activity in Water Using Commercially-available In Vitro Transactivation Bioassays at JoVE.com

Screening for Endocrine Activity in Water Using Commercially-available In Vitro Transactivation Bioassays

A protocol to screen for endocrine activity in organic extracts of water samples, including treated wastewater effluent and surface (receiving) water, was adapted using commercially available division-arrested ("freeze and thaw") in vitro transactivation bioassays.

Su Kullanımı Endokrin Aktivitesi Tarama Piyasada satılan<em&gt; İn Vitro</em&gt; Transaktivasyon biyolojik tayinler

In vitro transactivation bioassays have shown promise as water quality monitoring tools, however their adoption and widespread application has been ...

screening-for-endocrine-activity-water-using-commercially-available

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Environment

Screening for Endocrine Activity in Water Using Commercially-available In Vitro Transactivation Bioassays

7.5K Görüntüleme.  Southern California Coastal Water Research Project Authority. A protocol to screen for endocrine activity in organic extracts of water samples, including treated wastewater effluent and surface (receiving) water, was adapted using commercially available division-arrested ("freeze and thaw") in vitro transactivation bioassays.

Video: Screening for Endocrine Activity in Water Using Commercially-available In Vitro Transactivation Bioassays

EPA Method 1615. Measurement of Enterovirus and Norovirus Occurrence in Water by Culture and RT-qPCR. I. Collection of Virus Samples

EPA Method 1615 was developed with a goal of providing a standard method for measuring enteroviruses and noroviruses in environmental and drinking waters. The standardized sampling component of the method concentrates viruses that may be present in water by passage of a minimum specified volume of water through an electropositive cartridge filter. The minimum specified volumes for surface and finished/ground water are 300 L and 1,500 L, respectively. A major method limitation is the tendency for the filters to clog before meeting the sample volume requirement. Studies using two different, but equivalent, cartridge filter options showed that filter clogging was a problem with 10% of the samples with one of the filter types compared to 6% with the other filter type. Clogging tends to increase with turbidity, but cannot be predicted based on turbidity measurements only. From a cost standpoint one of the filter options is preferable over the other, but the water quality and experience with the water system to be sampled should be taken into consideration in making filter selections.

EPA Method 1615 uses an electropositive filter to concentrate enteroviruses and noroviruses in environmental and drinking waters. This manuscript describes the procedure for collecting samples for Method 1615 analyses.

Enterovirus Kültür ve RT-qPCR Su Norovirüs Oluşum EPA Metot 1615 Ölçüm. Virüs Örneklerinin I. Koleksiyonu

EPA Method 1615 was developed with a goal of providing a standard method for measuring enteroviruses and noroviruses in environmental and drinking waters. ...

Çevre

EPA Method 1615. Measurement of Enterovirus and Norovirus Occurrence in Water by Culture and RT-qPCR. Part III. Virus Detection by RT-qPCR

EPA Method 1615 measures enteroviruses and noroviruses present in environmental and drinking waters. This method was developed with the goal of having a standardized method for use in multiple analytical laboratories during monitoring period 3 of the Unregulated Contaminant Monitoring Rule. Herein we present the protocol for extraction of viral ribonucleic acid (RNA) from water sample concentrates and for quantitatively measuring enterovirus and norovirus concentrations using reverse transcription-quantitative PCR (RT-qPCR). Virus concentrations for the molecular assay are calculated in terms of genomic copies of viral RNA per liter based upon a standard curve. The method uses a number of quality controls to increase data quality and to reduce interlaboratory and intralaboratory variation. The method has been evaluated by examining virus recovery from ground and reagent grade waters seeded with poliovirus type 3 and murine norovirus as a surrogate for human noroviruses. Mean poliovirus recoveries were 20% in groundwaters and 44% in reagent grade water. Mean murine norovirus recoveries with the RT-qPCR assay were 30% in groundwaters and 4% in reagent grade water.

Here we present a procedure to quantify enterovirus and norovirus in environmental and drinking waters using reverse transcription-quantitative PCR. Mean virus recovery from groundwater with this standardized procedure from EPA Method 1615 was 20% for poliovirus and 30% for murine norovirus.

Enterovirüs Kültür ve RT-qPCR Su Norovirus Oluşum EPA Method 1615 Ölçümü. Bölüm III. RT-qPCR Virüs Algılama

EPA Method 1615 measures enteroviruses and noroviruses present in environmental and drinking waters. This method was developed with the goal of having a ...

A Duplex Digital PCR Assay for Simultaneous Quantification of the Enterococcus spp. and the Human Fecal-associated HF183 Marker in Waters

This manuscript describes a duplex digital PCR assay (EntHF183 dPCR) for simultaneous quantification of Enterococcus spp. and the human fecal-associated HF183 marker. The EntHF183 duplex dPCR (referred as EntHF183 dPCR hereon) assay uses the same primer and probe sequences as its published individual quantitative PCR (qPCR) counterparts. Likewise, the same water filtration and DNA extraction procedures as performed prior to qPCR are followed prior to running dPCR. However, the duplex dPCR assay has several advantages over the qPCR assays. Most important, the dPCR assay eliminates the need for running a standard curve and hence, the associated bias and variability, by direct quantification of its targets. In addition, while duplexing (i.e. simultaneous quantification) Enterococcus and HF183 in qPCR often leads to severe underestimation of the less abundant target in a sample, dPCR provides consistent quantification of both targets, whether quantified individually or simultaneously in the same reaction. The dPCR assay is also able to tolerate PCR inhibitor concentrations that are one to two orders of magnitude higher than those tolerated by qPCR. These advantages make the EntHF183 dPCR assay particularly attractive because it simultaneously provides accurate and repeatable information on both general and human-associated fecal contamination in environmental waters without the need to run two separate qPCR assays. Despite its advantages over qPCR, the upper quantification limit of the dPCR assay with currently available instrumentation is approximately four orders of magnitude lower than that achievable by qPCR. Consequently, dilution is needed for measurement of high concentrations of target organisms such as those typically observed following sewage spills.

A Duplex Digital PCR Assay for Simultaneous Quantification of the Enterococcus spp. and the Human Fecal-associated HF183 Marker in Waters

This manuscript describes a duplex digital PCR assay that can be used to simultaneously quantify Enterococcus spp. and the HF183 genetic markers as indicators of general and human-associated fecal contamination in recreational waters.

Eşzamanlı Niceleme için Dubleks Dijital PCR Testi<em&gt; Enterococcus spp.</em&gt; Ve Waters İnsan Fekal ilişkili HF183 Marker

This manuscript describes a duplex digital PCR assay (EntHF183 dPCR) for simultaneous quantification of Enterococcus spp. and the human fecal-associated ...

Characterization and Application of Passive Samplers for Monitoring of Pesticides in Water

Five different water passive samplers were calibrated under laboratory conditions for measurement of 124 legacy and current used pesticides. This study provides a protocol for the passive sampler preparation, calibration, extraction method and instrumental analysis. Sampling rates (RS) and passive sampler-water partition coefficients (KPW) were calculated for silicone rubber, polar organic chemical integrative sampler POCIS-A, POCIS-B, SDB-RPS and C18 disk. The uptake of the selected compounds depended on their physicochemical properties, i.e., silicone rubber showed a better uptake for more hydrophobic compounds (log octanol-water partition coefficient (KOW) &#62; 5.3), whereas POCIS-A, POCIS-B and SDB-RPS disk were more suitable for hydrophilic compounds (log KOW &#60; 0.70).

A protocol about the characterization and application of five different passive sampling devices is presented.

Suda Pestisitlerin İzleme Karakterizasyonu ve Pasif Numune Uygulama

Five different water passive samplers were calibrated under laboratory conditions for measurement of 124 legacy and current used pesticides. This study ...

A Simple Planting Technique for Re-establishing Trees Where Frequent Inundation Occurs

Many of the Everglades tree islands have lost elevation over the past century and most of their trees have died such that they are now covered with herbaceous plants. This protocol describes a simple, cost-effective tree planting technique needed for restoring degraded Everglade tree islands. The design is patterned after a natural Everglades process that creates floating peat islands, which allows tree survival and growth in flooded conditions and often leads to the development of tree islands. Commercially available peat bags were used as the medium for the growth and establishment of potted native tree saplings. The pop-up configuration floated initially and provided additional elevation to minimize inundation, with a single native tree species sapling and a single tree fertilizer spike. During a 3 year study involving 105 pop-ups, most plants survived (80%) and many thrived. Determining whether this technique can establish trees on a degraded tree island will require longer studies and extensive field tests.

This protocol describes a simple, cost-effective tree planting technique for restoring degraded Everglades tree islands that experience inundation. The design creates an island (pop-up) which floats initially and adds elevation to promote tree survival and growth under flooded conditions.

Bir basit tekniği sık su baskını/taşkın oluştuğu için yeniden kurulması ağaç dikme

Many of the Everglades tree islands have lost elevation over the past century and most of their trees have died such that they are now covered with ...

Bioindication Testing of Stream Environment Suitability for Young Freshwater Pearl Mussels Using In Situ Exposure Methods

Knowledge of habitat suitability for freshwater mussels is an important step in the conservation of this endangered species group. We describe a protocol for performing in situ juvenile exposure tests within oligotrophic river catchments over one-month and three-month periods. Two methods (in both modifications) are presented to evaluate the juvenile growth and survival rate. The methods and modifications differ in value for the locality bioindication and each has its benefits as well as limitations. The sandy cage method works with a large set of individuals, but only some of the individuals are measured and the results are evaluated in bulk. In the mesh cage method, the individuals are kept and measured separately, but a low individual number is evaluated. The open water exposure modification is relatively easy to apply; it shows the juvenile growth potential of sites and can also be effective for water toxicity testing. The within-bed exposure modification needs a high workload but is closer to the conditions of a natural juvenile environment and it is better for reporting the real suitability of localities. On the other hand, more replications are needed in this modification due to its high-hyporheic environment variability.

Bioindication Testing of Stream Environment Suitability for Young Freshwater Pearl Mussels Using In Situ Exposure Methods

In situ bioindications enable determination of the suitability of an environment for endangered mussel species. We describe two methods based on the juvenile exposure of freshwater pearl mussels in cages to oligotrophic river habitats. Both methods are implemented in variants for open water and hyporheic water environments.

Genç tatlı su midye içinde in Situ maruz kalma yöntemlerle inci için Bioindication akış ortamı uygunluğu test

Knowledge of habitat suitability for freshwater mussels is an important step in the conservation of this endangered species group. We describe a protocol ...

Optimized Procedure for Determining the Adsorption of Phosphonates onto Granular Ferric Hydroxide using a Miniaturized Phosphorus Determination Method

This paper introduces a procedure to investigate the adsorption of phosphonates onto iron-containing filter materials, particularly granular ferric hydroxide (GFH), with little effort and high reliability. The phosphonate, e.g., nitrilotrimethylphosphonic acid (NTMP), is brought into contact with the GFH in a rotator in a solution buffered by an organic acid (e.g., acetic acid) or Good buffer (e.g., 2-(N-morpholino)ethanesulfonic acid) [MES] and N-cyclohexyl-2-hydroxyl-3-aminopropanesulfonic acid [CAPSO]) in a concentration of 10 mM for a specific time in 50 mL centrifuge tubes. Subsequently, after membrane filtration (0.45 &#181;m pore size), the total phosphorus (total P) concentration is measured using a specifically developed determination method (ISOmini). This method is a modification and simplification of the ISO 6878 method: a 4 mL sample is mixed with H2SO4 and K2S2O8 in a screw cap vial, heated to 148-150 &#176;C for 1 h and then mixed with NaOH, ascorbic acid and acidified molybdate with antimony(III) (final volume of 10 mL) to produce a blue complex. The color intensity, which is linearly proportional to the phosphorus concentration, is measured spectrophotometrically (880 nm). It is demonstrated that the buffer concentration used has no significant effect on the adsorption of phosphonate between pH 4 and 12. The buffers, therefore, do not compete with the phosphonate for adsorption sites. Furthermore, the relatively high concentration of the buffer requires a higher dosage concentration of oxidizing agent (K2S2O8) for digestion than that specified in ISO 6878, which, together with the NaOH dosage, is matched to each buffer. Despite the simplification, the ISOmini method does not lose any of its accuracy compared to the standardized method.

This paper introduces a procedure to investigate the adsorption of phosphonates onto iron-containing filter materials, particularly granular ferric hydroxide, with little effort and high reliability. In a buffered solution, the phosphonate is brought into contact with the adsorbent using a rotator and then analyzed via a miniaturized phosphorus determination method.

Fosfonat adsorpsiyon taneli ferrik minyatürize fosfor belirleme yöntemini kullanarak hidroksit üzerine belirlemek için en iyi duruma getirilmiş yordamı

This paper introduces a procedure to investigate the adsorption of phosphonates onto iron-containing filter materials, particularly granular ferric ...

Colletotrichum fioriniae Development in Water and Chloroform-based Blueberry and Cranberry Floral Extracts

To accurately monitor the phenology of the bloom period and the temporal dynamics of floral chemical cues on fungal fruit rotting pathogens, floral extraction methods and coverslip bioassays were developed utilizing Colletotrichum fioriniae. In blueberry and cranberry, this pathogen is optimally controlled by applying fungicides during the bloom period because of the role flowers play in the initial stages of infection. The protocol detailed here describes how floral extracts (FE) were obtained using water-, chloroform-, and field rainwater-based methods for later use in corresponding glass coverslip bioassays. Each FE served to provide a different set of information: response of C. fioriniae to mobilized floral chemical cues in water (water-based), pathogen response to flower and fruit surface waxes (chloroform-based), and field-based monitoring of collected floral rainwater, moving in vitro observations to an agricultural setting. The FE is broadly described as either water- or chloroform-based, with an appropriate bioassay described to compensate for the inherent differences between these two materials. Rainwater that had run off flowers was collected in unique devices for each crop, alluding to the flexibility and application of this approach for other crop systems. The bioassays are quick, inexpensive, simple, and provide the ability to generate spatiotemporal and site-specific information about the presence of stimulatory floral compounds from various sources. This information will ultimately better inform disease management strategies, as FE decrease the time needed for infection to occur, thus providing insight into changing risks for pathogen infection over the growing season.

Colletotrichum fioriniae Development in Water and Chloroform-based Blueberry and Cranberry Floral Extracts

Here, bioassays designed to monitor the development of a fungal pathogen, Colletotrichum fioriniae, in the presence of blueberry or cranberry floral extracts on glass coverslips are described. Water-, chloroform-, and field rainwater- based floral extraction techniques are detailed as well as insight into how this information can be applied.

Colletotrichum fioriniae Su ve kloroform tabanlı yaban mersini ve kızılcık çiçek özleri kalkınma

To accurately monitor the phenology of the bloom period and the temporal dynamics of floral chemical cues on fungal fruit rotting pathogens, floral ...

Leaf Area Index Estimation Using Three Distinct Methods in Pure Deciduous Stands

Accurate estimations of leaf area index (LAI), defined as half of the total leaf surface area per unit of horizontal ground surface area, are crucial for describing the vegetation structure in the fields of ecology, forestry, and agriculture. Therefore, procedures of three commercially used methods (litter traps, needle technique, and a plant canopy analyzer) for performing LAI estimation were presented step-by-step. Specific methodological approaches were compared, and their current advantages, controversies, challenges, and future perspectives were discussed in this protocol. Litter traps are usually deemed as the reference level. Both the needle technique and the plant canopy analyzer (e.g., LAI-2000) frequently underestimate LAI values in comparison with the reference. The needle technique is easy to use in deciduous stands where the litter completely decomposes each year (e.g., oak and beech stands). However, calibration based on litter traps or direct destructive methods is necessary. The plant canopy analyzer is a commonly used device for performing LAI estimation in ecology, forestry, and agriculture, but is subject to potential error due to foliage clumping and the contribution of woody elements in the field of view (FOV) of the sensor. Eliminating these potential error sources was discussed. The plant canopy analyzer is a very suitable device for performing LAI estimations at the high spatial level, observing a seasonal LAI dynamic, and for long-term monitoring of LAI.

An accurate estimation of leaf area index (LAI) is crucial for many models of material and energy fluxes within plant ecosystems and between an ecosystem and the atmospheric boundary layer. Therefore, three methods (litter traps, needle technique, and PCA) for taking precise LAI measurements were in the presented protocol.

Saf Yaprak Döken Standlarda Üç Farklı Yöntem Kullanılarak Yaprak Alan İndeksi Tahmini

Accurate estimations of leaf area index (LAI), defined as half of the total leaf surface area per unit of horizontal ground surface area, are crucial for ...

Measuring Phosphorus Release in Laboratory Microcosms for Water Quality Assessment

Phosphorus (P) is a critical limiting nutrient in agroecosystems requiring careful management to reduce transport risk to aquatic environments. Routine laboratory measures of P bioavailability are based on chemical extractions performed on dried samples under oxidizing conditions. While useful, these tests are limited with respect to characterizing P release under prolonged water saturation. Labile orthophosphate bound to oxidized iron and other metals can rapidly desorb to solution in reducing environments, increasing P mobilization risk to surface runoff and groundwater. To better quantify P desorption potential and mobility during extended saturation, a laboratory microcosm method was developed based on repeated sampling of porewater and overlying floodwater over time. The method is useful for quantifying P release potential from soils and sediments varying in physicochemical properties and can improve site-specific P mitigation efforts by better characterizing P release risk in hydrologically active areas. Advantages of the method include its ability to simulate in situ dynamics, simplicity, low cost, and flexibility.

Accurate quantification of phosphorus (P) desorption potential in saturated soils and sediments is important for P modeling and transport mitigation efforts. To better account for in situ soil-water redox dynamics and P mobilization under prolonged saturation, a simple approach was developed based on repeated sampling of laboratory microcosms.

Su kalite değerlendirmesi için laboratuar Microcosms fosfor serbest ölçme

Phosphorus (P) is a critical limiting nutrient in agroecosystems requiring careful management to reduce transport risk to aquatic environments. Routine ...